JPH1057077A - 新規化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 ある種の化合物をその抗生活性についてスク
リーンするのに有用な新規な化合物を開発する必要があ
る。 【解決手段】 （ａ）配列番号２のアミノ酸１ないし６
９７を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
と少なくとも７０％の同一性を有するポリヌクレオチ
ド；（ｂ）（ａ）のポリヌクレオチドと相補性であるポ
リヌクレオチド；および（ｃ）（ａ）または（ｂ）のポ
リヌクレオチドの少なくとも１５個の連続した塩基を含
むポリヌクレオチドからなる群より選択されるポリヌク
レオチド配列を有してなる単離されたポリヌクレオチド
が、化合物の抗生活性をスクリーンするのに有用であ
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本願は英国特許仮出願番号９６０５３８
１.４（１９９６年３月１４日出願）の優先権を伴う。

【０００２】

【発明の属する技術分野】本発明は、新たに同定された
ポリヌクレオチドおよびポリペプチド、およびその製法
および使用、ならびにその変異型、作用物質および拮抗
物質、ならびにその使用に関する。特に、これらおよび
他の点に関して、本発明は、ＡＴＰaseファミリーの新
規ポリヌクレオチドおよびポリペプチド（以下、「Ｆｔ
ｓＨ」と称する）に関する。

【０００３】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】スタ
フィロコッカス（Staphylococcus）遺伝子および遺伝子
産物を抗生物質開発の目的として用いるのが特に好まし
い。スタフィロコッカスは細菌の医学的に重要な種類を
構成する。そのスタフィロコッカスは、侵入性および毒
素産生性の２種の病気を引き起こすことが知られてい
る。侵入性感染症は、一般に、皮膚表面および深部組織
の両方に影響する膿瘍の形成を特徴とする。エス・アウ
レウス（S.aureus）は癌患者における菌血症の第二の主
な要因である。骨髄炎、敗血症性関節炎、敗血性血栓静
脈炎および急性細菌性心内膜炎もまた比較的よく起こ
る。スタフィロコッカスの毒素産生性の結果として起こ
る少なくとも３つの臨床的症状がある。これらの疾患の
発症は、組織侵入および菌血症と対立するものとして外
毒素の作用に由来する。これらの症状は、スタフィロコ
ッカス食中毒、火傷様皮膚症候群および毒素ショック症
候群を包含する。

【０００４】スタフィロコッカス・アウレウス感染症の
頻度は、過去２０年間に劇的に増加してきた。これは多
重性抗生物質耐性株の出現および免疫系が低下した人の
母集団が増加したことに起因する。標準的抗生物質のい
くつかまたはすべてに対して耐性であるスタフィロコッ
カス・アウレウス株を単離することは、もはや珍しいこ
とではない。これにより、この生物についての新しい抗
菌剤および診断試験の両方についての必要性が生じてき
た。

【０００５】膜機能、細胞サイクル制御および遺伝子発
現に関与する基本的膜結合蛋白質であるＦｔｓＨは、エ
シェリヒア・コリ（Escherichia coli）において初めて
特質化された［Tomoyasu,T.，Yuki,T.，Morimura,S.，M
ori,H.，Yamanaka,K.，Niki,H.，Hiraga,S.およびOgur
a,T.（１９９３）ジャーナル・オブ・バクテリオロジー
（Journal of Bacteriology）１７５：１３４４−１３
５１］。エシェリヒア・コリのＦｔｓＨは、推定分子量
が７０.７ＫＤａの６４４アミノ酸残基を含有してな
り、２つの疎水性領域を介して細胞質膜に局在化してい
ることが明らかにされている［Tomoyasu,T.，Yamanaka,
K.，Murata,K.，Suzuki,T.，Bouloc,P.，Kato,A.，Nik
i,H.，Hiraga,S.およびOgura,T.（１９９３）ジャーナ
ル・オブ・バクテリオロジー（Journal of Bacteriolog
y）１７５：１３５２−１３５７］。これはＡＡＡ−蛋
白質として知られている新規な推定ＡＴＰaseファミリ
ーに属するものであり、その蛋白質の構成員は、真正細
菌、始原菌および真核生物の間に広く分布している［Ku
nau,W.H.，Beyer,A.，Franken,T.，Gotte,K.，Marzioc
h,M.，Saidowski,J.，Skaletz-Rorowski,AおよびWiebe
l,F.F.（１９９３）バイオヒェミー（Biochemie）７
５：２０９−２２４］。ＦｔｓＨは推定ＡＴＰ結合部
位、亜鉛結合モチーフおよび隣接するＣ末端配列を含む
２００アミノ酸残基の細胞質領域にわたってこれらのＡ
ＴＰaseと有意な相同性を示す。最近、エシェリヒア・
コリのＦｔｓＨが、エシェリヒア・コリＲＮＡポリメラ
ーゼのσ３２サブユニットのＡＴＰ依存性分解を触媒す
ることが明らかにされ［Tomoyasu,T.，Gamer,J.，Buka
u,B.，Kanemori,M.，Mori,H.，Rutman,A.J.，Oppenhei
m,A.B.，Yura,T.，Yamanaka,K.，Niki,H.，Hiraga,S.お
よびOgura,T.（１９９５）Ｔhe ＥＭＢＯ Ｊournal １
４ ２５５１−２５６０］、それ自身、転写制御におけ
る重要な要素であると考えられる。加えて、ＦｔｓＨ
は、最適な蛋白質輸送および膜の一体性の維持において
重要なＳｅｃＹの非複合形態の蛋白質分解的除去に必要
である［Kihara,A.，Akiyama,Y.，Ito,K.（１９９５）
プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミ
ー・オブ・サイエンシズ（Proceedings of the Nationa
l Academy of Sciences ＵＳＡ）９２：４５３２−４５
３６］。ＦｔｓＨ突然変異細胞におけるＳｅｃＹの過剰
産生は細胞の成長および蛋白質の輸送に悪影響を及ぼす
ことが明らかにされている。

【０００６】エシェリヒア・コリ［Tomoyasu,T.，Yuki,
T.，Morimura,S.，Mori,H.，Yamanaka,K.，Niki,H.，Hi
raga,S.およびOgura,T.（１９９３）ジャーナル・オブ
・バクテリオロジー（Journal of Bacteriology）１７
５：１３４４−１３５１］に加えて、高度に保存された
ＦｔｓＨの相同体がラクトコッカス・ラクチス（Lactoc
occus lactis）［Nilsson,D.，Lauridsen,A.A.，Tomoya
su,T.およびOgura,T.（１９９４）マイクロバイオロジ
ー（Microbiology）１４０：２６０１−２６１０］、バ
シラス・サチリス（Bacillus subtilis）［Ogasawara,
N.，Nakai,S.およびYoshikawa,H.（１９９４）ＤＮＡリ
サーチ（DNA Research）１：１−１４］およびサッカロ
ミセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）［Th
orsness,P.E.，White,K.H.およびFox,T.D.）（１９９
３）モレキュラ・アンド・セルラー・バイオロジー（Mo
lecular and cellular Biology）１３：５４１８−５４
２６、Schnall,R.,Mannhaupt,G.,Stuka,R.,Ehnle,S.,Sc
hwarzlose,C.,Vetter,I.およびFeldmann,H.（１９９
４）イースト（Yeast）１０ １１４１−１１５５］に
おいて同定されている（しかし、エシェリヒア・コリの
ＦｔｓＨを除き、これらの蛋白質のうち、精製し、生化
学的に研究されているものはない）。種々の真正細菌お
よび真核生物間の高レベルの同一性は、機能の同一性を
強く示唆するものである。ＦｔｓＨ遺伝子はエシャリヒ
ア・コリにおける細胞生存力において必要である［Tomo
yasu,T.，Yuki,T.，Morimura,S.，Mori,H.，Yamanaka,
K.，Niki,H.，Hiraga,S.およびOgura,T.（１９９３）ジ
ャーナル・オブ・バクテリオロジー（Journal of Bacte
riology）１７５：１３４４−１３５１］。ＦｓｔＨ蛋
白質の阻害剤は、転写および蛋白質輸送を中断すること
により、細菌が宿主の感染を確立し、かつ維持すること
を防止し、その結果、細菌が宿主の防御に感受性になる
ので、成長が停止し、最終的に細胞が死滅し、したがっ
て抗菌療法において有用性がある。

【０００７】本発明の新規化合物のような、抗生活性に
ついて化合物をスクリーンするのに有用な利点を有する
ファクターが必要とされているのは明らかである。この
ようなファクターは、感染、機能障害および疾患の病因
における役割を決定するのにも有用である。感染、機能
障害または疾患の予防、緩和または抑制において役割を
果たし得る、そのようなファクターおよびその拮抗物質
およびその作用物質の同定および特質化も必要とされ
る。本発明のポリペプチドは、公知のバシラス・サチリ
スＦｔｓＨ蛋白質とアミノ酸配列相同性を有する。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明の目的の一つは、
表１に示すアミノ酸配列［配列番号２］と公知アミノ酸
配列またはバシラス・サチリスＦｔｓＨ蛋白質などの他
の蛋白質の配列の間の相同性により新規ＦｔｓＨポリペ
プチドとして同定されたポリペプチドを提供することで
ある。本発明の別の目的は、ＦｔｓＨポリペプチドをコ
ードするポリヌクレオチド、特に本発明においてＦｔｓ
Ｈと称するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
を提供することである。本発明の特に好ましい具体例に
おいて、ポリヌクレオチドは、表１に示す配列［配列番
号１］を有してなるＦｔｓＨポリペプチドまたはその変
異型をコードする領域を有する。

【０００９】本発明の別の特に好ましい例において、表
１のアミノ酸配列［配列番号２］またはその変異型を含
むスタフィロコッカス・アウレウス由来の新規ＦｔｓＨ
蛋白質がある。本発明の別の態様にしたがって、ＮＣＩ
ＭＢ寄託番号４０７７１に含まれるスタフィロコッカス
・アウレウスＷＣＵＨ２９株により発現可能な成熟ポリ
ペプチドをコードする単離された核酸分子が得られる。
本発明の別の態様によれば、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノ
ムＤＮＡを含むＦｔｓＨ、特にスタフィロコッカス・ア
ウレウスＦｔｓＨをコードする単離された核酸分子が得
られる。本発明の別の具体例は、生物学上、診断上、予
防上、臨床上または治療上有用な変異型およびこれを含
む組成物を包含する。

【００１０】本発明の別の態様にしたがって、本発明の
ポリヌクレオチドは治療または予防目的、特に遺伝免疫
化についての使用を提供する。とりわけ、本発明の特に
好ましい具体例は、天然に存在するＦｔｓＨの対立遺伝
子変異型およびそれによりコードされるポリペプチドで
ある。本発明の別の態様によれば、本明細書においてＦ
ｔｓＨと称されるスタフィロコッカス・アウレウスの新
規ポリペプチドならびにその生物学上、診断上、予防
上、臨床上また治療上有用な変異型およびこれを含む組
成物が提供される。

【００１１】とりわけ、本発明の特に好ましい具体例
は、天然に存在するＦｔｓＨ遺伝子の対立遺伝子により
コードされるＦｔｓＨポリペプチドの変異型である。本
発明の好ましい具体例において、前記ＦｔｓＨポリペプ
チドの産生法が提供される。本発明のもう一つ別の態様
に従って、例えば抗体を含む抗菌剤として有用な、この
ようなポリペプチドの阻害剤が提供される。本発明のあ
る種の好ましい具体例に従って、ＦｔｓＨ発現の評価、
疾患、例えば、上部呼吸管（例えば、中耳炎、細菌性気
管炎、急性咽頭蓋炎、甲状腺炎)、下部呼吸器（例え
ば、蓄膿、肺膿瘍)、心臓（例えば、感染性心内膜
炎）、胃腸管（例えば、分泌性下痢、脾膿瘍、後腹膜膿
瘍)、ＣＮＳ（例えば、脳膿瘍）、眼（例えば、眼瞼
炎、結膜炎、角膜炎、内眼球炎、前中隔膜および眼高フ
レグモーネ、涙嚢炎）、腎臓および尿管（例えば、副睾
丸炎、腎内および腎周囲膿瘍、毒性ショック症候群)、
皮膚（例えば、とびひ、毛包炎、皮下膿瘍、フレグモー
ネ、傷感染症、細菌性筋炎）、骨および関節（例えば、
敗血性関節炎、骨髄炎）の感染症などの疾患の治療、遺
伝変異の検定およびＦｔｓＨポリペプチドまたはポリヌ
クレオチドを細菌、特にスタフィロコッカス・アウレウ
ス菌に対する免疫学的応答を起こすために生物に投与す
ることについての生成物、組成物および方法が提供され
る。

