JPH10500671A

JPH10500671A - ペルオキシ亜硝酸塩分解触媒の使用方法、そのための薬剤組成物

Info

Publication number: JPH10500671A
Application number: JP7529755A
Authority: JP
Inventors: ケイススターン，マイクル; サルベミニ，ダニエラ
Original assignee: モンサントカンパニー
Priority date: 1994-05-13
Filing date: 1995-05-09
Publication date: 1998-01-20
Also published as: HUT76327A; BR9507643A; CN1222286C; EP0758892A1; FI964537A0; WO1995031197A1; HU9603140D0; NO964793D0; CN1152871A; NZ285648A; NO964793L; AU709553B2; FI964537A7; CZ323496A3; AU2512095A; CA2189528A1; PL317192A1

Abstract

(57)【要約】本発明はＭｎ、Ｆｅ、ＮｉおよびＶ遷移金属のような錯体化金属である、選択されたリガンド構造である錯体の使用を特徴とする、好ましくは無害の生成物へのペルオキシ亜硝酸塩の分解による疾患の治療方法を提供する。この使用方法およびそのための新規の薬剤組成物は、自然のバックグランド分解速度を越える速度でペルオキシ亜硝酸塩を分解することにより有利な影響を受ける疾患に罹っているヒトの疾患の治療を目的とし、投与単位型の、そのようなペルオキシ亜硝酸塩の分解を加速するのに有用な量の錯体を投与することを特徴とする。

Description

【発明の詳細な説明】ペルオキシ亜硝酸塩分解触媒の使用方法、そのための薬剤組成物技術分野本発明は、金属錯体によるペルオキシ亜硝酸塩の分解の使用方法、そのための新規薬剤組成物、およびその使用方法に関する。特に本発明は、金属錯体である化合物の使用によるペルオキシ亜硝酸塩の分解を特徴とする、選択された疾患の治療方法を提供する。この分解により、好ましくは酸素ラジカルのような有害な分解産物の生成を防ぎ、またペルオキシ亜硝酸塩の存在によりスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）の不活性化も防ぐ有用な物質が産生される。従って、本発明の選択された金属錯体の使用方法、およびそのような使用のための薬剤組成物は、単位投与型の速度加速性の有効量の金属錯体を投与することよりなる、自然のバックグランド分解速度を越える速度でペルオキシ亜硝酸塩を分解することを特徴とする治療により、有利な影響を受ける疾患の治療を目的とする。すなわち、本発明の治療方法および新規組成物は、疾患の治療において（１）ペルオキシ亜硝酸塩の触媒性分解速度の加速、および（２）ペルオキシ亜硝酸塩による不活性化に対するＳＯＤの保護という、２重の利点を与える。すなわち、本発明は、これまで知られていなかった人体内のペルオキシ亜硝酸塩の存在による有害な作用から保護することにより、そのような分解により有利に影響されるヒトの疾患の治療方法を与える。さらに、ＳＯＤの不活性化に対して保護されるため、そのような分解は、過酸化物の過剰産生に関連する疾患に対する保護を与える。これらの疾患には、脳卒中、頭の傷害および心筋虚血のような虚血性再潅流障害、敗血症、慢性もしくは急性の炎症（例えば、関節炎、炎症性腸疾患など）、成人型呼吸窮迫症候群、癌、気管支肺異形成、癌の薬物治療による副作用、心血管系疾患、糖尿病（バナジウムポルフィリン錯体については含まない）、多発性硬化症、パーキンソン病、家族性筋萎縮性側策硬化症、および大腸炎や特異的神経障害が含まれ、好ましくは虚血性再潅流障害、炎症、敗血症、多発性硬化症、パーキンソン病および脳卒中が含まれる。背景分野一酸化窒素（ＮＯ）は、有用なメッセンジャーとしての役割と有害な中間体としての役割の２重の生理的役割が知られている。一酸化窒素は、マクロファージ、好中球、肝細胞および内皮細胞を含む多くの型の細胞で産生されることが証明されている。それぞれ、ヒブス（Hibbs）ら、Scinece，1987，235，473-476；リメレ（Rimele）ら、J．Pharmacol．Exp．Ther.，1988，245，102-111；クラン（ Curran）ら、J．Exp．Med.，1989，170，1769-1774；およびプラマー（Plamer）ら、Nature，1987，327，524-526を参照。ＮＯの産生に関与する化学反応は、Ｌ −アルギニンをシトルリンとＮＯに変換する、一酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）と呼ぶ一群の酵素により触媒される。フォースターマン（Forstermann）ら、Bio chemical Pharmacology，1991，42，1849-1857を参照。グアニル酸シクラーゼの刺激におけるシグナル化分子としてのＮＯの役割は、充分確立されている（モノカダ（Monocada）ら、Pharmacological Reviews，1991,43，109-142）が、その細胞毒性の起源は不明であった。最近、ＮＯ自身は細胞傷害に関係がないかも知れないという、無視できない証拠が浮上してきた（lst Annual Mtg．of Oxygen Society（Nov．12-4，1993、サウスカロライナ州チャールストン）の抄録、エル・ブルネリとジェイ・エス・ベックマン（L．Brunnelli and J.S．Beckman）による「一酸化窒素は殺菌活性を示すのに過酸化物を必要とする」（"Nitric Oxide Requires Superoxide to Exe rt Bactericidal Activity"）を参照）。その代わりに、過酸化物とＮＯの反応による産生される、より反応性の種であるペルオキシ亜硝酸塩が、ＮＯの過剰産生で観察される細胞毒性においてある役割を果たしていることが見いだされている。ペルオキシ亜硝酸塩は、プロトンについて一次である反応を介して分解することが知られている。プロトンに触媒されるペルオキシ亜硝酸塩の分解速度（以後「自然の分解速度」と呼ぶ）は、広範なｐＨ範囲にわたる研究から理解されている（ケイス（Keith）ら、J Chem Soc(A)，p.90，1969を参照）。ｐＨが７．４の時、温度は３７℃に維持され、観察されたペルオキシ亜硝酸塩の分解速度は、３．６×１０^-1秒^-1である（ベックマン（Beckman）ら、Proc．Natl．Aca d．Sci．USA Vol 87，pp1620-1624，1990を参照）。ベックマン（Beckman）は、ペルオキシ亜硝酸塩の分解により、デオキシリボースまたはジメチルスルホキシドの酸化により評価した時ヒドロキシ基に類似の反応性を有する強い酸化体を生成することを示しており、さらにスーパーオキシドジスムターゼは、ペルオキシ亜硝酸塩の生成を防いで、病的条件下で過酸化物とＮＯ・を産生するように刺激される血管組織を保護することを示唆している。ベックマン（Beckman）ら、Pro c．Natl．Acad．Sci．USA，Vol.87，pp1629-1624，February，1990中の「ペルオキシ亜硝酸塩による見かけのヒドロキシ基産生」（"Apparent Hydroxyl Radical Production by Peroxynitrite"）を参照。さらに、ペルオキシ亜硝酸塩は分解すると、ヒドロキシ基と強力なニトロ化物質である二酸化窒素を生成することは、充分確立されている。いずれの分子種も、脂質膜やスルフヒドリル残基と反応することが証明されている強力な酸化体である（ラジ（Radi）ら、The Journal of Biological Chemistry，Vol．266，No ．7，March 5，pp4244-4250，1991中の「スルフヒドリル基のペルオキシ亜硝酸塩酸化」（"Peroxynitrite Oxidation of Sulfhydryls"）を参照）。ハーディー（Hardy）らは、Ｏ₂ ^-と一酸化窒素との相互作用がペルオキシ亜硝酸塩を生成し、またはＯ₂ ^-をプロトン化してペルヒドロキシ基を生成することが、ＨＡＥ細胞の好中球が介在する死滅に関与していることを示唆しており（カリホルニア州アナハイムでの、１９９２年４月５日〜９日のＦＡＳＥＢＭｅｅｔｉｎｇ）、ハーディー（Hardy）らはさらに、ヒト内皮細胞の酸化的傷害におけるペルオキシ亜硝酸塩の役割を示唆している（ルイジアナ州ニューオリンズでの、１９９３年３月２８日〜４月１日のＦＡＳＥＢの"Experimental Biology"セクションの抄録）。すなわち、ペルオキシ亜硝酸塩分解による有害産物が、多くの文献に具体的に記載されている。さらに、ペルオキシ亜硝酸塩がＭｎとＦｅＳＯＤと反応すると、酵素が不活性化される（ラジ（Radi）ら、Arch．Biochem．Biophys.，1991，288，481-487も参照）。現在では、ペルオキシ亜硝酸塩はＣｕＺｎＳＯＤも不活性化することが知られている。すなわち、広範な疾患における、ペルオキシ亜硝酸塩の分解の影響（傷害性分解産物の生成によるもの、またはＳＯＤの不活性化によるものであっても）は、充分記録されている。例えば、ラットの大腸に及ぼすペルオキシ亜硝酸塩の有害作用を評価する試験は、ラクミレエウィッツ（Rachmilewitz）ら、Gastroenterology 105(6)1993の「ペルオキシ亜硝酸塩誘導ラット大腸炎」（"Peroxynitrite-induced Rat Colit is: A New Model of Colonic Inflammation"）中に報告されている。ベックマン（Beckman）らはＰＣＴ／ＵＳ９１／０７８９４（米国特許第５，２７７，９０８号に対応する）において、ペルオキシ亜硝酸塩は、虚血性、炎症性または敗血症条件下のある組織中で過酸化物（Ｏ₂ ^-）と一酸化窒素の反応により生成することを、具体的に記載している。ベックマン（Beckman）らは、Natur e，Vol 364，12 August 1993において、ＳＯＤ欠損とペルオキシ亜硝酸塩を筋萎縮性側策硬化症（ＡＬＳ）に結びつけており、ホッグ（Hogg）らとベックマン（ Beckman）らは、ペルオキシ亜硝酸塩と動脈硬化症の関係を、それぞれBiochemic al Society Transactions，Vol．21（１９９２年１２月２２日受理）と「免疫組織化学的方法により検出されるヒトの動脈硬化症における蛋白チロシンの広範なニトロ化」（"Extensive Nitration of Protein Tyrosines in Human Atheroscl erosis Detected by Immunohistochemistry"）、Biol．Chem．Hoppe-Sevler，Vo l．375，pp81-88，February 1994で記載している。さらに種々の疾患におけるペルオキシ亜硝酸塩の関与が、喫煙が原因の肺疾患、動脈硬化症、筋萎縮性側策硬化症、寒冷刺激脳浮腫について見いだされている（Chem．Res．Toxicol.，Vol． 5，No．3，1992 pp425-431）。また、The Journal of Biological Chemistry，V ol．268，No．21，No．21 Issue of July 25，pp15394-15398，1993中の「マウスの寒冷刺激脳浮腫」（"Cold-induced Brain Edema inMice"）も参照。さらに最近では、シャーチ（Scherch）らによりペルオキシ亜硝酸塩の毒性の阻止用の薬剤をスクリーニングするための、脊髄ニューロン毒性測定法が開発された（23rd Annual Meeting of the Society for Neuroscience、ワシントン、 D.D.、１９９３年１１月７〜１２日、またこの抄録はSociety for Neuroscience Abstracts 19(1-3)1993とBiosis 94:4951に記載されている）。さらにペルオキシ亜硝酸塩の存在量を低下させてＳＯＤの不活性化を防止することにより、本発明はまた、スーパーオキシドジスムターゼの生理学的利点に基づく疾患の治療における、スーパーオキシドジスムターゼの既知の生理学的利点を増強する。この点でＳＯＤとその模倣物は、過酸化物と一酸化窒素の過剰産生の阻害により、疾患の治療に有用であることが証明されている。すなわち、本発明は、ＳＯＤとＳＯＤ模倣物による疾患の既知の治療法に関する。ベックマン（Beckman）らのＰＣＴ出願はまた、酸素ラジカル過酸化物の不均化を触媒することを記載し、脳卒中や頭の傷害、心筋虚血、腹部血管閉塞、膀胱炎、および種々の炎症性症状の治療における酸化傷害を防止または低下させるのに、ＳＯＤやその変種が一般的に使用できることを証明する文献を記載している。ベックマン（Beckman）らのＰＣＴ出願はまた、Ｏ₂ ^-に関連したこれらの同じ疾患症状におけるペルオキシ亜硝酸塩の存在を認識しているが、本発明のさらなる改良は示していない。ＳＯＤまたはその模倣物による治療に関連することが知られている疾患のさらなる教示が、ＥＰ公報第０５２４１６１号（ヨーロッパ特許出願第９２８７００９７号）（参考のため本明細書に引用）に見いだされる。ポルフィリン錯体は、米国特許第５，２８４，６７４号に有用な診断および治療薬として開示され、非ペプチドフェオフォルバイド（phaeophorbide）類似体は、日本特許公報平５−３３１０６３号にエンドセリン受容体アンタゴニストとして開示され、カロテノポルフィリンは、米国特許第５，２８６，４７４号に哺乳動物癌組織を見つけ目に見えるようにするのに有用であるとして開示されており、錯体化金属を含まない同様の窒素含有大環状化合物が、細胞毒性物質として米国特許第５，２８３，２５５号に開示されている。本発明で見いだされたような金属錯体やその有用性は示されていない。