JPH10501236A

JPH10501236A - 血栓造影用放射性標識化合物

Info

Publication number: JPH10501236A
Application number: JP8501180A
Authority: JP
Inventors: ディーン，リチャード・ティ; リスター−ジェイムズ，ジョン; シビテロ，エドガー・アール; マックブライド，ウィリアム
Original assignee: ダイアテック・インコーポレイテッド
Priority date: 1994-06-03
Filing date: 1995-06-01
Publication date: 1998-02-03
Also published as: ZA954549B; CN1230443C; EP0772460A1; CN1154071A; CN1087630C; KR100241169B1; CN1401661A; CA2191949A1; WO1995033496A1; KR970703170A; US6022520A; US5830856A

Abstract

(57)【要約】本発明は、放射性標識シンチグラフィイメージング剤およびかかる薬物を製造するための方法および試薬に関する。さらに詳しくは、本発明は、血小板ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体である血小板受容体に結合するペプチドを含む特異的結合化合物、かかる化合物を製造するための方法およびキット、および哺乳動物体における血栓をイメージするための共有結合した放射性標識結合部分を介するテクネチウム−９９ｍで標識したかかる化合物を使用するための方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】血栓造影用放射性標識化合物発明の背景１．発明の分野本発明は、シンチグラフィイメージング剤および試薬、ならびにかかる薬剤および試薬の製造方法に関する。さらに詳しくは、本発明は、テクネチウム−９９ｍ（Ｔｃ−９９ｍ）で放射性標識することができる試薬、かかる試薬の製造および放射性標識のための方法およびキット、ならびに哺乳動物体における血栓形成の部位を造影するためにかかる放射性標識試薬を用いるための方法に関する。２．従来技術の説明血栓症および血栓塞栓症、特に、深静脈血栓症（ＤＶＴ）および肺塞栓症（ＰＥ）は、有意な罹病率および脂肪率に関連する一般的な臨床状態である。合衆国において、年間約５００万人の患者が１つ以上のＤＶＴのエピソードを経験し、５００,０００ケースを超える肺塞栓症ケースが生じ、１００,０００人が死亡すると言われている（Ｊ.Ｓeabold、Ｓociety of Ｎuclear Ｍedicine Ａnnual Ｍ eeting １９９０）。すべての肺性の閉栓の９０％以上が下肢におけるＤＶＴから生じる。抗凝集療法は、十分早期に適用された場合には、有効にこれらの症状を治療しうる。しかしながら、かかる治療は、不必要な予防的適用を遠ざける危険性（例えば内出血）に関連している。血栓溶解の解決のためのより向上した手法（組み換え組織プラスミノゲンアクチベーターまたはストレプトキナーゼの投与のごとき）を急性の場合に用いることができるが、これらの手法はより大きな危険性さえ有する。そのうえ、これらの手法の効果的な臨床的適用は、血栓を生じている部位を同定して治療効果をモニターすることが必要である。これらの理由により、最も好ましくは非侵入的方法を用いるインビボでの血栓局在化についての迅速な手段が非常に要求される。深部静脈血栓部位の同定に現在用いられている方法は、コントラスト静脈造影法および圧縮Ｂモード超音波であり；用いる手法の選択は、血栓の予想される位置による。しかしながら、前者の方法は侵入的であり、療法の方法は患者にとり不愉快である。さらに、これらの方法は多くの場合、不適切であるかまたは不正確な結果を生じる。ＰＥの診断に用いられる現在の方法は胸部Ｘ線撮影、心電図（ＥＫＧ）、動脈酸素分圧、パーフュージョンならびにベンチレーション肺スキャン、および肺血管造影法である。後者（非侵入的）方法以外には、単純な診断のできるこれらの方法はない。核医学の分野では、少量の内部投与された放射性標識したトレーサー化合物（放射性トレーサーまたは放射性医薬と称される）の分布を検出することによって、ある種の病的状態が位置確認されるか、または、その程度が評価される。これらの放射性医薬の検出方法は、一般的に、造影または放射性造影方法として知られている。 ⁶⁷Ｇa、^99mＴc（Ｔc−９９ｍ）、¹¹¹Ｉn、¹²³Ｉ、¹²⁵Ｉおよび¹⁶⁹Ｙbを含む種々の放射性核種は、放射性造影に有用であることが知られている。Ｔc−９９ｍは、それが１４０keＶでガンマ線を放射し、６時間の物理的半減期を有しており、モリブデン−９９／テクネチウム−９９ｍジェネレーターを用いてon-siteで容易に利用可能であるので、好ましい核種である。インビボ投与された場合に他の組織に優先して血栓成分に特異的に結合するガンマ放射線ラジオトラクターは、血栓結合ラジオトラクターの位置（それゆえ、血栓の位置）を決定する外部シンチグラフイメージを提供することができる。血栓は、架橋フィブリン中にメッシュを形成した血液細胞（大部分は活性化血小板）から構成される。活性化血小板は、ラジオイメージングのための特に良好な標的である。なぜなら、それらは、通常は、循環血中には見いだされないからである（循環血は未活性化血小板を含有する）。活性化血小板はGPIIb/IIIa受容体をそれらの細胞表面上に発現する。この受容体に対する通常のリガンドはフィブリノーゲンである（Plow et al.,1987,Persp ectives in Inflammation,Necrosis and Vascular Cell Biology,pp.267〜275）。しかしながら、ペプチドであってもよいが必ずしもペプチドであることはない小型の合成アナログであって、この受容体に結合するアナログが開発された（例は、Klein et al.,1992,米国特許第５０８６０６９号およびEgbertson et al.,199 2,欧州特許出願ＥＰＡ０４７８３２８Ａ１）。これらの合成分枝の多くが低いアフィニティーでしか結合しないが、合成された他のものは非常に高いアフィニティーを有する（Egbertson et al.上と同じ文献）。血栓をイメージングするための放射性トレーサーを提供する試みは、従来技術で知られている。これらは、¹¹¹Ｉnまたは^99mＴc（Ｔc−９９ｍ）および¹²³Ｉ− および¹²⁵Ｉ−標識フィブリノーゲンで標識した自己血小板を含む（後者は、ガンマカメラとは対照的にガンマシンチレーションプローブで検出する）。血栓を標識するために用いられるさらなる放射性標識化合物としては、プラスミン、プスミノーゲン活性化因子、ヘパリン、フィブロネクチン、フィブリンフラグメントＥ₁および抗フィブリンおよび抗血小板モノクローナル抗体が挙げられる（Ｋn ight、１９９０、Ｓem.Ｎucl.Med．２０：５２−６７を参照）。血小板ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体に結合する能力を有する化合物は、従来技術で知られている。ＲuoslahtiおよびＰierschbacher、Ｕ.Ｓ.特許第４,５７８,０７９号には、配列Ｘ−Ａrg−Ｇly−Ａsp−Ｒ−Ｙのペプチドが開示されている（ここで、ＸおよびＹは、Ｈまたはアミノ酸であり、Ｒは、ＴhrまたはＣysであり、このペプチドは、血小板に結合する能力を有する）。ＲuoslahtiおよびＰierschbacher、Ｕ.Ｓ.特許第４,７９２,５２５号には、配列Ａrg−Ｇly−Ａsp−Ｘのペプチドが開示されている（ここで、Ｘは、Ｓer、Ｔ hrまたはＣysであり、該ペプチドは、血小板に結合する能力を有する）。Ｋleinら、１９９２、Ｕ.Ｓ.特許第５,０８６,０６９号には、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体に結合するグアニジン誘導体が開示されている。Ｐierschbacherら、１９８９、ＰＣＴ／ＵＳ８８／０４４０３には、下層への細胞付着を阻害するための構造的に制限されたＲＧＤ含有ペプチドが開示されている。Ｎuttら、１９９０、欧州特許出願第９０２０２０１５.５号には、フィブリノーゲン受容体拮抗薬である環状ＲＧＤが開示されている。Ｎuttら、１９９０、欧州特許出願第９０２０２０３０.４号には、フィブリノーゲン受容体拮抗薬である環状ＲＧＤが開示されている。Ｎuttら、１９９０、欧州特許出願第９０２０２０３１.２号には、フィブリノーゲン受容体拮抗薬である環状ＲＧＤが開示されている。