JPH10316585A - キラーｔ細胞賦活剤 - Google Patents
キラーｔ細胞賦活剤Info
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Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 防御抗原を含み、皮膚表皮角質層を物理
的または化学的に破壊することにより活性化された表皮
ランゲルハンス細胞表面に適用するための、該抗原特異
的キラーＴ細胞賦活剤。特に、支持体上に、防御抗原を
放出可能な状態で含有する粘着層が積層されてなる粘着
テープ製剤の形態であることを特徴とする該抗原特異的
キラーＴ細胞賦活剤。また、上記製剤の使用による哺乳
動物の抗原特異的キラーＴ細胞賦活方法。 【効果】 本発明の抗原特異的キラーＴ細胞賦活剤は、
接種した防御抗原を提示する細胞のみを特異的に殺傷す
るキラーＴ細胞を増幅活性化するので、難治療性のウイ
ルス感染症および癌の予防および治療に極めて有用。
的または化学的に破壊することにより活性化された表皮
ランゲルハンス細胞表面に適用するための、該抗原特異
的キラーＴ細胞賦活剤。特に、支持体上に、防御抗原を
放出可能な状態で含有する粘着層が積層されてなる粘着
テープ製剤の形態であることを特徴とする該抗原特異的
キラーＴ細胞賦活剤。また、上記製剤の使用による哺乳
動物の抗原特異的キラーＴ細胞賦活方法。 【効果】 本発明の抗原特異的キラーＴ細胞賦活剤は、
接種した防御抗原を提示する細胞のみを特異的に殺傷す
るキラーＴ細胞を増幅活性化するので、難治療性のウイ
ルス感染症および癌の予防および治療に極めて有用。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、防御抗原を含有す
る該抗原特異的キラーＴ細胞賦活用、並びに微生物感染
症および癌予防治療用製剤、特に粘着テープ製剤に関す
る。さらに、本発明は、該免疫賦活剤を用いた哺乳動物
のキラーＴ細胞賦活方法、並びに微生物感染症および癌
の予防治療方法に関する。
る該抗原特異的キラーＴ細胞賦活用、並びに微生物感染
症および癌予防治療用製剤、特に粘着テープ製剤に関す
る。さらに、本発明は、該免疫賦活剤を用いた哺乳動物
のキラーＴ細胞賦活方法、並びに微生物感染症および癌
の予防治療方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、Ｂ
型およびＣ型肝炎等のウイルス感染症や癌のような重篤
な症状に至る難治療性の疾患に対して、ウイルス感染細
胞や癌細胞のみを選択的に攻撃除去する薬や治療法は現
在のところ無く、生体に副作用や危害を与えない有効な
治療法の開発が待たれるところである。ウイルス感染細
胞や癌細胞を選択的に殺傷する１つの有効な方法とし
て、生体が生来有している免疫系を賦活する方法が以前
から注目されている。哺乳動物が持つ免疫系を誘導賦活
する方法としてワクチン法が知られている。ワクチン
は、生弱毒性微生物を含む生ワクチンと、不活化微生物
またはその感染防御抗原を含む不活化ワクチンに分けら
れる。不活化ワクチンに属するコンポーネントワクチン
は、微生物抗原蛋白や癌細胞表面蛋白あるいはそれらの
ペプチド断片などを抗原として使用するものであり、安
全に免疫系を賦活する有効な手段として従来よりよく用
いられてきた。しかしながら、従来のワクチン法は体液
性免疫を賦活する、すなわち抗原特異的な抗体の産生を
高めるものであり、細胞外に放出されたウイルス粒子等
の除去には有効であるが、ウイルス感染の主体となる感
染細胞や癌細胞の除去に対しては効力が無い。
型およびＣ型肝炎等のウイルス感染症や癌のような重篤
な症状に至る難治療性の疾患に対して、ウイルス感染細
胞や癌細胞のみを選択的に攻撃除去する薬や治療法は現
在のところ無く、生体に副作用や危害を与えない有効な
治療法の開発が待たれるところである。ウイルス感染細
胞や癌細胞を選択的に殺傷する１つの有効な方法とし
て、生体が生来有している免疫系を賦活する方法が以前
から注目されている。哺乳動物が持つ免疫系を誘導賦活
する方法としてワクチン法が知られている。ワクチン
は、生弱毒性微生物を含む生ワクチンと、不活化微生物
またはその感染防御抗原を含む不活化ワクチンに分けら
れる。不活化ワクチンに属するコンポーネントワクチン
は、微生物抗原蛋白や癌細胞表面蛋白あるいはそれらの
ペプチド断片などを抗原として使用するものであり、安
全に免疫系を賦活する有効な手段として従来よりよく用
いられてきた。しかしながら、従来のワクチン法は体液
性免疫を賦活する、すなわち抗原特異的な抗体の産生を
高めるものであり、細胞外に放出されたウイルス粒子等
の除去には有効であるが、ウイルス感染の主体となる感
染細胞や癌細胞の除去に対しては効力が無い。
【０００３】ウイルス感染細胞や癌細胞の特異的な除去
にあたっては、生体の免疫系の中でも、特にＣＤ８分子
陽性のキラーＴ細胞（以下、ＣＴＬという場合もある）
が重要な役割を果たす。ウイルス感染細胞はウイルス蛋
白を、また癌細胞は変異蛋白をそれぞれ細胞質内でペプ
チド断片化し、それを主要組織適合複合体（以下、ＭＨ
Ｃという）クラスＩ分子と呼ばれる器に乗せ細胞表面に
発現し、異常の起きた細胞であることを生体免疫系にア
ピールする。ＣＴＬは該ウイルスペプチドまたは変異ペ
プチド（癌抗原ペプチド）／ＭＨＣクラスＩ分子複合体
を認識し、それを発現した細胞を殺傷する。
にあたっては、生体の免疫系の中でも、特にＣＤ８分子
陽性のキラーＴ細胞（以下、ＣＴＬという場合もある）
が重要な役割を果たす。ウイルス感染細胞はウイルス蛋
白を、また癌細胞は変異蛋白をそれぞれ細胞質内でペプ
チド断片化し、それを主要組織適合複合体（以下、ＭＨ
Ｃという）クラスＩ分子と呼ばれる器に乗せ細胞表面に
発現し、異常の起きた細胞であることを生体免疫系にア
ピールする。ＣＴＬは該ウイルスペプチドまたは変異ペ
プチド（癌抗原ペプチド）／ＭＨＣクラスＩ分子複合体
を認識し、それを発現した細胞を殺傷する。
【０００４】近年、ウイルス感染細胞や癌細胞を特異的
に認識して殺傷するＣＴＬの活性化、増幅を目的とした
ワクチン法の研究が活発に行われるようになった。中で
も、ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ）への抗原提示能が知られて
いた樹状細胞が、ＣＴＬに対してもＭＨＣクラスＩ分子
を介して高い抗原提示能を有することが明らかとなり、
これを用いたワクチン法の開発が最も注目を浴びている
（J. I. Mayordomo etal. Nature Med. 1 (12), 1279-1
302 (1995))。しかし、この方法は、末梢血中にわずか
に存在する未分化樹状細胞を分離し、これを試験管内で
長期間培養して増幅させ、得られる活性化樹状細胞にウ
イルスペプチドまたは癌抗原ペプチドを感作して細胞表
面のＭＨＣクラスＩ分子上に該抗原ペプチドを提示した
樹状細胞を誘導し、これを生体内に移入するというもの
であり、未分化樹状細胞の分離や長期間培養等の煩雑な
操作を伴うので、臨床応用の実現性は乏しい。
に認識して殺傷するＣＴＬの活性化、増幅を目的とした
ワクチン法の研究が活発に行われるようになった。中で
も、ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ）への抗原提示能が知られて
いた樹状細胞が、ＣＴＬに対してもＭＨＣクラスＩ分子
を介して高い抗原提示能を有することが明らかとなり、
これを用いたワクチン法の開発が最も注目を浴びている
（J. I. Mayordomo etal. Nature Med. 1 (12), 1279-1
302 (1995))。しかし、この方法は、末梢血中にわずか
に存在する未分化樹状細胞を分離し、これを試験管内で
長期間培養して増幅させ、得られる活性化樹状細胞にウ
イルスペプチドまたは癌抗原ペプチドを感作して細胞表
面のＭＨＣクラスＩ分子上に該抗原ペプチドを提示した
樹状細胞を誘導し、これを生体内に移入するというもの
であり、未分化樹状細胞の分離や長期間培養等の煩雑な
操作を伴うので、臨床応用の実現性は乏しい。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】したがって、本発明の
目的は、ウイルス感染症や癌の有効な予防治療法を確立
するための、ウイルス感染細胞または癌細胞を特異的に
殺傷するＣＴＬを効率的に活性化する医薬製剤の提供で
ある。また、本発明の別の目的は、該製剤を用いたＣＴ
Ｌの賦活方法およびウイルス感染症や癌の予防治療法を
提供することである。
目的は、ウイルス感染症や癌の有効な予防治療法を確立
するための、ウイルス感染細胞または癌細胞を特異的に
殺傷するＣＴＬを効率的に活性化する医薬製剤の提供で
ある。また、本発明の別の目的は、該製剤を用いたＣＴ
Ｌの賦活方法およびウイルス感染症や癌の予防治療法を
提供することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、皮膚表皮に多数常
在する樹状細胞であるランゲルハルス細胞が、生体の外
的刺激に対する初期バリアである表皮角質層を物理的ま
たは化学的に破壊するだけで活性化され、ＣＴＬへの抗
原提示能が急激に高まること、並びに活性化された表皮
ランゲルハンス細胞は、ＣＴＬへの抗原提示に重要なＭ
ＨＣクラスＩ分子の他、ＣＴＬへの確実な接着に必要な
ＩＣＡＭ−１、Ｂ７−２、ＣＤ４０等の発現が増大さ
せ、ＣＴＬ前駆細胞が多数存在するリンパ節内へと移動
することを見出した。また、本発明者らは、角質層バリ
アを破壊した皮膚表皮に、バリア破壊後約２４時間以内
にウイルスペプチドまたは癌抗原ペプチドを塗布する
か、あるいは該抗原ペプチドを粘着層に放出可能な状態
で含有する粘着テープを貼付することによって該抗原ペ
プチドを経皮接種すれば、表皮ランゲルハンス細胞は、
その細胞表面で発現が高まったＭＨＣクラスＩ分子上に
該抗原を提示しながらリンパ節へ移動し、そこでＣＴＬ
前駆細胞と接着することによりＣＴＬ前駆細胞を活性化
して増幅させ、効率よく該抗原特異的な成熟ＣＴＬへと
分化させ得ることを見出した。さらに、本発明者らは、
上記の方法で抗原ペプチドを経皮接種した哺乳動物から
採取したリンパ球が、該抗原で感作した細胞のみを特異
的に傷害することを確認して本発明を完成するに至っ
た。
を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、皮膚表皮に多数常
