JPH1042860A - イノシトールの製造方法およびヘキサクロロシクロヘキサン耐性株の取得法 - Google Patents
イノシトールの製造方法およびヘキサクロロシクロヘキサン耐性株の取得法Info
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- JPH1042860A JPH1042860A JP20479096A JP20479096A JPH1042860A JP H1042860 A JPH1042860 A JP H1042860A JP 20479096 A JP20479096 A JP 20479096A JP 20479096 A JP20479096 A JP 20479096A JP H1042860 A JPH1042860 A JP H1042860A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】より経済的にイノシトールを生産する。
【解決手段】ヘキサクロロシクロヘキサンに耐性を有す
る微生物を用いる。
る微生物を用いる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】イノシトールは、高等動物に
おいてビタミンの一種として重要な物質で、栄養食品、
飼料添加物、医薬品などに利用される。
おいてビタミンの一種として重要な物質で、栄養食品、
飼料添加物、医薬品などに利用される。
【０００２】
【従来の技術】従来イノシトールは、米糠、コーンステ
ィープリカーなどからの抽出（特開昭６１−５６１４２
号公報）、パン酵母を培養して製造する方法（欧州特許
公開第５０６２８９）などが知られている。また、本発
明者らによるキャンディダ属に属する微生物を培養して
製造する方法（特開平８−２５８号公報、特開平８−８
９２６６号公報、特開平８−３８１８８号公報）があ
る。
ィープリカーなどからの抽出（特開昭６１−５６１４２
号公報）、パン酵母を培養して製造する方法（欧州特許
公開第５０６２８９）などが知られている。また、本発
明者らによるキャンディダ属に属する微生物を培養して
製造する方法（特開平８−２５８号公報、特開平８−８
９２６６号公報、特開平８−３８１８８号公報）があ
る。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】米糠、コーンスティー
プリカーなどから抽出する方法は、イノシトール以外の
不純物が多く、精製が困難であり、経済的に問題があ
る。また、パン酵母を培養して製造する方法は、生産性
が低く、やはり経済的に問題があり、さらに工業的実績
もない。また、キャンディダ属に属する微生物を培養し
て製造する方法は、工業的に収率、収量の点で満足いく
ものではなかった。
プリカーなどから抽出する方法は、イノシトール以外の
不純物が多く、精製が困難であり、経済的に問題があ
る。また、パン酵母を培養して製造する方法は、生産性
が低く、やはり経済的に問題があり、さらに工業的実績
もない。また、キャンディダ属に属する微生物を培養し
て製造する方法は、工業的に収率、収量の点で満足いく
ものではなかった。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記問題
点を解決するため、キャンディダ属に属する微生物の変
異株がイノシトールを収率、収量良く蓄積する事を見い
出した。本発明者らはさらに生産性の高いイノシトール
の製造方法について鋭意研究した結果、イノシトールの
生産能を有する微生物に、ヘキサクロロシクロヘキサン
する耐性を付与することにより、イノシトールの蓄積濃
度、生成収率が著しく向上することを見出し本発明に到
達した。
点を解決するため、キャンディダ属に属する微生物の変
異株がイノシトールを収率、収量良く蓄積する事を見い
出した。本発明者らはさらに生産性の高いイノシトール
の製造方法について鋭意研究した結果、イノシトールの
生産能を有する微生物に、ヘキサクロロシクロヘキサン
する耐性を付与することにより、イノシトールの蓄積濃
