JPH10509181A

JPH10509181A - 転移リスクを減少させるための酸化窒素放出薬剤の使用

Info

Publication number: JPH10509181A
Application number: JP8517097A
Authority: JP
Inventors: ジェイ．コーサイス、ロナルド; コング、リプ; ケイ．キーファー、ラリー
Original assignee: Government of the United States of America
Current assignee: Government of the United States of America
Priority date: 1994-11-22
Filing date: 1995-11-20
Publication date: 1998-09-08
Also published as: EP0804177A1; AU4246096A; AU699387B2; WO1996015781A1; CA2205555A1; US5700830A; CA2205555C

Abstract

(57)【要約】酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基を含有する酸化窒素放出化合物を哺乳類に投与することを含む、哺乳類における癌性細胞と非癌性構造との間の接着(adherence)を阻害する方法。当該化合物は当該哺乳類に接着(adherence)阻害有効量の酸化窒素を放出することができるものである。

Description

【発明の詳細な説明】転移リスクを減少させるための酸化窒素放出薬剤の使用発明の技術分野本発明は、哺乳類における癌性細胞と非癌性細胞との間の接着(adherence)を阻害する方法、より詳細には、酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基を含有する酸化窒素放出薬剤（nitric oxide-releasing agent）を用いて哺乳類における転移リスクを減少させる方法に関する。発明の背景現在の癌治療法には外科手術、放射線療法、化学療法および免疫療法が含まれる。通常、これらの方法の一またはそれ以上が組み合わせて用いられ、外科手術と放射線療法が最も癌を根絶するのに有効である。しかし、外科手術と放射線療法はどちらも局所的治療法であり、これらの治療は腫瘍が局在化しているときのみ有用である。もし癌が全身的または転移性ならば、化学療法と免疫療法がより有用な治療方法である。転移は腫瘍治療の最も深刻な問題の一つであり、致命的状態のほとんどを引き起こす。転移のリスクは原発性腫瘍の治療において特に高く、よってこの段階で転移の形成を緊急に予防する必要がある。転移では、原発性腫瘍から循環系またはリンパ系への癌性細胞の放出、続く毛細管および後毛細管小静脈の壁への癌性細胞の接着(adhesion)および管外遊出が生じ、その結果として、癌性細胞が新たな組織部位に移動し、一またはそれ以上の続発性腫瘍の形成を起こす。一旦、腫瘍細胞が循環系へのアクセスを得ると、その後に続く転移カスケードの段階では、微小血管内皮への接着(adhesion)および基底膜（血管壁を取り囲む薄い細胞外マトリックスであり、特定の蛋白質分解酵素により分解されると考えられている）の浸潤が生じる。転移性癌性細胞の内皮への接着(adhesion)には、ＶＣＡＭ、ＶＬＡ−４、Ｅ−セレクチン（E-select in）およびシアリル−ルイスＸ（sialyl-Lewis X）のような接着構造(adhesive structure)が介在する。同様に、腫瘍細胞の基底膜への接着(adhesion)には、ラミニン、フィブロネクチンおよびコンドロネクチン(chondronectin)のような種々の糖蛋白質に結合する特異的細胞表面受容体が介在する。ラミニンは基底膜特異的糖蛋白質であり、３つの鎖、すなわちα、β１、およびβ２から構成され、その形状は十字形で、多くの癌（例えば、結腸癌および乳癌）に好まれる糖蛋白質である（Liotta，Cancer Res., 46，1-7(1986); Terran ova et al.，PNAS USA，80，444-448(1983); Terranova et al.，Cancer Res., 42 ，2265-2269(1982); およびVlodavsky et al.，Nature, 289, 304-306(1981) ）。ラミニンは細胞接着(cell adhesion)、移動、増殖、神経突起伸長および分化の促進を活性化する（例えば、Timpl et al.，J ．Biol．Chem.，254, 993(197 9)，Engel et al.，J ．Mol．Biol., 150, 97(1981)，Kleinman et al.，J ．Cell ．Biochem., 27，317(1985)およびGraf et al.，Cell，48,989(1987)参照）。細胞表面にラミニン受容体を有する悪性細胞は通常の細胞に比べてより容易にラミニンに結合し接着(attach)する。運動性因子および組織化学走性因子は悪性腫瘍細胞の運動を刺激することができ、ある種の腫瘍細胞の臓器特異的転移に関連している（Hujanen et al.，Canc er Research, 45，3517-3521(1985)）。化学誘引物質は腫瘍細胞転移に重要な役割を果たしているかもしれない。転移は、原発性腫瘍から離れた臓器部位への腫瘍細胞の広がりを生じるので、種々の形態の化学療法および免疫療法が転移の治療に用いられてきた。従来の化学療法は、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、マイトマイシン（ＭＭＣ）、シスプラチン（ＣＤＤＰ）またはアドリアマイシン（ＡＤＲ）のような核酸または蛋白質の合成の阻害剤を用いて主に行われてきた。しかしながら、これらの阻害剤は非常に強い副作用を伴うので、それらの使用は実質的に補助的治療に限定されてきた。最近、インターフェロンやインターロイキンのようなサイトカインの投与によって免疫学的防御システムである異物排除機構(foreign body exclusion mechan ism)を増強することにより癌を治療する試みが行われている。もちろん、これらの物質は生物に異物が侵入したときにのみ局所的に生成される。従って、そのような化合物を全体的または全身的に投与すると、副作用も引き起こす。さらに、生物に癌細胞を異物として認識するのが困難だとすると、この治療法を適用できる癌は非常に限定される。同様に、生物学的応答調節剤（Biological response modifier，ＢＲＭ)のような免疫強化抗腫瘍剤の使用もまた副作用を伴う。米国特許第５，３０６，７１４号（Okamoto et al.，1994年 4月26日)および米国特許第５，００４，７３５号（Okamoto et al.，1991年 4月 2日）には、（Ｓ）−２，３−ジヒドロポリプレノールおよび（Ｓ）−２，３−ジヒドロポリプレノールモノホスフェートおよびそれらの医薬的に許容される塩を転移の治療に使用することが開示されている。Ｎ−（３−フェニルプロピル）−１−デオキシノジリマイシン、１−デオキシノジリマイシン、Ｄ−グルカロ−δ−ラクタム、および６−Ｏ−トリフェニルメチル−Ｄ−グルコ−δ−ラクタムのようなラクタム類が、米国特許第４，９８５，４４５号（Suzuki，1991年1 月15日）に転移の阻害剤として記載されている。米国特許第５，２４２，６９２号（Djaldetti et al.，1993年 9月 7日）には、筋肉組織および筋肉細胞培養物から単離され得る、分子量約25,000〜30,000ダルトンの腫瘍細胞増殖阻害剤が開示されている。米国特許第５，２３１，０８２号（Schasteen，1993 年 7月27日）には、抗転移環状ペプチドが開示されている。この環状ペプチドは67kDa のラミニン受容体に結合し、ラミニンが介在する細胞接着(cell adhesion)およびメラノーマ細胞による転移増殖を阻止すると言われている。他の抗転移ペプチド（ペンタペプチドtyr-ile-gly-ser-arg を含む）が、ヨーロッパ特許出願公開第０２７８７８１号，Iwamoto et al.，Science, 238, 1132(1987)，およびGraf et al.，Biochem istry , 26，6896（1987）に開示されている。ラミニンβ１ペプチドおよびその腫瘍細胞転移の治療における使用が米国特許第５，１７５，２５１号（Jo hnson et al.，1992年12月29日）に記載されている。転移を阻害するためにペンタペプチドのようなアシル化ペプチドを投与することが米国特許第５，０３９，６６２号（Schasteen et al.，1991年 8月13日）に記載されている。アシルアミノアルキルピリジンアミドの投与が転移の治療方法として米国特許第５，０３０，６４２号（Fuller et al.，1991 年 7月 9日）に記載されている。このアミドは５−リポキシゲナーゼの特異的阻害剤として記載され、細胞浸潤活性と転移を阻害すると言われている。５−（２−クロロベンジル）−４，５，６，７−テトラヒドロチエノ［３，２ −ｃ］ピリジンの転移治療のための使用が米国特許第４，９６３，５５９号（Su zuki，1990年10月16日）に記載されている。ある種のカスタノスペルミンエステル類（castanospermine esters）およびカスタノスペルミン(castanospermine)の投与による転移の阻害が、米国特許第４，９５２，５８５号（Sunkara et al.，1990年 8月28日）および米国特許第４，７９２，５５８号にそれぞれ記載されている。臓器細胞レクチンに特異的な単糖類および／またはそのような単糖類を含有する複合糖質、特にβ−Ｄ−ガラクトースおよび／または末端β−Ｄ−ガラクトース部分を含有する複合糖質の転移治療のための使用が米国特許第４，９４６，８３０号（Pulverer et al.，1990 年 8月 7日）に記載されている。 Terranova et al．((1982)前記)には、ある種の転移性細胞をラミニンに対する抗体で処置することが開示されている。この抗体は転移性細胞の基底膜との相互作用能力を低下させ、細胞がマウスに注射されたときに生じる転移の数を減少させる。転移（肺、胸部および結腸の原発性腫瘍から生じるようなもの）をコントロールするためにリボヌクレアーゼ阻害剤を投与することが米国特許第５，１７５，００５号（Fukushima et al.，1992年12月29日）に記載されている。プロテインキナーゼＣを阻害する化合物を転移を阻害する手段として使用することが米国特許第５，１５１，３６０号（Handa et al.，1992年 9月29日）に開示されている。