在する樹状細胞であるランゲルハルス細胞が、生体の外
的刺激に対する初期バリアである表皮角質層を物理的ま
たは化学的に破壊するだけで活性化され、ＣＴＬへの抗
原提示能が急激に高まること、並びに活性化された表皮
ランゲルハンス細胞は、ＣＴＬへの抗原提示に重要なＭ
ＨＣクラスＩ分子の他、ＣＴＬへの確実な接着に必要な
ＩＣＡＭ−１、Ｂ７−２、ＣＤ４０等の発現が増大さ
せ、ＣＴＬ前駆細胞が多数存在するリンパ節内へと移動
することを見出した。また、本発明者らは、角質層バリ
アを破壊した皮膚表皮に、バリア破壊後約２４時間以内
にウイルスペプチドまたは癌抗原ペプチドを塗布する
か、あるいは該抗原ペプチドを粘着層に放出可能な状態
で含有する粘着テープを貼付することによって該抗原ペ
プチドを経皮接種すれば、表皮ランゲルハンス細胞は、
その細胞表面で発現が高まったＭＨＣクラスＩ分子上に
該抗原を提示しながらリンパ節へ移動し、そこでＣＴＬ
前駆細胞と接着することによりＣＴＬ前駆細胞を活性化
して増幅させ、効率よく該抗原特異的な成熟ＣＴＬへと
分化させ得ることを見出した。さらに、本発明者らは、
上記の方法で抗原ペプチドを経皮接種した哺乳動物から
採取したリンパ球が、該抗原で感作した細胞のみを特異
的に傷害することを確認して本発明を完成するに至っ
た。
【０００７】すなわち、本発明は以下の通りである。 （１）防御抗原を含み、皮膚表皮角質層を物理的または
化学的に破壊することにより活性化された表皮ランゲル
ハンス細胞表面に適用するための該抗原特異的ＣＴＬ賦
活剤。 （２）支持体の片面に、防御抗原を放出可能な状態で含
む該粘着層が積層されてなる粘着テープ製剤の形態であ
ることを特徴とする上記（１）の抗原特異的ＣＴＬ賦活
剤。 （３）粘着層表面が２種の領域に分かれるように該粘着
層が区分され、そのいずれか一方が防御抗原を含むこと
を特徴とする上記（２）の抗原特異的ＣＴＬ賦活剤。 （４）支持体の両面に粘着層が積層され、片面の粘着層
が防御抗原を放出可能な状態で含む粘着テープ製剤の形
態であることを特徴とする上記（１）の抗原特異的ＣＴ
Ｌ賦活剤。 （５）防御抗原が、病原性微生物、その感染防御抗原と
なるペプチドおよび癌細胞特異的変異ペプチドからなる
群より選択される１以上のものである上記（１）〜
（４）のいずれかの抗原特異的ＣＴＬ賦活剤。 （６）微生物感染症または癌の予防治療剤である上記
（５）の抗原特異的ＣＴＬ賦活剤。 （７）皮膚表皮角質層を破壊することにより、表皮ラン
ゲルハンス細胞表面にＭＨＣクラスＩ分子を発現させた
後、該表皮に防御抗原を経皮接種することにより該ラン
ゲルハンス細胞を該抗原特異的に活性化してリンパ節に
移動させ、リンパ節内でＣＴＬ前駆細胞を該抗原提示ラ
ンゲルハンス細胞と作用させることを特徴とする哺乳動
物の該抗原特異的ＣＴＬ賦活方法。 （８）上記（１）または（２）の抗原特異的ＣＴＬ賦活
剤を、角質層を破壊した表皮に投与することにより防御
抗原を経皮接種することを特徴とする上記（７）の哺乳
動物の抗原特異的ＣＴＬ賦活方法。 （９）粘着テープの粘着層表面を、皮膚表皮角質層面に
接着した後剥離する操作を１回以上行うことにより該角
質層を破壊することを特徴とする上記（７）の哺乳動物
の抗原特異的ＣＴＬ賦活方法。 （１０）上記（３）の抗原特異的ＣＴＬ賦活剤の、防御
抗原を含まない粘着層領域を用いて皮膚表皮角質層を破
壊し、該抗原特異的ＣＴＬ賦活剤の、防御抗原を含む粘
着層領域表面を該表皮に接着させることにより防御抗原
を経皮接種することを特徴とする上記（９）の哺乳動物
の抗原特異的ＣＴＬ賦活方法。 （１１）上記（４）の抗原特異的ＣＴＬ賦活剤の、防御
抗原を含まない片面の粘着層を用いて皮膚表皮角質層を
破壊し、該抗原特異的ＣＴＬ賦活剤の、防御抗原を含む
片面の粘着層表面を該表皮に接着させることにより防御
抗原を経皮接種することを特徴とする上記（９）の哺乳
動物の抗原特異的ＣＴＬ賦活方法。 （１２）防御抗原が、病原性微生物、その感染防御抗原
となるペプチドおよび癌細胞特異的変異ペプチドからな
る群より選択される１以上のものである上記（７）〜
（１１）のいずれかの哺乳動物の抗原特異的ＣＴＬ賦活
方法。 （１３）哺乳動物の微生物感染症または癌の予防および
治療方法である上記（１２）の抗原特異的ＣＴＬ賦活方
法。
化学的に破壊することにより活性化された表皮ランゲル
ハンス細胞表面に適用するための該抗原特異的ＣＴＬ賦
活剤。 （２）支持体の片面に、防御抗原を放出可能な状態で含
む該粘着層が積層されてなる粘着テープ製剤の形態であ
ることを特徴とする上記（１）の抗原特異的ＣＴＬ賦活
剤。 （３）粘着層表面が２種の領域に分かれるように該粘着
層が区分され、そのいずれか一方が防御抗原を含むこと
を特徴とする上記（２）の抗原特異的ＣＴＬ賦活剤。 （４）支持体の両面に粘着層が積層され、片面の粘着層
が防御抗原を放出可能な状態で含む粘着テープ製剤の形
態であることを特徴とする上記（１）の抗原特異的ＣＴ
Ｌ賦活剤。 （５）防御抗原が、病原性微生物、その感染防御抗原と
なるペプチドおよび癌細胞特異的変異ペプチドからなる
群より選択される１以上のものである上記（１）〜
（４）のいずれかの抗原特異的ＣＴＬ賦活剤。 （６）微生物感染症または癌の予防治療剤である上記
（５）の抗原特異的ＣＴＬ賦活剤。 （７）皮膚表皮角質層を破壊することにより、表皮ラン
ゲルハンス細胞表面にＭＨＣクラスＩ分子を発現させた
後、該表皮に防御抗原を経皮接種することにより該ラン
ゲルハンス細胞を該抗原特異的に活性化してリンパ節に
移動させ、リンパ節内でＣＴＬ前駆細胞を該抗原提示ラ
ンゲルハンス細胞と作用させることを特徴とする哺乳動
物の該抗原特異的ＣＴＬ賦活方法。 （８）上記（１）または（２）の抗原特異的ＣＴＬ賦活
剤を、角質層を破壊した表皮に投与することにより防御
抗原を経皮接種することを特徴とする上記（７）の哺乳
動物の抗原特異的ＣＴＬ賦活方法。 （９）粘着テープの粘着層表面を、皮膚表皮角質層面に
接着した後剥離する操作を１回以上行うことにより該角
質層を破壊することを特徴とする上記（７）の哺乳動物
の抗原特異的ＣＴＬ賦活方法。 （１０）上記（３）の抗原特異的ＣＴＬ賦活剤の、防御
抗原を含まない粘着層領域を用いて皮膚表皮角質層を破
壊し、該抗原特異的ＣＴＬ賦活剤の、防御抗原を含む粘
着層領域表面を該表皮に接着させることにより防御抗原
を経皮接種することを特徴とする上記（９）の哺乳動物
の抗原特異的ＣＴＬ賦活方法。 （１１）上記（４）の抗原特異的ＣＴＬ賦活剤の、防御
抗原を含まない片面の粘着層を用いて皮膚表皮角質層を
破壊し、該抗原特異的ＣＴＬ賦活剤の、防御抗原を含む
片面の粘着層表面を該表皮に接着させることにより防御
抗原を経皮接種することを特徴とする上記（９）の哺乳
動物の抗原特異的ＣＴＬ賦活方法。 （１２）防御抗原が、病原性微生物、その感染防御抗原
となるペプチドおよび癌細胞特異的変異ペプチドからな
る群より選択される１以上のものである上記（７）〜
（１１）のいずれかの哺乳動物の抗原特異的ＣＴＬ賦活
方法。 （１３）哺乳動物の微生物感染症または癌の予防および
治療方法である上記（１２）の抗原特異的ＣＴＬ賦活方
法。
【０００８】
【発明の実施の形態】本発明の抗原特異的ＣＴＬ賦活方
法の特徴は、皮膚表皮角質層を物理的または化学的に破
壊することにより表皮ランゲルハンス細胞表面のＭＨＣ
クラスＩ分子の発現が増大するとともに、活性化された
表皮ランゲルハンス細胞がリンパ節に移動するという現
象を利用する点にある。ＭＨＣクラスＩ分子の発現が増
大した後、該表皮ランゲルハンス細胞がリンパ節へ移動
するまでの間に、該表皮に防御抗原を経皮接種すれば、
該ＭＨＣクラスＩ分子内自己ペプチドは該防御抗原のペ
プチドで置換される。
法の特徴は、皮膚表皮角質層を物理的または化学的に破
壊することにより表皮ランゲルハンス細胞表面のＭＨＣ
クラスＩ分子の発現が増大するとともに、活性化された
表皮ランゲルハンス細胞がリンパ節に移動するという現
象を利用する点にある。ＭＨＣクラスＩ分子の発現が増
大した後、該表皮ランゲルハンス細胞がリンパ節へ移動
するまでの間に、該表皮に防御抗原を経皮接種すれば、
該ＭＨＣクラスＩ分子内自己ペプチドは該防御抗原のペ
プチドで置換される。
【０００９】本発明において、防御抗原とは、病原微生
物（細菌、真菌、ウイルス等）の感染防御抗原となる該
微生物由来蛋白、癌細胞特異的に発現する変異蛋白、あ
るいは免疫原性を保持したそれらのペプチド断片等の
他、従来生ワクチンまたは不活化ワクチンとして使用さ
れる生弱毒性微生物またはその死菌などもすべて包含す
る。微生物由来蛋白としては、例えばＨＩＶ由来蛋白、
Ｂ型およびＣ型肝炎ウイルスの表面抗原、インフルエン
ザウイルスの表面抗原等が、また、癌細胞特異的変異蛋
白としては、癌化細胞分化抗原蛋白等が挙げられる。該
防御抗原は１種のみでも、複数の防御抗原を混合して使
用してもよい。
物（細菌、真菌、ウイルス等）の感染防御抗原となる該
微生物由来蛋白、癌細胞特異的に発現する変異蛋白、あ
るいは免疫原性を保持したそれらのペプチド断片等の
他、従来生ワクチンまたは不活化ワクチンとして使用さ
れる生弱毒性微生物またはその死菌などもすべて包含す
る。微生物由来蛋白としては、例えばＨＩＶ由来蛋白、
Ｂ型およびＣ型肝炎ウイルスの表面抗原、インフルエン
ザウイルスの表面抗原等が、また、癌細胞特異的変異蛋
白としては、癌化細胞分化抗原蛋白等が挙げられる。該
防御抗原は１種のみでも、複数の防御抗原を混合して使
用してもよい。
【００１０】活性化された表皮ランゲルハンス細胞は、
ＭＨＣクラスＩ分子／防御抗原ペプチド複合体で抗原提
示しながらリンパ節内へと移動し、リンパ節内で該防御
抗原を特異的に認識するＭＨＣ拘束性Ｔ細胞レセプター
を有するＣＴＬ前駆細胞と密接に結合する。両細胞の結
合には、抗原−レセプター間結合の他、ＭＨＣクラスＩ
分子−ＣＤ８間、ＩＣＡＭ−１−ＬＦＡ−１間、ＬＦＡ
−３−ＣＤ２間結合が寄与する。該結合によりＣＴＬ前
駆細胞は活性化されて増幅し、該抗原特異的な成熟ＣＴ
Ｌへと分化する。この成熟し増幅した抗原特異的ＣＴＬ
はリンパ液の循環に乗って全身をパトロールし、該抗原
を提示する標的細胞（例えば、ウイルス感染細胞や癌細
胞等）のみを識別して結合し、パーフォリンやグランザ
イムといった細胞傷害物質を放出して標的細胞を殺傷す
る。
ＭＨＣクラスＩ分子／防御抗原ペプチド複合体で抗原提
示しながらリンパ節内へと移動し、リンパ節内で該防御
抗原を特異的に認識するＭＨＣ拘束性Ｔ細胞レセプター
を有するＣＴＬ前駆細胞と密接に結合する。両細胞の結