度、生成収率が著しく向上することを見出し本発明に到
達した。
【０００５】すなわち、本発明はヘキサクロロシクロヘ
キサンに耐性を有し、かつイノシトールを分泌する性質
を持った微生物を培養して、培養液中にイノシトールを
蓄積せしめ、前記培養液よりイノシトールを採取するこ
とおよび、ヘキサクロロシクロヘキサン質に耐性を有
し、かつイノシトール生産能を有する微生物を培養し
て、得られた菌体、もしくはそれらの処理物を用い、イ
ノシトールを生成蓄積せしめる反応を行い、前記反応液
よりイノシトールを採取することを特徴とするイノシト
ールの製造方法である。
キサンに耐性を有し、かつイノシトールを分泌する性質
を持った微生物を培養して、培養液中にイノシトールを
蓄積せしめ、前記培養液よりイノシトールを採取するこ
とおよび、ヘキサクロロシクロヘキサン質に耐性を有
し、かつイノシトール生産能を有する微生物を培養し
て、得られた菌体、もしくはそれらの処理物を用い、イ
ノシトールを生成蓄積せしめる反応を行い、前記反応液
よりイノシトールを採取することを特徴とするイノシト
ールの製造方法である。
【０００６】ここでいうヘキサクロロシクロヘキサンと
は、イノシトール代謝拮抗物質である。すなわち、微生
物の生育を阻害する物質し、 グルコースからイノシト
ール生合成する場合の生合成系に関与する酵素の抑制あ
るいは阻害作用を示し、その抑制あるいは阻害がイノシ
トールおよび、またはイノシトール以降の生合成系の物
質の添加により回復する物質のことである。 ヘキサク
ロロシクロヘキサンとしては、α−ヘキサクロロシクロ
ヘキサン、β−ヘキサクロロシクロヘキサン、γ−ヘキ
サクロロシクロヘキサン、δ−ヘキサクロロシクロヘキ
サンなどが挙げられ、各々の異性体を単独、または組み
合わせて用いることができる。
は、イノシトール代謝拮抗物質である。すなわち、微生
物の生育を阻害する物質し、 グルコースからイノシト
ール生合成する場合の生合成系に関与する酵素の抑制あ
るいは阻害作用を示し、その抑制あるいは阻害がイノシ
トールおよび、またはイノシトール以降の生合成系の物
質の添加により回復する物質のことである。 ヘキサク
ロロシクロヘキサンとしては、α−ヘキサクロロシクロ
ヘキサン、β−ヘキサクロロシクロヘキサン、γ−ヘキ
サクロロシクロヘキサン、δ−ヘキサクロロシクロヘキ
サンなどが挙げられ、各々の異性体を単独、または組み
合わせて用いることができる。
【０００７】
【発明の実施の形態】本発明に使用する微生物は、イノ
シトールを分泌する微生物であるならばいずれでもよい
が、親株としては、本発明者らにより６−クロロ−６−
デオキシグルコース耐性変異株として取得された、キャ
ンディダ・ボイディニイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｂｏｉｄｉ
ｎｉｉ）＃６９１２（ＦＥＲＭ Ｐ−１５７４０）を用
いることが好ましい。イノシトールを分泌する性質があ
れば、他に、薬剤に対する耐性、栄養要求性などの性質
があってもよく、イノシトールを分泌する微生物はすべ
て本発明に含まれるものである。
シトールを分泌する微生物であるならばいずれでもよい
が、親株としては、本発明者らにより６−クロロ−６−
デオキシグルコース耐性変異株として取得された、キャ
ンディダ・ボイディニイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｂｏｉｄｉ
ｎｉｉ）＃６９１２（ＦＥＲＭ Ｐ−１５７４０）を用
いることが好ましい。イノシトールを分泌する性質があ
れば、他に、薬剤に対する耐性、栄養要求性などの性質
があってもよく、イノシトールを分泌する微生物はすべ
て本発明に含まれるものである。
【０００８】変異株の誘導は親株を紫外線照射するか、
あるいは変異誘発剤（たとえばＮ−メチル−Ｎ′−ニト
ロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、エチルメタンスルホン酸
など）で処理した後、親株が生育できないような濃度の
ヘキサクロロシクロヘキサンを含む固体培地で生育可能
