JPH10313794A

JPH10313794A - 魚類養殖用飼料組成物

Info

Publication number: JPH10313794A
Application number: JP9130875A
Authority: JP
Inventors: Masahiro Kajikawa; 昌弘梶川; Mikitomo Asai; 幹友浅井; Akitomo Amemura; 明倫雨村; Tomonori Yano; 友紀矢野
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1997-05-21
Filing date: 1997-05-21
Publication date: 1998-12-02
Anticipated expiration: 2017-05-21
Also published as: JP2923263B2

Abstract

(57)【要約】【課題】養殖魚類の免疫活性増強用の飼料組成物の提
供。【解決手段】飼料中にカードランを配合し、魚類に摂
取させる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、魚類養殖用飼料組
成物、さらに詳しくは、養殖魚類等の免疫活性を高める
ことによって養殖の場における生産性の向上を図るため
の魚類養殖用飼料組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】近年、水産の分野でも資源の枯渇が叫ば
れ、各種魚類の養殖が盛んに行われ、一定の成果を上げ
つつある。しかし、養殖水域の汚染、生産性を上げるた
めの過密養殖、種苗輸送の活発化に伴う病原菌の伝播な
どが原因で、魚に対する感染病が蔓延し、養殖の生産性
を著しく阻害している。この問題の解消のため、従来、
主として抗生物質などの薬品の投与が行われてきた。し
かし、食用に供する魚類に対する過剰な薬品の使用は、
その残留性や耐性菌の出現による効果の低下などの問題
を生じ、ここ数年、治療よりも、予防を目的とした各種
の免疫賦活剤が市場に供給されるようになった。これら
の一例としては、酵母、担子菌、海藻由来の多糖類、レ
バミゾール、ウシラクトフェリン、ビヒズス菌のペプチ
ドグリカンなどがある。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、養殖の場で
病気に強い魚を飼育するために、相対的に安価で、添加
効果の優れた養殖魚類用の免疫賦活剤を新たに提供する
ことを目的とする。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、魚類に対
する免疫賦活作用を有する化合物を探索する過程で、直
鎖のβ−１,３−グルカンであるカードランがその目的
に極めて有効であることを見いだし、本発明を完成する
に至った。すなわち、従来から、カードランがマウスに
対して抗腫瘍作用や補体活性化作用などの免疫賦活作用
を示すことが知られている。しかしながら、これは、あ
くまでも実験室で哺乳類に腹腔内投与がなされた場合で
あり、カードランが魚類の免疫系にどのような影響を及
ぼすか、さらには魚類の感染症に対して防御効果を示す
か否かについては全く情報はなかった。このような状況
に鑑み、本発明者らは、免疫賦活作用のあるカードラン
を水産養殖業界へ導入すべく、魚に対して経口で投与し
たところ、カードラン投与区は、対照区に比べて魚病菌
攻撃試験における生残率が著しく向上することがわかっ
た。また、カードランは食細胞の貧食活性を向上させる
こと、補体系を著しく活性化することなどの新たな知見
が得られた。

【０００５】本発明は、このような本発明者らの新たな
知見に基づくもので、カードランを含有してなることを
特徴とする養殖魚類用の飼料組成物を提供するものであ
る。本発明の飼料組成物は、飼料成分とカードランとを
配合してなるもので、通常、組成物全量に対して、０.
０５〜５重量％の割合でカードランが配合され、また、
使用するカードランは水の存在下で、６０℃以上に加熱
されたカードランであることが好ましい。

