JPH1075769A

JPH1075769A - 菌体の分離方法

Info

Publication number: JPH1075769A
Application number: JP25226796A
Authority: JP
Inventors: Tsuneyasu Adachi; 恒康安達
Original assignee: Kurita Water Industries Ltd
Current assignee: Kurita Water Industries Ltd
Priority date: 1996-09-03
Filing date: 1996-09-03
Publication date: 1998-03-24
Anticipated expiration: 2016-09-03
Also published as: JP3216543B2

Abstract

(57)【要約】【課題】発酵生産物と菌体を含む液に、カチオン性を有
する高分子凝集剤を添加して菌体を分離する際に、発酵
生産物の活性及び回収率を低下させることなく、液中に
残留する余剰の高分子凝集剤を選択的に除去することが
できる菌体の分離方法を提供する。【解決手段】発酵生産物と菌体とを含む液に、カチオン
性を有する高分子凝集剤を添加して菌体を分離する方法
において、高分子凝集剤が残留する液に、縮合リン酸塩
を添加することを特徴とする菌体の分離方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、菌体の分離方法に
関する。さらに詳しくは、本発明は、発酵生産物と菌体
を含む液に、カチオン性を有する高分子凝集剤を添加し
て菌体を分離する方法において、発酵生産物の活性及び
回収率を低下させることなく、液中に余剰の高分子凝集
剤を残留させることなく、菌体を分離することができる
菌体の分離方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】発酵法によって生産した酵素などの有価
物を製品化する場合、生産菌と発酵生産物を固液分離し
て、発酵生産物を膜分離などにより精製する必要があ
る。この固液分離の方法として、高分子凝集剤を用いて
菌体を凝集させ、液中に残留する発酵生産物と菌体を分
離する技術がある。しかし、この処理を行ったとき、液
中に余剰の高分子凝集剤が残留する場合があり、残留し
た高分子凝集剤が、発酵生産物に混入して製品の品質を
低下させたり、あるいは、発酵生産物の精製に用いられ
る膜やイオン交換樹脂に付着して、これらの分離性能を
著しく低下させるという悪影響を引き起こす場合があ
る。このような問題を解決するために、液中に残留する
高分子凝集剤を除去する必要がある。液中に残留する高
分子凝集剤を除去する技術としては、特開昭５０−５１
４６７号公報や特開昭５０−５６３６５号公報に開示さ
れているような、高分子凝集剤処理を行う際に、アルミ
ニウム塩や鉄塩のような金属塩を添加する方法、あるい
は、特公昭５４−２９９２号公報に開示されているよう
な、アニオン性界面活性剤を添加する方法が知られてい
る。しかし、これらの方法は、主として廃水処理におけ
る高分子凝集剤に対して適用されるものである。発酵法
により生産された有価物は、酵素などの蛋白質である場
合がほとんどであり、金属塩や界面活性剤を添加する
と、酵素などの活性が低下してしまう。このため、従来
の高分子凝集剤を除去する技術は、発酵法において使用
した高分子凝集剤の残留分除去に適用することはできな
かった。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、発酵生産物
と菌体を含む液に、カチオン性を有する高分子凝集剤を
添加して菌体を分離する際に、発酵生産物の活性及び回
収率を低下させることなく、液中に残留する余剰の高分
子凝集剤を選択的に除去することができる菌体の分離方
法を提供することを目的としてなされたものである。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者は、上記の課題
を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、カチオン性を有す
る高分子凝集剤が残留する液に縮合リン酸塩を添加し、
カチオン性を有する高分子凝集剤と縮合リン酸塩を反応
させることにより、液中のカチオン性を有する高分子凝
集剤を除去することが可能となることを見いだし、この
知見に基づいて本発明を完成するに至った。すなわち、
本発明は、（１）発酵生産物と菌体とを含む液に、カチ
オン性を有する高分子凝集剤を添加して菌体を分離する
方法において、高分子凝集剤が残留する液に、縮合リン
酸塩を添加することを特徴とする菌体の分離方法、を提
供するものである。さらに、本発明の好ましい態様とし
て、（２）縮合リン酸塩の添加量が、残留する高分子凝
集剤の等重量〜２０倍量である第(１)項記載の菌体の分
離方法、及び、（３）縮合リン酸塩を添加したのち、さ
らに水不溶性の粒子を添加する第(１)項又は第(２)項記
載の菌体の分離方法、を挙げることができる。

