JPH104954A - タバコ根圏定着性シュードモナス属微生物ならびにそれを用いたタバコの土壌病害防除剤および防除方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 タバコ根部への定着性が高い微生物を提供
し、該微生物を安定的に植物根へ定着させ、タバコの土
壌病害を防除する方法を提供する。 【解決手段】 シュードモナス属に属し、ニコチン分解
能を有し、タバコ根部への定着性が高い新規細菌。およ
びニコチン分解能を有し、タバコ根部への定着性が高い
微生物をタバコの根部、栽培地、またはその土壌に存在
させることでタバコの土壌病害の発生を防止する方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、タバコ根に定着性
が優れたニコチン分解性のシュードモナス属細菌に関す
るものである。本発明はさらに、本細菌をタバコ根に導
入あるいは根部で選択的に増殖させて定着させ、タバコ
立枯病を防除する方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】植物病原細菌の１種であるシュードモナ
ス・ソラナセアラム（Pseudomonas solanacearum）の寄
生によって起こるタバコ立枯病あるいはナス科植物青枯
病（以下、単に立枯病と略す）は、タバコ、トマト、ナ
ス、ピーマン等多くの作物で被害が多い。

【０００３】立枯病菌は、土壌中で長期間生存しやす
く、いったん植物体に感染すると増殖が速いので、防除
が極めて困難であることから、作物病害の中でも難防除
病害の一つとされている。

【０００４】立枯病を防除するためには、従来から土壌
くん蒸剤、例えばクロルピクリンや臭化メチルなどが主
として用いられている。しかしながら、近年、これらの
薬剤の使用は、刺激臭による公害の発生、環境汚染およ
びオゾン層の破壊の原因となることや、土壌中の病原菌
だけでなく有用な微生物までも死滅させることから、よ
り安全で効果の高い防除法が求められてきた。

【０００５】一方、自然の土壌中には、病原菌に対し拮
抗作用を示す微生物が多数存在することが明らかになっ
ており、安全で効果的な防除法を提供するために、これ
らの拮抗性の微生物を用いて立枯病を防除する試みが広
く行われている。

【０００６】その例を示すと、シュードモナス・プチー
ダ（Pseudomonas putida）を用いる方法（日本植物病理
学会報（1990）56巻：404）、シュードモナス・フルオ
レセンス（Pseudomonas fluorescens）を用いる方法（R
evista de Microbiologia（1989）vol 20:18-26）、弱
病原性のシュードモナス・ソラナセアラム バクテリオ
シン産生菌株（Pseudomonas solanacearum）を用いる
方法（特開平1-16579）などがあげられる。

【０００７】しかしながら、一般に拮抗細菌を土壌病害
の防除に使用する場合は問題がある。すなわち、拮抗細
菌が植物の根によく定着し、そこで活動する必要がある
が、圃場などの自然環境下では、根圏環境が温室条件下
とは異なることから拮抗細菌の定着性が悪いので、病原
菌の生存や活動とそれにともなう病害の発生を抑制でき
ず、防除効果が低いあるいは不安定な場合が多いことが
指摘されている。

【０００８】例えば、上記のシュードモナス・プチーダ
あるいはシュードモナス・フルオレセンスを用いた例で
は、これらの拮抗細菌が立枯病菌に対して培地上で抗菌
活性を示し、温室内の短期実験で発病抑制効果が認めら
れているが、しかし、汚染畑では防除効果が認められな
かったり、栽培後期に防除効果が著しく低下する例がほ
とんどで、栽培期間の長いナス科植物に使用して後期ま
で満足する防除効果を示す拮抗細菌は、今のところ知ら
れていない。

【０００９】また、上記特開平1-16579の弱病原性のシ
ュードモナス・ソラナセアラム バクテリオシン産生菌
（ＯＭ２菌株）を用いた例では、その後の研究により、
ＯＭ２菌株の根部への定着に18℃以上の温度条件が必要
なことが明らかになった。一般のタバコ畑の移植時は３
月にあたり、この温度条件を満たせないことから、処理
した菌が減少しやすく、そのために効果が低いあるいは
不安定になることが認められる。