【０００６】

【発明の実施の形態】本発明で使用するカードランは、
アルカリゲネス・フェカリスおよびアグロバクテリウム
属バクテリアの産生する直鎖のβ−１,３−グルカンで
ある。カードランは、原田ら（１９６６）によって発見
され、現在、食品添加物として主に食品用途に広く利用
されている。その構造は、グルコースがβ−１,３−結
合によって直鎖状につながったホモポリマーであり、β
−１,３−結合以外の結合およびグルコース以外の構成
糖は存在しないとされている。その特性は、水および各
種の有機溶媒に不溶、アルカリ、蟻酸溶液および尿素溶
液に可溶、そして６０℃付近まで一旦加熱後さらに加熱
することにより加熱ゲルを形成（ハイセットゲル）し、
さらに、６０℃付近まで加熱後、冷却すると冷却ゲルを
形成する（ローセットゲル）。また、フィルムを形成
し、さらに保湿効果などを示す。このように、カードラ
ンの大きな特性は、特に、温度および温度に対する履歴
によって著しくその物理化学的性質を異にすることであ
る。すなわち、カードランはその温度履歴によって分子
の構造がはなはだ異なる状態となる。

【０００７】かくして、用いるカードランは、通常市販
されているカードランをそのままでもよく、また、予
め、カードランを水に分散後、加熱し、カードランに特
定のコンフォメーションを取らせたものでもよい。カー
ドランの水への分散に格別の条件や、考慮は特に必要な
いが、水１００重量部に対して、カードラン０.１〜５
重量部程度が最も扱いやすい。また、水の量は、組成物
の剤形等を考慮して決める。加熱条件は、４０℃以上で
あればよく、好ましくは、６０℃以上、さらに好ましく
は、７０℃以上の温度で加熱する。加熱上限温度は１５
０℃までであれば効果の点では大きな違いはなく、作業
性を考えれば１００℃までの範囲で十分である。加熱時
間は、特に限定するものではないが、通常、３０秒〜２
０分間の加熱で所望の効果が得られる。本発明の飼料組
成物におけるカードランの含量は、特に限定するもので
はないが、組成物の取り扱いや、効果等の点から、組成
物全量に対して０.０５〜５重量％であることが好まし
い。

【０００８】本発明の魚類養殖用飼料組成物は、飼料成
分とカードランとを混合して製造される。混合する他の
飼料成分は、特に限定するものではなく、魚類養殖に通
常使用される各種の飼料や、その混合物等いずれでもよ
く、混合方法も特に限定するものではない。また、予
め、自体公知の方法に従って、飼料成分と、カードラン
とを混合した後、粉末、顆粒、ペレット状等の所望の剤
形成形してもよく、あるいは、使用直前に、例えば、通
常使用される公知の魚類養殖用飼料とカードランとを混
合し、要すれば、さらに成形して組成物としてもよい。
例えば、成形前の粉末状態の飼料に、原料の一つとし
て、通常用いられている混合機でカードランを混合すれ
ばよい。その後、必要に応じてエクストルーダー、ペレ
ッターなどで成形し、所望の飼料組成物が得られる。ま
た、加熱したカードランを使用する場合、カードラン分
散液がゲル状ないしペースト状になるので、組成物に配
合するに際しては、例えば、つぶした後、飼料組成物成
形用の水に均一に分散させるなどして、飼料組成物全体
に均一に混合する。

【０００９】本発明の魚類養殖用飼料組成物は、通常の
飼料組成物と同様な方法で使用でき、組成物の供給量も
特に限定するものではなく、用いた飼料成分の供給量に
応じて与えることができる。本発明の飼料組成物は、養
殖されている各魚種に対応できる。魚類の例としては、
淡水魚のニジマス、コイ、キンギョ、アメリカナマズ、
ウナギ、ティラピア、アユ、ヤマメ、アマゴ、ヒメマ
ス、ブラウンマスなど、海水魚の大西洋サケ、ベニザ
ケ、マスノスケ、サクラマス、ブリ、タイ、クロダイ、
ヒラメ、フグ、シマアジ、カンパチなどがあげられる。

