JPH1045788A - 新規複合糖質の製造方法 - Google Patents
新規複合糖質の製造方法Info
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- JPH1045788A JPH1045788A JP8223105A JP22310596A JPH1045788A JP H1045788 A JPH1045788 A JP H1045788A JP 8223105 A JP8223105 A JP 8223105A JP 22310596 A JP22310596 A JP 22310596A JP H1045788 A JPH1045788 A JP H1045788A
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- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 酵素による糖鎖転移反応を利用して新規な構
造の複合型糖鎖を有する複合糖質を製造する方法を提供
する。 【構成】 エンドグリコシダーゼの存在下、下記式（式
１）： Ｘ−ＧｌｃＮＡｃ−β−ＧｌｃＮＡｃ−Ｙ ＋ Ｒ−Ｚ → Ｘ−ＧｌｃＮＡｃ −Ｒ−Ｚ ＋ β−ＧｌｃＮＡｃ−Ｙ （式１） （式中、Ｘは複合型糖鎖、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチル
−Ｄ−グルコサミン、Ｙは糖質、複合糖質、ペプチドあ
るいはタンパク質を示す。Ｒはβ−ＧｌｃＮＡｃ以外の
糖残基で、４位水酸基がエクアトリアルな立体配置をと
るヘキソピラノースあるいはペントピラノースである。
Ｚは糖質、複合糖質あるいはペプチド等を示す。）で表
される反応により複合型糖鎖（Ｘ−ＧｌｃＮＡｃ）をβ
−ＧｌｃＮＡｃ以外の糖残基を有する糖鎖受容体（Ｒ−
Ｚ）に転移付加させて新規複合糖質を製造する方法。 【効果】天然にはない新規な構造の複合型糖鎖を持つ複
合糖質の合成に有用で、安定性、薬理作用等の面で改善
された複合糖質を提供する。
造の複合型糖鎖を有する複合糖質を製造する方法を提供
する。 【構成】 エンドグリコシダーゼの存在下、下記式（式
１）： Ｘ−ＧｌｃＮＡｃ−β−ＧｌｃＮＡｃ−Ｙ ＋ Ｒ−Ｚ → Ｘ−ＧｌｃＮＡｃ −Ｒ−Ｚ ＋ β−ＧｌｃＮＡｃ−Ｙ （式１） （式中、Ｘは複合型糖鎖、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチル
−Ｄ−グルコサミン、Ｙは糖質、複合糖質、ペプチドあ
るいはタンパク質を示す。Ｒはβ−ＧｌｃＮＡｃ以外の
糖残基で、４位水酸基がエクアトリアルな立体配置をと
るヘキソピラノースあるいはペントピラノースである。
Ｚは糖質、複合糖質あるいはペプチド等を示す。）で表
される反応により複合型糖鎖（Ｘ−ＧｌｃＮＡｃ）をβ
−ＧｌｃＮＡｃ以外の糖残基を有する糖鎖受容体（Ｒ−
Ｚ）に転移付加させて新規複合糖質を製造する方法。 【効果】天然にはない新規な構造の複合型糖鎖を持つ複
合糖質の合成に有用で、安定性、薬理作用等の面で改善
された複合糖質を提供する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、酵素の糖鎖転移反
応を利用した新規な複合型糖鎖を持つ複合糖質およびそ
の製造方法に関する。医薬分野に応用される。
応を利用した新規な複合型糖鎖を持つ複合糖質およびそ
の製造方法に関する。医薬分野に応用される。
【０００２】
【従来の技術】糖質および複合糖質は生物の細胞、体液
等に存在し、細胞の基質認識や細胞−細胞間の認識等に
深く関わっている。中でもシアル酸を含む複合型糖鎖を
有する複合糖質は細胞の認識機能に最も深く関わり、ま
た生体内物質の吸収、分解等の代謝の速度に関係してい
る。タンパク質には糖鎖を持つものが知られ、例えばエ
リスロポエチンの場合、糖鎖末端のシアル酸をはずすと
生体内での活性が速やかに消失し、シアロ複合型糖鎖が
生理的に特に重要な役割を果たしている。これらの生理
的機能に着目して、例えば動物細胞等を用いて遺伝子工
学的に作られたエリスロポエチンやティシュープラスミ
ノーゲンアクチベーター等の糖タンパク質が医薬として
利用されている。また、ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン
（ｈＣＧ）等ペプチドホルモンの中にも糖鎖を持つもの
が知られている。一方、タンパク質、生理活性ペプチド
あるいはセラミド等に糖鎖を付けたりあるいは今ある糖
鎖を別の糖鎖に換えることにより、生理機能の強化や生
理活性の改変に役立つことが期待される。
等に存在し、細胞の基質認識や細胞−細胞間の認識等に
深く関わっている。中でもシアル酸を含む複合型糖鎖を
有する複合糖質は細胞の認識機能に最も深く関わり、ま
た生体内物質の吸収、分解等の代謝の速度に関係してい
る。タンパク質には糖鎖を持つものが知られ、例えばエ
リスロポエチンの場合、糖鎖末端のシアル酸をはずすと
生体内での活性が速やかに消失し、シアロ複合型糖鎖が
生理的に特に重要な役割を果たしている。これらの生理
的機能に着目して、例えば動物細胞等を用いて遺伝子工
学的に作られたエリスロポエチンやティシュープラスミ
ノーゲンアクチベーター等の糖タンパク質が医薬として
利用されている。また、ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン
（ｈＣＧ）等ペプチドホルモンの中にも糖鎖を持つもの
が知られている。一方、タンパク質、生理活性ペプチド
あるいはセラミド等に糖鎖を付けたりあるいは今ある糖
鎖を別の糖鎖に換えることにより、生理機能の強化や生
理活性の改変に役立つことが期待される。
【０００３】糖鎖を酵素的に改変する方法としては、
１）転移酵素あるいはエキソグリコシダーゼによる方法
と、２）エンドグリコシダーゼによる方法が考えられ
る。
１）転移酵素あるいはエキソグリコシダーゼによる方法
と、２）エンドグリコシダーゼによる方法が考えられ
る。
【０００４】１）の方法としては、例えばＤ．Ｈ．ジョ
ジアッセ（D. H. Joziasse）ら［ヨーロピアン ジャー
ナル オブ バイオケミストリー（Eur. J. Bioche
m.)、 第１９１巻、第７５〜８３頁（１９９０）］があ
るが、これは糖鎖の非還元末端からの逐次反応である。
また、最近、Ｍ．シャスター（M. Schuster）ら［ジャ
ーナル オブ アメリカン ケミカル ソサエテイ（J.