【００１０】これらの問題点を解決するためには、接種
した細菌を効率的に根に定着させる必要がある。これま
で定着性向上のために、拮抗細菌を種子や種いもなどに
塗布したり、タルク、ゼオライト、炭などに培養菌を添
加するなどの工夫がなされているが、いずれも単独で
は、効果が不安定な場合が多い。

【００１１】

【発明が解決しようとする課題】以上のことから、土壌
病害の拮抗細菌による防除においては、根部への定着性
が高い拮抗細菌を用いて安定的に植物根へ定着させる方
法の開発が強く望まれている。

【００１２】一方、近年、遺伝子工学的手法をもとに拮
抗細菌が生産する抗菌物質の遺伝子解析がめざましく進
んでおり、この成果を病害防除に応用する試みがなされ
つつある。その１つの方法として抗菌物質生産遺伝子を
植物体に組み込むことが考えられ、この方面での研究が
進んでいるが、そのような方法では植物の種類に合わせ
てそれぞれ組換え植物を作成する必要があり、時間と労
力がかかる。

【００１３】そこで、遺伝子工学的手法の別の利用法と
して抗菌物質生産遺伝子を根圏微生物に組み込んで、定
着した微生物が生産した抗菌物質によって防除を図る方
法も考えられる。しかし、この方法の効果が高いかどう
かは、用いた微生物が植物根にうまく定着できるかどう
かにかかっている。したがって、根部への定着性の極め
て高い細菌を提供することは、この方法による病害防除
の可能性をさらに高めるためにも急務である。

【００１４】したがって、本発明はタバコ根への定着能
の高い新規細菌を提供するものである。本発明はさら
に、タバコ根への定着能の高い細菌を利用した立枯病の
防除剤および防除方法を提供する。

【００１５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、従来まで
の研究に使用されている拮抗細菌あるいは担体との組み
合わせとは異なる観点から研究を進め、タバコ根部での
定着性が優れた細菌を発見した。また、これらの細菌を
根部に導入し、選択的に増殖・定着させることによって
立枯病が効果的に防除できることを発見し、本発明を完
成した。

【００１６】すなわち、本発明者は、タバコの根圏に生
息している微生物の種類と密度を調べるなかで、タバコ
の根圏にはニコチン分解性の細菌が存在すること、そし
てそのような細菌は他のナス科植物であるトマトに比べ
て著しく多いことを発見した。さらに、これらニコチン
分解性細菌の中でも、特に蛍光性シュードモナス属細菌
が、根から遊離しにくい部位で、よく増殖・定着するこ
とを明らかにした。このように、土壌あるいは植物根圏
で生息し、これらの試料から容易に分離される特定の細
菌がタバコ根部で生産されるニコチンを資化して根圏部
に良好に定着し、植物体に悪影響を及ぼさず立枯病の防
除効果を示すことを発見した。なお、ニコチン分解性の
シュードモナス属細菌は、病害防除あるいは微生物の根
圏定着の分野では従来知られておらず、本発明により初
めて提供されたものである。

【００１７】タバコ根部への定着性が高い新規細菌 本発明の細菌は、シュードモナス属に属し、ニコチン分
解能を有し、タバコ根部への定着性が高い新規細菌であ
る。

【００１８】本発明の細菌のニコチン分解能は、ニコチ
ンを０．２％程度の量で含む培地上で旺盛な生育を示す
ことから識別可能である。さらに、ニコチン培地に６％
ケイタングステン酸を含む０．１Ｎ塩酸を噴霧すると培
地中のニコチンはケイタングステン酸ニコチンとなり白
色の沈殿が生じるが、ニコチン分解菌のコロニー周辺は
透明帯となることから容易に確認できる（凍結及び乾燥
研究会会誌（１９８６）３２巻：７８〜８２）。

【００１９】タバコ根への定着性は、リファンピシン耐
性の突然変異株を作成し、これをタバコ根部に処理した
のち、定期的に根部を採取して、段階希釈法により、キ
ングＢ培地にリファンピシンを５０ｐｐｍ程度添加した
培地上に生育したコロニーを計数することによって評価
できる。

