JPH10512570A

JPH10512570A - コンホメーション的に制限された逆ターンライブラリおよびそれらに関連する方法

Info

Publication number: JPH10512570A
Application number: JP8522413A
Authority: JP
Inventors: カーン，マイケル
Original assignee: モレキュメティックスリミテッド
Priority date: 1995-01-20
Filing date: 1996-01-19
Publication date: 1998-12-02
Also published as: CA2210349A1; EP0804460A1; AU4761996A; WO1996022304A1

Abstract

(57)【要約】コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物のライブラリ、およびこれらを構築する方法が開示される。この逆ターン擬態物は、直線状ペプチドの生物学的に活性なコンホメーションを擬態する、β-ターン、γ-ターン、およびβ-膨張擬態物を含む。好ましい実施態様において、直線状ペプチドのアミノ酸配列に基づいて鋳型ライブラリが構築され、そして、それらは種々の環サイズを有する複数のβ-ターン、γ-ターン、およびβ-膨張擬態物を含む。次いで、鋳型ライブラリを適切なアッセイにおいてスクリーニングし、生物学的に活性な鋳型ライブラリのメンバーを同定する。次いで、生物学的に活性な鋳型のメンバーの構造に基づいて、最適化されたライブラリを構築する。これは、それらのアミノ酸配列の置換物を含む。この最適化されたライブラリを同様にスクリーニングし、生物学的に活性な逆ターン擬態物を同定する。目的の生物学的標的と相互作用するライブラリのメンバーの同定に関連する方法、ならびにこのようなメンバーの診断剤、予防剤および/または治療剤としての使用もまた開示される。

Description

【発明の詳細な説明】コンホメーション的に制限された逆ターンライブラリおよびそれらに関連する方法関連出願本出願は、1994年３月15日に出願された、米国特許出願第08/213,124号の一部継続出願であり；そして、1994年５月２日に出願された米国特許出願第08/236,6 74号の一部継続出願であり、それは1992年８月６日に出願された同第07/926,350 号の継続出願であり、それは1991年２月７日に出願された米国特許出願第07/651 ,800号の一部継続出願である。技術分野本発明は、一般に、コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物のライブラリ、目的の生物学的標的と相互作用するライブラリのメンバーの同定に関連する方法、ならびにこのようなメンバーの診断剤、予防剤および/または治療剤としての使用に関する。発明の背景治療剤として可能な活性についての分子のランダムスクリーニングが何年にもわたって行われ、そして結果として多くの重要な薬物の発見がなされた。分子生物学およびコンピューターケミストリーの進歩は、いわゆる「合理的な薬物設計」に、増加された興味をもたらしたが、このような技術は、最初に予想されたような迅速または信頼し得るものではないということが明らかになった。従って、近年、ランダムな薬物スクリーニングに対し、新たな興味および回帰が起こっている。この目的のために、組み合わせの化学ライブラリ、および生物学的に活性なメンバーの探索におけるこのようなライブラリのスクリーニングの発展に基づく新たな技術において、特定の進歩（stride）がなされてきた。一般に、組み合わせの化学ライブラリは単に、分子の収集である。このようなライブラリは、ライブラリ内の化学種、ならびにライブラリのメンバーの産生、およびどのメンバーが目的の生物学的標的と相互作用するかの同定の両方に使用される方法によって変化する。この分野はまだ新しいが、ライブラリを産生およびスクリーニングする方法は、既にきわめて多様で高度になっている。例えば、種々の組み合わせの化学ライブラリにおける最近の概説は、多くのこのような技術を同定し、標識化および未標識化ライブラリメンバーの両方の使用を包含する（Janda、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91:10779-10785、1994）。現在まで、組み合わせの化学ライブラリは、一般的にペプチドまたはヌクレオチド起源のメンバーに限られていた。この目的のために、Houghtenらの技術は、分割（split）合成技術を介して可溶性組み合わせペプチドライブラリを組み立てる（assemble）いわゆる「二元性で定義された反復（dual-defined iterative ）」方法の１例を例示する（Nature(London)354:84-86、1991；Biotechniques13 ：412-421、1992；Bioorg.Med.Chem.Lett.3:405-412、1993）。この技術により、数千万のメンバーを含む可溶性ペプチドライブラリが得られている。このようなライブラリは、オピオイドペプチド（例えば、メチオニンおよびロイシンエンケファリン（DooleyおよびHoughton、Life Sci.52、1509-1517、1993）の同定に効果的であることが示され、そして、N-アシル化ペプチドライブラリは、有効なオピオイドアンタゴニストであるアセタリンを同定するのに使用されてきた（Do oleyら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：10811-10815、1993）。より最近では、全てのD-アミノ酸オピオイドペプチドライブラリが構築され、そしてミュー(「μ 」)オピオイドレセプターに対する鎮痛薬（analgesic）活性がスクリーニングされた（Dooleyら、Science 266：2019-2022、1994）。ペプチドのメンバーおよびヌクレオチドの起源を含む組み合わせのライブラリは重要な有用性を有するが、異なる起源のメンバーを含むライブラリが当該技術でまだ必要とされている。例えば、大部分の従来のペプチドライブラリは、単にアミノ酸配列を改変してライブラリのメンバーを産生するだけであり、そして、このようなペプチドメンバーに、制限された二次構造を与えない。ペプチドの二次構造が生物学的活性に重要であることは、よく理解されている。従って、当該分野において、生物学的活性ペプチドの実際の構造を擬態するメンバーを含むライブラリが必要とされる。また、当該分野において、このようなライブラリを産生する方法ならびに目的の標的（特に生物学的標的）に対するライブラリメンバーをスクリーニングして、生物学的活性なライブラリメンバーを同定する技術が必要とされる。本発明はこれらの必要性を満たし、そしてさらに関連する利点を提供する。発明の要旨簡潔に述べると、本発明は、コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物のライブラリおよびそれらの産生に関連する方法に関する。本発明はさらに、目的の生物学的標的と相互作用するライブラリメンバーのスクリーニングおよび同定に関連する方法、ならびにこのような同定されたメンバーの診断剤、予防剤および/または治療剤としての使用に関する。本発明の１つの実施態様では、メンバーとして複数のコンホメーション的に制限された逆ターン擬態物を含むライブラリが開示され、その構造は、以下の詳細な説明において、より詳細にわたって記載される。関連する局面では、生物学的活性な試薬を同定する方法が開示され、適切なアッセイにおいて上記のライブラリメンバーをスクリーニングする工程、およびそれにより生物学的活性なライブラリメンバーを同定する工程を包含する。さらなる実施態様では、既知のアミノ酸配列を有する直線状ペプチドの生物学的活性なコンホメーションを擬態する、生物学的活性なコンホメーション的に制限された逆ターン擬態物を同定する方法を開示する。この方法において、コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物は、直線状ペプチドの既知のアミノ酸配列に基づいて構築され、多数の環サイズを有しコンホメーション的に制限されたβ-ターン、γ-ターン、およびβ-膨張（bulge）擬態物から選択される複数のメンバーを含む鋳型ライブラリを産生する。次いで、鋳型ライブラリの生物学的に活性なメンバーを同定するために、鋳型ライブラリのメンバーを適切なアッセイにおいてスクリーニングする。次いで、コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物を、鋳型ライブラリの生物学的に活性なメンバーに基づいて構築し、生物学的に活性な直線状ペプチドの既知のアミノ酸配列に基づく種々のアミノ酸置換物を有する複数のメンバーを含む、最適化されたライブラリを産生する。最後に、最適化されたライブラリのメンバーを適切なアッセイにおいてスクリーニングし、最適化されたライブラリの生物学的に活性なメンバーを同定する。さらなる実施態様では、診断剤、予防剤および/または治療剤として有用な、コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物が開示される。このような擬態物の構造、およびこれらの合成方法は、以下の詳細な説明において、より詳しく開示される。本発明の別の局面は、以下の詳細な説明を参照することにより明らかになる。図面の簡単な説明図1A〜1Bは、12員環および14員環を有する、コンホメーション的に制限された β-ターン擬態物の代表的な合成を例示する。図2A〜2Cは、10員環を有するコンホメーション的に制限されたβ-ターン擬態物および７員環を有するγ-ターン擬態物の代表的な合成を示す。発明の詳細な説明本発明は、一般的に、天然に存在するペプチドまたは合成ペプチドの、コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物（本明細書中では、「逆ターン擬態物」または「擬態物」と呼ぶ）を含むライブラリに関し、そして、それらは診断剤、予防剤および/または治療剤のような生物活性薬の同定において有用である。本発明の実施において、ライブラリは、数十〜数百、さらに数百万までの個々の逆ターン擬態物（本明細書中では、「メンバー」とも呼ぶ）を含み得る。一旦集められると、本発明のライブラリは、生物活性を有する個々のメンバーを同定するためにスクリーニングされ得る。