Amer. Chem. Soc.）、第１１６巻、第１１３５〜１１
３６頁（１９９４）］は数種のグリコシルトランスフェ
ラーゼを組み合わせた糖鎖の固相合成法を報告してい
る。しかしこれらエキソグリコシダーゼまたはグリコシ
ルトランスフェラーゼを用いた糖鎖合成反応は糖残基一
つ一つについてその酵素反応を逐次的に行わねばなら
ず、反応ステップが多く、大変煩雑である。
ジアッセ（D. H. Joziasse）ら［ヨーロピアン ジャー
ナル オブ バイオケミストリー（Eur. J. Bioche
m.)、 第１９１巻、第７５〜８３頁（１９９０）］があ
るが、これは糖鎖の非還元末端からの逐次反応である。
また、最近、Ｍ．シャスター（M. Schuster）ら［ジャ
ーナル オブ アメリカン ケミカル ソサエテイ（J.
Amer. Chem. Soc.）、第１１６巻、第１１３５〜１１
３６頁（１９９４）］は数種のグリコシルトランスフェ
ラーゼを組み合わせた糖鎖の固相合成法を報告してい
る。しかしこれらエキソグリコシダーゼまたはグリコシ
ルトランスフェラーゼを用いた糖鎖合成反応は糖残基一
つ一つについてその酵素反応を逐次的に行わねばなら
ず、反応ステップが多く、大変煩雑である。
【０００５】一方、２）のエンドグリコシダーゼを用い
た糖転移反応としては、Ｒ．Ｂ．トリムブル（R. B. Tr
imble）ら［ジャーナル オブ バイオロジカル ケミ
ストリー（J. Biol. Chem.）、第２６１巻、第１２００
０〜１２００５頁（１９８６）］のフラボバクテリウム
メニンゴセプチカム（Flavobacterium meningoseptic
um）由来のエンド−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダー
ゼ（エンド−Ｆ）に関するもの、Ｒ．Ｍ．バーデールス
（R. M. Bardales）ら［ジャーナル オブ バイオロジ
カル ケミストリー（J. Biol. Chem.）、第２６４巻、
第１９８９３〜１９８９７頁（１９８９）］のディプロ
コッカス ニューモニエ（Diprococcuspneumoniae）由
来のエンド−α−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼに
関するものがあり、前者はグリセロールが受容体に、ま
た後者はグリセロール、ｐ−ニトロフェノール、セリ
ン、スレオニン等が受容体になるという報告である。そ
の後、竹川ら［特開平５−６４５９４号（１９９３）］
がアルスロバクター プロトホルミエ（Arthrobacter p
rotophormiae）由来のエンド−β−Ｎ−アセチルグルコ
サミニダーゼ（エンド−Ａ）による糖質への高マンノー
ス型糖鎖の転移反応を、また、Ｋ．ヤマモト（K. Yamam
oto） ら［バイオケミカル バイオフィジカルリサーチ
コミュニケーション（Biochem. Biophys. Res. Commu
n.）、第２０３巻、第２４４〜２５２頁（１９９４）］
はムコール ヒエマリス（Mucor hiemalis）由来のエン
ド−Ｍによる糖質への糖鎖転移反応を報告した。
た糖転移反応としては、Ｒ．Ｂ．トリムブル（R. B. Tr
imble）ら［ジャーナル オブ バイオロジカル ケミ
ストリー（J. Biol. Chem.）、第２６１巻、第１２００
０〜１２００５頁（１９８６）］のフラボバクテリウム
メニンゴセプチカム（Flavobacterium meningoseptic
um）由来のエンド−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダー
ゼ（エンド−Ｆ）に関するもの、Ｒ．Ｍ．バーデールス
（R. M. Bardales）ら［ジャーナル オブ バイオロジ
カル ケミストリー（J. Biol. Chem.）、第２６４巻、
第１９８９３〜１９８９７頁（１９８９）］のディプロ
コッカス ニューモニエ（Diprococcuspneumoniae）由
来のエンド−α−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼに
関するものがあり、前者はグリセロールが受容体に、ま
た後者はグリセロール、ｐ−ニトロフェノール、セリ
ン、スレオニン等が受容体になるという報告である。そ
の後、竹川ら［特開平５−６４５９４号（１９９３）］
がアルスロバクター プロトホルミエ（Arthrobacter p
rotophormiae）由来のエンド−β−Ｎ−アセチルグルコ
サミニダーゼ（エンド−Ａ）による糖質への高マンノー
ス型糖鎖の転移反応を、また、Ｋ．ヤマモト（K. Yamam
oto） ら［バイオケミカル バイオフィジカルリサーチ
コミュニケーション（Biochem. Biophys. Res. Commu
n.）、第２０３巻、第２４４〜２５２頁（１９９４）］
はムコール ヒエマリス（Mucor hiemalis）由来のエン
ド−Ｍによる糖質への糖鎖転移反応を報告した。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】糖質に糖鎖を新たに付
与したりあるいは他の糖鎖と入れ換えたりする、いわゆ
る糖鎖の改変（リモデリング）により複合糖質の生体内
での安定性や生物活性が天然の複合糖質に比べて増強さ
れたり、天然にない生物機能が付加されれば医薬品に応
用した場合に有用である。また、複合糖質における糖鎖
のもつ生理的機能は今まで糖鎖改変の有効な手段がなか
ったために、十分には解明されていないが、その役割の
解析のための重要な手段を提供する。
与したりあるいは他の糖鎖と入れ換えたりする、いわゆ
る糖鎖の改変（リモデリング）により複合糖質の生体内
での安定性や生物活性が天然の複合糖質に比べて増強さ
れたり、天然にない生物機能が付加されれば医薬品に応
用した場合に有用である。また、複合糖質における糖鎖
のもつ生理的機能は今まで糖鎖改変の有効な手段がなか
ったために、十分には解明されていないが、その役割の
解析のための重要な手段を提供する。
【０００７】エンドグリコシダーゼの糖鎖転移反応によ
る方法は、天然の糖鎖がブロックのまま糖鎖受容体へ転
移付加されて複合糖質が合成される点で新しい方法を提
供するものであった。
る方法は、天然の糖鎖がブロックのまま糖鎖受容体へ転