【００２０】本発明のシュードモナス属細菌は、ニコチ
ンを含む培地上での生育の有無、タバコ根部への定着
性、およびシュードモナス属の特徴に基づいて、微生物
分野の通常の技術によって土壌等の自然界から分離する
ことができ、そのようにして分離される微生物は全て本
発明の範囲に含まれる。ニコチンを含む培地の例は、後
記実施例１に記載されている。さらに、分離された微生
物に、好ましい性質、例えば立枯病菌に対する拮抗性を
与えるように、遺伝子操作その他の方法で改変したもの
も本発明の範囲内である。

【００２１】本発明の細菌は、驚くべきことに、試験管
内での立枯病菌に対する拮抗作用の有無にかかわらず、
これらを移植前等の適当な時期にタバコの根や土壌に導
入することによって、立枯病を効果的に防除することが
できる。すなわち、後記実施例２〜５において、根圏に
定着するシュードモナス属細菌のうち、優先種とされる
シュードモナス・フルオレセンスおよびシュードモナス
・プチーダを実施例１の分離株の中から選び出し、それ
ぞれニコチン分解能が異なる菌株間でタバコ根部に対す
る定着性および立枯病に対する発病抑制効果について調
べたところ、いずれの種においても、ニコチン分解性を
有する細菌が定着性が高く、かつ抑制効果も高いことが
判明した。このようにして見いだされたニコチン分解性
の好ましい細菌株の例が、シュードモナス・フルオレセ
ンス（Ｆ２７Ｒ２，Ｆ３０Ｒ２，Ｆ８９Ｒ１）およびシ
ュードモナス・プチーダ（ＰＰ２，ＰＰ３，ＰＰ４）で
ある。

【００２２】ニコチン分解性と定着性との間に関連性が
存在する理由としては、本発明の細菌は、タバコ根で生
産されるニコチンの根外部への漏出部位で著しく増殖す
ることが考えられる。この漏出部位は、傷口あるいは亀
裂部などからなり、一方では、病原菌の侵入場所でもあ
る。したがって、本発明の細菌による立枯病の抑制機構
については、病原菌の侵入を物理的あるいは抗菌物質で
防ぐためと考えられる。また、植物体に抵抗性を誘導す
ることも考えられる。但し、本発明はこれらの理論に拘
束されるものではない。

【００２３】タバコ立枯病の防除方法および防除剤 本発明は、タバコ立枯病の防除方法および防除剤も提供
する。

【００２４】本発明の防除方法は、ニコチン分解能を有
し且つタバコ根部への定着性が高い微生物および／また
はそれらの培養物を有効成分として、タバコの根部、栽
培地またはその土壌に存在させ、タバコ栽培開始から収
穫までのほぼ全期間または少なくとも一時期にタバコ立
枯病の病原菌の増殖および／または活動を抑制すること
よりなる。

【００２５】本発明の方法に用いる微生物は、典型的に
は上記の新規細菌である。しかし、それ以外にも、ニコ
チン分解能を有し、それゆえタバコ根部への定着性が高
く、タバコの根部、栽培地、またはその土壌に存在させ
ることでタバコの土壌病害の発生を防止する性質を有す
る微生物は種々存在すると思われる。そのような微生物
には、細菌、真菌、放線菌および酵母が含まれる。した
がって、ニコチン分解能をもつ微生物の中から、タバコ
根部への定着性の高い微生物を選択し、本発明の方法に
使用することは本発明の範囲に含まれる。

【００２６】本発明の方法に用いるための微生物の増殖
は適宜行ってよい。例えば、本発明の新規細菌の場合、
特別な培養基を準備する必要がなく、肉エキス培地、キ
ングＢ培地等一般細菌用の培地でよく増殖する。培養条
件は、振盪培養・通気培養などの好気的条件下で行なう
が、温度は、20〜30℃好ましくは25〜30℃、pHは5〜8好
ましくは6〜7、培養期間は1〜4日好ましくは2〜3日が適
当である。なお、寒天入りの斜面あるいは平板培地で培
養し、培地上に生育した菌体を用いても良い。