な菌株を採取すればよい。
あるいは変異誘発剤（たとえばＮ−メチル−Ｎ′−ニト
ロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、エチルメタンスルホン酸
など）で処理した後、親株が生育できないような濃度の
ヘキサクロロシクロヘキサンを含む固体培地で生育可能
な菌株を採取すればよい。
【０００９】ヘキサクロロシクロヘキサン耐性変異株
は、親株よりヘキサクロロシクロヘキサンに強い耐性を
有する株のことである。本発明においては、親株の相対
生育度の３０％以下を示すヘキサクロロシクロヘキサン
の濃度範囲において６０％以上の相対生育度を示す変異
株を取得するのが好ましい。ここでの相対生育度は培養
液の６６０ｎｍにおける吸光度を測定し、イノシトール
代謝拮抗物質を添加していない培養液の吸光度を１００
％とした時の相対値で示す。耐性を検定する場合のイノ
シトール代謝拮抗物質は市販のものを用いればよい。
は、親株よりヘキサクロロシクロヘキサンに強い耐性を
有する株のことである。本発明においては、親株の相対
生育度の３０％以下を示すヘキサクロロシクロヘキサン
の濃度範囲において６０％以上の相対生育度を示す変異
株を取得するのが好ましい。ここでの相対生育度は培養
液の６６０ｎｍにおける吸光度を測定し、イノシトール
代謝拮抗物質を添加していない培養液の吸光度を１００
％とした時の相対値で示す。耐性を検定する場合のイノ
シトール代謝拮抗物質は市販のものを用いればよい。
【００１０】本発明における培養方法について説明す
る。イノシトール生産用の培地は、炭素源、窒素源、無
機イオンおよび必要に応じてその他の有機微量成分を含
有する通常の培地である。
る。イノシトール生産用の培地は、炭素源、窒素源、無
機イオンおよび必要に応じてその他の有機微量成分を含
有する通常の培地である。
【００１１】炭素源としては、グルコース、フラクトー
ス、でんぷんおよびセルロースの加水分解物、糖蜜など
の糖類、フマール酸、クエン酸、コハク酸のごとき有機
酸、メタノール、エタノール、グリセロールのごときア
ルコール類などを１〜１５％、窒素源として、酢酸アン
モニウムのごとき有機アンモニウム塩、硫酸アンモニウ
ム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム、硝酸アン
モニウム、のごとき無機アンモニウム塩、アンモニアガ
ス、アンモニア水、尿素等を０．１〜４．０％、有機微
量成分としては、ビオチン等の被要求性物質が０．００
０００１％〜０．１％、また必要に応じて、コーンステ
ィープリカー、ペプトン、酵母エキス等０〜５％をそれ
ぞれ適当に含有する培地が用いられる。これらの他に、
リン酸カリウム、硫酸マグネシウム、塩化カルシウム、
塩化ナトリウム、硫酸亜鉛、硫酸銅、硫酸第１鉄、等が
微量成分として添加される。また好ましくは消泡剤など
も添加し、培養条件の安定化をはかる。
ス、でんぷんおよびセルロースの加水分解物、糖蜜など
の糖類、フマール酸、クエン酸、コハク酸のごとき有機
酸、メタノール、エタノール、グリセロールのごときア
ルコール類などを１〜１５％、窒素源として、酢酸アン
モニウムのごとき有機アンモニウム塩、硫酸アンモニウ
ム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム、硝酸アン
モニウム、のごとき無機アンモニウム塩、アンモニアガ
ス、アンモニア水、尿素等を０．１〜４．０％、有機微
量成分としては、ビオチン等の被要求性物質が０．００
０００１％〜０．１％、また必要に応じて、コーンステ
ィープリカー、ペプトン、酵母エキス等０〜５％をそれ
ぞれ適当に含有する培地が用いられる。これらの他に、
リン酸カリウム、硫酸マグネシウム、塩化カルシウム、
塩化ナトリウム、硫酸亜鉛、硫酸銅、硫酸第１鉄、等が
微量成分として添加される。また好ましくは消泡剤など
も添加し、培養条件の安定化をはかる。
【００１２】培養は通常、好気条件で行う。培養の間、
培地のｐＨ３〜８に、温度は２０〜３５℃に調節し、２
４〜９６時間振とうまたは通気撹拌培養すれば好ましい
