JPH1045598A

JPH1045598A - ウイルス感染症予防治療剤

Info

Publication number: JPH1045598A
Application number: JP8305697A
Authority: JP
Inventors: Yoichi Fujii; 陽一藤井; Akio Adachi; 昭夫足立; Toshio Asano; 敏雄浅野
Original assignee: Asahi Chemical Industry Co Ltd
Current assignee: Asahi Chemical Industry Co Ltd
Priority date: 1996-04-10
Filing date: 1997-04-01
Publication date: 1998-02-17

Abstract

(57)【要約】【解決手段】下記の一般式〔Ｉ〕【化１】（ただし、式中、Ｒ¹は水素原子または水酸基を表す）
で示される化合物またはその酸付加塩を有効成分とする
ウイルス感染予防治療剤である。【効果】優れたウイルス感染症の予防治療効果が得ら
れる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ウイルス感染症予
防治療剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】ウイルスは、ＤＮＡまたはＲＮＡいずれ
かの核酸と少数の蛋白分子からなる粒子状の微生物であ
り、ウイルス単独では、通常、増殖能を有さず、動物、
細菌、真菌、藻類あるいは植物の細胞内に浸入し、宿主
細胞内の代謝系を使ってはじめて増殖することが知られ
ている。ウイルスの遺伝子には、感染に必要なタンパク
質や宿主細胞内での核酸の発現に必要なタンパク質（酵
素）、さらにウイルスの構造を保持するためのタンパク
質等の情報を含んでいる。

【０００３】ウイルスの感染を受けた場合、どのような
症状が現れるかはウイルスの種類によって千差万別で、
同じウイルスが異なった症状を起こすこともある一方
で、異なったウイルスが似かよった症状を起こすことも
多い。また、ウイルスの感染を受けると必ず症状が出る
わけではなく、全く症状が現れない場合（不顕性感染）
も多い。症状が現れる場合（顕性感染）でも、すべての
症状が出揃う場合から一部の症状が出るだけで終わって
しまう場合まである。このような多様性が何によって生
じるのかは十分に明らかにはされていないが、少なくと
も、ウイルスの種類、感染を受けた個人の免疫機能の状
態に依存していることは確かである。

【０００４】動物に感染するウイルスは、その粒子内に
含まれる遺伝子によりＤＮＡウイルスとＲＮＡウイルス
に分類され動物ウイルスと総称される。ＤＮＡウイルス
とＲＮＡウイルスとでは、遺伝子の複製、転写機構に異
なる点があるが、動物ウイルスが細胞に感染し、増殖す
る過程は本質的には類似しているものと判断される。即
ち、（１）ウイルスの細胞表面への吸着、侵入、脱穀、
（２）核酸の複製、転写、（３）ウイルス蛋白の合成、
プロセシング、（４）ウイルス粒子の成熟と放出、とい
う共通の過程が示されるのである。いずれにしろ、この
ような過程により、ウイルス感染症の成立の前提となる
ウイスルの動物体内での増殖が行われ、宿主細胞の障
害、死滅に至る。

【０００５】従来、ウイルス感染症の予防治療のため
に、例えば、アマンタジンやリマンタジンが使用されて
いる。これらの薬剤は、細胞リゾチーム内のｐＨを高
め、ウイルスエンベロープ膜のプロテアーゼによる開裂
を阻害し、ウイルス粒子の侵入に必要な膜融合を阻害す
るとのことである。また、アシクロビル、ガンシクロビ
ル、ペンシクロビル、ホスカルネットナトリウムなど
は、ウイルスＤＮＡの複製を阻害する物質として知られ
ている。リバビリンやブレデニンは、ＲＮＡウイルスの
転写、複製（ＲＮＡ→ＲＮＡ）を阻害する。ネプラノシ
ンＡやアリステロマイシンは、ウイルスｍＲＮＡのキャ
ップのメチル化を阻害することにより、該ｍＲＮＡの翻
訳効率や安定性が低下し、ウイルスの増殖を結果的に抑
制する。

【０００６】また、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）や
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）は、自らのゲノムに由来す
るプロテアーゼにより、合成されたペプチドが切断され
て種々の構造機能蛋白を作り出すと言われているが、こ
のプロテアーゼ活性を特異的に阻害する物質も研究され
ている。インデナビル、クリキシバン等は、プロテアー
ゼインヒビターとして、プロテアーゼによるＨＩＶ（ヒ
ト免疫不全ウイルス）のプレ蛋白の開裂を阻害し、その
プレ蛋白の活性化を抑制してウイルスの増殖を抑制する
とのことである。さらに、インターフェロンの作用によ
り細胞内に蓄積する２−５オリゴアデニル酸は、ＲＮＡ
アーゼ活性を高めてウイルスｍＲＮＡの分解を速めるの
で、ウイルス蛋白への翻訳が阻害される。

【０００７】また、逆転写酵素の活性（ＲＮＡ→ＤＮ
Ａ）を阻害するものとして、３’−アジド−３’−デオ
キシチミジン（以下ＡＺＴと略することがある）、
２’，３’−ジデオキシシチジン（以下ｄｄＣと略する
ことがある）、２’，３’−ジデオキシイノシン（以下
ｄｄＩと略することがある）などが挙げられ、これら
は、ＡＩＤＳ治療に用いられているようである。