生物活性メンバーについてのライブラリのこのようなスクリーニングは、例えば、ライブラリのメンバーの結合活性を評価する工程、またはライブラリメンバーが機能アッセイに与える影響を評価する工程を包含し得る。スクリーニングは通常、ライブラリのメンバー（またはライブラリのメンバーのサブセット（subset））を目的の標的（例えば、抗体、酵素、レセプターまたは細胞株）と接触させることにより達成される。目的の標的と相互作用し得るライブラリのメンバーは、本明細書中で「生物活性ライブラリメンバー」または「生物活性擬態物」と呼ばれる。例えば、生物活性擬態物は、抗体またはレセプターに結合し得、酵素を阻害し得、あるいは関連する機能応答を誘発またはアンタゴナイズし得るライブラリメンバー（例えば、細胞株）であり得る。言い換えれば、本発明のライブラリのスクリーニングは、ライブラリメンバーが、１つまたはそれ以上の目的とする生物学的標的と相互作用し得るかどうかを決定する。さらに、相互作用が起こる場合、生物活性擬態物（または擬態物）は、次いでライブラリメンバーから同定され得る。ライブラリからの単一の（または限られた数の）生物活性擬態物（１つまたは複数）の同定は、それ自身で生物学的に活性であり、従って診断剤、予防剤または治療剤として有用であり、そして、さらにこれらの分野でもたらされた化合物の同定を顕著に進めるため使用され得る、逆ターン擬態物を産生する。ライブラリから生物活性擬態物を同定するのに使用される工程は、主に、ライブラリが空間的にアドレス可能（addressable）であるか、または非空間的にアドレス可能であるかに依存する。いずれのライブラリの型も、本発明の実施を可能にするが、空間的にアドレス可能なライブラリが好ましい。空間的にアドレス可能なライブラリにおいて、アッセイが行われる各反応容器は、単一の擬態物または少数の擬態物を含有する。したがって、空間的にアドレス可能なライブラリにおいて、生物活性な擬態物がスクリーニングアッセイで同定される場合、その同一性が明確に分かり、または限られた数の擬態物からなることが分かる。通常、空間的にアドレス可能なライブラリのサイズは、必要とされる空間的な分解の程度により限定される。しかし、空間的にアドレス可能なライブラリ内の比較的多数のメンバーを可能にする顕著な進歩が、最近なされた。例えば、光リソグラフ技術は現在、小さい領域（例えば、1.5cm²のチップ）における比較的多数のメンバー（64,000のオーダー）の空間的な分解を可能にする（Fodorら、Science 2 51：717-723、1991；Choら、Science 261：1303-1305、1993）（その両方は、本明細書中で参考として援用される）。このような技術は当業者に公知であり、そして、Janda，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：10779-10785、1993（本明細書中で参考として援用される）に要約される。大きく、空間的にアドレス可能なライブラリもまた、例えばHoughtenら（Nature 354：84-86、1991）（本明細書中で参考として援用される）によって開示されるように、反復アプローチを使用して構築され得る。あるいは、非空間的にアドレス可能なライブラリは、Ohlemeyerら（Proc.Natl .Acad.Sci.USA 90：10922-10926、1993）およびBrennerら（Proc.Natl.Acad.Sci .USA 89：5181-5183、1992）（これらの両方は、本明細書中で参考として援用される）によって開示されるような、コードされたライブラリを構築することにより作製され得る。簡潔に言えば、非空間的にアドレス可能なライブラリは、合成においてポリマービーズに結合した微少量の産物を直接配列決定する能力を必要とする。これは、ペプチド配列決定について５〜10ピコモルの範囲で、容易に達成し得る。あるいは、配列決定不可能な多数のものは、直接配列決定され得またはPCRされそして配列決定され得るコード配列決定可能なパートナー（例えば、ペプチドまたはオリゴヌクレオチド）を用いて共合成（cosynthesize）され得る。マススペクトル分析を使用して配列決定され得る、小さい配列決定可能なコード鎖が作製され得る（例えば、Ohlemeyerら、Nikolaievら、Peptide Res．6：16 1-170、1993）（本明細書中で参考として援用される）。本発明の１つの局面において、ライブラリメンバーを合成する方法が開示される。上記のように、本発明の擬態物は、コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物を包含し、そしてより詳細には、β-ターン、γ-ターン、およびβ-膨張の擬態物を含む、関連する構造の化合物を包含する。一般に、β-ターンは、アミノ酸ｎのCO基の酸素がアミノ酸n+3のNH基の水素に水素結合している場合のポリペプチド鎖の方向の反転である。同様に、γ-ターンおよびβ-膨張は、アミノ酸nのCO基の酸素がアミノ酸n+2およびアミノ酸n+4のNH基の水素にそれぞれ水素結合している場合のポリペプチド鎖の反転である。本発明のコンホメーション的に制限された逆ターン擬態物は、β-ターン、γ-ターン、およびβ-膨張の三次元構造を「擬態」し、従って、天然に存在するタンパク質および/またはペプチドに存在するこのような逆ターン構造の代理物として作用する。より詳細には、本発明のコンホメーション的に制限されたβ-ターン擬態物は、以下の構造ＩまたはIIを有する：ここで、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、およびＲ⁴はアミノ酸側鎖部位またはそれらの誘導体であり、Ｘは表１で同定される化学的部位から選択され、Ｙは-CH₂-、-N(Z)-、-O- 、および-S-から選択され、そしてＺは-Hまたは-CH₃である。本発明のコンホメーション的に制限されたγ-ターン擬態物は、以下の構造III またはIVを有する：ここで、Ｒ¹、Ｒ²、およびＲ⁴はアミノ酸側鎖部位またはそれらの誘導体であり、Ｘは表１で同定される化学的部位から選択され、Ｙは-CH₂-、-N(Z)-、-O-、および-S-から選択され、そしてＺは-Hまたは-CH₃である。本発明のコンホメーション的に制限されたβ-膨張擬態物は、以下の構造ＶまたはVIを有する：ここで、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ^3'、およびＲ⁴はアミノ酸側鎖部位またはそれらの誘導体であり、Ｘは表１で同定される化学的部位から選択され、Ｙは-CH₂-、-N(Z) -、-O-、および-S-から選択され、そしてＺは-Hまたは-CH₃である。それらの誘導体）が、このページの面の上または下に位置し得ることを示している。天然に存在するアミノ酸（すなわち、「L-アミノ酸」）の場合は、Ｒアミノ酸側鎖部位は、上記のＩ〜VIの構造で、ページの面の下に位置する（すなわち、対応するＲアミノ酸側鎖部位は、上記の構造で、ページの面の上に位置する（す子の残りを示す。言い換えれば、さらなる化学的部位は、上記の構造Ｉ〜VIの末端カルボニル基およびアミン基に共有結合している。本発明のこの局面は、以下において、より詳細に記載される。さらに、構造Ｉ〜VIを有するアミノ酸側鎖部位Ｒ¹を有する炭素原子のすぐ隣りのキラル炭素が、α-位置またはβ-位置のいずれかに存在し得ることは理解されるべきである。言い換えれば、この炭素原子は、以下の構造のいずれかを有し得る：本明細書中で使用される、用語「アミノ酸側鎖部位」は、天然に存在するタンパク質中に存在するアミノ酸側鎖部位のいずれかを表し、表２に同定される天然に存在するアミノ酸側鎖部位（しかしこれらに限定されない）を包含する。本発明の他の天然に存在するアミノ酸側鎖部位には、3,5-ジブロモチロシン、3,5-ジヨードチロシン、ヒドロキシリジン、γ-カルボキシグルタミン酸塩（エステル）、ホスホチロシン、およびホスホセリンの側鎖部位（しかしこれらに限定されない）が挙げられる。さらに、グリコシル化アミノ酸側鎖もまた、本発明の実施に使用され得、これにはグリコシル化トレオニン、グリコシル化セリン、およびグリコシル化アスパラギン（しかしこれらに限定されない）が挙げられる。構造Ｉ〜VIのアミノ酸側鎖部位がプロリンである場合、ピロリジン５員環は、コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物の１成分であり得る。言い換えれば、プロリンは、１つまたはそれ以上の「-NH-CH(R)-」部位の代わりに、コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物内の任意の位置に存在し得る。例えば、上記の構造Ｉ〜VI中の「-Y-CH(R²)-」位置（Y=Nである場合）にプロリンを含むことで、以下の構造I(a)〜VI(a)を生成する：ここで、Ｒ¹、Ｒ³、Ｒ^3'、Ｒ⁴、Ｘ、およびＺは、構造Ｉ〜VIに関連して、上記で同定した通りである。あるいは、構造ＩおよびIIは、プロリンをコンホメーション的に制限された逆ターン擬態物内の「-NH-CH(R³)」位置に含むことで修飾され得、以下の構造I(b) およびII(b)を生成する：同様に、構造ＶおよびVIは、プロリンをコンホメーション的に制限された逆ターン擬態物内の「-NH-CH(R³)」位置または「-NH-CH(R³')」位置に含むことで修飾され得、以下の構造V(b)、VI(b)、V(c)、およびVI(c)を生成する：ここで、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ^3'、Ｒ⁴、Ｘ、Ｙ、およびＺは、構造Ｉ〜VIに関連して上記で同定した通りである。従って、上記の一般的な構造Ｉ〜VIは、構造I(a)、II(a)、III(a)、IV(a)、V( a)、VI(a)、I(b)、II(b)、V(b)、VI(b)、V(c)、およびVI(c)を代表例として包含し、ここで、アミノ酸側鎖部位は、プロリン（またはその誘導体）である。本発明のコンホメーション的に制限された逆ターン擬態物は、適切な出発成分分子（本明細書中の以下で「構成部分」と呼ぶ）を使用して生成される。簡潔に言えば、第１、第２、および第３の構成部分を結合させ（種々の組み合わせで）、次いで環化して、本発明のコンホメーション的に制限された逆ターン擬態物を得る。本発明の文脈において、「第１の構成部分」は、以下の構造１を有する：ここで、Ｒ⁴はアミノ酸側鎖部位またはそれらの誘導体であり、Ｘは表１で同定された化学的部位から選択され、そしてＰはペプチド合成における使用に適切な保護基である。