JPH10507183A - 成長ホルモンおよびロイシンを含んでなる医薬製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 添加剤又は緩衝物質として成長ホルモンおよびロイシンを含んでなる医薬製剤は、ペプチド結合の脱アミド化、酸化および分解に対し極めて高い安定性を示す。生成物の安定性は、室温で凍結乾燥状態で又は溶解しているか又は再溶解する製剤の形でその保存および船積みを許容する。

Description

【発明の詳細な説明】 成長ホルモンおよびロイシンを含んでなる医薬製剤 発明の分野 本発明は、成長ホルモンを含んでなる安定化された医薬製剤、該製剤の製造方 法、および成長ホルモンから成る製剤を安定化するためにロイシンの使用に関す る。 発明の背景 ヒトのおよび普通の家畜動物のホルモンは、下垂体前葉で合成されそして分泌 される、約 191個のアミノ酸から成るタンパク質である。ヒト成長ホルモンは、 191個のアミノ酸から成る。 成長ホルモンは、身体の成長の調節におけるのみならず、タンパク質、炭水化 物および脂質の代謝の調節に関与する重要なホルモンである。成長ホルモンの主 効果は、成長を促進することである。 成長ホルモンによって影響される生体には、骨格、結合組織、筋肉、および内 臓例えば肝、小腸および腎が含まれる。 今日例えばヒト成長ホルモン(hGH)および Met−hGH を工業的規模で生ぜしめ る組換え工学および成長ホルモン遺伝子のクローニングが発達するまで、ヒト成 長ホルモンは、ヒトの孔体の下垂体から抽出により得ることができるのみであっ た。成長ホルモンの極めて限られた供給のため、小人症の治療に対し小児期およ び青春期に対する使用が限定されていた、たとえその使用が、特に（成長ホルモ ン欠損症、正常に短い身長およびターナー（Tarner）症候群による）、短い身長 、成人における成長ホルモン欠損症、不妊の使用、やけど、創傷治ゆ、および偽 関節の治療に対し並びにヒトの消費に対 して殺されるべき動物中の脂肪中の割合を減少するため提案されてきたが。 成長ホルモンの医薬製剤は、不安定の傾向にある。分解生成物、例えば脱アミ ド化又はスルホキシド化生成物およびダイマー又はポリマー形は、特に成長ホル モンの溶液中で生じる。 hGHの優先的分解は、１）種々の量の L-asp-hGH，L-iso-asp-hGH，D-asp-hGH 、および D-iso-asp-hGHを形成するため直接加水分解により、又は環状スクシン イミド中間体を介しての脱アミド化（Y.-C.J．Wang and M.A．Hanson．Parenter al Formulations of Proteins and Peptides: Stability and Stabilizers．J． Parenteral Science and Technology 42（Suppl.）（1988）53-525；M.C．Manni ng，K．Patel，R.T．Borchardt．Stability of Protein Pharmaceuticals．Phar maceutical Research 6（11）（1989）903-918；およびB.A．Johnson，J.M．Shi rokawa，W.S．Hancock，M.W．Spellman，L.J．Basa and D.W．Asward．J．Biol ．Chem．264，1462-71(1989).）並びに14位および 125位におけるメチオニン残 基の酸化である（L.C．Teh et al.，J．Biol．Chem.，262，785-794（1987）；G .W．Becker et al.，Biotech．Appl．Biochem.，10，326-337（1988）；R.A．Ho ughten et al.，Arch．Biochem．Biophys.，178，350-355（1977）；R.M．Riggi n et al.，Anal．Biochem．167，199-209（1987）；P．Gellerfors et al.，Act a Paediatr．