移付加されて複合糖質が合成される点で新しい方法を提
供するものであった。
【０００８】複合型糖鎖の転移活性を有するエンドグリ
コシダーゼとしてムコール ヒエマリス由来のエンド−
β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（エンド−Ｍ）
は、糖鎖受容体のＡｓｎにβ配置で結合したＮ−アセチ
ル−Ｄ−グルコサミン残基（ＧｌｃＮＡｃ）に糖鎖を転
移することが知られているが、本発明者らは糖鎖受容体
の糖残基がＧｌｃＮＡｃ以外の糖残基の場合にも酵素が
認識して糖鎖転移が起きることを見出し、本発明を考案
した。
コシダーゼとしてムコール ヒエマリス由来のエンド−
β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（エンド−Ｍ）
は、糖鎖受容体のＡｓｎにβ配置で結合したＮ−アセチ
ル−Ｄ−グルコサミン残基（ＧｌｃＮＡｃ）に糖鎖を転
移することが知られているが、本発明者らは糖鎖受容体
の糖残基がＧｌｃＮＡｃ以外の糖残基の場合にも酵素が
認識して糖鎖転移が起きることを見出し、本発明を考案
した。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明は、β−ＧｌｃＮ
Ａｃ以外の糖残基を有する糖鎖受容体にエンドグリコシ
ダーゼを用いて複合型糖鎖を転移付加させることにより
合成される天然にはない配列の複合型糖鎖を有する複合
糖質とその製造方法を提供する。
Ａｃ以外の糖残基を有する糖鎖受容体にエンドグリコシ
ダーゼを用いて複合型糖鎖を転移付加させることにより
合成される天然にはない配列の複合型糖鎖を有する複合
糖質とその製造方法を提供する。
【００１０】
【発明の実施の形態】本発明を概説すれば、本発明は天
然にはない配列の複合型糖鎖を有する複合糖質の製造法
に関する。エンドグリコシダーゼの存在下、下記式（式
１）： Ｘ−ＧｌｃＮＡｃ−β−ＧｌｃＮＡｃ−Ｙ ＋ Ｒ−Ｚ → Ｘ−ＧｌｃＮＡｃ −Ｒ−Ｚ ＋ β−ＧｌｃＮＡｃ−Ｙ （式１） （式中、Ｘは複合型糖鎖、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチル
−Ｄ−グルコサミン、Ｙは糖質、複合糖質、ペプチドあ
るいはタンパク質、Ｒはβ−ＧｌｃＮＡｃ以外の糖残
基、Ｚは糖質、複合糖質あるいはペプチド等）で表され
る転移反応を行うことを特徴とする。
然にはない配列の複合型糖鎖を有する複合糖質の製造法
に関する。エンドグリコシダーゼの存在下、下記式（式
１）： Ｘ−ＧｌｃＮＡｃ−β−ＧｌｃＮＡｃ−Ｙ ＋ Ｒ−Ｚ → Ｘ−ＧｌｃＮＡｃ −Ｒ−Ｚ ＋ β−ＧｌｃＮＡｃ−Ｙ （式１） （式中、Ｘは複合型糖鎖、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチル
−Ｄ−グルコサミン、Ｙは糖質、複合糖質、ペプチドあ
るいはタンパク質、Ｒはβ−ＧｌｃＮＡｃ以外の糖残
基、Ｚは糖質、複合糖質あるいはペプチド等）で表され
る転移反応を行うことを特徴とする。
【００１１】本発明に用いるエンドグリコシダーゼとし
ては、例えばＳ．カドワキ（S. Kadowaki ）ら［アグリ
カルチュラル アンド バイオロジカル ケミストリー
（Agr. Biol. Chem.）、第５４巻、第９７〜１０６頁
（１９９０）］により報告されたムコール ヒエマリス
（Mucor hiemalis）により生産されるエンド−β−Ｎ−
アセチルグルコサミニダーゼ（ＥＣ３．２．１．９
６）、エンド−Ｍがある。
ては、例えばＳ．カドワキ（S. Kadowaki ）ら［アグリ
カルチュラル アンド バイオロジカル ケミストリー
（Agr. Biol. Chem.）、第５４巻、第９７〜１０６頁
（１９９０）］により報告されたムコール ヒエマリス
（Mucor hiemalis）により生産されるエンド−β−Ｎ−
アセチルグルコサミニダーゼ（ＥＣ３．２．１．９
６）、エンド−Ｍがある。
【００１２】該酵素は下記式（式２）： Ｘ−ＧｌｃＮＡｃ−β−ＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−（ペプチド） （式２） （式中Ｘは複合糖鎖を示す）のアスパラギン（Ａｓｎ）
結合型糖鎖のキトビオース（ＧｌｃＮＡｃ−β−Ｇｌｃ
ＮＡｃ）部分のグリコシド結合を加水分解する。
結合型糖鎖のキトビオース（ＧｌｃＮＡｃ−β−Ｇｌｃ
ＮＡｃ）部分のグリコシド結合を加水分解する。
【００１３】（式２）のＸ−ＧｌｃＮＡｃ部分が水の水
酸基（この時、加水分解）でなく、糖鎖受容体の水酸基
に移れば糖鎖の転移反応が成立する。酵素エンド−Ｍは
高マンノース型糖鎖よりもシアル酸のついた複合型糖鎖
をより効率よく転移させることが出来る。
酸基（この時、加水分解）でなく、糖鎖受容体の水酸基
に移れば糖鎖の転移反応が成立する。酵素エンド−Ｍは
高マンノース型糖鎖よりもシアル酸のついた複合型糖鎖
をより効率よく転移させることが出来る。
【００１４】エンドグリコシダーゼによる糖鎖転移反応
の糖鎖受容体の糖部分は、通常、元の糖鎖配列にあった
のと同一構造の糖である。例えば酵素エンド−Ｍによる
複合型糖鎖の転移を例にとると、エンド−Ｍは（式２）
で示される複合型糖鎖のキトビオース（ＧｌｃＮＡｃ−
β−ＧｌｃＮＡｃ）部分に作用して切り取った糖鎖を受
容体のβ−ＧｌｃＮＡｃ部分に転移させる。即ち、（式
１）Ｒがβ−ＧｌｃＮＡｃである。 Ｘ−ＧｌｃＮＡｃ−β−ＧｌｃＮＡｃ−Ｙ ＋ β−ＧｌｃＮＡｃ−Ｚ → Ｘ−ＧｌｃＮＡｃ−β−ＧｌｃＮＡｃ−Ｚ ＋ β−ＧｌｃＮＡｃ−Ｙ （式３ ）
の糖鎖受容体の糖部分は、通常、元の糖鎖配列にあった
のと同一構造の糖である。例えば酵素エンド−Ｍによる
複合型糖鎖の転移を例にとると、エンド−Ｍは（式２）
で示される複合型糖鎖のキトビオース（ＧｌｃＮＡｃ−
β−ＧｌｃＮＡｃ）部分に作用して切り取った糖鎖を受
容体のβ−ＧｌｃＮＡｃ部分に転移させる。即ち、（式
１）Ｒがβ−ＧｌｃＮＡｃである。 Ｘ−ＧｌｃＮＡｃ−β−ＧｌｃＮＡｃ−Ｙ ＋ β−ＧｌｃＮＡｃ−Ｚ → Ｘ−ＧｌｃＮＡｃ−β−ＧｌｃＮＡｃ−Ｚ ＋ β−ＧｌｃＮＡｃ−Ｙ （式３ ）
【００１５】本発明者らは、酵素エンドグリコシダーゼ
による糖鎖転移反応の糖鎖受容体の糖残基の認識の特異
性を調べたところ、β−ＧｌｃＮＡｃ以外の糖残基の場