しかし金属錯体は有用な化合物であることがDerwent抄録に、中間体としてＪＰ０５２７７３７７−Ａに、そしてＭＲＩ剤として米国特許第５，２８４，９４４号に；シアン色素として米国特許第５，２８６，５９２号に；光伝導性フタロシアニン組成物として米国特許第５，２８３，１４６号に；光記録媒体中の記録層として米国特許第５，２８４，９４３号に、近赤外線吸収物質および表示／記録材料として米国特許第５，２９６，１６３２号の抄録に記載されている。鉄ヘモ蛋白は、敗血症ショックのような疾患の治療のために、サイトカインまたはエンドトキシンにより誘導される時有害な生理学的作用を有する一酸化窒素に結合するかまたは酸化する有効な物質であることが、ＰＣＴ出願Ｎｏ．ＰＣＴ／ＵＳ９３／０１２８８（公報Ｎｏ．ＷＯ９３／１６７２１）に開示されている。他の錯体やその有用性も開示されている。例えば「ルテニウムフタロシアニン」は、光力学的癌治療法のための水溶性物質として、Platinum Metals Rev.，19 95，39,(1)，14-18に開示され；選択された金属有機錯体は炎症の治療のために米国特許第４，８６６，０５４号に開示され；ポルフィリンおよびフタロシアニン抗ウイルス組成物は、ＨＩＶの感染または複製のインヒビターとして米国特許第５，１０９，０１６号に記載され；マンガンメソ−テトラ（４−スルファトフェニル）ポルフィリンは合成され、癌選択性ＭＲＩ造影剤として使用され；ＪＰ０３２７３０８２の抄録は、食品や他の製品の製造の抗酸化剤として使用するための過酸化物分解性金属ポルフィリンを記載し；米国特許第４７５８４２９号は、関節炎や非炎症性関節疾患の治療のために、交流電磁界と組合せて磁気または電気双極子を活性化するための鉄テトラフェニルポルフィリンスルホン酸酢酸塩を記載し；ＥＰ３９２６６６号の抄録は、ＨＩＶのようなウイルスの治療に使用するための１，５，９，１３−テトラザシクロヘキサデカンのような非毒性の反応活性金属原子または錯体を記載している。ＣＡ１１９：２０３２４０は、ヒポプリセミックス（hypoplycemics）としての金属ポルフィリンがフランス特許第９１−６１７４号に見いだされることを記載している。さらに多くの文献が、金属錯体について類似の用途を示している。最後に、ＪＰＯ５３３１０６３に窒素を含有する選択された大環状化合物が、高血圧、急性腎不全、心筋症および心筋梗塞を治療したり予防したりするためのエンドセリン受容体アンタゴニストとして記載されている。発明の要約本発明は、化合物または金属錯体である化合物を投与して、ペルオキシ亜硝酸塩を分解することを特徴とする、自然のバックグランド分解速度以上の、すなわちそれを越える速度でペルオキシ亜硝酸塩が分解されることにより有利な影響を受ける疾患に罹っているヒトの該疾患の治療方法である。好ましくはペルオキシ亜硝酸塩は、無害な分子種に分解される。化合物は、遷移金属（例えば、Ｍｎ、Ｆｅ、ＮｉおよびＶ）の１つのような錯体金属を提供する、リガンド構造である。好適なリガンドは、ポルフィリン、アザ大環状化合物などのような大環状リガンドである。本発明は、ペルオキシ亜硝酸塩が存在しないことにより有効に影響される、哺乳動物（ヒトを含む）の疾患の新規治療方法であって、式構造式Ｉ（式中、Ｒ₃、Ｒ₆、Ｒ₉、またはＲ₁₂は、Ｈ，アルキル、アルケニル、ＣＨ₂ＣＯＯＨ、フェニル、ピリジニル、およびＮ−アルキルピリジルよりなる群から独立に選択され、ここで、フェニル、ピリジニル、およびＮ−アルキルピリジルは、炭素原子で結合しているであり、そしてフェニルは、ハロゲン、アルキル、アリール、ベンジル、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ₂ 、ＳＯ₃Ｈ、ＮＯ₂、ＮＨ₂、Ｎ（Ｒ）₃ ⁺（Ｒは、水素、アルキル、またはアルキルアリールである）により随時置換され；ピリジニルは、ハロゲン、アルキル、アリール、ベンジル、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ₂ 、ＳＯ₃Ｈ、ＮＯ₂、ＮＨ₂、Ｎ（Ｒ）₃ ⁺またはＮＨＣＯＲ’（Ｒは、前記で定義したものであり、Ｒ’はアルキルである）により随時置換され；Ｎ−アルキルピリジン環は、ハロゲン、アルキル、アリール、ベンジル、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ₂、ＳＯ₃Ｈ、ＮＯ₂、ＮＨ₂、Ｎ（Ｒ）₃ ⁺またはＮＨＣＯＲ’（ＲとＲ’は、前記で定義したものである）により随時置換され；Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₁₀、またはＲ₁₁は、Ｈ、アルキル、アルケニル、カルボキシアルキル、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＮＯ₂、ヒドロキシアルキル、およびＳＯ₃Ｈよりなる群から独立に選択されるか、またはＲ₁とＲ₂は一緒に５〜８個（好ましくは６個）の炭素原子を有する環を形成し；ＸとＹは、任意の単座配位または多座配位リガンドもしくはリガンド系またはその対応する陰イオンから得られる、適当なリガンドまたは電荷中和性陰イオン（例えば、安息香酸もしくは安息香酸陰イオン、フェノールもしくはフェノキシド陰イオン、アルコールもしくはアルコキシド陰イオン）であり、ハロゲン化物、オキソ、アコ、ヒドロキソ、アルコール、フェノール、ジオキシゲン、ペルオキソ、ヒドロペルオキソ、アルキルペルオキソ、アリールペルオキソ、アンモニア、アルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロシクロアルキルアミノ、ヘテロシクロアリール、アミノ、アミンオキシド、ヒドラジン、アルキルヒドラジン、アリールヒドラジン、一酸化窒素、シアン化物、シアン酸塩、チオシアン酸塩、イソシアン酸塩、イソチオシアン酸塩、アルキルニトリル、アリールニトリル、アルキルイソニトリル、アリールイソニトリル、硝酸塩、亜硝酸塩、アジド、アルキルスルホン酸、アリールスルホン酸、アルキルスルホキシド、アリールスルホキシド、アルキルアリールスルホキシド、アルキルスルフェン酸、アリールスルフェン酸、アルキルスルフィン酸、アリールスルフィン酸、アルキルチオールカルボン酸、アリールチオールカルボン酸、アルキルチオールチオカルボン酸、アリールチオールチオカルボン酸、アルキルカルボン酸（例えば、酢酸、トリフルオロ酢酸、シュウ酸）、アリールカルボン酸（例えば、安息香酸、フタール酸）、尿素、アルキル尿素、アリール尿素、アルキルアリール尿素、チオ尿素、アルキルチオ尿素、アリールチオ尿素、アルキルアリールチオ尿素、硫酸塩、亜硫酸塩、重硫酸塩、重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、チオ亜硫酸塩、ヒドロ亜硫酸塩、アルキルホスフィン、アリールホスフィン、アルキルホスフィンオキシド、アリールホスフィンオキシド、アルキルアリールホスフィンオキシド、アルキルホスフィンスルフィド、アリールホスフィンスルフィド、アルキルアリールホスフィンスルフィド、アルキルホスフォン酸、アリールホスフォン酸、アルキルホスフィン酸、アリールホスフィン酸、アルキル亜ホスフィン酸、アリール亜ホスフィン酸、リン酸塩、チオリン酸塩、亜リン酸塩、ピロリン酸塩、三リン酸塩、リン酸水素塩、リン酸二水素塩、アルキルグアニジノ、アリールグアニジノ、アルキルアリールグアニジノ、アルキルカルバメート、アリールカルバメート、アルキルアリールカルバメート、アルキルチオカルバメート、アリールチオカルバメート、アルキルアリールチオカルバメート、アルキルジチオカルバメート、アリールジチオカルバメート、アルキルアリールジチオカルバメート、重炭酸塩、炭酸塩、過塩素酸塩、塩素酸塩、亜塩素酸塩、次亜塩素酸塩、過臭素酸塩、臭素酸塩、亜臭素酸塩、次亜臭素酸塩、テトラハロマンガン酸塩、テトラフルオロホウ酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ヘキサフルオロアニトモネート（hexafluoroanitmonate）、次亜リン酸塩、ヨウ素酸塩、過ヨウ素酸塩、メタホウ酸塩、テトラアリールホウ酸塩、テトラアルキルホウ酸塩、酒石酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、サッカリン酸塩、アミノ酸、ヒドロキサム酸、チオトシル酸塩、およびイオン交換樹脂もしくは系の陰イオンよりなる群から独立に選択される；ただし、ＸとＹを含有する錯体が実質的に正の電荷を有する場合は、Ｚが存在しかつＺはＸまたはＹから独立に選択される対イオンであり、ＸとＹを含有する錯体が実質的に負の電荷を有する場合は、Ｚが存在しかつＺはアルカリ陽イオンおよびアルカリ土類陽イオン、有機陽イオン（例えば、アルキルまたはアルキルアリールアンモニウム陽イオン）から独立に選択される対イオンである；およびＭは、Ｍｎ、Ｆｅ、ＮｉおよびＶよりなる群から選択される）；構造式II （式中、Ｒ’はＣＨまたはＮであり；Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、Ｒ₁₀、Ｒ₁₁、Ｒ₁₂、Ｒ₁₃、Ｒ₁₄、Ｒ₁₅、およびＲ₁₆は、Ｈ、ＳＯ₃Ｈ、ＣＯＯＨ、ＮＯ₂、ＮＨ₂、およびＮ−アルキルアミノよりなる群から独立に選択され；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したように選択される）；構造式III （式中、Ｒ₁、Ｒ₅、Ｒ₉、およびＲ₁₃は、独立に直接の結合またはＣＨ₂であり；Ｒ₂、Ｒ₂ ’、Ｒ₄、Ｒ₄’、Ｒ₆、Ｒ₆’、Ｒ₈、Ｒ₈’、Ｒ₁₀、Ｒ₁₀’、Ｒ₁₂、Ｒ₁₂’、Ｒ₁₄、Ｒ₁₄’、Ｒ₁₆、Ｒ₁₆’は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｒ₃ 、Ｒ₇、Ｒ₁₁、Ｒ₁₅は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したものである）；（式中、Ｒ₁、Ｒ₅、Ｒ₉、およびＲ₁₃は、独立に直接の結合またはＣＨ₂であり；Ｒ₂、Ｒ₂ ’、Ｒ₄、Ｒ₄’、Ｒ₆、Ｒ₆’、Ｒ₇、Ｒ₉、Ｒ₉’、Ｒ₁₁、Ｒ₁₁’、Ｒ₁₃、Ｒ₁₃’ 、Ｒ₁₄は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｒ₃とＲ₁₀は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したものである）；（式中、Ｒ₁、Ｒ₄、Ｒ₈、Ｒ₁₂は、独立に直接の結合またはＣＨ₂であり；Ｒ₂、Ｒ₂’Ｒ₃ 、Ｒ₅、Ｒ₅’、Ｒ₇、Ｒ₉、Ｒ₉’、Ｒ₁₁、Ｒ₁₁’、Ｒ₁₃、Ｒ₁₃’、Ｒ₁₄ は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｒ₁₀は、Ｈまたはアルキルであり；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したものである）；（式中、Ｒ₁、Ｒ₄、Ｒ₇、およびＲ₁₀は、独立に直接の結合またはＣＨ₂であり；Ｒ₂、Ｒ₂ ’、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₅’、Ｒ₆、Ｒ₈、Ｒ₈’、Ｒ₉、Ｒ₁₁、Ｒ₁₁’、およびＲ₁₂は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したものである）；（式中、Ｒ₁、Ｒ₄、Ｒ₈、およびＲ₁₁は、独立に直接の結合またはＣＨ₂であり；Ｒ₂、Ｒ₃ 、Ｒ₃’、Ｒ₅、Ｒ₅’、Ｒ₇、Ｒ₇’、Ｒ₉、Ｒ₁₀、Ｒ₁₀’、Ｒ₁₂、Ｒ₁₂’、およびＲ₁₃は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｒ₆は水素およびアルキルであり；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したものである）；（式中、Ｒ₁、Ｒ₄、Ｒ₇、Ｒ₁₀は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₃’、Ｒ₅ 、Ｒ₅’、Ｒ₆、Ｒ₈、Ｒ₉、Ｒ₉’、Ｒ₁₁、Ｒ₁₁’、およびＲ₁₂は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したものである）；（式中、Ｒ₁、Ｒ₃、Ｒ₄、およびＲ₆は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｒ₂とＲ₅は、Ｈ、アルキル、ＳＯ₃Ｈ、ＮＯ₂、ＮＨ₂、ハロゲン、ＣＯＯＨ、およびＮ（Ｒ）₃ ⁺ （Ｒは前記で定義したものである）よりなる群から独立に選択され；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したものである）；（式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄は、Ｈ、アルキル、ＳＯ₃Ｈ、ＮＯ₂、ＮＨ₂、ハロゲン、ＣＯＯＨ、およびＮ（Ｒ）₃ ⁺（Ｒは前記で定義したものである）よりなる群から独立に選択され；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したものである）；構造式IV （式中、Ｒ₁、Ｒ₁’、Ｒ₂、Ｒ₂’、Ｒ₃、Ｒ₃’、Ｒ₄、Ｒ₄’、Ｒ₅、Ｒ₅’、Ｒ₆、Ｒ₆’、Ｒ₇、およびＲ₇’は、Ｈ、アルキル、アルコキシ、ＮＯ₂、アリール、ハロゲン、ＮＨ₂、ＳＯ₃Ｈよりなる群から独立に選択され、Ｒ₆、Ｒ₆’、Ｒ₇、およびＲ₇ ’は、Ｒ₆、Ｒ₆’、Ｒ₇、およびＲ₇’の別の１つと互いに一緒になって環状の基（好ましくは、炭素原子６個のシクロアルキル基）を形成し、Ｍ¹はＦｅ、ＮｉまたはＶであり；Ｘ、Ｙ、およびＺは、前記で定義したものである）；の化合物の加速分解有効量を、薬剤学的に許容される担体とともに、好ましくは、単位投与型で投与することを特徴とする、上記方法である。