Scand（suppl），370，93-100（1990）；M.J．Kaufman，Pharm．Re s.，7（3）289-292（1990）.）凍結乾燥状態で並びに溶液中の hGHの主分解産物 は、脱アミド化hGH である。脱アミド化は、149位の Asnで生起しそして少程度 152位で生起する。hGHはまた、14位および 125位で、特に溶液中で相当容易に酸 化される。（L.C．Teh et al.，J．Biol．Chem.，262，785-794（1987）; G.W． Becker et al.，Biotech．Appl．B iochem.，10，326-337（1988）; R.A．Houghten et al.，Arch．Biochem．Bioph ys.，178，350-355（1977）; R.M．Riggin et al.，Anal．Biochem.，167，199- 209（1987）; P．Gellerfors et al.，Acta Paediatr．Scand（suppl），370，9 3-100（1990））。 スルホキシドを形成する溶液中での hGHの酸化は、通常、製剤中に溶解する酸 素に起因する。蒸留水で酸素の溶解性は、約 200μＭ（９）である。４IU／mlを 含んでなる製剤中の hGHの濃度は、60nMの hGHに相当する 1.3mg／mlであるので 、通常の貯臓条件下で酸素は hGHの酸化に対する化学量論的量の約 300倍過剰で 存在するであろう。 タッピング(tapping)しそして製剤を充てんする前に緩衝剤を脱ガスすること により問題を解決しようとすることは可能でなかった。 今日、次のようには考えられていない；すなわち、hGHの脱アミド化形および 酸化形は、毒性又は改変された生物学的活性又はレセプター結合性を有するが、 しかしスルホキシドの配座安定性が、天然hGH と比較して減少しているという効 果に対する徴候がある。 hGHを含んでなる安定した、溶解製剤の開発のため、脱アミド化の速度とスル ホキシドの形成並びに反応を制御する手段を知ることは重要である。 分解の動力学は、温度、pHおよび hGH製造中の種々の添加剤又は補助剤に依存 する。 不安定さの段に、成長ホルモンは、今日、凍結乾燥されそしてその成長ホルモ ンが分解を最少化するための使用に際し再構成されるまで４℃で凍結乾燥形で保 存される。 hGHを含んでなる凍結乾燥製剤は、今日疾患により再構成され次いで４℃で14 日までの期間使用中溶液として保存され、この間幾ら かの分解は起こるであろう。 更に、凍結乾燥成長ホルモンの再構成プロセスは、患者に困難さを与える傾向 にある。 従って、製造者から薬局までの系列は、２年までの長い保存期間を許容する、 制御された低温度、例えば４℃で製剤を取り扱うのに適合している。 しかし、自己−投薬のためのペンシステムの長期間の使用並びに使用の拡大分 野は、次の製剤を要求する；すなわち、その製剤は、「十分な」冷却が必ずしも 得られないような条件下、末端使用者にとって十分に長い期間安定である。 好ましくは、製剤は約１カ月間凍結乾燥状態で末端使用者にとって安定である べきでありそして追加的にカートリッジの目的とする使用期間ペン(pen)装置内 で再構成された状態で１カ月間安定であるべきである。 従って、比較的高温度で使用期間凍結乾燥状態で安定でありそして追加的に比 較的高温度で使用期間溶液中で安定である成長ホルモンのより安定な製剤に対す る必要性が存在する。そのような安定化は、次のような場合に重要である、すな わち、治療すべき患者に関し、クリニックから家庭まで成長ホルモンの投与を移 動させる場合であり、そこでは最適保存は前記の如く得られないかもしれない。 更に、ペン装置を有する使用者に、成長ホルモンの投与のパターンのシフトは 、患者によって遂行されるべき取扱いを促進するために成長ホルモンを含んでな る安定した溶解製剤を要求する。