合にも複合型糖鎖の転移反応が起きることを見出し、本
発明を完成した。
による糖鎖転移反応の糖鎖受容体の糖残基の認識の特異
性を調べたところ、β−ＧｌｃＮＡｃ以外の糖残基の場
合にも複合型糖鎖の転移反応が起きることを見出し、本
発明を完成した。
【００１６】即ち、この方法によればβ−ＧｌｃＮＡｃ
に類縁の糖残基を有する糖鎖受容体を合成して用いるこ
とにより、これに酵素的に糖鎖が転移付加して天然には
ない新しい配列の糖鎖を有する複合糖質を合成すること
が可能となる。
に類縁の糖残基を有する糖鎖受容体を合成して用いるこ
とにより、これに酵素的に糖鎖が転移付加して天然には
ない新しい配列の糖鎖を有する複合糖質を合成すること
が可能となる。
【００１７】β−ＧｌｃＮＡｃに代わる糖残基として
は、例えばα−ＧｌｃＮＡｃ（ＧｌｃＮＡｃのαアノマ
ー）、α及びβ−Ｄ−グルコース（Ｇｌｃ）、Ｄ−マン
ノース（Ｍａｎ）であり、キトビオース（ＧｌｃＮＡ
ｃ）2 や１−Ｓ−置換−Ｄ−グルコースあるいはＤ−キ
シロース（Ｘｙｌ）等も用いられる。これらはいずれも
β−ＧｌｃＮＡｃと同じ４位の水酸基がエクアトリアル
な立体配置をとるヘキソピラノースあるいはペントピラ
ノースである。
は、例えばα−ＧｌｃＮＡｃ（ＧｌｃＮＡｃのαアノマ
ー）、α及びβ−Ｄ−グルコース（Ｇｌｃ）、Ｄ−マン
ノース（Ｍａｎ）であり、キトビオース（ＧｌｃＮＡ
ｃ）2 や１−Ｓ−置換−Ｄ−グルコースあるいはＤ−キ
シロース（Ｘｙｌ）等も用いられる。これらはいずれも
β−ＧｌｃＮＡｃと同じ４位の水酸基がエクアトリアル
な立体配置をとるヘキソピラノースあるいはペントピラ
ノースである。
【００１８】糖鎖受容体として糖の１位のパラ−ニトロ
フェニル（ＰＮＰ）誘導体を用いて酵素エンド−Ｍによ
る複合型糖鎖の転移反応における糖の認識の特異性を調
べた結果を表１に、またその構造を図１（化１）に示
す。これら複合型糖鎖の受容体となる糖残基の構造はい
ずれも４位水酸基の立体配置がβ−ＧｌｃＮＡｃと同じ
エクアトリアルなヘキソピラノースあるいはペントピラ
ノースであり、この構造を有する糖に複合型糖鎖が転移
する。 表１。各種糖−ＰＮＰ誘導体への糖鎖転移反応収率 ──────────────────────────────────── Ｎｏ． 糖鎖受容体 相対転移反応収率（％） ──────────────────────────────────── １ ＰＮＰ−β−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃ １００ ２ ＰＮＰ−α−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃ ８６ ３ ＰＮＰ−β−Ｄ−キトビオース ３５ ４ ＰＮＰ−β−Ｄ−グルコース １１２ ５ ＰＮＰ−α−Ｄ−グルコース ６０ ６ ＰＮＰ−１ーＳ−β−Ｄ−グルコース ９３ ７ ＰＮＰ−β−Ｄ−マンノース ９６ ８ ＰＮＰ−β−Ｄ−キシロピラノース １５ ──────────────────────────────────── 糖鎖転移反応収率は、ＰＮＰ−β−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃを
糖鎖受容体とした時の反応収率を１００として、これに
対する相対値（％）で表示した。
フェニル（ＰＮＰ）誘導体を用いて酵素エンド−Ｍによ
る複合型糖鎖の転移反応における糖の認識の特異性を調
べた結果を表１に、またその構造を図１（化１）に示
す。これら複合型糖鎖の受容体となる糖残基の構造はい
ずれも４位水酸基の立体配置がβ−ＧｌｃＮＡｃと同じ
エクアトリアルなヘキソピラノースあるいはペントピラ
ノースであり、この構造を有する糖に複合型糖鎖が転移
する。 表１。各種糖−ＰＮＰ誘導体への糖鎖転移反応収率 ──────────────────────────────────── Ｎｏ． 糖鎖受容体 相対転移反応収率（％） ──────────────────────────────────── １ ＰＮＰ−β−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃ １００ ２ ＰＮＰ−α−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃ ８６ ３ ＰＮＰ−β−Ｄ−キトビオース ３５ ４ ＰＮＰ−β−Ｄ−グルコース １１２ ５ ＰＮＰ−α−Ｄ−グルコース ６０ ６ ＰＮＰ−１ーＳ−β−Ｄ−グルコース ９３ ７ ＰＮＰ−β−Ｄ−マンノース ９６ ８ ＰＮＰ−β−Ｄ−キシロピラノース １５ ──────────────────────────────────── 糖鎖転移反応収率は、ＰＮＰ−β−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃを
糖鎖受容体とした時の反応収率を１００として、これに
対する相対値（％）で表示した。
【化１】 （式中、ＰＮＰはパラ−ニトロフェニル基を示し、化合
物１〜８は表１に示した糖鎖受容体に対応する）。
物１〜８は表１に示した糖鎖受容体に対応する）。
【００１９】糖鎖受容体となるのはβ−ＧｌｃＮＡｃ以
外の糖残基を有する糖質あるいは複合糖質であり、糖残
基は４位水酸基の立体配置がエクアトリアルな構造をと
るヘキソピラノースあるいはペントピラノース誘導体で
ある。また、糖の１位水酸基はβでなくα−アノマーで
もよい。例えば、Ｄ−グルコース（Ｇｌｃ）残基を有す
る糖ペプチド誘導体等が用いられる。これらは化学合成
して用いられる。
外の糖残基を有する糖質あるいは複合糖質であり、糖残
基は４位水酸基の立体配置がエクアトリアルな構造をと
るヘキソピラノースあるいはペントピラノース誘導体で
ある。また、糖の１位水酸基はβでなくα−アノマーで
もよい。例えば、Ｄ−グルコース（Ｇｌｃ）残基を有す
る糖ペプチド誘導体等が用いられる。これらは化学合成
して用いられる。
【００２０】例えば、糖−Ａｓｎ残基を有するペプチド
（糖−Ａｓｎ−ペプチド）およびその誘導体は、例えば
Ｔ．イナヅ（T. Inazu）ら［シンレット、第８６９〜８
７０頁（１９９３）］に述べた方法に準じて合成された
糖−Ａｓｎ誘導体を用い、同じくＴ．イナヅ（T. Inaz
u）ら［ペプチド ケミストリー １９９３（PeptideCh
emistry １９９３）、第１０１〜１０４頁（１９９
