JPH10510542A - デスメチルセレギリンを用いる方法および医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 セレギリン代謝物であるデスメチルセレギリンおよびその立体異性体形を用いた方法および医薬組成物。特に、本発明は、セレギリン-応答性の疾病および症状用の、デスメチルセレギリンおよび／またはエント-デスメチルセレギリンを用いた新規の組成物および方法を提供する。セレギリン応答性の疾病および症状には、ニューロン変性またはニューロン外傷によって発生するもの、および免疫系不全によるものが含まれる。デスメチルセレギリンおよび／またはエント-デスチルセレギリンは、経口、または胃腸吸収に依存しない投与経路のいずれかによって投与する。デスメチルセレギリンとは、Ｎ-メチル-Ｎ-(プロプ-２-イニル)-２-アミノフェニルプロパンのＲ-(-)エナンチオマーであって、エント-デスメチルセレギリンとはそのＳ(+)エナンチオマーである。特許請求する組成物には、該Ｒ-(-)およびＳ-(+)異性体の両方ならびにそれらの混合物が含まれる。医薬上許容される酸付加塩も使用できる。有効投与量は、少なくとも約０.００１５ｍｇ／ｋｇ体重の日用量である。

Description

【発明の詳細な説明】 デスメチルセレギリンを用いる方法および医薬組成物 発明の分野 本発明は、セレギリン代謝物であるデスメチルセレギリンおよびそのエナンチ オマー、エント-デスメチルセレギリンを用いる方法および医薬組成物に関する 。特に、本発明は、セレギリン-応答性の疾病および症状用のこれらの剤を用い た組成物ならびに方法を提供する。 発明の背景 当該分野において、２の異なるモノアミン・オキシダーゼ酵素：モノアミンオ キシダーゼＡ(ＭＡＯ-Ａ)およびモノアミンオキシダーゼＢ（ＭＡＯ-Ｂ）、が知 られている。これらの酵素をコードするｃＤＮＡは、異なるプロモーター領域お よび異なるエキソン部分を示し、これらは異なる遺伝子位置で独立してコードさ れることを示す。加えて、２の蛋白質の分析により、それらの対応するアミノ酸 配列においても相異が示されている。 ＭＡＯ-Ｂを選択的に阻害することが判明した最初の化合物は、Ｒ-(-)-Ｎ-メ チル-Ｎ-(プロプ-２-イニル)-２-アミノフェニルプロパンであり、これはＬ-(-) -デプレニル、Ｒ-(-)-デプレニル、またはセレギリンとしても知られている。セ レギリンは以下の構造式： を有する。 ＭＡＯ-Ｂの阻害におけるセレギリンの選択性は、経口投与後のその安全特性 に対して重要である。トラニルシプロミン（tranylcypromine）(３０年前に導入 されたＭＡＯ阻害剤であるが、その後、その重症の高血圧副作用のために中止さ れた)は、セレギリンとは反対に、ＭＡＯの非-選択的阻害剤である。トラニルシ プロミンの急性毒性は、チラミンの代謝を妨害するＭＡＯ-Ａの阻害から生じる 。チラミンはＭＡＯ-Ａによって胃腸管で通常代謝されるが、ＭＡＯ-Ａが阻害さ れると、チーズ、ビール、ニシン他のごときチラミン含有食品の消費後にチラミ ン吸収が上昇する。これは、「チーズ効果」を生じる高血圧発症を沈静化し得る カテコールアミンの放出を生じる。この効果は、ＭＡＯ-Ａ阻害剤に関連する最 も重大な毒性効果として、ＧoodmanおよびＧilmanによって特徴付けられている 。 セレギリンの１の代謝物はそのＮ-デスメチルアナログである。構造的には、 該デスメチルセレギリン代謝物は式： の第二級アミンのＲ(-)エナンチオマー形である。 以前は、デスメチルセレギリンが医薬上有用なＭＡＯ-関連効果、すなわち、 ＭＡＯ-Ｂに対する強力かつ選択的な阻害効果を有することは知られていなかっ た。本発明の目的につきデスメチルセレギリンの有用性を測定する過程において 、デスメチルセレギリンのＭＡＯ-関連効果がより完全に特徴付けられた。この 特徴付けにより、セレギリンと比較して、デスメチルセレギリンが非常に弱いＭ ＡＯ-Ｂ阻害作用しか有さず、ＭＡＯ-Ｂに関する選択性において何ら利点を有し ないことが確立された。 例えば、本特徴付けにより、セレギリンがヒト血小板のＭＡＯ-Ｂに対して５ ×１０^-9ＭのＩＣ₅₀値を有する一方、デスメチルセレギリンのＩＣ₅₀値が４× １０^-7Ｍであることが確立され、これは後者が前者よりもＭＡＯ-Ｂ阻害剤とし て約８０倍活性が低いことを示している。同様な特徴は、ラット髄質ミトコンド リア-リッチ画分におけるＭＡＯ-ＢおよびＭＡＯ-Ａの阻害を測定した以下のデ ータに見ることができる： 上表から明らかなごとく、セレギリンがＭＡＯ-Ａの阻害剤としてよりもＭＡ Ｏ-Ｂのものとして約１２８倍も強力である一方、デスメチルセレギリンはＭＡ Ｏ-Ａの阻害剤としてよりもＭＡＯ-Ｂのものとして９７倍しか強力でない。した がって、デスメチルセレギリンは、セレギリンとしてのＭＡＯ-Ａと比較して、 ＭＡＯ-Ｂに対してほぼ同等の選択性を有するが、実質的に活性が低いようであ る。 同様な結果はラット脳組織で得られる。セレギリンがＭＡＯ-Ｂに対して０.１ １×１０^-7ＭのＩＣ₅₀を示す一方、デスメチルセレギリンのＩＣ₅₀値は７.３× １０^-7Ｍであり、これは、デスメチルセレギリンがセレギリンよりもＭＡＯ-Ｂ 阻害剤として約７０倍低い活性であることを示している。両方の化合物ともラッ ト脳中のＭＡＯ-Ａ阻害において低い活性を示す:セレギリンについては０.１８ ×１０^-5、デスメチルセレギリンについては７.０×１０^-5。かくして、デスメ チルセレギリンは、ＭＡＯ-Ａを阻害することにおいてセレギリンよりもほぼ３ ９倍活性が低い。 前記したその薬理学的特性に基づき、ＭＡＯ-Ｂ阻害剤としてのデスメチルセ レギリンは、セレギリンと比較して活性または選択性のいずれにおいても何ら利 点を供しない。反対に、前記のイン・ビトロ(in vitro)データは、ＭＡＯ-Ｂ阻 害剤としてのデスメチルセレギリンの使用には、７０倍ほどの量のセレギリンが 必要であることを示唆している。 イン・ビボ(in vivo)におけるＭＡＯ-Ｂ阻害剤としてのデスメチルセレギリン の活性は、Ｈeinonen，Ｅ.Ｈ.らによって報告されている(ツルク大学、神経細胞 学部(Ｔurku,Ｆinland)研究報告、３３号(１９９５)５９-６１頁からのＡcademi c Ｄissertation「Ｓelegiline in the Ｔreatment of Ｐarkinson's Ｄisease 」に引用されている「Ｄesmethylselegiline，a metabolite of selegiline，is anirreversible inhibitor of ＭＡＯ-Ｂ in human subjects」)。Ｈeinonenに よると、イン・ビボにおけるデスメチルセレギリンは、セレギリンのＭＡＯ-Ｂ 阻害効果の約５分の１しか有していない、すなわち、１.８ｍｇのセレギリンと 同一のＭＡＯ-Ｂ効果には、１０ｍｇのデスメチルセレギリンの用量を要するで あろう。 セレギリンが有用であることが知られている種々の疾病および症状には：鬱病 (米国特許第4,861,800号)；特に、軟膏、クリーム剤およびパッチを包含する経 皮投与形の使用を介するアルツハイマー病およびパーキンソン病；黄斑変性(米 国特許第5,242,950号)；空間学習能力によって明らかにされる眼機能および認識 機能を包含する老化性デジェネラシー(米国特許第5,151,449号)；脳下垂体依存 性-クッシング病(米国特許第5,192,808号)；免疫系不全(米国特許第5,276,057号 )； および精神分裂症(米国特許第5,151,419号)が含まれる。ＰＣＴ国際公開番号Ｗ Ｏ 92/17169号は、神経筋および神経変性疾患の治療、ならびに低酸素状態、低 血糖状態、虚血性の卒中または外傷によるＣＮＳ障害の治療におけるセレギリン の使用を開示している。 前記の症状の治療にセレギリンが有効であることは知られているが、その機作 の正確な数もしくは性質または作用機作はいずれも知られていない。しかしなが ら、恐らく、酸化的ニューロン障害を低下し、酵素スーパーオキシドジスムター ゼ量を増加し、かつ／または、ドーパミン異化作用を低下することによって、ニ ューロン保護(neuronal protection)またはニューロン救済(neuronal rescue)を セレギリンが供するという事実が存在する。例えば、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ 9 2/17169号は、動物の神経機能を、直接維持し、その損失を防ぎ、かつ／または 、それを補助することによってセレギリンが作用することを報告している。 