結果が得られる。
培地のｐＨ３〜８に、温度は２０〜３５℃に調節し、２
４〜９６時間振とうまたは通気撹拌培養すれば好ましい
結果が得られる。
【００１３】次に本発明における酵素法でのイノシトー
ルの生産方法について説明する。前記発酵法における培
地と同様に培養し、菌体をえる。この菌体をそのまま反
応に用いてもよいが、好ましくは、公知の方法で原形質
分離化処理して行う。反応原料は、ニコチンアミドアデ
ニンジヌクレオチド、アンモニア存在下で行い、ｐＨは
３〜８、温度は２０〜３５℃で１０〜７２時間振盪して
行う。
ルの生産方法について説明する。前記発酵法における培
地と同様に培養し、菌体をえる。この菌体をそのまま反
応に用いてもよいが、好ましくは、公知の方法で原形質
分離化処理して行う。反応原料は、ニコチンアミドアデ
ニンジヌクレオチド、アンモニア存在下で行い、ｐＨは
３〜８、温度は２０〜３５℃で１０〜７２時間振盪して
行う。
【００１４】培養液中に分泌蓄積されたイノシトール
は、そのまま単離採取することなく、飼料などに用いる
ことができる。また、培養液あるいは反応液からイノシ
トールを採取するには公知の方法で可能である。例え
ば、菌体を遠心分離などで除去した後、カチオンおよび
アニオン交換樹脂でイオン性の物質を除き、濃縮すれば
結晶を取得することができる。
は、そのまま単離採取することなく、飼料などに用いる
ことができる。また、培養液あるいは反応液からイノシ
トールを採取するには公知の方法で可能である。例え
ば、菌体を遠心分離などで除去した後、カチオンおよび
アニオン交換樹脂でイオン性の物質を除き、濃縮すれば
結晶を取得することができる。
【００１５】
【実施例】以下、実施例により本発明を具体的に説明す
る。
る。
【００１６】実施例１ （δ−ヘキサクロロシクロヘキサン耐性変異株の分離）
キャンディダ・ボイディニイ＃６９１２の菌体を常法に
よりＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジ
ン処理（３００μg ／ml）、３０℃１０分）した後、こ
の細胞を適当に希釈し、表１に示した培地に10mg／ｌの
濃度でδ−ヘキサクロロシクロヘキサン（δ−ＨＣＣ
Ｈ）を加えた平板培地に塗布し、３０℃で４日間培養し
た。生育してきた変異処理したキャンディダ・ボイディ
ニイのコロニーを純粋な変異株として単離し、キャンデ
ィダ・ボイディニイδ−６５（ＦＥＲＭ Ｐ−１５７３
９）を取得した。
キャンディダ・ボイディニイ＃６９１２の菌体を常法に
よりＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジ
ン処理（３００μg ／ml）、３０℃１０分）した後、こ
の細胞を適当に希釈し、表１に示した培地に10mg／ｌの
濃度でδ−ヘキサクロロシクロヘキサン（δ−ＨＣＣ
Ｈ）を加えた平板培地に塗布し、３０℃で４日間培養し
た。生育してきた変異処理したキャンディダ・ボイディ
ニイのコロニーを純粋な変異株として単離し、キャンデ
ィダ・ボイディニイδ−６５（ＦＥＲＭ Ｐ−１５７３
９）を取得した。
【００１７】
【表１】
【００１８】（δ−ヘキサクロロシクロヘキサン耐性変
異株の耐性度）キャンディダ・ボイディニイδ−６５及
びキャンディダ・ボイディニイ＃６９１２の各菌株を表
１に示す寒天培地を除いた培地を用いて３０℃で２４時
間振盪培養し、生育した菌体を各々集菌し生理食塩水で
洗浄した。これらの菌体懸濁液を表２に示す濃度のδ−
ヘキサクロロシクロヘキサンを添加した表１に示す培地
５ｍｌに各々植菌して、３０℃にて培養し、各菌株の７
２時間後の生育度を調べた。その結果は表２に示すとお
りである。本発明で使用するにδ−ヘキサクロロシクロ
ヘキサンに耐性な変異株は親株とと比較して、高濃度の
δ−ヘキサクロロシクロヘキサンによって生育が阻害さ
れず、強いδ−ヘキサクロロシクロヘキサン耐性を獲得
していることを示している。
異株の耐性度）キャンディダ・ボイディニイδ−６５及
びキャンディダ・ボイディニイ＃６９１２の各菌株を表
１に示す寒天培地を除いた培地を用いて３０℃で２４時