【０００５】

【発明の実施の形態】本発明方法は、発酵生産物と菌体
を含む液に、カチオン性を有する高分子凝集剤を添加し
て菌体を分離する方法に適用することができる。発酵液
中において、菌体は通常は負に帯電しているので、カチ
オン性を有する高分子凝集剤、すなわちカチオン性高分
子凝集剤又は両性高分子凝集剤を添加することにより、
菌体の電荷が中和され、あるいは、菌体表面上に高分子
凝集剤が吸着され、菌体表面上の電荷と吸着された高分
子凝集剤の間の静電的引力によって凝集することができ
る。本発明方法において使用するカチオン性高分子凝集
剤には特に制限はなく、例えば、ポリエチレンイミン、
ポリビニルアミン、ポリビニルアミジン、ポリ(メタ)ア
リルアミン、ハロゲン化ポリジアリルアンモニウム、ポ
リアミノアルキルメタクリレート、キトサンなどを挙げ
ることができる。本発明方法において使用する両性高分
子凝集剤には特に制限はなく、例えば、上記のカチオン
性高分子凝集剤に、さらにアニオン性基、例えば、カル
ボキシル基、スルホン基などが導入された構造を有する
両性高分子凝集剤などを挙げることができる。発酵液に
カチオン性を有する高分子凝集剤を添加すると、液中に
分散している菌体が凝集するので、菌体の凝集物と発酵
液中に存在する発酵生産物を分離することができる。菌
体の凝集物を分離する方法には特に制限はなく、例え
ば、菌体の凝集物をろ過、遠心沈降分離又は膜分離など
により除去して、菌体と液中の発酵生産物を分離するこ
とができる。あるいは、カチオン性を有する高分子凝集
剤により凝集した菌体を含む液に、アニオン性高分子凝
集剤を添加して凝集塊を生長させ、ベルトプレス型脱水
機などにより菌体の凝集物と液中の発酵生産物を分離す
ることができる。

【０００６】このような固液分離方法により菌体の凝集
物と発酵生産物を分離したとき、発酵生産物を含む液中
には、余剰のカチオン性を有する高分子凝集剤が残留す
る。本発明方法においては、発酵生産物を含む液中に残
留するカチオン性を有する高分子凝集剤を除去するため
に、高分子凝集剤が残留する液に縮合リン酸塩を添加す
る。添加する縮合リン酸塩には特に制限はなく、ポリリ
ン酸カリウムやポリリン酸ナトリウムなどを用いること
ができる。縮合リン酸塩の縮合度の分布に制限はなく、
また、直鎖状及び環状のいずれの縮合リン酸塩も使用す
ることができる。添加する縮合リン酸塩の量は、残留す
る高分子凝集剤の等重量〜２０倍量であることが好まし
く、２倍量〜１０倍量であることがより好ましい。系内
に、縮合リン酸塩と反応する物質、例えば、金属イオン
が存在する場合は、さらに過剰量添加するのがよい。縮
合リン酸塩は食品添加物でもあるため、発酵生産物の安
全性を損なうおそれがない。ポリリン酸ナトリウム及び
ポリリン酸カリウムは、食品添加物公定書に規格が定め
られ、規格に合格する製品が一般に市販されている。本
発明方法においては、上述のごとく、菌体の凝集物を分
離したのち、発酵生産物と残留する高分子凝集剤を含む
液に縮合リン酸塩を添加することができるほか、カチオ
ン性を有する高分子凝集剤により菌体を凝集した後の菌
体凝集物を分離していない液に縮合リン酸塩を添加する
ことができる。残留する高分子凝集剤を含む液に縮合リ
ン酸塩を添加することにより、残留高分子凝集剤と縮合
リン酸塩が反応して、水不溶性の反応物が生成する。残
留する高分子凝集剤と縮合リン酸塩の反応は、縮合リン
酸塩の添加により室温において速やかに進行するが、反
応の完了を確実にするため、縮合リン酸塩の添加後５〜
６０分反応時間を設けることが好ましい。