【０００８】逆転写酵素とは、ＲＮＡを鋳型にしてＤＮ
Ａを合成することを触媒する酵素であり、ウイルス粒子
に内在している。その他に、アロステリック逆転写酵素
阻害薬５−エチル−６−フェニルチオウラシル、ネビラ
ピンは、逆転写酵素の基質結合部以外に結合して、逆転
写酵素活性を阻害すると考えられている。また、Ｃカイ
ネース阻害剤Ｈ−７〔１−（５−イソキノリニルスルホ
ニル）−２−メチル−ピペラジン〕について、明確にＨ
ＩＶ感染症に効果があるとの結論ではないが、その関係
を検討した文献も存在する〔ＡｎｔｉｖｉｒａｌＲｅ
ｓ．２２，２７３〜２８３（１９９３）〕。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】有効なワクチンが開発
され、１９８０年にＷＨＯによって根絶宣言が出された
痘瘡の例もあるが、多くの試みにも拘らず、ウイルス感
染症に対する根治療は未だ確立されておらず、ウイルス
感染症の予防・治療に好ましい効果を示す新たな医薬が
求められていた。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記課題に
鑑み、鋭意努力の結果、下記の一般式〔Ｉ〕で示される
化合物またはその酸付加塩に、特に優れたウイルス感染
症予防、治療効果を認め、有効な改善剤となることを確
認し、本発明を完成するに至った。即ち、本発明は、下
記一般式〔Ｉ〕

【００１１】

【化２】（ただし、式中、Ｒ¹は水素原子または水酸基を表す）
で示される化合物またはその酸付加塩を有効成分とする
ウイルス感染症予防治療剤（以下、時として予防治療剤
という）である。

【００１２】一般式〔Ｉ〕（ただし、式中、Ｒ¹は水素
原子または水酸基を表す）で示される化合物が、血管拡
張作用等を示し、血管拡張剤等において有用な物質であ
ることは既に公知である〔特公平７−８０８５４号公
報、特開昭６１−１５２６５８号公報、特開昭６１−２
２７５８１号公報、特開平２−２５６６１７号公報、特
開平４−２６４０３０号公報、特開平６−０５６６６８
号公報、特開平６−０８０５６９号公報、特開平６−２
９３６４３号公報、特開平７−２７７９７９号公報、Ｂ
ｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，８，１０９１（１９８
９）、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，
２５９，７３８（１９９１）、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ
ａｃｏｌ．，１９５，２６７（１９９１）、Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４６，１４８７（１９９
３）〕。

【００１３】一般式〔Ｉ〕で示される化合物または酸付
加塩は前述の通り公知であり、とくに一般式〔Ｉ〕（式
中、Ｒ¹が水素原子を表す）で示される化合物の酸付加
塩は塩酸ファスジル〔ＦＡＳ；ｈｅｘａｈｙｄｒｏ−１
−（５−ｉｓｏｑｕｉｎｏｌｉｎｅｓｕｌｆｏｎｙｌ）
−１Ｈ−１，４−ｄｉａｚｅｐｉｎｅｈｙｄｒｏｃｈ
ｌｏｒｉｄｅ〕として、既に市販されている薬剤であっ
て、低毒性であることは確認されている。また、ＦＡＳ
がミオシン軽鎖リン酸化酵素阻害作用やＣカイネース阻
害作用など蛋白リン酸化阻害作用を示すことも知られて
いる〔脳神経４５（９）、８１９〜８２４頁、１９９３
年〕。

【００１４】しかし従来、本発明の化合物がウイルス感
染症の予防治療に好ましい効果を示すことは、全く知ら
れていなかった。本発明の一般式〔Ｉ〕で示される化合
物は、公知の方法、例えば、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂ
ｕｌｌ．，４０，（３）７７０〜７７３（１９９２）、
特開昭６１−１５２６５８号公報等に掲載されている方
法により合成することができる。また、その酸付加塩
は、薬学上許容される非毒性の塩が好ましく、例えば塩
酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸等の無機酸、および酢
酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、コハク酸、フマル酸、マ
レイン酸、メタンスルホン酸等の有機酸の塩を挙げるこ
とができる。

【００１５】本発明のウイルス感染症予防治療剤を調製
するに際しては、上述の一般式〔Ｉ〕で示される化合物
またはその酸付加塩と公知の医薬上許容される担体とを
混合すればよい。上記の担体としては、例えば、ゼラチ
ン：乳糖、グルコース等の糖類：コーン、小麦、米、と
うもろこし澱粉等の澱粉類：ステアリン酸等の脂肪酸：
ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等
の脂肪酸塩：タルク：植物油：ステアリルアルコール、
ベンジルアルコール等のアルコール：ガム：ポリアルキ
レングリコール等が挙げられる。

【００１６】これらの内、液状担体の例としては一般に
水、生理食塩液、デキストロースまたは類似の糖溶液、
エチレングリコール、プロピレングリコール、ポリエチ
レングリコール、ポリプロピレングリコール等のグリコ
ール類が挙げられる。本発明のウイルス感染症予防治
療剤がカプセル剤である場合には、通常ゼラチンを用い
てカプセルを調製し、使用することが好ましい。投与方
法は、経口投与や非経口投与が挙げられる。経口投与に
適した剤形としては、錠剤、カプセル剤、粉剤、顆粒
剤、液剤、エリキシル剤等が挙げられ、非経口投与に適
した剤形としては、液剤が例示される。

【００１７】非経口的に筋肉内注射、静脈内注射、皮下
注射で投与する場合には、一般式〔Ｉ〕で示される化合
物またはその酸付加塩は、溶液を等張にするために、食
塩またはグルコース等の他の溶質を添加した無菌溶液と
して使用される。注射により投与する場合には、さら
に、滅菌水、塩酸リドカイン溶液（筋肉内注射用）、生
理食塩液、ブドウ糖溶液、静脈内注射用液体、電解質溶
液（静脈内注射用）等で溶解することも好ましい。この
ように溶解した場合には、通常０．００１〜２０重量
％、好ましくは０．０１〜１０重量％の有効成分を含む
ように調製されることがある。

【００１８】経口投与が錠剤、カプセル剤、粉剤、また
は顆粒剤である場合には、０．０１〜１００重量％、好
ましくは１〜４０重量％の有効成分を含む例が挙げられ
る。経口投与が液剤である場合は、０．０１〜２０重量
％の有効成分を含む懸濁液またはシロップが好ましい例
として挙げられる。この場合担体としては、香料、シロ
ップ、製剤的ミセル体等の水様賦形剤を挙げることがで
きる。