本発明の「第２の構成部分」は、以下の構造2(a)、2(b)、および2(c)より選択される：ここで、Ｒ³は、アミノ酸側鎖部位またはそれらの誘導体であり、Ｗは-H、-OHアルキル、アリール、-O-アルキル、-O-アリール、-S-アルキル、または-S-アリールであり、そしてＰはペプチド合成における使用に適切な保護基である。本発明の「第３の構成部分」は、以下の構造3(a)、3(b)、および3(c)から選択される：ここで、Ｒ¹およびＲ²は、アミノ酸側鎖部位またはそれらの誘導体であり、Ｙは -CH2-、-NZ-、-O-または-S-であり、ＺはＨまたはメチルであり、Ｗは-H、-OH、アルキル、アリール、-O-アルキル、-O-アリール、-S-アルキル、または-S-アリールであり、そしてＰはペプチド合成における使用に適切な保護基である。従って、構造3(a)のＹが-CH2-、-NZ-、-O-、または-S-である場合、以下の第３のモジュール構成部分3(a1)、3(a2)、3(a3)、および3(a4)がそれぞれ得られる：より詳細には、本発明のコンホメーション的に制限されたβ-ターン擬態物（上記の構造ＩおよびIIを参照のこと）は、第１の構成部分を第２の構成部分と反応させて、結合した第１-第２中間体を生成し、次いでこの第１-第２中間体を第３の構成部分と反応させて、結合した第１-第２-第３中間体を生成し、そして、次いで得られた第１-第２-第３中間体を環化して、コンホメーション的に制限されたβ-ターン擬態物を得ることにより、合成する。コンホメーション的に制限されたγ-ターン擬態物（上記の構造IIIおよびIVを参照のこと）は、第２の構成部分を省略すること以外は、同様の方法（すなわち、第１-第３中間体を環化する）で合成する。同様に、コンホメーション的に制限されたβ-膨張（上記の構造ＶおよびVIを参照のこと）は、２つの第２の構成部分を使用して合成する（すなわち、第１-第２-第２-第３中間体を環化する）。例えば、以下の構造４を有するコンホメーション的に制限されたβ-ターン擬態物の一般的な合成は、以下の技術により行われ得る。第１のモジュール構成部分１を、第２のモジュール構成部分2(a)と結合させ、以下に例示する第１-第２中間体５を生成する（以下の反応スキームは、例示の目的で示され、そして、構造１のカルボン酸部位は、例えばエステル化によって、アミド結合の形成によって、または固体支持体への付着によって、適切に保護されるべきであることを理解するべきである）：次いで、第３のモジュール構成部分3(a1)を第１-第２中間体５と結合させて、プレ環化β-ターン擬態物６を得、これを順番に環化して、構造４のβ-ターン擬態物を生成する：本発明のコンホメーション的に制限された逆ターン擬態物の全ては、上記に概略を述べた一般的な方法によって、種々の構成部分を適切に選択することによって合成され得る。例えば、構造Ｉ〜VIのＲ基の改変体は、所望のＲ基を有する適切な第１、第２、および第３の構成部分を使用して作成し得る。同様に、コンホメーション的に制限されたγ-ターン擬態物は、第１の構成部分と第３の構成部分を結合し、（第２の構成部分を省略する）、次いで環化して合成され得る。あるいは、第１の構成部分は第２の構成部分と結合され得、次いでさらに別の第２の構成部分と結合させて、第１-第２-第２中間体を得る。次いで、この中間体は第３の構成部分と結合し得、そして環化して対応するコンホメーション的に制限されたβ-膨張擬態物を得る。本発明のコンホメーション的に制限された逆ターン擬態物の合成に関するさらなる開示は、以下の実施例１〜３に記載される。本発明のライブラリのペプチド擬態物の合成は、本発明の第１、第２、および第３の構成部分を組み合わせて、公知のペプチド合成技術を使用することで達成され得る。より詳細には、任意のアミノ酸配列が、コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物のN-末端および/またはC-末端に付加され得る。この目的のために、擬態物は固体支持体（例えば、PAM樹脂）上で、公知の技術を用いて合成され得る（例えば、John M．StewartおよびJanis D．Young、Solid Phase Pep tide Synthesis、1984、Pierce Chemical Comp.、Rockford、Illinoisを参照のこと）。さらに、液相合成技術および固相合成技術の両方の組み合わせは、本発明のペプチド擬態物を合成するのに使用され得る。例えば、固体支持体は、コンホメーション的に制限された逆ターンが配列に付加される時点まで、直線状ペプチド配列を合成するのに使用され得る。以前に液相合成技術により合成された、適切なコンホメーション的に制限された逆ターン擬態物は、次いで、次の「アミノ酸」として、固相合成に添加され得る（すなわち、N-末端およびC-末端の両方を有するコンホメーション的に制限された逆ターン擬態物が、直線状ペプチドに付加されるべき次のアミノ酸として使用され得る）。コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物の配列への組み込みの際に、次いでさらなるアミノ酸が添加され得、固体支持体に結合したペプチドワクチンを完結する。あるいは、N-末端およびC-末端を保護された直線状ペプチド配列は、固体支持体上で合成され得、支持体から除去され得、次いで、溶液中で公知の溶液結合技術を用いて、コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物に結合され得る。本発明の別の局面では、ライブラリを構築する方法が開示される。従来的な組み合わせの化学技術（例えば、Gallopら、J.Med.Chem.37：1233-1251、1994を参照）は、試薬の連続的な基礎となる分子足場（scaffold）への結合により多数の化合物を迅速に調製することを可能にする。結合技術は、天然に存在するアミノ酸から誘導されるペプチドライブラリを構築するのに使用される。例えば、20の適切に保護されかつ異なるアミノ酸の20の混合物をとり、それぞれを20のアミノ酸の１つと反応させることにより、400（すなわち、20²）ジペプチドのライブラリが産生される。この方法を７回繰り返すことにより、約260億（すなわち、20⁸ ）のオクタペプチドからなるペプチドライブラリの調製物を得る。上記のペプチドライブラリは、天然に存在するアミノ酸から誘導される従来的な組み合わせライブラリを生じる。従来的な組み合わせライブラリは、その構成物が結合する部分の配列のみが異なるメンバーからなる。例えば、オクタペプチドのライブラリは、ABCDEFGH、ACBDEFGH、ABDCEFGHなどを含むメンバーからなる（ここで、Ａ〜Ｈは、アミノ酸を表す）。本発明の実施において、ライブラリはコンホメーション的に制限された逆ターン擬態物からなる。すなわち、任意の所定のペプチド配列について、多数の逆ターンが可能である。従って、本発明のライブラリは顕著に大きくなり得、そして、直線状ペプチドの配列の変形のみによって構築されるライブラリよりも多様である。このような逆ターン擬態ライブラリは、固定した配列を提供するだけでなく、それぞれの固定した配列において、種々の固定したコンホメーションの擬態物のファミリーを提供する。この点を例示するために、ペプチドABCDEFGHについての逆ターン擬態物の代表的なライブラリを、以下にスキーム的に示す。上記のライブラリは、一般的には５のβ-ターン擬態物、６のγ-ターン擬態物、および４のβ-膨張擬態物を含む。さらに、上記の各々について、さらなる逆ターン擬態物が構築され得る。上記のように、逆ターン擬態物のコンホメーションは、第１の構成部分と第３の構成部分を、第１の構成部分の結合基Ｘを介して、第３の構成部分のアゼチジノン基のカルボニルと共有結合させて環化することにより制限する（実施例３を参照のこと）。第１および第３の構成部分の間のさらなる構成部分の存在は、逆ターン擬態物の性質を決定する：第１-第２-第３、第１-第３、および第１-第２-第２-第３成分切片の環化がβ-ターン、γ-ターン、およびβ-膨張擬態物をそれぞれ生じる。従って、所定の配列に対し可能な多くの逆ターンに加え、結合基Ｘ（表１を参照のこと）の変形は、擬態物ライブラリのより大きい多様性を供給する。従って、本発明のライブラリは、存在する直線状ペプチドの組み合わせライブラリと異なる。例えば、ほとんどのヘキサペプチドライブラリ（すなわち、ABCD EF）において、各位置はランダム化されて、10⁶〜10⁷のメンバーのライブラリを提供する（すなわち、A(20)B(20)C(20)D(20)E(20)F(20)=6.4×10⁷メンバー）。概念的には、逆ターン擬態物についてのこのタイプのライブラリを生成することは可能であるが、実際にはこれはいくつかの理由により魅力的なものではない。第１に、逆ターンライブラリは、多くの可能なリンカー基Ｘのために必然的に大きく、それゆえ、ライブラリ中に少量の任意の１成分が存在し、従って任意の単一な成分が検出されにくくなる（Medynski．Biotechnology 12：709-710、1994 ）。第２に、多数の非天然構成ブロックは、最初に合成される必要がある。第３に、本発明のライブラリは、直接配列決定するのに適切ではない。直線状ペプチドライブラリは、ペプチドミクロ配列決定技術を用いて配列決定され得、これはピコモルレベルほどしかない材料に対する配列情報を提供し得る（例えば、Lam ら、Nature 354：82-84、1991を参照）。しかし、この技術を行うためには、ペプチド中の個々のアミノ酸が切断されなければならない。本発明の逆ターン擬態物は、コンホメーション的に制限された環においてこの能力を有さない。従って、この型の配列決定を不可能にする。従って、本発明の実施において、ライブラリは、起点としての既知の直線状ペプチド配列に基づく。ペプチド配列は、天然に存在するペプチドまたはプロテインから誘導し得、あるいは、合成ペプチドまたはファージディスプレイのような生体高分子ライブラリを介して生成し得る。一旦ペプチド配列が選択されると、本発明のライブラリは、２つの段階において好適に構築され得る：（１）最適な鋳型の決定、および（２）選択した鋳型の側鎖の相互作用の最適化。これらの段階の両方は、以下に議論するように、目的とする特定の生物学的標的を有する、個々のライブラリのメンバーの相互作用の評価を包含する。最適な鋳型の決定は、選択された特定の配列についての種々の可能な逆ターンの評価を必要とする。言い換えれば、第１の段階は、配列情報を例示するための、擬態物の形態の探索である。実施例の方法により、目的のペプチドとしての配列ABCDEFのヘキサペプチドを仮定して、以下に示すタイプのライブラリが最初に構築される。