成長ホルモンを含んでなる安定な溶解製剤は、 製剤の再構成を避けることのできる患者によって使用されるペン装置に適合する カートリッジの形態で使用できるように製造でき、従って凍結乾燥された製剤、 再構成のための適当なビヒクル並びに製剤の殺菌の再構成のための 殺菌装置の入手において存在する必要はないであろう。 安定な理由から、製剤の使用直前に凍結乾燥された製剤の再構成を避けること が又望ましいであろう。 更に、成長ホルモン製剤の製造において凍結乾燥工程を避けることも適当であ ろう。凍結乾燥は、時間がかかりそしてコスト高のプロセスでありそしてしばし ば凍結乾燥器の限られた能力のため製造においてしばしば“ボトルネック(bottl eneck)”でもある。 従って、溶解された hGH製剤が、保存期間中そして１カ月までの使用期間中安 定であるようにさせるため、分解プロセスの速度を減少する必要がある。 hGHを安定化させるための従来の試みは、ダイマーの形成を防止するのに十分 に成功してこなかった。ダイマー形成に係わる問題は、例えばベッカー、Biotec hnology and Applied Biochemistry ９，478（1987）に記載されている。 国際公開WO89／09614 およびオーストラリア特許出願 30771／89は、ヒト成長 ホルモン、グリシンおよびマニトールを含有する安定な医薬製剤である。そのよ うな製剤は、凍結乾燥状態中並びに再構成後の使用期間中、正常な加工および貯 臓中、改善された安定性を示す。 公開されたヨーロッパ特許出願303746は、以上の内容を開示する；すなわち； 動物成長ホルモンは、種々の安定剤で安定化され、その結果不溶物が減少しそし て水性環境下で可溶性の活性が保たれ、そのような安定剤には、幾つかのポリオ ール、アミノ酸、生理学的pHで荷電した側基を有するアミノ酸のポリマーおよび 塩素塩が含まれる。ポリオールは、非還元糖、糖アルコール、糖酸、ペンタエリ トリトール、ラクトース、水溶性デキストランおよびフィコリ；アミノ酸は、グ リシン、サッカロース、リンス又はその塩、セリン、 アルギニン又はその塩、ベタイン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−グリシン、アスパラギン 酸又はその塩、グルタミン酸又はその塩；生理的pHで荷電した側鎖を有するアミ ノ酸のポリマは、ポリリシン、ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸、ポリア ルギニン、ポリヒスチジン、ポリオルニチンおよびその塩から選ばれ；そして塩 素誘導体は、塩化コリン、コリン土水素シトラート、コリンビタルトラート、コ リンビカーボネート、トリコリン、シトラート、コリンアスコルベート、コリン ボラート、コリングルコナート、コリンホスファート、ジ（コリン）スルファー トおよびジコリンムカートから成る群から選ばれる。 米国特許 4,917,685は、ヨーロッパ特許303746に言及されるものと同じ安定剤 を用いて安定化される成長ホルモンを含んでなる植め込むことが意図されたデリ バリーデバイスを開示する。 ヨーロッパ公開特許 374,120は、hGHおよび三個の水酸基を有するポリオール を含んでなる、安定化された製剤を開示する。グリセロールおよびトリス（ヒド ロキシメチル）アミノメタンが、言及されている。更に、ポリオールと共に緩衝 剤としてヒスチジン塩酸塩の存在が開示されている。 国際公開WO93／12811 は、凍結乾燥粉末又はアスパラギンを含んでなる水性溶 液の形態で成長ホルモンの安定化製剤を開示する。 国際公開WO93／12812 は、凍結乾燥粉末又はヒスチジンを含んでなる水性溶液 の形態で成長ホルモンの安定化製剤を開示する。 国際公開WO93／19776 は、緩衝物質として、ホスファート緩衝剤を含んでなる 製剤よりもより安定であるシトラートを含んでなる成長ホルモンを含んでなるタ ンパク質製剤を開示する。製剤は又、アミノ酸、例えばグリシンおよびアラニン および／又はマニトール又は他の糖アルコールおよび／又はグリシンおよび／又 は他の炭水化 物および所望の防腐剤例えばベンジルアルコールを含有することが できる。 