【００１９】本発明の予防治療剤の投与量は、患者の年
齢、健康状態、体重、症状の程度、同時処置があるなら
ばその種類、処置頻度、所望の効果の性質、あるいは投
与経路や投与計画によっても決定されるが、一般には、
非経口投与で０．０１〜２５ｍｇ／ｋｇ・日、経口投与
で０．０２〜４０ｍｇ／ｋｇ・日が挙げられる。さら
に、非経口投与では、好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ・日
以上、さらに好ましくは１ｍｇ／ｋｇ・日以上、特に好
ましくは２ｍｇ／ｋｇ・日以上が挙げられ、経口投与で
は、好ましくは０．５ｍｇ／ｋｇ・日以上、さらに好ま
しくは１又は２ｍｇ／ｋｇ・日以上、特に好ましくは４
ｍｇ／ｋｇ・日以上が挙げられる。

【００２０】本発明の予防治療剤は、驚くべきことに、
各種の試験において抗ウイルス活性を示し、ウイルス感
染症予防治療剤として有効であることが判明した。ウイ
ルス感染症に対して、抗ウイルス化学療法が必要とされ
ているものは、例えば、次の例が知られている（最新内
科学体系２６巻、７３〜８８頁）。

【００２１】例えば、ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎ
ｃｙｔｉａｌ（ＲＳ）ウイルス、パラインフルエンザウ
イルス、インフルエンザウイルス、ライノウイルス、ア
デノウイルス、ロタウイルスなどによる急性ウイルス感
染症、また、単純ヘルペスウイルス、水痘帯状疱疹ウイ
ルス、サイトメガロウイルス、ＥＢウイルス、ヒトヘル
ペスウイルス６などの免疫抑制状態で再発重症化するウ
イルス感染症、また、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイ
ルス、ＨＩＶ、ＨＴＬＶなど慢性化またはキャリア化す
るウイルス感染症、また、風疹ウイルスなど垂直感染を
起こすウイルス感染症、また、エボラ、ラッサ熱、腎症
候性出血熱などを起こす出血熱ウイルス感染症が挙げら
れる。

【００２２】上記において、ＡＩＤＳ（後天性免疫不全
症候群）の病原ウイルス〔ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩ
Ｖ）〕や、成人Ｔ細胞白血病をもたらすウイルス（ＨＴ
ＬＶ）などのレトロウイルス〔化学療法の領域、１１
（６）１０６９〜１０７８頁、１９９５；蛋白質核酸
酵素、４０（９０）、１０７９〜１０９１頁、１９９
５〕による感染症が近年大きな問題となっている。レト
ロウイルスとは、逆転写酵素を持つＲＮＡウイルスの略
称であるが、レトロウイルス感染症である成人Ｔ細胞白
血病とＡＩＤＳは病原体が１９８０年代に発見されたも
のでその研究はまだ新しく、急激な増加を見せている。

【００２３】即ち、本発明の予防治療剤の対照として好
ましくは、レトロウイルスによって引き起こされる感染
症（レトロウイルス感染症）が例示され、さらに好まし
くは、ＡＩＤＳなどのＨＩＶ感染症や成人Ｔ細胞白血病
が挙げられる。また本発明は、請求項１記載の一般式
〔Ｉ〕で示される化合物（式中、Ｒ¹は水素原子または
水酸基を表す）またはその酸付加塩を有効成分とする、
ウイルスの感染抑制剤、またはウイルス伝播抑制剤であ
る。

【００２４】また本発明は、請求項１記載の一般式
〔Ｉ〕で示される化合物（式中、Ｒ¹は水素原子または
水酸基を表す）またはその酸付加塩を有効成分とするウ
イルス増殖抑制剤である。更に本発明は、請求項１記載
の一般式〔Ｉ〕で示される化合物（式中、Ｒ¹は水素原
子または水酸基を表す）またはその酸付加塩を有効成分
とするＥｎｖ蛋白質発現抑制剤である。

【００２５】さらにまた本発明は、請求項１記載の一般
式〔Ｉ〕で示される化合物（式中、Ｒ¹は水素原子また
は水酸基を表す）またはその酸付加塩を有効成分とする
ウイルス産生抑制剤である。本発明のウイルス産生抑制
とは、感染細胞からのウイルス粒子の放出を抑制するこ
とを意味し、本発明の抑制剤は、この抑制作用に優れて
いる。また更に本発明は、請求項１記載の一般式〔Ｉ〕
で示される化合物（式中、Ｒ ¹は水素原子または水酸基
を表す）またはその酸付加塩を有効成分とするウイルス
の合胞体形成抑制剤である。

【００２６】これらの発明において、ウイルスがレトロ
ウイルスであることが好ましく、ＨＩＶ、さらにＨＩＶ
−１であることが好ましい例として挙げられる。もちろ
ん本発明は、これらの医薬を用いた予防治療または抑制
方法として提示される。また、本発明の化合物は、以下
の方法によりウイルス感染による細胞死またはアポプト
シス（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）が抑制されることが確認で
き、ＨＩＶ等のウイルス感染症に有効であることが示さ
れる。

【００２７】〔方法〕あらかじめ３７℃、５％ＣＯ₂条
件下で継代培養しておいたＭＯＬＴ４細胞（Ｋｉｋｕｋ
ａｗａ，Ｒ．ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．１９８
６，５７：１１５９〜１１６２）を培養液〔１０％牛胎
児血清（ＪＲＨ，Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）を添加し
たＲＰＭＩ培地（日水社製）〕に浮遊させて細胞懸濁液
を調製する。２×１０⁶個の細胞を含むこの細胞懸濁液
を、２５ｍｌの培養フラスコに分注し、さらに適当量の
ＨＩＶ２／ＧＨ１２３（Ｓｈｉｂａｔａ，Ｒ．ｅｔａ
ｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．１９９０，６４：７４２〜７４
７）を添加し感染させる。これに培養液を加え最終的に
１０ｍｌ／フラスコに調整する。本発明の化合物（ＦＡ
ＳおよびＲ¹が水酸基の化合物）の既知濃度の水溶液を
２０μｌずつ加え薬剤添加群とする。また薬剤無添加の
コントロール群も作製する。感染させた次の日から３日
から４日毎に培養上清５ｍｌを交換する。