ニューロン細胞に対するセレギリンの生化学的効果は広範に研究されている。 例えば、Ｔattonら、「Ｓelegiline Ｃan Ｍediate Ｎeuronal Ｒescue Ｒather than Ｎeuronal Ｐrotection」，Ｍovement Ｄisorders 8(増刊号１):S20-S30( 1993)；Ｔattonら、「Ｒescue of Ｄying Ｎeurons」，Ｊ．Ｎeurosci．Ｒes．3 0:666-672(1991);およびＴattonら、「(-)-Ｄeprenyl Ｐrevents Ｍitochondrial Ｄepolarization and Ｒeduces Ｃell Ｄeath in Ｔrophically Ｄeprived Ｃe lls」11th Ｉnt'l Ｓymp．on Ｐarkinson's Ｄisease(Ｒoma，Ｉtaly)、1994年3 月26-30日参照。 セレギリンは広範な投与経路および投与量形を介して対象に投与しても有用で あることが知られている。例えば、米国特許第4,812,481号(Ｄegussa ＡＧ社)は 、経口、口周囲、腸、肺、直腸、鼻、膣、舌、静脈内、動脈内、心内、筋肉内、 腹膜内、皮内および皮下処方における、同時セレギリン-アマンタジン(amantadi ne)の使用を開示している。米国特許第5,192,550号(Ａlza Ｃorporation社)は、 セレギリンに対して非透過性であるが外部流体に対して透過性である外部膜を含 む投与量形を記載している。この投与量形は、セレギリンの経口、舌下または口 内投与について適用性を有し得る。同様に、米国特許第5,387,615号は、錠剤、 丸 剤、カプセル剤、粉剤、噴霧剤、坐薬、皮膚パッチ剤、非経口剤、ならびに油- 水性懸濁液、溶液および乳液を包含する経口液剤を含む、種々のセレギリン組成 物を開示している。また、セレギリン含有持放性(長期作用性)の処方および装置 も開示している。 デスメチルセレギリンに加えて、セレギリンは１の他の主要な直接代謝物、メ タンフェタミン(methamphetamine)を産生する。デスメチルセレギリンおよびメ タンフェタミンは、両方ともさらにアンフェタミン(amphetamine)に代謝される 。最後の２の代謝物、アンフェタミンおよびメタンフェタミンは、ドーパミン神 経細胞に対して持続的に神経毒性効果に対して活性を有し、望ましくない副産物 であることが知られている。セレギリンとは異なり、デスメチルセレギリンは、 代謝物としてアンフェタミンのみを産生し、メタンフェタミンは産生しない。 したがって、非常に活性が高く、選択的なＭＡＯ-Ｂ阻害剤であるが、セレギ リンの実際の使用は、ＭＡＯ-Ｂに対するその用量-依存的特異性、および投与後 に生成するセレギリン代謝物の薬理学によって制限される。 発明の概要 本発明は、両方のデスメチルセレギリン(「ＤＭＳ」または「Ｒ(-)ＤＭＳ」) およびそのエナンチオマー(「エント-ＤＭＳ」または「Ｓ(＋)ＤＭＳ」と略する エント-デスメチルセレギリン)が、セレギリンと比較してＭＡＯ-Ｂ阻害活性が 顕著に低く、ＭＡＯ-Ｂに対する選択性が明らかに不足しているにも拘わらず、 対象にセレギリン-様効果を供するのに有用であるという驚くべき知見に関する 。特に、本発明は、デスメチルセレギリン、エント-デスメチルセレギリンおよ びそれらの異性体混合物が、セレギリン-応答性の疾病または症状においてセレ ギリン-様治療効果を得るより有利な方法を提供するという驚くべき知見に関す る。かくして、本発明は、有効成分としてデスメチルセレギリンおよび／または エント-デスメチルセレギリンを用いる新規な医薬組成物、ならびにデスメチル セレギリンおよびエント-デスメチルセレギリンの投与に関する新規な治療方法 を提供する。 特に、本発明は： (１)セレギリン-応答性の疾病または症状に罹った患者に、セレギリン-様治療 効果を生じるのに十分な量で、デスメチルセレギリン、エント-デスメチルセレ ギリン、またはそれらの混合物を投与する ことを特徴とする、該患者においてセレギリン-様治療効果を得るための改良さ れた方法；ならびに (２)１または２以上の任意の医薬上許容される補助剤または担体に加えて、一 定周期ベースで投与したその医薬組成物の１または２以上の単位用量が、その単 位用量を投与した対象における１または２以上のセレギリン-応答性の疾病また は症状を治療するに有効であるように一定量のデスメチルセレギリン、エント- デスメチルセレギリン、またはそれらの混合物を含む医薬組成物 を提供する。 本明細書で用いる「セレギリン-応答性の疾病または症状」なる語は、セレギ リンが有用であることが知られている、ヒトを含む哺乳動物におけるいずれの種 々の疾病または症状をもいう。特に、「セレギリン-応答性の疾病または症状」 とは、前記した種々の疾病および症状、例えば、アルツハイマー病、認識不全、 ニューロン救済などをいう。同様にして、「セレギリン-様治療効果」なる語は 、セレギリン-応答性の疾病または症状につき治療する対象においてセレギリン によって奏される１または２以上の健康効果をいう。 本方法に応答するニューロン変性または外傷に関連するセレギリン-応答性の 疾病または症状には、パーキンソン病、アルツハイマー病、鬱病、緑内症、黄斑 変性、虚血、糖尿病性神経障害、注意力欠乏障害、後ポリオ症候群、多発性硬化 症、不能、ナルコレプシー、慢性疲労症候群、遺伝性脱毛症、老人性痴呆症、低 酸素症、認識不全、精神分裂症の負の総体的症状、筋萎縮性側索硬化症、ツーレ ット症候群、後発性運動障害、および毒性神経変性が含まれる。 本発明は、Ｒ(-)ＤＭＳ、Ｓ(＋)ＤＭＳまたはそれらの混合物による免疫系機 能の回復または改善も包含する。かかる改善または回復は、セレギリンを動物に 投与した場合に起こることが報告されている。治療可能な症状または疾病には、 老化性免疫系不全、ＡＩＤＳ、ガンおよび感染症が含まれる。 用いる特定の経路に依存して、デスメチルセレギリンまたはエント-デスメチ ルセレギリンのいずれかは遊離塩基の形態または生理学上許容される非毒性の酸 付加塩として投与する。かかる塩には、限定するものではないが、塩酸塩、臭化 水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩、メタンスルホン酸塩、酢酸塩、酒石酸塩、乳酸塩 、コハク酸塩、クエン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、ソルビン酸塩、アコニ ット酸塩、サリチル酸塩、フタル酸塩、エンボン酸(embonic acid)塩、エナント 酸塩などのごとき有機または無機酸由来のものが含まれる。塩、特に塩酸塩の使 用は、特に投与経路が、例えば非経口投与のような水性溶液を用いる場合に望ま しく；遊離塩基形の送達デスメチルセレギリンまたはエント-デスメチルセレギ リンの使用は、経皮投与に特に有用である。したがって、本明細書に引用するＤ ＭＳもしくはエント-ＤＭＳまたはそれらの混合物の投与は、遊離塩基および酸 付加塩形態の両方を包含する。 本発明の目的に有用なデスメチルセレギリンおよび／またはエント-デスメチ ルセレギリンの最適日用量は、例えば、治療すべき疾病または症状の重度、治療 を行う対象の状態、治療応答性の望む程度、および患者または動物に投与する同 時療法に基づくような当該分野で公知の方法によって決定される。しかしながら 、普通は、治療に対する応答性によっては進行的により高用量を用いつつ、遊離 第二級アミンに基づいて算出して少なくとも約０.００１５ｍｇ／ｋｇの初期用 量を付き添いの医師または獣医師が投与するであろう。典型的に、日用量は約０ .０１ｍｇ／ｋｇ患者体重であろうが、約０.５ｍｇ／ｋｇ患者体重まで拡げても よい(かかる全ての用量は、遊離第二級アミンに基づいて再度算出する)。これら のガイドラインは、さらに、個々の患者または動物の年令、体重、臨床的状態、 および認められた応答に依存して、付き添いの医師または獣医師によって実際の 用量が注意深く力価測定されることを要求している。 該日用量は単一または複数の投与様式で投与できる。投与の形態または様式は 、例えば、１または２日以上の工程にわたる経皮パッチのごとき、単一投与単位 からの比較的少量の有効成分の連続的放出を許容できる。これは、パーキンソン 病、 アルツハイマー病および鬱病のごとき慢性症状の治療において特に望ましい。