【００１２】本発明のこの態様および他の態様のある種
の好ましい具体例において、特に厳格な条件下、Ｆｔｓ
Ｈポリヌクレオチド配列とハイブリダイゼーションする
ポリヌクレオチドが提供される。本発明のある種の好ま
しい具体例において、ＦｔｓＨポリペプチドに対する抗
体が提供される。

【００１３】本発明の他の具体例において、本発明のポ
リペプチドまたはポリヌクレオチドと結合するか、さも
なければ相互作用し、活性を阻害するかまたは活性化す
る化合物の同定法であって、本発明のポリペプチドまた
はポリヌクレオチドをスクリーンされるべき化合物と、
化合物とポリペプチドまたはポリヌクレオチドの間に結
合または他の相互作用が起きるような条件下で接触させ
て、化合物との結合または他の相互作用を評価し（この
ような結合または相互作用はポリペプチドまたはポリヌ
クレオチドの化合物との結合または相互作用に応じて検
出可能なシグナルを提供しうる別の成分と関連する）；
化合物のポリペプチドまたはポリヌクレオチドとの結合
により生じるシグナルの存在または不在を検出すること
により、化合物がポリペプチドまたはポリヌクレオチド
と結合するか、さもなければ相互作用し、その活性を活
性化するかまたは阻害するかどうかを測定することから
なる方法が提供される。

【００１４】本発明のもう一つ別の態様に従って、Ｆｔ
ｓＨ作用物質および拮抗物質、好ましくは静菌性または
殺菌性作用物質および拮抗物質が提供される。本発明の
さらに別の態様に従って、単細胞または多細胞生物に対
する適用に関するＦｔｓＨポリヌクレオチドまたはＦｔ
ｓＨポリペプチドを含有してなる組成物が提供される。
開示された発明の精神および範囲内にある種々の変形お
よび修飾は、以下の記載および本開示の他の部分から当
業者には容易に明らかとなるであろう。

【００１５】用語の定義 本明細書において頻繁に用いられる用語の理解を助ける
ために、以下の定義を示す。「宿主細胞」は、外因性ポ
リヌクレオチド配列により形質転換またはトランスフェ
クションされるか、または形質転換またはトランスフェ
クション能を有する細胞である。

【００１６】当業界で知られる「同一性」は配列の比較
により決定されるような２またはそれ以上のポリペプチ
ド配列または２またはそれ以上の配列の間の関係であ
る。当該分野において、「同一性」はまた、このような
配列の鎖の間の一致により測定されるようなポリペプチ
ドまたはポリヌクレオチド配列間の配列関連性の程度を
も意味する。「同一性」および「類似性」は、［コンピ
ューテイショナル・モレキュラ・バイオロジー（Comput
ational Molecular Biology）、レスク、エイ・エム（L
esk,A.M.）編、Oxford University Press，New York，
１９８８；バイオコンピューティング：インフォーマテ
ィクス・アンド・ジェノム・プロジェクツ（Biocomputi
ng:Informatics and Genome Projects）、スミス、ディ
ー・ダブリュー（Smith,D.W.）編、Academic Press，Ne
w York，１９９３；コンピューター・アナリシス・オブ
・シーケンス・データ（Computer Analysis of Sequenc
e Data）、第Ｉ部、グリフィン、エイ・エム（Griffin,
A.M.）およびグリフィン、エイチ・ジー（Griffin,H.
G.）編、Humana Press，New Jersey，１９９４；シーケ
ンス・アナリシス・イン・モレキュラ・バイオロジー
（Sequence Analysis in Molecular Biology）、フォン
・ハインジ、ジー（von Heinje,G.）Acadeic Press，１
９８７；シーケンス・アナリシス・プライマー（Sequen
ce Analysis Primer）、グリブスコフ、エム（Gribsko
v,M.）およびデベルクス、ジェイ（Devereux,J.）編、M
Stockton Press，New York，１９９１；およびカリ
ロ、エイチ（Carillo,H.）およびリプマン、ディー（Li
pman,D.）エスアイエイエム ジャーナル・オブ・アプ
ライド・マスマティックス（SIAM J.Applied Math.）、
４８：１０７３（１９８８）］に記載されているような
もの（これに限定されない)を含む公知方法により計算
できる。同一性を測定する好ましい方法は、試験する配
列の間に最大の一致が得られるように設計される。同一
性および類似性の測定方法は、公的に入手可能なコンピ
ュータープログラムにおいて集成される。２つの配列の
間の同一性および類似性を測定する好ましいコンピュー
タープログラム法は、ＧＣＧプログラム・パッケージ
［デベルクス．ジェイ（Devereux,J.）ら、ニュークレ
イック・アシッズ・リサーチ（Nucleic Acids、Researc
h）１２（１)：３８７（１９８４）］、ＢＬＡＳＴＰ、
ＢＬＡＳＴＮおよびＦＡＳＴＡ［アチュル、エス・エフ
（Atschul,S.F.）ら、ジャーナル・オブ・モレキュラ・
バイオロジー（J.Molec.Biol.）２１５：４０３−４１
０（１９９０）］を含むが、これに限定されない。ＢＬ
ＡＳＴ ＸプログラムはＮＣＢＩおよび他の供給源から
こと公的に入手可能である ［ＢＬＡＳＴマニュアル
（アルチュル、エス（Altschul,S.）ら、NCBI NLM NIH
Bethesda，MD20894；アルチュル、エス（Altschul,S.）
ら、ジャーナル・オブ・モレキュラ・バイオロジー（J.
Molec.Biol.）２１５：４０３−４１０（１９９
０）］。

【００１７】「単離された」は、「人工的に」その自然
の状態から変形されたこと、すなわち、天然に存在する
場合に、そのもとの環境から変化するかまたは取り出さ
れるか、またはその両方を意味する。例えば、生体内に
天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチド
は、「単離された」ではないが、その自然状態の共存物
質から分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドは、本発明において用いる用語の意味で「単離され
た」である。「ポリヌクレオチド」は、一般に、非修飾
ＲＮＡまたはＤＮＡあるいは修飾ＲＮＡまたはＤＮＡで
あるポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌク
レオチドを意味する。「ポリヌクレオチド」は、限定す
ることなく、一本および二本鎖ＤＮＡを包含し、一本鎖
および二本鎖領域または一本鎖、二本鎖および三本鎖領
域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、
および一本鎖および二本鎖領域の混合物であるＲＮＡ、
一本鎖、より典型的には、二本鎖、または三本鎖領域、
あるいは一本鎖および二本鎖領域の混合物であってもよ
いＤＮＡおよびＲＮＡを含むハイブリッド分子を全て包
含する。加えて、本明細書において用いる「ポリヌクレ
オチド」は、ＲＮＡまたはＤＮＡあるいはＲＮＡおよび
ＤＮＡの両方を含む三本鎖領域を意味する。このような
領域中にある鎖は同じ分子または異なる分子に由来す
る。領域は、１またはそれ以上の分子を包含するが、よ
り典型的には分子のうちのいくつかの領域のみを含む。
三重螺旋領域の分子の１つをポリヌクレオチドと称する
ことが多い。本明細書において用いる場合、「ポリヌク
レオチド」なる用語はまた、１またはそれ以上の修飾さ
れた塩基を含む前記のようなＤＮＡまたはＲＮＡも包含
する。このように、安定性についてまたは他の理由のた
めに修飾された主鎖骨格を有するＤＮＡまたはＲＮＡは
本発明にいう「ポリヌクレオチド」である。さらに、イ
ノシンなどの希少な塩基、またはトリチル化塩基などの
修飾塩基を含有してなるＤＮＡまたはＲＮＡは、二例だ
けを挙げるが、本明細書にいう「ポリヌクレオチド」で
ある。非常に多種のの修飾が当業界で公知の多くの有用
な目的のために役立つＤＮＡおよびＲＮＡについてなさ
れるのは明らかである。本明細書において用いる場合
「ポリヌクレオチド」なる語は、このような化学的、酵
素的または代謝的に修飾された形態のポリヌクレオチ
ド、ならびにウイルスおよび例えば単純および複雑な細
胞を含む細胞に特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形
態を包含する。「ポリヌクレオチド」はまたしばしばオ
リゴヌクレオチドと称する短鎖ポリヌクレオチドも包含
する。

【００１８】「ポリペプチド」はペプチド結合または修
飾ペプチド結合により互いに結合した１またはそれ以上
のアミノ酸を含むいずれのペプチドまたは蛋白質をも意
味する。「ポリペプチド」は、一般にペプチド、オリゴ
ペプチドおよびオリゴマーと称する短鎖、および一般に
蛋白質と称する長鎖の両方を意味する。ポリペプチドは
２０の遺伝子でコードされたアミノ酸以外のアミノ酸を
含んでもよい。「ポリペプチド」は自然のプロセス、例
えばプロセッシングおよび他の翻訳後の修飾だけでな
く、化学的修飾技術により修飾されるものを包含する。
このような修飾は基本テキスト、より詳細な専門論文、
ならびに多数の研究文献に記載されており、これらは当
業者には周知である。同じ種類の修飾は特定のポリペプ
チドにおけるいくつかの部位で同程度または色々な程度
で存在しうると考えられる。また、特定のポリペプチド
は多くの型の修飾を有していてもよい。修飾は、ペプチ
ド主鎖骨格、アミノ酸側鎖、およびアミノまたはカルボ
キシル末端を含むポリペプチド中のいかなるところでも
起こりうる。修飾は、例えば、アセチル化、アシル化、
ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、
ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド
誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、
ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、
ジスルフィド結合の形成、脱メチル化、共有架橋の形
成、システインの形成、ピログルタミン酸塩の形成、ホ
ルミル化、ガンマ−カルボキシル化、グリコシル化、Ｇ
ＰＩアンカーの形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチ
ル化、ミリストイル化、酸化、蛋白質加水分解的プロセ
ッシング、ホスホリル化、プレニル化、ラセミ化、グリ
コシル化、脂質結合、硫酸塩化、グルタミン酸残基のガ
ンマ−カルボキシル化、ヒドロキシル化およびＡＤＰ−
リボシル化、セレノイル化、硫酸塩化、トランスファー
ＲＮＡに媒介されるアミノ酸の蛋白質への付加、例えば
アルギニル化およびユビキチン化を包含する。例えば、
プロテインズ−ストラクチャー・アンド・モレキュラ・
プロパティーズ（PROTEINS-STRUCTURE AND MOLECULAR P
ROPERTIES）第２版、ティー・イー・クレイトン、ダブ
リュー・エイチ・フリーマン（T.E.Creighton,W.H.Free
man）および共同研究者、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９
３）およびウォルド、エフ（Wold,F.）、ポストトラン
スレイショナル・プロテイン・モディフィケイション
ズ：パースペクティブズ・アンド・プロスペクツ（Post
translational Modifications:Perspective and Prospe
cts）、ｐ１−１２ ポストトランスレイショナル・コ
バレント・モディフィケイション・オブ・プロテインズ
（POSTTRANSLATIONAL COVALENT MODIFICATION OF PROTE
INS）、ビー・シー・ジョンソン（B.C.Johnson）編、Ac
ademic Press，New York（１９８３）：サイフター（Se
ifter）ら、メソッズ・イン・エンザイモロジー（Meth.
Enzymol.）、１８２：６２６−６４６（１９９０）およ
びラタン（Rattan）ら、プロテイン・シンセシス：ポス
トトランスレイショナル・モディフィケイションズ・ア
ンド・エイジング（Proteins Synthesis：Posttranslat
ional Modifications and Aging，Ann.N.Y.Acad.Sci．
６６３：４８−６２（１９９２）を参照のこと。ポリペ
プチドは分枝または環状でもよく、側鎖を有しても、有
していなくてもよい。環状、分枝および分枝環状ポリペ
プチドは、翻訳後の自然のプロセスから得られ、完全な
合成的手法によっても産生しうる。