転移を阻害するためのＮ，Ｎ，Ｎ−トリメチルスフィンゴシンの使用が米国特許第５，１３７，９１９号（Igarashi et al.，1992 年 8月11日）に記載されている。クロスグリ(black currant)の種から得た脂質を栄養または医薬組成物の形態（これはエイコサペンタノイックアシッド(eicosapentanoic acid)およびジホモ −γ−リノレン酸の生物学的利用率を促進するが、一方でアラキノイックアシッド(arachinoic acid)の生物学的利用率を抑制する）で投与することで細胞接着（cell adhesion）および、それにより転移を防止することが米国特許第５，１４１，９５８号（Crozier-Willi et al.，1992年 8月25日）に記載されている。手術後の悪性腫瘍転移を抑制するためのレクチン、アブリン(Abrin)およびアブラス(Abrus)アグルチニンの投与が米国特許第５，０５３，３８６号（Tung，1 991年10月 1日）に開示されている。メラノーマおよび乳癌のような転移の高い可能性を特徴とする腫瘍の手術切除後の５−アミノ−または置換アミノ−１，２，３−トリアゾールの投与が米国特許第５，０４５，５４３号（Hupe，1991年 9 月 3日）に記載されている。従って、一般的に癌の治療に、そしてより詳細には転移の治療に、多くの腫瘍阻害物質が実際に使用され、より多くの物質が潜在的な使用可能性を有することが明らかである。しかしながら、今日においても癌の一般的療法はなく、それゆえに化学療法に貢献するどんなものでも、少なくとも癌および関連する転移の治療により有効な薬剤を得ることを望んでいる医療従事者には喜んで受け入れられる。ＮＯを合成する腫瘍細胞は合成しないものより転移性が少ないと考えられる(R adomski et al.，Cancer Research, 51，6073-6078(1991); Dong et al.，Cance r Research, 54，789-7793(1994))。外因性のＮＯの投与が転移に効果を及ぼすか否かはわかっていない。しかし、市販のＮＯ−放出性化合物を用いてこの仮説を試験するのに伴う問題は、これらの化合物が部位特異的にＮＯを放出することができないことである。体全体にＮＯを放出する現在市場に出ているＮＯプロドラッグを用いて癌患者を治療するのは望ましくないだろう。なぜなら、それは他のＮＯ−感受性組織に、腫瘍細胞に対するどんな有益な効果も上回りうる望ましくない副作用をもたらすであろうからである。酸化窒素は純粋な形態では、水性媒体に対して限られた溶解度を有する反応性の高いガスである（窒素酸化物の環境保健規準に関するＷＨＯ対策グループ、窒素酸化物、環境保健規準４（Oxides of Nitrogen，Enviromental Health Criter ia 4）（世界保健機関：ジュネーブ、１９７７年））。従って、大多数の生物学的システムに酸化窒素を早期に分解させることなく確実に導入することは困難である。代謝されて酸化窒素を放出する化合物および水溶液中で自発的に酸化窒素を放出する化合物を含めた、酸化窒素を送達することのできる多くの化合物が薬理学的目的で開発されている。代謝されて酸化窒素を放出する化合物には、広く使用されているニトロ血管拡張剤、ニトログリセリンおよびニトロプルシドナトリウムが含まれ（Ignarro et al.，J ．Pharmacol．Exp．Ther.，218, 739-749(1981); Ignarro，Annu ．Rev. Pharmacol ．Toxicol. ，30，535-560(1990); Kruszyna et al.，Toxicol. Appl ． Pharmacol., 91，429-438(1987); Wilcox et al.，Chem ．Res. Toxicol., 3, 71 -76(1990))、これらの化合物は比較的安定であるが、活性化により酸化窒素を放出する。この特徴はある適用では有利となるかもしれないが、重大な障害にもなりうる。例えば、ニトログリセリンに対する耐性が、関係する酵素／補因子システムの消耗を介して発現する（Ignarro et al.，Annu ．Rev. Pharmacol ．Toxico l. ，25，171-191(1985); Kuhn et al.，J ．Cardiovasc. Pharmacol., 14(Suppl ．11)，S47-S54(1989)）。また、ニトロプルシドの長期投与はシアン化物の代謝産物を生じさせ、毒性につながる（Smith et al.，「生物学的に反応性の中間体の抜粋集」生物学的に反応性の中間体IV、分子的および細胞的効果とそれらの人間の健康に対する影響（“A Potpourri of Biologi cally Reactive Intermediates”，Biological Reactive Intermediates IV ．Mo lecular and Cellular Effects and Their Impact on Human Health) (Witmer et al.編)、実験医学と生物学における進歩、第283 巻（プレナムプレス、ニューヨーク、１９９１年）３６５〜３６９頁（Advances in Experimental Medicine and Biology Volume 283(Plenum Press: New York，1991)，pp．365-369）。ＮＯ−放出薬剤の非常に重要なクラスは酸化窒素−求核剤複合体、ＮＯ−放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-（「ＮＯＮＯエート」；“ＮＯＮＯａｔｅ”）官能基を含有する化合物である。数多くの酸化窒素−求核剤複合体が報告されている（例えば、Drago，A CS Adv ．Chem．Ser. ，36，143-149(1962)）。LonghiおよびDrago，Inorg. Chem. ，2 ，85(1963)も参照。これらの複合体の多くは加熱または加水分解により酸化窒素を放出することが知られている（例えば、Maragos et al.，J ．Med．Chem., 34，3242-3247(1991)）。最近、ある種の酸化窒素−求核剤複合体を用いて哺乳類の心臓血管障害を治療する方法が開示された（例えば、米国特許第４，９５４，５２６号）。これらの化合物はアニオン性Ｎ₂Ｏ₂ ^-基またはその誘導体を含有する。Maragos et al.，（前記）も参照。これらの化合物の多くは薬理学的に特に有望であることが判明した。なぜなら、ニトロプルシドやニトログリセリンのようなニトロ血管拡張剤と異なり、最初に活性化する必要がなく酸化窒素を放出するからである。純粋に自発的に酸化窒素を放出できることが現在知られている唯一の他のシリーズの薬剤は、Ｒ−Ｓ−ＮＯ構造の化合物、Ｓ−ニトロソチオールシリーズである（Stam ler et al.，Proc ．Natl．Acad．Sci．U.S.A., 89，444-448(1992)）；Ｓ−ニトロソ−Ｎ−アセチルペニシラミンは溶液中で酸化窒素を放出し、ＤＮＡ合成阻害に有効であると報告されている(Garg et al.，Biochem ．and Biophys．Res．Com m. ，171 ，474-479(1990))。しかしながら、Ｒ−Ｓ−ＮＯ→ＮＯ反応は速度論的に複雑であり制御が難しい（Morley et al.，J ．Cardiovasc．Pharmac ol., 21，670-676(1993)）。同様に、モルシドミン(molsidomine)やリンシドミン(linsidomine)のような化合物はＮＯを放出させるために活性化が必要なだけでなく、望ましくないフリーラジカルも放出する。従って、ＮＯＮＯエートは一次反応によりどんな所定のｐＨででも分解されて、予測された、定量的でかつ制御された量の酸化窒素を供給する点で現在知られている薬剤の中で有益である。例えば、Maragos et al.,（前記）参照。水溶液中で酸化窒素を放出する酸化窒素／求核剤複合体はまた、米国特許第５，０３９，７０５号、第５，１５５，１３７号、第５，１８５，３７６号、第５，２０８，２３３号、第５，２１２，２０４号、第５，２５０，５５０号、ならびに係属中の米国特許出願番号０７／９５０，６３７（１９９２年９月２３日出願）、および０７／８５８，８８５（１９９２年３月２７日出願）にも有用な心臓血管作用薬として開示されている（Maragos et al.，J ．Med．Chem., 34，324 2-3247(1991)も参照）。かなりの研究と相当な財源の支出にもかかわらず、癌の有効な治療方法の必要性がいまだに残されている。特に、転移で起こるような癌性細胞と非癌性構造との間の接着(adherence)を阻害する有効な方法が要求されている。従って、ひとつの局面において、本発明は、本方法を必要とする患者において、転移で起こるような癌性細胞と非癌性構造との間の接着(adherence)を阻害する方法を提供する。本発明のその他の目的や長所、ならびに他の発明の特徴は、ここに述べる発明の記載から明らかとなるだろう。発明の要旨本発明は、哺乳類（特にヒト）における癌性細胞と非癌性構造との間の接着（ adherence）を阻害する方法を提供する。本方法は、それを必要とする哺乳類に、酸化窒素放出官能基Ｎ₂Ｏ₂ ^-を含有する酸化窒素放出薬剤を投与することを含む。酸化窒素放出薬剤は接着阻害有効量(adherence-inhibiting effective amou nt)の酸化窒素を当該哺乳類に放出して、癌性細胞と非癌性構造との間の接着(adherence)を阻害する（ここで、「非癌性構造」という語は、細胞、組織、膜、臓器などをいう）。本発明は転移のリスクを減少させる方法を提供する。当該方法もまた、投与を必要とする哺乳類に酸化窒素放出薬剤を投与することを含む。この薬剤は、酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基を含有する単量体であってもよいし、あるいは酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基が結合した高分子を含有する高分子組成物であってもよい。この高分子はまた生体高分子であってもよい。この薬剤は接着阻害有効量(adherence-inhibiting effective amount)の酸化窒素を、当該哺乳類における癌性細胞と非癌性構造との間の接着(adherence)のリスクのある部位、特に転移のリスクのある部位に局所的に放出することができる。図面の簡単な説明図１は、リポポリサッカライド（ＬＰＳ）、ＤＥＴＡ／ＮＯ（Ｈ₂ＮＣＨ₂ＣＨ₂ Ｎ［Ｎ（Ｏ）ＮＯ］^-ＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨ₃ ⁺）、またはＬＰＳとＤＥＴＡ／ＮＯの非存在下または存在下での小静脈（ＶＥＮ）および小動脈（ＡＲＴ）に対して接着した腫瘍細胞(adherent tumor cell)の％の棒グラフである。