上記の式は、主要な配列ABCDEFに基づく、異なるサイズおよびコンホメーションを有する、β-ターン、γ-ターン、およびβ-膨張ターン擬態物の重なり合う（n ested）配置を表す。上記のライブラリは、各ターン物が異なるリンカー基Ｘを有する、３つのβ-ターンからなる。例えば、３つの異なるリンカー基が使用される場合、10-、12-、および14-員環を含むβ-ターン擬態物が調製され得る（実施例３を参照のこと）。同様に、上記のライブラリはまた、４つのγ-ターン擬態物からなり、そしてＸの適切な選択により、7-、9-、および11-員環を有する γ-ターン擬態物が調製され得る。上記のライブラリは、さらに、２つのβ-膨張擬態物からなり、３つの異なるＸリンカー基を使用することにより、13-、15-、および17-員環を含むβ-膨張擬態物を生成する。このように構築された上記のライブラリについて、最適な鋳型の選択は、適切なアッセイにおいてライブラリメンバーを目的の標的に接触させることにより行われる。例えば、最適な鋳型（正の相互作用またはアッセイの「ヒット（hit）」により決定される）は、以下に示すような12-員環を含むβ-ターンであり得る。一旦最適な鋳型が選択されると、次いで、鋳型の側鎖が最適化される。側鎖の最適化の工程において、鋳型は維持され、そして種々の残基（Ａ〜Ｆ）がランダム化される。ランダム化は、他の側鎖（他のアミノ酸から誘導される構成成分）が置換される、さらなる化合物の合成を包含する。ターン残基（Ｃ〜Ｆ）および隣接する残基（Ａ〜Ｂ）の両方もランダム化され得る。ランダム化は単一のスクリーニングで行われてもよいし、あるいは、ランダム化は２回またはそれ以上の回数のスクリーニングに分けられてもよい。鋳型選択において、最適な側鎖の決定は、適切なアッセイを用いるスクリーニングにより達成される。スクリーニングアッセイの結果は、以下に示す配列を有する12員環を含むβ-ターンを提供し得る。上記の方法によるライブラリの調製は、実施例４に記載される。本発明のさらなる局面では、ライブラリの生物活性についてのスクリーニング方法、および生物活性なライブラリのメンバーを単離する方法が開示される。本発明のライブラリは、種々の技術および方法を用いて、生物活性についてスクリーニングされ得る。一般には、スクリーニングアッセイは、次により行われ得る（１）ライブラリを、レセプターのような目的の生物学的標的と接触させ、ライブラリの擬態物と標的との間に結合を生じさせる工程、ならびに（２）適切なアッセイ（例えば、Lamら（Nature 354：82-84、1991）またはGriminskiら（Biote chnology、12：1008-1011、1994）（これらの両方は本明細書中で参考として援用される）により開示された、比色定量アッセイ）により、生じた結合事象を検出する工程。好ましい実施態様では、ライブラリメンバーは溶液中に存在し、そして、標的は固相に固定される。あるいは、ライブラリは固相に固定され得、そして溶液中の標的と接触させることにより、探針（probe）され得る。上記のように、本発明のライブラリが空間的にアドレス可能であり、そして、正の相互作用「ヒット(hit)」が達成される場合、この生物活性な擬態物の構造がわかるか、または限られた数の構造からなることがわかる。本発明の非空間的にアドレス可能なライブラリの場合、スクリーニング生物アッセイの特定の実施態様に依存して、スクリーニングアッセイにおいて生物活性を認識することを促進し、そしてまた擬態物の単離および同定を可能にするための、特定の性質および特性が逆ターン擬態物に付与（imposed）され得る。例えば、レセプターが結合した生物活性擬態物は、固相固定化リガンド結合性タンパク質（例えば、磁性ビーズに固定化したアビジン）との結合相互作用を介して回収され得る。このようなスクリーニングアッセイにおいて、レセプターが結合した擬態物の固定化リガンド結合性タンパク質への結合を行うために、擬態物は適切なリガンドを有する必要がある。上記の例においては、タンパク質を結合している固定化リガンドがアビジンである場合、擬態物リガンドは、好ましくはビオチンである。上記の例において、一旦レセプターに結合している擬態物のビオチンが、磁性ビーズ上に固定化されたアビジンに結合すると、生物活性な擬態物は、磁場を加えることにより、容易に固定化レセプターから除去され得る。例えば、磁性ビーズの磁石との接触は、擬態物をレセプターから分離するのに効果的である。生物活性な擬態物を同定するために、次いで、擬態物を磁性固相から（例えば切断によって）離す。擬態物の磁性ビーズからの切断は、化学的手段または酵素的手段のいずれかを介して行われ得る。いずれの場合においても、擬態物は切断可能な適切な結合を有するべきである。好ましい実施態様では、擬態物を酵素的手段により磁性ビーズから切断し、そして、切断可能な結合は、酵素切断を受けやすいペプチド配列である。例えば、酵素トロンビンは、配列GRG（グリシン-アルギニン-グリシン）を効果的に切断する。従って、切断可能な結合GRGを有する擬態物が結合した磁性ビーズのトロンビン処理は、GRG配列の切断および生物活性な擬態物の遊離をもたらす。切断可能なリンカーについてのさらなるストラテジーは、Patekら、Int.J.Peptide Protein Res.42：97-117、1993（本明細書中で参考として援用される）に開示される。本発明のコンホメーション的に制限された逆ターン擬態物は、このように切断可能なリンカーを組み入れ得、擬態物の同定の前の擬態物スクリーニングフォーマットからの生物活性な擬態物の遊離を促進する。好ましいリンカーは、タンパク質加水分解を起こし得るか、またはタンパク質加水分解を起こす傾向があるアミノ酸配列である。本発明の切断可能なリンカーは、好ましくは、コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物と、リガンド（例えば、ビオチンまたはトリプシン様セリンプロテアーゼ第Ｘ因予）との間に位置する。本発明のさらなる切断可能なリンカーは、アスパラギンプロテアーゼカテプシンＤに対する認識部位（すなわち、切断部位）を含む。本発明の他の切断可能な結合には、カテプシンＢまたはカテプシンＥによって切断可能なアミノ酸配列（しかしこれらに限定されない）が挙げられる。カテプシンＢは、Ｐ₂およびＰ₃位置の塩基性アミノ酸（例えば、アルギニンまたはリジン）、Ｐ₁の小さい疎水性部位、ならびにＰ₁'およびＰ₄の芳香族疎水性部位を有する配列を切断する、システインプロテイナーゼである（Matsuedaら、The Chemical Society of Japan- Chemistry Letters 1857-1860頁 1988；Matsunagaら、FEBS 324：325-330、1993 ）。同様に、カテプシンＥは、Ｂ細胞およびＴ細胞の両方の中に存在するエンドソームのアスパラギンプロテイナーゼであるが、腹膜マクロファージ中には存在しない。この酵素の活性な切断（cleft）は、Ｐ₁-Ｐ₁’部位を占める疎水性残基の間に切断を起こさせる明確な選択性（preference）により、９つもの残基を調節し得る。（例えば、Bennettら、Eur.J.Immunol.22：1519-1524、1992）従って、上記のスクリーニング方法のために、擬態物はリガンド（例えば、レセプターからの効果的な回収のためのビオチン）、および切断可能な結合（例えば、酵素的切断を受けやすいペプチド配列）の両方を含む。このような擬態物は、上記の擬態物の固相または液相での合成を補足する従来の化学により調製され得、そして、上記の擬態物の固相または液相での合成に直接組み入れられ得る。この目的のために、ビオチンおよび切断可能な結合の組み込みは、擬態物のＣ末端において好適になされる。この擬態物は、以下の表現により、スキーム的に表現され得る： N-末端-逆ターン擬態物-C末端-切断可能な結合-リガンド上記の擬態物は、それ自身で逆ターン擬態物を生成する同じ方法により合成され得る。簡潔には、ビオチンのようなリガンドを擬態物に組み込むために、リジン残基を第１の残基として擬態物に組み込む。リジン側鎖の求核的ε-アミノ基は、ビオチンのようなリガンドの結合のために、反応性部位として作用する。ビオチンの反応性の形態（例えば、ビオチンのN-ヒドロキシスクシンイミド）でのリジン残基の処理は、ビオチンの擬態物への結合をもたらす。次いで、ペプチド擬態物合成は、切断部位を作製するのに適切な、さらなるアミノ酸残基により続けられ得る。例えば、上述のように、残基のグリシン、アルギニン、およびグリシンは結合して、このような切断可能な結合を供給し得る。一旦ビオチンおよび切断可能な結合の両方が置き換わると、ペプチド擬態物合成は上述のように、および実施例１〜３のように続く。本発明のさらに別の局面では、生物活性な擬態物の同定方法が開示される。上記のように、生物活性な擬態物は、適切な酵素で処理することにより遊離させ得る。結果として、個々の生物活性な擬態物および切断酵素を含む溶液を得る。生物活性な擬態物が、サイズ排除濾過のような従来的な技術により切断酵素から分離され得、分析に適切な生物活性な擬態物の溶液を供給し得る。好ましい実施態様において、生物活性な擬態物の溶液を、液体クロマトグラフィーおよびマススペクトル分析（LC-MS）の組み合わせにより分析する。擬態物ライブラリのスクリーニングアッセイから、１つ以上の生物活性な擬態物が回収される場合、液体クロマトグラフィー分析は生物活性な擬態物の分離手段および定量手段の両方を提供する。このような混合物のクロマトグラムは、擬態物の結合プロフィールを提供する。液体クロマトグラムのマススペクトル分析器への溶出は、生物活性な擬態物の明瞭な同定を提供する。以下の実施例は、例示により提示されるものであり、制限するものではない。実施例実施例１構成部分の合成この実施例は、本発明のコンホメーション的に制限された逆ターン擬態物を形成するために結合する構成部分の合成を示す。A ．第１構成部分の合成本発明の第１構成部分は、以下の構造１を有する：ここで、Ｒ⁴は、アミノ酸側鎖部位またはそれらの誘導体であり、Ｘは、表１に示される部位から選択される化学的部位であり、およびＰは、ペプチド合成において使用される適切なアミノ保護基である。「Ｘ」部位は、第１構成部分と第３構成部分との間に架橋を形成し、これがコンホメーション的に制限された逆ターン擬態物の環の大きさを規定する。Ｘ部位は、長さおよび屈曲性が変化し得、それゆえコンホメーション的に制限された逆ターン擬態物の三次元構造をもたらす。第１構成部分は、Ｎ−保護されたヒドラジンであり得る。ここでＸ部位は、単一窒素原子である。