国際公開WO94／03198 は、ヒト成長ホルモン、緩衝剤、非イオン界面活性剤、 および所望により、中性塩、マニトール、又は防腐剤を含有する安定な水性製剤 を開示する。 ヨーロッパ公開特許 106,608は、安定剤として、サッカリド又は中性アミノ酸 を用い、グロブリンの安定化溶液を開示する。 米国特許 4,537,769は、バリンを含む種々のアミノ酸によりインフルエンザウ ィルスからのノイラミニダーゼに対する安定化効果を開示する。 米国特許 4,915,945は、糖（例えばスクロース）、糖アルコールおよび／又は アミノ酸を用い、ヒトプラズマCl不活性物質タンパク質の安定性を開示する。 本発明の簡単な記載 今や、驚くべきことに以下の内容が見出された、すなわち添加剤としてロイシ ンを含むヒト成長ホルモンの製剤は、脱アミド化に対し極めて高い安定性を示す 。生成物の安定性は、凍結乾燥中又は溶解しもしくは再溶解した製剤の形で保存 および船積みを許容する。 本発明の医薬製剤は、適当な方法で、例えば非経口又は経口投与により粘膜； 例えば点鼻投与により投与するために製剤化できる。 医薬製剤は、バイアル又はカートリッジ又は他の適当な容器例えば精製シュリ ンジ又はペン装置内に含まれる用量の形で存在してもよい。 従って、本発明の製剤は、通常のビヒクル、例えば蒸留水又は注射用水を用い 後に再構成されるべき凍結乾燥粉末の形で又は成長ホルモンを含んでなる溶液の 形で存在することができる。そのような ビヒクルは、通常の防腐剤例えばｍ−クレゾールおよびベンジルアルコールを含 むことができる。 本発明の好ましい態様は、ロイシンを含んでなりそして更に成長ホルモンの緩 衝化された水性溶液の形で担体を含んでなる成長ホルモンの医薬製剤の形である 。そのような製剤は、直ちに使用できる形態でありそして何ら相当に分解するこ となく水性溶液として保存されそして船積みされ得る。 成長ホルモンの溶液中で用いられるべき緩衝剤は、例えばヒスチジン、シトラ ート、タルトラート又はホスファート緩衝剤である。 安全性の理由から、溶液のpHは好ましくは約２〜約８の値に、より好ましくは ５〜７のpHに、特に約 6.8のpHに好ましく調節される。 安定化効果を得るため、ロイシンが、約 0.1mMから 100mMまでの量で、より好 ましくは約５mMの量で好ましく加えられる。 本発明の医薬製剤は、更に稠度を調節するための塩および所望によりそのプロ セスを、例えば凍結乾燥使用前に製剤を再構成するとき凍結乾燥製剤の急速でか つ完全な溶解促進するための賦形剤を更に含むことができる。 賦形剤は、二糖類、例えばラクトース、トレハロース、およびスクロース、糖 アルコール例えばソルビトール、又はマニトール、多糖例えばデキストラン（商 標）製品、例えばデキストラン（商標）40、デキストラン（商標）70又はデキス トラン（商標）75、およびフィコール（商標）として商品化されているポリマー 並びに多価アルコール例えばポリエチレングリコール又はポリビニルアルコール 又はこれらの二＞又は三＞の組み合せから選ぶことができる。 医薬製剤は、成長ホルモンを、バリンを含む溶液に、好ましくは 0.1mM〜100m M、より好ましくは約１〜10mM、好ましくは２〜６mM 、最も好ましくは約３〜５mMの量で加えることにより製造できる。成長ホルモン は、固体形で又は緩衝溶液例えばヒスチジン、シトラート、タルトラート又はホ スホラート緩衝液中に存在することができる。一つの態様において、溶液は容器 に充填されそして凍結乾燥される。 本発明方法の一つの態様において、任意の塩および賦形剤が加えられ、しかる 後、溶液を容器に充てんしそして凍結乾燥する。 更に本発明の別の面は、成長ホルモンの安定化製剤の製剤化に対するロイシン の使用に関する。 本発明に関連して、「成長ホルモン」は、全ての起源例えば、鳥、牛、馬、羊 、豚、サケ、マス又はマグロ成長ホルモン、好ましくは牛、ヒト又は豚成長ホル モンであってよく、ヒト成長ホルモンが最も好ましい。本発明に従って用いられ る成長ホルモンは、例えば常法により下垂体を抽出することにより天然源から単 離された天然成長ホルモンであるか、又はセンセン等、Biotech and Bioeng．