Ｎuttら、１９９０、欧州特許出願第９０２０２０３２.０号には、フィブリノーゲン受容体拮抗薬である環状ＲＧＤが開示されている。Ｎuttら、１９９０、欧州特許出願第９０３１１１４８.２号には、フィブリノーゲン受容体拮抗薬である環状ペプチドが開示されている。Ｎuttら、１９９０、欧州特許出願第９０３１１１５１.６号には、フィブリノーゲン受容体拮抗薬である環状ペプチドが開示されている。Ａliら、１９９０、欧州特許出願第９０３１１５３７.６号には、フィブリノーゲン受容体拮抗薬である環状ペプチドが開示されている。Ｂarkerら，1991，PCT／US90/03788号は、血小板凝集阻害用の環状ペプチドを開示している。Ｐierschbacherら,1991,PCT/US91/02356号は、フィブリノーゲン受容体アンタゴニストである環状ペプチドを開示している。Ｄugganら,1992，欧州特許出願92304111.5号は、フィブリノーゲン受容体アンタゴニストを開示している。Ｇarlandら，1992，欧州特許出願92103861.8号および92108214.5号は、血小板凝集阻害剤としてフェニルアミド誘導体を開示している。Ｂondinellら，1993，PCT／US92/05463号は、二環式のフィブリノーゲンアンタゴニストを開示している。Ｂlackburnら，PCT/US92/08788号は、ＧＰIIｂ/IIIａ受容体に特異性を有する非ペプチジルインテグリン阻害剤を開示している。Ｅgbertsonら，1992，欧州特許出願0478328A1号は、ＧＰｎｂ/IIIａ受容体に高アフィニティーで結合するチロシン誘導体を開示している。Ｏjimaら，1992，204th Ｍeeting，Ａmer,ｃhem.Ｓoc.Ａbst.44は、血小板凝集の阻害に有用な合成マルチマーＲＤＧＦを開示している。Ｈartmanら，1992，Ｊ.Ｍed.Ｃhem.35:4640-4642は、ＧＰIIｂ/IIIａ受容体に高アフィニティーで結合するチロシン誘導体を開示している。血栓の放射性イメージング用の放射性同位体標識ペプチドは、先行技術に記載されている。Ｓtuttle，1990，PCT/GB90/00933号は、イン・ビボでＲＧＤ結合部位に結合し得る、配列アルギニン-グリシン-アスパラギン酸(ＲＧＤ)よりなる３〜１０アミノ酸を含む放射性同位体標識ペプチドを開示している。Ｒodwellら，1991，PCT/US91/03116号は「分子認識ユニット」と「エフェクタードメイン」のコンジュゲートを開示している。ペプチドを放射性標識するためのキレート化剤の使用、およびペプチドをＴc −９９ｍで標識化するための方法は、従来技術で知られており、同時係属中のＵ .Ｓ.特許出願第０７／６５３,０１２号、第０７／８０７,０６２号、第０７／８７１,２８２号、第０７／８８６,７５２号、第０７／８９３,９８１号、第０７／９５５,４６６号、第０８／０１９／８６４号、第０８／０７３／５７７号、第０８／２１０,８２２号、第０８／２３６,４０２号および第０８／２４１,６２５号に開示されており、血栓を造影するためのシンチグラフィーイメージング剤とし用いるための放射性標識ペプチドは、従来技術で知られており、同時係属中のＵ.Ｓ.特許出願第０７／８８６，７５２号、第０７／８９３,９８１号および第０８／０４４,８２５号ならびに国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９２／００７５７、ＰＣＴ／ＵＳ９２／１０７１６、ＰＣＴ／ＵＳ９３／０２３２０、ＰＣＴ／ＵＳ９３／０３６８７、ＰＣＴ／ＵＳ９３／０４７９４、ＰＣＴ／ＵＳ９３／０５３７２、ＰＣＴ／ＵＳ９３／０６０２９、ＰＣＴ／ＵＳ９３／０９３８７、ＰＣＴ／ＵＳ９４／０１８９４、ＰＣＴ／ＵＳ９４／０３８７８およびＰＣＴ／ＵＳ９４／０５８９５に開示されている（出典明示により本明細書の一部とする）。 in vivoで血栓をイメージングする際に使用するため、慣用の放射性標識、好ましくは、Ｔc−９９ｍで放射性標識した小さな（血液およびバックグラウンド組織クリアランスを増強させるために）、合成した（慣用の製造を実施可能にするためおよび調節アクセプタンスを容易にするため）、高親和性の、特異的結合分子がなお必要とされている。慣用の放射性同位体、好ましくは、Ｔc−９９ｍ、¹¹¹Ｉnまたは⁶⁸Ｇaで放射性標識されている、活性化した血小板上でＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体に特異的に結合する小さな合成化合物は、当該技術分野でのこの要求を満たし、本発明によって提供される。発明の概要本発明は、インビボでの血栓の非侵襲性イメージングのためのシンチグラフ用剤として、ＧＰIIb／IIIa受容体に高親和性で結合する低分子合成放射性標識（好ましくはＴc−９９m、¹¹¹Ｉnまたは⁶⁸Ｇa標識）化合物を提供するものである。それによって本発明は、放射能的に標識した試薬であるシンチグラフ血栓イメージング剤を提供するものである。具体的には、本発明は、テクネチウム−９９ｍ（Ｔc−９９ｍ）、¹¹¹Ｉn、または⁶⁸Ｇaで、好ましくはＴc−９９ｍで放射性標識した血栓イメージング剤を製造するための試薬を提供するものである。本発明の試薬は、それぞれ、血小板グリコプロテインIIb／IIIa（ＧＰIIb／IIIa）受容体に特異的にかつ高親和性で結合し、さらに、放射性標識錯体形成部分に共有結合するペプチド化合物、ただしこれらに限定されない、を含む、特異的結合化合物からなる。我々は、最適なイメージングのために、試薬は血小板ＧＰIIb／IIIa受容体に、標準血小板凝固アッセイ（下記実施例３参照）においてわずか１μＭの濃度で存在した場合に５０％の程度までヒト血小板のアデノシンジホスフェート（ＡＤＰ）誘発凝固を阻害する十分な親和性で結合する能力がなければならないことを見いだした。低分子化合物、好ましくは約１０,０００ダルトン以下の分子量を有する化合物を用いることは、明らかな商業的利点である。このような低分子化合物は、容易に製造できる。更に、これらは、免疫原性ではなく、迅速に血管から消失するようであるので、より良いかつより迅速な血栓イメージングが可能である。反対に、抗体またはそれらのフラグメントなどのより大きい分子、または他の生物学的に誘導される１０,０００ダルトン以上のペプチドは、製造費用がかかり、また、免疫原性であり、かつ血流からより遅く消失するようであるので、インビボでの血栓の迅速な診断を妨害するものである。本発明はまた、特異的結合化合物が４ないし１００アミノ酸のアミノ酸配列および約１０,０００ダルトン以上でない分子量を有する直鎖状または環状ペプチドである試薬を提供するものである。本発明の一態様は、血小板ＧＰIIb／IIIa受容体に特異的に結合する特異的結合化合物からなる、哺乳動物身体内で血栓をイメージングするために放射性標識される能力があり、かつ式：式中、Ｃ(pgp)^sは保護システインであり、(aa)はチオール基を含有しない第１級 α−またはβ−アミノ酸である、のＴc−９９ｍ錯体形成部分に共有結合する血栓イメージング剤を製造するための試薬を提供する。好ましい実施態様では、アミノ酸はグリシンである。その他の実施態様では、本発明は、血小板ＧＰIIb／IIIa受容体に特異的に結合する特異的結合化合物からなる、哺乳動物身体内で血栓をイメージングするために放射性標識される能力があり、かつ式：式中、ＡはＨ、ＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＮＨＯＣ、( アミノ酸またはペプチド)−ＯＯＣまたはＲ⁴であり、ＢはＨ、ＳＨ、または−ＮＨＲ³、−Ｎ(Ｒ³)−(アミノ酸またはペプチド)またはＲ⁴であり、ＺはＨまたはＲ⁴であり、ＸはＳＨまたは−ＮＨＲ³、−Ｎ(Ｒ³)−(アミノ酸またはペプチド) またはＲ⁴であり、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴は、独立してＨまたは直鎖状または分枝状または環状低級アルキルであり、ｎは０、１または２であり、ここで、（ペプチド）は２ないし約１０アミノ酸のペプチドであり、さらに（１）Ｂが−ＮＨＲ³または−Ｎ(Ｒ³)−(アミノ酸またはペプチド)である場合、ＸはＳＨであり、ｎは１または２であり；（２）Ｘが−ＮＨＲ³または−Ｎ(Ｒ³)−(アミノ酸またはペプチド)である場合、ＢはＳＨであり、ｎは１または２であり；（３）ＢがＨまたはＲ⁴である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＮＨＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＯＯＣであり、ＸはＳＨであり、ｎは０または１であり；（４）ＡがＨまたはＲ⁴であり、次いでＢがＳＨである場合、Ｘは−ＮＨＲ³または−Ｎ(Ｒ³)−(アミノ酸またはペプチド)であり、ＸがＳＨである場合、Ｂは−ＮＨＲ³または−Ｎ(Ｒ³)−(アミノ酸またはペプチド)であり；（５）ＸがＨまたはＲ⁴である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＮＨＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＯＯＣであり、ＢはＳＨであり；（６）Ｚがメチルである場合、Ｘはメチルであり、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ ＮＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＮＨＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＯＯＣであり、ＢはＳＨであり、ｎは０であり；（７）ＢがＳＨであり、ＸがＳＨである場合、ｎは０ではない；さらに、チオール部分が還元形態であり、（アミノ酸）はチオール基を含有しない第１級α−またはβ−アミノ酸である、の単一チオール含有部分からなるＴc−９９ｍ錯体形成部分に共有結合する血栓イメージング剤を製造するための試薬を提供する。本発明のこの態様の特定の実施態様では、放射性標識錯体形成部分は、式： IIa．−(アミノ酸)¹−(アミノ酸)²−{Ａ−ＣＺ(Ｂ)−{Ｃ(Ｒ¹Ｒ²)}_n−Ｘ}、 IIb．−{Ａ−ＣＺ(Ｂ)−{Ｃ(Ｒ¹Ｒ²)}_n−Ｘ}−(アミノ酸)¹−(アミノ酸)²、 IIc．−(第１級α，ω−またはβ，ω−ジアミノ酸)−(アミノ酸)¹−{Ａ−ＣＺ(Ｂ)−{Ｃ(Ｒ¹Ｒ²)}_n−Ｘ}、または IId．−{Ａ−ＣＺ(Ｂ)−{Ｃ(Ｒ¹Ｒ²)}_n−Ｘ}−(アミノ酸)¹−(第１級α,ω− またはβ,ω−ジアミノ酸)、式中、(アミノ酸)¹および(アミノ酸)²は、それぞれ独立して、チオール基を含有しない天然、修飾、置換、または変更α−βアミノ酸であり、ＡはＨ、ＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＮＨＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣまたはＲ⁴であり、ＢはＨ、ＳＨ、または−ＮＨＲ³、−Ｎ(Ｒ³)−( アミノ酸またはペプチド)またはＲ⁴であり、ＺはＨまたはＲ⁴であり、ＸはＳＨまたは−ＮＨＲ³、−Ｎ(Ｒ³)−(アミノ酸またはペプチド)またはＲ⁴であり、Ｒ¹ 、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴は、独立してＨまたは直鎖状または分枝状または環状低級アルキルであり、ｎは０、１または２のいずれかの整数であり、（ペプチド）は２ないし約１０アミノ酸のペプチドであり、さらに（１）Ｂが−ＮＨＲ³または −Ｎ(Ｒ³)−(アミノ酸またはペプチド)である場合、ＸはＳＨであり、ｎは１または２であり；（２）Ｘが−ＮＨＲ³または−Ｎ(Ｒ³)−(アミノ酸またはペプチド)である場合、ＢはＳＨであり、ｎは１または２であり；（３）ＢがＨまたはＲ⁴である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＮＨＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＯＯＣであり、ＸはＳＨであり、ｎは０または１であり；（４）ＡがＨまたはＲ⁴であり、次いでＢがＳＨである場合、Ｘは−ＮＨＲ³または−Ｎ(Ｒ³)−(アミノ酸またはペプチド)であり、ＸがＳＨである場合、Ｂは −ＮＨＲ³または−Ｎ(Ｒ³)−(アミノ酸またはペプチド)であり；（５）ＸがＨまたはＲ⁴である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＮＨＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＯＯＣであり、ＢはＳＨであり；（６）Ｚがメチルである場合、Ｘはメチルであり、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＮＨＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＯＯＣであり、ＢはＳＨであり、ｎは０であり；（７）ＢがＳＨであり、ＸがＳＨである場合、ｎは０ではない；さらに、チオール基が還元形態である、を有する。その他の実施態様では、本発明は、血小板ＧＰIIb／IIIa受容体に特異的に結合する特異的結合化合物からなる、哺乳動物身体内で血栓をイメージングするために放射性標識される能力があり、かつ式：（本発明の場合は、この構造を有する放射性標識結合部分をピコリン酸(Ｐic)ベース部分と称する）；または（本発明の場合は、この構造を有する放射性標識結合部分をピコリルアミン(Ｐi ca)ベース部分と称する）；式中、ＸはＨまたは保護基であり、(アミノ酸)はチオール基を含有しない第１級α−またはβ−アミノ酸である、の放射性標識錯体形成部分に共有結合する血栓イメージング剤を製造するための試薬を提供するものであり、放射性標識錯体形成部分は、特異的結合化合物に共有結合し、放射性標識錯体形成部分の錯体および放射性標識は、電子的に中性である。好ましい実施態様では、アミノ酸はグリシンであり、Ｘはアセトアミドメチル保護基である。更に好ましい実施態様では、特異的結合化合物は、アミノ酸、最も好ましくはグリシンを介して放射性標識錯体形成部分に共有結合する。本発明のまた別の実施態様は、血小板ＧＰIIb／IIIa受容体に特異的に結合する特異的結合化合物からなる、哺乳動物身体内で血栓をイメージングするために放射性標識される能力があり、かつビスアミノビスチオール放射性標識錯体形成部分である放射性標識錯体形成部分に共有結合する血栓イメージング剤を製造するための試薬を提供する。本発明のこの実施態様におけるビスアミノビスチオール部分は、下記式：式中、それぞれのＲ⁵は独立して、Ｈ、ＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅であり、それぞれの(p gp)^sは独立してチオール保護基またはＨであり、ｍ、ｎおよびｐは独立して２または３であり、Ａは直鎖状または環状の低級アルキル、アリール、ヘテロサイクリルまたはそれらの組合わせもしくは置換誘導体であり、更にＸは特異的結合化合物である；および式中、それぞれのＲ⁵は独立して、Ｈ、炭素数１ないし６の低級アルキル、フェニルまたは低級アルキルもしくは低級アルコキシで置換されたフェニルであり、ｍ、ｎおよびｐは独立して１または２であり、Ａは直鎖状または環状の低級アルキル、アリール、ヘテロサイクリルまたはそれらの組合わせもしくは置換誘導体であり、ＶはＨまたはＣＯ−（アミノ酸またはペプチド）であり、Ｒ⁶はＨ、（アミノ酸）またはペプチドまたは特異的結合化合物であり、ただし、ＶがＨであるとき、Ｒ⁶はアミノ酸またはペプチドまたは特異的結合化合物であり、Ｒ⁶がＨであるとき、Ｖはアミノ酸またはペプチドまたは特異的結合化合物であるが、ここで（アミノ酸）はチオール基を含有しない第１級α−またはβ−アミノ酸である、からなる群から選択される式を有する。（本発明の目的には、この構造を有する放射性標識結合部分を“ＢＡＴ”部分と称する）。好ましい実施態様では、特異的結合化合物は、アミノ酸、最も好ましくはグリシンを介して放射性標識錯体形成部分に共有結合する。本発明の上記態様の好ましい実施態様では、特異的結合化合物は、４から１００の間のアミノ酸からなるペプチドである。放射性標識の最も好ましい実施態様はテクネチウム−９９ｍである。本発明の試薬は、特異的結合化合物または放射性標識錯体形成部分が多価連結部分に共有結合する場合に、形成され得る。本発明の多価連結部分は、特異的結合化合物または放射性標識錯体形成部分に共有結合する能力のある少なくとも２つの同一リンカー官能基からなる。好ましいリンカー官能基は、第１級または第２級アミン、ヒドロキシル基、カルボン酸基、またはチオール反応性基である。好ましい実施態様では、多価連結部分は、ビス−スクシンイミジルメチルエーテル（ＢＳＭＥ）、４−(２,２−ジメチルアセチル)安息香酸（ＤＭＡＢ）、トリス(スクシンイミジルエチル)アミン（ＴＳＥＡ）、トリス(アセトアミドエチル) アミン、ビス−(アセトアミドエチル)エーテル、ビス−(アセトアミドメチル)エーテル、Ｎ−{２−(Ｎ',Ｎ'−ビス(２−スクシンイミドエチル)アミノエチル)} −Ｎ⁶,Ｎ⁹−ビス(２−メチル−２−メルカプトプロピル)−６,９−ジアザノナンアミド（ＢＡＴ−ＢＳ）、α,ε−ビスアセチルリジン、リジン、および１,８− ビス−アセトアミド−３,６−ジオキサオクタンである。