【００１９】本明細書で用いる「変異型」なる用語は、
各々、対照物のポリヌクレオチドまたはポリペプチドと
異なるが、基本的性質は保持しているポリヌクレオチド
またはポリペプチドである。ポリヌクレオチドの典型的
な変異型は、別の対照物のポリヌクレオチドとヌクレオ
チド配列が異なっている。変異型のヌクレオチド配列に
おける違いは対照物のポリヌクレオチドによりコードさ
れるポリペプチドのアミノ酸配列を変更してもまたは変
更しなくてもよい。ヌクレオチドの違いは、以下に記載
するように、対照物の配列によりコードされるポリペプ
チドにおいてアミノ酸置換、付加、欠失、融合および切
形を生じさせる。ポリペプチドの典型的な変異型は、別
の対照物のポリペプチドとアミノ酸配列が異なる。一般
に、違いは限られていて、そのため対照物のポリペプチ
ドおよび変異型の配列は全体として非常によく似てお
り、多くの領域で一致している。変異型および対照物の
ポリペプチドはいかなる組み合わせでも１またはそれ以
上の置換、付加、欠失によりアミノ酸配列が異なってい
る。置換または挿入されたアミノ酸残基は、遺伝コード
によりコードされるものであってもよくまたはなくても
よい。ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの変異型
は、対立変異型のような天然に存在するものであるか、
または天然に存在することが知られていない変異型であ
ってもよい。天然に存在しないポリヌクレオチドまたは
ポリペプチドの変異型は、突然変異誘発技術、直接合
成、および他の当業者に公知の組換え法により産生され
る。

【００２０】

【発明の実施の形態】本発明は、以下により詳細に記載
する新規ＦｔｓＨポリペプチドおよびポリヌクレオチド
に関する。特に、本発明はスタフィロコッカス・アウレ
ウスの新規ＦｔｓＨのポリペプチドおよびポリヌクレオ
チドであって、アミノ酸配列の相同性によりバシラス・
サチリスＦｔｓＨポリペプチドと関連するものに関す
る。本発明は、さらには、表１［配列番号１］および表
１［配列番号２］に示すヌクレオチドおよびアミノ酸を
有するＦｔｓＨに関し、ＮＣＩＭＢに寄託番号４０７７
１で寄託されているＤＮＡのＦｔｓＨヌクレオチド配列
およびこれによりコードされるアミノ酸配列に関する。

【００２１】表 １ スタフィロコッカス・アウレウスＦｔｓＨのポリヌクレ
オチドおよびポリペプチド配列 ＦｔｓＨポリヌクレオチド配列［配列番号１］

【００２２】

【化１】

【００２３】この表のポリヌクレオチド配列に由来する
ＦｔｓＨポリペプチド配列［配列番号２］

【００２４】

【化２】

【００２５】寄託物質 スタフィロコッカス・アウレウスＷＣＵＨ２９株を含む
寄託物は、ナショナル・コレクション・オブ・インダス
トリアル・アンド・マリン・バクテリア社（National C
ollection of Industrial and Marine Bacteria Ltd.
（ＮＣＩＭＢ）（２３ St.Machar Drive，Aberdeen A
B2 1RY，Scotland）に１９９５年９月１１日、ＮＣＩＭ
Ｂ寄託番号４０７７１で寄託されている。この寄託され
ているスタフィロコッカス・アウレウス株を、本明細書
において、「寄託株」または「寄託株のＤＮＡ」と称す
る。

【００２６】寄託物質は、完全長ＦｔｓＨ ＤＮＡを含
有し、寄託後に「ＮＣＩＭＢ ４０７７１」と称される
株である。該寄託物質に含まれるポリヌクレオチドの配
列、ならびにこれによりコードされるポリペプチドのア
ミノ酸配列は、本発明における配列の記載と対立する事
象を調節する。寄託物は特許目的に関する微生物の寄託
に関する国際協定ブダペスト条約の取り決めの下になさ
れる。株は、取り消し不能で、限定なく、または特許が
付与されると公衆に解放される状況にある。寄託物は単
に当業者の便宜のためのみに提供され、３５Ｕ.Ｓ.Ｃ.
§１１２の下に要求されるような、寄託が実施のために
必要とされる承認事項ではない。寄託物質の製造、使用
または販売には許可が必要で、かかる許可がこれにより
授与されるものではない。

【００２７】ポリペプチド 本発明のポリペプチドは表１のポリペプチド［配列番号
２］（特に成熟ポリペプチド）ならびにポリペプチドお
よびフラグメント、特にＦｔｓＨの生物学的活性を有す
るもの、および表１のポリペプチド［配列番号２］また
はその関連する部分と少なくとも７０％の同一性、好ま
しくは表１［配列番号２］のポリペプチドと少なくとも
８０％の同一性、より好ましくは表１のポリペプチド
［配列番号２］と少なくとも９０％の類似性（より好ま
しくは少なくとも９０％の同一性）、さらにより好まし
くは表１のポリペプチド［配列番号２］と少なくとも９
５％の類似性（さらにより好ましくは９５％の同一性）
を有するものを含み、また一般に少なくとも３０アミノ
酸、より好ましくは少なくとも５０アミノ酸を含むポリ
ペプチドのこのような部分を有するポリペプチドを包含
する。

【００２８】フラグメントは前記ポリペプチドのアミノ
酸配列の全部ではないが一部と完全に同じアミノ酸配列
を有する変異型ポリペプチドである。ＦｔｓＨポリペプ
チドに関して、フラグメントは「独立」であるか、また
は一部または一領域を形成するより大きなポリペプチド
内に含まれるか、もっとも好ましくは単一の連続領域、
単一のより大きなポリペプチドとして存在する。

【００２９】好ましいフラグメントは、例えば、表１の
アミノ酸配列［配列番号２］の一部を有する楔形ポリペ
プチド、またはその変異型、例えばアミノ末端を含む一
連の残基、またはカルボキシル末端を含む一連の残基を
包含する。宿主細胞、特にスタフィロコッカス・アウレ
ウスにおける本発明のポリペプチドの減成形態も好まし
い。アルファーヘリックスおよびアルファーヘリックス
形成領域、ベーターシートおよびベーターシート形成領
域、ターンおよびターン形成領域、コイルおよびコイル
形成領域、親水性領域、疎水性領域、アルファー両親媒
性領域、ベータ両親媒性領域、柔軟性領域、表面形成領
域、基質結合領域、および高抗原性インデックス領域を
含むフラグメントなどの構造または機能的性質を特徴と
するフラグメントがさらに好ましい。

【００３０】同様な活性またはよりすぐれた活性を有す
るか、または望ましくない活性が少ないものを含むＦｔ
ｓＨの活性を媒介するフラグメントである生物学的に活
性なフラグメントも好ましい。動物において、特に人に
おいて抗原性または免疫原性であるフラグメントも包含
される。特に好ましいのは、スタフィロコッカス・アウ
レウスの生存性に必須の機能を与えるレセプターまたは
酵素領域を含むか、または個体、特に人における病気の
原因を開始または維持する能力を有するフラグメントで
ある。本発明のポリペプチドのフラグメントである変異
型はペプチド合成による対応する完全長ポリペプチドの
産生に用いられ、したがって、これらの変異型は本発明
の完全長ポリペプチドの産生の中間体として用いられ
る。

【００３１】ポリヌクレオチド 本発明の別の態様は、表１の推定アミノ酸配列［配列番
号２］を有するＦｔｓＨをコードする単離されたポリヌ
クレオチドおよびこれに緊密に関連するポリヌクレオチ
ドおよびその変異型に関する。表１に示すポリヌクレオ
チド配列［配列番号１］などの本明細書に示した情報を
用いて、ＦｔｓＨポリペプチドをコードする本発明のポ
リヌクレオチドは、標準的クローニングおよびスクリー
ニング法、例えばスタフィロコッカス・アウレスＷＣＵ
Ｈ２９細胞を出発物質として用いたバクテリア由来の染
色体ＤＮＡフラグメントのクローニングおよび配列化な
どの方法と、それに続いて完全長クローンを得ることに
より得られる。例えば、表１に示す配列［配列番号１］
などの本発明のポリヌクレオチド配列を得るためには、
典型的には、イー・コリまたは他の適当な宿主における
スタフィロコッカス・アウレスＷＣＵＨ２９の染色体Ｄ
ＮＡのクローンのライブラリーを部分配列由来の放射標
識したオリゴヌクレオチド、好ましくは１７ｍｅｒまた
はそれ以上のものでプローブ化する。プローブのＤＮＡ
と同一のＤＮＡを有するクローンは厳密な条件を用いて
区別できる。このようにして元の配列から設計された配
列決定プライマーで同定された個々のクローンを配列決
定することにより、両方向に配列を延ばして、完全遺伝
子配列を決定することができる。都合よくは、このよう
な配列決定は、プラスミドクローンから調製された変性
二本鎖ＤＮＡを用いて行われる。適当な技術は、マニア
ティス、ティー、フリッシュ、イー・エフおよびサムブ
ルック（Maniatis,T.，Fritsch,E.F.and Sambrook）
ら、モレキュラ・クローニング、ア・ラボラトリー・マ
ニュアル（MOLECULAR CLONING,A LABORATORY MANUA
L）、第２版；Cold，Spring Harbor Laboratory Pres
s，Cold Spring Harbor，New York（１９８９）に記載
されている。（特に、ハイブリダイゼーションによるス
クリーニング１．９０および変性二本鎖ＤＮＡ鋳型の配
列決定１３.７０を参照のこと）。本発明の例として、
表１に示すポリヌクレオチド配列［配列番号１］がスタ
フィロコッカス・アウレスＷＣＵＨ２９細胞由来のＤＮ
Ａライブラリーにおいて見いだされた。

【００３２】表１に示すＤＮＡ配列［配列番号１］は当
該分野において周知のアミノ酸残基の分子量から計算で
きる推定分子量の表１に示すアミノ酸残基［配列番号
２］を有する蛋白質をコードするオープンリーディング
フレームを含有する。本発明のＦｔｓＨは、寄託株のＦ
ｔｓＨをコードするＤＮＡの配列決定の結果により示さ
れるようにＡＴＰaseファミリーの他の蛋白質と構造的
に関連している。蛋白質は公知の蛋白質のうち、バシラ
ス・サチリスＦｔｓＨ蛋白質と最大の相同性を示す。表
１のＦｔｓＨ［配列番号１］はその全長にわたりバシラ
ス・サチリスＦｔｓＨポリペプチドのアミノ酸配列と約
６７％の同一性を有する。

【００３３】本発明はその全長にわたり、表１のコーデ
ィング配列［配列番号１］と同一であるポリヌクレオチ
ド配列を提供する。また、本発明により、成熟ポリペプ
チドまたはそのフラグメントのコーディング配列それ自
身ならびに他のコーディング配列を有するリーディング
フレームにおける成熟ポリペプチドまたはフラグメント
のコーディング配列、例えばリーダーまたはセクレタリ
ー配列、プレまたはプロまたはプレプロ蛋白質配列をコ
ードするものなども提供される。ポリヌクレオチドはま
た、例えば非コーディング５’および３’配列、例えば
転写、非翻訳配列、終止シグナル、リボソーム結合部
位、ｍＲＮＡを安定化させる配列、イントロン、ポリア
デニル化シグナル、およびさらに別のアミノ酸をコード
する別のコーディング配列など（これに限定されない）
も含有する。例えば、融合ポリペプチドの精製を促進す
るマーカー配列をコードできる。本発明の一具体例にお
いて、マーカー配列はｐＱＥベクター（キアゲン社製
品）において得られ、ゲンツ（Gentz）ら、プロシーデ
ィングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・
サイエンシズ（Proc.Natl.Acad.Sci.，ＵＳＡ）８６：
８２１−８２４に記載されているようなヘキサヒスチジ
ンペプチドまたはＨＡ ｔａｇ［ウィルソン（Wilson)
ら、セル（Cell）３７：７６７（１９８４）］である。
本発明のポリヌクレオチドはまた、構造遺伝子および遺
伝子発現を調節するその自然に関連する配列を含むポリ
ペプチド（これに限定されない）も包含する。