合には、抗原−レセプター間結合の他、ＭＨＣクラスＩ
分子−ＣＤ８間、ＩＣＡＭ−１−ＬＦＡ−１間、ＬＦＡ
−３−ＣＤ２間結合が寄与する。該結合によりＣＴＬ前
駆細胞は活性化されて増幅し、該抗原特異的な成熟ＣＴ
Ｌへと分化する。この成熟し増幅した抗原特異的ＣＴＬ
はリンパ液の循環に乗って全身をパトロールし、該抗原
を提示する標的細胞（例えば、ウイルス感染細胞や癌細
胞等）のみを識別して結合し、パーフォリンやグランザ
イムといった細胞傷害物質を放出して標的細胞を殺傷す
る。
【００１１】角質層を破壊する方法は特に制限されない
が、例えばアセトンなどの有機溶剤により角質間層を形
成する皮脂を除く方法、あるいは機械的に角質層を破壊
する方法などが挙げられる。後者の好ましい一態様とし
て、粘着テープを表皮角質層面に接着させた後剥離する
操作（以下、粘着テープストリッピングと称する）を１
回ないし数回繰り返す方法が例示される（白井文哉ら、
日東技報、31 (2)、76(1993) ）。
が、例えばアセトンなどの有機溶剤により角質間層を形
成する皮脂を除く方法、あるいは機械的に角質層を破壊
する方法などが挙げられる。後者の好ましい一態様とし
て、粘着テープを表皮角質層面に接着させた後剥離する
操作（以下、粘着テープストリッピングと称する）を１
回ないし数回繰り返す方法が例示される（白井文哉ら、
日東技報、31 (2)、76(1993) ）。
【００１２】粘着テープストリッピングに用いる粘着テ
ープは、その接着力がベークライト板に対し８０ｇ／１
２ｍｍ幅以上の剥離粘着力を有するものであることが好
ましく、また、必要以上に角質を剥離しても効果は変わ
らないことを考慮すれば、１６００ｇ／１２ｍｍ幅以下
の剥離粘着力であることが好ましい。粘着剤の材質とし
てはアクリル系ポリマー粘着剤、ゴム系ポリマー粘着剤
などいずれの粘着剤であってもよい。
ープは、その接着力がベークライト板に対し８０ｇ／１
２ｍｍ幅以上の剥離粘着力を有するものであることが好
ましく、また、必要以上に角質を剥離しても効果は変わ
らないことを考慮すれば、１６００ｇ／１２ｍｍ幅以下
の剥離粘着力であることが好ましい。粘着剤の材質とし
てはアクリル系ポリマー粘着剤、ゴム系ポリマー粘着剤
などいずれの粘着剤であってもよい。
【００１３】防御抗原の経皮接種は、角質層を破壊する
と同時もしくは破壊後約２４時間以内に、好ましくは破
壊後約１２時間以内に粘着テープストリッピングした同
じ表皮表面に本発明の抗原特異的ＣＴＬ賦活剤を投与す
ることにより行うことができる。本発明の抗原特異的Ｃ
ＴＬ賦活剤は、外用剤の形態をとるものであれば特に制
限はなく、通常防御抗原と適当な外用剤用の基剤を含む
ものである。具体的には、例えば、防御抗原を、適当な
軟膏基剤と混和して調製される軟膏剤や、あるいは粘着
層を基剤として、防御抗原を該粘着層に植種する形に存
在させるかもしくは該粘着層に埋め込む形で存在させて
徐放放出が可能となるように設計された粘着テープ製剤
（以下、抗原特異的ＣＴＬ賦活用粘着テープ製剤と称す
る）が挙げられる。
と同時もしくは破壊後約２４時間以内に、好ましくは破
壊後約１２時間以内に粘着テープストリッピングした同
じ表皮表面に本発明の抗原特異的ＣＴＬ賦活剤を投与す
ることにより行うことができる。本発明の抗原特異的Ｃ
ＴＬ賦活剤は、外用剤の形態をとるものであれば特に制
限はなく、通常防御抗原と適当な外用剤用の基剤を含む
ものである。具体的には、例えば、防御抗原を、適当な
軟膏基剤と混和して調製される軟膏剤や、あるいは粘着
層を基剤として、防御抗原を該粘着層に植種する形に存
在させるかもしくは該粘着層に埋め込む形で存在させて
徐放放出が可能となるように設計された粘着テープ製剤
（以下、抗原特異的ＣＴＬ賦活用粘着テープ製剤と称す
る）が挙げられる。
【００１４】軟膏剤の場合、軟膏基剤としてワセリン、
パラフィン、プラスチベース、シリコン、植物油、ロウ
等の油脂系基剤、親水軟膏、親水ワセリン、精製ラノリ
ン、オイセリン等の乳剤性基剤、マクロゴール類等の水
溶性基剤などが例示される。また、必要に応じてパラオ
キシ安息香酸エステル類等の保存剤を添加してもよい。
パラフィン、プラスチベース、シリコン、植物油、ロウ
等の油脂系基剤、親水軟膏、親水ワセリン、精製ラノリ
ン、オイセリン等の乳剤性基剤、マクロゴール類等の水
溶性基剤などが例示される。また、必要に応じてパラオ
キシ安息香酸エステル類等の保存剤を添加してもよい。
【００１５】防御抗原の経皮接種は、該軟膏剤を角質層
を破壊した皮膚表皮に塗布することにより行うことがで
きる。軟膏剤中の防御抗原含有量は、該軟膏剤を通常量
塗布した際の投与量が、１種の抗原について０．１μｍ
ｏｌ／ｃｍ2 〜１ｍｍｏｌ／ｃｍ2 の範囲となるように
調整されるのが好ましい。
を破壊した皮膚表皮に塗布することにより行うことがで
きる。軟膏剤中の防御抗原含有量は、該軟膏剤を通常量
塗布した際の投与量が、１種の抗原について０．１μｍ
ｏｌ／ｃｍ2 〜１ｍｍｏｌ／ｃｍ2 の範囲となるように
調整されるのが好ましい。
【００１６】防御抗原の経皮接種の特に好ましい態様
は、本発明の抗原特異的ＣＴＬ賦活用粘着テープ製剤で
あり、これは角質層を破壊した皮膚表皮に貼付するもの
である。本発明の抗原特異的ＣＴＬ賦活用粘着テープ製
剤は、防御抗原が適度に徐放されるように設計されてい
ると同時に、粘着層表面に植種されるかもしくは粘着層
中に埋め込まれた該防御抗原が、少なくとも本来の防御
抗原としての機能を保持する程度に安定に存在すること
が必要である。また、この抗原特異的ＣＴＬ賦活用粘着
テープ製剤の粘着力は、表皮に十分接着するほどに強く
設計されていることも重要である。使用される粘着剤
は、防御抗原の抗原性を低下または変化させないことが
必須であるが、上記の条件を充足する粘着剤であれば、
アクリル系ポリマー粘着剤であっても、ゴム系ポリマー
粘着剤であってもよい。特に、好適に用いられる粘着剤
としては親水性ポリマーからなる粘着剤が挙げられる。
は、本発明の抗原特異的ＣＴＬ賦活用粘着テープ製剤で
あり、これは角質層を破壊した皮膚表皮に貼付するもの
である。本発明の抗原特異的ＣＴＬ賦活用粘着テープ製
剤は、防御抗原が適度に徐放されるように設計されてい
ると同時に、粘着層表面に植種されるかもしくは粘着層
中に埋め込まれた該防御抗原が、少なくとも本来の防御
抗原としての機能を保持する程度に安定に存在すること
が必要である。また、この抗原特異的ＣＴＬ賦活用粘着
テープ製剤の粘着力は、表皮に十分接着するほどに強く
設計されていることも重要である。使用される粘着剤
は、防御抗原の抗原性を低下または変化させないことが
必須であるが、上記の条件を充足する粘着剤であれば、
アクリル系ポリマー粘着剤であっても、ゴム系ポリマー
粘着剤であってもよい。特に、好適に用いられる粘着剤
としては親水性ポリマーからなる粘着剤が挙げられる。
【００１７】親水性ポリマーとしては、アラビアゴム，
カルボキシメチルセルロースなどの水溶性天然高分子な
ど、またビニルピロリドン、ビニルアルコール、２−ヒ
ドロキシエチルアクリレート、２−メトキシエチルアク
リレート、アクリル酸などの水溶性モノマーを重合して
なるポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポ
リメトキシエチルアクリレート、ポリアクリル酸など、
さらにこれら水溶性モノマーの２種以上の共重合体が例
示される。また本発明で求められる親水性を損なわない
範囲内で、アクリル酸ブチルやアクリル酸−２−エキシ
ヘキシルなどの疎水性モノマーが重合された粘着性高分
子であってもよい。
カルボキシメチルセルロースなどの水溶性天然高分子な
ど、またビニルピロリドン、ビニルアルコール、２−ヒ
ドロキシエチルアクリレート、２−メトキシエチルアク
リレート、アクリル酸などの水溶性モノマーを重合して
なるポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポ
リメトキシエチルアクリレート、ポリアクリル酸など、
さらにこれら水溶性モノマーの２種以上の共重合体が例
示される。また本発明で求められる親水性を損なわない
範囲内で、アクリル酸ブチルやアクリル酸−２−エキシ
ヘキシルなどの疎水性モノマーが重合された粘着性高分
子であってもよい。
【００１８】より好ましい親水性ポリマーとして、アル
コキシアルキルアクリレートおよびＮ−ビニルラクタム
からなるアクリル系共重合体が挙げられる。アクリル系
共重合体のモノマー成分であるアルコキシアルキルアク
リレートとしては、炭素数１〜４のアルコキシ基と炭素
数２〜４のアルキル基あるいはアルキレングリコール基
とをもつアクリレートが好ましい。具体的には、例えば
２−メトキシエチルアクリレート、２−エトキシエチル
アクリレート、２−ブトキシエチルアクリレート、３−
メトキシプロピルアクリレート、３−エトキシプロピル
アクリレートさらにメトキシトリエチレングリコールア
クリレート、メトキシジプロピレングリコールアクリレ
ートなどのアルコキシアルキレングリコールアクリレー
トが挙げられ、親水性が高いなどの点から、２−メトキ
シエチルアクリレート、２−エトキシエチルアクリレー
トが好ましい。
コキシアルキルアクリレートおよびＮ−ビニルラクタム
からなるアクリル系共重合体が挙げられる。アクリル系
共重合体のモノマー成分であるアルコキシアルキルアク
リレートとしては、炭素数１〜４のアルコキシ基と炭素
数２〜４のアルキル基あるいはアルキレングリコール基
とをもつアクリレートが好ましい。具体的には、例えば
２−メトキシエチルアクリレート、２−エトキシエチル
アクリレート、２−ブトキシエチルアクリレート、３−
メトキシプロピルアクリレート、３−エトキシプロピル
アクリレートさらにメトキシトリエチレングリコールア
クリレート、メトキシジプロピレングリコールアクリレ
ートなどのアルコキシアルキレングリコールアクリレー
トが挙げられ、親水性が高いなどの点から、２−メトキ
シエチルアクリレート、２−エトキシエチルアクリレー
トが好ましい。
【００１９】もう一方のモノマー成分であるＮ−ビニル
ラクタムとしては、５〜７員環のＮ−ビニルラクタムが
使用される。例えば、Ｎ−ビニル−２−ピロリドン、Ｎ
−ビニル−２−ピペリドン、Ｎ−ビニル−２−カプロラ
クタムなどが挙げられるが、安全性や凡用性の面からＮ
−ビニルピロリドンが好ましい。
ラクタムとしては、５〜７員環のＮ−ビニルラクタムが
使用される。例えば、Ｎ−ビニル−２−ピロリドン、Ｎ
−ビニル−２−ピペリドン、Ｎ−ビニル−２−カプロラ