【００１０】また、本発明の組成物は魚類に対して免疫
活性作用を示すことから、対象とする感染症もとくに限
定されるものではない。すなわち、ラブドウィルス、ビ
ルナウィルス、ヘルペスウィルス、イリドウィルスなど
のウィルス病、ノカルディア症、連鎖球菌症、シュード
モナス症、類結節症、鰭赤病、細菌性腎臓病、赤点病、
エロモナス病、せっそう病、ビブリオ病、細菌性鰓病、
レッドマウス病、腸敗血症、パラコロ病、エドワジェラ
症、冷水病、滑走細菌症、カラムナリス病などの細菌
病、水カビ病、ワタカブリ病、真菌性肉芽腫症、イクチ
オホヌス症、ブランキオマイセス症、デルモシスチジウ
ム症、胃拡張症などの真菌病などに対して、魚体そのも
のの防御機能を増進する立場から対応が可能である。さ
らに、カードラン投与区の魚は、対照区の魚と比較し
て、食味の要素中の触覚、視覚（小俣靖著、「美味し
さ」と味覚の科学、日刊工業新聞社）がよいことが認め
られた。すなわち、カードラン投与区の魚は、活力がよ
く、筋肉にはりがあり、健康魚であった。これに対し、
病魚は体色が黒ずみ、体表面粘液が多い傾向にあるが、
カードラン投与区の魚はその様な傾向は認められなかっ
た。さらにまた、カードラン投与区の魚は、対照区の魚
と比較して、肉厚で、料理しやすいことが認められた。

【００１１】

【実施例】つぎに、実施例をあげて本発明をさらに具体
的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものでは
ない。実施例１熊本県八代市の養殖場から購入したコイ
（体重約３０ｇ）を１０尾ずつ、６０リットルの水槽に
入れ、水温２２〜２３℃で１週間予備飼育した後、実験
に供した。なお、予備飼育期間中は市販の養鯉用配合飼
料（日本配合飼料、Ｎo.６Ｐ）を毎日、飽食するまで与
えた。

【００１２】カードラン配合飼料組成物は、つぎのよう
に製造した。表１に示すごとく、脱イオン水３８mlにカ
ードラン（１６０、３１０または６３０mg）を懸濁さ
せ、電子レンジ中で加熱してゲル化させた。各ゲルをミ
キサーにかけて微粒子化した後、各々に粉末化した養鯉
用配合飼料（日本配合飼料、Ｎo.６Ｐ）６２ｇを加えて
混合し、ペレット状に成形して試験用飼料とした。な
お、試験用飼料（Ａ、ＢおよびＣ）は９.７ｇ（コイ１
０尾に対する１日当たりの投与量）ずつに小分けして−
２０℃に保存した。

【００１３】

【表１】

【００１４】試験用試料の投与はつぎのようにして行っ
た。各試験区のコイに魚体重の３.２％相当量の試験用
飼料（配合飼料に換算すると２％相当量）を１日おきに
５回、朝夕２回に分けて投与した。なお、試験用飼料を
投与しない日および対照区には魚体重の２％相当量の配
合飼料を与えた。１日当たりのカードラン投与量を計算
すると、飼料Ａ区では５０mg／kg体重、飼料Ｂ区では１
００mg／kg体重、飼料Ｃ区では２００mg／kg体重とな
る。本実験に用いたエドワルドシエラ・タルダ（Ｅdwar
dsiella tarda）ＮＧ８１０４は、ヒラメ病魚から分離
された菌株である。この菌株の病原性を魚体内通過によ
って高めた後、ハートインヒュージョン寒天培地（日水
製薬）上でそれぞれ３６℃、１３時間および２２℃、１
７時間培養し、滅菌生理食塩水（０.８５％ＮaＣl）に
それぞれ２×１０⁸ＣＦＵ／ml、５×１０⁷ ＣＦＵ／ml
となるよう懸濁させた。試験用飼料の最終投与から３日
後にＥ.tarda菌（２×１０⁸ＣＦＵ／１００ｇ体重）を
コイの腹腔内に接種し、７日後の生残率を求めた。生残
率の比較にはＦisherの正確確率検定法を用い、Ｐ＜０.
０５のとき有意差があるとみなした。