本発明はまた、本発明の試薬とＴc−９９ｍ、¹¹¹Ｉnまたは⁶⁸Ｇa、最も好ましくはＴc−９９ｍとの錯体であるシンチグラフ用イメージング剤、およびかかるシンチグラフ用イメージング剤を提供するために本発明の試薬を放射性標識する方法を含む。本発明により提供されるＴc−９９ｍ放射性標識錯体は、本発明の試薬を還元剤の存在下でＴc−９９ｍと反応させることにより、形成される。好ましい還元剤には、ジチオナイトイオン、第一スズイオン、および第一鉄イオンがあるが、これらに限定されない。本発明の錯体は、本発明の試薬を、本明細書に与えた通り、予め還元したＴc−９９ｍ錯体のリガンド交換によりＴc−９９ｍで標識することによっても形成される。本発明は、また、Ｔc−９９ｍで放射性標識した本発明の試薬であるシンチグラフ用イメージング剤を製造するためのキットを提供するものである。本発明により与えた試薬をＴc−９９ｍで標識するためのキットは、予め定めた量の本発明試薬と試薬をＴc−９９ｍで標識するのに十分な量の還元剤を含有する封止バイアルからなる。本発明は、インビトロでの化学合成により本発明のペプチド試薬を製造する方法を提供する。好ましい実施態様では、ペプチドは、固相ペプチド合成により合成する。本発明は、インビボでのガンマシンチグラフイメージを得ることにより、哺乳動物身体内で血栓をイメージングするためのＴc−９９ｍ標識化試薬であるシンチグラフ用イメージング剤を使用する方法を提供する。これらの方法は、本発明のＴc−９９ｍ標識化試薬の有効診断量を投与し、哺乳動物身体内の血栓部位に配置されたＴc−９９ｍ標識により放出されるガンマ放射線を検出することを含んでなる。本発明の特定の好ましい実施態様は、下記の好ましい実施態様および請求の範囲のより詳細な記載から明らかになるであろう。図面の簡単な説明第１図は本発明のＴｃ−９９ｍ放射標識ペプチド試薬を用いたヒト患者の腿における静脈血栓のシンチグラフ画像の説明図、第２図は本発明のＴｃ−９９ｍ放射標識ペプチド試薬を用いたヒト患者のふくらはぎにおける静脈血栓のシンチグラフ画像の説明図である。発明の詳細な説明本発明は、哺乳類体内の血栓を画像化するための放射標識血栓画像化剤を調製するための、ペプチド試薬を含む、試薬を提供する。本発明によって提供される試薬は、特異的結合性化合物に共有結合した放射標識結合性基を含んでおり、当該特異的結合性化合物は血小板ＧＤIIb／IIIaリセプターである血小板リセプターに結合し、血小板富化血漿中におけるヒトの血小板凝集を１μＭを超えない濃度で存在するとき５０％まで阻止する（すなわちＩＣ₅₀＝１μＭ）ことが出来る。本発明の目的において、血栓画像化剤なる用語は放射標識錯体形成性基に共有結合した、そして好ましくはＴｃ−９９ｍ、¹¹¹Ｉｎまたは⁶⁸Ｇａ、より好ましくはＴｃ−９９ｍにより放射標識された特異的結合性化合物を含む本発明の実施態様に関して使用されるものである。本発明者らは、先に、好適な画像化のためには、ここに開示された試薬が血小板グリコプロテインＩＩｂ／ＩＩＩａリセプターに充分な親和性をもって結合することが必要であり、それは０.３μＭまでの濃度で存在するとき標準の検定においてアデノシンジホスフェート（ＡＤＰ）誘導血小板凝集を阻止する（実施例３参照）（ＩＣ₅₀≦０.３μＭ）ことを見いだした。この発明は米国特許出願08/ 044,825および国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９４／０３８７８に開示されており、この両出願における開示は本発明についての参考にすべきものである。本発明者らは、今回インビボシンチグラフ画像化において有利な高品質なものがＩＣ₅₀≦１μＭを有するここに開示の放射標識シンチグラフ画像化剤を使用することによって得られることを見いだした。Ｔｃ-９９ｍでの標識は、本発明の利点である。なぜならば、この放射性同位体の核および放射性特性がそれを理想的なシンチグラフィー・イメージング剤とするからである。この放射性同位体は、１４０ｋｅＶの単一光子エネルギーおよび約６時間の放射能半減期を有し、⁹⁹Ｍｏ-^99mＴｃジェネレーターから容易に入手可能である。本発明のもう１つの利点は、好ましい放射性核種(Ｔｃ-９９ｍ、Ｇａ-６７、Ｉｎ-１１１)のいずれもが、当該分野で公知である他の放射性核種( 例えば、¹²⁵Ｉ)に対して、毒性でないことである。Ｔｃ-９９ｍ錯化基および化合物は、本発明により提供されるチオール保護基{ (ｐｇｐ)^s}に共有結合したチオールを含有するかかる基に共有結合しており、該チオール-保護基は同一または異なっていてもよく、限定するものではないが： −ＣＨ₂アリール（アリールはフェニルまたはアルキルもしくはアルキルオキシ置換フェニル）； −ＣＨ（アリール）₂（アリールはフェニルまたはアルキルもしくはアルキルオキシ置換フェニル）； −ＣＨ（アリール）₃（アリールはフェニルまたはアルキルもしくはアルキルオキシ置換フェニル）； −ＣＨ₂−（４−メトキシフェニル）； −ＣＨ−（４−ピリジル）（フェニル）； −Ｃ（ＣＨ₃）； −９−フェニルフルオレニル −ＣＨ₂ＮＨＣＯＲ（Ｒは非置換または置換アルキルまたはアリール）； −ＣＨ₂ＮＨＣＯＯＲ（Ｒは非置換または置換アルキルまたはアリール）； −ＣＯＮＨＲ（Ｒは非置換または置換アルキルまたはアリール）； −ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ₂−フェニル；である。好ましい保護基は式−ＣＨ₂−ＮＨＣＯＲ（式中、Ｒは１ないし８個の炭素原子を有する低級アルキル、フェニルまたは低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、カルボキシまたはアルコキシカルボニルで置換されたフェニルである）を有する。最も好ましい保護基はアセトアミドメチル基である。本発明の各特異的結合ペプチド含有具体例はアミノ酸の配列からなる。本発明で使用するアミノ酸の用語は、全てＬ−およびＤ−、一次α−またはβ−アミノ酸、天然アミノ酸等を含むことを意図する。本発明により提供される特異的結合ペプチドは、以下の配列を有するペプチドを含むが、これらに限定されない（以下のペプチドのアミノ酸は、特記しない限り、Ｌ−アミノ酸である）：ＣＨ₂ＣＯ.Ｙ_D.Ａ_pc.ＧＤＣＧＧＧＣＨ₂ＣＯ.Ｙ_D.Ａ_pc.ＧＤＣＫＧＣＨ₂ＣＯ.Ｙ_D.Ａ_pc.ＧＤＣＧＧＣＨ₂ＣＯ.Ｙ_D.Ａ_pc.ＧＤＣＣＨ₂ＣＯ.Ｙ_D.Ａ_pc.ＧＤＣＫＣＨ₂ＣＯ.Ｙ_D.Ａ_mp.ＧＤＣＣＨ₂ＣＯ.Ｙ_D.Ａ_mp.ＧＤＣＫおよびＯ−(４−ピペリジニル)ブチルチロシン。本発明の特異的結合ペプチドは、インビトロ化学合成できる。本発明のペプチドは、一般にペプチド合成装置で有利に製造できる。インビトロ化学合成している間に、放射標識結合分子がペプチドに共有結合するように、本発明のペプチドは、当業者に既知の技術を使用して製造できる。合成の間に放射性結合分子に共有結合するこのようなペプチドは、共有結合の特異部位が決定できるため有利である。本発明の放射結合分子は、標的特異的ペプチドにペプチド合成中に挿入し得る。ピコリン酸を含む態様において{(Ｐic−)；例えば、Ｐic-Ｇly-Ｃys(保護基) −}、放射標識結合分子は、最後の(すなわちアミノ末端)残基として合成において合成できる。加えて、ピコリン酸含有放射標識結合分子は、リジンのε−アミノ基に共有結合し得、例えば、ペプチド鎖の任意の位置に挿入し得るαＮ(Ｆmoc )−Ｌys−εＮ{Ｐic−Ｇly−Ｃys(保護基)}を得る。この配列は、標的結合部位への容易な挿入経路を提供するため、特に有利である。同様に、ピコリルアミン(Ｐica)−含有放射標識結合分子{−Ｃys(保護基)−Ｇ ly−Ｐica}は、配列{−Ｃys(保護基)−Ｇly−}をペプチド鎖のカルボキシ末端に挿入することによりペプチド合成中に製造できる。ペプチドの樹脂からの開裂に続いて、ペプチドのカルボキシ末端を活性化し、ピコリルアミンと結合する。この合成経路は、反応性側鎖官能性がマスク(保護)されたままであり、ピコリルアミンの結合中に反応しないことを必要とする。Ｐic−Ｇly−Ｃys−および−Ｃys−Ｇly−Ｐicaキレーターを含む小合成の例は、以下の実施例に示す。本発明は、これらのキレーターを実質的に任意のインビボ血栓特異的結合できるペプチドに包含させ、Ｔｃ−９９ｍを天然錯体として有する放射標識ペプチドを得るために提供される。本発明はまた、Ｔｃ−９９ｍで標識し得るビスアミンビスチオール(ＢＡＴ)キレーターを含む特異的結合小合成ペプチドを提供する。本発明は、これらのキレーターを実質的に任意のインビボ血栓特異的結合できるペプチドに包含させ、Ｔｃ−９９ｍを天然錯体として有する放射標識ペプチドを得るために提供される。