クタムなどが挙げられるが、安全性や凡用性の面からＮ
−ビニルピロリドンが好ましい。
【００２０】アルコキシアルキルアクリレートの配合割
合は特に限定されないが、好ましくはアクリル系共重合
体全体の６０〜８０重量％であり、さらに好ましくは６
５〜７５重量％である。また、Ｎ−ビニルラクタムの配
合割合も特に制限はないが、好ましくはアクリル系共重
合体全体の２０〜４０重量％であり、さらに好ましくは
２５〜３５重量％である。
合は特に限定されないが、好ましくはアクリル系共重合
体全体の６０〜８０重量％であり、さらに好ましくは６
５〜７５重量％である。また、Ｎ−ビニルラクタムの配
合割合も特に制限はないが、好ましくはアクリル系共重
合体全体の２０〜４０重量％であり、さらに好ましくは
２５〜３５重量％である。
【００２１】親水性高分子の製造は、それぞれ自体既知
の方法で行うことができる。例えばアクリル系共重合体
は、溶液重合、乳化重合、懸濁重合、塊状重合、光重合
などのいずれの共重合方法で製造してもよい。
の方法で行うことができる。例えばアクリル系共重合体
は、溶液重合、乳化重合、懸濁重合、塊状重合、光重合
などのいずれの共重合方法で製造してもよい。
【００２２】粘着層には、さらに適度な粘着性を付与す
るために、親水性または水溶性の低分子物質を添加して
もよい。親水性または水溶性の低分子物質としては、沸
点が１００〜４００℃の高沸点液状化合物が挙げられ
る。その具体例として多価アルコール、糖アルコールな
どが挙げられるが、この時タンパク質と反応して褐変反
応（メイラード反応）など起こさない還元糖が好ましく
用いられる。多価アルコールとしてはエチレングリコー
ル、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、
液状ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、
ジプロピレングリコール、１，１，１−トリヒドロキシ
プロパン、グリセリンなど還元糖としては、ソルビトー
ル、ソルビタン、エリスリトール、キシリトール、トレ
ハロースなどが挙げられる。
るために、親水性または水溶性の低分子物質を添加して
もよい。親水性または水溶性の低分子物質としては、沸
点が１００〜４００℃の高沸点液状化合物が挙げられ
る。その具体例として多価アルコール、糖アルコールな
どが挙げられるが、この時タンパク質と反応して褐変反
応（メイラード反応）など起こさない還元糖が好ましく
用いられる。多価アルコールとしてはエチレングリコー
ル、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、
液状ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、
ジプロピレングリコール、１，１，１−トリヒドロキシ
プロパン、グリセリンなど還元糖としては、ソルビトー
ル、ソルビタン、エリスリトール、キシリトール、トレ
ハロースなどが挙げられる。
【００２３】またグリセリンとエチレングリコールやプ
ロピレングリコールとのエーテル型付加体であるポリオ
キシエチレングリセルエーテルやポリオキシプロピレン
ソルビトールエーテルやポリオキシエチレンソルビタン
エーテルでもよい。これらの親水性又は水溶性低分子物
質の使用量は、粘着層を形成する粘着剤の５〜９０重量
％範囲で添加される。
ロピレングリコールとのエーテル型付加体であるポリオ
キシエチレングリセルエーテルやポリオキシプロピレン
ソルビトールエーテルやポリオキシエチレンソルビタン
エーテルでもよい。これらの親水性又は水溶性低分子物
質の使用量は、粘着層を形成する粘着剤の５〜９０重量
％範囲で添加される。
【００２４】上記の親水性粘着層は、粘着層全体が架橋
されていて、該粘着層を構成する成分のうち５〜７５％
が水によって溶解溶出されないゲル状不溶体を構成して
もよい。この場合の粘着層の架橋方法としては、架橋剤
の添加による方法が挙げられる。架橋剤としては、エチ
レングリコールジグリシジルエーテル、トリグリシジル
イソシアヌレートなどの多価エポキシ化合物、コロネー
トＬやコロネートＨＬ（日本ポリウレタン社製）などの
イソシアネート化合物が用いられる。これらの架橋剤の
添加量は、粘着層を構成する粘着剤１００重量部に対し
て通常０．０１〜５重量部の範囲で選ばれる。
されていて、該粘着層を構成する成分のうち５〜７５％
が水によって溶解溶出されないゲル状不溶体を構成して
もよい。この場合の粘着層の架橋方法としては、架橋剤
の添加による方法が挙げられる。架橋剤としては、エチ
レングリコールジグリシジルエーテル、トリグリシジル
イソシアヌレートなどの多価エポキシ化合物、コロネー
トＬやコロネートＨＬ（日本ポリウレタン社製）などの
イソシアネート化合物が用いられる。これらの架橋剤の
添加量は、粘着層を構成する粘着剤１００重量部に対し
て通常０．０１〜５重量部の範囲で選ばれる。
【００２５】また、別の粘着層の架橋方法としては、例
えば電子線またはγ線などの放射線照射架橋による不溶
化が挙げられる。この場合の放射線の照射線量は、例え
ばアクリル系共重合体であれば、１ＫＧｙ以上、特に２
５ＫＧｙ以上５０ＫＧｙ以下とすることが好ましい。
えば電子線またはγ線などの放射線照射架橋による不溶
化が挙げられる。この場合の放射線の照射線量は、例え
ばアクリル系共重合体であれば、１ＫＧｙ以上、特に２
５ＫＧｙ以上５０ＫＧｙ以下とすることが好ましい。
【００２６】粘着層は、生体の表皮に貼布するに十分な
粘着力を有するように設計されていれば特に制限はない
が、例えば、ベークライト板に対して３０ｇ／１２ｍｍ
幅以上、好ましくは８０ｇ／１２ｍｍ幅以上の剥離粘着
力を有するものが挙げられる。必要以上に生体皮膚に粘
着すると皮膚組織を傷めてしまう場合があるので、６０
０ｇ／１２ｍｍ幅以下の剥離粘着力を有するように設計
するのがより好ましい。粘着層の厚さは、所要の剥離粘
着力が得られ、且つ剥離する際に粘着層が凝集破壊する
ことがないように設計されていればよく、通常１０〜１
００μｍ、好ましくは２０〜８０μｍの範囲が用いられ
る。
粘着力を有するように設計されていれば特に制限はない
が、例えば、ベークライト板に対して３０ｇ／１２ｍｍ
幅以上、好ましくは８０ｇ／１２ｍｍ幅以上の剥離粘着
力を有するものが挙げられる。必要以上に生体皮膚に粘
着すると皮膚組織を傷めてしまう場合があるので、６０
０ｇ／１２ｍｍ幅以下の剥離粘着力を有するように設計
するのがより好ましい。粘着層の厚さは、所要の剥離粘
着力が得られ、且つ剥離する際に粘着層が凝集破壊する
ことがないように設計されていればよく、通常１０〜１
００μｍ、好ましくは２０〜８０μｍの範囲が用いられ
る。
【００２７】本発明の抗原特異的ＣＴＬ賦活用粘着テー
プ製剤は、少なくとも粘着層の一部に防御抗原を放出可
能な状態で含有するものであれば、使用に応じて種々の
剤型を選択することができる。該粘着テープ製剤を防御
抗原の経皮接種のみに使用する場合、支持体の片面に粘
着層が積層され、該粘着層全体に、好ましくは均一にな
るように防御抗原が含まれるものが例示される。一方、
角質層を破壊するための粘着テープストリッピングと防
御抗原の経皮接種の両方に該粘着テープ製剤を使用する
場合、支持体の片面に粘着層が積層され、該粘着層の表
面が２種の領域に分かれるように粘着層が区分され、そ
のいずれか一方の粘着層領域に防御抗原が含まれるも
の、あるいは支持体の両面に粘着層が積層され、片面の
粘着層にのみ防御抗原が含まれるものが例示される。ど
ちらの剤型においても、防御抗原を含まない粘着層領域
が粘着テープストリッピングに、防御抗原を含む粘着層
領域が防御抗原の経皮接種のためにそれぞれ使用され
る。両粘着層領域は、粘着テープストリッピングおよび
防御抗原の経皮接種にそれぞれ要求される上記の条件を
充足する限り、同一の粘着層であっても異なる粘着層で
あってもよい。
プ製剤は、少なくとも粘着層の一部に防御抗原を放出可
能な状態で含有するものであれば、使用に応じて種々の
剤型を選択することができる。該粘着テープ製剤を防御
抗原の経皮接種のみに使用する場合、支持体の片面に粘
着層が積層され、該粘着層全体に、好ましくは均一にな
るように防御抗原が含まれるものが例示される。一方、
角質層を破壊するための粘着テープストリッピングと防
御抗原の経皮接種の両方に該粘着テープ製剤を使用する
場合、支持体の片面に粘着層が積層され、該粘着層の表
面が２種の領域に分かれるように粘着層が区分され、そ
のいずれか一方の粘着層領域に防御抗原が含まれるも
の、あるいは支持体の両面に粘着層が積層され、片面の
粘着層にのみ防御抗原が含まれるものが例示される。ど
ちらの剤型においても、防御抗原を含まない粘着層領域
が粘着テープストリッピングに、防御抗原を含む粘着層
領域が防御抗原の経皮接種のためにそれぞれ使用され
る。両粘着層領域は、粘着テープストリッピングおよび
防御抗原の経皮接種にそれぞれ要求される上記の条件を
充足する限り、同一の粘着層であっても異なる粘着層で
あってもよい。
【００２８】本発明で用いる柔軟なシート状の支持体
は、取扱時破壊しない程度に十分な強度があれば特に材
質は限定されないが、例えばポリエチレン、ポリプロピ
レン、ポリエステル、ポリアミド、ポリカーボネート、
ポリスルホン、ポリ塩化ビニル、ポリエーテル、ポリウ
レタン、エチレン−酢酸ビニル共重合体、酢酸セルロー
ス、ニトロセルロースなどからなるプラスチックフィル
ムが好適に用いられる。
は、取扱時破壊しない程度に十分な強度があれば特に材
質は限定されないが、例えばポリエチレン、ポリプロピ
レン、ポリエステル、ポリアミド、ポリカーボネート、
ポリスルホン、ポリ塩化ビニル、ポリエーテル、ポリウ
レタン、エチレン−酢酸ビニル共重合体、酢酸セルロー
ス、ニトロセルロースなどからなるプラスチックフィル
ムが好適に用いられる。
【００２９】本発明の抗原特異的ＣＴＬ賦活用粘着テー
プ製剤は、例えば、上記の粘着性親水性高分子と親水性
低分子物質を含有する水溶液または水／アルコール混合
溶液に、防御抗原を必要な濃度で含むように調整された
水分散液または水／アルコール混合分散液を加えてよく
混合分散させた後、柔軟なシート上の支持体上に一定の
厚さで塗布し、１０〜２００℃の範囲の適当な温度で乾
燥することによって製造される。この時乾燥温度は、塗
布した粘稠な分散液中の内容物の変質を防ぐためにはで
きるだけ低い温度が好ましく、通常３０〜１００℃の温
度の範囲が用いられる。この方法で製造される粘着テー