本発明はまた、ヒトでのペルオキシ亜硝酸塩の加速分解に有効な量の前記で定義した式Ｉ、II、III Ａ、III Ｂ、III Ｃ、III Ｄ、III Ｅ、III Ｆ、III Ｇ、 III ＨＮＯ化合物を、単位投与型、好ましくは経口単位投与型で、薬剤学的に許容される担体とともに投与することを特徴とする、自然のバックグランド分解速度を越える速度でペルオキシ亜硝酸塩が加速分解されることにより有利な影響を受けるヒトの疾患の治療のための薬剤組成物でもある。Ｘ、Ｙ、およびＺは、それぞれ薬剤学的に許容される陰イオンまたは陽イオンである。図面の簡単な説明図１：金属錯体によるペルオキシ亜硝酸塩の分解の触媒性を示す、Ｆｅ（III ）ＴＭＰＳとＦｅ（III）ＴＰＰＳについてのｋ_obs対触媒濃度のプロット。図２：ペルオキシ亜硝酸塩によるＣｕＺｎＳＯＤの不活性化を示すプロット。図３：ペルオキシ亜硝酸塩分解触媒Ｆｅ（III）ＴＭＰｙＰを用いる、ペルオキシ亜硝酸塩による不活性化に対するＣｕＺｎＳＯＤの濃度依存性保護を示すプロット。図４：ペルオキシ亜硝酸塩分解触媒Ｆｅ（III）ＴＭＰＳを用いる、ペルオキシ亜硝酸塩による不活性化に対するＣｕＺｎＳＯＤの濃度依存性保護を示すプロット。図５：ペルオキシ亜硝酸塩介在ヒト微小血管内皮細胞傷害。９６ウェル細胞培養プレートで増殖させた⁵¹Ｃｒ標識ＨＭＤＥ細胞上へ、真正のペルオキシ亜硝酸塩を重層した。４５分後、特異的細胞傷害の量を測定し、最小二乗回帰線によりペルオキシ亜硝酸塩濃度と関係つけた。値は、３重測定の平均±標準誤差である。図６：細胞傷害測定法で真正のペルオキシ亜硝酸塩の添加の直前に、ペルオキシ亜硝酸塩触媒であるＦｅ（ＴＭＰｙＰ）（三角）とＮｉ（II）ジエノＮ₄）ＰＦ₆（丸）をＨＤＭＥ細胞に加えた。４５分後、特異的細胞傷害の量を、培地中に放出された放射標識物の量により測定した。値は、３重測定の平均±標準誤差である。＊ダネット（Dunnett）のｔ検定によるｐ＜０．０１対０μＭ対照。図７：Ｆｅ（ＴＭＰｙＰ）によるヒト大動脈内皮細胞に対する好中球介在性傷害の阻害。細胞傷害測定法でＴＮＦ／Ｃ５ａによる活性化の直前に、ペルオキシ亜硝酸塩触媒であるＦｅ（ＴＭＰｙＰ）を好中球に加えた。２時間後、特異的細胞傷害の量を、培地中に放出された放射標識物の量により測定した。値は、３重測定の平均±標準誤差である。＊ダネット（Dunnett）のｔ検定によるｐ＜０．０１対０μＭ対照。図８：ＰＮ（ペルオキシ亜硝酸塩）−介在傷害からのＲＡＷ細胞のＮｉおよびＦｅ触媒保護の比較。ＲＡＷ２６４．７細胞を、９６ウェルプレートのウェル当たり約２×１０５で蒔いた。アラマーブルー（Alamar Blue）を蛍光生成物に代謝する細胞の能力により測定した時、ＰＮ−介在傷害が完全に保護されるまで、増加する濃度のＮｉ触媒またはＦｅＴＭＰｙＰの存在下で、各ウェルの細胞にＰＮ（３６０マイクロモル）を加えた。各条件は、４ウェルの平均±標準誤差である。図９：Ｆｅ触媒によるＰＮ−介在ＲＡＷ細胞傷害からの保護。以下の触媒の存在下でまたは非存在下で、細胞を５００マイクロモルのＰＮで処理した：ＦｅＴＭＰｙＰ、ＦｅＴＭＰＳ、ＦｅＴＰＰＳ。細胞の生存活性（viability）は、本文と図の凡例１、２および３に記載したように追跡した。値は、４重測定の平均±標準誤差である。図１０：ラットの空腸で１時間後（例えば、ＬＰＳ抗原投与の４時間後）に観察した放射標識アルブミンの漏れ（血漿血管外遊出、μｌ／ｇ組織）の増加に及ぼす、大腸菌（E.coli）リポ多糖（ＬＰＳ、３mg/kg、静脈内ボーラス）で抗原投与３時間後に投与したＦｅＴＭＰＳ、ＦｅＴＭＰｙＰ、またはＺｎＴＭＰｙＰ（３０mg/kg、静脈内ボーラス）の作用。結果は、４〜８匹のラットの平均±標準誤差として示してある。発明の詳細な説明本発明で使用される「アルキル」という用語は、単独の場合も組合せの場合も、１〜約２２個の炭素原子、好ましくは約１〜約１８個の炭素原子、最も好ましくは約１〜約１２個の炭素原子を含有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基を意味する。そのような基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソアミル、ヘキシル、オクチル、ノニル、デシル、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル、オクタデシルおよびエイコシルがあるが、これらに限定されない。「アリール」という用語は、単独の場合も組合せの場合も、アルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、複素環、アルコキシアリール、アルカリール、アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、アミン、シアノ、ニトロ、アルキルチオ、フェノキシ、エーテル、トリフルオロメチルなどから選択される１つまたはそれ以上の置換基を随時含有するフェニルまたはナフチル基であり、例えば、フェニル、ｐ−トシル、４−メトキシ−フェニル、４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）フェニル、４−フルオロフェニル、４−クロロフェニル、４−ヒドロキシフェニル、１−ナフチル、２−ナフチルなどがある。「アラルキル」という用語は、単独の場合も組合せの場合も、１つの水素原子は本明細書で定義されるアリール基により置換される、本明細書で定義されるアルキルまたはシクロアルキル基（例えば、ベンジル、２−フェニルエチルなど）を意味する。「複素環」という用語は、環中の炭素原子以外の少なくとも１つの別の種類の原子を含有する環構造を意味する。最も一般的な他の種類の原子としては、窒素、酸素およびイオウがある。複素環の例としては、ピロリジニル、ピペリジニル、イミダゾリジニル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロチエニル、フリル、チエニル、ピリジル、キノリル、イソキノリル、ピリダジニル、ピラジニル、インドリル、イミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、ピラゾリル、ピリジニル、ベンゾキサジアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、トリアゾリルおよびテトラゾリル基があるが、これらに限定されない。「シクロアルキル」という用語は、単独の場合も組合せの場合も、３〜約１０個、好ましくは３〜約８個、最も好ましくは３〜約６個の炭素原子を含有するシクロアルキル基を意味する。そのようなシクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロフェチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、およびペルヒドロナフチルがあるが、これらに限定されない。「シクロアルケニル」という用語は、単独の場合も組合せの場合も、１つまたはそれ以上の２重結合を有するシクロアルキル基を意味する。シクロアルケニル基の例としては、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロオクテニル、シクロペンタジエニル、シクロヘキサジエニル、およびシクロオクタジエニルがあるが、これらに限定されない。式は構造式Ｉである本発明に有用な大環状リガンドは、いくつかのリガンドの調製について当該分野で公知の一般的合成法に従って調製することができる。例えば、以下を参照： 1）Campestrini，S.；Meunier，B．Inorg．Chem．31，1999-2006，(1992). 2）Robert，A.；Loock，B.；Momenteau，M.；Meunier，B．Inorg．Chem．30，70 6-711，(1991). 3）Lindsey，J.S.；Wagner，R.W．J．Org．Chem．54，828-836，(1989). 4）Zipplies，M.F.；Lee，W.A.;Bruice，T.C．J．Am．Chem．Soc．108，4433-44 45，(1986). 式は構造式IIである本発明に有用な大環状リガンドは、いくつかのリガンドの調製について当該分野で公知の一般的合成法に従って調製することができる。例えば、以下を参照： 1）いくつかの化合物は、ポルフィリン・プロダクツ社（Prophyrin Products，I nc.）（ユタ州ローガン（Logan））から市販されている。 2）Y.L．Meltze; Phthalocyanine Technology in Chemical Process Reviews No .42;ノイエスデータ社（Noyes Data Corp）、ニュージャージー州パークリッジ( 1970). 式は構造式IIIである本発明に有用な大環状リガンドは、いくつかのリガンドの調製について当該分野で公知の一般的合成法に従って調製することができる。例えば、以下を参照： 1）Doedken，V.L.；Molin-Case，J.；Whang，Y-A; J.C.S.Chem．Comm．337-338, (1973) 2）Martin，J.G.；Cummings，S.C.；Inorg．Chem．12，1477-1482，(1973). 3）Riley，D.P.；Stone，J.A.；Busch，D.H．J．Am．Chem．Soc．98，1752-1762 ,(1976). 4）Dabrowiak，J.C.；Merrell，P.H.；Stone，J.A.；Busch，D.H.；J．Am．Chem .Soc．95，6613-6622，(1973). 5）Riley，D.P.;Busch，D.H.；Inorg．Chem．23，3235-3241，(1984). 6）Watkins，D.D.；Riley，D.P.；Stone，J.A.；Busch，D.H.；Inorg．Chem．15 ,387-393，(1976). 7）Riley，D.P.；Stone，J.A.；Busch，D.H.；J．Am．Chem．Soc．99，767-777, (1977). 式は構造式IVである本発明に有用な大環状リガンドは、いくつかのリガンドの調製について当該分野で公知の一般的合成法に従って調製することができる。例えば、以下を参照： 1）Diehl，H.；Hoch，C.C.；Inorganic Synthesis Vol 3.p 196．McGraw-Hill,N ew York(1950). 2）Srinivasan，K.；Michaud，P.；Kochi，J.K.；J．Am．Chem．Soc．108，2309 -2320，(1986). 3）Samsel，E.G.；Srinivasan，K.；kochi，J.K．J．Am．Chem．Soc．107，7606 -7617，(1985). 本発明の化合物は、１つまたはそれ以上の不斉炭素を有してもよく、従って光学異性体の形、およびそのラセミ体もしくは非ラセミ体混合物の形で存在することができる。光学異性体は、従来法（例えば、光学活性のある酸で処理することによりジアステレオ異性体塩を形成させる）により、ラセミ体を分割することにより得られる。適当な酸の例としては、酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、ジトルオイル酒石酸および樟脳スルホン酸があり、結晶化させてジアステレオ異性体の混合物を分離し、次にこれらの塩から光学活性のある塩基を放出させる。光学異性体分割の別の方法は、鏡像異性体の分離を最大にするように随時選択される、キラルクロマトグラフィーカラムの使用である。さらに別の方法としては、本発明の１つまたはそれ以上の二級アミン基を、活性型の光学的に純粋な酸または光学的に純粋なイソシアン酸塩と反応させることにより、共有ジアステレオ異性体分子を合成する方法がある。合成されたジアステレオ異性体は、従来法、例えばクロマトグラフィー、蒸留、結晶化または昇華により分離し、次に加水分解して鏡像異性体的に純粋なリガンドを提供する。光学活性のある本発明の化合物は、光学活性のある出発物質（例えば、天然のアミノ酸）を用いて同様に得られる。本発明のペルオキシ亜硝酸塩分解触媒活性のための金属錯体をスクリーニングするために、酸性過酸化水素と亜硝酸ナトリウムを反応させてペルオキシ亜硝酸塩を調製し、そのナトリウム塩として単離して、次に、ハーフペニーとロビンソン（Halfpenny and Robinson）、J．Chem．Soc.，1952，928-938に記載のようにＮａＯＨで急速に反応を停止させる。ペルオキシ亜硝酸塩は３０２nmで吸収極大を有し、吸光係数は１６７０Ｍ−１cm−１である。従って、ストップ−フロー分光学的測定法で３０２nmの吸光度で分解を追跡することにより、ペルオキシ亜硝酸塩の分解を観察することができる。すなわち、金属錯体を加えることによる自然の分解速度を越える速度でペルオキシ亜硝酸塩の分解が観察されることは、本発明の化合物の証拠である。さらに、ペルオキシ亜硝酸塩は濃度依存性にＣｕＺｎＳＯＤ酵素を不活性化することが見いだされた。ペルオキシ亜硝酸塩はＭｎＳＯＤを不活性化することも知られている（イスチロポウロス（Ischiropoulos）ら、Archives of Biochemis try and Biophysics，Vol．298，No．2，November 1，pp．431-437，1992の「スーパーオキシドジスムターゼに触媒されるペルオキシ亜硝酸塩介在チロシンニトロ化」を参照）ため、本発明は、ペルオキシ亜硝酸塩による不活性化からＣｕＺｎＳＯＤを保護する化合物を提供する。こうして本発明の化合物は、ＳＯＤ酵素の存在により有利に影響される、ヒトの疾患の治療に有用であることが証明されている。すなわち、本発明の治療方法は、ペルオキシ亜硝酸塩により引き起こされるか、または心筋梗塞、脳卒中または自己免疫疾患のようなＳＯＤ酵素の保護的存在の欠如により引き起こされる疾患を対象とする。後者の疾患は、ペルオキシ亜硝酸塩の存在にも関連することが証明されている。