４）］の方法により固相合成法を用いて合成される。誘
導体はＮ末端アミノ酸のαアミノ基が無保護あるいは９
−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）誘
導体［ＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−（ペプチド）−Ｆｍｏ
ｃ］あるいは第３ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）誘
導体［ＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−（ペプチド）−ＢＯＣ］
等である。保護基を付けたまま（この時は転移反応後に
常法により保護基を外す）、あるいは遊離型で糖鎖受容
体として反応に供する。
（糖−Ａｓｎ−ペプチド）およびその誘導体は、例えば
Ｔ．イナヅ（T. Inazu）ら［シンレット、第８６９〜８
７０頁（１９９３）］に述べた方法に準じて合成された
糖−Ａｓｎ誘導体を用い、同じくＴ．イナヅ（T. Inaz
u）ら［ペプチド ケミストリー １９９３（PeptideCh
emistry １９９３）、第１０１〜１０４頁（１９９
４）］の方法により固相合成法を用いて合成される。誘
導体はＮ末端アミノ酸のαアミノ基が無保護あるいは９
−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）誘
導体［ＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−（ペプチド）−Ｆｍｏ
ｃ］あるいは第３ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）誘
導体［ＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−（ペプチド）−ＢＯＣ］
等である。保護基を付けたまま（この時は転移反応後に
常法により保護基を外す）、あるいは遊離型で糖鎖受容
体として反応に供する。
【００２１】本発明の転移反応において、糖鎖供与体と
してはシアル酸を含有するシアロ複合型糖鎖あるいはシ
アル酸のないアシアロ複合型糖鎖を有する複合糖質が用
いられる。例えば、ヒトトランスフェリンや牛フェツイ
ン等のシアロ複合糖質であり、そのまま用いてもよい
が、プロナーゼ等のタンパク質加水分解酵素によりタン
パク質部分をアスパラギン（Ａｓｎ）残基のみにまで小
さくした複合型糖質がより適している。
してはシアル酸を含有するシアロ複合型糖鎖あるいはシ
アル酸のないアシアロ複合型糖鎖を有する複合糖質が用
いられる。例えば、ヒトトランスフェリンや牛フェツイ
ン等のシアロ複合糖質であり、そのまま用いてもよい
が、プロナーゼ等のタンパク質加水分解酵素によりタン
パク質部分をアスパラギン（Ａｓｎ）残基のみにまで小
さくした複合型糖質がより適している。
【００２２】このようにして天然の複合型糖鎖が受容体
の糖残基に転移して生じた糖鎖は、天然にはなかった全
く新しい配列の糖鎖となる。例えば、（化２）に示した
ようにＧｌｃ残基を有する糖質に２本鎖シアロ複合型糖
鎖を転移させると、生じた糖鎖は新しい配列の複合型糖
鎖になる。即ち、トランスフェリン由来のシアロ２本鎖
複合型糖鎖は（ＮｅｕＡｃ−Ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃ−Ｍ
ａｎ）2−Ｍａｎ−ＧｌｃＮＡｃ−ＧｌｃＮＡｃ−の構
造であるが、転移生成した糖鎖は（ＮｅｕＡｃ−Ｇａｌ
−ＧｌｃＮＡｃ−Ｍａｎ）2−Ｍａｎ−ＧｌｃＮＡｃ−
Ｇｌｃ−と、エンドグリコシダーゼにより認識され加水
分解されるＧｌｃＮＡｃ−ＧｌｃＮＡｃ部分がＧｌｃＮ
Ａｃ−Ｇｌｃに変わった全く新しい配列の糖鎖である。
の糖残基に転移して生じた糖鎖は、天然にはなかった全
く新しい配列の糖鎖となる。例えば、（化２）に示した
ようにＧｌｃ残基を有する糖質に２本鎖シアロ複合型糖
鎖を転移させると、生じた糖鎖は新しい配列の複合型糖
鎖になる。即ち、トランスフェリン由来のシアロ２本鎖
複合型糖鎖は（ＮｅｕＡｃ−Ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃ−Ｍ
ａｎ）2−Ｍａｎ−ＧｌｃＮＡｃ−ＧｌｃＮＡｃ−の構
造であるが、転移生成した糖鎖は（ＮｅｕＡｃ−Ｇａｌ
−ＧｌｃＮＡｃ−Ｍａｎ）2−Ｍａｎ−ＧｌｃＮＡｃ−
Ｇｌｃ−と、エンドグリコシダーゼにより認識され加水
分解されるＧｌｃＮＡｃ−ＧｌｃＮＡｃ部分がＧｌｃＮ
Ａｃ−Ｇｌｃに変わった全く新しい配列の糖鎖である。
【００２３】例えばヒトトランスフェリン由来シアロ複
合型糖鎖のＤ−グルコース残基を有するＡｓｎ誘導体
（Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ−Ｇｌｃ）への転移反応の例（化
２）を示す。ここで、ＮｅｕＡｃはシアル酸を、Ｇａｌ
はＤ−ガラクトースを、ＭａｎはＤ−マンノースを、ま
たＦｍｏｃはアミノ酸（Ａｓｎ）のＮ末端の保護基９−
フルオレニルメチルオキシカルボニル基を示す。点線で
囲った部分は、天然の元の形の糖鎖（上）及び形成され
たＧｌｃＮＡｃ−Ｇｌｃを含む新しい配列の糖鎖（下）
を示す。
合型糖鎖のＤ−グルコース残基を有するＡｓｎ誘導体
（Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ−Ｇｌｃ）への転移反応の例（化
２）を示す。ここで、ＮｅｕＡｃはシアル酸を、Ｇａｌ
はＤ−ガラクトースを、ＭａｎはＤ−マンノースを、ま
たＦｍｏｃはアミノ酸（Ａｓｎ）のＮ末端の保護基９−
フルオレニルメチルオキシカルボニル基を示す。点線で
囲った部分は、天然の元の形の糖鎖（上）及び形成され
たＧｌｃＮＡｃ−Ｇｌｃを含む新しい配列の糖鎖（下）
を示す。
【化２】
【００２４】用いるエンドグリコシダーゼとしては、エ
ンド−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（ＥＣ３．
２．１．９６）であり、複合型糖鎖の転移活性を有する
ものが使われる。例えば、エンド−Ｍ等が用いられる。
ンド−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（ＥＣ３．