逆ターン擬態物への環化の際に、そのような第１構成部分は第３構成部分のカルボニル基とヒドラジド結合を形成する。あるいは、第１構成部分は、環化の際にアミド結合を形成するＮ−保護されたアミンであり得る。第１構成部分の両方の一般的なタイプの合成を、以下に示す。（１）Ｎ−保護されたヒドラジン(X=NH)の合成第１構成部分として使用されるＮ−保護されたヒドラジンは、HoffmanおよびK im(Tet.Lett．31:2953、1990)、ならびにVidalら(J．Org．Chem．58:4791-4793 、1993)の手順に従って、対応するアミノ酸から製造され得る。簡単に言えば、アミノ酸は、硫酸水溶液中の亜硝酸ナトリウムとの反応、続くジアゾメタンによる処理により、対応するα−ヒドロキシメチルエステルに変換され得る。無水トリフルオロメタンスルホン酸によるトリフルオロスルホネートへの変換の後、α −ヒドロキシ基は、モノ−ｔ−ブチルオキシカルボニルヒドラジンで置換される（キラルな炭素原子の周りのアミノ酸コンフィギュレーションの全ての反転を伴う）。結果として、第１構成部分であるＮ−保護されたヒドラジンを得る。この第１構成部分は、式１で表され、ここで、カルボン酸基は、メチルエステルとして保護され、ＸはNHであり、そしてＰはアミノ保護基であるｔ−ブチルオキシカルボニル(BOC)である。代表的な第１構成部分であるＮ−保護されたヒドラジンへのアミノ酸の変換を、以下に示す。（２）第１成分であるＮ−保護されたアミン(X=NHRCH₂)の合成還元的アミノ化。種々の第１構成部分が、GribbleおよびNutatitis（Org．Pre p．Proced．Int．17:317、1985）、またはSasakiおよびCoy（Peptides 8:119、1 987）により記載されている、容易な還元アミノ化プロセスにより、適切なアルデヒドから調製され得る。この方法において、アミノ酸のアミノ基とアルデヒドのカルボニル基との反応はイミンを形成し、続いて、このイミンは適切な水素化物還元剤で還元されて、C-N結合を提供し得る。本発明の、このような第１構成部分を生成するために、必要なアルデヒドは、Ｎ−保護されたアミノ基を有する。還元アミノ化の一般的な方法による、第１成分であるＮ−保護されたアミンの合成を、概略的に以下に示す（キラル炭素原子の周りのアミノ酸コンフィギュレーションは、全て保持される）：あるいは、上記のＮ−保護されたアミンの合成は、HOOC-CH(R⁴)-NH₂部位をP-OOC -CH(R⁴)-NH₂で置換することにより固体支持体上で達成され得、P-OOC-CH(R⁴)-NH CH₂RNHPを得る。上記のＮ−保護されたアミノアルデヒドは、一般式P-NH-R-CHOで表され得る。ここでＰは、アミノ保護基であり、そしてＲは化学的部位（例えば、-CH₂-、-C( CH₃)₂-、-CH=CHC(CH₃)₂-、または-CH₂CH₂C(CH₃)₂-）であり、それはＮ−保護されたアミノ基でアルデヒドカルボニルを結合する。上記の還元アミノ化の生成物としては、ＸがNH-R-CH₂である構造１の第１構成部分を得る。アミノ酸からのアルデヒドの合成。変化可能なＸを有する第１構成部分の還元アミノ化方法による調製は、適切なアルデヒド（すなわち、Ｎ−保護されたアミノ基を有するアルデヒド）の合成を必要とする。このような適切なアルデヒドは、Goelら（Org．Syn．67:69、1988）により記載される２段階手順により、対応するアミノ酸から直接調製され得る。代表的な一連の反応において、Ｎ−保護されたアミノ酸を、まずメチルクロロホルメートで処理し、そしてN,O-ジメチルヒドロキシアミンで処理することにより混合無水物に変換し、対応するカルボキシアミドを提供する。続いてそれは水素化アルミニウムリチウムでアルデヒドに還元される。上記のような、Ｎ−保護されたアミノ酸の対応するＮ−保護されたアルデヒドへの変換を、以下の反応により概略的に示す：ここで、ＰおよびＲは、上記の通りである。適切なＮ−アミノ保護されたアルデヒドの合成は、以下のセクション(a)〜(d)に示される。 (a) 第１成分であるＮ-保護されたアミン（X=NHCH₂CH₂）本実施例において、アルデヒドは、Ｎ−保護された2-アミノエタノールであり、対応するＮ−保護されたアミノ酸（グリシン）から、上記セクション（２）に記載のGoelらのプロセスに従って調製され得る。N-BOC-グリシンは、種々の供給源から市販されており、そしてアルデヒド、すなわちBOC-NH-CH₂-CHOに変換するのに適している。上記（２）に記載の還元アミノ化の条件下で、得られたアルデヒド（N-BOC-アミノアセトアルデヒド）をアミノ酸により処理することで、以下に示す第１成分であるＮ−保護されたアミンを得る。それはＸが-NHCH₂CH₂-であり、そしてＰがBOC保護基であるような、一般式１の第１構成部分である： (b) 第１成分であるＮ−保護されたアミン(X=NHC(CH₃)₂CH₂) 本実施例において、アルデヒドは、Ｎ−保護された2-アミノ-2-メチルプロパナールであり、そして上記セクション（２）に記載のGoelらのプロセスに従って対応するＮ−保護されたアミノ酸（2-メチルアラニン）から調製され得る。N-BO C-2-メチルアラニンは、種々の供給源から市販されており、そしてアルデヒド、すなわちBOC-NH-C(CH₃)₂-CHOに変換するのに適している。上記セクション（２）に記載の還元アミノ化の条件下で、得られたアルデヒド（N-BOC-2-アミノ-2-メチルプロパナール）をアミノ酸により処理することで、以下に示される第１成分であるＮ−保護されたアミンを得る。それは、ＸがNHC(CH₃)₂CH₂であるような、一般式１の第１構成部分を満たす。 (c) 第１成分であるＮ−保護されたアミン(X=NHC(CH₃)₂CH=CHCH₂) リンカーＸの長さの延長および屈曲性の調整は、上記のアルデヒドのホモロゲーションにより達成され得る。例えば、Wittig反応による上記セクション(2)(b) のアルデヒド中間体のホモロゲーションは、HouseおよびRasmusson（J．Org．Ch em．26:4278、1961）に記載されているようなビニローグアナログを提供する。簡単に言えば、メチル（トリフェニルホスホランイリデン）アセテートによる上記セクション(2)(b)のN-BOC-2-アミノ-2-メチルプロパナールの処理により、アルデヒド炭素鎖が炭素２個分延長される。この反応を、以下に概略的に表す。次いで、上記のエステル生成物は塩基性条件下で加水分解され得、対応するN-BO Cアミノカルボン酸を得る。次いでそれは、上記セクション(2)に記載のGoelらの還元方法によりアルデヒドに直接変換され得る。上記のエステルから誘導されるカルボン酸の、対応するアルデヒドへの変換を以下に示す。上記セクション(2)に記載の還元アミノ化の条件下で、ビニローグアルデヒドをアミノ酸により処理することで、以下に示す第１成分であるＮ−保護されたアミンを得る。それはＸがNHC(CH₃)₂CH=CHCH₂であるような、第１構成部分の一般式１を満たす。 (d) 第１成分であるＮ−保護されたアミン(X=NHC(CH₃)CH₂CH₂CH₂) 上記セクション(2)(c)のＸ部位は、リンカー部位にいくらかの剛性を与えるビニル基を含有する。より屈曲性のリンカーは、上記のＮ−保護されたビニローグアルデヒドの水素化により調製され得る。ビニローグアルデヒドの水素化は、以下に示される飽和アナログを生成する。上記セクション(2)に記載の還元アミノ化の条件下で、飽和アルデヒドをアミノ酸により処理することで、以下に示す第１成分であるＮ−保護されたアミンを得る。それは、ＸがNHC(CH₃)₂CH₂CH₂CH₂であるような、第１構成部分の一般式１を満たす。 B ．第２構成部分の合成本発明の第２構成部分は、以下の構造2a、2b、または2cのいずれか１つを有し得る：ここでＲ³は、アミノ酸側鎖部位またはそれらの誘導体であり、Ｗは、先に定義した通りであり、そしてＰは、ペプチド合成に使用するのに適したアミノ保護基である。構造2aは、Ｎ−保護されたアミノ酸の一般的な表現であり、そして構造2b は、Ｎ−保護されたプロリン誘導体を表す。適切な第２構成部分である2aおよび2bは、市販されている。例えば、FMOCアミノ酸は、種々の供給源から市販されている。あるいは、これらまたは他のＮ−保護されたアミノ酸は、標準的な有機合成技術により容易に調製され得る。第２構成部分2cは、アミノ酸のアジド誘導体である。このアミノ酸誘導体においては、α−アミノ基は、アジド基で置換されている。アミノ酸のアジド誘導体は、以下の反応（Zaloomら、J．Org．Chem．46:5173-5176、1981）により調製され得る： C ．第３構成部分の合成第３構成成分は、以下の構造のいずれか１つを有し得る：ここでＲ¹およびＲ²は、アミノ酸側鎖部位またはそれらの誘導体であり、Ｙは、 -CH₂-、-NZ-、-O-、または-S-であり、Ｚは、Ｈまたは-CH₃であり、Ｗは、先に定義した通りであり、そしてＰは、ペプチド合成の使用に適したアミノ保護基である。好ましい保護基としては、ｔ−ブチルジメチルシリル(TBDMS)、BOC、FMOC およびAlloc（すなわち、アリルオキシカルボニル）が挙げられる。より詳細には、第３構成部分3(a)は、以下の構造のいずれか１つを有し得る：本発明の第３構成部分は、β−プロピオラクタム誘導体であり、また2-アゼチジノン誘導体として一般に公知である。第３構成部分3aは、アゼチジノン環と分子のカルボン酸部分とをつなぐ原子の性質が異なるアナログアゼチジノンである。これらの第３構成部分の２つの部分をつなぐ原子は、3(a1)、3(a2)、3(a3)および3(a4)それぞれに対してC、N，O、およびSである。第３構成部分3bは、3a(2) の誘導体であり、ここで、Ｒ²は、プロリンである。第３構成部分3cは、アゼチジノン窒素がα−アミノ酸のα−アミノ基でもある、2-置換アゼチジノンである。これらの第３構成部分3a〜3cの典型的な合成を、以下に示す。（１）第３構成部分3(a1)の合成第３構成部分3(a1)は、Williamsら、J．Amer．Chem．Soc．111:1073、1989に一般的に記載されている方法により調製され得る。3(a1)の合成を、以下に概略的に示す。簡単に言えば、リチウムジイソプロピルアミドでの処理により生成したN-TBDMS- 2-アゼチジノンのアニオンを、4-ブロモブテニル誘導体でアルキル化し、対応する4-ブテニルアゼチジノンを得る。四酸化ルテニウムによる末端アルケンの酸化開裂は、ＰがTBDMS保護基である第３構成部分3(a1)を提供する。（２）第３構成部分3(a2)の合成第３構成部分3(a2)は、Millerら（J．Amer．