別 法として、それは、虚血または神経障害のごとき症状においては静脈内または吸 引によるごときより直接的な全身経路により１または２以上の分別した用量を投 与することが望ましい。緑内障および黄斑変性のごときなお他の症例においては 、眼内経路を介するごとき局所投与を指示すことができる。 経口投与の場合においては、本発明は、デスメチルセレギリンおよび／または エント-デスメチルセレギリンの経口使用が、種々の症状および疾病における使 用につき、経口セレギリンよりもより有効であるという予期せぬ知見を包含する 。したがって、デスメチルセレギリンおよびそのエナンチオマーは、セレギリン それ自体の使用が副作用によって禁避される対象において経口的に使用する。 デスメチルセレギリンおよび／またはエント-デスメチルセレギリンを含有す る医薬組成物は、慣用技術に従って調製することができる。例えば、デスメチル セレギリン用投与の非経口経路、例えば、筋肉内、静脈内および動脈内経路用の 調製物には、滅菌等張圧生理食塩水を用いることができる。滅菌等張溶液は、眼 内投与にも用いることができる。 デスメチルセレギリンおよび/またはエント-デスメチルセレギリンの経皮用量 単位形は、種々の以前に記載されている技術(例えば、米国特許第4,861,800号； 第4,868,218号；第5,128,145号；第5,190,763号；および第5,242,950号；ならび に欧州特許出願EP-A 404807号、EP-A 509761号およびEP-A 593807号参照)を用い て調製できる。例えば、例えば、デスメチルセレギリンが直接粘着剤に取り込ま れていて、この混合物が裏打ちシート上にキャストされた一体パッチ構造を使用 し得る。 別法として、デスメチルセレギリンおよび／またはエント-デスメチルセレギ リンは、例えばEP-A 593807号記載のごとく、塩から遊離塩基への変換に作用す る複層パッチに酸付加塩として取り込ませることもできる。 デスメチルセレギリンおよび／またはエント-デスメチルセレギリンは、例え ば、５〜１５％のデスメチルセレギリンを液体および固体ポリエチレングリコー ル、ポリマー、および非イオン性界面活性剤(所望により、プロピレングリコー ルおよび乳化剤を添加してもよい)の混合物と合したリオトロピック液晶組成物 を利用した装置によって投与することもできる。かかる経皮調製物の調製に関す るさらなる詳細については、EP-A 5509761号に参照することができる。 「エント-デスメチルセレギリン」なる語はデスメチルセレギリンのＳ(＋)-異 性体形をいうため、セレギリンおよびエント-デスメチルセレギリンの前記混合 物には光学異性体のラセミ体および非-ラセミ体の両方の混合物が含まれる。 本発明の調製物および方法により治療可能な対象には、セレギリン-様-治療効 果が有用であることが知られているヒトおよび非-ヒト対象の両方が含まれる。 したがって、前記の組成物および方法は、哺乳動物に、特に家庭の哺乳動物に特 に有用な治療を提供する。かくして、本発明の方法および組成物はイヌおよびネ コ種におけるセレギリン-応答性の疾病および症状の治療に用いる。 前記の組成物および方法の首尾よい使用には、有効量のデスメチルセレギリン 、エント-デスメチルセレギリンまたはそれらの混合物の使用が要求される。デ スメチルセレギリンおよびエント-デスメチルセレギリンは両方とも、ＭＡＯの 阻害剤としてセレギリンよりも顕著に活性が低いが、これらの剤またはこれらの 剤の混合物の使用は、セレギリン-様治療応答性を得るために有理の多量の投与 量を要しない。驚くべきことには、セレギリン-様治療効果を達成するために必 要な投与量は、セレギリンの知られている用量と同程度である。したがって、デ スメチルセレギリンおよびエント-デスメチルセレギリンは両方ともかかる投与 量でははるかに低いＭＡＯ-Ａ阻害しか示さないため、デスメチルセレギリンお よびエント-デスメチルセレギリンは、セレギリンと比較して、ＭＡＯ-Ａに関連 する毒性に関して実質的に広い幅の安全性を提供する。特に、ＭＡＯ-Ａ阻害の 悪影響の危険性、例えば、高血圧の発症は、ＭＡＯ-Ａ阻害の４０-７０倍低い活 性によって最小限化される。 前記したごとく、ＭＡＯ-Ｂ阻害に関するその証明し得る劣る阻害特性にも拘 わらず、デスメチルセレギリンおよびそのエナンチオマーは、セレギリン-応答 性症状、例えば、ニューロン変性またはニューロン外傷から生じる症状を治療す ることにおいて、セレギリンよりも顕著に有効である。この点に関して、デスメ チルセレギリンおよび／またはそのエナンチオマーは、セレギリンそれ自体のよ うに、上部ＧＩ管または他の胃腸吸収によらない経路によって投与した場合に特 に有用である。好ましい経路には、非経口、局所、経皮、眼内、口内、舌下、鼻 内、吸入、膣および直腸経路が含まれる。 前記したごとく、本発明は、デスメチルセレギリンが光学活性形態およびラセ ミ体形の両方で、すなわち、デスメチルセレギリンおよびエント-デスメチルセ レギリンの混合物として使用できるというさらなる知見を包含する。デスメチル セレギリン、そのエナンチオマーおよびそれらの混合物は、実施例１で後記する ごとく、当該分野で公知の方法によって簡便に調製する。 図面の簡単な説明 図１：ニューロン生存性に対するセレギリンの効果。中脳培養物は、胎生１４ 日齢ラットから調製した。培養物は、プレート当たり約１.５×１０⁶個の細胞で 用い、増殖培地単独(対照培養物)またはセレギリンを補充した増殖培地のいずれ かで維持した。１、８および１５日目に、チロシンヒドロキシラーゼ(「ＴＨ」) の存在について細胞を免疫染色した。横線棒グラフは５０μＭセレギリン存在下 で維持した培養物につき得られた結果を表し、白抜き棒グラフは対照培養物につ いての結果を表す。すべての場合において、結果は、１日目の対照培養物中に存 在するＴＨ陽性細胞の％として表す。「ＤＩＶ」なる略語は、「イン・ビトロで の日数」をいう。図１および以下に論じる図の両方における棒グラフ上側のアス タリスクまたは星印は、統計学的に有意、すなわち、Ｐ＜０.０５である、一定 量における対照から異なる結果を示す。 図２：中脳細胞における[³Ｈ]-ドーパミン取り込み。図１で前記したごとく培 養した細胞を、標識ドーパミンのその取り込みにつき試験し、その結果を図２に 示す。横線棒グラフは５０μＭセレギリン存在下で維持した細胞における取り込 みを表し、白抜き棒グラフは対照培養物における取り込みを表す。 図３：グルタミン酸受容体依存性のニューロン死に対するセレギリンの効果。 ラット胎児中脳細胞を前記のごとく培養した。培養を安定化させた後は、その培 養培地を４日間毎日取り換えて、グルタミン酸受容体-依存性の細胞死を誘導し た。培養に応じて、培地には０.５、５.０または５０μＭのいずれかのセレギリ ンが含まれていた。最後に培地を取り換えた後に、培養した細胞をチロシンヒド ロキシラーゼの存在につき免疫染色した。左から右に、棒グラフは対照、０.５ 、５.０および５０μＭセレギリンについての結果を表す。 図４：ニューロン培養物におけるドーパミン取り込みに対するセレギリンの効 果。 図３に論じたごとく、ラット中脳細胞を培養し、培地を日ベース取り換えた。細 胞によるトリチウム化ドーパミンの取り込みを測定し、その結果を図に示す。左 から右に、棒グラフは図３と同順序である。 図５：グルタミン酸受容体依存性のニューロン死に対するＲ(-)デスメチルセ レギリンの効果。ラット胎児中脳培養物は、セレギリンの代わりにＲ(-)ＤＭＳ を用いた以外は前記のごとく調製した。９日目に、培養中のＴＨ陽性細胞数を計 測した。結果は、対照の％として表す。左から右に、棒グラフは対照、０.５、 ５および５０μＭのＲ(-)ＤＭＳについての結果を示す。 図６：ニューロン培養物におけるドーパミン取り込みに対するＲ(-)デスメチ ルセレギリンの効果。細胞培養物を図５について前記したごとく調製し、ついで トリチウム化ドーパミンの取り込みについて試験した。対照の、ならびに０.５ μＭ、５μＭおよび５０μＭデスメチルセレギリンの存在下で維持した細胞につ いての結果を図の左から右に示す。 図７：種々のモノアミンオキシダーゼ阻害剤の存在下でインキュベートした中 脳細胞のドーパミン取り込みの比較。ラット胎児中脳細胞を図３-６について記 載したごとく調製し、種々のモノアミンオキシダーゼ阻害剤の存在下でインキュ ベートした。検査した阻害剤は、すべて０.５、５および５０μＭ濃度における 、セレギリン；Ｒ(-)デスメチルセレギリン；パルギリン(pargyline)；およびク ロルギリン(clorgyline)である。