これらの金属錯体は、本明細書に記載のペルオキシ亜硝酸塩に及ぼす、その分解の測定により、本発明の範囲内であることが見いだされている。化合物および誘導体および中間体について前記の式で企図されるものと同等物は、でこれに対応する化合物、および化合物の互変異性体のような同じ一般的性質、および種々のＲ基の１つまたはそれ以上は本明細書で定義した置換基の単純な変種（例えば、記載したものより高級なアルキル基である置換基）、またはトシル基は他の窒素または酸素保護基であるか、またはＯ−トシル基はハロゲン化物であるような同じ一般的性質を有する化合物である。１以外の電荷を有する陰イオン（例えば、炭酸塩、リン酸塩、およびリン酸水素）は、錯体の活性に悪影響を与えない限り、１の電荷を有する陰イオンの代わりに使用することができる。しかし１以外の電荷を有する陰イオンを使用すると、前述の錯体の一般的構造が少し変化する。さらに置換基が水素である時または水素でもよい時、その位置における水素以外の置換基（例えば、ヒドロカルビル基または、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、および類似の官能基）の正確な化学的性質は、全体の活性および／または合成方法に悪影響を与えない限り、決定的に重要ではない。前述の文献に記載の化学反応は、本発明の化合物の調製に最も広い形での応用に適した変更を加えて一般的に開示してある。従ってまれに前述の反応が、開示された範囲内の各化合物に対して、記載されたように応用できないこともある。これが発生する化合物は、当業者は容易に理解できるであろう。このような場合、当業者に公知の従来法の修飾（例えば、妨害する基の適当な保護、別の従来試薬に変更、または反応条件の修飾など）を行って反応をうまく進めるか、または本明細書に開示もしくは他の従来法の反応を、本発明の対応する化合物の調製に使用することができるであろう。すべての調製法において、すべての出発物質は公知であるか、または公知の出発物質から容易に調製できる。本発明をさらに説明しなくても前述の記載から、当業者は本発明を最大限に利用することができるであろう。従って以下の具体的な態様は、本発明を単に例示するのみであり、決して本発明を限定するものと考えてはならない。例使用した試薬は特に明示しない限り、入手したままで使用した。５，１０，１５，２０−テトラキス（Ｎ−メチル−４−ピリジル）ポルフィリンテトラトシル酸塩とアセタト−５，１０，１５，２０−テトラキス（４−スルファトフェニル）ポルフィリン鉄（III）は、ポルフィリン・プロダクツ社（Prophyrin Products，Inc.）（ユタ州ローガン（Logan））から購入した。鉄（III）クエン酸錯体と鉄（III）ＥＤＴＡ錯体は、アルドリッチケミカル社（Aldrich Chemica l Co.）（ウィスコンシン州ミルウォーキー）から購入した。すべての核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは、バリアン（Varian）ＶＸＲ−３００またはバリアン（Varian）ＶＸＲ−４００分光光度計を用いて得られた。定性および定量質量スペクトルは、フィニガン（Finnigan）ＭＡＴ９０、フィニガン（Finnigan）４５００およびＶＧ４０−２５０Ｔ分光光度計を用いて得られた。例１アセタト（５，１０，１５，２０−テトラキス（４−メチル−４−ピリジル）ポルフィナト）鉄（III）テトラ−トシル酸塩、Ｆｅ（III）ＴＭＰｙＰの合成磁気攪拌棒の付いた１００ml丸底フラスコに５，１０，１５，２０−テトラ− （Ｎ−メチル−ピリジル）ポルフィリンテトラトシル酸塩（Ｈ₂ＴＭＰｙＰ）（０．３０ｇ，０．２３１ミリモル）を充填し、最小量のメタノールに溶解した。無水Ｆｅ（ＯＡｃ）₂（０．１２０ｇ，０．６９２ミリモル）を加え、次に直ちに２５mlの氷酢酸と１００μlのトリエチルアミンを加えた。反応混合物を加熱還流した。可視分光光度計により反応を追跡し、４２６nmに金属化ポルフィリンを示す強いバンドが出現したことで反応が完了したと決定した。メタノールを留去し、固体を再び最小量のメタノールに取った。混合物を真空下で濃縮して総量を約２０mlとし、この時点で未反応のＦｅ（ＯＡｃ）₂が沈殿した。遠心分離して固体を分離し、母液をセファデックスＬＨ−２０カラム（２×３０cm）でメタノールを溶出液として用いてクロマトグラフィーを行なった。最初の着色バンドを集め、溶媒を留去してＦｅ（III）ＴＭＰｙＰ（ＯＡｃ）を沈殿させて、エーテルで粉砕して８５mg（２６％）の目的の生成物（質量スペクトル解析で確認）を得た。例２５，１０，１５，２０−テトラキス（３，５−ジスルホン化メシチル）ポルフィリンオクタナトリウム塩（Ｈ₂ ＴＭＰＳ）の合成バジャー（Badger）の方法（G.M．Badger，R.A．Jones，R.L．Laslett Aust． J．Chem.，17，1022，［1964］）により、ピロールとメシトアルデヒドを密封したガラス管中で縮合させるか、またはメウニエル（Meunier）の文献の調製法（M eunier et al．Nouv．J．Chim.，10，39-49，［1986］）に従って、コリジンを還流させて、５，１０，１５，２０−テトラメシチルポルフィリン（Ｈ₂ＴＭＰ）を調製した。還流ベンゼン中で２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４ −ベンゾキノンで酸化し、次に塩基性アルミナのクロマトグラフィーにより、塩素不純物を除去した。いずれの方法もほとんど同じ収率のＨ₂ＴＭＰＳを与えた。Ｈ₂ＴＭＰＳの合成は、メウニエル（Meunier）の方法（Meunier et al．Inorg ．Chem.，31，1999-2006，［1992］）に若干変更を加えて行なった。還流冷却器と攪拌棒の付いた２５mlの丸底フラスコに、Ｈ₂ＴＭＰ（１．０ｇ，１．２８ミリモル）を充填した。オレウム（Ｈ₂ＳＯ₄＋１８〜２３％ＳＯ₃）１０mlを加え、反応物を８０℃で４０分間加熱した。反応物を冷却し、氷浴中で冷却した１００mlの水に内容物を滴下して加えた。得られた水溶液を２ＮＮａＯＨ（約２２０ml）でｐＨ６〜７に中和した。留去して水を除去し、得られた固体残渣を最小量のメタノールで粉砕した。得られた沈殿物を濾過して除去し、濾液をさらに真空下で６０mlに濃縮した。得られた沈殿物（さらに、Ｎａ₂ＳＯ₄）を遠心分離により分離した。上澄液を蒸発乾固し、１．５９ｇ（７８％）の目的のスルホン化ポルフィリンを得た。例３アセタト−５，１０，１５，２０−テトラキス（３，５ジスルホネートメシチル）ポルフィリンマンガン（III）オクタナトリウム塩（Ｍｎ（III）ＴＭＰＳ）の合成Ｈ₂ＴＭＰＳ（０．２ｇ，０．１２５ミリモル）とＭｎ（ＯＡｃ）₂（０．２９６ｇ，１．７１ミリモル）を３８mlの水に溶解し、８５℃で１時間加熱した。可視分光光度計により反応を追跡し、遊離塩基ポルフィリンのソーレー（Soret）バンド（４１６nm）がＭｎ（III）ポルフィリン種に特徴的な４６８nmの新しいバンドで置換された時、反応が完了したと決定した。真空下で反応物の容量を１０mlと減少させ、ダウエックス（Dowex）５０ＷＸ−８陽イオン交換樹脂（Ｈ＋型）でクロマトグラフィーを行い、過剰のＭｎ（ＯＡｃ）₂を除去した。溶出液の容量を１０mlに減少させ、１．０ＮのＮａＯＨでｐＨ８．０に調整した。得られた溶液を蒸発乾固させた。残渣を７mlのメタノールに取り、セファデックスＬＨ−２０カラムでメタノールを溶出液として用いてクロマトグラフィーを行なった。紫色のバンドを集め、蒸発乾固して、０．１７５ｇ（９０％）の目的の金属化ポルフィリン（質量スペクトル解析で確認）を得た。例４アセタト−５，１０，１５，２０−テトラキス（３，５ジスルホネートメシチル）ポルフィリン鉄（III）オクタナトリウム塩（Ｆｅ（III）ＴＭＰＳ）の合成Ｈ₂ＴＭＰＳ（０．２ｇ，０．１２５ミリモル）とＦｅ（ＯＡｃ）₂（０．３００ｇ，１．７２ミリモル）を３８mlの水に溶解した。反応混合物を還流し、可視分光光度計により反応を追跡して、反応が完了したと決定した。反応完了後、反応物を濾過し、反応物の容量を１０mlに減少させた。橙褐色の反応混合物を、ダウエックス（Dowex）５０ＷＸ−８陽イオン交換樹脂（Ｈ＋型）を通過させて、過剰のＦｅ（ＯＡｃ）₂を除去した。溶出液の容量を１０mlに減少させ、１．０ＮのＮａＯＨでｐＨ７．５に調整した。得られた溶液を蒸発乾固させた。残渣を７mlのメタノールに取り、セファデックスＬＨ−２０カラムでメタノールを溶出液として用いてクロマトグラフィーを行なった。橙褐色のバンドを蒸発乾固して、０．１７０ｇ（７２％）の目的のＦｅポルフィリン（質量スペクトル解析で確認）を得た。例５アセタト−５，１０，１５，２０−テトラキス（３，５−ジスルホネートメシチル）ポルフィリンニッケル（III）オクタナトリウム塩（Ｎｉ（III）ＴＭＰＳ）の合成Ｈ₂ＴＭＰＳ（０．１ｇ，０．０６３ミリモル）とＮｉ（ＯＡｃ）₂（０．１５６ｇ，０．６３ミリモル）を２０mlの水に溶解し、３時間還流した。反応混合物はＮｉポルフィリンを示す橙色であった。可視分光光度計により反応が完了したことを確認した。反応物の容量を５mlに減少させ、ダウエックス（Dowex）５０ＷＸ−８陽イオン交換樹脂（Ｈ＋型）でクロマトグラフィーを行い、過剰のＮｉ（ＯＡｃ）₂を除去した。溶出液の容量を５mlに減少させ、１．０ＮのＮａＯＨでｐＨ８．０に調整した。得られた溶液を蒸発乾固させた。残渣を７mlのメタノールに取り、セファデックスＬＨ−２０カラムでメタノールを溶出液として用いてクロマトグラフィーを行なった。溶媒を除去して生成物を単離して、０．０９０ｇ（８５％）の目的の金属化ポルフィリン（質量スペクトル解析で確認）を得た。例６Ｎ，Ｎ’−エチレンビス（３，３’−ジメトキシサリチリデンアミン）リガンドの合成コールマン（Coleman）の方法（Coleman et al．Inorg．Chem.，20，700，［1 981］）の変法を使用した。攪拌棒の付いた１００ml丸底フラスコに２５mlの無水エタノールと３−メトキシサリチルアルデヒド（３．０４ｇ，０．０２モル）を充填した。無水エタノールとエチレンジアミン（０．６０１ｇ，０．０１モル）の溶液を新たに調製し、サリチルアルデヒドに一回で加えた。反応物を１時間還流すると、この間黄橙色の沈殿物が現れた。生成物を濾過して集め、１００ml の熱アルコールで洗浄し、真空下で乾燥して４．４ｇ（９８％）の目的の生成物を得た。例７クロロ［Ｎ，Ｎ’−エチレンビス（３，３’−ジメトキシサリチリデンアミナト）鉄（III）の合成Ｎ，Ｎ’−エチレンビス（３，３’−ジメトキシサリチリデンアミン）（０．０５ｇ，０．１８８ミリモル）を２０mlのメタノールに溶解し、Ｆｅ（Ｃｌ）₃ （０．０３０ｇ，０．１８８ミリモル）を１回で加えた。溶液を１時間還流した後、真空下で溶媒を除去した。紫色の残渣を最小量の水で洗浄した。固体を１０ mlのメタノールに取り、濾過して溶媒を除去して再度単離して、０．０４７ｇ（７０％）の目的の鉄錯体を得た。例８１２、１４−ジメチル−１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカ−１１，１３−ジエナトニッケル（II）ヘキサフルオロホスフェート、Ｎｉ（II）（［１４］ジエノＮ₄）ＰＦ₆の合成マーチンとカミングス（Martin and Cummings）の方法（Martin，J.G.；Cummi ngs，S.C．Inorg．Chem.，12，1477-1482，［1973］）に従って、Ｎｉ（II）（［１４］ジエノＮ₄）ＰＦ₆を調製した。化合物を、質量スペクトル解析により性状解析し、目的の構造に一致することが証明された。例９１２、１４−ジメチル−１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカ−１１，１４−ジエンニッケル（II）ヘキサフルオロホスフェート、Ｎｉ（II）（［１４］ジエンＮ₄）（ＰＦ₆）₂、Ｎｉ（II）（［１４］ジエンＮ₄）（ＰＦ₆）₂の合成マーチンとカミングス（Martin and Cummings）の方法（Martin，J.G.；Cumming s，S.C．Inorg．Chem.，12，1477-1482，［1973］）に従って、Ｎｉ（II）（［１４］ジエノＮ₄）（ＰＦ₆）₂からＮｉ（II）（［１４］ジエンＮ₄）（ＰＦ₆）₂ を調製した。例１０６，８，１５、１７−テトラメチルジベンゾ［ｂ，ｉ］［１，４，８，１１］テトラアザテトラデカ−２，４，７，９，１２，１４−ヘキサエナトニッケル（II ）、Ｎｉ（II）［１４］１２エンＮ₄の合成ゲンドケン（Goendken）らの方法（Goendken et．al J.C.S．Chem．Comm.，33 7-338，［1973］）に従って、Ｎｉ（II）［１４］１２エンＮ₄を調製した。錯体を、質量スペクトル解析により性状解析し、目的の構造に一致することが証明された。例１１本例は、これらの試験で使用されるペルオキシ亜硝酸塩ストック溶液の調製法を示す。ヒューズ（Hughs）の方法（Hughs，M.N.；Nicklin，H.G．J．Chem．Soc .，(A)，450-452，［1968］）を修飾した方法を使用した。０℃の０．６ＭのＮａＮＯ₂の激しく攪拌した溶液１０mlに、等量のＨＣｌ／Ｈ₂Ｏ₂溶液（０．６ＭのＨＣｌと０．７ＭのＨ₂Ｏ₂）を加え、次に直ちに０．７５ＭのＮａＯＨ１０mlを加えた。得られた黄色の溶液を、２５mgのＭｎＯ₂ で３分間処理し、直ちに濾過した。濾液を−２０℃のフリーザー中で数日間保存すると、フラスコの上部に薄い黄色のバンドとして、ペルオキシ亜硝酸ナトリウムが分別された。黄色のバンドを集めて、約１mlの２８０mM ペルオキシ亜硝酸ナトリウム溶液を得た。溶液を−２０℃のフリーザー中で数日間攪拌して保存してもペルオキシ亜硝酸塩はほとんど分解しなかった。例１２本例は、ストップトフロー動力学的解析により化合物がペルオキシ亜硝酸塩分解触媒であることを決定するために使用した方法を記載する。すべての分析は、リレー（Riley）の方法（Riley，D.P．et．al．Anal．