36 ，1-11（1990）に記載の如く組換え法により製造された成長ホルモンであってよ い。「成長ホルモン」は又、成長ホルモン（ここにおいて１以上のアミノ酸残基 が欠損している）；その類似体（ここにおいて、天然分子中の１以上のアミノ酸 残基は別のアミノ酸残基、好ましくは天然のアミノ酸残基により置換されており 、但し置換が何らの不都合な効果例えば抗原性又は減少せしめられた作用を有し ない限りである）；又は例えば Met−hGH の如きＮ−又はＣ−末端伸長を有する その誘導体の地形の形であってよい。好ましい成長ホルモンは、ヒト成長ホルモ ン（hGH）である。 成長ホルモンの語句「用量」は、投与レジメにおいて治療的効果を与える量を 意味する。ここにおける製剤は、直ちに使用できる製剤を基準にして、少なくと も約 0.1mg／ml、好ましくは約10mg／ml まで、好ましくは約１mg／ml〜約40mg／ml、より好ましくは約１mgするように製 造される。下垂体低下小人症を煩うヒトに投与するこれらの組成物の使用に対し 、これらの製剤は、意図される治療に対し今日考えられている用量生活規則に相 当する、約 0.1mg／ml〜約10mg／mlを含有する。濃度範囲は、本発明に対し重要 でなくそして投与を管理する医者によって変化し得る。 本発明に従って用いられるべきロイシンは、好ましくは天然αロイシンである 。アミノ酸は１又はｄアミノ酸であるか又はそれらの混合物であってよい。 本発明に関連して、「高安定性」が、製剤がホスフェート緩衝剤を含んでなる 通常の製剤よりもより安定でありそして好ましくは安定剤としてヒスチジンを含 んでなる対応する製剤と同等に好ましくは安定であるとき、得られそしてここに おいて hGHの脱アミド化が、WO93／12812において開示されたホスフェート緩衝 剤として比較して数20〜30％だけ減少している。 本発明方法で用いられる溶剤は、水、アルコール、例えばエチル、ｎ−プロピ ル又はイソプロピル、ブチルアルコール又はこれらの混合物であってよい。溶剤 は、防腐剤例えばｍ−クレゾール又はベンジルアルコールを含んでいてもよい。 発明の詳細な記載 本発明を次の実施例により詳しく説明するが、この例は本発明を例示する。実 施例は添付の請求の範囲で定義される本発明の範囲を限定するものと考えてはな らない。 実施例 例１ 脱アミド化の減少 脱アミド化の速度を、pH6.8のヒスチジンと比較して、５mMのＬ−ロイシンお よびＤ−ロイシンの存在下、pH6.8で４mg／mlの hGHを含んでなる hGH製剤に対 し37℃で調べた。 hGH製剤を、10mMのアミノ酸溶液２mlに８mgの hGHを溶解することによって調 製した。従って、２mlの 3.0％ベンジルアルコールを添加し、４mg／mlの hGH、 ５mMのＤ−ロイシン又はＬ−ロイシン、1.5％のベンジルアルコール、pH6.8(HCI 又はNaOHを加えて調節）の最終製剤を得た。 下記の表で述べられている hGH製剤を37℃で７日間、そして溶離剤として尿素 を用いIE−HPLCにより脱アミド化hGF の含量に対し分析した。結果を次の表に示 す。 出発物質中の脱アミド化hGH の含量は、2.0％であった： 前記表から、以下の内容が明らかである；すなわち、ホスフェート緩衝剤と比 較してＤ−ロイシン又はＬ−ロイシンを添加することにより、hGH の脱アミド化 は25〜30％だけ減少する（ヒスチジンと比較して、少なくとも安定である、注上 記WO93/12812）。 前記結果は、以下の内容を示している；すなわち脱アミド化の速度は、100mM まで、好ましくは約５mMまでの低含量でＬ−ロイシン又はＤ−ロイシンを添加す ることによって減少する。脱アミド化の速度は、ホスフェート緩衝剤をＬ−ロイ シン又はＤ−ロイシンで置換することにより30％以上減少し得る。 防腐剤としてベンジルアルコールを使用すると、脱アミド化の速度に何ら影響 しないように思われる。 