２．１．９６）であり、複合型糖鎖の転移活性を有する
ものが使われる。例えば、エンド−Ｍ等が用いられる。
【００２５】本発明の糖鎖転移反応は、基質の糖鎖供与
体である複合型糖質、糖鎖受容体および酵素のエンドグ
リコシダーゼを緩衝溶液中で混合することにより行われ
る。この時、基質である糖鎖供与体と糖鎖受容体の仕込
濃度を共に高濃度にすることにより反応が高収率で進行
する。また酵素の添加量を制限して反応を行うことによ
り高い収率が得られる。
体である複合型糖質、糖鎖受容体および酵素のエンドグ
リコシダーゼを緩衝溶液中で混合することにより行われ
る。この時、基質である糖鎖供与体と糖鎖受容体の仕込
濃度を共に高濃度にすることにより反応が高収率で進行
する。また酵素の添加量を制限して反応を行うことによ
り高い収率が得られる。
【００２６】緩衝液としては、ｐＨ５〜８程度の適当な
緩衝液が用いられる。エンド−Ｍの場合、通常ｐＨ５．
５〜６．５の酢酸あるいはリン酸緩衝液中で反応が行わ
れる。反応温度は通常、室温〜５０℃程度、好ましくは
３０〜４０℃で行われ、反応時間は１〜２４時間程度で
ある。エンド−Ｍ酵素の場合、通常、温度３７℃で３〜
１８時間程度反応が行われる。
緩衝液が用いられる。エンド−Ｍの場合、通常ｐＨ５．
５〜６．５の酢酸あるいはリン酸緩衝液中で反応が行わ
れる。反応温度は通常、室温〜５０℃程度、好ましくは
３０〜４０℃で行われ、反応時間は１〜２４時間程度で
ある。エンド−Ｍ酵素の場合、通常、温度３７℃で３〜
１８時間程度反応が行われる。
【００２７】生成した新規な複合型糖質は公知の手段に
従って反応終了液から容易に分離精製することが出来
る。例えば、ゲルろ過カラムクロマトグラフィー、イオ
ン交換樹脂カラムクロマトグラフィー、レクチンカラム
クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（Ｈ
ＰＬＣ）等により反応終了液から反応生成物新規複合型
糖質を分離し、更に濃縮、脱塩、凍結乾燥等を行えばよ
い。
従って反応終了液から容易に分離精製することが出来
る。例えば、ゲルろ過カラムクロマトグラフィー、イオ
ン交換樹脂カラムクロマトグラフィー、レクチンカラム
クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（Ｈ
ＰＬＣ）等により反応終了液から反応生成物新規複合型
糖質を分離し、更に濃縮、脱塩、凍結乾燥等を行えばよ
い。
【００２８】
【実施例】以下に実施例をあげて本発明を更に具体的に
説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。
説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。
【００２９】
【実施例１】複合型糖鎖のパラ−ニトロフェニル（ＰＮ
Ｐ）グリコシドへの転移反応：糖鎖供与体として、ヒト
トランスフェリン（生化学工業）をプロナーゼ処理とセ
ファデックスＧ−２５ゲルろ過を繰り返して得たＡｓｎ
残基のみを有する２本鎖複合型糖鎖からなるシアロ糖ペ
プチド（以下ＴＦ−ＳＧＰと略する、分子量２３３８）
を調製した。ＴＦ−ＳＧＰをノイラミニダーゼ処理して
シアル酸のないアシアロ糖ペプチド（以下ＴＦ−ＡＳＧ
Ｐと略する）を調製した。糖鎖受容体は各種の糖の１位
のＰＮＰ誘導体（ＰＮＰ−糖）（生化学工業、シグマ
社）を用いた。ＴＦ−ＳＧＰ １μｍｏｌとＰＮＰ−糖
５００ｎｍｏｌを０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．２
５）２４μｌに溶解し、エンド−Ｍ １６０μＵを含む
酵素溶液１６μｌを加え、３７℃で３時間反応した。加
熱処理により反応を停止後反応液を蒸留水で１ｍｌに希
釈して、反応生成物をＨＰＬＣで分析した。各種ＰＮＰ
−糖へのシアロ複合型糖鎖の転移反応収率を、ＰＮＰ−
β−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃを糖鎖受容体とした時の転移反応
収率（１２．２％）を１００（％）として、その相対値
で先の表１に示した。これら糖鎖転移反応生成物をＨＰ
ＬＣにより単離し、質量分析の結果、ＰＮＰ−糖へのシ
アロ複合型糖鎖の転移生成物であることを確認した。Ｔ
Ｆ−ＡＳＧＰを糖鎖供与体として同様に反応した時、Ｐ
ＮＰ−β−ＧｌｃＮＡｃ、ＰＮＰ−β−グルコースへの
相対反応収率は各８１％及び８４％であった。
Ｐ）グリコシドへの転移反応：糖鎖供与体として、ヒト
トランスフェリン（生化学工業）をプロナーゼ処理とセ
ファデックスＧ−２５ゲルろ過を繰り返して得たＡｓｎ
残基のみを有する２本鎖複合型糖鎖からなるシアロ糖ペ
プチド（以下ＴＦ−ＳＧＰと略する、分子量２３３８）
を調製した。ＴＦ−ＳＧＰをノイラミニダーゼ処理して
シアル酸のないアシアロ糖ペプチド（以下ＴＦ−ＡＳＧ
Ｐと略する）を調製した。糖鎖受容体は各種の糖の１位
のＰＮＰ誘導体（ＰＮＰ−糖）（生化学工業、シグマ
社）を用いた。ＴＦ−ＳＧＰ １μｍｏｌとＰＮＰ−糖
５００ｎｍｏｌを０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．２
５）２４μｌに溶解し、エンド−Ｍ １６０μＵを含む
酵素溶液１６μｌを加え、３７℃で３時間反応した。加
熱処理により反応を停止後反応液を蒸留水で１ｍｌに希
釈して、反応生成物をＨＰＬＣで分析した。各種ＰＮＰ
−糖へのシアロ複合型糖鎖の転移反応収率を、ＰＮＰ−
β−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃを糖鎖受容体とした時の転移反応
収率（１２．２％）を１００（％）として、その相対値
で先の表１に示した。これら糖鎖転移反応生成物をＨＰ
ＬＣにより単離し、質量分析の結果、ＰＮＰ−糖へのシ
アロ複合型糖鎖の転移生成物であることを確認した。Ｔ
Ｆ−ＡＳＧＰを糖鎖供与体として同様に反応した時、Ｐ
ＮＰ−β−ＧｌｃＮＡｃ、ＰＮＰ−β−グルコースへの
相対反応収率は各８１％及び８４％であった。
【００３０】
【実施例２】ヒトトランスフェリン由来シアロ糖鎖のＦ
ｍｏｃ−Ａｓｎ−Ｇｌｃへの糖鎖転移反応： 糖鎖受容
体にはＮ末をＦｍｏｃ（９−フルオレニルメチルオキシ
カルボニル）で保護したＡｓｎにβ−Ｄ−グルコースを