【００２８】その際、薬剤添加群の薬剤濃度が一定にな
るように予め培養液に薬剤を溶解させる。また、ウイル
ス非感染のＭＯＬＴ４細胞にそれぞれの薬剤を添加し、
感染細胞と同様に長期培養し、薬剤自身の細胞に対する
影響も調べる。感染させた後の２５日から３０日後に、
軽く細胞を攪拌し、細胞浮遊液１００μｌを９６穴プレ
ートに採取する。そして、ＭＴＴ法（村上他、日本臨床
増刊ＨＩＶ感染症・ＡＩＤＳ、１１３〜１１９頁；Ｐ
ａｕｗｅｌｓ．Ｒ．ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．Ｍ
ｅｔｈｏｄｓ，１９８８，２０：３０９〜３２１）にて
生細胞数を定量し、薬剤の効果を検討する。

【００２９】すなわち、プレートに５ｍｇ／ｍｌのＭＴ
Ｔ〔臭化３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−
２，５−ジフェニル−２Ｈテトラゾリウム、同仁化学研
究所製〕を１０μｌ添加し、３７℃、５％ＣＯ₂で２時
間反応させ、ホルマザンを生成させる。次に、１０％Ｔ
ｒｉｔｏｎ−Ｘ、０．０４Ｎ塩酸のイソプロパノールを
添加し、ホルマザンを可溶化させ、生成したホルマザン
量をＯＤ_550nmの吸光度としてプレートリーダーで測定
する。対照の吸光度は、ＭＴＴのＯＤ_630nmで測定す
る。ＭＴＴは生細胞数に比例し吸光波長が５５０ｎｍの
ホルマザンに変化する。本発明化合物を添加した群で
は、ウイルス感染による細胞死またはアポプトシスが抑
制されることが判った。

【００３０】

【発明の実施の形態】次いで、本発明について実施例を
挙げて具体的に説明するが、本発明は、何ら実施例によ
って限定されるものではない。

【００３１】実施例１製剤例（無菌注射剤）下記の表１に示す成分を注射用蒸留水に溶解し、その
後、注射用蒸留水を添加し必要な最終含量とし、この溶
液２ｍｌをアンプルに密封し、加熱滅菌無菌注射剤を製
造した。

【００３２】

【表１】

【００３３】実施例２製剤例（錠剤）下記の表２に示す成分を含む錠剤を常法により調製し
た。

【００３４】

【表２】

【００３５】実施例３ＨＩＶの合胞体形成阻止活
性ａ）ＨＩＶ−１ａｃｕｔｅ−ｐｈａｓｅｉｎｆｅｃ
ｔｉｏｎに対する薬剤の作用：（方法）ＭＯＬＴ−４（ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅ
ＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎＡＴＣＣＣ
ＲＬ−１５８２）を、１０％ＦＢＳ（牛胎児血清；ギブ
コ社製）入りのＲＰＭＩ培地（ギブコ社製）にて培養
（培養条件：３７℃、５％ＣＯ₂／９５％空気）して得
た細胞を適当な細胞数（１×１０⁵ｃｅｌｌｓ／５０μ
ｌ）に調製した。その調製液５０μｌと、ＨＩＶ−１
（ＬＡＶ−１株；Ｗａｉｎ−Ｈｏｂｓｏｎｅｔａ
ｌ．，Ｃｅｌｌ４０，９〜１７，１９８５）を上記の
１０％ＦＢＳ入りのＲＰＭＩ培地により調製した調製液
５０μｌとを、９６穴マイクロプレートの各ウエルに入
れ、４８時間培養した（ＭＯＬＴ−４とＨＩＶ−１感染
の条件；Ｍ．Ｏ．Ｉ．＝４．０）。

【００３６】薬剤添加群の試験として、図１に示された
各最終濃度となるように各薬剤を上記１０％ＦＢＳ入り
のＲＰＭＩ培地に溶解せしめた薬剤溶液１００μｌを、
ＭＯＬＴ−４細胞調製液とＨＩＶ−１調製液との混合時
に添加し、最終溶液量を２００μｌとした。形成した合
胞体（シンシチウム）の数を顕微鏡下でウエル毎に数え
た。

【００３７】薬剤としては、ＦＡＳ〔塩酸ファスジル；
Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，４０，（３）７７
０〜７７３（１９９２）〕、Ｃカイネース阻害剤Ｈ−７
〔１−（５−イソキノリニルスルホニル）−２−メチル
−ピペラジン；シグマ社製〕、カルモジュリンカイネー
スII阻害剤ＫＮ−６２［１−〔Ｎ，Ｏ−ビス−（５−イ
ソキノリンスルホニル）−Ｎ−メチル−Ｌ−タイロシ
ル〕−４−フェニル−ピペラジン；シグマ社製、Ｎｅｕ
ｒｏｓｃｉｅｎｃｅＬｅｔｔ．１２９，４７（１９９
１）］を用いた。

【００３８】薬剤無添加群（対照群）として、上記の薬
剤添加群の試験における薬剤溶液１００μｌに替えて薬
剤無添加のブランク溶液を添加した。測定された薬剤添
加群における合胞体形成数と、薬剤無添加群における合
胞体形成数とから、以下の数式により合胞体形成能を計
算した。合胞体形成能＝薬剤添加群における合胞体形成数／薬剤
無添加群における合胞体形成数

【００３９】（結果）結果は図１に示した。図１の縦軸
は合胞体形成能、横軸は薬剤の最終濃度（μＭ）をそれ
ぞれ示す。ＦＡＳ（−○−）は、１．０μＭまで合胞体
形成を９０％阻止した。Ｈ−７（−△−）、ＫＮ−６２
（−□−）は、３０μＭでそれぞれ約５０％、７５％の
阻止活性を示したが、２．０μＭでは、いずれもその効
果は認められなかった。なお、上記コントロール（薬剤
無添加群）の合胞体数は１７５±２０個であった。ＦＡ
Ｓは、ＨＩＶ−１ウイルス粒子の細胞への感染を明らか
に抑止したものと結論付けられた。したがって、ＦＡＳ
は、ＨＩＶ感染の抑制または予防の効果を示す。