Bioch em，196，344-349，［1991］）により超純水を用いて調製した生化学的等級のリン酸カリウム緩衝液（カルビオケム（Calbiochem））を使用して行なった。動力学的測定は、データ採取と操作のためにＯＬＩＳ−ＲＳＭ−１０００オペレーティングシステムを用いて、オリスラピッド走査ストップトフロー分光光度計（OL IS Rapid Scanning Stopped-Flow Spectrometer）（オンライン・インストルメント・システムズ社（On-Line Instrument Systems In.，）、ジョージア州ボガート（Bogart））により行なった。ペルオキシ亜硝酸塩は３０２nmに強い吸収（吸光係数＝１６７０Ｍ^-1cm^-1）を有し、ペルオキシ亜硝酸ナトリウムについて一次かつプロトンについて一次の反応（Hughs，M.N.；Nicklin，H.G．J．Chem.Soc .，(A)，450-452，［1968］）で、３７℃、ｐＨ７．４でｔ_1/2＝１．９秒（Beck man，J.S．et．al．Proc．Natl．Acad．Sci．USA，87，1620-1624，［1990］）で分解することが証明されている。すなわち、典型的な実験でペルオキシ亜硝酸ナトリウムの自然のバックグランド分解速度は、以下のように測定した。５０mMのＮａＯＨ中の２４mMのペルオキシ亜硝酸ナトリウムのストック溶液を、少容量シリンジに入れ、１００mMのリン酸カリウムｐＨ＝７．４をストップトフロー分光光度計の大容量シリンジに入れた。すべてのストップトフロー測定は２２±１℃で行なった。試料コンパートメントに溶液を注入すると、ストックペルオキシ亜硝酸ナトリウムが約２５倍希釈される。ペルオキシ亜硝酸ナトリウムの分解はペルオキシ亜硝酸塩について一次であり、ｔ_1/2＝５．２秒でｋ_obs＝１．３９×０．１５秒^-1である。触媒性ペルオキシ亜硝酸塩分解活性を試験するために、金属錯体を１００mMリン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ＝７．４に溶解し、大容量シリンジに入れ、ペルオキシ亜硝酸塩の分解を前述のように追跡した。試験した錯体の触媒速度定数（ｋ^catＭ^-1秒^-1 ）は、錯体濃度を変化させ、ｋ_obs対［錯体］をプロットして求めた（表１）。ｋ_obsは、各触媒濃度で３つのストップトフロー解析の平均から得られた。種々の化合物についてのこの分析の代表的データを図１に示す。Ｍｎ、Ｆｅ、Ｃｏ、ＣｕおよびＮｉの単純な２価および３価塩酸塩は、０．０５０mMおよびこれ以下の濃度で触媒性ペルオキシ亜硝酸塩分解活性を示さなかった。例１３本例は、ペルオキシ亜硝酸塩によるＣｕＺｎ−スーパーオキシドジスムターゼ（ＣｕＺｎＳＯＤ）の不活性化、および例１２で活性があることが証明されたペルオキシ亜硝酸塩分解触媒は、ペルオキシ亜硝酸塩による不活性化に対してＣｕＺｎＳＯＤを保護することを例示する。ウシ肝臓ＣｕＺｎＳＯＤのストック溶液（ＤＤＩファーマシューティカルズ社（DDI Pharmaceuticals Inc.）、カリホルニア州マウンテンビュー）は、約１．０ｇの酵素を１０mlの５０mMリン酸カリウム緩衝液ｐＨ７．４に溶解して調製した。過酸化物を不均化するこの溶液の活性は、リレー（Riley）の方法（Riley， D.P．et．al．Anal．Biochem，196，344-349，［1991］）により測定した。すべてのｋ_obsは、キネティック・インストルメンツ社（Kinetic Instruments Inc. ）（ミシガン州アンアーバー（Ann Arbor））製のストップトフロー分光光度計をＭＡＣ II ＣＸパーソナルコンピューターに接続して求めた、３回の測定値の平均である。ペルオキシ亜硝酸塩によるＣｕＺｎＳＯＤの不活性化ペルオキシ亜硝酸塩とＥＤＴＡ溶液添加後の最終測定液量が１０mlになるように、１．０mlのストックＣｕＺｎＳＯＤ溶液を５０mMのリン酸カリウム緩衝液ｐＨ７．４に分注して、ペルオキシ亜硝酸塩を不活性化した。これらの測定溶液に、種々の量のペルオキシ亜硝酸塩（２５mMストック溶液）を、測定中のペルオキシ亜硝酸塩の最終濃度が、０、２５、５０、７５、および１００μＭなるように加えた。ペルオキシ亜硝酸塩に点火後、１００μlの２．５mMストックＥＤＴＡ溶液を各測定溶液に添加して、ＥＤＴＡの最終濃度を２５０μＭにした。次に各溶液を、スーパーオキシドジスムターゼ活性についてストップトフロー解析により測定した。ペルオキシ亜硝酸塩濃度に対するｋ_obsのプロットを図２に示す。２５０μＭＥＤＴＡのみと１００μＭ亜硝酸カリウムもしくは硝酸カリウムの存在下でＣｕＺｎＳＯＤを含有する対照反応物では、ＣｕＺｎＳＯＤ活性は低下しなかった。例１４ペルオキシ亜硝酸塩分解触媒を用いるペルオキシ亜硝酸塩による不活性化からのＣｕＺｎＳＯＤの保護種々のペルオキシ亜硝酸塩分解触媒を添加した以外は、前述のように測定溶液を調製した。最終溶液量は、１０mlに維持した。すなわち測定溶液に、Ｆｅ（II I）ＴＭＰｙＰ（最終濃度０．５と１．０μＭ）とＦｅ（III）ＴＭＰＳ（最終濃度１．０と５．０μＭ）を加えた。次に溶液を種々の量のペルオキシ亜硝酸塩で処理して、最終濃度が０、２５、５０、７５および１００μＭとなるようにした。ペルオキシ亜硝酸塩で処理した後、ＥＤＴＡを最終濃度２５０μＭになるように加えた。次にＳＯＤ活性について溶液を測定した。種々の触媒濃度における［ペルオキシ亜硝酸塩］に対するｋ_obsのプロットは、Ｆｅ（III）ＴＭＰｙＰ（図３）とＦｅ（III）ＴＭＰＳ（図４）の保護作用を示す。使用した測定条件下で、Ｆｅ（III）ＴＭＰｙＰとＦｅ（III）ＴＭＰＳは、過酸化物の不均化について有効な触媒ではないことが証明された。例１５インビトロ評価：材料：ヒト組換え腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−ａ）は、ジェンザイム社（Genzyme Co rporation）（マサチューセッツ州ケンブリッジ）から得た。ヒト組換え補体Ｃ５ａとＬ−アルギニン（Ｌ−ａｒｇ）は、シグマケミカル社（Sigma Chemical C ompany）（ミズーリ州セントルイス）から購入した。５０mMのＮａＯＨ中の真正ペルオキシ亜硝酸塩は、前述のように調製した。内皮細胞の単離：新生児包皮からのヒト皮膚微小血管内皮細胞（ＨＤＭＥ細胞）は、既に記載されたように調製した（Marks，R.M.，Czerniecki，M.，and Pen ny，R．In Vit ．Cell．Devel．Biol.，21，627-635［1985］）。簡単に説明すると、数人のドナーからの新生児包皮を７０％エタノール中で洗浄し、小片に切り、次にトリプシン（０．６％；アービン・サイエンティフィック（Irvine Scien tific）、カリホルニア州サンタアナ）とＥＤＴＡ（１％；シグマケミカル社（S igma Chemical Company）、ミズーリ州セントルイス）に７−９分間浸漬した。組織の非ケラチン化表面をメスの刃で押さえつけて、内皮細胞を取り出した。３５％Percoll 密度勾配（シグマケミカル社（Sigma Chemical Company）（ミズーリ州セントルイス）で細胞を遠心分離した。２５０×ｇで１０分間遠心分離後、１．０４８g/ml未満の密度に対応する細胞を集めて、ゼラチン被覆組織培養プレートに入れた（０．１％；シグマケミカル社（Sigma Chemical Company）（ミズーリ州セントルイス）。汚染している細胞を、毎日ツベルクリンシリンジに取り付けた２５ゲージを用いて取り除いた。精製した内皮細胞は、３０％ヒト血清（バイオウィタカー社（BioWittaker，Inc．）、メリーランド州ウォーカーズビル（Walkersville））、１０ng/ml ＥＧＦ（コラボラティブ・バイオメディカル・プロダクツ社（Collaborative Biomedical Products）、マサチューセッツ州ベッドフォード）、２mML−グルタミン（アービン・サイエンティフィック（Irvin e Scientific）、カリホルニア州サンタアナ）、および２５０μg/mlジブチルｃＡＭＰ、１μg/mlヒドロコルチゾン（シグマケミカル社（Sigma Chemical Compa ny）（ミズーリ州セントルイス）を補足したＭＣＤＢ１３１（内皮基底培地；クロネチックス社（Clonetics Corporation））中で、第５継代（約８倍の集団の倍加）まで増殖させた。これらの細胞を、内皮細胞マーカー（第VIII因子免疫反応性、細胞関連アンギオテンシン変換酵素活性、および低密度リポプロテイン摂取）について試験して、正常の内皮細胞として性状解析した。マイコプラズマが陰性であると試験された後、以後の測定で使用するために、第５継代の細胞を１０％ＤＭＳＯ中で冷凍保存した（コリエル・インスチチュート（Coriel Institu te）、ニュージャージー州カムデン（Camden））。好中球の調製：ヒト好中球を、健常志願者の末梢血から単離した（Look，D.C.， Rapp，S.R.，Keller，B.T.，and Holtzman，M.J．Am．J．Physiol.，263，L79-L 87［1992］）。ＥＤＴＡ抗凝固剤を加えた血液を、１工程密度遠心分離を用いて分離した（ピーエムエヌ・プレップ（PMN Prep）、ロビンズ・サイエンティフィック（Robbins Scientific）、カリホルニア州サニーデール）後、ハンクス緩衝液生理食塩水（ＨＢＳＳ；シグマケミカル社（Sigma Chemical Company）、ミズーリ州セントルイス）で数回洗浄し、赤血球の低張溶解を行なった。調製物は、＞９５％の好中球を含有し、トリパンブルー（ギブコ・ラボラトリーズ（GIBCO Laboratories）、ニュージャジー州グランドアイランド）排除試験で＞９５％生存であった。精製した好中球を、０．０１％ＢＳＡ（マイルズ社（Miles，Inc. ）、イリノイ州カンカキー（Kankakee））と３００μＭのＬ−ａｒｇを補足したＨＢＳＳ（ＨＢＳＳＢＡ）中で５×１０６細胞／mlの濃度で懸濁した。内皮細胞傷害測定：内皮細胞に対する刺激した好中球またはペルオキシ亜硝酸塩の細胞毒性作用を、モルドウ（Moldow）（Moldow et．al．Methods Enzymol.，1 05，378-385，［1985］）が記載したように⁵¹Ｃｒ放出測定法を用いて測定した。第５継代のＨＤＭＥ細胞を、９６ウェルマイクロタイタープレート中で約１〜２×１０⁴細胞／cm²（約９０％のコンフルエンス）の密度まで増殖させ、１０μ Ci/ml［⁵¹Ｃｒ］クロム酸ナトリウム（アマシャム社（Amersham Corporation）、イリノイ州アーリントンハイツ）で１８時間標識した。ＨＤＭＥ細胞を、１００U/mlのヒト組換え腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−ａ；ジェンザイム社（Ge nzyme Corporation）、マサチューセッツ州ケンブリッジ）で４時間サイトカイン活性化を行ない、次にＨＢＳＳＢＡで２回洗浄した。好中球の懸濁液を２．５ ×１０⁵／ウェルで加え、１５分間沈降させた。他に特に明記しない場合は、好中球は２５U/mlのＴＮＦ−ａで１０分間プライムし、次に３μg/mlの補体成分Ｃ５ａ（シグマケミカル社（Sigma Chemical Company）、ミズーリ州セントルイス）で活性化した。３７℃で２時間インキュベートを続けた。真正のペルオキシ亜硝酸塩を使用した時は、好中球の非存在下で加えた。ペルオキシ亜硝酸塩は、５０mMＮａＯＨ中の２５mMストックから直接ＨＤＭＥ細胞層に添加し、最終濃度０〜８００μＭを得た。測定法の前にすべてのインヒビターをＨＢＳＳＢＡ中で新たに作成し、ペルオキシ亜硝酸塩の添加または好中球活性化の前にウェル容量の１／１０量として加えた。 ⁵¹１Ｃｒ放出は、各ウェルの上澄液（可溶性画分）を吸引して測定した。単層をＨＢＳＳＢＡで静かに洗浄して、吸着していない細胞を取り、洗浄液を可溶性画分とともにプールした。各ウェルの吸着した細胞を１ＮＮａＯＨで可溶化し、別の試験管に移した。両画分をガンマシンチレーション分光光度計で分析した。結果は、以下のように⁵¹Ｃｒ放出割合として表した：％放出＝ｃｐｍ（可溶性＋非吸着／ウェル当たりの総ｃｐｍ）×１００。特異的細胞毒性は、刺激した好中球による⁵¹Ｃｒ放出と非刺激好中球（典型的には上記の自発的放出の１〜２％）による⁵¹Ｃｒ放出の間の差を反映する。結果は、２〜３回の別々の測定で確認し、データは代表値として示した。図５から明らかように、内皮細胞にペルオキシ亜硝酸塩を添加すると容量依存的に細胞傷害が増加し、ペルオキシ亜硝酸塩の細胞毒性作用を示している。ストップトフロー分析によりペルオキシ亜硝酸塩分解触媒であることが証明された錯体は、ペルオキシ亜硝酸塩介在細胞傷害からの保護を与えることができる（図６い。これらの錯体は、容量依存的に好中球介在細胞傷害に対して保護することもできる（図７）。例１６ペルオキシ亜硝酸塩分解触媒を用いる細胞保護測定法のプロトコール：ペルオキシ亜硝酸塩（ＰＮ）介在傷害と死滅から細胞を保護するＰＮ触媒の効果を迅速に評価するために、細胞生存活性測定法を確立した。ペルオキシ亜硝酸塩の抗原投与は、細胞に外から与えた合成ＰＮのパルスよりなっていた。ＰＮ介在傷害から細胞を保護するＰＮ触媒の効果をよりよく評価するために、最大の障害（１００％）を引き起こすことが決定されているある量のペルオキシ亜硝酸塩（５０mMのＮａＯＨ中）を、触媒の存在下でまたは非存在下で細胞の各ウェルに外来パルスとして加えた。ＮａＯＨ自体は毒性はなかった。細胞（ＲＡＷ２６４．７細胞またはＰ８１５肥満細胞腫細胞；アメリカンタイプカルチャーコレクション（（American Type Culture Collection）、メリーランド州ロックビル）を、９６ウェル組織培養プレートにコンフルエンスになるように蒔いた。各ウェルをダルベッコーリン酸緩衝化生理食塩水（ＤＰＢＳ；ギブコ（GIBCO）BRL、ニューヨーク州グランドアイランド）で２回洗浄して、外来性ペルオキシ亜硝酸塩と反応する可能性のある蛋白や他の血清成分を除去する。