結合させたＦｍｏｃ−Ａｓｎ−Ｇｌｃ（分子量５１７）
を用いた。この合成はＴ・イナヅらの先の文献記載のＦ
ｍｏｃ−Ａｓｎ−ＧｌｃＮＡｃの合成法に準じて行っ
た。ＴＦ−ＳＧＰ １μｍｏｌ（２．２４ｍｇ）とＦｍ
ｏｃ−Ａｓｎ−Ｇｌｃ ５００ｎｍｏｌ（０．２５８ｍ
ｇ）を０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．２５）２４μｌ
に溶解し、エンド−Ｍ １６０μＵを含む酵素溶液１６
μｌを加え、３７℃で６時間反応した。加熱処理により
反応を停止後反応液を蒸留水で１ｍｌに希釈して、反応
生成物をＨＰＬＣで分析した。転移反応生成物が１５．
８％（対仕込糖鎖受容体、モル比）の収率で得られた。
反応生成物をＨＰＬＣ分取により単離し、質量分析の結
果、ｍ／ｚ［Ｍ−Ｈ］２５１８にシグナルが観測され、
トランスフェリン由来のシアル酸が２個ついた（ジシア
ロ）２本鎖複合型糖鎖がＦｍｏｃ−Ａｓｎ−Ｇｌｃに転
移した化合物（分子量２５１９）であることが確認され
た。これをシアリダーゼで処理するとアシアロ体の化合
物（分子量１９３７）が得られシアル酸の存在が確認さ
れた。
ｍｏｃ−Ａｓｎ−Ｇｌｃへの糖鎖転移反応： 糖鎖受容
体にはＮ末をＦｍｏｃ（９−フルオレニルメチルオキシ
カルボニル）で保護したＡｓｎにβ−Ｄ−グルコースを
結合させたＦｍｏｃ−Ａｓｎ−Ｇｌｃ（分子量５１７）
を用いた。この合成はＴ・イナヅらの先の文献記載のＦ
ｍｏｃ−Ａｓｎ−ＧｌｃＮＡｃの合成法に準じて行っ
た。ＴＦ−ＳＧＰ １μｍｏｌ（２．２４ｍｇ）とＦｍ
ｏｃ−Ａｓｎ−Ｇｌｃ ５００ｎｍｏｌ（０．２５８ｍ
ｇ）を０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．２５）２４μｌ
に溶解し、エンド−Ｍ １６０μＵを含む酵素溶液１６
μｌを加え、３７℃で６時間反応した。加熱処理により
反応を停止後反応液を蒸留水で１ｍｌに希釈して、反応
生成物をＨＰＬＣで分析した。転移反応生成物が１５．
８％（対仕込糖鎖受容体、モル比）の収率で得られた。
反応生成物をＨＰＬＣ分取により単離し、質量分析の結
果、ｍ／ｚ［Ｍ−Ｈ］２５１８にシグナルが観測され、
トランスフェリン由来のシアル酸が２個ついた（ジシア
ロ）２本鎖複合型糖鎖がＦｍｏｃ−Ａｓｎ−Ｇｌｃに転
移した化合物（分子量２５１９）であることが確認され
た。これをシアリダーゼで処理するとアシアロ体の化合
物（分子量１９３７）が得られシアル酸の存在が確認さ
れた。
【００３１】
【実施例３】ヒトトランスフェリン由来シアロ糖鎖のＧ
ｌｃ残基を有するペプチドへの糖鎖転移反応：糖鎖受容
体にはＡｓｎとアラニン（Ａｌａ）からなるペプチドの
Ａｓｎ残基にβ−Ｄ−グルコースを結合させたＦｍｏｃ
−Ａｓｎ（Ｇｌｃ）−Ａｌａ（分子量５８８）を、Ｔ．
イナヅらの文献記載の方法に準じてＡｌａとＦｍｏｃ−
Ａｓｎ（Ｇｌｃ）とから合成した。ＴＦ−ＳＧＰ １μ
ｍｏｌ（２．２４ｍｇ）とＦｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｇｌｃ）
−Ａｌａ ５００ｎｍｏｌ（０．２９４ｍｇ）を０．１
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．２５）２４μｌに溶解し、エ
ンド−Ｍ １６０μＵを含む酵素溶液１６μｌを加え、
３７℃で６時間反応した。加熱処理により反応を停止後
反応液を蒸留水で１ｍｌに希釈して、反応生成物をＨＰ
ＬＣで分析した。転移反応生成物が１６．３％（対仕込
糖鎖受容体、モル比）の収率で得られた。反応生成物を
ＨＰＬＣ分取により単離し、質量分析の結果、ｍ／ｚ
［Ｍ−Ｈ］２５９０にシグナルが観測され、トランスフ
ェリン由来のシアル酸が２個ついた（ジシアロ）２本鎖
複合型糖鎖がＦｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｇｌｃ）−Ａｌａに転
移した化合物（分子量２５９０）であることが確認され
た。
ｌｃ残基を有するペプチドへの糖鎖転移反応：糖鎖受容
体にはＡｓｎとアラニン（Ａｌａ）からなるペプチドの
Ａｓｎ残基にβ−Ｄ−グルコースを結合させたＦｍｏｃ
−Ａｓｎ（Ｇｌｃ）−Ａｌａ（分子量５８８）を、Ｔ．
イナヅらの文献記載の方法に準じてＡｌａとＦｍｏｃ−
Ａｓｎ（Ｇｌｃ）とから合成した。ＴＦ−ＳＧＰ １μ
ｍｏｌ（２．２４ｍｇ）とＦｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｇｌｃ）
−Ａｌａ ５００ｎｍｏｌ（０．２９４ｍｇ）を０．１
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．２５）２４μｌに溶解し、エ
ンド−Ｍ １６０μＵを含む酵素溶液１６μｌを加え、
３７℃で６時間反応した。加熱処理により反応を停止後
反応液を蒸留水で１ｍｌに希釈して、反応生成物をＨＰ
ＬＣで分析した。転移反応生成物が１６．３％（対仕込
糖鎖受容体、モル比）の収率で得られた。反応生成物を
ＨＰＬＣ分取により単離し、質量分析の結果、ｍ／ｚ
［Ｍ−Ｈ］２５９０にシグナルが観測され、トランスフ
ェリン由来のシアル酸が２個ついた（ジシアロ）２本鎖
複合型糖鎖がＦｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｇｌｃ）−Ａｌａに転
移した化合物（分子量２５９０）であることが確認され
た。
【００３２】
【発明の効果】本発明により、複合型糖鎖をβ−Ｇｌｃ
ＮＡｃ以外の糖残基を有する他の糖質、複合糖質あるい
はペプチド等（糖鎖受容体）に転移させて新規な配列の
複合型糖鎖を有する複合糖質を容易に合成することが可
能となった。例えば、糖鎖受容体としてβ−ＧｌｃＮＡ
ｃ以外の糖残基を持つ生理活性ペプチドを合成して糖鎖
を転移付加させることにより、天然には無かった新規な
糖鎖配列の複合糖ペプチドを合成出来る。このような糖
鎖は生体内の糖鎖分解酵素に対して安定化することが期
待され、本発明は、医薬への応用に有効である。また、
天然にはない複合型糖鎖の調製法としても有用である。
ＮＡｃ以外の糖残基を有する他の糖質、複合糖質あるい
はペプチド等（糖鎖受容体）に転移させて新規な配列の
複合型糖鎖を有する複合糖質を容易に合成することが可
能となった。例えば、糖鎖受容体としてβ−ＧｌｃＮＡ