発明の詳細な説明本発明は、哺乳類における癌性細胞と非癌性構造との間の接着(adherence)を阻害する方法を提供し、哺乳類における転移のリスクを減少させるのに有用である。本方法は、哺乳類（特にヒト）に、酸化窒素放出官能基Ｎ₂Ｏ₂ ^-を含有する酸化窒素放出薬剤を投与することを含む。この薬剤は、酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基を含有する化合物または酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基が結合した高分子を含有する高分子組成物である。この薬剤は、潜在的に転移性の癌性細胞に（例えば、免疫化学的相互作用により）付着して、それにより転移を阻害するのに十分なＮＯを細胞に投与することができる、あるいは接着阻害有効量(adherence-inhib iting effective amount)の酸化窒素を、当該哺乳類における非癌性構造の転移のリスクのある部位に局所的に放出することができる。酸化窒素放出高分子組成物は多くの形態で、例えば、後記でより詳細に説明するような臓器または細胞特異的生体高分子として、またはインプラント、リポソーム、マイクロ粒子、マイクロスフェア、ビーズまたはディスクとして投与することができる。「接着阻害有効」量(“adherence-inhibiting effective”amount)は投与量に関して後述する。有用な薬理学的薬剤は、酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基を単量体または高分子（生体高分子を含む）に取り込むことにより提供され得る。本発明の方法で使用に適した酸化窒素放出薬剤は式：（式中、Ｘは有機または無機部位であり、Ｘ’は有機または無機置換基、医薬上許容される金属中心、医薬上許容されるカチオンなどである。）で定義される。Ｎ₂Ｏ₂ ^-基は結合基ＸおよびＸ’のいずれか一方または両方を介して生体高分子に結合している。酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基は、好ましくは酸化窒素／求核剤付加物、すなわち、酸化窒素と求核剤との複合体であり、最も好ましくはアニオン性部位Ｘ［Ｎ（Ｏ）ＮＯ］^-（式中、Ｘは任意の適当な求核剤残基を示す）を含む酸化窒素／求核剤複合体である。求核剤残基は、好ましくは第一アミン（例えば、（ＣＨ₃ ）₂ＣＨＮＨ［Ｎ（Ｏ）ＮＯ］ＮａにおけるＸ＝（ＣＨ₃）₂ＣＨＮＨ）、第二アミン（例えば、（ＣＨ₃ＣＨ₂）₂Ｎ［Ｎ（Ｏ）ＮＯ］ＮａにおけるＸ＝（ＣＨ₃ＣＨ₂）₂Ｎ）、ポリアミン（例えば、両性イオンＨ₂Ｎ（ＣＨ₂）₃ＮＨ₂ ⁺（ＣＨ₂）₄ Ｎ［Ｎ（Ｏ）ＮＯ］^-（ＣＨ₂）₃ＮＨ₂におけるＸ＝スペルミン、両性イオンＣＨ₃ＣＨ₂Ｎ［Ｎ（Ｏ）ＮＯ］^-ＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨ₃ ⁺におけるＸ＝２−（エチルアミノ）エチルアミン、または両性イオンＣＨ₃ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ［Ｎ（Ｏ）ＮＯ］^-ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨ₃ ⁺におけるＸ＝３− （ｎ−プロピルアミノ）プロピルアミン）、またはオキシド（すなわち、ＮａＯ［Ｎ（Ｏ）ＮＯ］ＮａにおけるＸ＝Ｏ^-）、またはそれらの誘導体である。このような酸化窒素／求核剤複合体は酸化窒素を予測し得る速度で生物学的に使用可能な形態で送達することができる。適当な酸化窒素／求核剤複合体には、次式で表されるものが含まれる。言及によってここに組み入れられる米国特許第５，２１２，２０４号に記載されている〔式中、Ｊは有機または無機部位（例えば、炭素原子を介してＮ₂Ｏ₂ ^-基の窒素と結合していない部位を含む）であり、Ｍ^+xは医薬上許容されるカチオン（式中、ｘはカチオンの原子価である）であり、ａは少なくとも１の整数であり、ｂおよびｃは中性化合物を与える最も小さい整数である。〕；言及によってここに組み入れられる米国特許第５，１５５，１３７号に記載されている（式中、ｂおよびｄは同一または異なって０または１であり、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄およびＲ₅は同一または異なって水素、Ｃ_3-8シクロアルキル、Ｃ_1-12直鎖または分枝鎖アルキル、ベンジル、ベンゾイル、フタロイル、アセチル、トリフルオロアセチル、ｐ−トルイル、ｔ−ブトキシカルボニルまたは２，２，２−トリクロロ−ｔ−ブトキシカルボニルであり、ｘ、ｙおよびｚは同一または異なって２〜１２の整数である。）；言及によってここに組み入れられる米国特許第５，１５５，１３７号に記載されている（式中、Ｂはであり、Ｒ₆およびＲ₇は同一または異なって水素、Ｃ_3-8シクロアルキル、Ｃ_1-1 ₂ 直鎖または分枝鎖アルキル、ベンジル、ベンゾイル、フタロイル、アセチル、トリフルオロアセチル、ｐ−トルイル、ｔ−ブトキシカルボニルまたは２，２，２−トリクロロ−ｔ−ブトキシカルボニルであり、ｆは０〜１２の整数であり、ただしＢが置換されたピペラジン部位の場合、ｆは２〜１２の整数である。）；言及によってここに組み入れられる米国特許第５，２５０，５５０号に記載されている（式中、Ｒ₈は水素、Ｃ_3-8シクロアルキル、Ｃ_1-12直鎖または分枝鎖アルキル、ベンジル、ベンゾイル、フタロイル、アセチル、トリフルオロアセチル、ｐ−トルイル、ｔ−ブトキシカルボニルまたは２，２，２−トリクロロ−ｔ−ブトキシカルボニルであり、Ｒ₉は水素またはＣ₁−Ｃ₁₂直鎖または分枝鎖アルキルであり、ｇは２〜６である。）；言及によってここに組み入れられる米国特許第５，０３９，７０５号および同第５，２０８，２３３号および１９９３年２月１２日に出願された米国特許出願番号０８／０１７，２７０に記載されている（式中、Ｒ₁およびＲ₂は独立して直鎖または分枝鎖Ｃ₁−Ｃ₁₂アルキル基およびベンジル基からなる群より選ばれ、あるいはＲ₁およびＲ₂が窒素原子と共に結合して、複素環基、好ましくはピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノまたはモルホリノ基を形成し、Ｍ^+xは医薬上許容されるカチオンであり、ｘはカチオンの原子価である。）；言及によってここに組み入れられる１９９２年３月２７日に出願された米国特許出願番号０７／８５８，８８５に記載されている K[(M)^x'_x(L)_y(R¹R²N-N₂O₂)_z] （ＶＩ）（式中、Ｍは医薬上許容される金属、またはｘが少なくとも２の場合、異なる２種の医薬上許容される金属の混合物であり、Ｌは（Ｒ¹Ｒ²Ｎ−Ｎ₂Ｏ₂）とは異なる配位子であり、少なくとも１つの金属に結合しており、Ｒ¹およびＲ²はそれぞれ有機部位であり、それらは同一または異なっていてよく、ｘは１〜１０の整数であり、ｘ’は金属Ｍの形式的な酸化状態（formal oxidation state）を示し、１〜６の整数であり、ｙは１〜１８の整数であり、ｙが少なくとも２の場合、配位子Ｌは同一または異なっていてもよく、ｚは１〜２０の整数であり、Ｋは化合物を必要な程度まで中性にする医薬上許容される対イオンである。）；言及によってここに組み入れられる米国特許第４，９５４，５２６号に記載されている [R-N(H)N(NO)O^-]_yX （ＶＩＩ）（式中、ＲはＣ_2-8低級アルキル、フェニル、ベンジルまたはＣ_3-8シクロアルキルであり、任意のＲ基は１〜３個の置換基で置換されていてもよく、その置換基は同一または異なっていて、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ_1-8アルコキシ、−ＮＨ₂ 、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ₂、−ＣＨ（Ｏ）、−Ｃ（Ｏ）ＯＨおよび−ＮＯ₂からなる群より選ばれ、Ｘは医薬上許容されるカチオン、医薬上許容される金属中心、またはＣ_1-8低級アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ₃および−Ｃ（Ｏ）ＮＨ₂からなる群より選ばれる医薬上許容される有機基であり、ｙは１〜３であり、Ｘの原子価と一致する。）；言及によってここに組み入れられる１９９２年９月２３日に出願された米国特許出願番号０７／９５０，６３７に記載されている〔式中、Ｒ₁およびＲ₂は独立して、Ｃ_1-12直鎖アルキル、アルコキシまたはアシルオキシで置換されたＣ_1-12直鎖アルキル、ヒドロキシまたはハロゲン置換されたＣ_2-12直鎖アルキル、Ｃ_3-12分枝鎖アルキル、ヒドロキシ、ハロゲン、アルコキシまたはアシルオキシで置換されたＣ_3-12分枝鎖アルキル、Ｃ_3-12直鎖オレフィンおよびＣ_3-12分枝鎖オレフィン（これらは置換されていないか、またはヒドロキシ、アルコキシ、アシルオキシ、ハロゲンまたはベンジルで置換されている）から選ばれるか、あるいはＲ₁およびＲ₂がそれらが結合している窒素原子と共に複素環基、好ましくはピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノまたはモルホリノ基を形成し、Ｒ₃は、置換されていないか、またはヒドロキシ、ハロゲン、アシルオキシまたはアルコキシで置換されているＣ_1-12直鎖およびＣ_3-12分枝鎖アルキル、置換されていないか、またはハロゲン、アルコキシ、アシルオキシまたはヒドロキシで置換されているＣ_2-12直鎖またはＣ_3-12分枝鎖オレフィン、置換されていないかまたは置換されているＣ_1-12アシル、スルホニルおよびカルボキサミドから選ばれる基；あるいはＲ₃は式−（ＣＨ₂）_n−ＯＮ＝Ｎ（Ｏ）ＮＲ₁Ｒ₂ （式中、ｎは２〜８の整数であり、Ｒ₁およびＲ₂は上記に定義した通り）で表される基であり、好ましくは、Ｒ₁、Ｒ₂およびＲ₃はヘテロ原子のαにハロゲンまたはヒドロキシ置換基(a halo or a hydroxy substitute α to a hetero at om)を含まない。〕本発明に合わせて、酸化窒素放出薬剤は、本願と同日に出願されたSaavedraらの米国特許出願に記載されているような高分子組成物または生体高分子組成物であってもよい。「高分子に結合している」という語はＮ₂Ｏ₂ ^-官能基が物理的または化学的に、高分子に結びついている（associated）、一部、高分子に取り込まれている(incorporated)または高分子内に含有されている(contained)ことを意味する。Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基の高分子との物理的な結びつき(association)または結合(bonding)は、高分子を酸化窒素／求核剤複合体と共沈させることにより、ならびにＮ₂Ｏ₂ ^-基の高分子との共有結合により達成することができる。Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基の高分子との化学的結合は、例えば、酸化窒素／求核剤付加物の求核剤部分が高分子と共有結合し、Ｎ₂Ｏ₂ ^-基が結合している求核剤残基が高分子自身の一部を形成するような(すなわち、高分子のバックボーン(backbone) 中にある、または高分子のバックボーン上のペンダント基に結合している)共有結合であってよい。酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基が高分子に結びついている、一部、高分子に取り込まれているまたは高分子内に含有されている、すなわち高分子に「結合」(“bound”)している方法は本発明において重要ではなく、全ての結びつき(assocation)、取り込み(incorporation)および結合(bonding)の手段が本発明で意図されている。Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基を高分子内に取り込むことにより、目的とする生物学的部位にＮＯを局在化して放出させるために投与することのできる高分子結合酸化窒素／求核剤付加物組成物が提供されることが見い出されている。高分子結合付加物組成物の部位特異的送達は、酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基の作用の選択性を高める。もし高分子に結合したＮ₂Ｏ₂ ^-官能基が必然的に局在化しているならば、官能基の酸化窒素放出効果はそれらと接触した組織に集中するだろう。もし高分子が可溶性ならば、例えば、フィブリンまたは組織トロンボプラスチンに対する抗体のような標的組織に対して特異的な抗体に結合することにより、あるいはそのような抗体の誘導体とすることにより、作用の選択性をさらにアレンジすることができる。同様に、重要な受容体のリガンドの認識配列を模倣したペプチドにＮ₂Ｏ₂ ^-基を結合することにより、核酸中の標的配列との部位特異的な相互作用が可能なオリゴヌクレオチドに結合する場合と同様な、酸化窒素放出の局在化した集中した効果を与える。他の蛋白質、核酸および多糖類（ホルモンおよび運動性、化学走性および管外遊出因子または物質を含む）も同様に利用できる。例えば、保護されたＮ₂Ｏ₂ ^-基を有するピペラジンは、腫瘍細胞化学走性に重要なＩＫＶＡＶ認識配列を含有するポリペプチドに共有結合させることができる。得られた分子が、抗化学走性剤(antichemotactic agent)としてのＮＯ再生能と、腫瘍細胞および／または腫瘍細胞が接着(attach)および管外遊出する傾向がある血管系およびリンパ系の部位に対するＩＫＶＡＶ配列のアフィニティとの両方を保持しているならば、転移を減少させる、あるいは予防することもできる。本発明に関して、広範な種類の如何なる高分子も使用可能である。選択される高分子は、ただ、生物学的に許容し得るものであればよい。本発明において使用に適した高分子を例示すれば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリテトラフルオロエチレン、ポリビニリデンジフルオライド、ポリビニルクロライド等のポリオレフィン；ポリエチレンイミンまたはその誘導体；ポリエチレングリコール、多糖類等のポリエーテル；ポリ（ラクチド／グリコリド）等のポリエステル；ナイロン等のポリアミド；ポリウレタンが挙げられる。本発明に関して、広範な種類の如何なる生体高分子も使用可能である。使用に適した生体高分子としては、ペプチド、ポリペプチド、蛋白質、オリゴヌクレオチド、核酸（例、ＲＮＡおよびＤＮＡ）、糖蛋白質、グリコーゲン等が挙げられる。あるいは、脂肪酸、グルコース、アミノ酸、スクシネート、リボヌクレオチド、リボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオチドおよびデオキシリボヌクレオシドのような生体高分子のサブユニットが使用できる。具体例としては、抗体またはその断片；ラミニン、フィブロネクチンのような細胞外マトリックス蛋白質またはそれらの細胞接着部位ペプチド認識配列(cell attachment-site peptide recogni-ti on sequence)（ＲＧＤＳ、ＩＫＶＡＶ、ＹＩＧＳＲなど）；および成長因子、ペプチドホルモン、および高アフィニティ細胞表面受容体部位のある他のポリペプチド（例えば、ＥＧＦ、ＴＧＦα、ＴＧＦβおよびＴＮＦ）が挙げられる。このような分子は、受容体に結合したとき、標的細胞内に内在化されて、それによってＮＯ供与体部分の細胞間送達を促進する。好ましくは、高分子結合および生体高分子結合ＮＯＮＯエートでは、Ｎ₂Ｏ₂ ^- 官能基が結合基ＸまたはＸ’のいずれか一方または両方を介して高分子または生体高分子に結合している。高分子結合酸化窒素放出組成物は広範な種類の形態で投与することができる。如何なる形態の送達手段も放出前の酸化窒素の完全な状態を適当に保護し、癌性細胞と非癌性細胞との間の接着(adherence)を阻害する、より好ましくは、転移のリスクを阻害する効果的な手段となりうるような速度、量、および場所で酸化窒素の放出を制御するものでなければならない。例えば、局所投与用または局在化して放出するための投与用の送達手段としては、インプラント、パッチ、ステント、リポソーム、マイクロ粒子、マイクロスフェア、ビーズ、粉末、液体、ゲル、モノリシック樹脂、ディスクまたはその他のデバイスが挙げられるが、これらに限定されない。局所的な投与または放出の有利な点は、全身的な投与または放出に比べて、より少ない投与量を用いてより速く標的部位で効果的な薬物濃度を得ることができ、より低い毒性副作用を実現することである。局在化して放出するための全身投与用の送達手段としては、溶液剤、懸濁剤、乳剤、カプセル剤、小袋(sachet)、錠剤、経皮（局所）投与用パッチ、喉飴(lozenge)、エアロゾル剤、リポソーム、マイクロ粒子、マイクロスフェア、ビーズ、プロドラッグ、リガンド認識配列を模倣した小さなペプチド、および配列特異的オリゴヌクレオチド（前記で説明）が挙げられるが、これらに限定されない。上記化合物を含めた、Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基を有する酸化窒素放出複合体は、多数の異なる方法により高分子支持体に結合させることができる。例えば、上記化合物は、化合物を高分子とともに共沈させることにより、当該高分子に結合させることができる。共沈は、例えば、高分子と酸化窒素／求核剤化合物とを可溶化し、溶媒を蒸発させることからなる。またＮ₂Ｏ₂ ^-基を含有する単量体を、溶融した高分子に溶解し、温度を下げて固体化させたときに、マトリックス中にＮ₂Ｏ₂ ^- 基がある程度均一に分布するように含有させてもよい。あるいは、酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基は、上記の式を有するタイプの酸化窒素／求核剤複合体を、その場で高分子上に形成することにより、高分子に結合し得る。Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基は、高分子のバックボーン（backbone）の原子に結合するか、または高分子バックボーンにぶらさがっている基に結合するか、あるいは単に高分子マトリックスに補足されるだけでもよい。Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基が高分子バックボーンにある場合、高分子は将来の放出のために酸化窒素に結合すべく、酸化窒素と反応し得る部位をバックボーンにもつ。Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基が高分子バックボーンにぶらさがっている基の場合、高分子は、酸化窒素と反応してＮ₂Ｏ₂ ^-官能基を形成し得る適当な求核剤残基を含むか、あるいは当該求核剤残基で誘導体とされている。このように、適当な求核性残基を含む高分子または適当に誘導体とされた高分子と酸化窒素との反応は、高分子結合酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基を提供する。例示として、幾つかの一般的な手段が、ＮＯＮＯエート官能基が結合した生体高分子を含有する生体高分子組成物の合成に利用できる。一例として、構造Ｘ− Ｎ₂Ｏ₂ ^-のイオンを求電子剤（［Ｘ’］⁺供与体）と反応させると、共有結合した式Ｘ−Ｎ（Ｏ）＝ＮＯＸ’のＮＯＮＯエートを生じる。この保護された複合体を次いで所望の生体高分子に求核剤残基Ｘ、または求電子剤残基Ｘ’を介して結合する。あるいは、すでに生体高分子の一部である（あるいは生体高分子に結合し得る）求核剤残基を塩基性条件下でＮＯと反応させてＮ₂Ｏ₂ ^-官能基を含有する酸化窒素複合体を得ることもできる。特定の例として、第二級アミノ基を有する単純なアミノ酸を酸化窒素と反応させて本発明による化合物を生じさせることができる。同様に、ＮＯ官能基をペプチドの塩基性窒素に結合させることができる。ＮＯＮＯエート含有分子を本発明に従ってペプチド、ポリペプチドまたは蛋白質のチオールまたは活性化カルボン酸基に結合させる代わりの手段を用いることができる。さらに、例示として、Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基をarg-gly-asp（ＲＧＤ）のようなペプチドに結合して、分子arg-gly-asp-［Ｎ（Ｏ）ＮＯ］^-を調製してもよい。好ましくは、ＲＧＤトリペプチドは追加のペプチドユニットのような結合基を介してＮＯＮＯエートに結合するだろう。その他の受容体／リガンド認識配列を同様にして用いることができる。本発明の酸化窒素放出化合物および高分子結合酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基組成物を動物に投与する適当な方法を利用し得ること、およびある特定の組成物を投与するために一を超える投与経路を用いることができるが、ある特定の投与経路が別の投与経路よりも、より迅速により効果的な反応を提供することは、当業者であれば理解できるであろう。医薬的に許容される担体もまた当業者によく知られている。担体の選択は、特定の組成物ならびに組成物を投与するために用いられる特定の方法によりある程度決定されるだろう。従って、本発明の医薬組成物の適当な処方は多種多様である。