プ製剤の粘着層は必要な濃度で、且つ均一に防御抗原を
含有することになる。また、防御抗原の全体もしくは一
部が、形成された粘着層に埋め込まれている形で存在し
ており、結果的に該防御抗原が適度に徐放されるように
設計されることになる。また、本発明の抗原特異的ＣＴ
Ｌ賦活用粘着テープ製剤の別の製造方法としては、上記
の粘着性親水性高分子と親水性低分子物質を含む水溶液
または水／アルコール混合溶液をそのまま柔軟なシート
状の支持体上に一定の厚さで塗布し、１０〜２００℃の
範囲の適当な温度で乾燥させることによって、また必要
に応じて架橋処理することによって、まず防御抗原を含
有しない粘着テープを製造した後、防御抗原を必要な量
で含むように調整された水分散液または水／アルコール
混合分散液を、該粘着テープの粘着層表面に必要な防御
抗原植種量になるように塗布し、水またはアルコールを
蒸散乾燥させる方法が挙げられる。防御抗原を含む粘着
層領域と、防御抗原を含まない粘着層領域を有する剤型
の粘着テープ製剤は、上記２通りの製造方法を適当に組
み合わせることにより製造することができる。
プ製剤は、例えば、上記の粘着性親水性高分子と親水性
低分子物質を含有する水溶液または水／アルコール混合
溶液に、防御抗原を必要な濃度で含むように調整された
水分散液または水／アルコール混合分散液を加えてよく
混合分散させた後、柔軟なシート上の支持体上に一定の
厚さで塗布し、１０〜２００℃の範囲の適当な温度で乾
燥することによって製造される。この時乾燥温度は、塗
布した粘稠な分散液中の内容物の変質を防ぐためにはで
きるだけ低い温度が好ましく、通常３０〜１００℃の温
度の範囲が用いられる。この方法で製造される粘着テー
プ製剤の粘着層は必要な濃度で、且つ均一に防御抗原を
含有することになる。また、防御抗原の全体もしくは一
部が、形成された粘着層に埋め込まれている形で存在し
ており、結果的に該防御抗原が適度に徐放されるように
設計されることになる。また、本発明の抗原特異的ＣＴ
Ｌ賦活用粘着テープ製剤の別の製造方法としては、上記
の粘着性親水性高分子と親水性低分子物質を含む水溶液
または水／アルコール混合溶液をそのまま柔軟なシート
状の支持体上に一定の厚さで塗布し、１０〜２００℃の
範囲の適当な温度で乾燥させることによって、また必要
に応じて架橋処理することによって、まず防御抗原を含
有しない粘着テープを製造した後、防御抗原を必要な量
で含むように調整された水分散液または水／アルコール
混合分散液を、該粘着テープの粘着層表面に必要な防御
抗原植種量になるように塗布し、水またはアルコールを
蒸散乾燥させる方法が挙げられる。防御抗原を含む粘着
層領域と、防御抗原を含まない粘着層領域を有する剤型
の粘着テープ製剤は、上記２通りの製造方法を適当に組
み合わせることにより製造することができる。
【００３０】本発明の抗原特異的ＣＴＬ賦活用粘着テー
プ製剤は、通常、防御抗原量が、１種の抗原について
０．１μｍｏｌ／ｃｍ2 〜１ｍｍｏｌ／ｃｍ2 の範囲で
含まれるように設計調整されるのが好ましい。
プ製剤は、通常、防御抗原量が、１種の抗原について
０．１μｍｏｌ／ｃｍ2 〜１ｍｍｏｌ／ｃｍ2 の範囲で
含まれるように設計調整されるのが好ましい。
【００３１】本発明の抗原特異的ＣＴＬ賦活剤は、上記
の角質層破壊とそれに続く防御抗原の経皮接種により該
抗原特異的ＣＴＬを感作、増幅させるものである。結果
として生じる抗原特異的ＣＴＬはリンパ系を循環しなが
ら、該防御抗原を提示する細胞（例えば、ウイルス感染
細胞、癌細胞など）を特異的に識別して結合し、これを
殺傷する。したがって、該抗原特異的ＣＴＬ賦活剤は、
ウイルス等の微生物感染症や癌の予防および治療用に使
用することができる。
の角質層破壊とそれに続く防御抗原の経皮接種により該
抗原特異的ＣＴＬを感作、増幅させるものである。結果
として生じる抗原特異的ＣＴＬはリンパ系を循環しなが
ら、該防御抗原を提示する細胞（例えば、ウイルス感染
細胞、癌細胞など）を特異的に識別して結合し、これを
殺傷する。したがって、該抗原特異的ＣＴＬ賦活剤は、
ウイルス等の微生物感染症や癌の予防および治療用に使
用することができる。
【００３２】本発明の抗原特異的ＣＴＬ賦活剤は、一般
にＴ細胞依存性の細胞性免疫系を有する動物に対して適
用できるが、好ましくは、ヒト、サル、ウシ、ウマ、イ
ヌ、ネコ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、マウス、ラット、ハ
ムスター、モルモット等の哺乳動物に用いられる。
にＴ細胞依存性の細胞性免疫系を有する動物に対して適
用できるが、好ましくは、ヒト、サル、ウシ、ウマ、イ
ヌ、ネコ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、マウス、ラット、ハ
ムスター、モルモット等の哺乳動物に用いられる。
【００３３】
【実施例】以下に実施例を示して、本発明をさらに具体
的に説明する。
的に説明する。
【００３４】実施例１ （１）粘着テープストリッピングによる皮膚角質層バリ
ア破壊後の表皮ランゲルハンス細胞数の変化測定 Ｃ５７ＢＬ／６（Ｂ６）マウス耳翼の一方の角質層を市
販のセロファンテープでストリッピング操作を１０回繰
り返すことによって破壊し、１２、２４、４８時間後の
一定面積に切除した耳翼表皮シートをトリプシン処理す
ることによって表皮細胞浮遊液を得た。これをＭＨＣク
ラスII抗原の一つであるＩ−Ａb 抗原に特異的な抗体で
染色し、Ｉ−Ａb 抗原強陽性のランゲルハンス細胞をフ
ローサイトメトリーによりカウントした。コントロール
には、同一マウス個体の角質層を破壊していないもう一
方の耳翼表皮を用いた。結果を図１に示す。
ア破壊後の表皮ランゲルハンス細胞数の変化測定 Ｃ５７ＢＬ／６（Ｂ６）マウス耳翼の一方の角質層を市
販のセロファンテープでストリッピング操作を１０回繰
り返すことによって破壊し、１２、２４、４８時間後の
一定面積に切除した耳翼表皮シートをトリプシン処理す
ることによって表皮細胞浮遊液を得た。これをＭＨＣク
ラスII抗原の一つであるＩ−Ａb 抗原に特異的な抗体で
染色し、Ｉ−Ａb 抗原強陽性のランゲルハンス細胞をフ
ローサイトメトリーによりカウントした。コントロール
には、同一マウス個体の角質層を破壊していないもう一
方の耳翼表皮を用いた。結果を図１に示す。
【００３５】粘着テープストリッピングしていないマウ
ス耳翼表皮にはランゲルハンス細胞が定常量で存在して
いるが、ストリッピング処理した方の耳翼表皮のランゲ
ルハンス細胞数はテープストリッピング後１２時間でほ
ぼ半減し、表皮を離れて他組織へ移動していることが明
らかとなった。ランゲルハンス細胞の移動はテープスト
リッピング後約１２〜２４時間で最大となり、その後表
皮ランゲルハンス細胞数は徐々に増加して定常量まで回
復した。 （２）角質層バリア破壊後の表皮ランゲルハンス細胞の
活性化アクセサリー分子の発現 Ｂ６マウスの一方の耳翼角質層を実施例１−（１）で用
いたのと同じ粘着テープを用いてストリッピング操作を
１０回繰り返すことによって破壊し、０、１２、２４、
４８時間後にそれぞれ切除した耳翼の表皮シートをトリ
プシン処理し、表皮細胞浮遊液を得た。これをＩ−
Ａb ，ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１），ＣＤ８６（Ｂ７−
２）およびαβＴＣＲにそれぞれ特異的な抗体で染色
し、フローサイトメトリーを用いて解析した。コントロ
ールとしては、同一マウス個体の角質層を破壊していな
いもう一方の耳翼表皮を用いた。結果を図２に示す。
ス耳翼表皮にはランゲルハンス細胞が定常量で存在して
いるが、ストリッピング処理した方の耳翼表皮のランゲ
ルハンス細胞数はテープストリッピング後１２時間でほ
ぼ半減し、表皮を離れて他組織へ移動していることが明
らかとなった。ランゲルハンス細胞の移動はテープスト
リッピング後約１２〜２４時間で最大となり、その後表
皮ランゲルハンス細胞数は徐々に増加して定常量まで回
復した。 （２）角質層バリア破壊後の表皮ランゲルハンス細胞の
活性化アクセサリー分子の発現 Ｂ６マウスの一方の耳翼角質層を実施例１−（１）で用
いたのと同じ粘着テープを用いてストリッピング操作を
１０回繰り返すことによって破壊し、０、１２、２４、
４８時間後にそれぞれ切除した耳翼の表皮シートをトリ
プシン処理し、表皮細胞浮遊液を得た。これをＩ−
Ａb ，ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１），ＣＤ８６（Ｂ７−
２）およびαβＴＣＲにそれぞれ特異的な抗体で染色
し、フローサイトメトリーを用いて解析した。コントロ
ールとしては、同一マウス個体の角質層を破壊していな
いもう一方の耳翼表皮を用いた。結果を図２に示す。
【００３６】粘着テープストリッピングした耳翼表皮ラ
ンゲルハンス細胞は、１２、２４時間後に活性化し、Ｃ
ＴＬに抗原提示する際のＣＴＬとの結合などに重要なＩ
ＣＡＭ−１，Ｂ７−２，ＣＤ４０分子の発現を増大させ
ることが判った。また、抗体のコントロールとして行っ
たαβＴＣＲ抗体を用いた染色ではバリア破壊後当然発
現及び発現増強は観察されなかった。さらに、ＩＣＡＭ
−１，Ｂ７−２，ＣＤ４０分子の発現増強は、バリア破
壊後１２〜２４時間前後でピークに達し、４８時間後に
は活性化前のレベルに戻ることが判明した。粘着テープ
ストリッピングしていないマウス耳翼表皮では、ランゲ
ルハンス細胞のＩＣＡＭ−１，Ｂ７−２，ＣＤ４０分子
の発現レベルに変化は見られなかった。 （３）角質層バリア破壊後の表皮ランゲルハンス細胞表
面のＭＨＣクラスＩ分子の発現 実施例１−（２）と同じ方法で、ＭＨＣクラスＩ分子の
一つであるＨ−２Ｋb分子の発現について検討した。結
果を図３に示す。粘着テープストリッピングしたマウス
耳翼の表皮ランゲルハンス細胞は、破壊１２、２４時間
後に明らかにＣＴＬへの抗原提示の際重要なＨ−２Ｋb
分子の発現を増大させることが判った。一方、角質層を
破壊していない耳翼表皮のランゲルハンス細胞では、該
分子の発現増強は観察されなかった。
ンゲルハンス細胞は、１２、２４時間後に活性化し、Ｃ
ＴＬに抗原提示する際のＣＴＬとの結合などに重要なＩ
ＣＡＭ−１，Ｂ７−２，ＣＤ４０分子の発現を増大させ
ることが判った。また、抗体のコントロールとして行っ
たαβＴＣＲ抗体を用いた染色ではバリア破壊後当然発
現及び発現増強は観察されなかった。さらに、ＩＣＡＭ
−１，Ｂ７−２，ＣＤ４０分子の発現増強は、バリア破