【００２７】タバコの「根部」とは、植物を栽培した場
合に土壌中あるいは水耕液中にあって水分や栄養分の吸
収を行なう部分である。また、根部、栽培地またはその
土壌へ存在させるための細菌の導入は、菌体培養物をタ
バコの植物体やその周辺へ散布あるいは潅注したり、菌
体培養物中へ根部を浸漬することによって容易に行なう
ことができる。例えば、生菌として10⁵〜10¹⁰／ml好ま
しくは10⁷〜10⁹／mlの濃度で本畑移植の７日前から移植
の１か月後までの間にこれらを根部に導入する。導入の
一方法として浸漬処理する場合に、その浸漬時間は、30
分ないし3時間好ましくは1時間前後である。また、潅注
あるいは潅水処理で根部に導入する場合には、苗１株当
り5〜20ml、移植後は50〜200mlが適当である。あるい
は、菌体を土壌中に撹拌散布することによっても、同じ
ような効果が期待できる。

【００２８】また、細菌の導入と同時にあるいはしばら
く後に、ニコチンを含む溶液をタバコ周辺の土壌に潅注
等することによって、選択的に有用細菌の増殖が可能
で、さらに高い定着性および防除効果が期待できる。ニ
コチンを含む溶液の例としては、硫酸ニコチン、ニコチ
ンなどが挙げられる。

【００２９】また、これらの細菌に抗菌物質遺伝子を導
入することによって、病原菌の侵入部位でさらに効果的
に病原菌の侵入を防止することも可能である。したがっ
て、本発明の細菌は、病害防除用としてのみならず、タ
バコ根へ定着させるための拮抗細菌を創生するための材
料としても使用可能である。

【００３０】本発明の防除剤は、ニコチン分解能を有し
且つタバコ根部への定着性が高い微生物（典型的には本
発明の新規細菌）および／またはそれらの培養物を有効
成分として、使用時に、生菌として10⁵〜10¹⁰／ml好ま
しくは10⁷〜10⁹／mlの濃度にすることができる、乾燥製
剤、固形製剤、濃厚懸濁製剤、または希釈製剤として製
造される。必要であれば、増量剤、安定剤、若干のニコ
チン、細菌の栄養源、等を適宜加えてもよい。さらに、
本発明の防除剤を肥料と混合して提供することもでき
る。

【００３１】

【実施例】以下に実施例をあげて本発明の内容を説明す
る。

【００３２】実施例１：ニコチン分解性シュードモナス
属細菌の分離 栃木県小山市のタバコ畑から、健全なタバコ根部を掘り
取り、ハサミで根部を切り離し、付着している土壌を振
り落とした。約１ｃｍの長さに切断した根を10mlの滅菌
水中に入れ、ミキサーで撹拌したのち、得られた段階希
釈液を0.1mlずつキングＢ培地（プロテオースペプトンN
o3 20g，KH₂PO₄ 1.5g，MgSO₄・7H₂01.5g，グリセリン
10ml, 蒸留水 1,000ml：J. Lab. Clin. Med（1954）v
ol44:301〜307）上に画線した。28℃、2〜3日間培養
後、紫外線照射下で蛍光を発するコロニーをそれぞれ分
離し、−80℃のフリーザーで保存した。それぞれの細菌
株は、ニコチン合成培地（KH₂PO₄ 1.0g，MgSO₄ 0.5g
，Fe₂(SO₄)₃ 痕跡，CaCl₂痕跡，MnSO₄ 痕跡，Na₂MoO₄
痕跡，ニコチン 2.2g，蒸留水1,000ml，寒天20.0g：日
本土壌肥料学会報（1967）38巻：161〜166）上での生育
の有無からニコチン分解性と非分解性に区別した。さら
に、上記ニコチン培地から寒天を除いたニコチン液体培
地に分離菌株を接種し、２８℃で７日間振とう培養後、
培地中に残存するニコチン含量を調べて、ニコチン分解
性の有無を確認した。このようにしてニコチン分解性が
異なる蛍光性シュードモナス属細菌をそれぞれ約100株
ずつ得た。