さらに、細胞を、グルタミン酸受容体ブロッカ ーであるＭＫ-８０１ １０μＭ濃度存在下でもインキュベートした。培養物を トリチウム化ドーパミンの取り込みにつき試験した。 図８：デプレニルおよびデスメチルセレギリンのエナンチオマーによる神経細 胞ドーパミンのニューロン再取り込みの阻害。イン・ビトロ神経末端調製物(シ ナプトソーム調製物)は、新鮮なラット新線条体組織を用いて調製した。これは 、緩衝液単独、または種々の濃度のセレギリン、Ｒ(-)デスメチルセレギリンも しくはＳ(＋)デスメチルセレギリンを補充した緩衝液中でトリチウム化ドーパミ ンを取り込むその能力について試験した。各ＭＡＯ阻害剤存在下の取り込みは、 緩衝液単独存在下における取り込みに対する％阻害として表し、その結果を図８ に示す。図に示すごとく、プロットを用いて各供試剤についてのＩＤ₅₀を算出し た。Ｓ(＋)ＤＭＳについてのにＩＤ₅₀は２０μＭ；セレギリンについては８０μ Ｍ；およびＲ(-)ＤＭＳについては約１００μＭであった。 図９：モルモット海馬におけるイン・ビボＭＡＯ-Ｂ阻害。種々の用量のセレ ギリン、Ｒ(-)デスメチルセレギリン、およびＳ(＋)デスメチルセレギリンを５ 日間、モルモットに毎日注射した。ついで、動物を殺し、脳の海馬部分のＭＡＯ -Ｂ活性を測定した。結果は対照動物の海馬ＭＡＯ-Ｂ活性に対する％阻害として 表し、図９に示す。プロットを用いて各剤についてのＩＤ₅₀用量を算出した。セ レギリンについてのＩＤ₅₀は約０.０３ｍｇ／ｋｇ；ＤＭＳの両方のエナンチオ マーについては約０.３ｍｇ／ｋｇであった。 図１０：セレギリン、Ｒ(-)ＤＭＳまたはＳ(＋)ＤＭＳを注射したラットから の脾臓細胞中のイン・ビトロのインターフェロン(「ＩＦＮ」)産生。Ｆ３４４ラ ットを生理食塩水、セレギリン、Ｒ(-)ＤＭＳまたはＳ(＋)ＤＭＳで、６０日間 、毎日ｉｐ注射した。注射したラットはすべて老齢、すなわち、１８〜２０月齢 であった。１０日間の全く注射を行わない「洗い出し」期間経過後に、ラットを 殺してその脾臓を取り出した。刺激した脾臓細胞(リンパ球)によるインターフェ ロン−γのイン・ビトロ産生を測定し、注射していない老齢ラットおよび若齢ラ ット(３月齢)からの脾臓細胞(リンパ球)による産生と比較した。左から右に、棒 グラフは、若齢ラット；老齢ラット、生理食塩水を注射した老齢ラット；０.２ ５ｍｇ／ｋｇのセレギリンを注射した老齢ラット；１.０ｍｇ／ｋｇのセレギリ ンを注射した老齢ラット；０.０２５ｍｇ／ｋｇのＲ(-)ＤＭＳを注射したラット ； ０.２５ｍｇ／ｋｇのＲ(-)ＤＭＳを注射したラット；１.０ｍｇ／ｋｇのＲ(-)Ｄ ＭＳを注射したラット；および１.０ｍｇ／ｋｇのＳ(＋)ＤＭＳを注射したラッ トからの脾臓細胞についての結果を反映している。水平線は、ＩＦＮレベルが若 齢ラット脾臓細胞を用いて認められるＩＦＮレベルからレベルが有意(ｐ＜.０５ )に異なる点を示す。結果は、単位／ｍｌとして表す。 図１１：老齢ラットからの脾臓細胞中のイン・ビトロのＩＦＮ産生：図１０に 示したのと同結果が１１で繰り返されるが、若齢ラットの脾臓細胞についての結 果を含んでいない。「＃」は、生理食塩水を注射した老齢ラットからの脾臓につ いて得られたものとは有意に異なる(ｐ＜０．０５)結果を示す。「＊」は、１. ０ｍｇ／ｋｇのデプレニルを注射した老齢ラット以外の全グループから有意に異 なる結果を示す。 図１２：老齢ラットからの脾臓細胞によるイン・ビトロのインターロイキン- ２産生。ラットを前記(図１０参照)のごとく注射し、刺激した脾臓細胞によるイ ンターロイキン-２の産生を測定した。左から右への棒グラフの順序は図１０と 同じである。 図１３：ＩｇＭ陽性であるラット脾臓細胞の％。ラットに、前記(図１０参照) のどとく生理食塩水、セレギリン、Ｒ(-)ＤＭＳまたはＳ(＋)ＤＭＳを注射した 。ラットからの脾臓をアッセイして、ＩｇＭ陽性である細胞の％を算出し、その 結果を図に示す。図中の水平線は、若齢ラットから得られた脾臓で認められた％ と比較して統計学的に有意(Ｐ＜０.０５)であるＩｇＭ％の低下に対応する。棒 グラフは、左から右に、図１０および１２中と同じ順序である。 図１４：ＣＤ５陽性であるラット脾臓細胞の％。ＩｇＭ陽性である細胞の％を 測定する代わりにＣＤ５陽性であるものの％を測定した以外は、図１３の実験を 繰り返した。 発明の詳細な説明 セレギリン-応答性の疾病または症状を治療することにおけるデスメチルセレ ギリンおよびエント-デスメチルセレギリンの驚くべき有用性は、一部分、修復 および回復を促進することによるドーパミン作動性ニューロンの損失を防ぐこと におけるそれらの強力な作用に起因し得る。したがって、僅かかまたは全くＭＡ Ｏ-Ｂ阻害が一般的に認められない０.０１ｍｇ/ｋｇほど低い用量で、ニューロ ンの損傷および／または死の反転を認めることができる。デスメチルセレギリン およびエント-デスメチルセレギリンはニューロン機能の損失を防ぎ、その回復 を促進するため、それらは、広範な神経変性および神経筋の疾病において価値を 有する。この点に関して、デスメチルセレギリンおよびエント-デスメチルセレ ギリンは、以下の実施例でより経験的に記載するごとく、セレギリンよりも実質 的により強力である。実施例は説明目的のみのものであって、本発明の範囲を限 定するものではない。 実施例 実施例１：デスメチルセレギリンおよびエント-デスメチルセレギリンの調製 Ａ．デスメチルセレギリン デスメチルセレギリン(以下、「Ｒ(-)ＤＭＳ」と示す)は、当該分野で公知の 方法により調製する。例えば、デスメチルセレギリンは、米国特許第4,925,878 号記載のごとくセレギリン調製の公知の化学中間体である。デスメチルセレギリ ンは、トルエンのごとき不活性有機溶媒中のＲ(＋)-２-アミノフェニルプロパン (レボアンフェタミン(levoamphetamine))： の溶液を、僅かな高温(７０°-９０°)にて、臭化プロパルギル(Ｂｒ-ＣＨ₂-Ｃ ≡ＣＨ)のごとき反応性ハロゲン化プロパルギルの等モル量で処理することによ って調製できる。所望により、該反応は、炭酸カリウムのごとき酸受容体存在下 で行うこともできる。ついで、該反応混合物を、水性酸、例えば、５％塩酸で抽 出し、その抽出物をアルカリ性とした。形態が分離したその非水性層を、例えば ベンゼンにより抽出し、乾燥し、減圧下にて蒸留する。 別法として、該プロパルギル化は、米国特許第4,564,706号記載のセレギリン の調製と同様に、酒石酸のごとき弱酸と共にＲ(＋)-２-アミノフェニルプロパン の塩を用いる、水-非混和性の溶媒および水性アルカリの二相系で行うこともで きる。 Ｂ．エント-デスメチルセレギリン エント-デスメチルセレギリン(以下、「Ｓ(＋)ＤＭＳ」と示す)は、エナンチ オマーＳ(-)-２-アミノフェニルプロパン(デキストロアンフェタミン(dextroam- phetamine))、すなわち： からデスメチルセレギリンについて前記した方法に従って簡便に調製する。 Ｃ．エナンチオマー混合物 ラセミ体デスメチルセレギリンを含有するデスメチルセレギリンのエナンチオ マー形の混合物は、前記のアミノフェニルプロパン出発物質のラセミ体混合物を 含有するエナンチオマー混合物から簡便に調製する。 Ｄ．酸付加塩への変換 光学活性またはラセミ体形のいずれかのＮ-(プロプ-２-イニル)-２-アミノフ ェ ニルプロパンは、鉱酸での処理のごとき慣用技術によって生理学上許容される非 毒性の酸付加塩に変換できる。例えば、イソプロパノール中の塩酸を、塩酸デス メチルセレギリンの調製に用いる。遊離塩基または塩のいずれかは、結晶化また はクロマトグラフィーのごとき慣用技術によって再度さらに精製できる。 実施例２：チロシンヒドロキシラーゼを用いて測定しニューロン生存性 ニューロン生存性に対するデスメチルセレギリンの効果は、チロシンヒドロキ シラーゼ(ドーパミン生合成における律速酵素)に相関し得る。アッセイは、７〜 １４日間にわたる培養Ｅ-１４胎生中脳細胞中のチロシンヒドロキシラーゼ陽性 細胞の数を測定することによって行う。この系における保護は、ＢＤＮＦ、ＧＤ ＮＦ、ＥＧＦおよびβ-ＦＧＦを含む種々の栄養因子で認められた。 Ａ．試験方法 一定期妊娠Ｓprague-Ｄawleyラットを用いて、妊娠１４日目の胎生ラット脳か らのニューロン培養物を確立した。膜被覆物なしに中脳を切り出し、４℃の無Ｃ ａ⁺⁺Ｍｇ⁺⁺バランス塩溶液に採取した。