【００３４】本発明において用いる「ポリペプチドをコ
ードするポリヌクレオチド」なる語は、本発明のポリペ
プチド、特に細菌性ポリペプチド、特に表１に示すアミ
ノ酸配列［配列番号２］を有するスタフィロコッカス・
アウレウスＦｔｓＨのポリペプチドをコードする配列を
包含するポリヌクレオチドを包含する。この用語はま
た、ポリペプチドをコードする一つの連続した領域また
は不連続な領域（例えば、集成ファージまたは挿入配列
または編集により中断される）を含むポリヌクレオチド
と、別の領域であって、これもまたコーディングおよび
／または非コーディング配列を含むものを一緒に包含す
る。

【００３５】本発明はさらに、表１に示す推定アミノ酸
配列［配列番号２］を有するポリペプチドの変異型をコ
ードする本明細書において記載するポリヌクレオチドの
変異型に関する。本発明のポリヌクレオチドのフラグメ
ントである変異型は本発明の完全長ポリヌクレオチドを
合成するのに用いられる。さらに特に好ましい具体例
は、表１のＦｔｓＨポリペプチドのアミノ酸配列［配列
番号２］を有するＦｔｓＨ変異型をコードするポリヌク
レオチドであり、ここに数個、２、３個、５ないし１０
個、１ないし５個、１ないし３個、２、１または０個の
アミノ酸残基が置換、欠失または付加されているかまた
はその組み合わせである。これらのうち特に好ましいの
は、ＦｔｓＨの性質および活性を変更しないサイレント
置換、付加および欠失である。

【００３６】本発明のさらに好ましい具体例は、表１に
示すアミノ酸配列［配列番号２］を有するＦｔｓＨポリ
ペプチドをコードするポリヌクレオチドとその全長にわ
たり少なくとも７０％が同一であるポリヌクレオチド、
およびこのようなポリヌクレオチドと相補的なポリヌク
レオチドである。あるいは、もっとも好ましいのは、寄
託株のＦｔｓＨポリペプチドをコードするポリヌクレオ
チドおよびこれに相補的なポリヌクレオチドとその全長
にわたり、少なくとも８０％同一である領域を含むポリ
ヌクレオチドである。この点に関して、同一物とその全
長にわたり少なくとも９０％同一であるポリヌクレオチ
ドが特に好ましく、特に好ましいこれらのポリヌクレオ
チドうち、少なくとも９５％同一であるものが特に好ま
しい。さらに、少なくとも９７％同一であるものが少な
くとも９５％同一であるもののうちで大変好ましく、少
なくとも９８％同一であるものおよび少なくとも９９％
同一であるものが特に非常に好ましく、少なくとも９９
％同一であるものがより好ましい。

【００３７】好ましい具体例は、表１のＤＮＡ［配列番
号１］によりコードされる成熟ポリペプチドと実質的に
同一の生物学的機能または活性を保持するポリペプチド
をコードするポリヌクレオチドである。

【００３８】本発明はさらに本明細書においてすでに記
載した配列とハイブリダイゼーションするポリヌクレオ
チドに関する。この点に関して、本発明は特に厳しい条
件下で本明細書においてすでに記載したポリヌクレオチ
ドとハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドに関
する。本明細書において用いる場合、「厳しい条件」お
よび「厳しいハイブリダイゼーション条件」なる用語
は、配列間に少なくとも９５％、好ましくは少なくとも
９７％の同一性がある場合にのみハイブリダイゼーショ
ンが起こることを意味する。厳しいハイブリダイゼーシ
ョン条件の例は、４２℃で、５０％ホルムアミド、５×
ＳＳＣ（１５０ｍＭ ＮaＣl、１５ｍＭクエン酸三ナト
リウム）、５０ｍＭ リン酸ナトリウム（pＨ７.６）、
５×デンハード溶液、１０％硫酸デキストラン、および
２０微生物／変性、剪断鮭精子ＤＮＡを含む溶液中で一
夜インキュベートし、つづいてハイブリダイゼーション
支持体を０.１×ＳＳＣ中約６５℃で洗浄することであ
る。ハイブリダイゼーションおよび洗浄条件は周知であ
り、サムブルック（Sambrook）ら、モレキュラー・クロ
ーニング：ア・ラボラトリー・マニュアル（Molecular
Cloning：A Laboratory Manual.）、第２版、Cold Spri
ng Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor，N.Y.（１
９８９）、特にその第１１章］に例示されている。

【００３９】本発明はまた、基本的に、厳しいハイブリ
ダイゼーション条件下での、配列番号１に示すポリヌク
レオチド配列またはそのフラグメントの配列を有するプ
ローブを用いて配列番号１に示すポリヌクレオチド配列
について完全な遺伝子を含む適当なライブラリーのスク
リーニング；および前記ＤＮＡ配列の単離により得られ
るポリヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドも提
供する。このようなポリヌクレオチドを得るのに有用な
フラグメントは、例えば、本明細書に記載するプローブ
およびプライマーを包含する。

【００４０】本発明のポリヌクレオチド検定に関してさ
らに記載すると、例えば、前記の本発明のポリヌクレオ
チドは、ＦｔｓＨをコードする完全長ｃＤＮＡおよびゲ
ノムクローンを単離するため、およびＦｔｓＨ遺伝子と
高い配列類似性を有する他の遺伝子のｃＤＮＡおよびゲ
ノムクローンを単離するために、ＲＮＡ、ｃＤＮＡおよ
びゲノムＤＮＡについてのハイブリダイゼーションプロ
ーブとして用いられる。このようなプローブは一般に、
少なくとも１５塩基を含有してなるであろう。好ましく
は、このようなプローブは少なくとも３０塩基を有し、
少なくとも５０塩基を有してもよい。特に好ましいプロ
ーブは少なくとも３０塩基を有し、５０塩基またはそれ
以下を有するであろう。

【００４１】例えば、オリゴヌクレオチドプローブを合
成するためにＦｔｓＨ遺伝子のコーディング領域は、配
列番号１において示される公知ＤＮＡ配列を用いたスク
リーニングにより単離される。本発明の遺伝子と相補的
な配列を有する標識したオリゴヌクレオチドはｃＤＮ
Ａ、ゲノムＤＮＡまたはｍＲＮＡのライブラリーをスク
リーンし、ライブラリーのうちのどれとプローブがハイ
ブリダイゼーションするかを測定するために用いられ
る。

【００４２】本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプ
チドは、例えば、本明細書においてポリヌクレオチドの
試験に関してさらに記載するような疾患、特に人の疾患
の治療および診断法の発見用研究試薬および物質として
用いられる。配列番号１および／または２の配列由来の
オリゴヌクレオチドである本発明のポリヌクレオチド
は、本明細書において記載する方法において、好ましく
はＰＣＲに関して、本明細書において同定したポリヌク
レオチドが感染組織におけるバクテリア中に全部または
一部が転写されたかどうかを測定するために用いられ
る。このような配列はまた病原体が達成した感染の段階
および感染の種類の診断においても有用性を有する。

【００４３】本発明はまた、成熟蛋白質＋別のアミノま
たはカルボキシル末端アミノ酸、または成熟ポリペプチ
ドに対するアミノ酸インテリア（成熟形態が例えば１つ
のポリペプチド鎖以上を有する場合）であるポリペプチ
ドをコードするポリヌクレオチドを提供する。このよう
な配列は前駆体から成熟形態への蛋白質のプロセッシン
グにおいて有用で、とりわけ蛋白質を輸送し、蛋白質の
半減期を延長したり短縮し、検定または産生についての
蛋白質の操作を容易にする。in vivoの場合、一般に、
別のアミノ酸は細胞酵素により成熟蛋白質と別に加工さ
れる。

【００４４】１またはそれ以上のプロ配列と融合したポ
リペプチドの成熟形態を有する前駆体蛋白質はポリペプ
チドの不活性形態である。プロ配列を除去すると、この
ような不活性前駆体は一般に活性化される。プロ配列の
一部またはすべてを活性化前に除去する。一般に、この
ような前駆体をプロ蛋白質と称する。

【００４５】要するに、本発明のポリヌクレオチドは成
熟蛋白質、成熟蛋白質＋リーダー配列（プレ蛋白質と称
する）、プレ蛋白質のリーダー配列でない１またはそれ
以上のプロ配列を有する成熟蛋白質の前駆体、あるいは
リーダー配列および一般に、ポリペプチドの活性および
成熟形態を産生するプロセッシング段階で除去される１
またはそれ以上のプロ配列を有する、プロ蛋白質の前駆
体であるプレプロ蛋白質をコードする。

【００４６】ベクター、宿主細胞、発現 本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドを含んでなる
ベクター、本発明のベクターで遺伝子操作される宿主細
胞および組換え技術による本発明のポリペプチドの産生
に関する。細胞を含まない翻訳システムも本発明のＤＮ
Ａ構築物由来のＲＮＡを用いてこのような蛋白質を産生
するのに用いることができる。

【００４７】組換え産生について、宿主細胞は発現系ま
たはその一部または本発明のポリヌクレオチドを組み込
むために遺伝子操作できる。ポリヌクレオチドの宿主細
胞中への導入は、多くの標準的実験マニュアル、例え
ば、デイビス（Davis）ら、ベイシック・メソッズ・イ
ン・モレキュラ・バイオロジー（BASIC METHODS IN MOL
ECULAR BIOLOGY（１９８６）およびサムブルック（Samb
rook）ら、モレキュラー・クローニング：ア・ラボラト
リー・マニュアル（MOLECULAR CLONING：A LABORATORY
MANUAL）、第２版、Cold Spring Harbor Laboratory，C
old Spring Harbor，NY（１９８９）などに記載された
方法、例えば、リン酸カルシウムトランスフェクショ
ン、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクショ
ン、トランスベクション、マイクロインジェクション、
カチオン脂質媒介トランスフェクション、電気泳動、形
質導入、スクレイプローディング、衝動導入および感染
により行うことができる。

【００４８】適当な宿主の代表例は、ストレプトコッカ
ス、スタフィロコッカス、エンテロコッカス・イー・コ
リ、ストレプトマイセスおよびバシラス・サチリス細胞
などの細菌細胞；酵母細胞およびアスペルギルス細胞な
どの真菌細胞；ショウジョウバエＳ２およびスポドプテ
ラＳｆ９細胞などの昆虫細胞；ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨｅＬ
ａ、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＢＨＫ、２９３およびＢowes黒
色腫細胞などの動物細胞；および植物細胞を包含する。

【００４９】種々の発現系を本発明のポリペプチドの産
生に用いることができる。このようなベクターは、特
に、染色体、エピソームおよびウイルス由来のベクタ
ー、例えばバクテリアプラスミド、バクテリオファー
ジ、トランスポゾン、酵母エピソーム、挿入エレメン
ト、酵母染色体エレメント、バクロウイルス、ＳＶ４０
などのパポーバウイルス、ワクシニアウイルス、アデノ
ウイルス、鶏痘ウイルス、疑似狂犬病ウイルスおよびレ
トロウイルスなどのウイルス由来のベクター、およびそ
の組み合わせ由来のベクター、例えばコスミッドおよび
ファージミッドなどのプラスミドおよびバクテリオファ
ージ遺伝子エレメント由来のものを包含する。発現系構
築物は、発現を制御し、引き起こす調節領域を含有す
る。一般に、ポリヌクレオチドの維持、増殖または発現
および／または宿主におけるポリペプチドの発現に適し
た系またはベクターはこの点に関して発現に用いること
ができる。適当なＤＮＡ配列は種々の周知の慣例技術、
例えばサムブルック（Sambrook）ら、モレキュラ・クロ
ーニング、ア・ラボラトリー・マニュアル（MOLECULAR
CLONING，A LABORATORY MANUAL）（前掲）に記載された
ものにより発現系中に挿入される。

【００５０】翻訳された蛋白質の小胞体のルーメン中、
ペリプラスム間隙中または細胞外環境中への分泌に関し
て、適当な分泌シグナルは発現されたポリペプチド中に
組み込まれる。これらのシグナルはポリペプチドに対し
て内因性であるかまたはヘテロローガスシグナルであ
る。本発明のポリペプチドは硫酸アンモニウムまたはエ
タノール沈降、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換ク
ロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィ
ー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティ
ークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマ
トグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを包含
する周知の方法により組換え細胞培養物から回収および
精製できる。最も好ましくは、高性能液体クロマトグラ
フィーを精製に用いる。ポリペプチドが単離およびまた
は精製中に変性する場合、蛋白質の再生について周知の
技術を活性なコンフォメーションを再生するのに用い
る。