【００３３】実施例２：分離株の同定 実施例１で分離されたシュードモナス・フルオレセンス
と思われる菌株の中で、ニコチン分解性のものと非分解
性の菌株を無作為にそれぞれ３株ずつ選んだ。そして、
それぞれの細菌学的性質を調べた。

【００３４】

【表１】 第１表 細菌学的性質 試験項目 F27R2 F30R2 F89R1 F4R1 F64R1 F97R1 形態 桿菌 桿菌 桿菌 桿菌 桿菌 桿菌 グラム染色性 − − − − − − 胞子 − − − − − − 運動性 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ 酸素に対する態度 好気性 好気性 好気性 好気性 好気性 好気性 オキシダーゼ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ カタラーゼ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＯＦ Ｏ Ｏ Ｏ Ｏ Ｏ Ｏ 蛍光色素の生成 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ 硝酸塩還元 − − − − − − インドール生成 − − − − − − グリコース発酵性 − − − − − − アルギニンジヒドラーゼ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ 尿素分解 − − − − − − エスクリン加水分解 − − − − − − ゼラチン液化 ＋ ＋ ＋ − − ＋ ＰＮＰＧ − − − − − − 資化性 グルコース ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ L-アラビノース ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ D-マンノース ＋ ＋ ＋ − − ＋ D-マンニトール ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ N-アセチル-D-グルコサミン ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ マルトース − − − − − − グルコン酸カリウム ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ n-カプリン酸 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ アジピン酸 − − − − − − dl- リンゴ酸 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ クエン酸ナトリウム ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ 酢酸フェニル − − − ＋ ＋ − キシロースからの酸の産生 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ソルビトールの資化性 − − − − − − 黄色色素の生成 − − − − − − ニコチン分解性 ＋ ＋ ＋ − − −

【００３５】以上の６菌株は、細菌学的性質をもとにBe
rgey's Manual of Systematic Bacteriology volume 1
(1984)をもとに調べた結果、いずれもシュードモナス・
フルオレセンスに属する細菌株であると同定した。F27R
2、F30R2および F89R1菌株は、ニコチン分解を有する新
細菌株であり、そのうちF30R2およびF89R1菌株は、それ
ぞれFERM BP-5555およびFERM BP-5556として、平成８年
５月３０日に工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託
された。

【００３６】実施例３ １９９４年５月１１日にタバコ立枯病の汚染畑にタバコ
（品種：Ｖａ１１５）を移植した。そして、上記第１表
の菌株をそれぞれ３株ずつキングＢ液体培地で25℃、３
日間それぞれ振盪培養したのち、遠心集菌し、滅菌水中
に約10⁸／mlの濃度で懸濁し、６月１１日に株元に株当
り100mlずつ潅注した。試験は１区当たり９株を供試
し、２回反復で行った。処理後は、根圏部における処理
細菌の密度の推移を調べるとともに、定期的に発病状況
を観察し、タバコ栽培の収穫終了時である８月５日に最
終調査を行いそれぞれの菌株で処理されたタバコの発病
率を比較した。試験の結果を第２表に示す。

【００３７】

【表２】 第２表 タバコ根圏に処理した蛍光性シュードモナス属細菌の 推移と立枯病の発生 試験 ニコチン 根圏部における密度／乾燥根１ｇ 立枯病発病率 区別 分解能 0日後 15日後 30日後 8 月1日 8月5日 % (%) % (%) F 4R1 - 7.9×10⁷ 4.0×10⁶ 2.7×10⁶ 55.6 77.8 F64R1 - 1.5×10⁸ 3.8×10⁶ 5.1×10⁵ 22.2(48.2) 22.2(63.0) F97R1 - 3.1×10⁷ 3.2×10⁶ 1.6×10⁶ 66.7 88.9 F27R2 + 2.1×10⁸ 6.9×10⁶ 3.4×10⁶ 44.4 55.6 F30R2 + 2.4×10⁷ 6.1×10⁶ 2.5×10⁶ 0.0(18.5) 11.1(29.6)F89R1 + 1.0×10⁸ 1.7×10⁷ 4.5×10⁷ 11.1 22.2 注：（）内は、３菌株の平均発病率を示す。