次に各ウェルに２００μlのＤＰＢＳを加える。次に別のウェルに増加する濃度でＰＮを入れ、細胞の生存活性を追跡する。最大の細胞の死が観察される濃度を、次に触媒保護評価のために使用する。次に、増加する濃度の触媒を含有するリン酸緩衝化生理食塩水（２００μl）を、細胞の各ウェルに入れる。次に、ＰＮの最大量を細胞のすべてのウェルに入れる。１５分後、各ウェルから培地を除去し、フェノールレッドを含まず１０％胎児牛血清を補足したアールズ（Earles）最小基本培地で一晩回収させるか、またはアラマーブルー（Alamar Blue）生存活性試験（アラマー・サイエンティフック社（Alamar Scientific，Inc．）、カリホルニア州サクラメント）を用いて、その日にミトコンドリアの完全性について細胞のプレートを測定する。いずれの場合も、細胞は３７℃で５％ＣＯ₂中でインキュベートされる。細胞傷害は以下のように測定する。簡単に説明すると、１０％ＦＢＳ含有アールズＭＥＭ中の１０％アラマーブルー（ｖ／ｖ）を細胞の各ウェルに１〜２時間加える。色素の細胞の代謝により、生存細胞の数に正比例する蛍光生成物が得られる。さらに、蛍光代謝物の産生は２時間以上直線状である。次に、細胞の各ウェルからの１００μlの調整培地中の蛍光生成物の量を、ＩＤＥＸＸ蛍光プレートリーダー（ゲインの設定：１％）で、５４５nmで励起した後５７５nmの蛍光波長で測定する。生存活性は、絶対蛍光単位として求めるか、または未処理の細胞（１００％）で得られる値のパーセントとして求める。図８から明らかなように、Ｆｅ−およびＮｉ−配位触媒は、齧歯類の単球−マクロファージＲＡＷ２６４．７株を保護することができた（この方法では、ＰＮは細胞生存活性５０％を引き起こす容量で加えた）。ＲＡＷ細胞とＰ８１５細胞への増加する濃度のＰＮの比較からは、ペルオキシ亜硝酸塩介在傷害に対する感受性の差の証拠は得られなかった（データは示していない）。しかし図９に示すように、Ｆｅ−ＴＭＰｙＰ、ＦｅＴＭＰＳ、およびＦｅＴＰＰＳにより細胞はかなり保護され、一方Ｈ₂ＴＭＰｙＰとＺｎＴＭＰｙＰは比較的無効であり（データは示していない）、これは触媒能がないことと一致する。ＰＮの後に触媒を加えると、傷害から細胞をレスキューすることは不可能であり（データは示していない）、これはＰＮによる酸化的傷害から直接細胞を保護する触媒の能力を示している。例１７インビボ評価：カラゲニン誘導足浮腫．ペルオキシ亜硝酸塩触媒のインビボでの作用を、まずカラゲニン誘導足浮腫について試験した。炎症のインビボのモデルとしてこれを選択した理由は、１）炎症応答はＮＯＳインヒビターにより、および２）スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）により、阻止されることという知見に基づく。これはＮＯとＯ₂が参加していることを示す。雄のスプラーグ−ドーレイ（Sprag ue-Dawley）ラットをハーランスプラーグ−ドーレイ（Harlan Sprague-Dawley）（インディアナ州インディアナポリス）から購入した。雄のスプラーグ −ドーレイ（Sprague-Dawley）ラット（１７５−２００ｇ）の右後足の足底にカラゲニン（０．８５％食塩水中１％の懸濁液を０．１ml）を注射した。カラゲニン注射の直前に体積記録器により足の体積を測定し、次に１〜６時間まで１時間毎に測定した。浮腫は、各ラットについて注射前の値に対するカラゲニン注射後の足の体積の増加（ml）として表した。ラットの足底にカラゲニンを注射した１時間後、活性または不活性ペルオキシ亜硝酸塩触媒をボーラス静脈内注射した；次に６時間目まで１時間毎に足の膨張を評価した。これらの薬剤で得られる相対的阻害割合（％）を表２に要約する。これらの実験条件下で、不活性化ペルオキシ亜硝酸塩触媒Ｈ₂ＴＭＰＳ、ＺｎＴＭＰｙＰもしくはＭｎＴＰＰＳ（すべて３０mg/kgで投与した）またはＦｅＣｌ₃ （５mg/kg、ｎ＝６）は、浮腫形成を阻害しなかった。結果は、同じ時点での対照ラットで得られる値と比較した足浮腫の阻害％として表した。各点は、ｎ＝６のラットの平均±標準誤差である。ラットでのエンドトキシンによる小腸傷害の誘導：敗血症ショック後に起きる多臓器不全症候群（ＭＯＦＳ）は、ほとんどの場合致命的である。ＭＯＦＳの「原動力」は、消化管系、特に小腸である。広範な血管収縮により、小腸粘膜に広範な虚血が認められる。虚血と低酸素症により、動物（ラット、ネコ、イヌ）やヒトの両方で粘膜病変を引き起こす。粘膜病変の原因は低酸素症である。再潅流の間（例えば、最初の重症の血管収縮の後）、Ｏ₂ ^-が放出され、消化管系の粘膜病変において重要な役割を果たす。内蔵動脈閉塞に誘導されるショックによる小腸傷害は、スーパーオキシドジスムターゼにより防止され、ＬＰＳ誘導小腸炎症は、一酸化窒素経路の非選択的インヒビターにより阻害される（Boughton-Smith， N.K et al.，1993）。過剰のＮＯ産生が、低血圧、血管収縮物質に対する低応答性、および敗血症ショックに関連する心血管虚脱において重要な病理学的役割を有することを示唆する、実質的な実験的および臨床的証拠がある。さらに一酸化窒素シンターゼインヒビターは、エンドトキシンに引き起こされる小腸傷害を防止する。我々は、エンドトキシンによるラットの小腸傷害のモデルを開発し、ペルオキシ亜硝酸塩触媒の治療的投与の効果を評価した。小腸の血管透過性は、ＬＰＳ（３mg/kg、血清型Ｏ１１１：Ｂ４）または等張生理食塩水とともに静脈内投与した［¹²⁵Ｉ］−標識ウシ血清アルブミン（［¹²⁵Ｉ］−ＢＳＡ）（０．５ml ；０．５μCi）の空腸組織への漏出として測定した。ＬＰＳ投与の４時間後、空腸組織の切片を結紮し取り出した。小腸組織を迅速に洗浄し、ブロットして水分を除き、重量を測定した。クエン酸三ナトリウム（最終濃度０．３１８％）の入った試験管に血液（０．５ml）を集め、遠心分離（１０、０００ｇ×１０分）して血漿を調製した。全組織の切片と一定量の血漿（１００μl）中の［¹²⁵Ｉ］− ＢＳＡ含量をガンマカウンターで測定した。小腸組織中の血漿の総量は、μl/g として表した。小腸組織中の血管内容量中の変化は、別の群のラットで空腸を取り出す２分前に［¹²⁵Ｉ］−ＢＳＡを静脈内投与して測定した。放射標識物の組織含量と血漿含量を測定し、血管内容量はμl/g組織として表した。この値を、血漿漏出試験から得られた値から引いて、小腸血漿アルブミン漏出の尺度を得た。ＬＰＳ投与後（４時間）、血漿漏出は有意に（Ｐ＜０．０１）増加した（７７±１０から２２４±１８μl/g、ｎ＝８）。図１０に示すように、ＬＰＳ注射の３時間後のＦｅＴＭＰＳまたはＦｅ−ＴＭＰｙＰ（３０mg/kg、静脈内、ｎ＝４）の投与は、１時間後に放射標識アルブミン漏出の低下を引き起こした。これに対して、ＬＰＳ注射の３時間後の不活性のペルオキシ亜硝酸塩触媒であるＺｎＴＭＰｙＰ（３０mg/kg、静脈内、ｎ＝４）の投与は、１時間後に放射標識アルブミン漏出を阻害しなかった（図１０）。このデータは、空腸組織の組織学的観察により支持された。食塩水で処理したラットと比較するとＬＰＳは、ひだや絨毛の破壊をともなう大きな空腸傷害を引き起こした。ＦｅＴＭＰＳまたはＦｅＴＭＰｙＰ（３０mg/kg、静脈内）で処理したラットの空腸では、ＬＰＳ誘導性傷害はそれほど大きくはなかった。すなわち、本発明の化合物または錯体である化合物は、新規であり、多くの炎症性疾患や障害を治療するのに使用することができる。例えば、虚血臓器への再潅流障害（例えば虚血心筋への再潅流傷害）、炎症性腸疾患、リウマチ様関節炎、骨関節炎、高血圧、乾癬、臓器移植拒絶、臓器保存、インポテンツ、放射性誘導性傷害、喘息、動脈硬化症、血栓症、血小板凝集、癌転移の薬物治療の副作用、インフルエンザ、脳卒中、火傷、外傷、急性膵臓炎、腎孟腎炎、肝炎、自己免疫疾患、インスリン依存性糖尿病、播種性血管内凝固、脂肪塞栓症、成人および幼児呼吸窮迫、および新生児出血。ＩＬ−２治療を受けている患者はしばしば、発熱、悪寒、低血圧、毛細管漏出症候群（capillary leak sydrome）、および多臓器不全の証拠（特に、腎不全や胆汁鬱帯黄疸）などの生命に危険のある副作用を発症する。ＩＬ−２は、腫瘍壊死因子、インターロイキン１および６などのサイトカインの複雑なネットワークを誘導する。従ってＩＬ−２治療を受けた患者は、エンドトキシン血症患者に似ている（低血圧、ＴＮＦレベルの上昇、サイトカインレベルの上昇など）。これらのいくつかは、フリーラジカルの放出およびｉＮＯＳを誘導し、その結果ＮＯを放出する。最近の論文は、腎細胞癌や悪性黒色腫のＩＬ−２治療を受けている患者でｉＮＯＳが誘導されることを示している（Hibbs，J.B．et al.，ＩＬ−２治療を受けている患者におけるＬ−アルギニンからのサイトカイン誘導性一酸化窒素合成の証拠、J．Clin．Invest．Vol 89，867-877）。本発明の化合物または錯体の活性は、前述のストップトフロー動力学的解析を用いて証明することができる。ストップトフロー動力学的解析は、水中のペルオキシ亜硝酸塩の分解速度を追跡するための正確で直接的な方法である。ストップトフロー動力学的解析は、触媒性ペルオキシ亜硝酸塩分解活性のために錯体をスクリーニングするのに適しており、ストップトフロー動力学的解析により示されるように、本発明の活性錯体は、前述の疾患や障害の治療に関係することが証明されている。すなわち、本発明は、ペルオキシ亜硝酸塩を分解するのに加速された速度有効量の金属錯体（好ましくは、金属錯体は前記で定義したものである）を単位投与型で投与することを特徴とする、自然のバックグランド分解速度以上の速度でペルオキシ亜硝酸塩が分解されることにより有利な影響を受ける疾患（好ましくは、ヒトの疾患）の治療方法と組成物に関する。このような方法や組成物は、正常の生物学的に有利な機構に悪影響を与えることなく、これらの疾患を治療する。単回または複数回の投与で宿主に投与される１日の総量は、例えば約１〜約１００mg/kg体重であり、より普通には約３〜３０mg/kgである。単位投与型組成物は、１日の投与量を構成する複数回の投与量を含有する。複数回の回数は、好ましくは単位投与型の約３０mg/kgの約１〜３回／日である。この投与量の血清濃度は、約１５μＭ〜１．５mMであり、好適には３〜３００μＭである。単位投与型を作成するのに担体物質と組合せられる活性成分の量は、治療される宿主および具体的な投与方法により変わる。本発明の化合物および／または組成物で疾患を治療するための投与方法は、種種の要因（患者のタイプ、年齢、体重、性別、食事および病状、疾患の重症度、投与経路、薬剤学的状況、例えば使用される特定の化合物の活性、効力、薬物動力学および毒性の特徴、ドラッグデリバリーシステムを使用するかいなか、化合物は薬剤組合せの一部として投与されるか）に従って選択される。すなわち実際に使用される投与方法は、大きく変動し、従って前述の好適な投与方法とは異なることもある。本発明の化合物は、経口、非経口、吸入スプレー、直腸、または局所的に、必要に応じて従来の非毒性の薬剤学的に許容される担体、補助剤、および賦形剤を含有する投与単位で投与される。局所投与は、経皮パッチまたはイオントフェオエーシス用具などの経皮的投与を用いることもできる。本明細書において使用する非経口投与とは、皮下注射、静脈内注射、筋肉内注射、胸骨内注射、または点滴がある。注射用製剤、例えば無菌の注射用の水性もしくは油性懸濁液は、適当な分散剤もしくは湿潤剤および懸濁剤を用いて、公知の方法に従って調製される。無菌の注射用製剤もしくは懸濁剤はまた、非毒性の非経口投与として許容される希釈剤または溶媒（例えば１，３−ブタンジオール溶液として）中の、無菌の注射用溶液もしくは懸濁液であってもよい。使用可能な許容される賦形剤や溶媒には、水、リンゲル液、および等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに、無菌の固定油が溶媒または懸濁媒体として従来法で使用される。この目的のために、合成モノ− またはジグリセリドなどの任意の刺激性の低い固定油を使用することができる。さらにオレイン酸のような脂肪酸を、注射剤の調製に使用することができる。薬剤の直腸投与のための坐剤は、常温で固体であるが直腸内温度で液体である（従って、直腸内で溶融して薬剤を放出する）適当な非刺激性の賦形剤（例えば、ココアバターおよびポリエチレングリコール）に薬剤を混合することにより調製することができる。経口投与用の固体投与型には、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、顆粒およびゲル剤がある。このような固体投与型において、活性化合物は、少なくとも１つの不活性の希釈剤（例えば、ショ糖、乳糖またはデンプン）と混合される。このような投与型はまた、通常、不活性の希釈剤以外の追加の物質（例えば、ステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤）を含有してもよい。カプセル剤、錠剤、および丸剤の場合は、投与型は緩衝剤を含有してもよい。錠剤や丸剤は、さらに腸溶コーティングで調製することもできる。経口投与用の液体投与型は、当該分野で普通に使用される希釈剤（例えば水）を含有する、薬剤学的に許容されるエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ、エリキシルを含有してもよい。このような組成物はまた、補助剤（例えば、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、甘味剤、香味剤および芳香剤）を含有してもよい。本発明の化合物は単独の活性薬剤として投与することもできるが、これらはまた、本発明の１つまたはそれ以上の化合物と組合せて、または治療の標的である具体的な病状に対して有効であることが知られている１つまたはそれ以上の化合物と組合せて使用することもできる。