Chem．Soc．102:7026、1980）に一般的に記載されている方法により調製され得る。3(a2)の合成を以下に概略的に示す。簡単に言えば、β−ヒドロキシアミド誘導体の環化により、4-アミノ-2-アゼチジノンが得られる。アゼチジノンアミノ基の、α−ケトベンジルエステル誘導体による縮合およびナトリウムシアノボロヒドリドによる付随還元により、3(a2) のエステルを得る。ベンジル保護基の水素化分解により、第３構成部分3(a2)が得られる。（３）第３構成部分3(a3)の合成第３構成部分3(a3)は、以下で概略的に表される方法により調製され得る：簡単に言えば、アリルアルコールのオキシアニオンによる、（ヒドロキシアゼチジノンから誘導された）4-トリフルオロメタンスルホニル-2-TBDMS-2-アゼチジノン誘導体からのトリフルオロメタンスルホネート基の置換により、3(a3)の末端アルケンが得られる。四酸化ルテニウムによる末端アルケンの酸化開裂により、カルボン酸3(a3)が得られる。あるいは、そして好ましい実施態様においては、第３構成部分3(a3)は、以下の手順により調製される：上記の反応において、β−ラクタムの水酸化、およびヒドロキシエステルの対応するトリフラートの置換、そして続く水素化分解により、望ましい第３構成部分を提供する。（４）第３構成部分3(a4)の合成第３モジュール構成部分3(a4)は、3(a3)と同じ様式で製造される。但し、POC( O)CH(R²)S-を、アリルアルコールの代わりに添加し、そして得られたエステルを加水分解して3(a4)を得る。（５）第３構成部分3bの合成第３モジュール構成部分3bは、3(a3)と同じ様式で製造される。但しプロリンのエステルを、アリルアルコールの代わりに添加し、そして得られたエステルを加水分解して3(b)を得る。（６）第３構成部分3cの合成第３構成部分3cは、HartおよびHu（Chem．Rev．89:1447、1990）に一般的に記載される方法により調製され得る。3cの合成を、以下に概略的に示す。簡単に言えば、アミノ酸ベンジルエステルのα−アミノ基と、α−アミノ酸から誘導されたN-BOC保護されたアルデヒドのカルボニル基との縮合によるイミン生成物を、メチルイソブチレートのエノレートで処理して、4,4-ジメチル-2-アゼチジノン誘導体を得る。ベンジル保護基の水素化分解により、ＰがBOC保護基でありそしてＺがメチルである第３構成部分3cが得られる。あるいは、上記イミンの、メチルアセテートのエノレートによる処理、続く水素化分解により、Ｚが水素である第３構成部分3cが得られる。実施例２第１、第２、および／または第３構成部分のカップリング本発明の逆ターン擬態物を製造するための構成部分のカップリングは、一般的にアミド結合の形成を含む。構成部分同士をつなぐアミド結合は、標準的な合成ペプチド技術により形成され得、そして液相合成または固相合成のどちらかにより行われ得る。代表的には、コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物を含有するペプチドの固相合成において、第１構成部分は、合成時に特異点でペプチド配列に組み込まれる。一旦第１構成部分が組み込まれたら、擬態物ターンの残りの合成が続く。例えば、コンホメーション的に制限されたβターン擬態物に関して、ターンは、第２、および第３構成部分の続くカップリング、その後の第１構成部分の第３構成部分への環化により合成される。次いで、ペプチドの残りが、残りのアミノ酸の連続的で段階的なカップリングによるペプチド鎖のさらなる伸長によって合成され得る。 A．第１および第２構成部分の代表的なカップリング第１および第２構成部分のカップリングにより、結合した第１−第２中間体が得られる。３つの異なる、結合した第１−第２中間体種は、第１構成部分１と第２構成部分2a、2b、または2cとのカップリングにより形成され得る。1-2a、1-2b 、および1-2cで表される、カップリング生成物を以下に示す。上の表記において、ＰはBOCであり、そしてＰ'はFMOCである。第１および第２構成部分のカップリングは、シリコン媒介された酸フロライドカップリングにより達成され得る。このカップリングの手順において、固相に固定された１は、５当量のビス（トリメチルシリル）アセトアミドで処理することにより、対応するN-トリメチルシリル誘導体（以下の1a）に変換される。 2a〜2cの酸フロライドのいずれかとN-シリル誘導体1aとの反応により、それぞれ結合した第１−第２中間体1-2a、1-2b、または1-2cを得る。2a〜2cの酸フロライドは、CarpinoおよびHan(J．Amer．Chem．Soc．112:9651-52、1990)により記載される一般的な方法に従って、シアヌル酸フロライド処理により対応するカルボン酸から容易に調製され得る。（１）N-FMOC 保護されたアミノ酸を用いるペプチドカップリング上記の一般的なシリコン媒介された酸フロライドペプチドカップリングの手順は、Ｎ−保護されたアミノ酸フロライド（例えば、2aまたは2b）をＮ−シリルペプチド（例えば、1a）でカップリングするのに用いられ得る。液相でのペプチド合成に関しては、Ｎ−保護されたアミノ酸フロライドは、カルボキシ保護された N-シリルアミノ酸とカップリングする。シリコン媒介された酸フロライドカップリング方法は、カップリング剤（例えば、カルボジイミドまたは混合無水物剤）を使用する従来のアミド形成反応よりも優れている。これらの試薬は、別のアミノ酸のアミノ基とのカップリングのためのアミノ酸のカルボキシル基を活性化する。あるいは、そして好ましい実施態様においては、アミノ末端とカルボニル基との間のカップリングは、HATUと共に行われ得る。シリコン媒介された酸フロライドカップリングが提供する改善および利点にもかかわらず、いくつかの場合において、ペプチド結合の形成は、N-シリルペプチドのアミノ酸側鎖と、カルボキシ活性化アミノ酸の従来のかさ高いN-FMOC（フルオレニルメトキシカルボニル）保護基との間の立体相互作用のために困難なままである。事実、アミノ酸と比較的かさ高い側鎖（例えば、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、アルギニン、ロイシン、イソロイシン、グルタミン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、およびトレオニン）とのカップリング反応速度は、N-FMOC保護されたアミノ酸を利用するカップリング反応において、比較的立体障害の少ない側鎖（例えば、グリシン、アラニン、およびセリン）を有するこれらのアミノ酸と比較して、顕著に遅い。第２級アミン（例えば、1a）のペプチド結合形成はまた、立体的理由により、より困難である。さらなるアミノ置換基は、アミノ基の立体障害を有意に増加させ、そして求核性（カルボキシ誘導体でペプチド結合を形成する能力）を減少させる。反応性の低下は、遅い反応速度から明らかである。ペプチドカップリングにおけるこの困難は、N-FMOC保護されたアミノ酸との反応において特にあてはまる。（２）アジド酸フロライドを用いるペプチドカップリングかさ高いN-FMOC保護されたアミノ酸フロライドのペプチドカップリングについての立体性に関する問題は、対応するアジド酸フロライドの使用により排除され得る。FMOC基とは対照的に、アジド基は、小さい（３個の窒素原子を有する）線状置換基である。前者の酸フロライドにおいては、アミノ酸のα−アミノ基は、ペプチドカップリング反応において、妨害を防止する基（FMOC）により単純に保護される。一旦カップリングすると、保護基は除去され、続いてカップリングが行われる。対照的にアジド酸フロライドにおいては、アミノ酸のα−アミノ基は、アジド基（N₃）に変換されている。アジド酸フロライドによるカップリングの後、アジド基は、続くカップリングのために直接活性化され得る。いずれかの酸フロライド試薬についての全体の結果としてペプチド結合が形成される。しかし、アジド酸フロライド試薬は、N-FMOC保護されたアミノ酸に関するペプチド結合形成の立体阻害の問題を起こさない。従って、アジド酸フロライドは、立体的に望ましいペプチド結合形成のために選択される試薬である。これらのカップリングは、立体的にかさ高い側鎖部位とアミノ酸との反応、および第２級アミンとのアミド結合形成を含む。これらの酸フロライドの構造を、以下に示す（Ｒは、アミノ酸側鎖部位またはそれらの誘導体を表す）。上記の標準的な方法により、アジド酸フロライドは対応するアジド酸から調製され得、そしてアジド酸は対応するアミノ酸から容易に合成され得る。上記のように、続くカップリングの前にアジド酸を脱保護しなければならないＮ−保護されたアミノ酸誘導体とは異なり、アジド酸は、続くアミノ酸とのペプチドカップリングのために直接活性化され得る。アジドペプチドのトリフェニルホスフィンによる処理により、ホスフィンイミンが生成する。これは、アミノ酸あるいは本発明の第２または第３構成部分との反応で、ペプチド結合および対応する鎖伸長ペプチドを生成する。このプロセスは、一般的に以下に示される。ここで、Ｒは、アミノ酸側鎖部位である：上記のアジド酸フロライドペプチドカップリング方法は、一般的にペプチドカップリングに有用であり、より詳細には、本発明の実施に有用である。この方法を、以下のセクションC、D、およびEにおいて、本発明のモジュール構成部分のカップリングについてさらに例示する。 B．第１および第３構成部分の代表的なカップリング第１モジュール成分および第３モジュール成分のカップリングにより、結合した第１−第３中間体が得られる。６個の異なる、結合した第１−第３中間体種は、第３構成部分3(a1)、3(a2)、3(a3)、3(a4)、3b、または3cのいずれかと第１構成部分１とのカップリングの結果として形成され得る。カップリング生成物は、以下に示すように、1-3(a1)、1-3(a2)、1-3(a3)、1-3(a4)、1-3(b)、および1-3( c) として表される：上の表記において、Ｐは、ペプチド合成での使用に適した保護基であり、Ｘは、実施例１に記載されるリンカーであり、そしてＲ¹、Ｒ²、Ｒ³、およびＲ⁴は、アミノ酸側鎖部位である。第１および第３構成部分のカップリングは、N-シリル誘導体1aを介して、上記 Aに記載のシリコン媒介された酸フロライド方法により達成される。結合した第１−第３中間体は、コンホメーション的に制限されたγターン擬態物合成の前駆体である。 C．結合した第１−第２成分中間体と第３構成部分との代表的なカップリング結合した第１−第２中間体と第３モジュール構成部分とのカップリングにより、結合した第１−第２−第３中間体が得られる。