【００３８】第２表に示されるとおり、ニコチンの分解
能力がない蛍光性シュードモナス属細菌は、供試した３
株ともに処理後、根圏での密度が低下しやすく、処理後
３０日目には処理直後の約５％以下の密度であった。ま
た、立枯病の発病も多く、最終調査では、平均63.0％の
発病率を示した。一方、ニコチン分解性菌の場合は、根
圏部における細菌密度の減少が緩慢で定着性が高く、発
病率も非分解性菌の場合に比べて著しく低いものが多か
った。その中でも、Ｆ３０Ｒ２の発病率は11.1％と最も
低く、防除効果が優れていた。また、Ｆ８９Ｒ１は供試
した菌株の中で根圏での生存・増殖能力が優れていた。

【００３９】実施例４ 実施例１で分離した菌株あるいは保存株のうちシュード
モナス・プチーダに属すると思われる菌株を選び、その
中でニコチン分解性のものと非分解性の菌株を無作為に
それぞれ３株ずつ選んだ。そして、それぞれの細菌学的
性質を調べた。なお、IFO1416菌株は財団法人発酵研究
所保存のシュードモナス・プチーダ標準株である。

【００４０】

【表３】 第３表 細菌学的性質 試験項目 PP2 PP3 PP4 IFO1416 PP13 PP14 形態 桿菌 桿菌 桿菌 桿菌 桿菌 桿菌 グラム染色性 − − − − − − 胞子 − − − − − − 運動性 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ 酸素に対する態度 好気性 好気性 好気性 好気性 好気性 好気性 オキシダーゼ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＯＦ Ｏ Ｏ Ｏ Ｏ Ｏ Ｏ 蛍光色素の生成 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ 硝酸塩還元 − − − − − − インドール生成 − − − − − − グルコース発酵性 − − − − − − アルギニンジヒドラーゼ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ 尿素分解 − − − − − − エスクリン加水分解 − − − − − − ゼラチン液化 − − − − − − ＰＮＰＧ − − − − − − 資化性 グルコース ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ L-アラビノース ＋ ＋ ＋ − − − D-マンノース ＋ ＋ ＋ − − − D-マンニトール − − − − − − N-アセチル-D-グルコサミン − − − − − − マルトース − − − − − − グルコン酸カリウム ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ n-カプリン酸 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ アジピン酸 − − − − − − dl- リンゴ酸 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ クエン酸ナトリウム ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ 酢酸フェニル ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ニコチン分解性 ＋ ＋ ＋ − − −

【００４１】以上の６菌株は、細菌学的性質をもとにBe
rgey's Manual of Systematic Bacteriology volume 1
(1984)をもとに調べた結果、いずれもシュードモナス・
プチーダに属する細菌株であると同定した。ＰＰ２、Ｐ
Ｐ３およびＰＰ４菌株は、ニコチン分解能を有する新細
菌株であり、そのうちＰＰ４菌株は、ＦＥＲＭ ＢＰ−
５５５４として平成８年５月３０日に工業技術院生命工
学工業技術研究所に寄託された。

【００４２】実施例５ １９９５年５月２４日にタバコ立枯病の汚染畑にタバコ
（品種：ＢＹ４）を移植した。そして、上記第３表の菌
株をそれぞれ３株ずつキングＢ液体培地で25℃、３日間
それぞれ振盪培養したのち、遠心集菌し、滅菌水中に約
10⁸／mlの濃度で懸濁し、これを６月２６日に株元に株
当り100mlずつ潅注した。試験は１区当たり９株供試
し、２回反復で行った。処理後は、定期的に発病状況を
観察した。結果を第４表に示す。