【００４０】ｂ）ＨＩＶ−１ｃｈｒｏｎｉｃ−ｐｈａ
ｓｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎに対する薬剤の作用：（方法）ＭＯＬＴ−４を培養（培養条件：３７℃、５％
ＣＯ₂／９５％空気、１０％ＦＢＳ入りのギブコ社製Ｒ
ＰＭＩ培地）して得た細胞を適当な細胞数（１×１０⁵
ｃｅｌｌｓ／５０μｌ）に調製し、その調製液５０μｌ
に、ＨＩＶ−１（ＬＡＶ−１）調製液５０μｌを添加し
て混合培養し（ＭＯＬＴ−４とＨＩＶ−１感染の条件；
Ｍ．Ｏ．Ｉ．＝１．０）、３日間隔で感染細胞混合液を
新しい培養液と２：５の容量比で培養した。これを１ケ
月以上行って持続感染細胞を作製した。そして、その持
続感染細胞を適当な細胞数（１×１０⁵ｃｅｌｌｓ／５
０μｌ）に調製して、持続感染細胞調製液とした。

【００４１】一方、非感染細胞調製液としては、ＭＯＬ
Ｔ−４を培養（培養条件：３７℃、５％ＣＯ₂／９５％
空気、１０％ＦＢＳ入りのギブコ社製ＲＰＭＩ培地）し
て得た細胞を適当な細胞数（１×１０⁵ｃｅｌｌｓ／５
０μｌ）に調製して得た。

【００４２】上記の持続感染細胞調製液５０μｌを９６
穴マイクロプレートの各ウエルに入れ、その上に上記の
非感染細胞調製液５０μｌとを９６穴マイクロプレート
の各ウエルに添加し、４８時間培養し、形成した合胞体
（シンシチウム）の数を顕微鏡下で数えた。

【００４３】薬剤添加群の試験として、図２に示された
各最終濃度となる各薬剤溶液１００μｌを、持続感染細
胞調製液と非感染細胞調製液との混合時に添加した。ま
た、薬剤無添加群（対照群）として、上記の薬剤添加群
の試験における薬剤溶液１００μｌに替えて薬剤無添加
のブランク溶液を添加した。なお、用いた薬剤や、合胞
体形成能の計算手順は、上記ａ）の場合と同様である。

【００４４】（結果）その結果は、図２に示した。図２
の縦軸は合胞体形成能、横軸は薬剤濃度（μＭ）をそれ
ぞれ示す。図２に示される通りＦＡＳは、極めて高い合
胞体形成抑制作用を示した。ＦＡＳ（−○−）は少なく
とも３．７５μＭでも合胞体形成阻止活性を示した。一
方、Ｈ−７（−△−）、ＫＮ−６２（−□−）では全く
合胞体形成阻止活性が認められなかった。

【００４５】持続感染細胞から非感染細胞へのウイルス
伝播が明らかにＦＡＳによって抑制されたものと認めら
れた。したがって、ＦＡＳはウイルス（特にＨＩＶ）感
染患者において、血中およびリンパ節などの組織でのウ
イルス伝播を抑制することが示された。

【００４６】本発明の予防治療剤は、ウイルスの感染抑
制、および感染細胞と非感染細胞間のウイルス伝播（感
染）抑制のいずれにおいても、低い薬剤濃度で効果が認
められた。したがって、本発明の予防治療剤はＨＩＶ感
染症を始めとしたウイルス感染症の予防治療剤として期
待できる。なお、実施例３、４、５及び６の実験におい
て、本発明の予防治療剤は、何らＭＯＬＴ−４細胞に対
する細胞毒性をうかがわせる所見は得られなかった。

【００４７】実施例４ＨＩＶの増殖抑制作用〔細胞表面でのＥｎｖ（ｇｐ１２０）蛋白質の発現抑制
作用〕（方法）ＭＯＬＴ−４を培養（培養条件：３７℃、５％
ＣＯ₂／９５％空気、１０％ＦＢＳ入りのギブコ社製Ｒ
ＰＭＩ培地）して得た細胞を、適当な細胞数（１×１０
⁵ｃｅｌｌｓ／５０μｌ）に調製した。その調製液５０
μｌと、ＨＩＶ−１（ＬＡＶ−１株）調製液５０μｌ
（ＭＯＬＴ−４とＨＩＶ−１感染の条件；Ｍ．Ｏ．Ｉ．
＝１．０）とを、９６穴マイクロプレートの各ウエルに
入れ、１時間培養し、細胞へ感染させた。

【００４８】この各ウエルに下記の薬剤溶液を１００μ
ｌ量を添加し、５日間培養した。その後、ウエルから溶
液をプラスチックチューブ（エッペンドルフ社製）に移
し、遠心分離後細胞を収集した。取得したこの細胞に、
一次抗体として、マウス抗Ｅｎｖｇｐ１２０モノクロ
ーナル抗体（Ｒｅｐｌｉｇｅｎ社製）を用い、二次抗体
として、ＦＩＴＣ（ＦｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎＩｓｏｔ
ｈｉｏｃｙａｎａｔｅ）標識ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｃａ
ｐｐｅｌ社製）を用いて発色させ、蛍光顕微鏡下で、蛍
光を有する細胞をＥｎｖ陽性細胞として、その細胞数を
蛍光顕微鏡下で測定した。即ち、Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ
ｉｎＨＩＶｒｅｓｅａｒｃｈ，ｅｄｉｔｅｄｂ
ｙＡ．Ａｌｄｏｖｉｎｉ＆Ｂ．Ｄ．Ｗａｌｋｅ
ｒ，Ｓｔｏｋｔｏｎｐｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，
１９９０に従って間接蛍光抗体法で行った。