壊後１２〜２４時間前後でピークに達し、４８時間後に
は活性化前のレベルに戻ることが判明した。粘着テープ
ストリッピングしていないマウス耳翼表皮では、ランゲ
ルハンス細胞のＩＣＡＭ−１，Ｂ７−２，ＣＤ４０分子
の発現レベルに変化は見られなかった。 （３）角質層バリア破壊後の表皮ランゲルハンス細胞表
面のＭＨＣクラスＩ分子の発現 実施例１−（２）と同じ方法で、ＭＨＣクラスＩ分子の
一つであるＨ−２Ｋb分子の発現について検討した。結
果を図３に示す。粘着テープストリッピングしたマウス
耳翼の表皮ランゲルハンス細胞は、破壊１２、２４時間
後に明らかにＣＴＬへの抗原提示の際重要なＨ−２Ｋb
分子の発現を増大させることが判った。一方、角質層を
破壊していない耳翼表皮のランゲルハンス細胞では、該
分子の発現増強は観察されなかった。
【００３７】参考例１ 抗原ペプチドの合成 公知文献に基づいて、ＭＨＣクラスＩ分子の一つである
Ｈ−２Ｋb 分子上に提示され、Ｂ６マウスにおいてＣＴ
Ｌを誘導活性化し得る単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）
および水泡性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）由来抗原ペプチ
ド、並びに卵白アルブミン（ＯＶＡ）由来ペプチド３種
を合成した。 ＨＳＶ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｂ ４９８−５０
５（文献：Bonneau et al., Virology 195; 62-70 (199
3)) 配列：Ser Ser Ile Glu Phe Ala Arg Leu （配列表配列
番号１） ＶＳＶ ＮＰ ５３−５９（文献：Van Bleek and Nath
enson, Nature 348; 213-215 (1990)) 配列：Arg Gly Tyr Val Tyr Gln Gly Leu （配列表配列
番号２） Ｏｖａｌｂｕｍｉｎ ２５７−２６４（文献：Falo et
al., Nature Med. 1; 649-653 (1995)) 配列：Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys Leu （配列表配列
番号３）
Ｈ−２Ｋb 分子上に提示され、Ｂ６マウスにおいてＣＴ
Ｌを誘導活性化し得る単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）
および水泡性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）由来抗原ペプチ
ド、並びに卵白アルブミン（ＯＶＡ）由来ペプチド３種
を合成した。 ＨＳＶ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｂ ４９８−５０
５（文献：Bonneau et al., Virology 195; 62-70 (199
3)) 配列：Ser Ser Ile Glu Phe Ala Arg Leu （配列表配列
番号１） ＶＳＶ ＮＰ ５３−５９（文献：Van Bleek and Nath
enson, Nature 348; 213-215 (1990)) 配列：Arg Gly Tyr Val Tyr Gln Gly Leu （配列表配列
番号２） Ｏｖａｌｂｕｍｉｎ ２５７−２６４（文献：Falo et
al., Nature Med. 1; 649-653 (1995)) 配列：Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys Leu （配列表配列
番号３）
【００３８】参考例２ Ｈ−２Ｋb 分子を強制発現させ
たＬ細胞遺伝子導入株の作製 角質層を破壊した皮膚に抗原ペプチドを塗布した際、マ
ウス体内で誘導活性化されるＣＴＬが抗原ペプチドを提
示したＨ−２Ｋb 分子に特異的なＣＴＬであるかどうか
を試験管内で確かめるために、Ｈ−２Ｋb 分子を全く持
たないＬ細胞にＨ−２Ｋb 分子を強制的に発現させた細
胞株を作製した。 （ｉ）Ｈ−２Ｋb 分子遺伝子導入株の作製 強制発現プロモーター遺伝子の下流にＨ−２Ｋb 遺伝子
を組み込み、且つチミジンキナーゼ遺伝子を持つプラス
ミドＤＮＡを作製し、これを塩化カルシウム法によりＬ
tk- 細胞に導入した。遺伝子導入された細胞をチミジン
キナーゼ活性を指標として選抜してＬkb遺伝子導入株を
得た。 （ii）Ｌkb細胞におけるＨ−２Ｋb 分子の発現の証明 作製したＬkb細胞をＨ−２Ｋb 特異的抗体で染色し、フ
ローサイトメトリーにより解析した。細胞のコントロー
ルとしては遺伝子導入前のＬtk- 細胞を用い、また抗体
のコントロールとしてはＨ−２Ｋb 特異的抗体と抗体の
クラスだけが一致する別の抗体を用いた。その結果、Ｌ
kb細胞では確実にＨ−２Ｋb 分子の発現が観察された
（図４）。
たＬ細胞遺伝子導入株の作製 角質層を破壊した皮膚に抗原ペプチドを塗布した際、マ
ウス体内で誘導活性化されるＣＴＬが抗原ペプチドを提
示したＨ−２Ｋb 分子に特異的なＣＴＬであるかどうか
を試験管内で確かめるために、Ｈ−２Ｋb 分子を全く持
たないＬ細胞にＨ−２Ｋb 分子を強制的に発現させた細
胞株を作製した。 （ｉ）Ｈ−２Ｋb 分子遺伝子導入株の作製 強制発現プロモーター遺伝子の下流にＨ−２Ｋb 遺伝子
を組み込み、且つチミジンキナーゼ遺伝子を持つプラス
ミドＤＮＡを作製し、これを塩化カルシウム法によりＬ
tk- 細胞に導入した。遺伝子導入された細胞をチミジン
キナーゼ活性を指標として選抜してＬkb遺伝子導入株を
得た。 （ii）Ｌkb細胞におけるＨ−２Ｋb 分子の発現の証明 作製したＬkb細胞をＨ−２Ｋb 特異的抗体で染色し、フ
ローサイトメトリーにより解析した。細胞のコントロー
ルとしては遺伝子導入前のＬtk- 細胞を用い、また抗体
のコントロールとしてはＨ−２Ｋb 特異的抗体と抗体の
クラスだけが一致する別の抗体を用いた。その結果、Ｌ
kb細胞では確実にＨ−２Ｋb 分子の発現が観察された
（図４）。
【００３９】実施例２ 角質層バリア破壊皮膚への抗原
ペプチド塗布による抗原特異的ＣＴＬの感作及び誘導 角質層バリアを破壊した皮膚で活性化した表皮ランゲル
ハンス細胞が、抗原ペプチドパルスにより生体内で抗原
特異的ＣＴＬを感作および誘導活性化することを以下の
手順で確認した。Ｂ６マウス耳翼の角質層を実施例１−
（１）で用いたものと同じ粘着テープを用い、ストリッ
ピング操作を１０回繰り返すことにより破壊し、ストリ
ッピングから１２、２４、４８時間後に、参考例１で合
成した抗原ペプチドを塗布する。該抗原ペプチドは７０
％エタノールに溶解し、耳翼片面当たり１０μｍ塗布し
た。ペプチド塗布から１週間後に頚部リンパ節を切除
し、リンパ球を試験管内でＩＬ−２を微量（５Ｕ／ｍ
ｌ）に含むＲＰＭＩ１６４０培地を用いて２日間培養し
た。51ＣｒでラベルしたＬkb細胞（コントロールとして
Ｌtk- 細胞を用いる）を抗原ペプチド５μｍｏｌでパル
スした。培養したリンパ球をエフェクター細胞として、
51Ｃｒラベルおよび抗原ペプチドパルスしたＬkb細胞ま
たはＬtk- 細胞を標的細胞として細胞傷害アッセイを行
った。
ペプチド塗布による抗原特異的ＣＴＬの感作及び誘導 角質層バリアを破壊した皮膚で活性化した表皮ランゲル
ハンス細胞が、抗原ペプチドパルスにより生体内で抗原
特異的ＣＴＬを感作および誘導活性化することを以下の
手順で確認した。Ｂ６マウス耳翼の角質層を実施例１−
（１）で用いたものと同じ粘着テープを用い、ストリッ
ピング操作を１０回繰り返すことにより破壊し、ストリ
ッピングから１２、２４、４８時間後に、参考例１で合
成した抗原ペプチドを塗布する。該抗原ペプチドは７０
％エタノールに溶解し、耳翼片面当たり１０μｍ塗布し
た。ペプチド塗布から１週間後に頚部リンパ節を切除
し、リンパ球を試験管内でＩＬ−２を微量（５Ｕ／ｍ
ｌ）に含むＲＰＭＩ１６４０培地を用いて２日間培養し
た。51ＣｒでラベルしたＬkb細胞（コントロールとして
Ｌtk- 細胞を用いる）を抗原ペプチド５μｍｏｌでパル
スした。培養したリンパ球をエフェクター細胞として、
51Ｃｒラベルおよび抗原ペプチドパルスしたＬkb細胞ま
たはＬtk- 細胞を標的細胞として細胞傷害アッセイを行
った。
【００４０】頚部リンパ節におけるＣＴＬの存在比の変
化：表１に頚部リンパ節におけるリンパ球総数及びＣＤ
８陽性細胞数の変化を、各抗原ペプチド塗布毎に計測し
た結果を示した。抗原ペプチドは参考例１で示した３種
を用いた。テープストリッピングにより活性化された抗
原ペプチドパルス表皮ランゲルハンス細胞はリンパ節に
おいて抗原提示し、免疫系細胞を感作増幅してその数を
増加させることが示された。特に、ＣＴＬのマーカーで
あるＣＤ８分子を持つリンパ球数の増加が観察された。
このＣＤ８陽性リンパ球数の増加は、テープストリッピ
ング１２〜２４時間後に最大となり、表皮におけるラン
ゲルハンス細胞数の変化とよく対応した。したがって、
活性化された表皮ランゲルハンス細胞はリンパ節に移動
してリンパ節内でＣＴＬを活性化することが強く示唆さ
れた。
化：表１に頚部リンパ節におけるリンパ球総数及びＣＤ
８陽性細胞数の変化を、各抗原ペプチド塗布毎に計測し
た結果を示した。抗原ペプチドは参考例１で示した３種
を用いた。テープストリッピングにより活性化された抗
原ペプチドパルス表皮ランゲルハンス細胞はリンパ節に
おいて抗原提示し、免疫系細胞を感作増幅してその数を
増加させることが示された。特に、ＣＴＬのマーカーで
あるＣＤ８分子を持つリンパ球数の増加が観察された。
このＣＤ８陽性リンパ球数の増加は、テープストリッピ
ング１２〜２４時間後に最大となり、表皮におけるラン
ゲルハンス細胞数の変化とよく対応した。したがって、
活性化された表皮ランゲルハンス細胞はリンパ節に移動
してリンパ節内でＣＴＬを活性化することが強く示唆さ
れた。
【００４１】
【表１】
【００４２】ペプチド抗原特異的ＣＴＬの感作誘導：テ
ープストリッピング１２時間後にＨＳＶ ｇｐ Ｂ，Ｖ
ＳＶ ＮＰ，ＯＶＡの３種の抗原ペプチドを、それぞれ
単独に塗布した群から得た頚部リンパ球由来のエフェク
ター細胞についての細胞傷害アッセイの結果を図５に示
す。例えば、ＨＳＶ ｇｐ Ｂペプチドを抗原ペプチド
として塗布した群から得た頚部リンパ節のＣＴＬは、Ｈ
ＳＶ ｇｐ Ｂ特異的に感作増幅しており、Ｈ−２Ｋb
とＨＳＶ ｇｐ Ｂペプチド複合体を表現している細胞