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９６年５月７日【補正内容】請求の範囲１．単位投与型の、ペルオキシ亜硝酸塩分解触媒である金属錯体を投与することを特徴とする、自然のバックグランド分解速度を越える速度でペルオキシ亜硝酸塩が分解されることにより有利な影響を受ける疾患に罹っているヒトの疾患の治療方法。２．疾患は、虚血性再潅流、癌の薬物治療による副作用、炎症、敗血症、脳卒中、多発性硬化症またはパーキンソン病である、請求の範囲第１項に記載の方法。３．疾患または症状は、急性または慢性の炎症である、請求の範囲第２項に記載の方法。４．疾患は敗血症である、請求の範囲第２項に記載の方法。５．疾患は脳卒中である、請求の範囲第２項に記載の方法。６．疾患は虚血性再潅流である、請求の範囲第２項に記載の方法。７．化合物は、Ｍｎ、Ｆｅ、ＮｉおよびＶよりなる群から選択される金属のリガンド構造である、請求の範囲第１項に記載の方法。８．リガンドは、Ｍｎ、Ｆｅ、またはＮｉである金属との大環状である、請求の範囲第７項に記載の方法。９．リガンドは、金属を含有するポルフィリンまたはアザ大環状物質である、請求の範囲第４項に記載の方法。 10．投与単位当たり、ペルオキシ亜硝酸塩の分解に有効な量の金属錯体を含む、ペルオキシ亜硝酸塩に関連した、虚血性再潅流、敗血症、慢性もしくは急性の炎症、成人型呼吸窮迫症候群、癌、気管支肺異形成、癌の薬物治療による副作用、心血管系疾患、糖尿病（バナジウムポルフィリン錯体による治療については含まない）、多発性硬化症、大腸炎や特異的神経障害を含む、ヒトの疾患の治療のための投与単位型の薬剤組成物であって、金属錯体は、式構造式Ｉ（式中、Ｒ₃、Ｒ₆、Ｒ₉、またはＲ₁₂は、Ｈ，アルキル、アルケニル、ＣＨ₂ＣＯＯＨ、フェニル、ピリジニル、およびＮ−アルキルピリジルよりなる群から独立に選択され、ここで、フェニル、ピリジニル、およびＮ−アルキルピリジルは、炭素原子で結合しているであり、そしてフェニルは、ハロゲン、アルキル、アリール、ベンジル、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ₂ 、ＳＯ₃Ｈ、ＮＯ₂、ＮＨ₂、Ｎ（Ｒ）₃ ⁺、ＮＨＣＯＲ’（Ｒは、水素、アルキル、アリール、アルカリールであり、Ｒ’はアルキルである）により随時置換され；ピリジニルは、ハロゲン、アルキル、アリール、ベンジル、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ₂ 、ＳＯ₃Ｈ、ＮＯ₂、ＮＨ₂、Ｎ（Ｒ）₃ ⁺またはＮＨＣＯＲ’（ＲとＲ’は前記で定義したものである）により随時置換され；Ｎ−アルキルピリジン環は、ハロゲン、アルキル、アリール、ベンジル、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ₂、ＳＯ₃Ｈ、ＮＯ₂、ＮＨ₂、Ｎ（Ｒ）₃ ⁺またはＮＨＣＯＲ’（ＲとＲ’は、前記で定義したものである）により随時置換され；Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₁₀、またはＲ₁₁は、Ｈ、アルキル、アルケニル、カルボキシアルキル、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＮＯ₂、ヒドロキシアルキル、およびＳＯ₃Ｈよりなる群から独立に選択されるか、またはＲ₁とＲ₂は一緒に５〜８個の環を形成し；ＸとＹは、任意の単座配位または多座配位リガンドもしくはリガンド系またはその対応する陰イオンから得られる、リガンドまたは電荷中和性陰イオンであり、ハロゲン化物、オキソ、アコ、ヒドロキソ、アルコール、フェノール、ジオキシゲン、ペルオキソ、ヒドロペルオキソ、アルキルペルオキソ、アリールペルオキソ、アンモニア、アルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロシクロアルキルアミノ、ヘテロシクロアリール、アミノ、アミンオキシド、ヒドラジン、アルキルヒドラジン、アリールヒドラジン、酸化窒素、シアン化物、シアン酸塩、チオシアン酸塩、イソシアン酸塩、イソチオシアン酸塩、アルキルニトリル、アリールニトリル、アルキルイソニトリル、アリールイソニトリル、硝酸塩、亜硝酸塩、アジド、アルキルスルホン酸、アリールスルホン酸、アルキルスルホキシド、アリールスルホキシド、アルキルアリールスルホキシド、アルキルスルフェン酸、アリールスルフェン酸、アルキルスルフィン酸、アリールスルフィン酸、アルキルチオールカルボン酸、アリールチオールカルボン酸、アルキルチオールチオカルボン酸、アリールチオールチオカルボン酸、アルキルカルボン酸、アリールカルボン酸、尿素、アルキル尿素、アリール尿素、アルキルアリール尿素、チオ尿素、アルキルチオ尿素、アリールチオ尿素、アルキルアリールチオ尿素、硫酸塩、亜硫酸塩、重硫酸塩、重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、チオ亜硫酸塩、ヒドロ亜硫酸塩、アルキルホスフィン、アリールホスフィン、アルキルホスフィンオキシド、アリールホスフィンオキシド、アルキルアリールホスフィンオキシド、アルキルホスフィンスルフィド、アリールホスフィンスルフィド、アルキルアリールホスフィンスルフィド、アルキルホスフォン酸、アリールホスフォン酸、アルキルホスフィン酸、アリールホスフィン酸、アルキル亜ホスフィン酸、アリール亜ホスフィン酸、リン酸塩、チオリン酸塩、亜リン酸塩、ピロリン酸塩、三リン酸塩、リン酸水素塩、リン酸二水素塩、アルキルグアニジノ、アリールグアニジノ、アルキルアリールグアニジノ、アルキルカルバメート、アリールカルバメート、アルキルアリールカルバメート、アルキルチオカルバメート、アリールチオカルバメート、アルキルアリールチオカルバメート、アルキルジチオカルバメート、アリールジチオカルバメート、アルキルアリールジチオカルバメート、重炭酸塩、炭酸塩、過塩素酸塩、塩素酸塩、亜塩素酸塩、次亜塩素酸塩、過臭素酸塩、臭素酸塩、亜臭素酸塩、次亜臭素酸塩、テトラハロマンガン酸塩、テトラフルオロホウ酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ヘキサフルオロアニトモネート（hexafluoroanit monate）、次亜リン酸塩、ヨウ素酸塩、過ヨウ素酸塩、メタホウ酸塩、テトラアリールホウ酸塩、テトラアルキルホウ酸塩、酒石酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、サッカリン酸塩、アミノ酸、ヒドロキサム酸、チオトシル酸塩、およびイオン交換樹脂もしくは系の陰イオンよりなる群から独立に選択される；ただし、ＸとＹを含有する錯体が実質的に正の電荷を有する場合は、Ｚは独立にＸまたはＹである対イオンであり、あるいは、ＸとＹを含有する錯体が実質的に負の電荷を有する場合は、Ｚはアルカリ陽イオンおよびアルカリ土類陽イオン、有機陽イオン（例えば、アルキルまたはアルキルアリールアンモニウム陽イオン）から選択される対イオンである；およびＭは、Ｍｎ、Ｆｅ、ＮｉおよびＶよりなる群から選択される）；構造式II （式中、Ｒ’はＣＨまたはＮであり；Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、Ｒ₁₀、Ｒ₁₁、Ｒ₁₂、Ｒ₁₃、Ｒ₁₄、Ｒ₁₅、およびＲ₁₆は、Ｈ、ＳＯ₃Ｈ、ＣＯＯＨ、ＮＯ₂、ＮＨ₂、およびＮ−アルキルアミノよりなる群から独立に選択され；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したものである）；構造式III （式中、Ｒ₁、Ｒ₅、Ｒ₉、およびＲ₁₃は、独立に直接の結合またはＣＨ₂であり；Ｒ₂、Ｒ₂’、Ｒ₄、Ｒ₄’、Ｒ₆、Ｒ₆’、Ｒ₈、Ｒ₈’、Ｒ₁₀、Ｒ₁₀’、Ｒ₁₂、Ｒ₁₂’、Ｒ₁₄、Ｒ₁₄’、Ｒ₁₆、Ｒ₁₆’は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｒ₃、Ｒ₇、Ｒ₁₁ 、Ｒ₁₅は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したものである）；（式中、Ｒ₁、Ｒ₅、Ｒ₉、およびＲ₁₃は、独立に直接の結合またはＣＨ２であり；Ｒ₂、Ｒ₂ ’、Ｒ₄、Ｒ₄’、Ｒ₆、Ｒ₆’、Ｒ₇、Ｒ₉、Ｒ₉’、Ｒ₁₁、Ｒ₁₁’、Ｒ₁₃、Ｒ₁₃’ 、Ｒ₁₄は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｒ₃とＲ₁₀は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したものである）；（式中、Ｒ₁、Ｒ₄、Ｒ₈、Ｒ₁₂は、独立に直接の結合またはＣＨ２であり；Ｒ₂、Ｒ₂’、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₅’、Ｒ₇、Ｒ₉、Ｒ₉’、Ｒ₁₁、Ｒ₁₁’、Ｒ₁₃、Ｒ₁₃’、Ｒ₁₄は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｒ₁₀は、Ｈまたはアルキルであり；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したものである）；（式中、Ｒ₁、Ｒ₄、Ｒ₇、およびＲ₁₀は、独立に直接の結合またはＣＨ２であり；Ｒ₂、Ｒ₂ ’、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₅’、Ｒ₆、Ｒ₈、Ｒ₈’、Ｒ₉、Ｒ₁₁、Ｒ₁₁’、およびＲ₁₂は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したものである）；（式中、Ｒ₁、Ｒ₄、Ｒ₈、およびＲ₁₁は、独立に直接の結合またはＣＨ２であり；Ｒ₂、Ｒ₃ 、Ｒ₃’、Ｒ₅、Ｒ₅’、Ｒ₇、Ｒ₇’、Ｒ₉、Ｒ₁₀、Ｒ₁₀’、Ｒ₁₂、Ｒ₁₂’、およびＲ₁₃は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｒ₆は水素およびアルキルであり；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したものである）；（式中、Ｒ₁、Ｒ₄、Ｒ₇、Ｒ₁₀は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₃’、Ｒ₅ 、Ｒ₅’、Ｒ₆、Ｒ₈、Ｒ₉、Ｒ₉’、Ｒ₁₁、Ｒ₁₁’、およびＲ₁₂は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したものである）；（式中、Ｒ₁、Ｒ₃、Ｒ₄、およびＲ₆は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｒ₂と５は、Ｈ、アルキル、ＳＯ３Ｈ、ＮＯ２、ＮＨ２、ハロゲン、ＣＯＯＨ、およびＮ（Ｒ）₃ ⁺ （Ｒは前記で定義したものである）よりなる群から独立に選択され；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したものである）；（式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄は、Ｈ、アルキル、ＳＯ₃Ｈ、ＮＯ₂、ＮＨ₂、ハロゲン、ＣＯＯＨ、およびＮ（Ｒ）₃ ⁺（Ｒは前記で定義したものである）よりなる群から独立に選択され；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したものである）；構造式IV （式中、Ｒ₁、Ｒ₁’、Ｒ₂、Ｒ₂’、Ｒ₃、Ｒ₃’、Ｒ₄、Ｒ₄’、Ｒ₅、Ｒ₅’、Ｒ₆、Ｒ₆’、Ｒ₇、およびＲ₇’は、Ｈ、アルキル、アルコキシ、ＮＯ₂、アリール、ハロゲン、ＮＨ₂、ＳＯ₃Ｈよりなる群から独立に選択され、Ｒ₆、Ｒ₆’、Ｒ₇、およびＲ₇ ’は、Ｒ₆、Ｒ₆’、Ｒ₇、およびＲ₇’の別の１つと互いに一緒になって環状の基（好ましくは、炭素原子６個のシクロアルキル基）を形成し、Ｍ¹はＦｅ、ＮｉまたはＶであり；Ｘ、Ｙ、およびＺは、前記で定義したものである）である、上記組成物。 11．金属錯体は、式（式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、Ｒ₁₀、Ｒ₁₁、Ｒ₁₂、Ｍ、Ｘ、Ｙ、およびＺは、請求の範囲第１０項の構造式Ｉで定義したものである）の構造式Ｉである、請求の範囲第１０項に記載の方法。 12．金属錯体は、式（式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、Ｒ₁₀、Ｒ₁₁、Ｒ₁₂、Ｒ₁₃、Ｒ₁₄、Ｘ、Ｙ、ＭおよびＺは、請求の範囲第１０項の構造式IIで定義したものである）の構造式IIである、請求の範囲第１０項に記載の方法。 13．金属錯体は、前記で定義した式の構造式III Ａ、III Ｂ、III Ｃ、III Ｄ、III Ｅ、またはIII Ｆである、請求の範囲第１０項に記載の方法。 14．金属錯体は、前記で定義した式の構造式III ＧまたはIII Ｈである、請求の範囲第１０項に記載の方法。 15．金属錯体は、式（式中、Ｒ₁、Ｒ₁’、Ｒ₂、Ｒ₂’、Ｒ₃、Ｒ₃’、Ｒ₄、Ｒ₄’、Ｒ₅、Ｒ₅’、Ｒ₆ 、Ｒ₆’、Ｒ₇、Ｒ₇’、Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭ¹は、前記で定義したものである）の構造式IVである、請求の範囲第１０項に記載の方法。 16．ＭはＦｅである、請求の範囲第１０項に記載の方法。 17．ＭはＮｉである、請求の範囲第１０項に記載の方法。 18．ＭはＶである、請求の範囲第１０項に記載の方法。 19．ＭおよびＭ¹はＭｎである、請求の範囲第１０項に記載の方法。 20．