【００１５】Ｅ.tarda菌を用いた攻撃試験の結果を図１
に示す。Ｅ.tardaによる攻撃試験では、対照区（飼料Ｄ
区）の生残率が２０％であったのに対して、５０mg／kg
投与区（飼料Ａ区）は６０％、１００mg／kg投与区（飼
料Ｂ区）は７０％、２００mg／kg投与区（飼料Ａ区）は
４０％であった。検定の結果、１００mg／kg投与区が対
照区と比較して有意に高かった。なお、このとき、頭腎
食細胞の活性の測定を行った。その方法と結果を以下に
記す。上記の方法でカードラン添加飼料を１日おきに５
回コイに経口投与し、最終投与から３日目に２−メチル
キノリンで麻酔し、背大動脈から脱血後、頭腎組織を摘
出した。頭腎を氷冷ＲＰＭＩ−ＰＣ培地（１０mＭリン
酸塩と０.３１％クエン酸ナトリウムを含むＲＰＭＩ−
１６４０、pＨ７.４）５mlを入れたプラスチック製の皿
（直径６０mm）に移し、シリコン処理スライドガラス２
枚の間にはさんで頭腎を潰して食細胞を遊離させた。こ
れを試験管に移し、シリコン処理ピペットでピペッティ
ングしてさらに組織をほぐした後、３０×ｇで３分間遠
心して混在する結合組織と細胞の凝集塊を沈降させた。
上層の浮遊細胞をクエン酸ナトリウムを含まないＲＰＭ
Ｉ培地（ＲＰＭＩ−Ｐ）で３回洗浄後、トリパンブルー
排除試験および位相差顕微鏡観察によって生きた食細胞
数を数え、ＲＰＭＩ−Ｐに１×１０⁷cells／mlとなるよ
うに浮遊させた。

【００１６】一方、パン酵母（Ｓaccharomyces serevis
iae、オリエンタル酵母）５００mgを１００ml用ビーカ
ーに秤量し、生理食塩水５０mlを加えて３０分間煮沸し
た。滅菌ガーゼで濾過後、遠心し、沈澱を生理食塩水で
数回洗浄後、１０％の牛胎児血清（ＦＢＳ）を含むＰＲ
ＭＩ−Ｐ培地に１×１０⁸cells／mlとなるよう懸濁させ
た。貧食活性の測定に当っては、頭腎食細胞浮遊液（１
×１０⁷cells／ml）１００μlと酵母懸濁液（１×１０⁸
cells／ml）１００μlをシリコン処理試験管中で混合
し、２５℃で６０分間インキュベートした後、試験管を
氷水につけて貧食を停止させた。この液約５０μlをス
ライドグラス上に塗沫して風乾後、ライト染色し、５０
０個以上の食細胞を顕微鏡下で観察して食作用指数（Ｐ
Ｉ）を求めた。

【００１７】

【数１】

【００１８】ＰＩの平均値の比較にはＭann−Ｗhitney
のＵ検定を用い、Ｐ＜０.０５のとき有意差があるとみ
なした。コイに０、５０、１００、２００mg／kg体重の
カードランを１日おきに５回経口投与して頭腎食細胞の
貧食活性を測定した結果、表２に示すごとく、いずれの
投与区も対照区に比べて有意に高い貧食活性を示した。
中でも５０mg／kg区は平均値で対照区の４.９倍の値を
示した。