経口投与に適した処方は、（ａ）水または生理食塩水のような希釈剤に溶解した有効量の高分子結合組成物のような液体溶液、（ｂ）予め決められた量の活性成分を固形物又は顆粒としてそれぞれ含むカプセル剤、小袋（sachet）、錠剤、（ｃ）適当な液体に懸濁した懸濁剤、および（ｅ）適当な乳剤からなりうる。錠剤は、乳糖、マンニトール、コーンスターチ、ポテトスターチ、微結晶セルロース、アラビアゴム、ゼラチン、コロイド状シリコンジオキシド、クロスカルメロースナトリウム（croscarmellose sodium）、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、及び他の賦形剤、着色剤、希釈剤、緩衝剤、湿潤剤、保存剤、矯味剤、及び薬理学的に適合し得る担体の一またはそれ以上を含んでいてもよい。喉飴(lozenge)は、矯味剤、通常、ショ糖およびアラビアゴムまたはトラガント中に活性成分を含み、同様に香剤(pastilles)は、ゼラチンおよびグリセリンまたはショ糖およびアラビアゴム乳剤、ゲル剤等の不活性基剤中に活性成分を含み、活性成分に加えて当分野で知られた担体を含む。本発明の酸化窒素放出組成物は、単独でまたは他の適当な成分と組み合わせて、吸入により投与されるエアロゾル処方に調製され得る。これらのエアロゾル処方は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素等の加圧された許容し得る噴射剤中に置かれる。非経口投与に適切な処方としては、抗酸化剤、緩衝液、制菌剤および該処方を投薬を受ける者の血液と等張にするための溶質を含有することのできる水性および非水性の等張性無菌注射溶液、および懸濁化剤、溶解補助剤、増粘剤、安定化剤および保存剤を含有することのできる水性および非水性の無菌の懸濁液が包含される。この処方は、アンプルおよびバイアルのような１回投与量または複数回投与量の密閉された容器で供せられ、注射には使用直前に、例えば水のような無菌の液体担体を添加するだけでよいフリーズドライ（凍結乾燥）した状態で保存され得る。即席注射溶液および懸濁液は前に述べた種類の無菌の粉末剤、顆粒剤および錠剤から調製され得る。本発明において動物、特にヒトに投与する量は、適当な時間枠にわたって動物に対して治療反応の効果を奏するのに十分なものとすべきである。投与量は、用いられるある特定の高分子組成物の強さ、用いられる送達手段のタイプ、投与経路、治療すべき動物の状態および体重、投与の時期、および投与時間の長さにより決定されるであろう。投与量はまた、ある特定の組成物の投与に伴うかもしれない悪い副作用の有無、性質及び程度によっても決定されるであろう。この投与量は治療、改善または予防されるべき状態に従って急性的にまたは長期的に投与される。ＮＯの「接着阻害有効量」(“adherence-inhibiting effective amount ”)は上記に定義したような癌性細胞と非癌性構造との間の接着を阻害する量である。以下の実施例により本発明をさらに説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。実施例実施例Ｉこの実施例では、以下に模式的に示すように、１−（２Ｓ−カルボキシピロリジン−１−イル）−１−オキソ−２−ヒドロキシジアゼン二ナトリウム塩の調製について説明する。２５％ナトリウムメトキシド（メタノール中）３９ｍｌ（０．１８ｍｏｌ）およびメタノール２０ｍｌ中の、Ｌ−プロリン１０ｇ（０．０８７ｍｏｌ）の溶液を脱気し、４０ｐｓｉのＮＯに２０時間曝露した。圧力を緩めて固形残渣を濾過にて集め、エーテルで洗浄し、減圧下で乾燥して白色固体１７ｇを得た：UV(0.0 1M NaOH)λ_max(ε)250 nm(ε = 4.9 mM^-1cm^-1);NMR(D₂O)δ 1.71(m， 1H)，1.91(m，2H)，2.27(m，1H)，3.27-3.43(m，2H)，4.04(m，1H)。メタノールのピークも存在したが、該固体にはプロリンおよびＮ−ニトロソプロリンは両方とも含まれなかった。実施例II この実施例では、以下に模式的に示すように、１−ヒドロキシ−２−オキソ− ３−カルボキシメチル−３−メチル−１−トリアゼン二ナトリウム塩の調製について説明する。メタノール１００ｍｌおよび水２０ｍｌ中の、水酸化ナトリウム８ｇ（０．２ｍｏｌ）の溶液にサルコシン８．９ｇ（０．１ｍｏｌ）を加えた。該溶液に４０ｐｓｉのＮＯを負荷し、２５℃で４８時間攪拌した。圧力を緩め、該溶液を減圧濃縮して、ＵＶ λ_max２５０ｎｍの白色固体を得た。蒸留物は強いアミン臭を有し、メチルアミンの塩化ベンゾイル誘導体であると決定された。該固形残渣を高真空下で乾燥後、Ｄ₂Ｏ中のＮＭＲにより解析した。ＮＭＲにより５つの生成物が検出された：メチルアミン，δ 2.28，36%; １−ジメチルアミノ−１−オキソ−２−ヒドロキシジアゼンナトリウム塩，δ 2.79，15%; Ｎ− ニトロソジメチルアミン，δ 3.11 および3.91，8% ;Ｎ−ニトロソサルコシンナトリウム塩，δ 3.15(s，E メチル)，3.84(s，Z メチル)，4.21(s，Z メチレン) ，4.80(s，E メチレン)，10%。標記化合物は該混合物の３２％として存在した： δ3.11(s，3H)および3.60(s，2H)。実施例III この実施例では、以下に模式的に示すように、１−ヒドロキシ−２−オキソ− ３−カルボキシメチル−３−メチル−１−トリアゼンＮ−メチルアミドナトリウム塩の調製について説明する。４０％メチルアミン水溶液１５０ｍｌ（１．９ｍｏｌ）を０℃まで冷却した。該溶液に１０Ｍ水酸化ナトリウム４０ｍｌを加え、続いてα−クロロアセチルクロリド（２７ｇ，０．２４ｍｏｌ）を０℃で２時間かけて注意深く加えた。室温にて一晩攪拌し続けた。得られた溶液を塩化ナトリウムで飽和させ、ジクロロメタンで抽出して硫酸ナトリウムで乾燥し、硫酸マグネシウム層を通して濾過した。溶媒のほとんどをロータリーエバポレーターで除去し、残渣を１気圧にて、次いで適当な減圧下で蒸留した。該生成物を９０〜２℃、１２５ｍｍＨｇで蒸留してサルコシンＮ−メチルアミド１５ｇ（６１％）を得た：IR（film）3318 ，2952，2889，1659，1553，1462，1413，1166 cm^-1；NMR（CDCl₃）δ 2.42(s， 3H)，2.86(s，1.5H)，2.83(s，1.5H)，3.23(s，2H)。２５％ナトリウムメトキシド（メタノール中）３．５ｍｌ（０．０１６ｍｏｌ）中のサルコシンＮ−メチルアミド１．７ｇ（０．０１６７ｍｏｌ）の溶液を圧力ビン中に置き、窒素をどっと流した後、４０ｐｓｉの酸化窒素を負荷した。該溶液を４８時間２５℃に保って濃厚なペーストを得た。圧力を緩め、残渣をエーテルで洗浄し、減圧下で乾燥して、ＵＶ λ_max（ε）２５０ｎｍ（２．４ｍＭ^- ¹ ｃｍ^-1）の固体１．４ｇを得た。実施例IV この実施例では、以下に模式的に示すように、Ｌ−プロリル−Ｌ−ロイシルグリシンアミドのビス（酸化窒素）付加物の調製について説明する。アセトニトリル４ｍｌ中のＬ−プロリル−Ｌ−ロイシルグリシンアミド（Ｓｉｇｍａ）１２０ｍｇ（０．４２３ｍｍｏｌ）のスラリーに、メタノール中の２５％ナトリウムメトキシド１００μｌを加えた。得られたゲルを均一な溶液が得られるまで数滴のメタノールで処理した。該溶液を微小Ｐａｒｒビンに移し、５分間窒素で発泡した後、４０ｐｓｉのＮＯに７２時間曝露した。該反応混合物を減圧下で乾燥して、ｐＨ７．４の緩衝液中でのλ_max（ε）２５０ｎｍ（６．２ｍＭ^-1ｃｍ^-1）の固体１８７ｍｇを得た。この固体は３７℃で７分の半減期で０．８６ｍｏｌのＮＯ（このｐＨで分解されるトリペプチド１ｍｏｌあたり）を放出した。鎖長を増したオリゴペプチドおよび蛋白質も同様にＮＯによって誘導することができる。実施例Ｖこの実施例では、以下に模式的に示すように、ＮＯと容易に反応する求核中心を含まない蛋白質への求核中心の結合について説明する。ＣＨ₂Ｃｌ₂：アセトニトリル（１２０ｍｌ）中のＮ−アセチル−Ｌ−メチオニン４．７８ｇ（０．０２５ｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却した。この溶液にジシクロロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）５．３６ｇ（０．０２５ｍｏｌ）を加えた後、ジクロロメタン６ｍｌ中のＮ−ｔ−ブトキシカルボニルピペラジン３．９０ｇ（０．０２１ｍｏｌ）をすばやく加えた。アセトニトリル：テトラヒドロフラン（４：１）で展開したシリカゲルＴＬＣプレート上で反応を追跡し、ヨウ素あるいはニンヒドリンスプレーのいずれかを用いて可視化した。反応は２時間以内に完了した。該反応混合物に数滴の氷酢酸を加え、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。残渣をエーテルにとり濾過した。透明な濾液を希酸、次いで希塩基で洗浄した。有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥、濾過し、さらに溶媒留去して、１−（ｔ−ブトキシカルボニル）−４−（Ｎ−アセチル−Ｌ− メチオニル）ピペラジンの、さらなる精製を要しない無色の油８．２ｇを得た： IR（film）3304，3058，2973，2931，2868，1701，1645，1539，1420，1237，11 73 cm^-1; NMR（CDCl₃）δ 1.47(s，9H)，1.80(m，2H)，2.02(s，3H)，2.10(s，3 H)，2.46(m，2H)，3.53(m，8H)，5.10(M，1H)，6.35(b，0.5H)，6.43(b，0.5H) 。ジクロロメタン６０ｍｌ中の１−（ｔ−ブトキシカルボニル）−４−（Ｎ−アセチル−Ｌ−メチオニル）ピペラジン８．６ｇ（０．０２４ｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロ酢酸１０ｍｌを加え、該混合物を室温にて一晩攪拌した。該溶液を水で抽出し、得られた水性溶液を水酸化ナトリウムを用いてアルカリ性にした。該生成物をジクロロメタンで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥後、濾過した。溶媒を留去して１−（Ｎ−アセチル−Ｌ−メチオニル）ピペラジン２．１ｇを油として得た：IR（film）3304，3051，2917，2861，1645，1546，1448，1377 cm^-1; N MR（CDCl₃）δ 1.95(m，2H)，2.02(s，3H)，2.10(s，3H)，2.54(m，2H)，2.98(m ，4H)，3.74(m，4H)，5.10(m，1H)，6.40(b，0.5H)，6.48(b，0.5H)。メタノール１ｍｌ中の１−（Ｎ−アセチル−Ｌ−メチオニル）ピペラジン５１０ｍｇ（１．９７ｍｍｏｌ）の溶液に、メタノール中の２５％ナトリウムメトキシド４２８μｌ（１．９７ｍｍｏｌ）を加えた。