18個の異なる、結合した第１− 第２−第３中間体種は、３個の第１−第２中間体1-2(a)、1-2(b)、または1-2(c) のいずれかと、６個の第３構成部分3(a)〜3(c)のいずれかとのカップリングの結果として形成され得る。1-2(a)と3(a)〜3(c)とのカップリング生成物を、1-2(a) -3(a1) 、1-2(a)-3(a2)、1-2(a)-3(a3)、1-2(a)-3(a4)、1-2(a)-3(b)、および1-2 (a)-3(c) として表される、第１−第２−第３中間体カップリング生成物の代表的な組として以下に示す：上記の構造において、Ｐは、ペプチド合成での使用に適した保護基であり、Ｘは、実施例１に記載されるリンカーである。Ｚは、水素またはメチルのいずれかであり、そしてＲは、アミノ酸側鎖部位を表す。1-2(b)および1-2(c)と3(a)〜3( c) とのカップリングで形成される、残りの10個の第１−第２−第３中間体は、上記で表されるものに類似の構造を有する。 1-2(b)誘導体を含むカップリングに関して、結合した第１−第２中間体と第３構成部分とのカップリングは、従来のペプチドカップリング技術（例えば、自動ペプチド合成機で行われるもの）により達成され得る。簡単に言えば、工程は、結合した第１−第２中間体のＮ−脱保護、ならびにペプチド結合形成およびカップリングをもたらす第３構成部分の付加およびカルボキシル基の活性化を包含する。あるいは、1-2(c)誘導体を含むカップリングに関して、カップリングは、上記セクションA(2)に記載のトリフェニルホスフィン活性化を介して容易に達成される。結合した第１−第２−第３中間体は、コンホメーション的に制限されたβターン擬態物合成に必要な前駆体である。 D．結合した第１−第２成分中間体と第２構成部分との代表的なカップリング結合した第１−第２中間体と第２モジュール構成部分とのカップリングにより、結合した第１-第２-第２中間体が得られる。９個の異なる、結合した第１−第２−第２中間体種は、３個の第１−第２中間体1-2(a)、1-2(b)、または1-2(c)のいずれかと、３個の第２構成部分2(a)〜2(c)のいずれかとのカップリングの結果として形成され得る。1-2(a)と2(a)〜2(c)とのカップリング生成物、すなわち1- 2(a)-2(a) 、1-2(a)-2(b)、および1-2(a)-2(c)として表される第１−第２−第２中間体カップリング生成物の代表的な組を、以下に示す：上の表記において、Ｐは、ペプチド合成での使用に適した保護基であり、Ｘは、実施例１に記載されるリンカーであり、そしてＲは、アミノ酸側鎖部位である。1-2(b) および1-2(c)と2(a)〜2(c)とのカップリングから形成される、残りの第１ −第２−第２−第３中間体は、上記で表されるものに類似の構造を有する。結合した第１−第２中間体と第２構成部分とのカップリングは、上記Cに記載のペプチドカップリング技術により達成され得る。 E．結合した第１−第２−第２成分中間体と第３構成部分との代表的なカップリング結合した第１−第２−第２中間体と第３モジュール構成部分とのカップリングにより、結合した第１−第２−第２−第３中間体が得られる。45の異なる、結合した第１−第２−第２-第３中間体種は、９個の第１−第２−第２中間体1-2(a)- 2(a) 、1-2(a)-2(b)、1-2(a)-2(c)、1-2(b)-2(a)、1-2(b)-2(b)、1-2(b)-2(c)、1 -2(c)-2(a) 、1-2(c)-2(b)、および1-2(c)-2(c)のいずれかと、５個の第３構成部分3(a)〜3(c)のいずれかとのカップリングの結果として形成され得る。1-2(a)-2 (a) と3(a1)とのカップリング生成物、すなわち1-2(a)-2(a)-3(a1)として表される第１−第２−第２-第３中間体カップリング生成物の代表的な種を、以下に示す：上の表記において、Ｐは、ペプチド合成での使用に適した保護基であり、Ｘは、実施例１に記載されるようなリンカーであり、そしてＲは、アミノ酸側鎖部位である。残りの第１−第２−第２−第３中間体は、上記で表されるものに類似の構造を有する。結合した第１−第２−第２中間体と第３構成部分とのカップリングは、上記C で記載されるペプチドカップリング技術により、達成され得る。結合した第１−第２−第２−第３中間体は、コンホメーション的に制限された β膨張擬態物合成に必要な前駆体である。実施例３コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物を形成するための結合した構成部分の環化第１構成部分の結合基Ｘと第３構成部分のアゼチジノン基のカルボニル炭素との共有カップリングによる、第１および第３モジュール構成部分の環化により、本発明のコンホメーション的に制限された逆ターン擬態物が得られる。第１構成部分と第３構成部分との間の構成部分の存在が、コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物の性質（すなわち、βターン擬態物、γターン疑態物、または β膨張疑態物）を決定する。第１構成部分の第３構成部分への環化は、第１構成部分の結合基Ｘからの保護基Ｐの除去を包含する。実施例1Aに記載されるように、Ｐは、アミノ保護基、代表的にはBOC基である。それゆえ、CH₂Cl₂中のTFAによる結合した中間体の処理、および引き続いてのDIPEAによる中和により、保護基が除去され、そして求核性窒素を有する結合基Ｘが得られる。Ｘの性質に依存して、求核性窒素は、実施例 1A(1)のヒドラジン、または実施例1A(2)(a〜d)のアミンのいずれかである。第１構成部分の求核性ヒドラジンまたはアミンは、それぞれヒドラジドまたはアミドへの容易な環化をもたらす。環化の容易さは、第３構成部分のアゼチジノンカルボニルの近接性および求電子性による。 A．代表的なコンホメーション的に制限されたβターン：結合した第１−第２− 第３モジュール成分の環化第１−第２−第３結合中間体のＮ-脱保護および環化により、βターン擬態物が得られる。結合した中間体は、上記実施例2Cに記載されたもののいずれか１つであり得る。例えば、Xが-NH-である種についての1-2(a)-3(a1)の酸水溶液処理は、以下のコンホメーション的に制限されたβターン擬態物への環化をもたらす：上記に示された環化は、本発明の全てのβターン擬態物の環化を表す。 B．コンホメーション的に制限されたγ−ターン擬態物：結合した第１−第３モジュール成分の環化第１−第３結合中間体のＮ−保護および環化により、γターン擬態物が得られる。結合した中間体は、上記の実施例2Bに記載されるもののいずれか１つであり得る。例えば、Xが-NH-である種についての1-3(a1)の酸水溶液処理は、以下に示すコンホメーション的に制限されたγターン擬態物への環化をもたらす：上記に示された環化は、本発明の全てのγターン擬態物の環化を表す。 C．代表的なコンホメーション的に制限されたβ膨張擬態物：結合した第１−第２−第２−第３モジュール成分の環化第１−第２−第２−第３結合中間体のＮ−保護および環化により、β膨張擬態物が得られる。結合した中間体は、上記実施例2Eに記載されたもののいずれか１つであり得る。例えば、Xが-NH-である種についての1-2(a)-2(a)-3(a1)のTFA/CH₂ Cl₂処理および中和は、以下に示されるコンホメーション的に制限されたβ膨張擬態物への環化をもたらす。上記で示される環化は、本発明の全てのβ膨張擬態物の環化を表す。実施例４コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物 β−エンドルフィンを含有する代表的なライブラリの合成およびそこからの生物学的活性擬態物の同定本発明の好ましい実施態様においては、公知の生物学的活性を有する線状ペプチド配列が得られる。このような配列は、天然ペプチド、線状ペプチドライブラリ（例えば、合成またはファージディスプレイ）から同定された配列、またはタンパク質の生物学的活性領域の一部であるエピトープの組み合わせであり得る。本実施例において、線状ペプチドは、以下の配列を有するβ−エンドルフィンである：上記ペプチドのＮ−末端配列（すなわち、YGGFM(L)）は、抗β−エンドルフィン抗体3E7(Boehringer Mannheim)(Lamら、Nature 354:82-84、1991)（この文献は本明細書中に参考として援用される）により認識される。擬態物ライブラリは、Ｎ−末端ペンタペプチド配列の周りに構築され、その結合（すなわち、生物学的活性）コンフォメーションを以下のように決定する： 10員環、12員環、および14員環を有するβターン擬態物、７員環、９員環、および11員環を有するγターン、ならびに13員環、15員環、および17員環を有するβ 膨張擬態物（例えば、(2×5)+(3×5)+(1×5)=30メンバー）が得られる。上記擬態物の合成は、一般的に、図１および２で示される上記実施例１〜３に開示の手順により達成される。図１Aおよび１Bにおいて、12員環および14員環を有するβターン擬態物の合成が開示されている。一方、図2A、2Bおよび2Cは、７員環を有するγターン擬態物、および10員環を有するβターン擬態物の合成を記載する。9員環および11員環を有するγターン、および15員環および17員環を有するβ膨張の合成は、第２構成部分を省略したこと（γターン）またはさらなる第２構成部分を付加したこと（β膨張）以外は図1Aおよび1Bに例示される合成に従う。13員環を含有するβ膨張の合成は、第２モジュール構成部分をさらに含むこと以外は図2A、2B、および2Cの開示に従う。さらに詳細には、第１工程は、市販のBOC-Gly-PAM樹脂と第１の２つのアミノ酸（すなわちＫおよびＬ）とをDIC HOBT（すなわち、カルボジイミドカップリング）によりカップリングし、FMOC-LKG-PAMを得ることを包含する。12員環および 14員環を有するβターン擬態物の場合（9員環および11員環を有するγターン擬態物ならびに15員環および17員環を有するβ膨張擬態物についても同様）、次の工程は、リンカーＸの合成を完了させる樹脂上の還元アミノ化を包含する。10員環を有するβターン擬態物の場合（7員環を有するγターン擬態物および13員環を有するβ膨張擬態物についても同様）、アミノ酸ヒドラジドが前合成される（すなわち、第１構成部分）。第２構成部分とヒンダード第２級アミンとのカップリングは、HATU（4×）を用いて行われる。FMOC基の除去およびβラクタムへのカップリング（すなわち、第３構成部分）は、上記実施例２で概説されたものと同様であり、そしてTFAによる環の環化は、実施例３に開示の方法により達成される。