ｃ以外の糖残基を持つ生理活性ペプチドを合成して糖鎖
を転移付加させることにより、天然には無かった新規な
糖鎖配列の複合糖ペプチドを合成出来る。このような糖
鎖は生体内の糖鎖分解酵素に対して安定化することが期
待され、本発明は、医薬への応用に有効である。また、
天然にはない複合型糖鎖の調製法としても有用である。
【００３３】
【化１】酵素エンドグリコシダーゼによる糖鎖転移の受
容体となる４位水酸基がエクアトリアルな立体配置をと
るヘキソピラノースあるいはペントピラノースの１位パ
ラ−ニトロフェニル（ＰＮＰ）誘導体の構造を示す。１
はＰＮＰ−β−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃ、２はＰＮＰ−α−Ｄ
−ＧｌｃＮＡｃ、３はＰＮＰ−β−Ｄ−キトビオース、
４はＰＮＰ−β−Ｄ−グルコース、５はＰＮＰ−α−Ｄ
−グルコース、６はＰＮＰ−１ーＳ−β−Ｄ−グルコー
ス、７はＰＮＰ−β−Ｄ−マンノースまた８はＰＮＰ−
β−Ｄ−キシロピラノースを示す。
容体となる４位水酸基がエクアトリアルな立体配置をと
るヘキソピラノースあるいはペントピラノースの１位パ
ラ−ニトロフェニル（ＰＮＰ）誘導体の構造を示す。１
はＰＮＰ−β−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃ、２はＰＮＰ−α−Ｄ
−ＧｌｃＮＡｃ、３はＰＮＰ−β−Ｄ−キトビオース、
４はＰＮＰ−β−Ｄ−グルコース、５はＰＮＰ−α−Ｄ
−グルコース、６はＰＮＰ−１ーＳ−β−Ｄ−グルコー
ス、７はＰＮＰ−β−Ｄ−マンノースまた８はＰＮＰ−
β−Ｄ−キシロピラノースを示す。
【化２】Ｎ末をＦｍｏｃで保護したアスパラギン（Ａｓ
ｎ）残基に結合したＤ−グルコース（Ｇｌｃ）を有する
糖質（Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ−Ｇｌｃ）への酵素エンド−Ｍ
によるシアロ複合型糖鎖の転移反応の反応式を示す。点
線で囲った部分が元の天然複合型糖鎖（上）および新た
に形成された非天然の複合型糖鎖（下）である。
ｎ）残基に結合したＤ−グルコース（Ｇｌｃ）を有する
糖質（Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ−Ｇｌｃ）への酵素エンド−Ｍ
によるシアロ複合型糖鎖の転移反応の反応式を示す。点
線で囲った部分が元の天然複合型糖鎖（上）および新た
に形成された非天然の複合型糖鎖（下）である。
【手続補正書】
【提出日】平成８年９月１２日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】削除
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ａ６１Ｋ 31/715 Ａ６１Ｋ 37/20
Claims (5)
- 【請求項１】エンドグリコシダーゼの存在下、β−Ｎ−
アセチル−Ｄ−グルコサミン（β−ＧｌｃＮＡｃ）以外
の糖残基を有する糖質あるいは複合糖質（糖鎖受容体）
に複合型糖鎖を転移させることにより複合糖質を製造す
る方法。 - 【請求項２】請求項１の糖鎖受容体の糖残基が、４位水
酸基がエクアトリアルな立体配置をとるヘキソピラノー
スあるいはペントピラノースである請求項１に記載の方
法。 - 【請求項３】請求項２の糖鎖受容体の糖残基がα−Ｎ−
アセチル−Ｄ−グルコサミン（α−ＧｌｃＮＡｃ）、Ｄ
−グルコース（Ｇｌｃ）、Ｄ−マンノース（Ｍａｎ）あ
るいはＤ−キシロピラノース（Ｘｙｌ）である請求項１
に記載の方法。 - 【請求項４】エンドグリコシダーゼがエンド−β−Ｎ−
アセチルグルコサミニダーゼ（ＥＣ３．２．１．９６）
である請求項１に記載の方法。 - 【請求項５】エンドグリコシダーゼの存在下、β−Ｇｌ
ｃＮＡｃ以外の糖残基を有する糖質あるいは複合糖質
（糖鎖受容体）に複合型糖鎖を転移させることにより製
造される新規複合糖質。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22310596A JP3811527B2 (ja) | 1996-08-05 | 1996-08-05 | 新規複合糖質の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22310596A JP3811527B2 (ja) | 1996-08-05 | 1996-08-05 | 新規複合糖質の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1045788A true JPH1045788A (ja) | 1998-02-17 |
| JP3811527B2 JP3811527B2 (ja) | 2006-08-23 |
Family
ID=16792912
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22310596A Expired - Fee Related JP3811527B2 (ja) | 1996-08-05 | 1996-08-05 | 新規複合糖質の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3811527B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106905472A (zh) * | 2017-04-18 | 2017-06-30 | 北京蛋白质组研究中心 | 一种功能化温度敏感型聚合物及其制备方法与应用 |
-
1996
- 1996-08-05 JP JP22310596A patent/JP3811527B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106905472A (zh) * | 2017-04-18 | 2017-06-30 | 北京蛋白质组研究中心 | 一种功能化温度敏感型聚合物及其制备方法与应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3811527B2 (ja) | 2006-08-23 |
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