この系を脱気して４０ｐｓｉのＮＯを負荷した。該溶液をＮＯに１２０時間曝露した後、圧力を緩めて、固体生成物を濾過にて集め、エーテルで洗浄後、乾燥して１−［４−（Ｎ−アセチル− Ｌ−メチオニル）ピペラジン−１−イル］−１−オキソ−２−ヒドロキシジアゼンナトリウム塩２７ｍｇを、ＵＶ λ_max（ε）２５２ｎｍ（１２．０ｍＭ^-1ｃｍ^-1）の白色固体として得た。該生成物はｐＨ７および２５℃にて６．９分の半減期で分解して試薬１ｍｏｌあたり１．７２ｍｏｌのＮＯを生成した。実施例VI この実施例では、以下に模式的に示すように、ペプチド、ポリペプチドまたは蛋白質のＣ末端に、前もって形成しておいた求核窒素原子を含むＮＯＮＯエートの結合について説明する。メタノール６０ｍｌ中の１−ピペラジンカルボン酸エチル２０ｇ（０．１２６ｍｏｌ）の溶液をＰａｒｒビン中に置き、該溶液をメタノール中の２５％ナトリウムメトキシド２７．４ｍｌ（０．１２６ｍｏｌ）で処理した。この系を脱気し、４０ｐｓｉの酸化窒素を負荷して２５℃に４８時間保った。白色結晶状生成物を濾取し、冷メタノール、さらに多量のエーテルで洗浄した。該生成物を減圧乾燥して収量１４．５ｇ（４８％）の１−（４−カルベトキシピペラジン−１−イル）−１−オキソ−２−ヒドロキシジアゼンナトリウム塩を得た：融点 184-5℃ ; UV（0.01 M NaOH）λ_max（ε）252 nm(10.4 mM^-1cm^-1); NMR（D₂O）δ1.25(t ，3H)，3.11(m，2H)，3.68(m，2H)，4.15(q，2H)。元素分析Ｃ₆Ｈ₁₃Ｎ₄Ｏ₄Ｎａ計算値：C,35.00%; H，5.42%; N，23.33%; Na，9.58%。実測値：C,34.87%; H ，5.53%; N，23.26%; Na，9.69%。この化合物のｐＨ７および２５℃での半減期は５分であった。この測定は紫外線スペクトルにおける２５２ｎｍの発色団の消失に基づいた。０．０１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液１０ｍｌ中の１−（４−カルベトキシピペラジン−１−イル）−１−オキソ−２−ヒドロキシジアゼンナトリウム塩１．３ｇ（５．４ｍｍｏｌ）の溶液を氷浴中で冷却した。メタノール１０ｍｌ中の硫酸ジメチル２ｍｌの溶液を滴下した。得られた溶液を０℃にて１時間撹拌した後、室温まで徐々に温まるようにした。２４時間後、該溶液をロータリーエバポレーターで濃縮した。残渣をジクロロメタンで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥して、硫酸マグネシウム層を通して濾過した。溶媒を減圧下で留去し、残渣をシリカゲル上のクロマトグラフィーにかけた。ジクロロメタン：酢酸エチル（２：１）で溶出することにより、１−（４−カルベトキシピペラジン−１−イル）−１−オキソ−２−メトキシジアゼン６８３ｍｇ（５５％）が油として得られ、静置することにより結晶化した：融点 46℃; UV λ_max（ε）240nm(8.4 mM^-1cm^-1);IR(fi lm)2988，2945，2875，1707，1504，1068 cm^-1; NMRδ 3.38(m，4H),3.67(m，4H )，4.03(s，3H)，4.16(q，2H); MS m／z(相対強度，%)，232(M⁺，3)，217(16)， 187(10)，157(100)，142(5)，98(4)，85(27)，70(26)，56(94)，54(19); Ｃ₈Ｈ₁ ₆ Ｎ₄Ｏ₄の計算される正確な質量（M⁺）232.1171，実測値 232.1172。元素分析Ｃ₈ Ｈ₁₆Ｎ₄Ｏ₄ 計算値：C，41.38%; H，6.90%; N，24.14%。実測値：C，41.23%; H ，6.82%; N，24.05%。１−（４−カルベトキシピペラジン−１−イル）−１−オキソ−２−メトキシジアゼン１．８ｇ（０．００７８ｍｏｌ）と５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液２０ｍｌの混合物を還流加熱した。定性的薄層クロマトグラフィーで調べると、４５分後には出発材料は該混合物中に残っていなかった。該溶液を室温にもどし、残渣が粘稠になるまで溶媒留去し、該残渣を酢酸エチルで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した後、溶媒留去した。生成物をシリカゲル上のクロマトグラフィーにかけ、ジクロロメタン：アセトン（１：１）で溶出して１−（ピペラジン− １−イル）−１−オキソ−２−メトキシジアゼン８２０ｍｇ（６６％）を淡黄色油として得た：UV λ_max（ε）234 nm（7.0 mM^-1cm^-1);NMR δ 3.03(m， 4H)，3.38(m，4H)，4.06(s，3H); IR（film）3318，2945，2854，1447，1364，1 286，1230，1046，1004 cm^-1; MS m/z(相対強度，%)，160(M⁺，2)，145(7)，143 (10)，115(9)，85(56)，58(7)，56(100); Ｃ₅Ｈ₁₂Ｎ₄Ｏ₂の計算される正確な質量（M⁺）160.0960，実測値 160.0966。ジクロロメタン：アセトニトリル（１：１）１０ｍｌ中のＮ−アセチル−Ｌ− メチオニン１６４ｍｇ（０．８５６ｍｍｏｌ）の溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）２０６ｍｇ（１ｍｍｏｌ）を加え、次いでジクロロメタン３ｍｌ中の１−（ピペラジン−１−イル）−１−オキソ−２−メトキシジアゼン１３７ｍｇ（０．８５６ｍｍｏｌ）をすばやく導入した。該反応混合物を２５℃ にて４時間攪拌した。氷酢酸を数滴加えて過剰のＤＣＣを分解した。該混合物を濾過し、溶媒留去した。残渣を酢酸エチルで抽出し、次いでそれを希塩酸で、その後、希水酸化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、硫酸マグネシウム層を通して濾過し、減圧下で溶媒留去した。１−（４−［Ｎ −アセチル］−Ｌ−メチオニルピペラジン−１−イル）−１−オキソ−２−メトキシジアゼンの精製は、アセトニトリル：テトラヒドロフラン（４：１）を溶出液として用いてシリカゲル上で行った：UV λ_max（ε）230 nm(8.7 mM^-1cm^-1); NMR δ 2.02(s，3H)，2.07(m，2H)，2.11(s，3H)，3.46(m，4H)，3.83(m，4H)， 4.03(s，3H)，5.15(m，1H)，6.28(b，0.5H)，6.35(b，0.5H)，IR 3297，2931，2 847，1645，1546，1497，1441，1223 cm^-1; MS m/z(相対強度，%)，333(M⁺，4) ，318(2)，304(3)，303(16)，288(12)，260(11)，259(100)，258(9)，214(78)， 184(37)，183(10)，174(5)，146(26)，142(56)，141(5)，104(63)，61(60); Ｃ₁ ₂ Ｈ₂₃Ｎ₅Ｏ₄Ｓの計算される正確な質量（M⁺）333.1470，実測値 333.1471。実施例VII この実施例では、単離された小動脈および小静脈への腫瘍細胞の接着(adhesio n)に対する酸化窒素放出化合物の効果を説明するものである。シリアンハムスターのメラニン性黒色腫細胞、ＲＭＰＩ１８４６は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から取得し、３７℃、５％ＣＯ₂の加湿雰囲気中、２０％ウシ胎仔血清（ＧＩＢＣＯ，ＧｒａｎｄＩｓｌａｎｄ，ＮＹ）で補充したＭｃＣｏｙの５Ａ培地（ＧＩＢＣＯ，ＧｒａｎｄＩｓｌａｎｄ，ＮＹ）中で成育させた。いったん癒着すると、細胞を０．２５％トリプシン（ＧＩＢＣＯ）で簡単にトリプシン処理して回収し、完全培地で中和し、１００×ｇで５分間遠心した後、１４５．０ｍＭＮａＣｌ，４．７ｍＭＫＣｌ，２．０ｍＭＣａＣｌ₂，１．１７ｍＭＭｇＳＯ₄，１．２ｍＭＮａＨ₂ＰＯ₄，５．０ｍＭグルコース，２．０ｍＭピルビン酸，０．０２ｍＭＥＤＴＡおよび３．０ｍＭ３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）緩衝液並びに１％ウシ胎仔血清（ｐＨ７．４に緩衝）からなる１％アルブミン生理食塩溶液（ＡＰＳＳ）中に１０⁶細胞／ｍｌの濃度となるように再懸濁し、Ｐ８濾紙（ＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）を通して濾過した。腫瘍細胞の生存性はトリパンブルー染色で検定し、９０％を越える生存性を有する細胞懸濁液のみを実験に使用した。体重５０ｇ〜１５０ｇの雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに、１００ｇあたりＰＳＳ１ｍｌ、または１００ｇあたり１ｍｇ／ｍｌのＬＰＳ（Ｓｈｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を含有するＰＳＳ１ｍｌを腹膜内注射した。４時間後、ラットをイナクチン（１００ｍｇ／ｋｇ腹膜内投与）で麻酔し、正中腹部切開を行い、上腸間膜動脈を単離してカニューレを挿入し、温かいブタゼラチンインク溶液１ｍｌを上腸間膜動脈カテーテルを介して腸間膜脈管系に注入して微細血管を可視化した。ブタゼラチンインク溶液は、ブタ皮膚ゼラチン（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）０．３６ｇと非透析の墨汁０．２ｍｌを温ＡＰＳＳ１０ｍｌ中に溶解し、Ｐ８濾紙を通して濾過することにより調製した。この濃度ではゼラチン溶液は室温で液体であり、２０℃より低温で固化する。腸の一部および付着した腸間膜を切除して、氷冷したｐＨ７．４のＰＳＳ（血清を加えていない以外はＡＰＳＳと同じ）を入れた解剖用チャンバーに置いた。直径（ＯＤ）７０〜１００μｍおよび長さ１．５〜２．０ｍｍの、分枝していない小動脈または小静脈を切り離し、隔離された管チャンバー（Ｈａｌｐｅｒｎ型）に移し、両端に直径約５０μｍのガラスのマイクロピペットでカニューレを挿入して１１〜０針縫ってしっかりと締め、部屋の空気で平衡化した３７℃のＰＳＳ中に浸した。浴槽の溶液は２ｍｌ／分の速度で絶えず更新した。流入カテーテルに接続した重力送り式の貯水槽を介して、３７℃のＡＰＳＳを管の内腔に灌流させた。カニューレ挿入後、管チャンバーを倒立顕微鏡に置いた。顕微鏡に据え付けたテレビカメラを用いてテレビモニターに画像を投影し、ビデオカセットレコーダーを用いて画像を記録した。ビデオ日時ジェネレーターが時刻、ストップウォッチ機能および日付をモニター上に投影した。ビデオカリパスを用いて管の直径を測定した。３０分の安定化期間後、管に腫瘍細胞懸濁液を灌流させた。