【００４９】下記の数式によりＥｎｖ陽性細胞百分率を
算出した。Ｅｎｖ陽性細胞（％）＝（ＦＩＴＣ陽性細胞／全細胞
数）×１００薬剤としては、ＦＡＳ、Ｈ−７、ＫＮ−６２を使用し
た。対照として薬剤を入れていない溶媒を用いた。

【００５０】（結果）結果は図３に示した。図３の縦軸
はＥｎｖ陽性細胞％（平均値±標準偏差、３例）、横軸
は薬剤濃度（μＭ）をそれぞれ示す。図３に示される通
り、ＦＡＳ（−○−）では、強いＥｎｖ発現抑制作用が
見られた。一方、ＫＮ−６２（−□−）では弱いＥｎｖ
発現阻止活性が認められたものの、Ｈ−７（−△−）で
は、有意なＥｎｖ発現阻止活性は検出できなかった。

【００５１】Ｅｎｖ蛋白質はＨＩＶ−１を始めレトロウ
イルス粒子の構造蛋白であり、感染ヒトＴ細胞表面およ
びＨＩＶ−１粒子表面などに存在する。従って、Ｅｎｖ
抗原の発現は、ウイルス増殖を示すものであり、ＦＡＳ
はウイルス増殖を抑制することを示している。以上か
ら、本発明の予防治療剤が、ＨＩＶ−１を含むレトロウ
イルスなどのウイルス感染症の予防治療に有用であるこ
とが示された。

【００５２】実施例５ＨＩＶの産生（細胞外への
放出）抑制作用（方法）ＭＯＬＴ−４を培養（培養条件：３７℃、５％
ＣＯ₂／９５％空気、１０％ＦＢＳ入りのギブコ社製Ｒ
ＰＭＩ培地）して得た細胞を適当な細胞数（１×１０⁵
ｃｅｌｌｓ／５０μｌ）に調製し、その調製液５０μｌ
と、ＨＩＶ−１（ＬＡＶ−１株）調製液５０μｌ（ＭＯ
ＬＴ−４とＨＩＶ−１感染の条件；Ｍ．Ｏ．Ｉ．＝４．
０）とを、９６穴マイクロプレートの各ウエルに入れ、
１時間培養し、ウイルスを細胞へ感染させた。

【００５３】この各ウエルに下記の薬剤溶液を１００μ
ｌ量を添加し、５日間培養した。その後、ウエルから培
養溶液をプラスチックチューブ（エッペンドルフ社製）
に移した。遠心分離後、培養上清中のｐ２４ｇａｇ蛋白
質量をアボットキット（ＥＬＩＳＡ；ダイナボット社
製）を用いて測定した。薬剤としては、ＦＡＳ、Ｈ−
７、ＫＮ−６２を使用した。対照として薬剤を入れてい
ない溶媒を用いた。

【００５４】（結果）結果は、図４に示した。図４の縦
軸はｐ２４ｇａｇ蛋白抗原濃度（ｎｇ／ｍｌ）、横軸は
薬剤濃度（μＭ）をそれぞれ示す。図４に示される通り
ＦＡＳ（−○−）添加により、培養上清中のｐ２４ｇａ
ｇ蛋白質が減少し、ＨＩＶ−１産生が抑制されたことが
示された。ＦＡＳのｐ２４ｇａｇ蛋白質減少作用は、Ｈ
−７（−△−）、ＫＮ−６２（−□−）よりも明らかに
強かった。

【００５５】ＨＩＶ−１ウイルス粒子の構築にあたり、
ｐ２４ｇａｇ蛋白質は、ウイルスコアを形成する重要な
蛋白質である。従って、ｐ２４ｇａｇ蛋白質量は、感染
性ウイルス量に比例する。すなわち、ＦＡＳはＨＩＶ−
１産生量、即ちウイルス産生量を抑制することが示され
た。本発明の予防治療剤が、ＨＩＶ−１感染症を含むウ
イルス感染症の予防治療に有用であることが示された。

【００５６】実施例６ＦＡＳと他の抗ＨＩＶ薬の
ＨＩＶ増殖抑制作用の比較（方法）前記の実施例３と同様の合胞体形成能阻止試験
系を用いて行った。薬剤としては、本発明の化合物〔Ｆ
ＡＳおよびＲ¹が水酸基の化合物（特開昭６１−１５２
６５８号公報）〕、ＡＩＤＳ治療薬として使用されてい
るｄｄＩ（シグマ社製）およびＡＺＴ（シグマ社製）、
またデキストラン硫酸（シグマ社製）をそれぞれ使用し
た。

【００５７】（結果）結果は、図５に示した。図５にお
いて縦軸は合胞体形成能を示し、横軸は薬剤濃度（μ
Ｍ）をそれぞれ示す。図５に示される通りデキストラン
硫酸（−△−）、ｄｄＩ（−▲−）、ＡＺＴ（−●
−）、ＦＡＳ（−○−）の５０％合胞体形成阻止濃度
は、各々約６０ｍＭ、１００μＭ、５０μＭ、８００ｎ
Ｍであり、ＨＩＶ−１の合胞体形成能阻止活性におい
て、ＦＡＳは、デキストラン硫酸、ｄｄＩおよびＡＺＴ
に比べて感受性が高かった。また、Ｒ¹が水酸基の化合
物においても、同様にＨＩＶ−１の合胞体形成を阻止し
た。

【００５８】ＨＩＶ−１の合胞体形成はＨＩＶ−１感染
の指標となり、ＨＩＶ−１の感染と増殖はレトロウイル
ス感染症であるＡＩＤＳ発症の指標である。すなわち、
本発明の予防治療剤は、既存の抗ＨＩＶ薬よりも有効な
抗ＨＩＶ感染症薬として期待できる。