【００５１】診断試験 本発明はまた診断用試薬として用いる本発明のＦｔｓＨ
の使用に関する。真核生物、特に哺乳動物、および特に
人におけるＦｔｓＨの検出により、疾患を診断するため
の診断法が得られる。ＦｔｓＨ遺伝子を含む生物に感染
した真核生物（本明細書において「個体」とも称す
る）、特に哺乳動物、特に人は、種々の技術により核酸
レベルで検出される。

【００５２】診断用核酸は、感染した個体細胞および組
織、例えば骨、血液、筋肉、軟骨、および皮膚から得ら
れる。ゲノムＤＮＡは診断に直接用いるか、ＰＣＲまた
は他の増幅技術を分析前に用いることにより酵素により
増幅してもよい。ＲＮＡまたはｃＤＮＡもまた同様に用
いることができる、増幅を用いて、個体中に存在する原
核細胞の種および株の特質化を原核細胞遺伝子の遺伝子
型の分析により行うことができる。欠失および挿入は増
幅産物の対照物の配列の遺伝子型と比較しての大きさの
変化により検出できる。点突然変異は、増幅したＤＮＡ
を標識したＦｔｓＨポリヌクレオチド配列とハイブリダ
イゼーションすることにより同定できる。完全に一致し
た配列は、ＲＮase消化または融点の違いにより一致し
ない複製物と区別できる。ＤＮＡ配列の違いもまたゲル
中のＤＮＡフラグメントの電気泳動の移動性を変性剤を
用いてまたは用いずに変更するかまたはあるいは直接Ｄ
ＮＡ配列化より検出できる。例えば、マイヤーズ（Myer
s）ら、サイエンス（Science）、２３０：１２４２（１
９８５）を参照のこと。特定の位置での配列の変化は、
ヌクレアーゼ保護試験、例えばＲＮaseおよびＳ１保護
または化学的開裂法により解明される。例えば、コット
ン（Cotton）ら、プロシーディングズ・オブ・ザ・ナシ
ョナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ［Proc.Natl.
Acad.Sci.，ＵＳＡ）、８５：４３９７−４４０１（１
９８５）］を参照のこと。

【００５３】本発明の遺伝子における突然変異または多
形性を有する細胞もまた、例えば血清型を考慮して種々
の技術によりＤＮＡレベルで検出される。例えば、突然
変異を検出するのにＲＴ−ＰＣＲを用いることができ
る。例えばＧeneＳcanなどの自動化検出システムと組み
合わせてＲＴ−ＰＣＲを用いるのが特に好ましい。 Ｒ
ＮＡまたはｃＤＮＡもまた同じ目的、ＰＣＲまたはＲＴ
−ＰＣＲに用いることができる。例として、ＦｔｓＨを
コードする核酸と相補的なＰＣＲプライマーを突然変異
の同定および分析に用いることができる。これらのプラ
イマーもまた、個体由来のサンプルから単離されたＦｔ
ｓＨ ＤＮＡの増幅に用いることができる。本発明はさ
らに、５’および／または３’末端から取り出された
１、２、３または４個のヌクレオチドを有するこれらの
プライマーを提供する。プライマーは、感染した個体か
ら単離された遺伝子を増幅するために用いられ、したが
って次にＤＮＡ配列の解明のために遺伝子を種々の技術
に付してもよい。このようにして、ＤＮＡ配列における
突然変異を検出し、感染の診断および血清型での分類お
よび／または感染性物質の分類に用いることができる。

【００５４】本発明はさらに、病気、好ましくは細菌感
染症、より好ましくは、スタフィロコッカス・アウレウ
スによる感染症、最も好ましくは、上部呼吸管（例え
ば、中耳炎、細菌性気管炎、急性咽頭蓋炎、甲状腺
炎)、下部呼吸器（例えば、蓄膿、肺膿瘍)、心臓（例え
ば、感染性心内膜炎）、胃腸管（例えば、分泌性下痢、
脾膿瘍、後腹膜膿瘍)、ＣＮＳ（例えば、脳膿瘍）、眼
（例えば、眼瞼炎、結膜炎、角膜炎、内眼球炎、前中隔
膜および眼高フレグモーネ、涙嚢炎）、腎臓および尿管
（例えば、副睾丸炎、腎内および腎周囲膿瘍、毒性ショ
ック症候群)、皮膚（例えば、とびひ、毛包炎、皮下膿
瘍、フレグモーネ、傷感染症、細菌性筋炎）、骨および
関節（例えば、敗血性関節炎、骨髄炎）の感染症などの
病気の診断法であって、個体由来のサンプルから第１表
の配列［配列番号１］を有するポリヌクレオチドの発現
の増加したレベルを測定することからなる方法を提供す
る。ＦｔｓＨポリヌクレオチドの発現の増加または減少
は、ポリヌクレオチドの定量について当業界で周知の方
法、例えば増幅、ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＮアーゼ、
ノザン・ブロッティングおよび他のハイブリダイゼーシ
ョン法などのいずれかを用いて測定することができる。

【００５５】加えて、正常対照サンプルと比べてのＦｔ
ｓＨ蛋白質の過剰産生を検出する本発明にしたがった診
断検定は、例えば感染の存在の検出に用いることができ
る。宿主由来のサンプルにおいてＦｔｓＨ蛋白質のレベ
ルを測定するのに用いることができる検出技術は、当業
界で周知である。このような検定法は、放射線免疫検定
法、拮抗結合検定、ウェスタンブロット分析およびＥＬ
ＩＳＡ検定を包含する。

【００５６】抗体 本発明のポリペプチドまたはその変異型、あるいはこれ
を発現する細胞はこのようなポリペプチドについて免疫
特異性抗体を産生するための免疫原として用いることが
できる。本発明において用いる「抗体」なる語は、モノ
クローナルおよびポリクローナル抗体、キメラ、一本
鎖、さる化抗体および人化抗体、ならびにＦａｂフラグ
メント（Ｆａｂ免疫グロブリン発現ライブラリーの産物
を含む）を包含する。本発明のポリペプチドに対して生
じる抗体は、動物、好ましくは人でない動物に対して通
常の方法を用いてポリペプチドまたはエピトープを有す
るフラグメント、類似体または細胞を投与することによ
り得られる。モノクローナル抗体の調製について、連続
細胞系培養物により産生される抗体を提供する当業界で
公知のいかなる技術も用いることができる。例として
は、種々の技術、例えばコーラー、ジー（Kohler,G.）
およびミルシュタイン、シー（Milstein,C.）、ネイチ
ャー（Nature）２５６：４９５−４９７（１９７５）；
コツバー（Kozbor）ら、イムノロジー・トゥデイ（Immu
nology Today）４：７２（１９８３）；コール（Cole）
ら、モノクローナル・アンチボディーズ・アンド・キャ
ンサー・セラピー（MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER
THERAPY，Alan R.Liss,Inc.（１９８５）ｐ７７−９６
に記載されているようなものを包含する。

【００５７】一本鎖抗体の産生用技術（米国特許番号４
９４６７７８）を本発明のポリペプチドに対する一本鎖
抗体の産生に応用することができる。また、トランスジ
ェニックマウスまたは他の哺乳動物などの他の生物を用
いてヒト化抗体を発現してもよい。別のファージディス
プレイ技術を用いて、抗ＦｔｓＨの保有についてスクリ
ーンした人由来またはナイーブライブラリー由来のリン
パ球のＰＣＲ増幅ｖ遺伝子のレパートリーのいずれかか
らのポリペプチドに対する結合活性を有する抗体遺伝子
を選択してもよい［マックファーティー、ジェイ（McCa
fferty,J.）ら、（１９９０）ネイチャー（Nature）３
４８、５５２−５５４；マークス、ジェイ（Marks,J.）
ら、（１９９２）バイオテクノロジー（Biotechnolog
y）１０、７７９−７８３］。これらの抗体の親和性は
チェインシャッフリングによっても向上させることがで
きる［クラックソン、ティー（Clackson,T.）ら、（１
９９１）ネイチャー（Nature）３５２、６２４−６２
８］。

【００５８】２個の抗原結合領域が存在する場合、各領
域は異なるエピトープに対し、「二重特異性」と称す
る。前記抗体は、アフィニティークロマトグラフィーに
よりポリペプチドを精製するためにポリペプチドを発現
するクローンの単離または同定に用いられる。

【００５９】このように、とりわけＦｔｓＨ−ポリペプ
チドに対する抗体を用いて、感染症、特に細菌感染症、
特に例えば、上部呼吸管（例えば、中耳炎、細菌性気管
炎、急性咽頭蓋炎、甲状腺炎)、下部呼吸器（例えば、
蓄膿、肺膿瘍)、心臓（例えば、感染性心内膜炎）、胃
腸管（例えば、分泌性下痢、脾膿瘍、後腹膜膿瘍)、Ｃ
ＮＳ（例えば、脳膿瘍）、眼（例えば、眼瞼炎、結膜
炎、角膜炎、内眼球炎、前中隔膜および眼高フレグモー
ネ、涙嚢炎）、腎臓および尿管（例えば、副睾丸炎、腎
内および腎周囲膿瘍、毒性ショック症候群)、皮膚（例
えば、膿痂疹、毛包炎、皮下膿瘍、フレグモーネ、傷感
染症、細菌性筋炎）、骨および関節（例えば、敗血性関
節炎、骨髄炎）の感染症などの病気などの病気の治療に
用いられる。

【００６０】ポリペプチド変異型は、抗原的、エピトー
プ的または免疫学的に等価な変異型を包含し、これは本
発明の一態様をなす。本明細書において用いる「抗原的
に等価な誘導体」なる語は、ある種の抗体により特異的
に認識され、本発明の蛋白質またはポリペプチドにした
場合に病原体と哺乳動物宿主間の物理的相互作用を妨げ
るポリペプチドまたはその等価物を包含する。本明細書
において用いる「免疫学的に等価な誘導体」なる用語
は、脊椎動物において抗体にするのに適当な処方にて用
いた場合に、その抗体が病原体と哺乳動物宿主の間の直
接的物理的相互作用を妨げるように作用するペプチドま
たはその等価物を包含する。

【００６１】抗原的または免疫学的に等価な誘導体また
はその融合蛋白質などのポリペプチドはマウスまたはラ
ットまたは鶏などの他の動物を免疫化する抗原として用
いられる。融合蛋白質はポリペプチドに安定性を付与す
る。抗原は、例えばウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）また
はキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）などの
免疫原性キャリア蛋白質との結合により会合する。別法
として、複数の蛋白質またはポリペプチドのコピーを含
む複数の抗原性ペプチド、またはその抗原的または免疫
学的に等価なポリペプチドは、免疫原性を向上してキャ
リアの使用を不要にするのに十分に抗原性であるかもし
れない。

【００６２】好ましくは、抗体またはその変異型は、個
体において免疫原性を少なくするように修飾される。例
えば、個体が人である場合、抗体はもっとも好ましくは
「ヒト化」され；ここに、ハイブリドーマ由来の抗体の
相補性決定領域は、例えばジョーンズ、ピー（Jones,
P.）ら、（１９８６）ネイチャー（Nature）３２１、５
２２−５２５またはテンペスト（Tempest）ら、（１９
９１）バイオテクノロジー（Biotechnology）９、２６
６−２７３に記載されるようにヒトモノクローナル抗体
中に移植される。