次いで、灌流物の流入を中断し、腫瘍細胞が内皮に定着できるようにした。該微小管上に着床した細胞数を観察・記録した。２０分後、流入および流出マイクロピペット間に１１５ｃｍＨ₂Ｏの圧力勾配をかけて灌流物の流れを再開した。５分後、管壁に接着 (adherent)して留まっている腫瘍細胞数を計測・記録した。５分間流れを再開した後の管壁に接着(adherent)した残留腫瘍細胞数を、流れを中断した時に管壁に着床した総細胞数で割ることにより、接着(adherent)した細胞のパーセンテージを算出した。一元ＡＮＯＶＡおよびＳｔｕｄｅｎｔ−Ｎｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓ試験を用いてグループ間の差を解析したところ、Ｐ＜０．０５で有意であると見なされた。前毛細管小動脈および後毛細管小静脈への腫瘍細胞の接着(adhesion)に及ぼすＬＰＳの効果を測定するために、ラットにＰＰＳ（１ｍｇ／ｍｌ）中に溶解したＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ）を１ｍｇ／１００ｇ体重の投与量で腹膜内注射した。一方、対照ラットには、ＰＰＳを１ｍｌ／１００ｇ体重で腹膜内注射した。４時間後、該動物を犠牲にして、上記のように腫瘍細胞接着分析(tumor cell adhesion analysis)のために腸間膜から小動脈または小静脈を単離した。腫瘍細胞は、未処理の小動脈によりも未処理の小静脈に非常に多く接着(adhesive)し、その差は約５倍であった。後毛細管小静脈を４時間ＬＰＳ処理すると、未処理の小静脈に比べて腫瘍細胞の接着(adhesion)が著しく増加した。しかしながら、前毛細管小動脈をＬＰＳ処理してもこれらの脈管への腫瘍細胞の接着(adhesion)に影響はなかった。未処理またはＬＰＳ処理した後毛細管小静脈への黒色腫細胞の接着(adhesion) に及ぼすＤＥＴＡ／ＮＯの形態での酸化窒素の効果を図１に示す。これはＬＰＳ、ＤＥＴＡ／ＮＯ、またはＬＰＳとＤＥＴＡ／ＮＯの非存在下または存在下でのＶＥＮおよびＡＲＴに対する接着腫瘍細胞(adherent tumor cell)の％の棒グラフである。再灌流３０分前に単離した後毛細管小静脈を１ｍＭＤＥＴＡ／ＮＯで処理すると、後毛細管小静脈への腫瘍細胞接着(tumor cell adhesion)の増大に及ぼすＬＰＳの増加効果は完全に阻止された。さらに、ＤＥＴＡ／ＮＯは未処理の小静脈への腫瘍細胞の接着(adhesion)も低減させた。この差はＰ＜０．０５で有意であった。これらの結果から、Ｎ₂Ｏ₂ ^-基を含有するＮＯ供与体の形態で外部から投与されたＮＯが、ＬＰＳで活性化された内皮への腫瘍細胞の接着(adhesion)を阻害し得ること、並びに外因性ＮＯがさらに生来の静脈内皮細胞への腫瘍細胞の接着(a dhesion)のベースラインをも減少させ得ることがわかった。ここに挙げた刊行物、特許、および特許出願は、各個々の文書が言及によって組み込まれるために個々にそして具体的に述べられ、ここに完全に明らかにされたと同程度に、ここに言及することで組み入れられるものである。本発明を、好ましい実施態様を強調して説明してきたが、当業者には好ましい実施態様が変更され得ることが自明であろう。本発明はここで特別に記載された以外の方法でも実施され得ることが意図される。従って、本発明は添付の請求の範囲の精神と範囲に包含されるすべての変形を含むものである。

【手続補正書】【提出日】１９９７年１０月２０日【補正内容】請求の範囲１．酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基を含有する酸化窒素放出化合物を有効成分として含有する、哺乳類における癌性細胞と非癌性細胞との間の接着(adherence) を阻害する薬剤であって、当該化合物は当該哺乳類に接着(adherence)阻害有効量の酸化窒素を放出することができるものである薬剤。２．当該化合物が、ペプチド、ポリペプチド、蛋白質、オリゴヌクレオチドおよび核酸からなる群より選ばれる高分子である請求の範囲第１項記載の薬剤。３．当該高分子が、組織特異的、細胞特異的または腫瘍特異的抗体またはその断片、腫瘍細胞接着(tumor cell attachment)に適した受容体−リガンド相互作用の認識配列を含有する蛋白質、抗化学走性剤およびホルモンからなる群より選ばれる請求の範囲第２項記載の薬剤。４．当該酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-基が、式（式中、Ｘは有機または無機部位であり、Ｘ’はＸ、医薬上許容される金属中心または医薬上許容されるカチオンからなる群より選ばれる。）に含まれる基であり、当該Ｎ₂Ｏ₂ ^-基はＸまたはＸ’の少なくとも１つを介して当該生体高分子に結合している請求の範囲第１項記載の薬剤。５．当該酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基が式：〔式中、Ｊは有機または無機部位であり、Ｍ^+xは医薬上許容されるカチオン（式中、ｘはカチオンの原子価である）であり、ａは少なくとも１であり、ｂおよびｃは中性化合物を与える最も小さい整数である。〕に含まれる基である請求の範囲第４項記載の薬剤。６．Ｊが炭素原子以外の原子を介して、複合体の残りの部分の窒素に結合している部位である請求の範囲第５項記載の薬剤。７．酸化窒素放出基がアラノシンまたはドパスチンの塩以外の化合物である請求の範囲第５項記載の薬剤。８．当該酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基が式：（式中、ｂおよびｄは同一または異なって０または１であり、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄およびＲ₅は同一または異なって水素、Ｃ_3-8シクロアルキル、Ｃ_1-12直鎖または分枝鎖アルキル、ベンジル、ベンゾイル、フタロイル、アセチル、トリフルオロアセチル、ｐ−トルイル、ｔ−ブトキシカルボニルまたは２，２，２−トリクロロ−ｔ−ブトキシカルボニルであり、ｘ、ｙおよびｚは同一または異なって２〜１２の整数である。）に含まれる基である請求の範囲第４項記載の薬剤。９．当該酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基が式：（式中、Ｂはであり、Ｒ₆およびＲ₇は同一または異なって水素、Ｃ_3-8シクロアルキル、Ｃ_1-1 ₂ 直鎖または分枝鎖アルキル、ベンジル、ベンゾイル、フタロイル、アセチル、トリフルオロアセチル、ｐ−トルイル、ｔ−ブトキシカルボニルまたは２，２，２−トリクロロ−ｔ−ブトキシカルボニルであり、ｆは０〜１２の整数であり、ただしＢが置換されたピペラジン部位の場合、ｆは２〜１２の整数である。）に含まれる基である請求の範囲第４項記載の薬剤。１０．当該酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基が式：（式中、Ｒ₈は水素、Ｃ_3-8シクロアルキル、Ｃ_1-12直鎖または分枝鎖アルキル、ベンジル、ベンゾイル、フタロイル、アセチル、トリフルオロアセチル、ｐ−トルイル、ｔ−ブトキシカルボニルまたは２，２，２−トリクロロ−ｔ−ブトキシカルボニルであり、Ｒ₉は水素またはＣ₁−Ｃ₁₂直鎖または分枝鎖アルキルであり、ｇは２〜６の整数である。）に含まれる基である請求の範囲第４項記載の薬剤。１１．当該酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基が式：（式中、Ｒ₁およびＲ₂は独立して直鎖または分枝鎖Ｃ₁−Ｃ₁₂アルキル基およびベンジル基からなる群より選ばれる。）に含まれる基である請求の範囲第４項記載の薬剤。１２．Ｒ₁およびＲ₂が介在する窒素原子と共に結合して複素環基を形成するようにＲ₁およびＲ₂が選ばれ、Ｍ^+xは医薬上許容されるカチオンであり、ｘはカチオンの原子価である請求の範囲第１１項記載の薬剤。１３．複素環基がピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノおよびモルホリノからなる群より選ばれる請求の範囲第１２項記載の薬剤。１４．当該酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基が式： K[(M)^x'_x(L)_y(R¹R²N-N₂O₂)_z] （ＶＩ）（式中、Ｍは医薬上許容される金属、またはｘが少なくとも２の場合、異なる２種の医薬上許容される金属の混合物であり、Ｌは（Ｒ¹Ｒ²Ｎ−Ｎ₂Ｏ₂）とは異なる配位子であり、少なくとも１つの金属に結合しており、Ｒ¹およびＲ²はそれぞれ有機部位であり、それらは同一または異なっていてよく、ｘは１〜１０の整数であり、ｘ’は金属Ｍの形式的な酸化状態を示し、１〜６の整数であり、ｙは１〜１８の整数であり、ただし、ｙが少なくとも２の場合、配位子Ｌは同一または異なっていてもよく、ｚは１〜２０の整数であり、Ｋは化合物を必要な程度まで中性にする医薬上許容される対イオンである。）に含まれる基である請求の範囲第４項記載の薬剤。１５．当該酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基が式： [R-N(H)N(NO)O^-]_yX （ＶＩＩ）（式中、ＲはＣ_2-8低級アルキル、フェニル、ベンジルまたはＣ_3-8シクロアルキルであり、任意のＲ基は１〜３個の置換基で置換されていてもよく、その置換基は同一または異なっていて、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ_1-8アルコキシ、−ＮＨ₂ 、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ₂、−ＣＨ（Ｏ）、−Ｃ（Ｏ）ＯＨおよび−ＮＯ₂からなる群より選ばれ、Ｘは医薬上許容されるカチオン、医薬上許容される金属中心、またはＣ_1-8低級アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ₃および−Ｃ（Ｏ）ＮＨ₂からなる群より選ばれる医薬上許容される有機基であり、ｙは１〜３であり、Ｘの原子価と一致する。）に含まれる基である請求の範囲第４項記載の薬剤。１６．