【００５９】実施例７本発明の化合物が血液学的
毒性を有さないことが確認された。（方法）ａ）血液凝固時間雌雄ウサギ（日本白色ウサギ、体重２〜３ｋｇ、オリエ
ンタル酵母）を使用した。ウサギの耳静脈より採血し、
３．８％クエン酸ナトリウム１／１０用量を添加して調
整した血液を、３，０００ｒｐｍで２０分間遠心分離し
た。得られた血漿に被検薬剤を添加した後、活性化部分
ｔｈｒｏｍｂｏｐｌａｓｔｉｎ時間（ＡＰＴＴ）とｐｒ
ｏｔｈｒｏｍｂｉｎ時間（ＰＴ）を、Ｃｏａｇｌｏｍｅ
ｔｅｒ〔Ｃｏａｇｔｅｃ（ＣｏａｇｔｅｃＴＥ６０
０，ＥＭＲＡ；ＫＣ−１０Ａ，バクスター社製）〕によ
り測定した。用いた被検薬剤としては、本発明の化合物
〔ＦＡＳおよびＲ¹が水酸基の化合物（特開昭６１−１
５２６５８号公報）〕と、ヘパリン（清水製薬社製）を
それぞれ用いた。

【００６０】ｂ）血小板凝集雌雄ウサギ（日本白色ウサギ、体重２〜３ｋｇ、オリエ
ンタル酵母）を使用した。ウサギの耳静脈より採血し、
３．８％クエン酸ナトリウム１／１０用量を添加して調
整した血液を、１，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し
た。分離された上清を取得して多血小板血漿（ＰＲＰ）
とし、その沈渣をさらに３，０００ｒｐｍで１０分間遠
心分離し、分離された上清を取得して乏血小板血漿（Ｐ
ＰＰ）とした。ＰＲＰ中の血小板数をＰＰＰにて３×１
０⁵プレート／μｌに調整した。

【００６１】ＰＲＰに被検薬剤を添加し、１分後に調製
したＡＤＰ（アデノシン２リン酸；シグマ社製）水溶液
を終濃度５μＭ、あるいはｃｏｌｌａｇｅｎ（シグマ社
製）水溶液を終濃度５μｇ／ｍｌになるように添加し、
惹起される凝集反応をアグリコメーター（ＮＢＳＨＥ
ＭＡＴＲＡＣＥＲＶＩ）にて測定した。生理食塩液添
加時の最大透光度に対する薬剤添加時の最大透光度から
阻害率を求めた。用いた被検薬剤としては、本発明の化
合物〔ＦＡＳおよびＲ¹が水酸基の化合物（特開昭６１
−１５２６５８号公報）〕と、アデノシン（シグマ社
製）を用いた。

【００６２】（結果）ａ）血液凝固時間下記の表３に示される通り、ウサギ血漿において、本発
明の化合物は、ＡＰＴＴ及びＰＴに影響を及ぼさなかっ
た。ヘパリンは、明らかにＡＰＴＴ及びＰＴを延長させ
た。したがって、ＦＡＳは血液凝固時間に影響を持たな
いことが示された。

【００６３】

【表３】

【００６４】ｂ）血小板凝集下記の表４に示される通り、ウサギ血小板において、本
発明の化合物は、ＡＤＰ凝集及びＣｏｌｌａｇｅｎ凝集
に影響を及ぼさなかった。アデノシンは、ＡＤＰ凝集及
びＣｏｌｌａｇｅｎ凝集を抑制した。

【００６５】

【表４】

【００６６】したがって、上記の実施例３、４、５およ
び６で用いられた本発明の化合物の試験管内濃度の３０
μＭ程度では、血液凝固および血小板凝集に関する副作
用がないことが確認された。以上のことから、本発明の
予防治療剤は、安全性の高いことが確認された。

【００６７】実施例８本発明の化合物の急性毒性試験をラットおよびマウスを
用いて実施し、低毒性であることが確認された。その結
果を以下の表５に示す。

【００６８】

【表５】

【００６９】実施例９単純ヘルペスウイルスＩ
型、およびパラインフルエンザウイルスのプラーク形成阻止活性（方法）実験は、参考文献〔ＡｎｔｉｖｉｒａｌＣｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ（１９
９４）５（６），３６６〜３７１；ウイルス実験学各
論、国立予防衛生研究所学友会編、丸善出版、１９８２
年、第６５〜７８頁または第３３１〜３４０頁〕に準じ
た実験手法により実施した。

【００７０】即ち、細胞培養液〔１０％牛胎児血清を添
加したダルベッコ変方ＭＥＭ（日水社製）〕にて培養し
たＶｅｒｏ細胞を、トリプシン（シグマ社製）にて剥離
し、前記と同一組成の細胞培養液に２０万ｃｅｌｌ／ｍ
ｌ浮遊させて調製した細胞浮遊液を、４８穴プレートの
各ウエルに０．５ｍｌ分注した。各ウエルが上記細胞に
てフルシートとなるように、このプレートを３７℃、５
％ＣＯ₂条件下で約一日培養した。培養後、培養上清を
除去した後、ウイルス培養液（ＭＭ；２％牛胎児血清を
添加したダルベッコ変方ＭＥＭ）により、４倍系列で段
階希釈した被検薬剤を含有せしめた各濃度の薬剤溶液５
０μｌを加えた。

【００７１】次いで、ウイルス（パラインフルエンザウ
イルス、或いは、単純ヘルペスウイルスＩ型）をＭＭに
て約５０ｐｆｕ（ｐｌａｑｕｅｆｏｒｍｉｎｇｕｎ
ｉｔ）／５０μｌとなるよう調整したウイルス液５０μ
ｌを、上記各ウエルに加えた。最後に、この各ウエルに
１％メチルセルロースを含有するＭＭ４００μｌずつを
加えて、薬剤添加試験群とした。また、薬剤溶液を添加
する代わりに、薬剤無添加のウイルス培養液を添加する
薬剤無添加コントロール試験群も実施した。

【００７２】以上の試験群を、３７℃、５％ＣＯ₂条件
下で３日間培養し、プラークを形成させ、各ウエルのプ
ラーク数を計測した。なお、本発明の化合物として、Ｆ
ＡＳおよびＲ¹が水酸基の化合物を被検薬剤として用い
た。薬剤溶液における最終薬剤濃度は、１００、２５、
６．３、１．６μｇ／ｍｌとし、各試験群は、２ウエル
の試験を行い、そのプラーク数の平均値を求めた。抗単
純ヘルペスウイルスＩ型効果の結果を表６に、抗パライ
ンフルエンザウイルス効果の結果を表７にそれぞれ示し
た。