例２ 脱アミド化の減少 脱アミド化の速度を、pH6.8のヒスチジンと比較して、５mMのＬ−ロイシンの 存在下、pH6.8で４mg／mlの hGHを含んでなる hGH製剤に対し37℃で調べた。 hGH製剤を、10mMのアミノ酸溶液２mlに８mgの hGHを溶解することによって調 製した。従って、２mlの3.0％ベンジルアルコールを添加し、４mg/mlの hGH、５ mMのＤ−ロイシン又はヒスチジン、 1.5％のベンジルアルコール、pH6.8(HCl又 はNaOHを加えて調節)の最終製剤を得た。 下記の表で述べられている hGH製剤を37℃で７日間、そして溶離剤としてアセ テートを用いIE−HPLCにより脱アミド化hGF の含量に対し分析した。結果を次の 表に示す。 出発物質中の脱アミド化hGH の含量は、2.0％であった： 前記表から、以下の内容が明らかである；すなわち、ホスフェート緩衝剤と比 較してロイシンを添加することにより、hGH の脱アミド化は25〜30％だけ減少す る（ヒスチジンと比較して、少なくとも安定である、注上記WO93/12812）。 前記結果は、以下の内容を示している；すなわち脱アミド化の速度は、100mM まで、好ましくは約５mMまでの低含量でロイシンを添加することによって減少す る。脱アミド化の速度は、ホスフェート緩衝剤をロイシンで置換することにより 30％以上減少し得る。 防腐剤としてベンジルアルコールを使用すると、脱アミド化の速度に何ら影響 しないように思われる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)， ＡＭ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，Ｃ Ｚ，ＥＥ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ， ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，Ｒ Ｕ，ＳＤ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．成長ホルモンおよびロイシンを含んでなる医薬製剤。 ２．前記医薬製剤が、緩衝水性溶液の形態にある、請求の範囲第１項記載の医 薬製剤。 ３．pH値が、約２〜約８の間隔内の値に調節されている、請求の範囲第１又は ２項記載の医薬製剤。 ４．ロイシンの濃度が、100mMまでである、請求の範囲第１〜３項のいずれか １項に記載の医薬製剤。 ５．塩および／又は賦形剤を更に含んでなる、請求の範囲第１〜４項のいずれ か１項に記載の医薬製剤。 ６．成長ホルモンが hGHである、請求の範囲第１〜５項のいずれか１項に記載 の医薬製剤。 ７．請求の範囲第１項記載の医薬製剤の製造方法であって、成長ホルモンを、 ロイシンを含んでなる溶液に添加することを含んでなる、前記方法。 ８．成長ホルモンの製剤の安定化方法であって、該製剤を安定化するために有 効なロイシンの量を添加することを含んでなる、前記方法。 ９．ロイシンを含んでなる溶液を、脱イオン水中にロイシンを溶解することに よって得ることを含んでなる、請求の範囲第７又は８項記載の方法。 10．ロイシンを含んでなる溶液が、またベンジルアルコールを含んでなる、請 求の範囲第１〜９項のいずれか１項に記載の方法。 11．前記製剤のpH値を、約２〜約８に調整することを更に含んでなる、請求の 範囲第１〜10項のいずれか１項に記載の方法。 12．更に塩を添加することを含んでなる、請求の範囲第１〜11項 のいずれか１項に記載の方法。 13．更に賦形剤を含んでなる、請求の範囲第１〜12項のいずれか１項に記載の 方法。 14．成長ホルモンおよびロイシンを含んでなる溶液を、容器に充填し次いで該 溶液を凍結乾燥することを含んでなる、請求の範囲第１〜13項のいずれか１項に 記載の方法。 15．成長ホルモンによって作用され得る患者の疾患の治療方法であって、該疾 患を治療するために有効である、請求の範囲第１〜６項のいずれか１項に記載の 医薬製剤の量を投与することを含んでなる、前記方法。 16．本明細書で開示した新規特徴又はその特徴の組み合わせ。