小孔パスツールピペットで温和にトリチ ュレートすることによって、組織フラグメントを化学規定培地中で分離させた。 細胞懸濁液をポリオルニチン-被覆３５ｍｍＦalconプラスチック皿(０.１ｍｇ／ ｍｌ、Ｓigma社)に、１.５×１０⁶細胞／皿の密度で平板した。培養物は１０％ ＣＯ₂／９０％空気の雰囲気、１００％相対湿度中、３７℃にて維持し、ＭＥＭ ／Ｆ１２(１：１、Ｇibco社)、グルコース(３３ｍＭ)、ＨＥＰＥＳ(１５ｍＭ)、 ＮａＨＣＯ₃(４４．６ｍＭ)、トランスフェリン(１００ｍｇ／ｍｌ)、インスリ ン(２５ｍｇ／ｍｌ)、プトレシン(６０ｎＭ)、セレン酸ナトリウム(３０ｎＭ)、 プロジェステロン(２０ｎＭ)およびグルタミン(２ｍＭ)よりなる化学規定培地を １週間当たり２回補充した。対照細胞は、全くさらなる添加物を与えない。他の 細胞に用いた培地も、１または２以上の濃度の供試物質、例えば、セレギリンを 含む。 培養物を室温にて３０分間、０.１Ｍリン酸緩衝液(ｐＨ７.４)中の４％パラホ ルムアルデヒド中で固定し、０.２％トリトンＸ-１００を３０分間浸透させ、ブ ロッキング血清存在下、４℃にて４８時間、抗-チロシンヒドロキシラーゼ抗体( １：１０００；Ｅugene Ｔech社)とインキュベートした。ついで、それを、着色 源(chromagen)として３',３'-ジアミノベンジジンを入れたペルオキシダーゼー カップル化アビジン-ビオチン染色キット(Ｖectastain ＡＢＣ kit；Ｖector Ｌ abs社)を用いて染色した。 培養物中のドーパミン作動性ニューロン数は、ＴＨ抗体で陽性免疫染色した細 胞をカウントすることによって測定する。全面積の２.５％を示す、皿の直径を 横切る２の横線中の１００領域(０.５ｍｍ×０.５ｍｍ)を、２００×倍率でＮik on倒立顕微鏡を用いてカウントした。 Ｂ．結果 前記した手法を用いて、以下の結果を得た： 実施例３：ドーパミン取り込みを用いて測定したニューロン生存性 培養物中でＴＨ陽性細胞数を測定することに加えて(実施例２参照)、ニューロ ン細胞に対するデスメチルセレギリンの保護効果は、ドーパミン取り込みを直接 測定することによって測定することができる。培養脳細胞による取り込み量は軸 索増殖に対応する。 Ａ．試験方法 前記で論じた方法で確立した細胞培養物は、０.９ｍＭ ＣａＣｌ₂および０.５ ｍＭ ＭｇＣｌ₂を補充したＰＢＳ(ｐＨ７.３)中のアルコルビン酸(０.２ｍｇ／ ｍｌ)存在下、[³Ｈ]ドーパミン(０.５ｍＣｉ／ｍｌ；３７Ｃｉ／ミリモル；Ｎew Ｅngland Ｎuclear社)と１５分間インキュベートした。２回濯ぎ、新鮮な緩衝 液で５分間インキュベートした後に、該培養物を９５％エタノールと一緒に３７ ℃にて３０分間インキュベートすることにより、細胞中に蓄積した[³Ｈ]ドーパ ミンを放出させた。ついで、調製物を１０ｍｌ Ｅcoscint(Ｎational Ｄiagnost ics社)に添加し、シンチレーション分光器でカウントした。非特異的取り込み値 は、１０ｍＭ マジンドール(mazindol)でドーパミン作動性ニューロンの取り込 みをブロッキングすることにより得た。 Ｂ．結果 前記手法を用いて、表３に示す結果を得た。 Ｃ．実施例２および３からの結論 実施例２および３に記載の結果から、デスメチルセレギリンがニューロン保護 剤として、セレギリンよりも優れていることが示された。デスメチルセレギリン はＭＡＯ-Ｂの阻害剤としてセレギリンよりも遥かに活性が低いという事実にも 拘わらず、これは真実である。 実施例４：イン・ビトロにおける、培養したドーパミン-含有中脳ニューロン中 のデスメチルセレギリンエナンチオマーの神経保護作用 ラット脳組織の中脳、ドーパミン-含有ニューロン培養物の生存性をこれらの 実験に用いて、セレギリンおよびＲ(-)デスメチルセレギリンの神経保護特性を 試験した。ＴＨ陽性神経細胞の数は、ドーパミン作動性ニューロンの生存性に直 接比例し、³Ｈ-ドーパミン取り込みはこれらのニューロン中の軸索増殖の尺度で ある。 Ａ．ドーパミン作動性ニューロンの生存性に対するセレギリンの効果 胎生１４日齢ラットから調製した中脳培養物を０.５、５または５０μＭセレ ギリンで、平板した日から始めて１５日間処理した。(細胞の培養およびこれら の実験で用いた他の方法に関するさらに詳細な議論については、Ｍytilineouら 、Ｊ.Ｎeurochem.61：1470-1478(1993)参照)。ドーパミンニューロンの生存性お よび増殖は、チロシンヒドロキシラーゼ(ＴＨ)免疫化学および[³Ｈ]ドーパミン 取り込みによって評価し、その結果を図１および２に示す。 セレギリンを０.５および５μＭの濃度で試験した場合のニューロン生存性に 対しては何ら効果は認められなかった。５０μＭにおいては、セレギリンは、平 板後８および１５日にＴＨ-陽性ニューロンの損失を低下し(図１)、１５日には ドーパミン取り込みを上昇した(図２)。別の実験において、０.５、５、５０ま たは１００μＭセレギリンでの前-処理により、実験で用いたアッセイ条件下で のドーパミン取り込みが阻害されないことが測定された。 結果は、得られた取り込み値がドーパミンニューロンの生存性およびプロセス 結果を反映すること、およびセレギリンが神経保護効果を有することを示してい る。 Ｂ．グルタミン酸受容体依存性の細胞死に対するセレギリンの効果 セレギリンの神経保護効果も、グルタミン酸受容体の阻害によってブロックし 得るニューロン細胞死を引き起こす実験パラダイムを用いて試験した。これらの 実験において、細胞を平板し、数日間安定化させた。ついで、細胞の増殖培地を 日ベースで取り換えて、例えば、ＭＫ-８０１を用いてグルタミン酸受容体をブ ロッキングすることによって防ぐことができる細胞死を誘導した。毎日培地を取 り換えて４日後に、培養物をチロシンヒドロキシラーゼについて染色し、トリチ ウム化ドーパミンの取り込みについてアッセイした。図３および４に示した結果 も、さらに、セレギリンがドーパミン作動性ニューロンの生存性を促進するとい う結論を支持する。 Ｃ．ドーパミンニューロンの生存性に対するデスメチルセレギリンの効果 ニューロン死のグルタミン酸受容体依存性モデルを用いると、セレギリンの代 わりにデスメチルセレギリンを用いた場合に、ドーパミン作動性ニューロンのな おより強力な保護が供された。試験した最低用量(０.５μＭ)でさえ、セレギリ ンまたはデスメチルセレギリンのいずれも補充することなく用いた培地中の対照 培養物に対して、デスメチルセレギリンは、ＴＨ陽性ニューロンの損失における 顕著な低下(図５)およびドーパミン取り込みにおける顕著な上昇(図６)を引き起 こした。 Ｄ．他のＭＡＯ阻害剤との比較 神経毒性のグルタミン酸受容体依存性のパラダイムを用いて、セレギリンおよ びデスメチルセレギリンの効果を２の他のＭＡＯ阻害剤、パルギリン(pargyline )およびクロルギリン(clorgyline)と比較した(図７)。以前の結果と同じく、ド ーパミン取り込みの測定値は、５０Ｍデプレニルならびに５および５０μＭデス メチルセレギリンによる神経保護を示した。パルギリンは用いた濃度で何ら保護 を付与しないようであったが、クロルギリンは５０μＭで保護した。予期したご とく、保護はＮＭＤＡ受容体ブロッカーＭＫ-８０１(１０μＭ)によっても得ら れた。 Ｅ．³Ｈ-ドーパミン取り込みに対するＤＭＳエナンチオマーの効果 表４に要約するデータは、Ｒ(-)ＤＭＳおよびＳ(＋)ＤＭＳが両方とも、培養 中の中脳ドーパミン-含有ニューロンにおいて神経保護剤として有効であること を示唆している。 これらの結果は、非処理対照細胞と比較して、Ｒ(-)ＤＭＳおよびＳ(＋)ＤＭ Ｓで処理した後に、各々、４０％および１３４％の大きな軸索増殖および末端軸 索生存性が存在したことを立証している。かくして、Ｓ(＋)ＤＭＳはＲ(-)ＤＭ Ｓよりもさおより強力、かつ／または有効な神経保護剤となり得る。 実施例５：ドーパミン再-取り込みの阻害剤としてのデスメチルセレギリンおよ びエント-デスメチルセレギリン 脳神経伝達物質ドーパミンの生物学的作用は、高-親和性の、前シナプスドー パミン-含有神経末端の制限膜内に存在するナトリウムおよびエネルギー-依存性 伝達系(神経細胞再取り込み)によってシナプスで終結する。この伝達機構の阻害 は、シナプスにおけるドーパミンの作用を拡張し、したがって、ドーパミンシナ プス伝達を向上する。 Ａ．試験方法 デスメチルセレギリン(ＤＭＳ)のＲ(-)およびＳ(＋)エナンチオマーを、ドー パミン再-取り込み系を阻害するその能力について試験し、セレギリンと比較し た。