【００７３】

【表６】上記の単純ヘルペスウイルスに対する結果は、表６に示
された通りであり、本発明化合物は、用量依存的にＤＮ
Ａウイルスである単純ヘルペスウイルスによるプラーク
数の形成を阻止した。

【００７４】

【表７】

【００７５】上記のパラインフルエンザウイルスに対す
る結果は、表７に示された通りであり、本発明化合物は
用量依存的にＲＮＡウイルスであるパラインフルエンザ
ウイルスによるプラーク数の形成を阻止した。プラーク
数の形成は、ウイルス感染、ウイルス増殖の指標であ
る。本発明化合物がＤＮＡウイルスである単純ヘルペス
ウイルス、また、ＲＮＡウイルスであるパラインフルエ
ンザウイルスの増殖、感染を明らかに抑止したものと結
論づけられた。従って、ＦＡＳなど本発明の化合物は、
ＤＮＡウイルス、ＲＮＡウイルス感染の抑制または予防
の効果を示すことが確認された。

【００７６】

【発明の効果】以上の実験結果から明らかなごとく、有
用なウイルス感染症予防治療剤となることが期待され
る。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の実施例３におけるＨＩＶ−１のａｃｕ
ｔｅ−ｐｈａｓｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎに対する薬剤の
作用（合胞体形成阻止活性の測定結果）を示すものであ
る。

【図２】本発明の実施例３におけるＨＩＶ−１のｃｈｒ
ｏｎｉｃ−ｐｈａｓｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎに対する薬
剤の作用（合胞体形成阻止活性の測定結果）を示すもの
である。

【図３】本発明の実施例４におけるＨＩＶ−１の増殖抑
制作用の測定結果を示すものである。

【図４】本発明の実施例５におけるＨＩＶ−１の産生抑
制の測定結果を示すものである。

【図５】本発明の実施例６におけるＦＡＳと他剤のＨＩ
Ｖ−１増殖抑制作用（合胞体形成阻止活性）比較の結果
を示すものである。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記一般式〔Ｉ〕【化１】（ただし、式中、Ｒ¹は水素原子または水酸基を表す）
で示される化合物またはその酸付加塩を有効成分とする
ウイルス感染症予防治療剤。
【請求項２】ウイルス感染症が、レトロウイルス感染
症である請求項１に記載のウイルス感染症予防治療剤。
【請求項３】レトロウイルス感染症が、ＨＩＶ感染
症、または成人Ｔ細胞白血病である請求項２に記載のウ
イルス感染症予防治療剤。
【請求項４】ウイルス感染症予防治療剤が、注射剤の
形態であることを特徴とする請求項１に記載のウイルス
感染症予防治療剤。
【請求項５】注射剤が、有効成分０．００１〜２０重
量％、好ましくは０．０１〜１０重量％含有するように
調製されていることを特徴とする請求項４に記載のウイ
ルス感染症予防治療剤。
【請求項６】注射剤が、有効成分として体重１ｋｇ当
たり一日投与量０．０１〜２５ｍｇであるように調製さ
れていることを特徴とする請求項４に記載のウイルス感
染症予防治療剤。
【請求項７】注射剤が、有効成分として体重１ｋｇ当
たり一日投与量０．１ｍｇ以上、好ましくは１または２
ｍｇ以上であるように調製されていることを特徴とする
請求項６に記載のウイルス感染症予防治療剤。
【請求項８】ウイルス感染症予防治療剤が、経口投与
用製剤の形態であることを特徴とする請求項１に記載の
ウイルス感染症予防治療剤。
【請求項９】経口投与用製剤が、有効成分を０．０１
〜１００重量％含有するように調製されていることを特
徴とする請求項８に記載のウイルス感染症予防治療剤。
【請求項１０】経口投与用製剤が、有効成分として体
重１ｋｇ当たり一日投与量０．０２〜４０ｍｇであるよ
うに調製されていることを特徴とする請求項８に記載の
ウイルス感染症予防治療剤。
【請求項１１】経口投与用製剤が、有効成分として体
重１ｋｇ当たり一日投与量０．５ｍｇ以上、好ましくは
１または２ｍｇ以上、特に好ましくは４ｍｇ以上である
ように調製されていることを特徴する請求項１０に記載
のウイルス感染症予防治療剤。
【請求項１２】請求項１に記載の一般式〔Ｉ〕で示さ
れる化合物（式中、Ｒ¹は水素原子または水酸基を表
す）またはその酸付加塩を有効成分とする、ウイルスの
感染抑制剤、ウイルス伝播抑制剤、ウイルス増殖抑制
剤、Ｅｎｖ蛋白質発現抑制剤、ウイルス産生抑制剤、ま
たはウイルスの合胞体形成抑制剤のいずれかの抑制剤。
【請求項１３】ウイルスが、レトロウイルスである請
求項１２に記載の抑制剤。
【請求項１４】レトロウイルスが、ＨＩＶである請求
項１３に記載の抑制剤。
【請求項１５】請求項１に記載の一般式〔Ｉ〕で示さ
れる化合物（式中、Ｒ¹は水素原子または水酸基を表
す）またはその酸付加塩の有効量を投与することからな
るウイルス感染症の予防治療のための、ウイルスの感染
抑制のための、ウイルス伝播抑制のための、ウイルス増
殖抑制のための、Ｅｎｖ蛋白質発現抑制のための、ウイ
ルス産生抑制のための、またはウイルスの合胞体形成抑
制のための、いずれかの予防治療法、または抑制方法。
【請求項１６】ウイルスが、レトロウイルスである請
求項１５項に記載の方法。
【請求項１７】レトロウイルスが、ＨＩＶである請求
項１６に記載の方法。