ＢＡＴキレーターを放射標識結合分子として含む小合成ペプチドの例は、下記実施例に提供する。放射活性テクネチウムと本発明の試薬との錯体の形成において、テクネチウム錯体、好ましくはＴＣ−９９ｍ過テクネテートの塩は、還元剤存在下、試薬と反応させる。好ましい還元剤は、ジチオナイト、スズおよび鉄イオンである；最も好ましい還元剤は、塩化スズである。このような錯体を作るための手段は、標識すべきあらかじめ定量した量の本発明の試薬およびＴｃ−９９ｍで試薬を標識するのに充分な量の還元剤を含む封印バイアルから成るキット形で簡便に提供される。あるいは、錯体は、本発明の試薬を、あらかじめ形成したテクネチウムの置換活性錯体および転移リガンドとして知られている他の化合物と反応させて製造し得る。この工程は、リガンド交換として知られ、当業者に既知である。置換活性錯体は、このような転移リガンドを例えばタートレート、シトレート、グルコネートまたはマンニートールとして製造し得る。Ｔｃ−９９ｍ過テクネテート塩の中で、本発明で有用なものは、ナトリウム塩のようなアルカリ金属塩またはアンモニウム塩または低級アルキルアンモニウム塩である。本発明の好ましい態様において、テクネチウム標識試薬を製造するためのキットが提供される。好適な量の試薬を、Ｔｃ−９９ｍで試薬を標識するのに充分な量の塩化スズのような還元剤を含むバイアルに挿入する。記載のような好適な量の転移リガンド(例えば、タートレート、シトレート、グルコネートまたはマンニトールのような)もまた包含できる。キットは、例えば、浸透圧、緩衝液、保存剤等を調節するための薬学的に許容可能な塩のような既知の薬学的調節物質もまた含み得る。キットの成分は、液体、凍結または乾燥形であり得る。好ましい態様において、キット成分は凍結乾燥形で提供する。本発明の放射標識血栓イメージング剤は、好適な量のＴｃ−９９ｍまたはＴｃ −９９ｍ錯体をバイアルに添加し、下記実施例４に記載の条件下で反応させることにより製造し得る。本発明により提供される放射方式シンチグラフ用イメージング剤は、好適な量の放射活性を有して提供される。Ｔｃ−９９ｍ放射活性錯体の形成において、一般的に、放射活性をmＬ当たり約０.０１マイクロキューリー(mＣｉ)から１００m Ｃｉ形成する濃度で含む溶液中で放射活性錯体を形成するのが好ましい。本発明により提供される血栓イメージング剤は、Ｔｃ−９９ｍで標識した場合、哺乳類体内の血栓の可視化に使用できる。本発明により、Ｔｃ−９９ｍ標識試薬は、一回単位注射可能用量で投与する。本発明により提供されるＴｃ−９９ｍ標識試薬は、水性食塩水媒体または血漿媒体のような静脈内注射に既知の媒体により静脈内投与し得る。一般に、投与すべき単位用量は、約０.０１mＣｉから約１００mＣｉ、好ましくは１mＣｉから２０mＣｉの放射活性を有する。単位用量で注射すべき溶液は約０.０１mＬから約１０mＬである。静脈内投与後、血栓のインビボイメージングは数分で行うことができる。しかしながら、イメージングは、放射標識ペプチドを患者に投与してから、所望により、１時間またはそれ以上で行うことができる。ほとんどの場合、充分な量の投与量が、イメージングすべき領域に、約０.１時間以内に蓄積し、シンチフォトの実施を可能にする。診断目的のためのシンチグラフ用イメージングの既知の方法が、本発明により利用できる。血栓はアテローム硬化症プラークで一般に見られる；本発明のシンチグラフ用イメージング剤に結合し得るインテグリン(integrin)受容体がある癌でみられ得る；このようなインテグリン受容体は、感染部位の白血球局在化に含まれまたは先立つ細胞粘着工程に含まれることは、当業者によりまた認識されるであろう。従って、本発明のシンチグラフ用イメージング剤は、アテローム硬化症プラーク、癌または感染部位を含む、ＧＰIIｂ／IIIａ受容体が発現する部位をイメージングするためのイメージング剤としての更なる実用性を有する。これらの化合物を製造し、標識する方法は、以下の実施例に完全に説明する。これらの実施例は上記方法のある態様および有利な結果を説明する。これらの実施例は、説明のためのみに示すものであり、限定する意図はない。実施例１固相ペプチド合成固相ペプチド合成(ＳＰＰＳ)は、０.２５ミリモル(mmol)スケールで、Ａpplie d Ｂiosystems Ｍodel 431Aペプチド合成器を用い、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル(Ｆmoc)アミノ−末端保護を用いて、ジシクロヘキシルカルボジイミド／ヒドロキシベンゾトリアゾールまたは２−(１Ｈ−ベンゾトリアゾル− １−イル)−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩／ヒドロキシベンゾトリアゾール(ＨＢＴＵ／ＨＯＢＴ)でカップリングして、カルボキシ−末端酸のためのｐ−ヒドロキシメチルフェノキシメチルポリスチレン(ＨＭＰ)樹脂またはカルボキシ−末端アミドのためのＲinkアミド樹脂を用いて、行われた。樹脂結合生成物は、トリフルオロ酢酸または５０／５０トリフルオロ酢酸／ジクロロメタンを含み、選択的に水、チオアニソール、エタンジチオールおよびトリエチルシランを含み、１００：５：５：２.５：２の比率で製造された溶液を１.５−３時間、室温で用いることにより普通に分割される。適当に、Ｎ−末アセチル基は、樹脂に結合している、遊離Ｎ−末アミノペプチドを２０％v／v無水酢酸で、ＮＭＰ(Ｎ−メチルピロリジノン)中で３０分間処理することにより導入される。リジンのα−およびε−アミンの両者からのペプチド鎖合成を含み、分肢鎖ペプチド試薬を製造するために、ＳＰＰＳにおいてＮα (Ｆmoc)Ｎε(Ｆmoc)−リジンが使用された。適当に、２−クロロアセチルおよび２−ブロモアセチル基は、ＳＰＰＳにおいてカップリングされる最後の残基として適当な２−ハロ酢酸を用いることにより、または樹脂結合のＮ端遊離アミノペプチドをＮＭＰ中２−ハロ酢酸／ジイソプロピルカルボジイミド／Ｎ−ヒドロキシサクシンイミドまたはＮＭＰ中の２−ハロ無水酢酸／ジイソプロピルエチルアミンで処理することにより導入される。適当に、ＨＰＬＣ−精製−２−ハロアセチル化ペプチドは、選択的にリン酸塩、重炭酸塩または０.５−１.０mＭＥＤＴＡを含有するｐＨ８の０.１−１.０mg／mＬ溶液で撹拌することにより環化され、次いで、酢酸で酸性化、凍結乾燥、ＨＰＬＣ精製がなされた。適当に、Ｃys −Ｃysジスルフィド結合環化は、前駆体のシステインを含まないチオールペプチドを０.１mg／mＬでｐＨ７の緩衝液中、アリコートの０.００６ＭＫ₃Ｆｅ(ＣＮ)₆で、安定な黄色が残存するまで、処理することによりなされた。過剰の酸化剤は過剰のシステインで還元し、混合物を凍結乾燥し、次いでＨＰＬＣで精製した。適当に、ペプチドチオール−クロロアセチル誘導スルフィドは、水中２−５０ mg／mＬの濃度の単一チオール含有ペプチド、および適当な数(例えば、二量体製造のための０.５モル当量および三量体製造のための０.３モル当量)のクロロアセチル多価結合部分をｐＨ１０で有するアセトニトリルまたはＴＨＦまたはＤＭＦを０.５から２４時間反応せしめることにより製造された。この溶液を酢酸で中和し、蒸留乾燥し、そして必要とあれば、ＴＦＡ１０mＬおよびトリエチルシラン２mＬなどのスカベンジャーを用いて保護をはずした。溶液を濃縮しそして生成物をエエテルで沈殿せしめた。生成物を分取ＨＰＬＣで精製した。適当には、単一チオール-含有ペプチド(５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ８中の５〜５０ｍｇ/ｍＬ)と、アセトニトリルに予め溶解した０.５モル当量のＢＭＭＥ(ビス-マレイミドメチルエーテル)とを室温にて約１−１８時間反応することによってＢＳＭＥ付加物を調製した。該溶液を濃縮し、生成物はＨＰＬＣによって精製した。適当には、１モル当量のトリエタノールアミンが存在または不存在で、単一チオール-含有ペプチド(ＤＭＦ中の１０〜１００ｍｇ/ｍＬのペプチド、または５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液(ｐＨ８)/アセトニトリルまたはＴＨＦ中の５〜５０ｍｇ/ｍＬ濃度のペプチド)と、アセトニトリルまたはＤＭＦに予め溶解した０.３３モル当量のＴＭＥＡ(トリス(２-マレイミドエチル)アミン；出典明示して本明細書の一部とみなす米国特許第０８/０４４,８２５号に開示されている) とを室温にて約１-１８時間反応することによってＴＳＥＡ付加物を調製した。付加物を含有するかかる反応混合物を濃縮し、ついで、該付加物をＨＰＬＣを用いて精製した。