このアッセイにおける阻害活性は、高いシナプスドーパミン活性を要する疾 病の治療において価値を有する剤の指標である。現在、これには、パーキンソン 病、アルツハイマー病および注意欠損機能冗進病(Ａttention Ｄeficit Ｈyper- activity Ｄisorder(ＡＤＨＤ))が含まれるであろう。 用いたアッセイ系は、実質的に、Ｆangら(Ｎeuropharmacology 33:763-768(19 94))によって記載されているものである。イン・ビトロ神経-末端調製物(シナプ トソーム調製物)は、新鮮なラット新線条体脳組織から得た。ドーパミン神経-末 端による輸送は、トリチウム化ドーパミンの取り込みを測定することによって測 定した。 Ｂ．結果 表５に示すデータに見られるように、セレギリン、Ｒ(-)ＤＭＳおよびＳ(＋) ＤＭＳはすべて、ドーパミン-含有神経末端によるドーパミンの再-取り込みを阻 害した。セレギリンおよびＲ(-)ＤＭＳはほぼ等しい活性であった。それとは反 対に、Ｓ(＋)ＤＭＳは、セレギリンまたはＲ(-)ＤＭＳのいずれかよりも４-５倍 強い活性であった。 相対活性は、５０％ドーパミン再取り込みを阻害するのに要する濃度(ＩＤ₅₀) によって表すことができる。ＩＤ₅₀値はグラフ的に算出し(図８参照)、以下の表 ６に示す。 Ｃ．結論 結果は、適当な濃度において、セレギリンおよびＤＭＳの各エナンチオマーが 、神経細胞シナプスで放出されたドーパミンの輸送を阻害し、シナプスにおける この神経伝達物質の相対活性を上昇すること立証している。この点に関して、Ｓ (+)ＤＭＳは、Ｒ(-)ＤＭＳよりもより強力なセレギリンよりもなお強力である。 この効果は、パーキンソン病、アルツハイマー病および注意欠損機能冗進病(Ａ ＤＨＤ)の治療における有益な剤の指標である。試験した剤の中では、Ｓ(+)ＤＭ Ｓが、ＡＤＨＤの治療に関して最も好ましいようである。 実施例６：ヒト血小板ＭＡＯ-Ｂおよびモルモット脳ＭＡＯ-ＢおよびＭＡＯ-Ａ 活性に対するデスメチルセレギリン(ＤＭＳ)のＲ(-)およびＳ(＋)エナンチオマ ーの作用 ヒト血小板ＭＡＯは、該酵素のＢ型異性形より全面的になる。本実験において は、ＤＭＳの２のエナンチオマーによるこの酵素の阻害を測定し、セレギリンに よる阻害と比較する。加えて、本実験は、モルモット海馬組織におけるＭＡＯ- ＡおよびＭＡＯ-Ｂに関する阻害活性について、ＤＭＳの２のエナンチオマーを 試験した。モルモット脳組織は、脳ドーパミン代謝、ＭＡＯの複数形の酵素動力 学、およびこれらの酵素と相互作用する新規な剤の阻害特性、を研究する最良の 動物モデルである。この動物種における複数形のＭＡＯは、ヒト脳組織で見出さ れたものと同様な動力学特性を示す。最後に、剤をモルモットに注射して、イン ・ビボにおいて、脳ＭＡＯの阻害剤として作用し得るそれらの範囲を試験した。 Ｂ．試験方法： 試験系は、ヒト血小板および／またはモルモット海馬ホモジネートによる、Ｍ ＡＯ-Ａ(¹⁴Ｃ-セロトニン)およびＭＡＯ-Ｂ(¹⁴Ｃ-フェニルエチルアミン)の特異 的基質のイン・ビトロ変換を用いた。各基質の変換速度は、Ｓ(+)ＤＭＳ、Ｒ(-) ＤＭＳまたはセレギリン存在下で測定し、これらの剤の不存在下でのアイソザイ ム活性と比較した。％阻害はこれらの値から算出した。活性は、５０＆阻害を引 き起こす各剤の濃度(ＩＣ₅₀)を比較することによって評価した。 ある実験においては、Ｒ(-)ＤＭＳ、Ｓ(+)ＤＭＳまたはセレギリンを、殺し、 酵素海馬ホモジネートを調製し、ＭＡＯ-ＡおよびＭＡＯ-Ｂ活性をイン・ビトロ アッセイする前の５日間、１日に一回、皮下的(ｓ.ｃ.)にイン・ビボ投与した。 これらの実験を行い、ＤＭＳエナンチオマーが脳組織に入り、ＭＡＯ活性を阻害 することができることを立証した。 Ｃ．結果 イン・ビトロＭＡＯ-Ｂ阻害活性 ＭＡＯ-Ｂ阻害の結果を表７および８に示す。セレギリンと比較したＭＡＯ-Ｂ 阻害についてのＩＣ₅₀値および活性を表９に示す。 認められるごとく、Ｒ(-)ＤＭＳは、ＭＡＯ-Ｂ阻害剤としてＳ(+)ＤＭＳより も２０-３５倍活性が高く、両方のエナンチオマーともセレギリンよりも活性が 低かった。 ＭＡＯ-Ａ阻害活性 モルモット海馬におけるＭＡＯ-Ａの阻害を測定した実験から得た結果を表１ ０に要約し、ＤＭＳの２のエナンチオマーおよびセレギリンについてのＩＣ₅₀値 を表１１に示す。 Ｒ(-)ＤＭＳはＭＡＯ-Ａ阻害剤としてＳ(+)ＤＭＳの２倍の活性であり、両方 ともセレギリンよりも２０-４０倍低い活性であった。さらに、これらの各剤は ２-３桁、すなわち１００から１０００倍、海馬脳組織におけるＭＡＯ-Ｂの阻害 剤よりもＭＡＯ-Ａの阻害剤として活性が低かった。したがって、セレギリンお よびＤＭＳの両方のエナンチオマーは、脳組織における選択的ＭＡＯ-Ｂ阻害剤 として分類し得る。 イン・ビトロ実験の結果 ＤＭＳの各エナンチオマーを、５日間連続して毎日１回、皮下投与によってイ ン・ビボ投与し、ついで脳ＭＡＯ-Ｂ活性の阻害を測定した。これらの条件下で は、Ｒ(-)ＤＭＳおよびＳ(+)ＤＭＳはＭＡＯ-Ｂ阻害剤として等活性であったが 、セレギリンよりも１０倍活性が低かった。その結果を図９に示し、ＩＣ50値を 表１２に要約する。 この実験により、ＤＭＳの各エナンチオマーが非経口イン・ビボ投与後に血液 脳-関門を透過し、脳ＭＡＯ-Ｂを阻害することが立証された。また、ＤＭＳの各 エナンチオマーおよびセレギリンの間でイン・ビトロで認められたＭＡＯ-Ｂ阻 害剤としての活性差がイン・ビボ条件下では減少することも立証された。この実 験で投与した投与量は、ＭＡＯ-Ａ活性を阻害するに十分ではない。 Ｄ．結論 Ｒ(-)ＤＭＳおよびＳ(+)ＤＭＳは両方とも、ＭＡＯ-ＢおよびＭＡＯ-Ａ阻害剤 としての活性を立証した。各エナンチオマーはＭＡＯ-Ｂに対して選択的であっ た。Ｓ(+)ＤＭＳは、一般的にＲ(-)ＤＭＳよりも活性が低く、ＤＭＳの両方のエ ナンチオマーはＭＡＯ-ＡおよびＭＡＯ-Ｂの両方を阻害することにおいてはセレ ギリンよりも活性が低い。両方のエナンチオマーは、これらのエナンチオマーが 非経口投与後に脳組織に侵入できることを示す、イン・ビボ投与後の活性を立証 した。ＭＡＯ-ＡまたはＭＡＯ-Ｂを阻害するこれらの剤の可能性は、これらの剤 がパーキンソン病、アルツハイマー病または鬱病の治療に価値を有することを示 唆している。 実施例７：デスメチルセレギリンのエナンチオマーによるイン・ビボの神経保護 神経学的変性を予防するＤＭＳのエナンチオマーの能力は、運動神経疾患、特 に筋萎縮性側索硬化症(ＡＬＳ)の動物モデルであるウォブラーマウスにこの剤を 投与することによって測定した。ウォブラーマウスは、経時的に悪化してゆく前 脚弱体、歩行障害、および前脚筋の屈曲収縮を示す。 Ｂ．試験方法 Ｒ(-)ＤＭＳ、Ｓ(+)ＤＭＳまたはプラセボは、ランダムにした二重盲検実験で 、３０日間毎日腹膜内注射することによってウォブラーマウスに投与した。この 期間の最後に、マウスを、その握力、走行時間、休止運動活性について検査し、 半定量的脚姿勢異常および半定量的歩行異常について等級付けした。溶液を調製 し、それを動物に注射した研究者と、行動変化を分析した研究者とは異なる。 アッセイおよび等級付けは、Ｍitsumotoら、Ａnn.Ｎeurol.36：142-148(1994) 記載と実質的に同様に行った。マウスの前脚の握力は、動物に両前脚でワイヤー を握らせることによって測定した。該ワイアーはグラム力量計に接続され、マウ スにワイヤーを強制的に離させるまで、該動物の尾に牽引力を負荷した。離した 時点の力量計の示数を握力の測定値として採用した。 走行時間は、特定の距離、例えば２.５フィート、を走行するのに要した最短 時間として定義し、幾つかの試行の最良時間を記録した。 脚姿勢異常は、収縮の程度に基づく尺度で等級付けし、歩行異常は、正常な歩 行から、脚を用いて体を支える無能力性までの範囲で等級付けした。 運動活動は、床が四角のグリッドで覆われた検査空間に動物を移動させること によって測定した。活動は、定めた時間間隔、例えば、９分間に、マウスによっ て横切られる四角部の数によって測定した。 Ｃ．結果 実験を開始する時点において、いずれかの変数において異なる群は全くなく、 これは３の群がベースラインで比較できることを示している。体重の増加は全３ 群において同一であり、これはいずれの動物においても大きな副作用が全く起こ らなかったことを示している。表１３は、供試動物の平均握力において認められ た差を要約している。 すべての動物において、第一週の終わりに握力が顕著に低下した。