【００６３】遺伝子免疫化における本発明のポリヌクレ
オチドの使用は好ましくはプラスミドＤＮＡの筋肉内へ
の直接注入［ウォルフ（Wolff）ら、ヒューマン・モレ
キュラ・ジェネティクス（Hum Mol Genet）１９９２、
１：３６３、マンソープ（Manthorpe）ら、ヒューマン
・ジーン・セラピー（Hum.Gene Ther.）１９６３：４、
４１９］、特異性蛋白質キャリアと錯体形成したＤＮＡ
のデリバリ［ウー（Wu）ら、ジャーナル・オブ・バイオ
ロジカル・ケミストリー（J Biol Chem）１９８９：２
６４、１６９８５）、リン酸カルシウムでのＤＮＡの随
伴沈降［ベンベニスティーとレシェフ（Benvenisty ＆
Reshef）、ＰＮＡＳ、１９８６：８３、９５５１）、種
々の形態のリポソーム中のＤＮＡの封入［カネダ（Kane
da）ら、サイエンス（Science）１９８９：２４３、３
７５］、粒子衝突［タン（Tang）ら、ネイチャー（Natu
re）１９９２、３５６：１５２、アイゼンブラウン（Ei
senbraun）ら、ディーエヌエイ・セルラー・バイオロジ
ー（DNA Cell Biol）１９９３，１２：７９１］および
クローン化したレトロウイルスベクターを用いたin viv
o感染［シーガー（Seeger）ら、ＰＮＡＳ １９８４：
８１、５８４９］などの適当なデリバリ法を用いる。

【００６４】拮抗物質および作用物質−検定および分子 本発明のポリペプチドはまた、例えば細胞、細胞を含ま
ない調製物、化学的ライブラリー、および天然の生成物
の混合物における小分子の基質およびリガンドの結合を
評価するのにも用いられる。これらの基質およびリガン
ドは天然の基質およびリガンドであるかまたは構造的ま
たは機能的類似物であってもよい。例えば、コリガン
（Coligan）ら、カレント・プロトコルズ・イン・イム
ノロジー（Current Protocols in Immunology）１
（２）：第５章（１９９１）参照。

【００６５】本発明はまたＦｔｓＨポリペプチドまたは
ポリヌクレオチドの作用を向上する（作用物質）かまた
はブロックする（拮抗物質）もの、特に静菌性および／
または細菌性である化合物を同定するための化合物のス
クリーニング法も提供する。スクリーニング法は、高ス
ループット技術を包含する。例えば、作用物質または拮
抗物質をスクリーンするためには、合成反応ミックス、
膜、細胞エンベロープまたは細胞壁などの細胞区画、あ
るいはそのいずれかの調製物であって、ＦｔｓＨポリペ
プチドおよび標識した基質またはポリペプチドのリガン
ドをＦｔｓＨ作用物質または拮抗物質でありえる候補分
子の非存在下または存在下にインキュベートする。候補
分子のＦｔｓＨポリペプチドに作用または拮抗する能力
は、標識したリガンドとの結合の低下またはこのような
基質由来の産物の産生の減少に反映される。無償で、す
なわちＦｔｓＨポリペプチドの効果を誘起することなく
結合する分子は、良好な拮抗物質でありえる可能性がも
っとも高い。よく結合し、生成物の基質からの産生率を
増加させる分子は作用物質である。基質からの生成物の
産生率またはレベルの検出は、報告者のシステムを用い
ることにより向上できる。この点で有用な報告者のシス
テムは、生成物、ＦｔｓＨポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチド活性における変化に応答する報告者の遺伝子中
に変換された比色標識した基質、および当業界で公知の
結合検定を包含するがこれに限定されない。

【００６６】ＦｔｓＨ拮抗物質の検定の他の例は、Ｆｔ
ｓＨおよび潜在的拮抗物質をＦｔｓＨ分子、組換えＦｔ
ｓＨ結合分子、天然の基質またはリガンド、あるいは基
質またはリガンド類似物と拮抗抑制検定用の適当な条件
下で結合させる拮抗検定である。ＦｔｓＨは、放射能ま
たは比色化合物などにより標識でき、結合分子と結合ま
たは生成物に変換されたＦｔｓＨ分子の数は、正確に測
定でき、潜在的な拮抗物質の有効性を評価できる。

【００６７】潜在的な拮抗物質は小有機分子、ペプチ
ド、ポリペプチドおよび本発明のポリヌクレオチドまた
はポリペプチドと結合し、これによりその活性を抑制ま
たは消滅させる抗体を包含する。潜在的拮抗物質は小有
機分子、ペプチド、結合分子の同じ部位にＦｔｓＨ誘発
活性を誘発することなく結合する蛋白質または抗体と緊
密に関連するようなポリペプチドであって、これにより
ＦｔｓＨを結合から排除することによりＦｔｓＨの作用
を防止する。

【００６８】潜在的拮抗物質はポリペプチドの結合部位
と結合し、占有し、これにより細胞結合分子との結合を
防止し、通常の生物学的活性を妨げる。小分子の例は、
小有機分子、ペプチドまたはペプチド様分子を包含する
が、これに限定されない。他の潜在的な拮抗物質は、ア
ンチセンス分子を包含する［これらの分子の記載に関し
ては、オカノ（Okano）、ジャーナル・オブ・ニューロ
ケミストリー（J.Neurochem.）５６：５６０（１９９
１）；オリゴデオキシヌクレオチド・アズ・アンチセン
ス・インヒビターズ・オブ・ジーン・エクスプレッショ
ン（OLIGODEOXYNUCLEOTIDES AS ANTISENSE INHIBITORS
OF GENE EXPRESSION，CRC PRESS，Boca Raton，FL（１
９８８）参照］。好ましい潜在的な拮抗物質は、Ｆｔｓ
Ｈの関連化合物および変異型を包含する。

【００６９】本発明において得られるＤＮＡ配列はそれ
ぞれ抗細菌性化合物の発見および開発において用いられ
る。発現によりコードされる蛋白質は抗細菌剤のスクリ
ーニングの目標として用いることができる。加えて、コ
ードされた蛋白質またはシャイン−デルガルノのアミノ
末端領域をコードするＤＮＡ配列または各ｍＲＮＡの他
の翻訳促進配列はアンチセンス配列を構築して、対象と
なるコーディング配列の発現を制御するのに用いること
ができる。

【００７０】本発明はまた、感染症の後遺症の原因とな
る病原体と哺乳動物宿主間の初期物理的相互作用を干渉
する本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチドまたは抑
制物質の使用も提供する。特に、本発明の分子を、細
菌、特にグラム陽性菌の哺乳動物の体内導入装置上の細
胞外マトリックス蛋白質または傷中の細胞外マトリック
ス蛋白質への付着の予防；ＦｔｓＨ蛋白質に媒介される
哺乳動物細胞の、例えば哺乳動物のチロシンキナーゼの
ホスホリル化の開始による侵入をブロックするため［ロ
ーゼンシャイン（Rosenshine）ら、インフェクション・
アンド・イムノロジー（Infect.Immun.）６０：２２１
１（１９９２）］；哺乳動物細胞外マトリックスと組織
損傷を媒介する細菌性ＦｔｓＨ蛋白質間の細菌の付着を
ブロックし；体内導入装置の移植または他の外科手術的
技術以外で開始される感染症における病理の通常の進行
をブロックするために用いられる。

【００７１】本発明の拮抗物質および作用物質は、例え
ば、上部呼吸管（例えば、中耳炎、細菌性気管炎、急性
咽頭蓋炎、甲状腺炎)、下部呼吸器（例えば、蓄膿、肺
膿瘍)、心臓（例えば、感染性心内膜炎）、胃腸管（例
えば、分泌性下痢、脾膿瘍、後腹膜膿瘍)、ＣＮＳ（例
えば、脳膿瘍）、眼（例えば、眼瞼炎、結膜炎、角膜
炎、内眼球炎、前中隔膜および眼高フレグモーネ、涙嚢
炎）、腎臓および尿管（例えば、副睾丸炎、腎内および
腎周囲膿瘍、毒性ショック症候群)、皮膚（例えば、膿
痂疹、毛包炎、皮下膿瘍、フレグモーネ、傷感染症、細
菌性筋炎）、骨および関節（例えば、敗血性関節炎、骨
髄炎）の感染症などの病気の抑制および治療に用いられ
る。

【００７２】ワクチン 本発明の別の態様は、個体、特に哺乳動物において免疫
学的応答を誘起する方法であって、個体に、抗体および
／またはＴ細胞免疫応答を生じさせて前記個体を感染
症、特に細菌性感染症、最も詳細にはスタフィロコッカ
ス・アウレウス感染症から防御するのに適当なＦｔｓ
Ｈ、またはそのフラグメントまたは変異型を接種するこ
とからなる方法に関する。また、このような免疫学的応
答がバクテリア複製を遅延させる方法も提供される。本
発明のさらに別の態様は、個体において免疫学的応答を
誘起する方法であって、病気が個体内ですでに確立され
ているかどうかにかかわらず、前記個体を病気から防御
するために抗体および／または例えばサイトカイン−産
生Ｔ細胞または細胞毒性Ｔ細胞などを含む抗体および／
またはＴ細胞免疫応答を生じさせるなどの免疫学的応答
を誘起するため、ＦｔｓＨ、そのフラグメントまたは変
異型の発現のためにin vivoでのＦｔｓＨ、そのフラグ
メントまたは変異型のＦｔｓＨの直接的発現を行うた
め、このような個体に核酸ベクターを送達することから
なる方法を提供する。遺伝子の適用の一例は、望ましい
細胞中に粒子上のコーティングとしてまたはその反対で
促進することによる。このような核酸ベクターは、ＤＮ
Ａ、ＲＮＡ、修飾された核酸、またはＤＮＡ／ＲＮＡハ
イブリッドを含む。

【００７３】本発明の別の態様は、免疫学的応答を起こ
しうるかまたはすでに誘起されている個体中に導入され
た場合に、このような個体中でＦｔｓＨまたはこれから
コードされる蛋白質に対する免疫学的応答を誘起する免
疫学的組成物に関し、ここに、組成物は、組換えＦｔｓ
Ｈまたは前記ＦｔｓＨまたはこれからコードされる蛋白
質の抗原をコードし、発現するＤＮＡを含む組換えＦｔ
ｓＨまたはこれからコードされる蛋白質を含む。免疫学
的応答は治療的または予防的に用いられ、抗体免疫また
はＣＴＬまたはＣＤ４＋Ｔ細胞から起こるような細胞免
疫の形態をとる。

【００７４】ＦｔｓＨポリペプチドまたはそのフラグメ
ントをそれ自身抗体を産生しないが、第一蛋白質を安定
化でき、免疫原性および保護的性質を有する融合蛋白質
を産生できるコプロテインと融合させる。このように融
合した組換え蛋白質は、好ましくはさらに抗原性コプロ
テイン、例えばヘモフィルス・インフルエンゼ由来のリ
ポ蛋白質、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（Ｇ
ＳＴ）またはベータ−ガラクトシダーゼ、蛋白質を可溶
化し、その産生および精製を促進する比較的大きなコプ
ロテインを含む。さらに、コプロテインは、免疫系の全
身的刺激を提供する点でアジュバントとして作用する。
コプロテインは、第一蛋白質のアミノまたはカルボキシ
末端のいずれかに付着する。

【００７５】本発明は、本発明のポリペプチドまたはポ
リヌクレオチドおよびサトウ、ワイ（Sato,Y.）ら、サ
イエンス（Science）２７３：３５２（１９９６）に記
載されているような免疫刺激性ＤＮＡ配列を含有してな
る、組成物、特にワクチン組成物、および方法を提供す
る。

【００７６】また、本発明により、スタフィロコッカス
・アウレウスでの感染の動物モデルにおけるこのような
遺伝子免疫化実験において用いられるＤＮＡ構築物にお
ける細菌細胞表面蛋白質の非変動領域をコードすること
が実証されている前記ポリヌクレオチドまたはその特定
のフラグメントを用いた方法であって、免疫応答の予防
または治療を惹起できる蛋白質エピトープの同定に特に
有用である方法が提供される。細菌感染症、特にスタフ
ィロコッカス・アウレウス感染症の哺乳動物、特に人に
おける予防薬または治療の開発のため感染に首尾よく対
抗し、または影響を受けなかった動物の必要な組織から
の特定のモノクローナル抗体のそれに続く調製がこの方
法により可能になると考えられる。

【００７７】ポリペプチドは、細菌の侵入に対して、例
えば細菌の損傷を受けた組織への付着をブロックするこ
とにより防御する特定の抗体を産生するために宿主に接
種するための抗原として用いられる。組織損傷の例は、
例えば機械的、化学的または熱的損傷によるかまたは体
内導入装置の移植によって起こる皮膚または結合組織の
傷、または口腔、乳腺、尿道または膣などの粘膜の傷を
包含する。