間振盪培養し、生育した菌体を各々集菌し生理食塩水で
洗浄した。これらの菌体懸濁液を表２に示す濃度のδ−
ヘキサクロロシクロヘキサンを添加した表１に示す培地
５ｍｌに各々植菌して、３０℃にて培養し、各菌株の７
２時間後の生育度を調べた。その結果は表２に示すとお
りである。本発明で使用するにδ−ヘキサクロロシクロ
ヘキサンに耐性な変異株は親株とと比較して、高濃度の
δ−ヘキサクロロシクロヘキサンによって生育が阻害さ
れず、強いδ−ヘキサクロロシクロヘキサン耐性を獲得
していることを示している。
【００１９】
【表２】
【００２０】実施例２ （発酵法によるδ−ヘキサクロロシクロヘキサン耐性変
異株の培養およびイノシトールの生産）キャンディダ・
ボイディニイδ−６５及びキャンディダ・ボイディニイ
＃６９１２を各々表３に示した培地５ｍｌに一白金耳植
菌し、３０℃で、２４時間振とうして前培養した。この
培養液を予め１１５℃１０分蒸気滅菌した表４に示した
組成の培地５０mlを含む５００ml容の三角フラスコに植
え継ぎ、１８０rpm 、振幅３０cmの条件下で７２時間培
養した後、予め滅菌したグルコースを５０ｇ／ｌになる
ように添加し、総計１２０時間培養した。
異株の培養およびイノシトールの生産）キャンディダ・
ボイディニイδ−６５及びキャンディダ・ボイディニイ
＃６９１２を各々表３に示した培地５ｍｌに一白金耳植
菌し、３０℃で、２４時間振とうして前培養した。この
培養液を予め１１５℃１０分蒸気滅菌した表４に示した
組成の培地５０mlを含む５００ml容の三角フラスコに植
え継ぎ、１８０rpm 、振幅３０cmの条件下で７２時間培
養した後、予め滅菌したグルコースを５０ｇ／ｌになる
ように添加し、総計１２０時間培養した。
【００２１】培養終了後、菌体、炭酸カルシウムを除去
したろ液中のイノシトール濃度を高速液体クロマトグラ
フィ−で定量したところ、表４に示すような結果を得
た。親株と比較し、変異株ではイノシトールの生産量が
大幅に向上している結果を得た。
したろ液中のイノシトール濃度を高速液体クロマトグラ
フィ−で定量したところ、表４に示すような結果を得
た。親株と比較し、変異株ではイノシトールの生産量が
大幅に向上している結果を得た。
【００２２】
【表３】
【００２３】
【表４】
【００２４】実施例３ 実施例２での培養液１Ｌ分の上清をカチオン交換樹脂ダ
イヤイオンＳＫ１Ｂ（三菱化学製）に通液し、その素通
り画分をあつめ、さらにアニオン交換樹脂ダイヤイオン
ＰＡ３１６（三菱化学製）に通液し、その素通り画分を
あつめ、濃縮晶析し、純度９８％以上のイノシトール結
晶１２．２ｇを得た。
イヤイオンＳＫ１Ｂ（三菱化学製）に通液し、その素通
り画分をあつめ、さらにアニオン交換樹脂ダイヤイオン
ＰＡ３１６（三菱化学製）に通液し、その素通り画分を
あつめ、濃縮晶析し、純度９８％以上のイノシトール結
晶１２．２ｇを得た。
【００２５】
【発明の効果】本発明の酵母を用い、発酵法によりイノ
シトールを培養液中に生産すると既存の方法と比較し、
より経済的なイノシトールの生産が可能となる。
シトールを培養液中に生産すると既存の方法と比較し、
より経済的なイノシトールの生産が可能となる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:72）
Claims (8)
- 【請求項１】ヘキサクロロシクロヘキサンに耐性を有
し、かつイノシトール分秘生産能を有する微生物を用い
ることを特徴とするイノシトールの製造方法。 - 【請求項２】ヘキサクロロシクロヘキサンに耐性を有
し、かつイノシトール分秘生産能を有する微生物を培養
して、培養液中にイノシトールを蓄積せしめることを特
徴とする請求項１記載のイノシトールの製造方法。 - 【請求項３】ヘキサクロロシクロヘキサンに耐性を有
し、かつイノシトール生産能を有する微生物を培養し
て、培養液中にイノシトールを蓄積せしめ、前記培養液
よりイノシトールを採取することを特徴とする請求項２
記載のイノシトールの製造方法。 - 【請求項４】ヘキサクロロシクロヘキサン耐性を有し、