実験の最後 に、握力は、０-１５ｇに分布し、平均９ｇである対照動物において最低であっ た。Ｒ(-)群は、０-６３ｇに分布する値で、２０ｇの平均握力を有していた。Ｓ (+)ＤＭＳで注射した第３群は、７-２０ｇに分布する個別値で、１４ｇの平均握 力を有していた。処理した動物群における握力の変動性はこのデータの有意な統 計分析を妨げたが、ＤＭＳ-処理動物において測定された平均握力は対照につい てよりも高かった。 走行時間、休止運動活動、半定量的脚姿勢異常等級付け、および半定量的歩行 異常等級付けも試験した。しかしながら、これらの試験のうちで、これら３群の うちのいずれかの１群が他から異なることを示唆するデータを示した試験は全く なかった。 実施例８：Ｒ(-)ＤＭＳおよびＳ(+)ＤＭＳによる免疫系回復 より老齢の個人が感染症およびガンにより感受性となる、動物およびヒトにお いて生じる免疫学的機能の老化性の衰退が存在する。米国特許第5,276,057号お よび第5,387,615号は、セレギリンが免疫系不全の治療に有用であることを示唆 している。本実験は、Ｒ(-)ＤＭＳおよびＳ(+)ＤＭＳがかかる不全の治療にも有 用であるか否かを判定するために行う。患者の正常な免疫的防御を強める能力が 、ガン、ＡＩＤＳならびに細菌性およびウイルス性の両方の感染症を包含する広 範 な急性および慢性の疾患の治療に有益であることは認識されなければならない。 Ａ．試験方法 本実験は、ラットモデルを用いて免疫機能を回復するためのＲ(-)ＤＭＳおよ びＳ(+)ＤＭＳの能力を試験する。ラットは以下の実験群に分けた： １）若齢ラット(３週齢、非注射)； ２）老齢ラット(１８-２０週齢、非注射)； ３）生理食塩水で注射した老齢ラット； ４）０.２５ｍｇ／ｋｇ体重の投与量でセレギリンを注射した老齢ラット； ５）１.０ｍｇ／ｋｇ体重の投与量でセレギリンを注射した老齢ラット； ６）０.０２５ｍｇ／ｋｇ体重の投与量でＲ(-)ＤＭＳを注射した老齢ラット； ７）０.２５ｍｇ／ｋｇ体重の投与量でＲ(-)ＤＭＳを注射した老齢ラット； ８）１.０ｍｇ／ｋｇ体重の投与量でＲ(-)ＤＭＳを注射した老齢ラット； ９）１.０ｍｇ／ｋｇ体重の投与量でＳ(+)ＤＭＳを注射した老齢ラット； ラットは、６０日間毎日、ｉｐ注射した。ついで、それを、注射を全く投与し ない期間である１０日間のさらなる「洗出し」期間維持した。この期間の最後に 動物を殺し、その脾臓を取り出した。ついで、その脾臓細胞を免疫系機能の指標 である種々の因子についてアッセイした。特に、標準試験を用いて以下の事項を 測定した： １）脾臓細胞によるイン・ビトロのインターフェロン−γ産生； ２）インターロイキン-２のイン・ビトロ産生； ３）ＩｇＭ陽性脾臓細胞の％(ＩｇＭはＢリンパ球のマーカーである)； ４）ＣＤ５溶性脾臓細胞の％(ＣＤ５はＴリンパ球のマーカーである) Ｂ．結果 ラット脾臓細胞によるインターフェロン産生に対するセレギリン、Ｒ(-)ＤＭ ＳおよびＳ(+)ＤＭＳの注射の効果を図１０および１１に示す。図１０に示すご とく、(若齢動物からの細胞による産生と、老齢動物または生理食塩水を注射し た老齢動物からの細胞による産生とを比較して)加齢につれて生じる細胞性イン ター フェロン産生の急激な低下が存在する。セレギリン、Ｒ(-)ＤＭＳおよびＳ(＋) ＤＭＳの注射は、すべて、γ-インターフェロンレベルの部分的な回復を誘導し 、最も顕著な増加は１.０ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で起こった。 図１０に示すのと同一のデータが、若齢ラットからの細胞についての結果が略 されていること以外、図１１においても繰り返されている。該図は、デプレニル 、Ｒ(-)ＤＭＳおよびＳ(+)ＤＭＳが老齢ラットの脾臓細胞におけるγ-インター フェロン産生を回復できる能力の範囲をより明確に示している。インターフェロ ン-γは、ウィルス複製を阻害し、種々の免疫学的機能を調節する多機能蛋白質 である。それは、Ｂ-細胞により産生されるクラスの抗体に作用し、クラスＩお よびクラスII ＭＨＣ複合体抗原を上方調節し、細胞内寄生体のマクロファージ- 媒介死殺の効率を高める。 図１２は、ラット脾臓細胞によるインターロイキン-２の産生に対する注射の 効果を示している。Ｒ(-)ＤＭＳおよびＳ(+)ＤＭＳの両方が、若齢動物からの細 胞で認められるレベルまで産生を回復し得ることを認めることができる。 ＩｇＭ陽性である脾臓細胞の％に対する注射の効果を図１３に示す。セレギリ ンおよびＲ(-)ＤＭＳは両方とも、若齢ラットの脾臓において認められるものに 近いレベルまでＩｇＭ陽性細胞を部分的に回復したことが判明した。かくして、 これらの剤はＢリンパ球細胞数を回復しているようである。 図１４は、０.０２５ｍｇ／ｋｇのＲ(-)ＤＭＳまたはＳ(+)ＤＭＳのいずれか の注射が、老齢ラットから得た脾臓におけるＣＤ５陽性細胞の％をわずかに上昇 し得たことを示唆している。しかしながら、セレギリン、または０.２５もしく は１.０ｍｇ／ｋｇのＲ(-)ＤＭＳでの注射はいずれも何ら効果を有していないよ うであった。 Ｃ．結論 全体として、結果はＤＭＳのエナンチオマーが免疫系機能に対するセレギリン の効果を模倣するという結論を支持している。そのうえ、インターフェロン、Ｉ Ｌ-２の産生、およびＩｇＭ陽性脾臓細胞の％に関して得られた結果は、ＤＭＳ エナンチオマーが老化性の免疫系機能の損失を少なくとも部分的に回復できると いう結論を支持している。かくして、Ｒ(-)ＤＭＳおよびＳ(+)ＤＭＳは、弱化し た受容体免疫により促進される疾病および症状に対して治療上有益な効果を有す るであろう。この疾病および症状には、ガン、ＡＩＤＳおよびすべてのタイプの 感染症が含まれよう。 実施例９：投与形の実施例 Ａ．デスメチルセレギリン・パッチ ２成分を完全に混合し、Ｓcotchpak^R9723ポリエステルフィルム裏打ちシート 上にキャストし、乾燥する。その裏打ちシートをパッチに切り出し、Ｓcotchpak^R 1022フルオロポリマー放出ライナーを適用し、そのパッチを包装に密閉する。 神経細胞変性または神経細胞外傷により発生したヒトにおける症状、例えばパー キンソン病の治療においては、１のパッチを毎日適用して、２４時間当たり１- ５ｍｇのデスメチルセレギリンを供給する。 Ｂ．眼科用液剤 塩酸塩としてのデスメチルセレギリン(０.１ｇ)、ホウ酸１.９ｇ、および硝酸 フェニル水銀０.００４ｇを滅菌水に溶解して全量１００ｍｌとする。その混合 液を滅菌し、密封する。それは、ニューロン変性またはニューロン外傷によって 発生する症状、例えば、緑内障性の視神経障害および黄斑変性の治療に、眼科的 に用いることができる。 実施例３：静脈内溶液 １％溶液は、ＨＣｌ塩としてのデスメチルセレギリン１ｇを０.９％等張生理 食塩水溶液に十分に溶解し、最終用量を１００ｍｌとすることによって調製する 。その溶液をクエン酸でｐＨ４に緩衝化し、密封し、滅菌して、ニューロン変性 またはニューロン外傷によって発生する症状の治療において静脈内投与するのに 適した１％溶液を得る。 Ｃ．経皮パッチ 自己架橋性アクリルベースの感圧粘着剤を、メチルエチルケトンのごとき有機 溶媒中のメタクリル酸とジメチルアミノエチルメタクリル酸とのコポリマーの溶 液に添加する。これを、EP-A 593807号に記載のごとく、第一の除去可能な包装 上にキャストし、溶媒を蒸発させ、その被覆包装をポリエステルの裏打ち層に置 く。 塩酸デスメチルセレギリンを、適当な有機溶媒、例えば、酢酸エチル中の非- 架橋性アクリルベースの感圧粘着剤の溶液に添加する。分散液の形成を促進する ために、さらなる溶媒を添加し、加熱および撹拌を適用することができる。これ を第二の除去可能な包装上に被覆し、溶媒を蒸発させる。以前に調製したポリエ ステル裏打ち層から包装を除去した後に、それを被覆した第二の除去可能な包装 に積層する。メチルエチルケトンのごとき有機溶媒中のさらなる自己架橋性アク リルベースの感圧粘着剤およびメタクリル酸とジメチルアミノエチルメタクリル 酸とのコポリマーを第三の除去可能な包装上にキャストし、溶媒を蒸発させる。 該第二および第三の包装を除去し、残りの層を積層し、得られた積層をパッチに 切り出して包装した。得られたパッチは、除去可能な放出ライナー、最初はデス メチルセレギリンを含んでいない粘着層、および塩酸塩(または他の塩)としての デスメチルセレギリンを含有するマトリックス層を有するであろう。非浸透性の 裏打り層は、除去可能な放出ライナーに接する粘着層と同様に、中間粘着層を介 してマトリックス層に粘着している。ニューロン変性またはニューロン外傷によ って発生するヒトにおける症状、例えば、パーキンソン病の治療においては、毎 日１のパッチを適用して、遊離塩基としてデスメチルセレギリンを供給する。 Ｄ．経口投与形 デスメチルセレギリンを含有する錠剤およびカプセル剤は、以下の成分 (ｍｇ／単位用量)から調製する： デスメチルセレギリン １-５ マイクロクリスタリン・セルロース ８６ ラクトース ４１.６ クエン酸 ０.５-２ クエン酸ナトリウム ０.１-２ ステアリン酸マグネシウム ０.４ ほぼ１：１の比のクエン酸とクエン酸ナトリウムを混合する