【００７８】本発明はまた、本発明の免疫原性組換え蛋
白質と適当な担体を含んでなるワクチン製剤も包含す
る。蛋白質は、胃中で分解されるので、例えば皮下、筋
肉内、静脈内、または皮内を含む非経口投与されるのが
好ましい。非経口投与に適した製剤は、酸化防止剤、緩
衝液、静菌剤および製剤を体液、好ましくは個体の血液
と等張にする溶質を含有してもよい水性または非水性滅
菌注射溶液；懸濁化剤または増粘剤を含有してもよい水
性および非水性滅菌懸濁液を包含する。製剤は単位また
は複投与量容器、例えば密封アンプルおよびバイアル中
に入れられ、使用直前に滅菌液体担体を添加するだけで
よい凍結乾燥状態で貯蔵される。ワクチン製剤はまた、
製剤の免疫原性を向上するためのアジュバント系、例え
ば水中油系および当業界で公知の他の系を包含する。投
与量はワクチンの比活性に依存し、通常の実験により容
易に決定できる。

【００７９】本発明はある種のＦｔｓＨ蛋白質に関して
記載してきたが、天然に存在する蛋白質および組換え蛋
白質の免疫原性に実質的に影響を与えない付加、欠失ま
たは置換を有する類似蛋白質のフラグメントも包含する
と理解される。

【００８０】組成物、キットおよび投与 本発明はまた、前記ポリヌクレオチドまたはポリペプチ
ド、またはその作用物質または拮抗物質を含む組成物に
関する。本発明のポリペプチドは非滅菌または滅菌担体
または細胞、組織または器官に関する使用についての担
体、例えば被験者への投与に適した医薬担体と組み合わ
せて用いられる。このような組成物は、例えば添加剤ま
たは治療上有効量の本発明のポリペプチドおよび医薬上
許容される担体または賦形剤を含む。このような担体
は、食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、水、グリセ
ロール、エタノールおよびその組み合わせを包含する
が、これに限定されない。製剤は投与法に適したもので
なければならない。本発明はさらに１またはそれ以上の
本発明の前記組成物の成分を充填した１またはそれ以上
の容器を含んでなる診断および医薬パックおよびキット
に関する。

【００８１】本発明のポリペプチドおよび他の化合物は
単独または他の化合物、例えば治療化合物と組み合わせ
て用いられる。医薬組成物は、例えば特に局所、経口、
肛門、経膣、静脈内、腹膜組織内、筋肉内、皮下、鼻腔
内または皮内経路による投与を含むあらゆる有効で都合
のよい方法によっても投与できる。治療または予防にお
いて、活性剤を個体に注射可能な組成物、例えば滅菌水
性分散液、好ましくは等張液として投与する。

【００８２】別法として、組成物を、局所適用のため
に、例えば軟膏、クリームまたはローション、眼軟膏
剤、点眼剤、点耳剤、洗口剤、含浸包帯剤および縫合材
およびエアゾルなどの形態にしてもよく、例えば防腐
剤、薬物の浸透を助ける溶媒、および軟膏およびクリー
ムにおける皮膚軟化薬などの適当な通常の添加剤を含ん
でもよい。このような局所処方物はまた、通常の適合性
担体、例えばクリームまたは軟膏基剤およびローション
用エタノールまたはオレイルアルコールを含んでもよ
い。このような担体は、製剤の約１％ないし約９８重量
％であり、より一般的には、製剤の約８０重量％までで
ある。

【００８３】哺乳動物、特に人への適用について、活性
物質の日投与量レベルは０.０１ｍｇ／ｋｇ／ないし１
０ｍｇ／ｋｇ、典型的には１ｍｇ／ｋｇ程度であると考
えられる。いずれの場合においても、医師が個人につい
て最適で、特定の個人の年齢、体重および反応に依存す
る実際の投与量を決定する。前記用量は平均的事例であ
る。もちろん、これより高または低用量が有利である場
合もあるが、これらも本発明の範囲内である。

【００８４】体内導入装置は、外科移植片、プロテーゼ
器具およびカテーテル、すなわち、患者の体内に導入さ
れ、長期間その位置に存続する装置を包含する。このよ
うな装置は、例えば人工関節、心臓弁、ペースメーカ
ー、血管移植片、血管カテーテル、脳脊髄液短絡、尿カ
テーテル、連続移動可能透析（ＣＡＰＤ）カテーテルな
どを包含する。

【００８５】本発明の組成物は体内導入装置の挿入直前
に関連した細菌に対する全身性効果を達成するために注
射により投与してもよい。処置は手術後、装置が体内に
ある期間中継続する。加えて、組成物はまた細菌性創傷
感染症、例えばスタフロコッカス創傷感染症を防止する
ためにいずれの手術技術に関してペリオペラティブカバ
ーを広げるために用いることができる。

【００８６】多くの整形外科医はプロテーゼ関節をつけ
た人は菌血症を起こしうる歯科治療の前に抗生予防を考
えなければならないと考えている。後発深部感染症はプ
ロテーゼ関節を損なうこともあり、重大な罹患率および
死亡率を伴う重篤な合併症である。したがって、活性物
質をこの状況において予防抗生物質の代替物としてその
使用を広げることができる。

【００８７】前記の望ましい療法に加えて、本発明の組
成物は一般に、創傷組織において曝露されている基質蛋
白質への細菌の付着の予防するための傷治療剤として、
また歯科治療において抗生物質予防薬の代替物またはこ
れと組み合わせて予防的用途に用いられる。別法とし
て、本発明の組成物は体内導入装置の挿入直前に浸すた
めに用いられる。創傷または体内導入装置の含浸用に活
性剤は好ましくは１μｇ／ｍｌないし１０ｍｇ／ｍｌの
濃度で存在する。

【００８８】ワクチン組成物は、注入可能な形態が好都
合である。通常のアジュバントを用いて免疫応答を向上
できる。接種に適した単位投与量は、抗原０.５ないし
５μｇ／ｋｇであり、このような用量を好ましくは１な
いし３回、１ないし３週間間隔で投与する。適用量範囲
では、本発明の化合物に関してはその適当な個体への投
与を排除する許容できない毒物学的効果はないと考えら
れる。本明細書において開示された各文献は、出典明示
により全体として本発明の一部とする。本発明出願が優
先権を主張するあらゆる特許出願も出典明示により全体
として本発明の一部とする。

【００８９】

【実施例】以下の実施例は特記に詳細に記載しないかぎ
り当業界で周知であり、慣例的な標準的技術を用いて実
施する。実施例は例示的なものであって、本発明を制限
するものではない。

【００９０】実施例１ 株の選択、ライブラリー産生
および配列決定 配列番号１に示したＤＮＡ配列を有するポリヌクレオチ
ドをイー・コリにおけるスタフィロコッカス・アウレウ
スの染色体ＤＮＡのクローンのライブラリーから得た。
重なりスタフィロコッカス・アウレウスＤＮＡを含有す
る２またはそれ以上のクローンからの配列化データを用
いて配列番号１の連続ＤＮＡ配列を構築した。ライブラ
リーを例えば以下の方法１および２などの慣例法により
調製する。

【００９１】全細胞ＤＮＡをスタフィロコッカス・アウ
レウスＷＣＵＨ２９から標準法にしたがって単離し、２
法のいずれかにより寸法分別した。

【００９２】方法１ 全細胞ＤＮＡを、針を通すことにより機械的に専断し
て、標準法にしたがって寸法分画する。大きさが最高１
１ｋｂｐのＤＮＡフラグメントを、エクソヌクレアーゼ
およびＤＮＡポリメラーゼでの処理により平滑にし、Ｅ
coＲＩリンカーを添加する。フラグメントをＥcoＲＩで
切断したベクターラムダＺapII中にライゲートし、ライ
ブラリーを標準法によりパッケージし、イー・コリをパ
ッケージしたライブラリーで感染させる。

【００９３】方法２ 全細胞ＤＮＡをライブラリーベクター（例えば、Ｒsa
Ｉ、ＰalＩ、ＡluＩ、Ｂshｌ２３５Ｉ）中へのクローニ
ング用の一連のフラグメントを生じさせるのに適した制
限酵素の１つまたは組み合わせで部分的に加水分解し、
このようなフラグメントを標準法にしたがって寸法分画
する。ＥcoＲＩリンカーをＤＮＡとライゲートし、次に
ＥcoＲＩで切断したベクターラムダＺapII中にライゲー
トし、ライブラリーを標準法によりパッケージし、イー
・コリをパッケージしたライブラリーで感染させる。ラ
イブラリーを標準法により増幅する。

【００９４】実施例２ 化合物スクリーニング用Ｆｔ
ｓＨ 本発明はＦｔｓＨ蛋白質の作用機序と干渉して、阻害す
るような試薬を到底するための試薬のスクリーニング法
であって、ＦｔｓＨ蛋白質を試薬と接触させ、ＦｔｓＨ
活性の抑制を測定することからなる方法を提供する。前
記方法のいずれかを用いて精製した前記のいずれかの形
態のポリペプチドはその作用機序に基づいて、例えば精
製細菌膜またはベシクルまたは合成リン脂質膜類似体の
存在下、または膜が必要でなく、ＦｔｓＨ蛋白質の活性
に必要であるか活性化するかのいずれかである別の高分
子または低分子量コファクターが含まれる場合、適当な
酵素緩衝液中、in vitro検定を行うのに用いることがで
きる。

【００９５】本発明に関連する試験の例を以下に示す： （１）蛋白質加水分解活性ペプチドまたは蛋白質基質内
のペプチド結合あるいはモデル基質内のアミドまたはエ
ステル結合の開裂の測定［例えば、アントノフ、ブイ・
ケイ（Antonov,V.K.）、ケミストリー・オブ・プロテオ
リシス（Chemistry of Proteolysis）［１９９３］Spri
nger Verlag，Berlin］により、第一の試験様式が得ら
れる。基質はＦｔｓＨにより開裂できるペプチドベース
の分子の形態である。蛋白質および／またはペプチドの
開裂は、生成物からの基質のクロマトグラフィーによる
分離（例えば、逆相、寸法排除、疎水性相互作用、アフ
ィニティーまたはイオン交換クロマトグラフィーなど）
を含む種々の方法（これに限定されない）または外的に
標識した基質（例えば、放射性または光学的標識）を用
いてモニターされる。後者の場合、測定は、基質からの
生成物の物理的分離（例えば、沈降および／または濾過
による）または、均一試験様式においては、標識に対す
る近接性または環境的影響（例えばシンチレーション近
接性、蛍光エネルギー伝達、蛍光異方性、蛍光関連揺
動、蛍光強度および／または波長における環境的変化な
ど）のいずれかに基づく。

【００９６】（２）蛋白質：蛋白質相互作用：脂質ベー
スの膜系または溶液中のいずれかにおけるＦｔｓＨ蛋白
質の別の蛋白質またはペプチドとの相互作用の測定は、
有効な試験様式を提供する。免疫検定または表面コーテ
ィング様式を放射標識または光学標識蛋白質および成分
と組あわせて用いることを含む不均質な試験が考えられ
る。非標識ＦｔｓＨと他のポリペプチドとの相互作用も
光学的バイオセンサー装置中表面プラスモン共鳴技術を
用いて直接観察できる。この方法はより大きな（＞５ｋ
Ｄａ）ポリペプチドとの相互作用の測定に有用であり、
蛋白質−蛋白質相互作用の抑制物質のスクリーンに応用
できる。蛍光標識成分を用いた溶液−ベースの均質試験
は蛍光強度、蛍光異方性、蛍光エネルギー伝達または結
合相互作用の結果としての強度における相関揺動におけ
る変化について報告される。これらのタイプの試験にお
いて有用な結合蛋白質は、例えば光学的バイオセンサー
法および細菌抽出に続いてアフィニティー捕獲または固
定化ＦｔｓＨ上のクロマトグラフィーを用いた「リガン
ドフィッシング」により同定される。所望により、アミ
ノ酸配列が水溶性を向上するように変更されているＦｔ
ｓＨの誘導体を用いてもよい。ＦｔｓＨ結合蛋白質の溶
液相捕獲は、可溶性ＦｔｓＨを、例えば界面活性剤抽出
物と混合し、抗ＦｔｓＨ抗体の使用またはＦｔｓＨを、
例えばビオチンで標識し、固定化アビジンまたはストレ
プトアビジン上で捕獲することにより複合体を再単離す
ることにより行われる。結合蛋白質の固定化ＦｔｓＨか
らの塩、pＨ変化またはカオトロピー試薬を用いた溶出
に続いて、溶出した蛋白質生成物を、逆相高性能液体ク
ロマトグラフィーなどの高分割法を用いて分離し、個々
のポリペプチドをＮ−末端アミノ酸配列決定および／ま
たは質量マッピング（蛋白質データベースに対する分子
イオン重量一致と組み合わせた質量分析）により特質化
する。