当該酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基が式：〔式中、Ｒ₁およびＲ₂は独立して、Ｃ_1-12直鎖アルキル、アルコキシまたはアシルオキシで置換されたＣ_1-12直鎖アルキル、ヒドロキシまたはハロゲン置換されたＣ_2-12直鎖アルキル、Ｃ_3-12分枝鎖アルキル、ヒドロキシ、ハロゲン、アルコキシまたはアシルオキシで置換されたＣ_3-12分枝鎖アルキル、Ｃ_3-12直鎖オレフィンおよびＣ_3-12分枝鎖オレフィン（これらは置換されていないか、またはヒドロキシ、アルコキシ、アシルオキシ、ハロゲンまたはベンジルで置換されている）から選ばれるか、あるいはＲ₁およびＲ₂がそれらが結合している窒素原子と共に複素環基を形成し、Ｒ₃は、置換されていないか、またはヒドロキシ、ハロゲン、アシルオキシまたはアルコキシで置換されているＣ_1-12直鎖およびＣ_3-12分枝鎖アルキル、置換されていないか、またはハロゲン、アルコキシ、アシルオキシまたはヒドロキシで置換されているＣ_2-12直鎖またはＣ_3-12分枝鎖オレフィン、置換されていないかまたは置換されているＣ_1-12アシル、スルホニルおよびカルボキサミドから選ばれる基、あるいはＲ₃は式−（ＣＨ₂）_n−ＯＮ＝Ｎ（Ｏ）ＮＲ₁Ｒ₂（式中、ｎは２〜８の整数であり、Ｒ₁およびＲ₂は上記に定義した通り）で表される基である。〕に含まれる基である請求の範囲第４項記載の薬剤。１７．Ｒ₁、Ｒ₂およびＲ₃はヘテロ原子のαにハロゲンまたはヒドロキシ置換基を含まない請求の範囲第１６項記載の薬剤。１８．複素環基がピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノおよびモルホリノからなる群より選ばれる請求の範囲第１６項記載の薬剤。１９．当該哺乳類の当該癌性細胞が潜在的に転移性である請求の範囲第１項記載の薬剤。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 31/70 Ａ６１Ｋ 31/70 33/00 33/00 38/00 ＡＤＵＣ０７Ｄ 295/22 ＺＣ０７Ｄ 295/22 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＤＵ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者コング、リプアメリカ合衆国、ルイジアナ州 71104、シュリーヴポート、ワイルダープレイス、314 (72)発明者キーファー、ラリーケイ. アメリカ合衆国、メリーランド州 20817、ベセスダ、リヴァーロード、7016

Claims

【特許請求の範囲】１．酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基を含有する酸化窒素放出化合物を哺乳類に投与することを含む、哺乳類における癌性細胞と非癌性細胞との間の接着(adheren ce)を阻害する方法であって、当該化合物は当該哺乳類に接着(adherence)阻害有効量の酸化窒素を放出することができるものである方法。２．当該化合物が、ペプチド、ポリペプチド、蛋白質、オリゴヌクレオチドおよび核酸からなる群より選ばれる高分子である請求の範囲第１項記載の方法。３．当該高分子が、組織特異的、細胞特異的または腫瘍特異的抗体またはその断片、腫瘍細胞接着(tumor cell attachment)に適した受容体−リガンド相互作用の認識配列を含有する蛋白質、抗化学走性剤およびホルモンからなる群より選ばれる請求の範囲第２項記載の方法。４．当該酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-基が、式（式中、Ｘは有機または無機部位であり、Ｘ’はＸ、医薬上許容される金属中心または医薬上許容されるカチオンからなる群より選ばれる。）に含まれる基であり、当該Ｎ₂Ｏ₂ ^-基はＸまたはＸ’の少なくとも１つを介して当該生体高分子に結合している請求の範囲第１項記載の方法。５．当該酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基が式：〔式中、Ｊは有機または無機部位であり、Ｍ^+xは医薬上許容されるカチオン（式中、ｘはカチオンの原子価である）であり、ａは少なくとも１であり、ｂおよびｃは中性化合物を与える最も小さい整数である。〕に含まれる基である請求の範囲第４項記載の方法。６．Ｊが炭素原子以外の原子を介して、複合体の残りの部分の窒素に結合している部位である請求の範囲第５項記載の方法。７．酸化窒素放出基がアラノシンまたはドパスチンの塩以外の化合物である請求の範囲第５項記載の方法。８．当該酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基が式：（式中、ｂおよびｄは同一または異なって０または１であり、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄およびＲ₅は同一または異なって水素、Ｃ_3-8シクロアルキル、Ｃ_1-12直鎖または分枝鎖アルキル、ベンジル、ベンゾイル、フタロイル、アセチル、トリフルオロアセチル、ｐ−トルイル、ｔ−ブトキシカルボニルまたは２，２，２−トリクロロ−ｔ−ブトキシカルボニルであり、ｘ、ｙおよびｚは同一または異なって２〜１２の整数である。）に含まれる基である請求の範囲第４項記載の方法。９．当該酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基が式：（式中、Ｂはであり、Ｒ₆およびＲ₇は同一または異なって水素、Ｃ_3-8シクロアルキル、Ｃ_1-1 ₂ 直鎖または分枝鎖アルキル、ベンジル、ベンゾイル、フタロイル、アセチル、トリフルオロアセチル、ｐ−トルイル、ｔ−ブトキシカルボニルまたは２，２，２−トリクロロ−ｔ−ブトキシカルボニルであり、ｆは０〜１２の整数であり、ただしＢが置換されたピペラジン部位の場合、ｆは２〜１２の整数である。）に含まれる基である請求の範囲第４項記載の方法。１０．当該酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基が式：（式中、Ｒ₈は水素、Ｃ_3-8シクロアルキル、Ｃ_1-12直鎖または分枝鎖アルキル、ベンジル、ベンゾイル、フタロイル、アセチル、トリフルオロアセチル、ｐ−トルイル、ｔ−ブトキシカルボニルまたは２，２，２−トリクロロ−ｔ−ブトキシカルボニルであり、Ｒ₉は水素またはＣ₁−Ｃ₁₂直鎖または分枝鎖アルキルであり、ｇは２〜６の整数である。）に含まれる基である請求の範囲第４項記載の方法。１１．当該酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基が式：（式中、Ｒ₁およびＲ₂は独立して直鎖または分枝鎖Ｃ₁−Ｃ₁₂アルキル基およびベンジル基からなる群より選ばれる。）に含まれる基である請求の範囲第４項記載の方法。１２．Ｒ₁およびＲ₂が介在する窒素原子と共に結合して複素環基を形成するようにＲ₁およびＲ₂が選ばれ、Ｍ^+xは医薬上許容されるカチオンであり、ｘはカチオンの原子価である請求の範囲第１１項記載の方法。１３．複素環基がピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノおよびモルホリノからなる群より選ばれる請求の範囲第１２項記載の方法。１４．当該酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基が式： K[(M)^x'_x(L)_y(R¹R²N-N₂O₂)_z] （ＶＩ）（式中、Ｍは医薬上許容される金属、またはｘが少なくとも２の場合、異なる２種の医薬上許容される金属の混合物であり、Ｌは（Ｒ¹Ｒ²Ｎ−Ｎ₂Ｏ₂）とは異なる配位子であり、少なくとも１つの金属に結合しており、Ｒ¹およびＲ²はそれぞれ有機部位であり、それらは同一または異なっていてよく、ｘは１〜１０の整数であり、ｘ’は金属Ｍの形式的な酸化状態を示し、１〜６の整数であり、ｙは１〜１８の整数であり、ただし、ｙが少なくとも２の場合、配位子Ｌは同一または異なっていてもよく、ｚは１〜２０の整数であり、Ｋは化合物を必要な程度まで中性にする医薬上許容される対イオンである。）に含まれる基である請求の範囲第４項記載の方法。１５．当該酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基が式： [R-N(H)N(NO)O^-]_yX （ＶＩＩ）（式中、ＲはＣ_2-8低級アルキル、フェニル、ベンジルまたはＣ_3-8シクロアルキルであり、任意のＲ基は１〜３個の置換基で置換されていてもよく、その置換基は同一または異なっていて、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ_1-8アルコキシ、−ＮＨ₂ 、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ₂、−ＣＨ（Ｏ）、−Ｃ（Ｏ）ＯＨおよび-ＮＯ₂からなる群より選ばれ、Ｘは医薬上許容されるカチオン、医薬上許容される金属中心、またはＣ_1-8低級アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ₃および−Ｃ（Ｏ）ＮＨ₂からなる群より選ばれる医薬上許容される有機基であり、ｙは１〜３であり、Ｘの原子価と一致する。）に含まれる基である請求の範囲第４項記載の方法。１６．当該酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基が式：〔式中、Ｒ₁およびＲ₂は独立して、Ｃ_1-12直鎖アルキル、アルコキシまたはアシルオキシで置換されたＣ_1-12直鎖アルキル、ヒドロキシまたはハロゲン置換されたＣ_2-12直鎖アルキル、Ｃ_3-12分枝鎖アルキル、ヒドロキシ、ハロゲン、アルコキシまたはアシルオキシで置換されたＣ_3-12分枝鎖アルキル、Ｃ_3-12直鎖オレフィンおよびＣ_3-12分枝鎖オレフィン（これらは置換されていないか、またはヒドロキシ、アルコキシ、アシルオキシ、ハロゲンまたはベンジルで置換されている）から選ばれるか、あるいはＲ₁およびＲ₂がそれらが結合している窒素原子と共に複素環基を形成し、Ｒ₃は、置換されていないか、またはヒドロキシ、ハロゲン、アシルオキシまたはアルコキシで置換されているＣ_1-12直鎖およびＣ_3-12分枝鎖アルキル、置換されていないか、またはハロゲン、アルコキシ、アシルオキシまたはヒドロキシで置換されているＣ_2-12直鎖またはＣ_3-12分枝鎖オレフィン、置換されていないかまたは置換されているＣ_1-12アシル、スルホニルおよびカルボキサミドから選ばれる基、あるいはＲ₃は式−（ＣＨ₂）_n−ＯＮ＝Ｎ（Ｏ）ＮＲ₁Ｒ₂（式中、ｎは２〜８の整数であり、Ｒ₁およびＲ₂は上記に定義した通り）で表される基である。〕に含まれる基である請求の範囲第４項記載の方法。１７．Ｒ₁、Ｒ₂およびＲ₃はヘテロ原子のαにハロゲンまたはヒドロキシ置換基を含む請求の範囲第１６項記載の方法。１８．複素環基がピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノおよびモルホリノからなる群より選ばれる請求の範囲第１６項記載の方法。１９．当該哺乳類の当該癌性細胞が潜在的に転移性である請求の範囲第１項記載の方法。