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項 【提出日】１９９７年２月２８日 【補正内容】 請求の範囲 １．治療用途のＳ(＋)-デスメチルセレギリンまたはその医薬上許容される酸 付加塩である化合物。 ２．ニューロン保護(neuroprotection)またはニューロン救済(neuronal rescu e)に使用する請求項１記載の化合物。 ３．免疫系機能を回復または改善するのに使用する請求項１記載の化合物。 ４．セレギリン-応答性の疾病を治療するのに使用する請求項１記載の化合物 。 ５．パーキンソン病、アルツハイマー病またはＡＤＨＤの治療に使用する請求 項１記載の化合物。 ６．ニューロン保護またはニューロン救済に使用する薬剤を製造するための請 求項１規定の化合物の使用。 ７．免疫系機能を回復または改善するのに使用する薬剤を製造するための請求 項１規定の化合物の使用。 ８．セレギリン-応答性の疾病を治療するのに使用する薬剤を製造するための 請求項１規定の化合物の使用。 ９．パーキンソン病、アルツハイマー病またはＡＤＨＤを治療するのに使用す る薬剤を製造するための請求項１規定の化合物の使用。 １０．有効成分、デスメチルセレギリンまたはその医薬上許容される酸付加塩 である化合物を含む非経口薬剤。 １１．全身投与に適した請求項１０記載の薬剤。 １２．非経口、舌下、口内または直腸投与に適した請求項１１記載の薬剤。 １３．デスメチルセレギリンが実質的に純粋なＳ(＋)-エナンチオマーである 請求項１０〜１２いずれかに記載の薬剤。 １４．デスメチルセレギリンが実質的に純粋なＲ(-)-エナンチオマーである請 求項１０〜１２いずれかに記載の薬剤。 １５．化合物が塩酸塩である請求項１４記載の薬剤。 【手続補正書】 【提出日】１９９７年１０月１３日 【補正内容】 補正した請求の範囲 １．有効成分としてＳ(+)エナンチオマー-デスメチルセレギリンまたはその医 薬上許容される酸付加塩を含むニューロン保護またはニューロン救済用の医薬組 成物。 ２．有効成分としてＳ(+)エナンチオマー-デスメチルセレギリンまたはその医 薬上許容される酸付加塩を含む免疫系機能を回復または改善させるための医薬組 成物。 ３．有効成分としてＳ(+)エナンチオマー-デスメチルセレギリンまたはその医 薬上許容される酸付加塩を含むセレギリン-応答性の疾病を治療するための医薬 組成物。 ４．有効成分としてＳ(+)エナンチオマー-デスメチルセレギリンまたはその医 薬上許容される酸付加塩を含むパーキンソン病、アルツハイマー病またはＡＤＨ Ｄを治療するための医薬組成物。 ５．有効成分としてＲ(-)エナンチオマー-デスメチルセレギリンまたはその医 薬上許容される酸付加塩を含むニューロン保護またはニューロン救済用の医薬組 成物。 ６．有効成分としてＲ(-)エナンチオマー-デスメチルセレギリンまたはその医 薬上許容される酸付加塩を含む免疫系機能を回復または改善させるための医薬組 成物。 ７．有効成分としてＲ(-)エナンチオマー-デスメチルセレギリンまたはその医 薬上許容される酸付加塩を含むセレギリン-応答性の疾病を治療するための医薬 組成物。 ８．有効成分としてＲ(-)エナンチオマー-デスメチルセレギリンまたはその医 薬上許容される酸付加塩を含むパーキンソン病、アルツハイマー病またはＡＤＨ Ｄを治療するための医薬組成物。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，Ｕ Ｇ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，Ｂ Ｒ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ， ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，Ｌ Ｕ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ， ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，Ｕ Ｓ，ＵＺ，ＶＮ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．一定周期ベースで投与する１または２以上の単位用量の当該組成物が、該 単位用量を投与した対象における１または２以上のセレギリン-応答性の疾病ま たは症状を治療するに有効なように、１または２以上の任意の医薬上許容される 賦形剤または担体に加えて、一定量のデスメチルセレギリン、エント-デスメチ ルセレギリン、またはそれらの混合物を含んでなる医薬組成物。 ２．経口投与用の請求項１記載の組成物。 ３．経皮投与用の請求項１記載の組成物。 ４．デスメチルセレギリンを実質的に純粋な立体異性体として用いた請求項１ 記載の組成物。 ５．ニューロン救済（neuronal rescue）またはニューロン保護(neuronal pro tection)を行うのに適した請求項１記載の組成物。 ６．対象における免疫系機能を回復するか、または改善するのに適した請求項 １記載の組成物。 ７．セレギリン-応答性の疾病または症状を患う対象に、セレギリン-様治療効 果を生ずるのに十分な量のデスメチルセレギリン、エント-デスメチルセレギリ ン、またはその混合物を投与することを特徴とする、該対象おいてセレギリン- 様治療効果を得るための改良された方法。 ８．対象がヒトである請求項７記載の方法。 ９．ＡＤＨＤの治療において、エント-デスメチルセレギリンを実質的に純粋 な立体異性体として用いる請求項８記載の方法。 １０．セレギリン-様治療効果がニューロン救済またはニューロン保護である 請求項７記載の方法。 １１．セレギリン-様治療効果が免疫系機能の改善または回復である請求項７ 記載の方法。 １２．哺乳動物体重ｋｇ当たり、遊離第二級アミンに基づいて計算して少なく とも約０．００１５ｍｇの単一または複数の投与量様式で投与する日用量のデス メチルセレギリンまたはエント-デスメチルセレギリン、またはそれらの医薬上 許容される酸付加塩を哺乳動物に投与することを特徴とする、ニューロン変性ま たはニューロン外傷によって発生する哺乳動物における症状を治療する方法。 １３．胃腸吸収に依存しない少なくとも１の投与経路を含む請求項１２記載の 方法。 １４．デスメチルセレギリンのＲ-(-)エナンチオマーを、遊離塩基として経皮 投与する請求項１２記載の方法。 １５．該Ｒ-(-)エナンチオマーを、医薬上許容される酸付加塩として非経口投 与する請求項１２記載の方法。 １６．医薬上許容される酸付加塩が塩酸塩である請求項１５記載の方法。 １７．単一または複数投与量様式で投与する日用量が、哺乳動物の体重ｋｇ当 たり、遊離第二級アミンに基づいて計算して約０.０１〜約０.５ｍｇである請求 項１２記載の方法。 １８．哺乳動物がヒトである請求項１２記載の方法。 １９．哺乳動物がイヌである請求項１２記載の方法。 ２０．哺乳動物がネコである請求項１２記載の方法。 ２１．哺乳動物の体重ｋｇ当たり、少なくとも約０.００１５ｍｇの遊離第二 級アミンの日経皮用量を供給するに十分な量のデスメチルセレギリン、エント- デスメチルセレギリンまたはそれらの医薬上許容される酸付加塩を少なくとも１ の層に含有する積層コンポジットを含む、ニューロン変性またはニューロン外傷 によって発生する哺乳動物における症状の治療に使用する経皮デリバリー組成物 。 ２２．哺乳動物体重ｋｇ当たり、遊離第二級アミンに基づいて計算して少なく とも約０.００１５ｍｇの単一または複数の投与量様式で投与する日用量のデス メチルセレギリンまたはエント-デスメチルセレギリン、またはそれらの医薬上 許容される酸付加塩を哺乳動物に投与することを特徴とする、免疫系不全によっ て発生する哺乳動物における症状を治療する方法。