適当な場合には、単一チオール含有ペプチド（５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ８）中２ないし５０ｍｇ／ｍＬのペプチド濃度）を、適当には１〜１８時間室温でアセトニトリルまたはＴＨＦ中に前溶解された０.５モラー当量のＢＡＴ− ＢＭ（Ｎ−［２−（Ｎ',Ｎ'−ビス（２−マレイミドエチル）アミノエチル）］ −Ｎ⁹−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ⁶,Ｎ⁹−ビス（２−メチル−２−トリフェニルメチルチオプロピル）−６,９−ジアザノナンアミド；ＵＳ第０８／０４４８２５号（参照により本明細書に記載とみなす）に開示）と反応させることによりＢＡＴ−ＢＳ付加物を調製した。次いで、溶液を蒸発乾固し、［ＢＡＴ−ＢＳ］ペプチド抱合体を１０ｍＬのＴＦＡおよび０.２ｍＬのトリエチルシランで１時間処理することにより脱保護した。溶液を濃縮し、生成した付加物をエーテルで沈殿させ、次いで、ＨＰＬＣにより精製した。 Waters Delta Pak C18カラムおよびアセトニトリルを変化させる水中０.１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）のグラジエント溶離を用いて、粗ペプチドを調製用高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により精製した。溶離フラクションからアセトニトリルを蒸発させ、次いで、凍結乾燥した。高速原子衝撃質量スペクトル法（ＦＡＢＭＳ）により各生成物の同一性を確認した。実施例２Ｔｃ−９９ｍによる放射ラベルの一般的方法実施例２で製造されたペプチド試薬０.１mgのサンプルを０.１mＬの水、５０m Ｍリン酸カルシウム緩衝液、０.１Ｍ重炭酸緩衝液または１０％ヒドロキシプロピルシクロ−デキストリン(ＨＰＣＤ)に溶解した。なお、各緩衝液はｐＨ５−１０である。Ｔｃ−９９ｍグルセプテートは、グルコスカンバイアル(Ｅ.Ｉ.Ｄu Ｐon de Ｎemourus，Ｉnc.，Ｗilmimgton，ＤＥ)を、１mＬの２００mＣｉまで含有するＴｃ−９９ｍナトリウム過テクネテートで再構成し、室温で１５分放置することにより製造される。次いで、このペプチドに２５μｌのＴｃ−９９ｍグルセプターゼを添加し、室温または１００℃で１５〜３０分間、反応を進行させた後、０.２μｍフィルターで濾過した。Ｔｃ−９９ｍ標識ペプチドの純度は、以下の条件を用いたＨＰＬＣによって決定した：ウォーターズ・デルタピュア（Waters DeltaPure）ＲＰ−１８、５μ、１５０ｍｍ×３.９ｍｍ分析用カラムに各放射標識ペプチドを装填し、これらペプチドを１ｍＬ／分に相当する溶媒流量で溶出させた。勾配溶出は、１０％溶媒Ａ（０.１％ＣＦ₃ＣＯＯＨ／Ｈ₂Ｏ）から初めて、４０％溶媒Ｂ₉₀（０.１％ＣＦ₃ ＣＯＯＨ／９０％ＣＨ₃ＣＮ／Ｈ₂Ｏ）まで、２０分間にわたって実施した。Ｔｃ−９９ｍラベルペプチドの純度は、表Ｉの脚注に記載した条件を用いてＨＰＬＣにより定められる。放射活性成分は、統合記録器につながっているイン− ライン放射線感知器により検査された。Ｔｃ−９９グルセプテートおよびＴｃ− ９９ｍナトリウム過テクネテートはこれらの条件下で１−４分で消失し、Ｔｃ− ９９ｍラベルペプチドは非常により多くの時間後に消失した。下記の表は、本明細書に記載された方法を用いて実施例により製造された、ペプチドの成功的なＴｃ−９９ｍラベルを示す。 * 上つきは下記の標識条件である：１．ペプチドはリン酸カリウム緩衝液５０mＭ（pＨ７.４）中に溶解され、室温にて標識された。２．ペプチドはリン酸カリウム緩衝液５０mＭ（pＨ７.４）中に溶解され、１００℃にて標識された。３．ペプチドは水中に溶解され、室温にて標識された。４．ペプチドは水中に溶解され、１００℃にて標識された。５．ペプチドはリン酸カリウム緩衝液５０mＭ（pＨ６.０）中に溶解され、１００℃にて標識された。６．ペプチドはリン酸カリウム緩衝液５０mＭ（pＨ５.０）中に溶解され、室温にて標識された。７．ペプチドはエタノール／水の５０：５０混合物中に溶解され、１００℃にて標識された。８．ペプチドは０.９％塩化ナトリウム溶液中に溶解され、室温にて標識された。 ** ＨＰＬＣ法（Ｒ_Tの後の上つきにより示されている）一般：溶媒Ａ＝０.１％ＣＦ₃ＣＯＯＨ／Ｈ₂Ｏ溶媒Ｂ₇₀＝０.１％ＣＦ₃ＣＯＯＨ／７０％ＣＨ₃ＣＮ／Ｈ₂Ｏ溶媒Ｂ₉₀＝０.１％ＣＦ₃ＣＯＯＨ／９０％ＣＨ₃ＣＮ／Ｈ₂Ｏ溶媒流速＝１mＬ／分ビダックカラム＝ビダック２１８ＴＰ５４ＲＰ−１８，５μm，２２０mm×４. ６mm保護カラム付分析カラムブラウンリーカラム＝ブラウンリー・スフェリー５ＲＰ−１８，５μm，２２０mm×４.６mmカラムウォーターズカラム＝ウォーターズ・デルターパックＣ１８，５μm，１５０mm ×３.９mmカラムウォーターズカラム２＝ウォーターズ・ノバ−パックＣ１８，５μm，１００mm ×８mmラジアル圧縮カラム方法１：ブラウンリーカラム１０分間に１００％Ａから１００％Ｂ₇₀ 方法２：ビダックカラム１０分間に１００％Ａから１００％Ｂ₉₀ 方法３：ビダックカラム１０分間に１００％Ａから１００％Ｂ₇₀ 方法４：ウォーターズカラム２０分間に１００％Ａから１００％Ｂ₉₀ 方法５：ウォーターズカラム１０分間に１００％Ａから１００％Ｂ₉₀ 方法６：ウォーターズ２カラム１０分間に１００％Ａから１００％Ｂ₉₀ *** ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアシドゲル電気泳動によって確認アミノ酸の一字省略文字は、Ｚ・ザベイ，バイオケミストリー（２版）１９８８年（マックミレン発行：ニューヨーク）３３頁中で知ることができ；アンダーラインは誘導体群の結合アミノ酸間のチオール結合の形成を示す；ペプチドは各ペプチド中未保護システイン残基（Ｃ）の遊離チオール部を経てリンカーを含むＢＳＨ、ＥＴＡＣ、ＢＳＭＥ、ＴＳＥＡ、(ＢＡＴ−ＢＳ)又は(ＣＨ₂ＣＯ)−に結合している；Ａc＝アセチル；Ｂz＝ベンゾイル；Ｐic＝ピコリノイル(ピリジン−２−カルボニル)；Ａcm＝アセトアミドメチル；Ｍob＝４−メトキシベンジル；Ａpc＝Ｌ−（Ｓ−（３−アミノプロピル）システイン）；Ｈly＝ホモリジン；Ｆ_D＝Ｄ−フェニルアラニン；Ｙ_D＝Ｄ−チロシン；ma＝２−メルカプトアセト酢酸；mmp=２−メルカプト−２−メチルプロピオ酸；ＢＡＴ＝Ｎ⁶，Ｎ⁹−ビス（２−メルカプト−２−メチルプロピル）−６，９−ジアザノナノイックアシド；ＥＴＡＣ＝４−（Ｏ−ＣＨ₂ＣＯ−Ｇly−Ｇly−Ｃys．アミド）アセトフェノン；ＢＡＴ−ＢＳ＝Ｎ−｛２−Ｎ',Ｎ'−ビス（２−サクシンイミドエチル）アミノエチル｝−Ｎ⁶，Ｎ⁹−ビス（２−メルカプト−２−メチルプロピル）−６,９ −ジアザノナンアミド；ＢＳＭＥ＝ビス−サクシンイミドメチルエーテル；ＴＳＥＡ＝トリス−（２−サクシンイミドエチル）アミン；ＮＥＳ＝Ｎ−エチルサクシンイミド；ＢＳＨ＝１，６−ビス−サクシンイミドヘキサン：Ａmp＝４−アミディノフェニルアラニン ^a＝エレクトロスプレー質量分析（ＥＳＭＳ）実施例３血小板凝集阻害アッセイ実質的にはZucker(1989,Methods in Enzymol.169:117〜133)により記載されたようにして血小板凝集の研究を行った。簡単に説明すると、１マイクロリットル中３０００００個の血小板からなる新鮮ヒト・血小板豊富血漿を用い、推定上の血小板凝集阻害化合物を用いて血小板凝集をアッセイした。アデノシンジホスフェート溶液を添加して最終濃度１０ないし１５マイクロモルとすることにより血小板凝集を誘導し、Bio/Dataアグレゴメーター（Bio/Data Corp.,Horsham,PA）を用いて血小板凝集の程度をモニターした。血小板凝集阻害化合物の濃度を、０ .１から５００μｇ／ｍｌまで変化させた。血小板凝集を５０％減じた阻害剤濃度（ＩＣ₅₀と定義）を、血小板凝集の程度に対する阻害剤濃度のプロットから決定した。陽性対照として試験した血小板の各バッチに関してペプチドＲＧＤＳに関する阻害曲線を決定した。これらの実験結果は表IIに示した。表IIにおいて、被験化合物は下記のものである（ＲＧＤＳは陽性対照である）。Ｐ４７＝ＡｃＳＹＧＲＧＤＶＲＧＤＦＫＣ_AcmＧＣ_Acm Ｐ９７＝ＧＲＧＤＶＲＧＤＦＫＣ_AcmＧＣ_AcmアミドＰ３２＝Ｃ_AcmＧＣ_AcmＲＲＲＲＲＲＲＲＲＧＤＶＰ１４３＝ＣＨ₂ＣＯ-Ｙ_DＲＧＤＣＧＧＣ_AcmＧＣ_AcmアミドＰ２４５＝ＣＨ₂ＣＯ-Ｙ_DＡ_pc．