のみを認識し確実にその細胞を傷害した。ＶＳＶ ＮＰ
ペプチドやＯＶＡペプチドを塗布した群についても、頚
部リンパ節由来のＣＴＬはそれぞれの接種された抗原ペ
プチドを提示する細胞のみを特異的に傷害した。なお、
当然のことながら、エフェクター細胞／標的細胞の比が
大きいほど確実に標的細胞を傷害した。
ープストリッピング１２時間後にＨＳＶ ｇｐ Ｂ，Ｖ
ＳＶ ＮＰ，ＯＶＡの３種の抗原ペプチドを、それぞれ
単独に塗布した群から得た頚部リンパ球由来のエフェク
ター細胞についての細胞傷害アッセイの結果を図５に示
す。例えば、ＨＳＶ ｇｐ Ｂペプチドを抗原ペプチド
として塗布した群から得た頚部リンパ節のＣＴＬは、Ｈ
ＳＶ ｇｐ Ｂ特異的に感作増幅しており、Ｈ−２Ｋb
とＨＳＶ ｇｐ Ｂペプチド複合体を表現している細胞
のみを認識し確実にその細胞を傷害した。ＶＳＶ ＮＰ
ペプチドやＯＶＡペプチドを塗布した群についても、頚
部リンパ節由来のＣＴＬはそれぞれの接種された抗原ペ
プチドを提示する細胞のみを特異的に傷害した。なお、
当然のことながら、エフェクター細胞／標的細胞の比が
大きいほど確実に標的細胞を傷害した。
【００４３】角質層バリア破壊後の皮膚への経時的な抗
原ペプチド塗布によるＣＴＬの感作誘導に与える影響：
テープストリッピング１２、２４、４８時間後に抗原ペ
プチドを塗布したそれぞれの群から得られる頚部リンパ
球由来のエフェクター細胞についての細胞傷害アッセイ
の結果を図６に示す。いずれの群においても、テープス
トリッピングにより活性化したペプチドパルス表皮ラン
ゲルハンス細胞は、リンパ節において抗原特異的にＣＴ
Ｌを感作誘導し、それぞれの抗原ペプチドを提示する細
胞のみを特異的に傷害した。テープストリッピング１２
〜２４時間後に抗原ペプチドを塗布した時に、最も強く
抗原特異的ＣＴＬがリンパ節内で感作誘導され、増幅し
ていることが判った。
原ペプチド塗布によるＣＴＬの感作誘導に与える影響：
テープストリッピング１２、２４、４８時間後に抗原ペ
プチドを塗布したそれぞれの群から得られる頚部リンパ
球由来のエフェクター細胞についての細胞傷害アッセイ
の結果を図６に示す。いずれの群においても、テープス
トリッピングにより活性化したペプチドパルス表皮ラン
ゲルハンス細胞は、リンパ節において抗原特異的にＣＴ
Ｌを感作誘導し、それぞれの抗原ペプチドを提示する細
胞のみを特異的に傷害した。テープストリッピング１２
〜２４時間後に抗原ペプチドを塗布した時に、最も強く
抗原特異的ＣＴＬがリンパ節内で感作誘導され、増幅し
ていることが判った。
【００４４】実施例３ 抗原ペプチドを含有する粘着テ
ープ製剤の製造 攪拌器付密閉型反応器に２−メトキシエチルアクリレー
ト７０重量部、Ｎ−ビニル−２−ピロリドン３０重量
部、重合開始剤としてアゾイソブチロニトリル０．１７
重量部及び蒸留水：メタノール：イソプロパノール混合
溶剤（重量比１６：２３：１）２５０重量部を仕込み、
反応容器を窒素置換した後、反応器内の温度を６０〜６
２℃に維持しながら１．５時間攪拌した。続いて７５℃
で２時間攪拌することにより反応を完結させた後、室温
まで冷却して粘稠なアクリル系強重合体溶液を得た。こ
の重合体溶液にポリオキシプロピレングリセリルエーテ
ル（平均分子量４００）１０重量部、トレハロース（林
原商事社品：商品名トレハオース）１０重量部を添加し
て完全に溶解させた。このアクリル系共重合体を含む溶
液を厚さ６μｍの柔軟な薄葉ポリエステルフィルム上に
塗布した後、１３０℃で１０分間乾燥させて、粘着層の
厚さが５０μｍの粘着テープを得た。別に参考例１で得
られる抗原ペプチドＨＳＶ ｇｐ Ｂを７０％エタノー
ルに溶解した後、該粘着テープの粘着層表面に１ｃｍ2
当たり５０μｍｏｌの塗布量になるように塗布した後、
エタノールを蒸散乾燥させ、ＨＳＶ ｇｐ Ｂペプチド
を植種した粘着テープ製剤を得た。この粘着テープ製剤
は、使用するまでその粘着層表面を保護する目的で離型
紙を貼り付けた。
ープ製剤の製造 攪拌器付密閉型反応器に２−メトキシエチルアクリレー
ト７０重量部、Ｎ−ビニル−２−ピロリドン３０重量
部、重合開始剤としてアゾイソブチロニトリル０．１７
重量部及び蒸留水：メタノール：イソプロパノール混合
溶剤（重量比１６：２３：１）２５０重量部を仕込み、
反応容器を窒素置換した後、反応器内の温度を６０〜６
２℃に維持しながら１．５時間攪拌した。続いて７５℃
で２時間攪拌することにより反応を完結させた後、室温
まで冷却して粘稠なアクリル系強重合体溶液を得た。こ
の重合体溶液にポリオキシプロピレングリセリルエーテ
ル（平均分子量４００）１０重量部、トレハロース（林
原商事社品：商品名トレハオース）１０重量部を添加し
て完全に溶解させた。このアクリル系共重合体を含む溶
液を厚さ６μｍの柔軟な薄葉ポリエステルフィルム上に
塗布した後、１３０℃で１０分間乾燥させて、粘着層の
厚さが５０μｍの粘着テープを得た。別に参考例１で得
られる抗原ペプチドＨＳＶ ｇｐ Ｂを７０％エタノー
ルに溶解した後、該粘着テープの粘着層表面に１ｃｍ2
当たり５０μｍｏｌの塗布量になるように塗布した後、
エタノールを蒸散乾燥させ、ＨＳＶ ｇｐ Ｂペプチド
を植種した粘着テープ製剤を得た。この粘着テープ製剤
は、使用するまでその粘着層表面を保護する目的で離型
紙を貼り付けた。
【００４５】実施例４ 角質層バリア破壊皮膚への抗原
ペプチド含有粘着テープ製剤の貼付による抗原特異的Ｃ
ＴＬの感作増幅 実施例２において、抗原ペプチドを塗布する代わりに角
質層破壊テープストリッピング直後に、実施例３で得ら
れたＨＳＶ ｇｐ Ｂ抗原ペプチドを植種した粘着テー
プ製剤を貼付する以外は、実施例２と全く同様の操作を
行って、角質層バリア破壊により該抗原ペプチド特異的
に活性化した表皮ランゲルハンス細胞がリンパ節に移動
して該抗原ペプチド特異的ＣＴＬを感作誘導することを
確認した。結果を表２に示す。
ペプチド含有粘着テープ製剤の貼付による抗原特異的Ｃ
ＴＬの感作増幅 実施例２において、抗原ペプチドを塗布する代わりに角
質層破壊テープストリッピング直後に、実施例３で得ら
れたＨＳＶ ｇｐ Ｂ抗原ペプチドを植種した粘着テー
プ製剤を貼付する以外は、実施例２と全く同様の操作を
行って、角質層バリア破壊により該抗原ペプチド特異的
に活性化した表皮ランゲルハンス細胞がリンパ節に移動
して該抗原ペプチド特異的ＣＴＬを感作誘導することを
確認した。結果を表２に示す。
【００４６】
【表２】
【００４７】テープストリッピング後、表皮ランゲルハ
ンス細胞の活性化に必要なリードタイムの経過の後は連
続的に表皮ランゲルハンス細胞の活性化が発現している
はずである。したがって、抗原ペプチド粘着テープをテ
ープストリッピングした皮膚表面に貼り付けることによ
り、連続的に抗原ペプチドが接種されることとなり、結
果として連続的に抗原ペプチドパルス表皮ランゲルハン
ス細胞がリンパ節へ移動する。その結果、連続的に抗原
ペプチド特異的ＣＴＬが感作誘導されることとなる。ま
た、結果的に実施例２の接種法に比べ抗原ペプチド特異
的ＣＴＬが時間的にも早く増幅活性化され、ストリッピ
ング時を０時間として、抗原ペプチド含有粘着テープ製
剤を貼り付けてから一定時間経過後までに増幅される抗
原ペプチド特異的ＣＴＬの総量も増加することがわかっ
た。
ンス細胞の活性化に必要なリードタイムの経過の後は連
続的に表皮ランゲルハンス細胞の活性化が発現している
はずである。したがって、抗原ペプチド粘着テープをテ
ープストリッピングした皮膚表面に貼り付けることによ
り、連続的に抗原ペプチドが接種されることとなり、結
果として連続的に抗原ペプチドパルス表皮ランゲルハン
ス細胞がリンパ節へ移動する。その結果、連続的に抗原
ペプチド特異的ＣＴＬが感作誘導されることとなる。ま
た、結果的に実施例２の接種法に比べ抗原ペプチド特異
的ＣＴＬが時間的にも早く増幅活性化され、ストリッピ
ング時を０時間として、抗原ペプチド含有粘着テープ製
剤を貼り付けてから一定時間経過後までに増幅される抗
原ペプチド特異的ＣＴＬの総量も増加することがわかっ
た。
【００４８】
【発明の効果】本発明の抗原特異的ＣＴＬ賦活剤は、皮
膚表皮角質層の破壊とそれに続く該抗原特異的ＣＴＬ賦
活剤による防御抗原の経皮接種という非常に簡便な方法
により、該抗原を提示する細胞のみを特異的に識別して
これを殺傷し得るＣＴＬを効率よく感作増幅することが
できるので、一般に難治療性のウイルス感染症や癌の予
防および治療剤として極めて有用であり、ヒトを含む哺
乳動物のウイルス感染症および癌に対して副作用の少な
い画期的な予防治療法を提供するものである。
膚表皮角質層の破壊とそれに続く該抗原特異的ＣＴＬ賦
活剤による防御抗原の経皮接種という非常に簡便な方法
により、該抗原を提示する細胞のみを特異的に識別して
これを殺傷し得るＣＴＬを効率よく感作増幅することが
できるので、一般に難治療性のウイルス感染症や癌の予
防および治療剤として極めて有用であり、ヒトを含む哺
乳動物のウイルス感染症および癌に対して副作用の少な
い画期的な予防治療法を提供するものである。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成９年７月２４日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】追加
【補正内容】
【図面の簡単な説明】
【図１】テープストリッピングによる角質層破壊後のマ
ウス耳翼表皮ランゲルハンス細胞の経時変化を示す図で
ある。
ウス耳翼表皮ランゲルハンス細胞の経時変化を示す図で
ある。
【図２】テープストリッピングによる角質層破壊後のマ
ウス耳翼表皮ランゲルハンス細胞における活性化アクセ
サリー分子の発現の変化を示す図である。
ウス耳翼表皮ランゲルハンス細胞における活性化アクセ
サリー分子の発現の変化を示す図である。
【図３】テープストリッピングによる角質層破壊後のマ
ウス耳翼表皮ランゲルハンス細胞表面のＨ−２Ｋｂ分子
の発現の変化を示す図である。
ウス耳翼表皮ランゲルハンス細胞表面のＨ−２Ｋｂ分子
の発現の変化を示す図である。
【図４】Ｌｋｂ細胞におけるＨ−２Ｋｂ分子の発現を示
す図である。
す図である。
【図５】テープストリッピングによる耳翼表皮角質層破
壊１２時間後に３種の抗原ペプチドをそれぞれ単独に塗
布したマウス群から得られた頚部リンパ球由来のエフェ
クター細胞の細胞傷害活性を示す図である。
壊１２時間後に３種の抗原ペプチドをそれぞれ単独に塗
布したマウス群から得られた頚部リンパ球由来のエフェ
クター細胞の細胞傷害活性を示す図である。