【００９７】（３）ヌクレオシド５’−三リン酸結合お
よび５’−三リン酸塩活性。ヌクレオシド５’−三リン
酸（ＮＴＰ）、例えばアデノシン５’−三リン酸（ＡＴ
Ｐ）のＦｔｓＨ蛋白質への結合およびそれに続くＦｔｓ
Ｈによる加水分解により、２つの有効なin vitro試験様
式が提供される。ヌクレオチド結合試験は、均質または
不均質測定法に基づき、放射性標識ヌクレオチド（フォ
トアフィニティー架橋、ゲル濾過、濾過結合）を用い、
分子光学シグナルを用いて、ヌクレオチドの結合または
蛍光／発色団ヌクレオチド誘導体に基づいて報告され、
その程度をモニターする（蛍光強度、異方性、揺らぎ相
関およびエネルギー伝達測定、吸光度および円二色性測
定）。ＦｔｓＨ蛋白質の、別のコファクターの存在下ま
たは不在下でのヌクレオチド加水分解を触媒する能力
を、基質（ＮＴＰ）および／または直接（放射能、比色
定量）または結合した酵素方式のいずれかを用いた生成
物（ＮＤＰ、無機リン酸塩）濃度における変化によりモ
ニターする。

【００９８】（４）顕微鏡：純粋なＦｔｓＨ蛋白質を用
いて、マウスまたはウサギまたは他の適当な動物宿主に
おいて抗体を増殖させ、該抗体を第二の抗体と結合させ
た金粒子と結合させる。活性に分割した細胞を採取し、
金結合物を添加し、標準的技術を用いて電子顕微鏡用に
調製したサンプルを可視化して、蛋白質の局在化および
試験試薬の効果を観察する。

【００９９】

【配列表】（１）一般的情報 （i）出願人：ホッジソン，ジョン ジェンキンス，オーウェン サージンソン，ジリアン （ii）発明の名称：新規化合物 （iii）配列の数：２ （iv）連絡用住所： （Ａ）受取人：スミスクライン・ビーチャム・コーポレ
イション （Ｂ）通り名：スウェードランド・ロード７０９番 （Ｃ）都市名：キング・オブ・プルシア （Ｄ）州名：ペンシルベニア州 （Ｅ）国名：ＵＳＡ （Ｆ）ジップ番号：１９４０６−０９３９ （v）コンピューター読み取り可能な形態： （Ａ）媒体型：ディスケット （Ｂ）コンピューター：ＩＢＭコンパチブル （Ｃ）操作システム：ＤＯＳ （Ｄ）ソフトウェア：ウィンドー・バージョン２.０用
のＦastＳＥＱ （vi）現出願のデータ： （Ａ）出願番号： （Ｂ）出願日：１９９７年３月１２日 （Ｃ）分類番号： （vii）先の出願のデータ （Ａ）出願番号：９６０５３８１.４ （Ｂ）出願日：１９９６年３月１４日 （viii）代理人等の情報： （Ａ）名前：ギミ，エドワード・アール （Ｂ）登録番号：３８８９１ （Ｃ）処理番号：Ｐ３１４１２ （ix）電気通信情報： （Ａ）電話番号：６１０−２７０−４４７８ （Ｂ）テレファックス番号：６１０−２７０−５０９０ （Ｃ）テレックス：

【０１００】（２）配列番号１に関する情報： （i）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：２０９４塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子の型：ゲノムＤＮＡ （xi）配列記載：配列番号１：

【化３】

【０１０１】（２）配列番号２に関する情報： （i）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：６９７アミノ酸 （Ｂ）配列の型：アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子の型：蛋白質 （xi）配列記載：配列番号２：

【化４】

【化５】

【化６】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＣＶ Ｃ１２Ｎ 1/21 ＡＤＡ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ ＡＤＺ Ｇ０１Ｎ 33/573 Ａ 39/00 ＡＢＤ Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＢＪ 39/395 ＡＣＤ ＡＢＬ Ｃ０７Ｋ 14/32 ＡＢＮ 16/12 ＡＣＪ Ｃ１２Ｎ 1/21 ＡＣＶ Ｃ１２Ｐ 21/02 ＡＤＡ Ｇ０１Ｎ 33/573 ＡＤＺ //(Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:445） (71)出願人 595047190 スミスクライン・ビーチャム・パブリッ ク・リミテッド・カンパニー ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍ ｐ．ｌ．ｃ. イギリス国ミドルセックス・ティーダブリ ュ８・９イーピー、ブレンフォード、ニュ ー・ホライズンズ・コート（番地の表示な し) (72)発明者 ジョン・エドワード・ホッジソン アメリカ合衆国19355ペンシルベニア州マ ルバーン、ラップ・ロード260番 (72)発明者 オーウェン・ジェンキンス イギリス、シーエム19・５エイチユー、エ セックス、ロイドン、エッピング・ロー ド、ザ・ファーズ（番地の表示なし) (72)発明者 ジリアン・サージンソン イギリス、ケイティ20・７エイキュー、サ リー、タッドワース、ジョゼフィン・アベ ニュー20番

Claims (26)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】（ａ）配列番号２のアミノ酸１ないし６９
   ７を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと
   少なくとも７０％の同一性を有するポリヌクレオチド；
   （ｂ）（ａ）のポリヌクレオチドと相補性であるポリヌ
   クレオチド；および（ｃ）（ａ）または（ｂ）のポリヌ
   クレオチドの少なくとも１５個の連続した塩基を含むポ
   リヌクレオチドからなる群より選択されるポリヌクレオ
   チド配列を有してなる単離されたポリヌクレオチド。
2. 【請求項２】 ポリヌクレオチドがＤＮＡである請求項
   １記載のポリヌクレオチド。
3. 【請求項３】 ポリヌクレオチドがＲＮＡである請求項
   １記載のポリヌクレオチド。
4. 【請求項４】 配列番号１に示すヌクレオチド１ないし
   ２０９４を含む請求項２記載のポリヌクレオチド。
5. 【請求項５】 配列番号１に示すヌクレオチド１ないし
   ２０９１を含む請求項２記載のポリヌクレオチド。
6. 【請求項６】 配列番号２のアミノ酸１ないし６９７を
   含むポリペプチドをコードする請求項２記載のポリヌク
   レオチド。
7. 【請求項７】（ａ）ＮＣＩＭＢ寄託番号４０７７１に含
   まれるＦｔｓＨ遺伝子により発現される同じ成熟ポリペ
   プチドをコードするポリヌクレオチドと少なくとも７０
   ％の同一性を有するポリヌクレオチド；（ｂ）（ａ）の
   ポリヌクレオチドと相補性であるポリヌクレオチド；お
   よび（ｃ）（ａ）または（ｂ）のポリヌクレオチドの少
   なくとも１５個の塩基を含むポリヌクレオチドからなる
   群より選択されるものを有してなる単離されたポリヌク
   レオチド。
8. 【請求項８】 請求項２に記載のＤＮＡを含有してなる
   ベクター。
9. 【請求項９】 請求項８に記載のベクターを含有してな
   る宿主細胞。
10. 【請求項１０】 該ＤＮＡによりコードされるポリペプ
    チドを請求項９に記載の宿主細胞から発現させることか
    らなるポリペプチドの産生法。
11. 【請求項１１】 細胞が請求項８に記載のベクター中に
    含まれるｃＤＮＡによりコードされるポリペプチドを発
    現するように、該細胞をそのベクターで形質転換または
    トランスフェクションすることからなる、ポリペプチド
    を発現する細胞の産生法。
12. 【請求項１２】 請求項９に記載の宿主を、ＦｔｓＨポ
    リペプチドまたはフラグメントの産生に十分な条件下で
    培養することからなる、そのＦｔｓＨポリペプチドまた
    はフラグメントの産生法。
13. 【請求項１３】 配列番号２のアミノ酸１ないし６９７
    と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を含有して
    なるポリペプチド。
14. 【請求項１４】 配列番号２に示すアミノ酸配列を含有
    してなるポリペプチド。
15. 【請求項１５】 請求項１３に記載のポリペプチドに対
    する抗体。
16. 【請求項１６】 請求項１３に記載のポリペプチドの活
    性を阻害する拮抗物質。
17. 【請求項１７】 治療上有効量の請求項１３に記載のポ
    リペプチドを個体に投与することからなるＦｔｓＨを必
    要とする個体の治療法。
18. 【請求項１８】 治療上有効量のポリペプチドを、該ポ
    リペプチドをコードし、該ポリペプチドをin vivoで発
    現するＤＮＡを個体に供給することにより投与する請求
    項１６記載の方法。
19. 【請求項１９】 治療上有効量の請求項１６に記載の拮
    抗物質を個体に投与することからなるＦｔｓＨポリペプ
    チドを阻害する必要がある個体の治療法。
20. 【請求項２０】 請求項１３に記載のポリペプチドをコ
    ードする核酸配列を決定することからなる、該ポリペプ
    チドの発現に関連する疾患の診断法。
21. 【請求項２１】 宿主由来のサンプルにおいて請求項１
    ３に記載のポリペプチドの存在について分析することか
    らなる診断法。
22. 【請求項２２】 請求項１３に記載のポリペプチドと相
    互作用し、その活性を阻害または活性化する化合物を同
    定する方法であって、 該ポリペプチドを含有してなる組成物を、スクリーンさ
    れるべき化合物と、該化合物とポリペプチドの間に相互
    作用を生じさせる条件下で接触させて化合物の相互作用
    （このような相互作用は、ポリペプチドと化合物との相
    互作用に応じて検出可能なシグナルを提供する能力を有
    するもう一つ別の成分と関連する）を評価し；該化合物
    がポリペプチドと相互作用し、そのポリペプチドの活性
    を活性化するかまたは阻害するかどうかを、化合物とポ
    リペプチドとの相互作用から生じるシグナルの存在また
    は不在を検出することにより測定することからなる化合
    物の同定法。
23. 【請求項２３】 抗体および／またはＴ細胞免疫応答を
    生じさせ、動物を疾患から防御するのに適当なＦｔｓ
    Ｈ、またはそのフラグメントもしくは変異型で哺乳動物
    を接種することからなる、哺乳動物における免疫学的応
    答の誘発方法。
24. 【請求項２４】 免疫学的応答を誘発し、抗体および／
    またはＴ細胞免疫応答を生じさせ、動物を病気から防御
    するために、ＦｔｓＨ、またはそのフラグメントもしく
    はその変異型のin vivoにおける発現に関して核酸ベク
    ターをＦｔｓＨフラグメントまたはその変異型の発現を
    起こすようにデリバーすることからなる哺乳動物におけ
    る免疫学的応答の誘発法。
25. 【請求項２５】 ＦｔｓＨポリヌクレオチドまたはそれ
    からコードされる蛋白質をコードし、発現するＤＮＡを
    含有してなる免疫学的組成物であって、哺乳動物に導入
    した場合に、哺乳動物にて所定のＦｔｓＨポリヌクレオ
    チドまたはそれからコードされる蛋白質に対して免疫学
    的応答を誘発する免疫学的組成物。
26. 【請求項２６】 配列番号１に示したポリヌクレオチド
    配列についての完全遺伝子を含有してなる適当なライブ
    ラリーを、厳密なハイブリダイゼーション条件下で、配
    列番号１に示した前記ポリヌクレオチド配列またはその
    フラグメントを有するプローブを用いてスクリーンし、
    該ＤＮＡ配列を単離することにより得られるＤＮＡ配列
    を実質的に含有してなるポリヌクレオチド。