ＧＤＣＧＧＣ_AcmＧＣ_AcmＧＧＦ_DＰＲＰＧアミドＰ６３＝ＡｃＳＹＧＲＧＤＶＲＧＤＦＫＣＴＣＣＡＰ９８＝ＧＲＤＧＶＲＧＤＦＣ_AcmＧＣ_AcmアミドＰ８１＝ＣＨ₂ＣＯ-Ｙ_DＲＧＤＣＣ_AcmＧＣ_AcmアミドＰ１５４＝ＣＨ₂ＣＯ-Ｙ_DＡｐｃＧＤＣＧＧＧＣ_AcmＧＣ_AcmアミドＰ３８１＝ (ＣＨ₂ＣＯ-Ｙ_DＡｐｃＧＤＣＫＧＣ_AcmＧＣ_AcmＧＧＣ-アミド)₂- ＢＳＭＥＰ３１７＝ (ＣＨ₂ＣＯ-Ｙ_DＡｐｃＧＤＣＧＧＣ_AcmＧＣ_AcmＧＧＣ-アミド)₃- ＴＳＥＡＰ２４６＝ＣＨ₂ＣＯ-Ｙ_DＡｐｃＧＤＣＧＧＣ_AcmＧＣ_AcmＧＧＣ-アミドＰ３５７＝ (ＣＨ₂ＣＯ-Ｙ_D.ＡｐｃＧＤＣＧＧＣ_AcmＧＣ_AcmＧＧＣ-アミド)₂- （ＢＡＴ−ＢＳ）Ｐ６６７＝（ＣＨ₂ＣＯＹ_D.Ａｐｃ.ＧＤＣＧＧＣ_AcmＧＣ_AcmＧＧＣアミド）₂ （ＣＨ₂ＣＯ₂）Ｋ（ＮεＫ）ＧＣアミドＰ７４７＝（ＣＨ₂ＣＯＹ_D.Ａｍｐ.ＧＤＣＧＧＣ_AcmＧＣ_AcmＧＧＣアミド）₂ （ＣＨ₂ＣＯ₂）Ｋ（Ｎε-Ｋ）ＧＣアミドＰ７４８＝（ＣＨ₂ＣＯＹ_D.Ａｍｐ.ＧＤＣＫＧＣＣアミド）₂（ＣＨ₂ＣＯ₂）Ｋ（Ｎε-Ｋ）ＧＣアミド（アミノ酸の一字省略文字は、Ｚ・ザベイ，バイオケミストリー（２版）１９８８年（マックミレン発行：ニューヨーク）３３頁中で知ることができる；Ａc＝アセチル；Ａcm＝アセトアミドメチル；Ａpc＝Ｌ−（Ｓ−（３−アミノプロピル）システイン）；Ｙ_D＝Ｄ−チロシン；ＢＳＭＥ＝ビス−サクシンイミドメチルエーテル；ＴＳＥＡ＝トリス−（２−サクシンイミドエチル）アミン；（ＢＡＴ −ＢＳ）＝Ｎ−｛２−Ｎ'，Ｎ'−ビス（２−サクシンイミドエチル）アミノエチル｝−Ｎ⁶，Ｎ⁹−ビス（２−メチル−２−メルカプトプロピル）−６，９−ジアザノナンアミド；ペプチドは各ペプチド中未保護システイン残基（Ｃ）の遊離チオール部をへてリンカー含むＢＳＭＥ、ＴＳＥＡ、(ＢＡＴ−ＢＳ)又は(ＣＨ₂ＣＯ)−に結合している。(...)₂Ｋは（）内の基とリジンの各アミノ基（すなわち、α−アミノ基および側鎖アミン）の間の共有結合を示す。(Ｎε-Ｋ)はリジン残基の通常のαアミノ基におけるよりもむしろεアミンにおける共有結合を示す。約１μＭより小かまたは等しいＩＣ₅₀を有する化合物が約１μＭより大のＩＣ₅₀ を有するシンチグラフィックイメージング剤より大きい効果を示すことをこれらの結果は示している。実施例４ひとインビボにおける深静脈血栓のシンチグラフィックイメージング化学構造：（ＣＨ₂ＣＯ.ＹnＡpcＧＤＣＧＧＣ_AcmＧＣ_AcmＧＧＣ．アミド）₂−ＢＳＭＥを有するＰ２８０と命名された本発明のシンチグラフィックイメージング剤の一具体例の予備ひと臨床的検討からなる一連の実験を行った。これらの実験は、年令３０〜６０、体重６３〜１００ｋｇである９人の患者（男性６、女性３）について行われた。患者はそれぞれ臨床的には深静脈血栓の症状を示し、診断は触診、超音波検査および／または対比静脈造影によって確認された。この検討における各患者は、静脈注射によって、約０.２５ｍｇペプチドを含む１０−２２ｍＣｉＴｃ−９９ｍ標識Ｐ２８０が投与された。ついでシンチグラフィックイメージングは高分解コリメータ（１４０ｋｅＶにてphotopcaked、２０％±window）を備えた大視野ガンマカメラを用いて４時間かけて行われた。ガンマカメライメージングは注射と同時に始められた。四肢の前肢の画像の後に後肢の画像が、１時間、ついで、２時間と４時間後に撮影された。これらの検討の結果は第１図に示した。第１図は下部大腿の血管中に血栓が分布していることを示しており、第２図は、血栓がふくらはぎの血管に存在することを示している。分布している血栓は各図において矢印で示している。迅速にかつ明瞭に深静脈に局在化するのに加えて、このシンチグラフィックイメージング剤は血流から迅速に発見され、注射後１時間循環中に残存している注射投与量は約１０％以下である。動物実験と一致して、注射投与量の少なくとも６０−７０％が腎臓において除去されるということが判明した。血栓の可視化は注射１５− ３０分後すぐに明瞭になり、注射後４−２４時間は可視のままである。血栓の可視化は前記の従来の臨床基準に基づいて作成された深静脈血栓の臨床的診断とよく相関しており、血栓は被験患者９人のうち、８人に見られた。血栓が見られなかった１人の患者は臨床的に古い血栓（４２日）が存在し、静止しているようであり、従って、表面に検出される血小板変換はなかった。最後に、これらの患者のいずれにもＴｃ９９ｍ標識Ｐ２８０投与について毒性または他の副作用は観察されなかった。これらの結果は、本発明のシンチオグラフィックイメージング剤がひとの深静脈血栓の可視化のための臨床的インビボ使用に有利な臨床的有効なシンチグラフィックイメージング剤の調製のための安全かつ効果的診断剤であることを示している。上記の開示は本発明のある種具体例を詳細に説明したものであり、これらに等しい修正または変更は添付の請求の範囲の述べられた本発明の要旨および範囲に含まれることが理解されるべきである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者シビテロ，エドガー・アールアメリカ合衆国03221ニューハンプシャー州ブラッドフォード、アールアール01・ボックス 379エイ番 (72)発明者マックブライド，ウィリアムアメリカ合衆国03102ニューハンプシャー州マンチェスター、ゴルフビュー・ドライブ110番

Claims

【特許請求の範囲】１．分子量が１０，０００ダルトンより小さく、血小板グリコプロテインIIb／I IIa受容体である血小板受容体に結合する特異的結合性化合物に共有結合的に結合している放射性標識錯体形成部分を含む、哺乳類動物の体内にある血栓をイメージングするための血栓イメージング剤を製造するための試薬であって、約１μ Ｍ以下の濃度で存在するとき、高血小板血漿中でヒト血小板の凝集を５０％阻止（ＩＣ５０）し得る試薬。２．特異的結合性化合物が４ないし１００個のアミノ酸からなる特異的結合性ペプチドである請求項１記載の試薬。３．放射性標識錯体形成部分が下式：式中、Ｃｐは保護されたシステインであり；（ａａ）はチオール基を持たない１級のαまたはβ−アミノ酸；式中、ＸはＨまたは保護基；（アミノ酸）はチオール基を持たない１級のαまたはβ−アミノ酸；式中、それぞれのＲ⁵は独立して、Ｈ、ＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅；それぞれの(pgp)^sは独立してチオール保護基またはＨ；ｍ、ｎおよびｐは独立して２または３；Ａは直鎖または環状の低級アルキル、アリール、ヘテロサイクリールまたはそれらの組合わせもしくは置換体；Ｘは特異的結合性化合物；およびそれぞれのＲ⁵は独立してＨ、炭素数１ないし６の低級アルキル、フェニルまたは低級アルキルもしくは低級アルコキシで置換されたフェニル；ｍ、ｎおよびｐは独立して１または２；Ａは直鎖または環状の低級アルキル、アリール、ヘテロサイクリールまたはそれらの組合わせもしくは置換体；ＶはＨまたは−ＣＯ−特異的結合性化合物；Ｒ⁶はＨまたは特異的結合性化合物；ただし、ＶがＨであるとき、Ｒ⁶は特異的結合性化合物であり、Ｒ⁶がＨであるとき、Ｖは−ＣＯ−特異的結合性化合物であるものとする、からなる群から選択される式を有する、請求項１記載の試薬。４．特異的結合性化合物と放射性標識錯体形成部分とが１個またはそれ以上のアミノ酸を介して共有結合的に結合している請求項１の試薬。５．式Ｉの放射性標識錯体形成部分の保護されたシステインが、式 −ＣＨ₂−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ式中、Ｒは炭素数１ないし６の低級アルキル、２−、３−、４−ピリジル、フェニルまたは低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、カルボキシまたは低級アルコキシカルボニルで置換されたフェニル；で表される保護基を有している請求項４記載の試薬。６．式Ｃｐ（ａａ）Ｃｐの放射性標識錯体形成部分が下記の式：を有する、請求項４記載の試薬。７．放射性標識錯体形成部分が放射性標識に結合している請求項１の試薬を含むシンチグラフ用イメージング剤。８．放射性標識がテクネチウム−９９ｍ、インジウム−１１１またはガリウム− ６８である請求項７の試薬。９．特異的結合性ペプチドが下記の式：ＣＨ₂ＣＯ.Ｙ_D.Ａ_pc.ＧＤＣＧＧＧＣＨ₂ＣＯ.Ｙ_D.Ａ_pc.ＧＤＣＫＧＣＨ₂ＣＯ.Ｙ_D.Ａ_pc.ＧＤＣＧＧＣＨ₂ＣＯ.Ｙ_D.Ａ_pc.ＧＤＣＣＨ₂ＣＯ.Ｙ_D.Ａ_pc.ＧＤＣＫＣＨ₂ＣＯ.Ｙ_D.Ａ_mp.ＧＤＣＣＨ₂ＣＯ.Ｙ_D.Ａ_mp.ＧＤＣＫおよびＯ−（４−ピペリジニル）ブチルチロシンを有するペプチドからなる群から選ばれた請求項２の試薬。１０．試薬が多様性の特異的結合性化合物に共有結合的に結合し、かつ多様性の放射性標識錯体形成部分に共有結合的に結合する多価連結部分を含んでおり、多様性多価のシンチグラフ用イメージング剤の分子量が約２０,０００ダルトンを超えない請求項１に記載の試薬。