かつイノシトール分泌生産能を有する微生物を培養し
て、得られた菌体、もしくはそれらの処理物を用い、イ
ノシトールを生成蓄積せしめる反応を行うことを特徴と
する請求項１記載のイノシトールの製造方法。 - 【請求項５】ヘキサクロロシクロヘキサン耐性を有し、
かつイノシトール分泌生産能を有する微生物を培養し
て、得られた菌体、もしくはそれらの処理物を用い、イ
ノシトールを生成蓄積せしめる反応を行い、前記反応液
よりイノシトールを採取することを特徴とする請求項４
記載のイノシトールの製造方法。 - 【請求項６】イノシトール分泌生産能を有する微生物が
キャンディダ属に属する微生物であることを特徴とする
請求項１から５のいずれか１項に記載のイノシトールの
製造方法。 - 【請求項７】キャンディダ属に属する微生物が、キャン
ディダ・ボイディニイであることを特徴とする請求項６
記載のイノシトールの製造方法。 - 【請求項８】ヘキサクロロシクロヘキサンに耐性でかつ
イノシトール分秘生産能を有する微生物を取得する方法
において、炭素源としてアルコール類を用いることを特
徴とする、ヘキサクロロシクロヘキサン耐性変異株の取
得法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20479096A JPH1042860A (ja) | 1996-08-02 | 1996-08-02 | イノシトールの製造方法およびヘキサクロロシクロヘキサン耐性株の取得法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20479096A JPH1042860A (ja) | 1996-08-02 | 1996-08-02 | イノシトールの製造方法およびヘキサクロロシクロヘキサン耐性株の取得法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1042860A true JPH1042860A (ja) | 1998-02-17 |
Family
ID=16496402
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20479096A Pending JPH1042860A (ja) | 1996-08-02 | 1996-08-02 | イノシトールの製造方法およびヘキサクロロシクロヘキサン耐性株の取得法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1042860A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013073483A1 (ja) | 2011-11-14 | 2013-05-23 | 旭化成ケミカルズ株式会社 | ミオイノシトール及びミオイノシトール誘導体の製造方法 |
| WO2013115012A1 (ja) | 2012-02-02 | 2013-08-08 | 旭化成ケミカルズ株式会社 | シロ‐イノシトールの製造方法 |
| WO2018004307A1 (ko) | 2016-06-30 | 2018-01-04 | 씨제이제일제당 (주) | 고농도 마이오-이노시톨의 효소적 제조방법 |
-
1996
- 1996-08-02 JP JP20479096A patent/JPH1042860A/ja active Pending
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013073483A1 (ja) | 2011-11-14 | 2013-05-23 | 旭化成ケミカルズ株式会社 | ミオイノシトール及びミオイノシトール誘導体の製造方法 |
| KR20140048334A (ko) | 2011-11-14 | 2014-04-23 | 아사히 가세이 케미칼즈 가부시키가이샤 | 미오이노시톨 및 미오이노시톨 유도체의 제조 방법 |
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