【図６】テープストリッピングによる耳翼表皮角質層破
壊１２、２４、４８時間後に、３種の抗原ペプチドをそ
れぞれ単独に塗布したマウス群から得られた頚部リンパ
球由来のエフェクター細胞の細胞傷害活性を示す図であ
る。
壊１２、２４、４８時間後に、３種の抗原ペプチドをそ
れぞれ単独に塗布したマウス群から得られた頚部リンパ
球由来のエフェクター細胞の細胞傷害活性を示す図であ
る。
Claims (13)
- 【請求項１】 防御抗原を含み、皮膚表皮角質層を物理
的または化学的に破壊することにより活性化された表皮
ランゲルハンス細胞表面に適用するための該抗原特異的
キラーＴ細胞賦活剤。 - 【請求項２】 支持体の片面に、防御抗原を放出可能な
状態で含む該粘着層が積層されてなる粘着テープ製剤の
形態であることを特徴とする請求項１記載の抗原特異的
キラーＴ細胞賦活剤。 - 【請求項３】 粘着層表面が２種の領域に分かれるよう
に該粘着層が区分され、そのいずれか一方が防御抗原を
含むことを特徴とする請求項２記載の抗原特異的キラー
Ｔ細胞賦活剤。 - 【請求項４】 支持体の両面に粘着層が積層され、片面
の粘着層が防御抗原を放出可能な状態で含む粘着テープ
製剤の形態であることを特徴とする請求項１記載の抗原
特異的キラーＴ細胞賦活剤。 - 【請求項５】 防御抗原が、病原性微生物、その感染防
御抗原となるペプチドおよび癌細胞特異的変異ペプチド
からなる群より選択される１以上のものである請求項１
〜４のいずれかに記載の抗原特異的キラーＴ細胞賦活
剤。 - 【請求項６】 微生物感染症または癌の予防治療剤であ
る請求項５記載の抗原特異的キラーＴ細胞賦活剤。 - 【請求項７】 皮膚表皮角質層を破壊することにより、
表皮ランゲルハンス細胞表面にＭＨＣクラスＩ分子を発
現させた後、該表皮に防御抗原を経皮接種することによ
り該ランゲルハンス細胞を該抗原特異的に活性化してリ
ンパ節に移動させ、リンパ節内で前駆キラーＴ細胞を該
抗原提示ランゲルハンス細胞と作用させることを特徴と
する非ヒト哺乳動物の該抗原特異的キラーＴ細胞賦活方
法。 - 【請求項８】 請求項１または２記載の抗原特異的キラ
ーＴ細胞賦活剤を、角質層を破壊した表皮に投与するこ
とにより防御抗原を経皮接種することを特徴とする請求
項７記載の非ヒト哺乳動物の抗原特異的キラーＴ細胞賦
活方法。 - 【請求項９】 粘着テープの粘着層表面を、皮膚表皮角
質層面に接着した後剥離する操作を１回以上行うことに
より該角質層を破壊することを特徴とする請求項７記載
の非ヒト哺乳動物の抗原特異的キラーＴ細胞賦活方法。 - 【請求項１０】 請求項３記載の抗原特異的キラーＴ細
胞賦活剤の、防御抗原を含まない粘着層領域を用いて皮
膚表皮角質層を破壊し、該抗原特異的キラーＴ細胞賦活
剤の、防御抗原を含む粘着層領域表面を該表皮に接着さ
せることにより防御抗原を経皮接種することを特徴とす
る請求項９記載の非ヒト哺乳動物の抗原特異的キラーＴ
細胞賦活方法。 - 【請求項１１】 請求項４記載の抗原特異的キラーＴ細
胞賦活剤の、防御抗原を含まない片面の粘着層を用いて
皮膚表皮角質層を破壊し、該抗原特異的キラーＴ細胞賦
活剤の、防御抗原を含む片面の粘着層表面を該表皮に接
着させることにより防御抗原を経皮接種することを特徴
とする請求項９記載の非ヒト哺乳動物の抗原特異的キラ
ーＴ細胞賦活方法。 - 【請求項１２】 防御抗原が、病原性微生物、その感染
防御抗原となるペプチドおよび癌細胞特異的変異ペプチ
ドからなる群より選択される１以上のものである請求項
７〜１１のいずれかに記載の非ヒト哺乳動物の抗原特異
的キラーＴ細胞賦活方法。 - 【請求項１３】 非ヒト哺乳動物の微生物感染症または
癌の予防および治療方法である請求項１２記載の抗原特
異的キラーＴ細胞賦活方法。
Priority Applications (6)
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|---|---|---|---|
| JP13003197A JP3879785B2 (ja) | 1997-05-20 | 1997-05-20 | キラーｔ細胞賦活剤 |
| DE69807402T DE69807402T2 (de) | 1997-05-20 | 1998-05-19 | Killer-T-Zell Aktivator und dessen Verwendung |
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| EP98109072A EP0891770B1 (en) | 1997-05-20 | 1998-05-19 | Killer T cell activator and use thereof |
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| AT98109072T ATE222755T1 (de) | 1997-05-20 | 1998-05-19 | Killer-t-zell aktivator und dessen verwendung |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13003197A JP3879785B2 (ja) | 1997-05-20 | 1997-05-20 | キラーｔ細胞賦活剤 |
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| JP3879785B2 JP3879785B2 (ja) | 2007-02-14 |
Family
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| ES (1) | ES2178076T3 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008105504A1 (ja) | 2007-03-01 | 2008-09-04 | Cosmed Pharmaceutical Co., Ltd. | 経皮免疫製剤、その製造方法及びそれを用いた経皮免疫方法 |
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|---|---|---|---|---|
| US20060002949A1 (en) | 1996-11-14 | 2006-01-05 | Army Govt. Of The Usa, As Rep. By Secretary Of The Office Of The Command Judge Advocate, Hq Usamrmc. | Transcutaneous immunization without heterologous adjuvant |
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| AU4188100A (en) * | 1999-04-08 | 2000-11-14 | Gregory M. Glenn | Dry formulation for transcutaneous immunization |
| DK1372708T3 (da) | 2001-02-13 | 2008-10-20 | Us Gov Sec Army | Vaccine til transkutan immunisering mod rejsediarre |
| EP1963558B1 (en) * | 2005-11-04 | 2012-08-15 | Mannius zu dem Berge, Johan Patrick Olof Ermes | Method for preparing a textile material |
| AU2008246579A1 (en) | 2007-05-08 | 2008-11-13 | National University Corporation, Hamamatsu University School Of Medicine | Cytotoxic T cell activator comprising EP4 agonist |
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|---|---|---|---|---|
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| DE19525607A1 (de) * | 1995-07-14 | 1997-01-16 | Boehringer Ingelheim Kg | Transcorneales Arzneimittelfreigabesystem |
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1997
- 1997-05-20 JP JP13003197A patent/JP3879785B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1998
- 1998-05-19 CA CA002238661A patent/CA2238661C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-05-19 DE DE69807402T patent/DE69807402T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-05-19 ES ES98109072T patent/ES2178076T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-05-19 AT AT98109072T patent/ATE222755T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-05-19 EP EP98109072A patent/EP0891770B1/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008105504A1 (ja) | 2007-03-01 | 2008-09-04 | Cosmed Pharmaceutical Co., Ltd. | 経皮免疫製剤、その製造方法及びそれを用いた経皮免疫方法 |
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