１１．多価連結部分がビスサクシンイミジルメチルエーテル、４−（２，２−ジメチルアセチル）安息香酸、Ｎ−｛２−（Ｎ',Ｎ'−ビス（２−サクシンイミドエチル）−Ｎ⁶,Ｎ⁹−ビス（２−メチル−２−メルカプトプロピル）−６,９−ジアザノナンアミド、トリス（アセタミドエチル）アミン、ビス（アセタミドエチル）エーテル、ビス（アセタミドメチル）エーテル、α,ε−ビスアセチルリシン、リシンおよび１，８−ビス−アセタミド−３,６ジオキサオクタン、１,２− ビス（２−クロロアセタミドエトキシ）エタンまたはその誘導体である請求項１０記載の試薬。１２．請求項２の試薬を還元剤の存在下にテクネチウム−９９ｍと反応させて得られる錯体。１３．還元剤がジチオナイトイオン、第一錫イオンまたは第二鉄イオンから選ばれている請求項１２の錯体。１４．事前に還元したテクネチウム−９９ｍ複合体のリガンド交換によって請求項２の試薬をテクネチウム−９９ｍで標識して得られる錯体。１５．請求項２の試薬の一定量を含む密封されたバイアルとその試薬をテクネチウム−９９ｍで標識するのに十分な量の還元剤からなる放射性医薬組成物製造用キット。１６．試薬がテクネチウム−９９ｍで標識されている、哺乳類の体内の血栓をイメージングするための医薬品の製造のための請求項２の試薬の使用。１７．試薬が化学的に生体外で合成される請求項２の試薬の製造方法。１８．特異的結合性ペプチドが固相法ペプチド合成法によって合成される請求項１７による試薬の製造方法。１９．放射性標識結合部分が生体外の化学合成により特異的結合性ペプチドに共有結合的に結合される請求項２の試薬の製造方法。２０．放射性標識結合部分が固相法ペプチド合成法によって特異的結合性ペプチドに共有結合的に結合される請求項１９の試薬の製造方法。２１．ペプチドを還元剤の存在下にＴｃ−９９ｍと反応させる請求項２によるペプチドの標識方法。２２．還元剤がジチオナイトイオン、第一錫イオンまたは第二鉄イオンから選ばれた請求項２１の方法。２３．特異的結合性化合物が下記の式：式中、Ａは疎水性Ｄ−α−アミノ酸またはＮ−アルキル−Ｌ−α−アミノ酸またはＬ−プロリン；Ｘはプラスに荷電できる側鎖を有するＬ−α−アミノ酸；Ｒはそれぞれ独自にＨ、低級アルキルまたは低級アルコキシアルキルを表す、を有する環状ペプチドドメインを持つ請求項１の試薬。２４．ＡがＤ−チロシンまたはＤ−フェニルアラニンであり、ＸがＬ−（Ｓ−（３−アミノプロピル）システイン）またはＬ−４−アミジノフェニルアラニンである請求項２３の試薬。２５．放射性標識錯体形成部分が下記式：ＡはＨ，ＨＯＯＣ，Ｈ₂ＮＯＣ，（アミノ酸またはペプチド）−ＮＨＯＣ，（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣまたはＲ⁴；ＢはＨ,ＳＨ,−ＮＨＲ³,−Ｎ（Ｒ³）−（アミノ酸またはペプチド）またはＲ⁴；ＸはＨ,ＳＨ,−ＮＨＲ³,−Ｎ（Ｒ³）−（アミノ酸またはペプチド）またはＲ⁴；ＺはＨまたはＲ⁴；Ｒ¹，Ｒ²，Ｒ³およびＲ⁴は独立してＨまたは低級の直鎖、分枝もしくは環状のアルキル；ｎは０、１または２；（ペプチド）は２ないし約１０アミノ酸からなるペプチドであり；さらに、Ｂが−ＮＨＲ³または−Ｎ（Ｒ³）−（アミノ酸またはペプチド）であるとき、ＸはＳＨ,ｎは１または２；Ｘが−ＮＨＲ³またはＮ（Ｒ³）−（アミノ酸またはペプチド）であるとき、ＢはＳＨ，ｎは１または２；ＢがＨまたはＲ⁴であるときＡはＨＯＯＣ，Ｈ₂ＮＯＣ，（アミノ酸またはペプチド）−ＮＨＯＣ，（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣ，ＸはＳＨ、ｎは０または１；ＡがＨまたはＲ⁴であるとき、ＢはＳＨ，Ｘは−ＮＨＲ³またはＮ（Ｒ³）−（アミノ酸またはペプチド）そしてＸがＳＨであるとき、Ｂは−ＮＨＲ³,−Ｎ（Ｒ³ ）−（アミノ酸またはペプチド）であり；Ｚがメチルであるとき、Ｘはメチル、ＡがＨＯＯＣ，Ｈ₂ＮＯＣ，（アミノ酸またはペプチド）−ＮＨＯＣ，（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣであり；ＢがＳＨであり、ＸがＳＨであるとき、ｎが０でなく；さらにチオール基が還元型であるとき、アミノ酸はチオール基を含まないαまたはβ−アミノ酸である、の１個のチオール含有部分を含む請求項１の試薬。２６．放射標識錯体部分が、式： IIａ．−(アミノ酸)¹−(アミノ酸)²−{Ａ−ＣＺ(Ｂ)−{Ｃ(Ｒ¹Ｒ²)}_n−Ｘ}、 IIｂ．−{Ａ−ＣＺ(Ｂ)−{Ｃ(Ｒ¹Ｒ²)}_n−Ｘ}−(アミノ酸)¹−(アミノ酸)²、 IIｃ．−(第１級α，ωまたはβ，ω−ジアミノ酸)−(アミノ酸)¹−{Ａ−ＣＺ( Ｂ)−{Ｃ(Ｒ¹Ｒ²)}_n−Ｘ}、または IIｄ．−{Ａ−ＣＺ(Ｂ)−{Ｃ(Ｒ¹Ｒ²)}_n−Ｘ}−(アミノ酸)¹−(第１級α，βまたはβ，γ−ジアミノ酸）〔式中、(アミノ酸)¹および(アミノ酸)²は、それぞれ独立して、チオ基を含まない、天然の、修飾、置換または変化したα−またはβ−アミノ酸；ＡはＨ、ＨＯＯＣ.Ｈ₂ＮＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＮＨＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＯＯＣまたはＲ⁴；ＢはＨ、ＳＨまたは−ＮＨＲ³、−Ｎ(Ｒ³)−（アミノ酸またはペプチド）またはＲ⁴ ；ＸはＳＨまたは−ＮＨＲ³、−Ｎ(Ｒ³)−(アミノ酸またはペプチド)またはＲ⁴；ＺはＨまたはＲ⁴；Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴は、独立してＨまたは直鎖または分枝鎖または環状低級アルキル； (ペプチド)は２から約１０アミノ酸のペプチド；ｎは０、１または２の整数およびＢが−ＮＨＲ³または−Ｎ(Ｒ³)−(アミノ酸またはペプチド)である場合、ＸはＳＨおよびｎは１または２；Ｘが−ＮＨＲ³または−Ｎ(Ｒ³)−(アミノ酸またはペプチド)である場合、ＢはＳＨおよびｎは１または２；ＢがＨまたはＲ⁴、ＡがＨＯＯＣ.Ｈ₂ＮＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＮＨＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＯＯＣである場合、ＸはＳＨおよびｎは０または１；ＡはＨまたはＲ⁴である場合、次いでＢがＳＨである場合、Ｘが−ＮＨＲ³または −Ｎ(Ｒ³)−(アミノ酸またはペプチド)およびＸがＳＨ、Ｂが−ＮＨＲ³または− Ｎ(Ｒ³)−(アミノ酸またはペプチド)；ＸがＨまたはＲ⁴である場合、ＡがＨＯＯＥ、Ｈ₂ＮＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＮＨＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＯＯＣおよびＢがＳＨ；Ｚがメチルである場合、Ｘがメチル、ＡがＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＮＨＯＣ、(ペプチド)−ＯＯＣおよびＢがＳＨおよびｎが０；ＢがＳＨおよびＸがＳＨである場合、ｎは０ではない；およびチオール部分が還元形である〕を有する放射標識部分からなる群から選択されるものである、請求項２５記載の試薬。２７．式ＣＨ₂ＣＯ−Ｙ_DＡ_pcＧＤＣＧＧＣ_AcmＧＣ_AcmＧＣＣ.アミドを有する、組成物。２８．部分量１,０００ダルトン以下であり、血小板糖タンパク質IIｂ／IIIａのレセプターに結合し、そして血小板を多量に含む血漿中でのヒト血小板凝集を、約１μＭより大きくない濃度で存在するとき５０％(ＩＣ₅₀)阻止し得る環状ペプチド(このペプチドは−Ａpm−Ｇly−Ａsp配列を含む)を含む組成物。２９．環状ペプチドが式〔Ａは親油性Ｄ−α−アミノ酸またはＮ−アルキル−Ｌ−α−アミノ酸またはＬ −プロリンおよび；Ｒは独立してＨ、低級アルキルまたは低級アルコキシアルキル〕である、請求項２８の組成物。３０．式：ＣＨ₂ＣＯ.Ｙ_D.Ａ_mp.ＧＤＣおよびＣＨ₂ＣＯ.Ｙ_D.Ａ_mp.ＧＤＣＫを有する環状ペプチドからなる群から選択される、請求項２８の組成物。３１．式：ＣＨ₂ＣＯ.Ｙ_D.Ａ_pc.ＧＤＣＧＧＧＣＨ₂ＣＯ.Ｙ_D.Ａ_pc.ＧＤＣＫＧＣＨ₂ＣＯ.Ｙ_D.Ａ_pc.ＧＤＣＧＧＣＨ₂ＣＯ.Ｙ_D.Ａ_pc.ＧＤＣＣＨ₂ＣＯ.Ｙ_D.Ａ_pc.ＧＤＣＫＣＨ₂ＣＯ.Ｙ_D.Ａ_mp.ＧＤＣＣＨ₂ＣＯ.Ｙ_D.Ａ_mp.ＧＤＣＫおよびＯ−(４−ピペリジニル)ブチルチロシンを有する環状ペプチドからなる群から選択される、組成物。３２．式ＣＨ₂ＣＯ.Ｙ_D.Ａ_mp.ＧＤＣＫＧＣＧ.アミドを有する組成物。