さらなるアミノ酸は、カルボジイミドのカップリングを介して添加されるさらなる残基と共に、HATUを用いて添加され得る。樹脂からの逆ターン擬態物の切断は、アミノリシスにより行われる（イソプロパノール中のNH₃）。次いでライブラリのメンバーは、標準ELISAフォーマットでアッセイされる。簡単に言えば、Costar ELISA strip(2588)を、１μg/mlのカルボネート緩衝液（pH 8.6）のβエンドルフィン（Novabiochem）で、室温にて１時間、50μｇ／ウエルでコーティングし、そして次いでPBSおよび0.5% Tween 20で３回洗浄する。ウエルを、ブロッキング緩衝液(PBS、1% BSA、および0.05% Tween 20)で満たし（約350μl）、そして室温で２時間インキュベートし、そして３回洗浄する。抗β−エンドルフィン抗体(3E7)は、ブロッキング緩衝液中で150ng/mlに希釈され、そしてライブラリのメンバーは、室温で30分間、異なる濃度の3E7でインキュベートされる。次いで、100μl各混合物をウェルに塗布し、室温で30分から１時間インキュベートする。線状ペプチドYGGFLKGを、ポジティブコントロールとして同様に試験する。１時間後、ウェルを、３回洗浄し、次いで、ブロッキング緩衝液(100μl/ウェル)中において1:1000の希釈で抗体と複合したGoat-anti-M ouse(Sigma)HRPでインキュベートし、室温で30分間から１時間インキュベートし、そして３回洗浄する。ABTS(Sigma)を、0.1Mクエン酸塩緩衝液(pH4.0)中で１μ g/mlに溶解し、そこに溶液１ml当たり10μlの30%H₂O₂を添加する。１ウェル当たり100μlのABTS溶液を添加し、室温で30分間インキュベートし、そして415nMでの光学密度を測定する。阻害性が最も大きい逆ターン擬態物は、最も低い光学密度を有するウエルにより示される。逆ターン擬態物の鋳型を一旦測定したら、次いで、上記の手順が繰り返され、同じ鋳型を有するが、大部分が生物学的に活性であることを決定する異なるアミノ酸側鎖部位を有する逆ターン擬態物を含有するライブラリを得る。言いかえれば、アミノ酸残基（特に環の残基）を無作為化することにより鋳型の側鎖を最適化する。さらなる改変（例えば、アミノ酸末端を改変すること）がまた、例えばアシル化により、またはＤおよびＬコンフィギュレーションの混合物（全てのＤコンフィギュレーションを含む）を利用することによりなされ得る。実施例５コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物IL-8を含有する代表的なライブラリの合成およびそこからの生物活性擬態物の同定 IL-8は、ケモカイン(chemokine)上科のメンバーであり、そして炎症、脈管形成、および好中球の化学走性に利用されている。構造(Baldwinら、Proc．Natl． Acad．Sci．88:502-505、1991)および突然変異の分析(Clark-Lewisら、J．Biol ．Chem．269:16075-16081、1994)に基づく、IL-8の領域（そのレセプターに結合することを含む）は、Ｎ末端残基4-10(ELRCQCI)およびCys-34(GPHC)を含有するループの両方を含むと考えられている。言いかえれば、IL-8結合領域は、三次元空間において逆ターン構造に密接に関連する線状ペプチド配列を含むと考えられている。この結合領域を擬態するために、本発明の逆ターンを以下のように表される線状ペプチドに結合させる：上の表記において、線状ペプチド（またはその擬態物）は、本発明の逆ターン擬態物の一端に共有結合的に結合する。IL-8の場合、以下の構造を含有するライブラリを合成する：上記擬態物のライブラリを、逆ターンのカルボニル末端に線状ペプチドを結合させること以外は、上記実施例１〜４に記載される様式で構築する。簡単に言えば、ペプチドIAQを、PAM樹脂上に構築し、PAM-IAQ-FMOCを得る。次いでDDE(ε- アミノFMOC)リジン残基（Bycroftら、J．Amer．Chem．Soc．116:7415-7416、199 4）を、カップリングする。FMOC基を、ジエチルアミンで除去し、そして逆ターンの合成を、上記の実施例に開示されるようにして進める。続いて、DDE基を、室温で2%N₂H₄により除去し、KLE残基を、カルボジイミドカップリングを用いて、個々に添加する。樹脂からの開裂を、上記のようにして行う。得られたライブラリを、シトカラシンＢで前処理されたヒト好中球から放出されたエラスターゼを含むIL-8の阻害の測定によりスクリーニングする。このようなアッセイは、Peveriら（Ｊ．Exp．Med．167:1547-1557、1988）（この文献は本明細書中で参考として援用される）に開示される。ライブラリはまた、Gramin skiおよびLerner（Biotechnology 12:1008-1011、1994）（この文献は本明細書中に参考として援用される）に開示されるアッセイを包含する他の手順によりスクリーニングされ得る。上記のように、本発明の特定の実施態様を例示の目的で本明細書中に記載したが、種々の改変が本発明の精神および範囲から外れることなしに行われ得ることが理解される。従って、本発明は、添付の請求の範囲以外には限定されない。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ )，ＡＬ，ＡＭ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物であって、該擬態物が、以下の構造Ｉ、II、III、IV、Ｖ、およびVIから選択され：ここで、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ^3'、およびＲ⁴はアミノ酸側鎖部位であり、Ｘは表１で同定される化学的部位から選択され、そしてＺは-Hまたは-CH₃である。２．生物学的に活性な薬剤を同定する方法であって、複数のコンホメーション的に制限された逆ターン擬態物をメンバーとして含むライブラリをスクリーニングする工程を包含し、ここで該擬態物は以下の構造Ｉ、II、III、IV、Ｖ、およびV Iから選択され：ここで、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ^3'、およびＲ⁴はアミノ酸側鎖部位であり、Ｘは表１で同定される化学的部位から選択され、Ｙは-CH₂-、-N(Z)-、-O-、および-S- から選択され、そしてＺは-Hまたは-CH₃であり、そしてここで該スクリーニングは適切なアッセイにおいて行われ、それによって生物学的に活性なライブラリのメンバーを同定する、方法。３．既知のアミノ酸配列を有する直線状ペプチドの生物学的に活性なコンホメーションを擬態する、生物学的に活性なコンホメーション的に制限された逆ターン擬態物を同定する方法であって、以下の工程：直線状ペプチドの既知のアミノ酸配列に基づく、コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物を構築し、鋳型ライブラリを産生する工程であって、該鋳型ライブラリが、多数の環サイズを有しコンホメーション的に制限されたβ−ターン、γ-ターン、およびβ-膨張擬態物からなる群から選択される複数のメンバーを含む、工程；該鋳型ライブラリのメンバーを適切なアッセイにおいてスクリーニングし、該鋳型ライブラリの生物学的に活性なメンバーを同定する工程；該鋳型ライブラリの該生物学的に活性なメンバーに基づいて、コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物を構築し、最適化されたライブラリを産生する工程であって、該最適化されたライブラリが、生物学的に活性な直線状ペプチドの既知のアミノ酸配列に基づく種々のアミノ酸置換物を有する複数のメンバーを含む、工程；ならびに該最適化されたライブラリのメンバーを適切なアッセイにおいてスクリーニングし、該最適化されたライブラリの生物学的に活性なメンバーを同定する工程；を包含する、方法。４．以下の構造ＩまたはIIを有する、コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物：ここで、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、およびＲ⁴はアミノ酸側鎖部位であり、Ｘは表１で同定される化学的部位から選択され、そしてＺは-Hまたは-CH₃である。５．以下の構造IIIまたはIVを有する、コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物：ここで、Ｒ¹、Ｒ²、およびＲ⁴はアミノ酸側鎖部位であり、Ｘは表１で同定される化学的部位から選択され、そしてＺは-Hまたは-CH₃である。６．以下の構造ＶまたはVIを有する、コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物：ここで、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ^3'、およびＲ⁴はアミノ酸側鎖部位であり、Ｘは表１で同定される化学的部位から選択され、そしてＺは-Hまたは-CH₃である。７．以下の構造ＩまたはIIを有する、コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物：ここで、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、およびＲ⁴はアミノ酸側鎖部位であり、Ｘはから選択され、ここでｎは１〜４であり、そしてＹは-CH₂-、-N(Z)-、-O-、および-S-から選択され、そしてＺは-Hまたは-CH₃である。８．以下の構造IIIまたはIVを有する、コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物：ここで、Ｒ¹、Ｒ²、およびＲ⁴はアミノ酸側鎖部位であり、Ｘはから選択され、ここでｎは１〜４であり、そしてＹは-CH₂-、-N(Z)-、-O-、および-S-から選択され、そしてＺは-Hまたは-CH₃である。９．以下の構造ＶまたはVIを有する、コンホメーション的に制限された逆ターン擬態物：ここで、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ^3'およびＲ⁴はアミノ酸側鎖部位であり、Ｘはから選択され、ここでｎは１〜４であり、そしてＹは-CH₂-、-N(Z)-、-O-、および-S-から選択され、そしてＺは-Hまたは-CH₃である。