ＭはＦｅである、請求の範囲第１１項に記載の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 31/555 ＡＢＥ 9454−4ＣＡ６１Ｋ 31/555 ＡＢＥＡＢＲ 9454−4ＣＡＢＲＡＢＸ 9454−4ＣＡＢＸＡＣＤ 9454−4ＣＡＣＤＡＣＥ 9454−4ＣＡＣＥＡＣＪ 9454−4ＣＡＣＪＡＤＵ 9454−4ＣＡＤＵＡＤＺ 9454−4ＣＡＤＺＣ０７Ｆ 9/00 9450−4ＨＣ０７Ｆ 9/00 Ａ 13/00 9450−4Ｈ 13/00 Ａ 15/02 9450−4Ｈ 15/02 15/04 9450−4Ｈ 15/04 // Ｃ０７Ｄ 487/22 9271−4ＣＣ０７Ｄ 487/22 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．単位投与型の、ペルオキシ亜硝酸塩分解触媒である金属錯体を投与することを特徴とする、自然のバックグランド分解速度を越える速度でペルオキシ亜硝酸塩が分解されることにより有利な影響を受ける疾患に罹っているヒトの疾患の治療方法。２．疾患は、虚血性再潅流、癌の薬物治療による副作用、炎症、敗血症、脳卒中、多発性硬化症またはパーキンソン病である、請求の範囲第１項に記載の方法。３．疾患または症状は、急性または慢性の炎症である、請求の範囲第２項に記載の方法。４．疾患は敗血症である、請求の範囲第２項に記載の方法。５．疾患は脳卒中である、請求の範囲第２項に記載の方法。６．疾患は虚血性再潅流である、請求の範囲第２項に記載の方法。７．化合物は、Ｍｎ、Ｆｅ、ＮｉおよびＶよりなる群から選択される金属のリガンド構造である、請求の範囲第１項に記載の方法。８．リガンドは、Ｍｎ、Ｆｅ、またはＮｉである金属との大環状である、請求の範囲第７項に記載の方法。９．リガンドは、金属を含有するポルフィリンまたはアザ大環状物質である、請求の範囲第４項に記載の方法。 10．投与単位当たり、ペルオキシ亜硝酸塩の分解に有効な金属錯体の量を含む、自然のバックグランド分解速度を越える速度でペルオキシ亜硝酸塩が分解されることにより有利な影響を受ける疾患に罹っているヒトの疾患の治療するための、投与単位中の薬剤組成物。 11．請求の範囲第１項に記載の方法であって、金属錯体は、式構造式Ｉ（式中、Ｒ₃、Ｒ₆、Ｒ₉、またはＲ₁₂は、Ｈ，アルキル、アルケニル、ＣＨ₂ＣＯＯＨ、フェニル、ピリジニル、およびＮ−アルキルピリジルよりなる群から独立に選択され、ここで、フェニル、ピリジニル、およびＮ−アルキルピリジルは、炭素原子で結合しているであり、そしてフェニルは、ハロゲン、アルキル、アリール、ベンジル、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ₂ 、ＳＯ₃Ｈ、ＮＯ₂、ＮＨ₂、Ｎ（Ｒ）₃ ⁺、ＮＨＣＯＲ’（Ｒは、水素、アルキル、アリール、アルカリールであり、Ｒ’はアルキルである）により随時置換され；ピリジニルは、ハロゲン、アルキル、アリール、ベンジル、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ₂ 、ＳＯ₃Ｈ、ＮＯ₂、ＮＨ₂、Ｎ（Ｒ）₃ ⁺またはＮＨＣＯＲ’（ＲとＲ’は、前記で定義したものである）により随時置換され；Ｎ−アルキルピリジン環は、ハロゲン、アルキル、アリール、ベンジル、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ₂、ＳＯ₃Ｈ、ＮＯ₂、ＮＨ₂、Ｎ（Ｒ）₃ ⁺またはＮＨＣＯＲ’（ＲとＲ’は、前記で定義したものである）により随時置換され；Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₁₀、またはＲ₁₁は、Ｈ、アルキル、アルケニル、カルボキシアルキル、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＮＯ₂、ヒドロキシアルキル、およびＳＯ₃Ｈよりなる群から独立に選択されるか、またはＲ₁とＲ₂は一緒に５〜８個の環を形成し；ＸとＹは、任意の単座配位または多座配位リガンドもしくはリガンド系またはその対応する陰イオンから得られる、リガンドまたは電荷中和性陰イオンであり、ハロゲン化物、オキソ、アコ、ヒドロキソ、アルコール、フェノール、ジオキシゲン、ペルオキソ、ヒドロペルオキソ、アルキルペルオキソ、アリールペルオキソ、アンモニア、アルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロシクロアルキルアミノ、ヘテロシクロアリール、アミノ、アミンオキシド、ヒドラジン、アルキルヒドラジン、アリールヒドラジン、一酸化窒素、シアン化物、シアン酸塩、チオシアン酸塩、イソシアン酸塩、イソチオシアン酸塩、アルキルニトリル、アリールニトリル、アルキルイソニトリル、アリールイソニトリル、硝酸塩、亜硝酸塩、アジド、アルキルスルホン酸、アリールスルホン酸、アルキルスルホキシド、アリールスルホキシド、アルキルアリールスルホキシド、アルキルスルフェン酸、アリールスルフェン酸、アルキルスルフィン酸、アリールスルフィン酸、アルキルチオールカルボン酸、アリールチオールカルボン酸、アルキルチオールチオカルボン酸、アリールチオールチオカルボン酸、アルキルカルボン酸、アリールカルボン酸、尿素、アルキル尿素、アリール尿素、アルキルアリール尿素、チオ尿素、アルキルチオ尿素、アリールチオ尿素、アルキルアリールチオ尿素、硫酸塩、亜硫酸塩、重硫酸塩、重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、チオ亜硫酸塩、ヒドロ亜硫酸塩、アルキルホスフィン、アリールホスフィン、アルキルホスフィンオキシド、アリールホスフィンオキシド、アルキルアリールホスフィンオキシド、アルキルホスフィンスルフィド、アリールホスフィンスルフィド、アルキルアリールホスフィンスルフィド、アルキルホスフォン酸、アリールホスフォン酸、アルキルホスフィン酸、アリールホスフィン酸、アルキル亜ホスフィン酸、アリール亜ホスフィン酸、リン酸塩、チオリン酸塩、亜リン酸塩、ピロリン酸塩、三リン酸塩、リン酸水素塩、リン酸二水素塩、アルキルグアニジノ、アリールグアニジノ、アルキルアリールグアニジノ、アルキルカルバメート、アリールカルバメート、アルキルアリールカルバメート、アルキルチオカルバメート、アリールチオカルバメート、アルキルアリールチオカルバメート、アルキルジチオカルバメート、アリールジチオカルバメート、アルキルアリールジチオカルバメート、重炭酸塩、炭酸塩、過塩素酸塩、塩素酸塩、亜塩素酸塩、次亜塩素酸塩、過臭素酸塩、臭素酸塩、亜臭素酸塩、次亜臭素酸塩、テトラハロマンガン酸塩、テトラフルオロホウ酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ヘキサフルオロアニトモネート（hexafluoroanit monate）、次亜リン酸塩、ヨウ素酸塩、過ヨウ素酸塩、メタホウ酸塩、テトラアリールホウ酸塩、テトラアルキルホウ酸塩、酒石酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、サッカリン酸塩、アミノ酸、ヒドロキサム酸、チオトシル酸塩、およびイオン交換樹脂もしくは系の陰イオンよりなる群から独立に選択される；ただし、ＸとＹを含有する錯体が実質的に正の電荷を有する場合は、Ｚは独立にＸまたはＹである対イオンであり、ＸとＹを含有する錯体が実質的に負の電荷を有する場合は、Ｚはアルカリ陽イオンおよびアルカリ土類陽イオン、有機陽イオン（例えば、アルキルまたはアルキルアリールアンモニウム陽イオン）からに選択される対イオンである；およびＭは、Ｍｎ、Ｆｅ、ＮｉおよびＶよりなる群から選択される）；構造式II （式中、Ｒ’はＣＨまたはＮであり；Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、Ｒ₁₀、Ｒ₁₁、Ｒ₁₂、Ｒ₁₃、Ｒ₁₄、Ｒ₁₅、およびＲ₁₆は、Ｈ、ＳＯ₃Ｈ、ＣＯＯＨ、ＮＯ₂、ＮＨ₂、およびＮ−アルキルアミノよりなる群から独立に選択され；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したものである）；構造式III （式中、Ｒ₁、Ｒ₅、Ｒ₉、およびＲ₁₃は、独立に直接の結合またはＣＨ₂であり；Ｒ₂、Ｒ₂ ’、Ｒ₄、Ｒ₄’、Ｒ₆、Ｒ₆’、Ｒ₈、Ｒ₈’、Ｒ₁₀、Ｒ₁₀’、Ｒ₁₂、Ｒ₁₂’、Ｒ₁₄ 、Ｒ₁₄’、Ｒ₁₆、Ｒ₁₆’は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｒ₃、Ｒ₇、Ｒ₁₁、Ｒ₁₅は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したものである）；（式中、Ｒ₁、Ｒ₅、Ｒ₉、およびＲ₁₃は、独立に直接の結合またはＣＨ₂であり；Ｒ₂、Ｒ₂ ’、Ｒ₄、Ｒ₄’、Ｒ₆、Ｒ₆’、Ｒ₇、Ｒ₉、Ｒ₉’、Ｒ₁₁、Ｒ₁₁’、Ｒ₁₃、Ｒ₁₃’ 、Ｒ₁₄は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｒ₃とＲ₁₀は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したものである）；（式中、Ｒ₁、Ｒ₄、Ｒ₈、Ｒ₁₂は、独立に直接の結合またはＣＨ₂であり；Ｒ₂、Ｒ₂’、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₅’、Ｒ₇、Ｒ₉、Ｒ₉’、Ｒ₁₁、Ｒ₁₁’、Ｒ₁₃、Ｒ₁₃’、Ｒ₁ ₄ は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｒ₁₀は、Ｈまたはアルキルであり；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したものである）；（式中、Ｒ₁、Ｒ₄、Ｒ₇、およびＲ₁₀は、独立に直接の結合またはＣＨ₂であり；Ｒ₂、Ｒ₂ ’、Ｒ₃、Ｒ₅、Ｒ₅’、Ｒ₆、Ｒ₈、Ｒ₈’、Ｒ₉、Ｒ₁₁、Ｒ₁₁’、およびＲ₁₂は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したものである）；（式中、Ｒ₁、Ｒ₄、Ｒ₈、およびＲ₁₁は、独立に直接の結合またはＣＨ₂であり；Ｒ₂、Ｒ₃ 、Ｒ₃’、Ｒ₅、Ｒ₅’、Ｒ₇、Ｒ₇’、Ｒ₉、Ｒ₁₀、Ｒ₁₀’、Ｒ₁₂、Ｒ₁₂’、およびＲ₁₃は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｒ₆は水素およびアルキルであり；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したものである）；（式中、Ｒ₁、Ｒ₄、Ｒ₇、Ｒ₁₀は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₃’、Ｒ₅ 、Ｒ₅’、Ｒ₆、Ｒ₈、Ｒ₉、Ｒ₉’、Ｒ₁₁、Ｒ₁₁’、およびＲ₁₂は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したものである）；（式中、Ｒ₁、Ｒ₃、Ｒ₄、およびＲ₆は、独立にＨまたはアルキルであり；Ｒ₂と５は、Ｈ、アルキル、ＳＯ₃Ｈ、ＮＯ₂、ＮＨ₂、ハロゲン、ＣＯＯＨ、およびＮ（Ｒ）₃ ⁺ （Ｒは前記で定義したものである）よりなる群から独立に選択され；Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭは、前記で定義したものである）；（式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄は、Ｈ、アルキル、ＳＯ₃Ｈ、ＮＯ₂、ＮＨ₂、ハロゲン、ＣＯＯＨ、およびＮ（Ｒ）₃ ⁺（Ｒは前記で定義したものである）よりなる群から独立に選択され；Ｘ、Ｙ、およびＭは、前記で定義したものである）；構造式IV （式中、Ｒ₁、Ｒ₁’、Ｒ₂、Ｒ₂’、Ｒ₃、Ｒ₃’、Ｒ₄、Ｒ₄’、Ｒ₅、Ｒ₅’、Ｒ₆、Ｒ₆’、Ｒ₇、およびＲ₇’は、Ｈ、アルキル、アルコキシ、ＮＯ₂、アリール、ハロゲン、ＮＨ₂、ＳＯ₃Ｈよりなる群から独立に選択され、Ｒ₆、Ｒ₆’、Ｒ₇、およびＲ₇ ’は、Ｒ₆、Ｒ₆’、Ｒ₇、およびＲ₇’の別の１つと互いに一緒になって環状の基（好ましくは、炭素原子６個のシクロアルキル基）を形成し、Ｍ¹はＦｅ、ＮｉまたはＶであり；Ｘ、Ｙ、およびＺは、前記で定義したものである）である、上記方法。 12．金属錯体は、式（式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、Ｒ₁₀、Ｒ₁₁、Ｒ₁₂、Ｍ、Ｘ、Ｙ、およびＺは、請求の範囲第１０項の構造式Ｉで定義したものである）の構造式Ｉである、請求の範囲第１１項に記載の方法。 13．金属錯体は、式（式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、Ｒ₁₀、Ｒ₁₁、Ｒ₁₂、Ｒ₁₃、Ｒ₁₄、Ｘ、Ｙ、ＭおよびＺは、請求の範囲第１０項の構造式IIで定義したものである）の構造式IIである、請求の範囲第１１項に記載の方法。 14．金属錯体は、前記で定義した式の構造式III Ａ、III Ｂ、III Ｃ、III Ｄ、III Ｅ、またはIII Ｆである、請求の範囲第１１項に記載の方法。 15．金属錯体は、前記で定義した式の構造式III ＧまたはIII Ｈである、請求の範囲第１１項に記載の方法。 16．金属錯体は、式（式中、Ｒ₁、Ｒ₁’、Ｒ₂、Ｒ₂’、Ｒ₃、Ｒ₃’、Ｒ₄、Ｒ₄’、Ｒ₅、Ｒ₅’、Ｒ₆ 、Ｒ₆’、Ｒ₇、Ｒ₇’、Ｘ、Ｙ、ＺおよびＭ¹は、前記で定義したものである）の構造式IVである、請求の範囲第１１項に記載の方法。 17．ＭはＦｅである、請求の範囲第１１項に記載の方法。 18．ＭはＮｉである、請求の範囲第１１項に記載の方法。 19．ＭはＶである、請求の範囲第１１項に記載の方法。 20．ＭおよびＭ¹はＭｎである、請求の範囲第１１項に記載の方法。 21．ＭはＦｅである、請求の範囲第１２項に記載の方法。 22．ペルオキシ亜硝酸塩に分解のための、投与単位当たり有効量の金属錯体（金属錯体は請求の範囲第１１項で定義したものである）を投与することを特徴とする、自然のバックグランド分解速度を越える速度でペルオキシ亜硝酸塩が分解されることにより有利な影響を受ける疾患に罹っているヒトの疾患を治療するための、投与単位型の薬剤組成物。