【００４３】

【表４】 第４表 立枯病の発生 試験区別 ニコチン 立枯病発病率 分解能 7月21日 7月28日 8月4日 % (%) % (%) % (%) IFO14164 − 16.7 22.2 33.3 PP13 − 0.0(7.4) 22.2(22.2) 22.2(25.9) PP14 − 5.6 22.2 22.2 PP 2 ＋ 0.0 11.1 27.8 PP 3 ＋ 0.0(0.0) 11.1(7.4) 11.1(14.8) PP 4 ＋ 0.0 0.0 5.6 無処理 5.6 16.7 27.8 注：（）内は、３菌株の平均発病率を示す。

【００４４】第４表に示されるとおり、無処理区では、
７月中旬から発病株が散見され、最終調査の８月４日に
は、２７．８％の発病率を示した。ニコチン非分解性細
菌の処理区では、初発生の時期は菌株によって異なるも
のの、最終調査では、無処理区とほぼ同様の発病率を示
した。

【００４５】一方、ニコチン分解性細菌の処理区では、
いずれも初発生時期が遅れる傾向を示し、最終発病率も
低い例が多かった。その中でもＰＰ４菌株は、最終発病
率が5.6％と著しく低く、防除効果が優れていた。

【００４６】

【発明の効果】本発明においては、生物学的方法でタバ
コの立枯病を防除するために、立枯病の病原菌との拮抗
作用の他に、タバコの根部への定着性に注目した。その
結果、タバコの根部へ良好に定着するニコチン分解性の
細菌の存在が見いだされた。このような細菌は、収穫時
までの長期間立枯病菌の増殖を防止できるため、立枯病
の防除のために直接使用することが可能である。さら
に、このような細菌に立枯病菌に対する拮抗作用等の好
ましい性質を付与することにより、生物学的防除方法を
一層改良することが期待できる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:40）

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 シュードモナス属に属し、ニコチン分解
   能を有し、タバコ根部への定着性が高い新規微生物。
2. 【請求項２】 シュードモナス・フルオレセンス（Pseu
   domonas fluorescen s）Ｆ３０Ｒ２菌株（FERM BP-555
   5）である請求項１記載の微生物。
3. 【請求項３】 シュードモナス・フルオレセンス（Pseu
   domonas fluorescen s）Ｆ８９Ｒ１菌株（FERM BP-555
   6）である請求項１記載の微生物。
4. 【請求項４】 シュードモナス・プチーダ（Pseudomona
   s putida）ＰＰ４菌株（FERM BP-5554）である請求項１
   記載の微生物。
5. 【請求項５】 タバコの根部、栽培地、またはその土壌
   に存在させることでタバコの土壌病害の発生を防止する
   性質を有する、請求項１、２、３または４記載の微生
   物。
6. 【請求項６】 土壌病害がシュードモナス・ソラナセア
   ラム（Pseudomonas solanacearum）が原因で起こるタバ
   コ立枯病である請求項５記載の微生物。
7. 【請求項７】 タバコの根部、栽培地、またはその土壌
   に存在させることでタバコの土壌病害の発生を防止する
   性質を有する、蛍光性シュードモナス属に属する微生物
   および／またはその培養物を有効成分として含んでな
   る、植物の土壌病害防除剤。
8. 【請求項８】 タバコの根部、栽培地、またはその土壌
   に存在させることでタバコの土壌病害の発生を防止する
   性質を有する、蛍光性シュードモナス属に属する微生物
   および／またはその培養物を、植物の根部、栽培地、ま
   たはその土壌に存在させることよりなる、植物の土壌病
   害防除方法。
9. 【請求項９】 ニコチン分解能を有する微生物のうちか
   らタバコ根部への定着性が高く、タバコの根部、栽培
   地、またはその土壌に存在させることでタバコの土壌病
   害の発生を防止する性質を有する微生物を選択し、選択
   された微生物またはその改変体および／またはそれらの
   培養物を、タバコの根部、栽培地またはその土壌に存在
   させ、タバコ栽培開始から収穫までのほぼ全期間または
   少なくとも一時期にタバコ立枯病の病原菌の増殖および
   ／または活動を抑制することよりなる、タバコ立枯病の
   防除方法。
10. 【請求項１０】 ニコチン分解能を有する微生物が、シ
    ュードモナス属の細菌である、請求項９の方法。