【００１９】

【表２】

【００２０】実施例２供試魚のヒラメ（Ｊapanese Ｆlo
under、Ｐralichthys olivaceus）は、福山大学附属内
海生物資源研究所で孵化後、種苗として飼育したconven
tional fish（平均体重３.５ｇ、平均体長５.２cm、平
均体高２.２cm）を用いた。カードラン配合飼料組成物
はつぎのように製造した。原料としてヒラメ用飼料（丸
紅飼料）１.８８kgにカードラン２０ｇを加え、つい
で、フィードオイル（理研ビタミン）０.１kg、水０.３
kgをこの順に加えて全体を混練した。混合機はＳＨＩＮ
−ＥＩＰＤ１０−１を用いた。ついで、不二パウダル製
ディスクペレッターＦ−５に５mmφのダイを装着して押
し出し、１０mmの長さに切断し、成形体を得た。その後
オーブンで乾燥した後スチーミングしたものを飼料とし
た。対照の飼料にはカードランの代わりに、セルロース
（商品名：「ＫＣフロック」、日本製紙）を同量使用し
た。実験は、試験飼料で４９日間飼育し、Ｅ．tarda Ｆ
Ｅ１（２×１０⁷cell／ml）を２６℃の海水に懸濁し、
網篭に入れた魚体を１０分間その中に浸漬した。その後
実験槽に戻し、無給餌飼育を行った。感染後毎日午前・
午後に分けて感染状態、延命状況を確かめた。その結
果、図２に示すごとく、感染後の延命は、カードラン投
与区で明らかに高い結果が得られた。なお、生残魚の解
剖所見ではカードラン配合飼料組成物投与区において良
好な症状が認められた。

【００２１】実施例３実施例２と同様に、中型ヒラメ稚
魚（平均体重６０.０ｇ）を用いて中期間（２２日間）
の経口給餌後、実施例１と同様にして，Ｅ．tarda細菌
（３×１０⁷cell／ml）に人為感染させ、延命を検討し
た。図３に示すごとく、感染後１９日での延命はカード
ラン配合飼料組成物投与区で明らかに高かった。

【００２２】実施例４実施例１と同様にして、大型ヒラ
メを用いて短期間（１３日間）の経口給餌後、Ｅ．tard
aに人為感染させ、延命を検討した。この時の飼料はつ
ぎのようにして調製した。原料としてヒラメ用飼料（丸
紅飼料）３７.６kgにカードラン０.４kgを加え混合し
た。成形機とてアルファライザーα１００用い、先端バ
レル温度１１０℃に設定して成型した。ダイの孔径は８
mmφのものを用いた。ついで、乾燥機中で１時間乾燥
し、飼料とした。対照の飼料にはカードランの代わり
に、セルロース（商品名：「ＫＣフロック」、日本製
紙）を同量使用した。感染後１７日間での延命は、図４
に示すごとく、カードラン配合飼料組成物投与区で第２
回試験と同様の結果が得られた。感染後の主要臓器重量
にはほとんど影響を及ぼさなかったが、個々の解剖病理
学的所見ではカードラン配合飼料組成物投与区において
良好な所見が認められた。

【００２３】

【発明の効果】以上記載したごとく、本発明によれば、
相対的に安価で、添加効果の優れた養殖魚類用の免疫賦
活剤を配合した新規な魚類養殖用飼料組成物が提供でき
る。

【図面の簡単な説明】

【図１】カードラン配合飼料組成物の経口投与がＥ．
tarda菌攻撃後のコイの生残率に及ぼす影響を試験した
結果を示すグラフ。

【図２】実施例２における試験結果の感染後日数と生
残率の関係を示すグラフ。

【図３】実施例３における試験結果の感染後日数と生
残率の関係を示すグラフ。

【図４】実施例４における試験結果の感染後日数と生
残率の関係を示すグラフ。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】カードランを含有してなることを特徴と
する魚類養殖用飼料組成物。
【請求項２】組成物に基づくカードランの含量が、
０.０５〜５重量％である請求項１記載の魚類養殖用飼
料組成物。
【請求項３】使用するカードランが、水の存在下、６
０℃以上で加熱したカードランである請求項１記載の魚
類養殖用飼料組成物。