【０００７】高分子凝集剤と縮合リン酸塩の反応物は、
ろ過、膜分離、遠心分離などの固液分離によって除去す
ることができる。高分子凝集剤と縮合リン酸塩の反応物
を含む液中に、水不溶性の粒子が存在すると、反応物は
その粒子に吸着され、固液分離による反応物の分離が容
易かつ確実になる。発酵液に高分子凝集剤を添加するこ
とにより生成した菌体の凝集物が存在する液に、縮合リ
ン酸塩を添加して余剰の高分子凝集剤と反応した場合
は、菌体の凝集物に高分子凝集剤と縮合リン酸塩の反応
物が吸着するため、菌体の凝集物を液から分離する際
に、残留高分子凝集剤と縮合リン酸塩の反応物を除去す
ることができる。発酵液に高分子凝集剤を添加すること
により生成した菌体の凝集物を除いた後の発酵生産物を
含有する液に縮合リン酸塩を添加して、高分子凝集剤と
縮合リン酸塩の反応物を形成させた場合は、反応物の分
離を容易にするために水不溶性の粒子を添加することが
好ましい。縮合リン酸塩と高分子凝集剤の反応物を水不
溶性の粒子に吸着させ、吸着後の粒子と液を分離するこ
とにより、液中の高分子凝集剤と縮合リン酸塩の反応物
を除去することができる。添加する水不溶性の粒子には
特に制限はなく、例えば、カオリン、シラス、珪藻土、
シリカゲル、活性炭、パルプ粉末、セルロース粉末、ス
チレンジビニルベンゼン共重合体などの無機素材や有機
素材を幅広く使用することができる。本発明方法によれ
ば、発酵法により生産された有価物と、菌体の分離に利
用されたカチオン性を有する高分子凝集剤の残留分を、
発酵生産物の活性及び回収率を低下させることなく、８
０％以上の高除去率で高分子凝集剤のみを選択的に除去
することができる。

【０００８】

【実施例】以下に、実施例を挙げて本発明をさらに詳細
に説明するが、本発明はこれらの実施例によりなんら限
定されるものではない。実施例１ポリエチレンイミン（分子量７万）５０ppmを含むリン
酸緩衝液（８ｍＭＮａＨ₂ＰＯ₄＋１２ｍＭＮａ₂ＨＰＯ₄
＋０.１ＭＮａＣｌ、pH７.２）の溶液１００mlが入った
ビーカーを５個用意し、その中の１個にはポリリン酸ナ
トリウムを添加せず（試料Ａ）、他の４個にはそれぞ
れ、ポリリン酸ナトリウム［キシダ化学(株)］を、濃度
が２５ppm（試料Ｂ）、５０ppm（試料Ｃ）、１００ppm
（試料Ｄ）、２００ppm（試料Ｅ）になるように加えて
撹拌した。室温で１時間静置したのち、それぞれのビー
カーに、カオリン［キシダ化学(株)］を溶液に対して
０.４重量％になるように添加して１分間撹拌した。孔
径５μｍのフィルター［マイレクスＳＶ、日本ミリポア
(株)］を用いてカオリンを除去し、ろ液中の全有機体炭
素量（ＴＯＣ）を、全有機体炭素計［ＴＯＣ−５００
０、(株)島津製作所］を用いて測定した。さらに、ポリ
エチレンイミン（分子量７万）５０ppmを含むリン酸緩
衝液の溶液（試料Ｆ）及びポリエチレンイミンを含まな
いリン酸緩衝液（試料Ｇ）についても、同様にしてＴＯ
Ｃを測定した。ＴＯＣは、試料Ａが１４ppm、試料Ｂが
１１ppm、試料Ｃが３.７ppm、試料Ｄが２.０ppm、試料
Ｅが２.３ppm、試料Ｆが２５ppm、試料Ｇが０.２ppmで
あった。結果を第１表に示す。

【０００９】

【表１】

【００１０】ポリリン酸ナトリウム及びカオリンを添加
していない試料ＦのＴＯＣ２５ppmが、溶液中のポリエ
チレンイミン５０ppmに対応し、ポリエチレンイミンを
含有しない試料ＧのＴＯＣ０.２ppmがポリエチレンイミ
ン０ppmに対応する。試料Ａ〜ＥのＴＯＣの値から、ポ
リリン酸ナトリウム５０ppm以上、すなわちポリエチレ
ンイミンの等重量以上を添加し、カオリンを添加して処
理することにより、溶液中のポリエチレンイミンの８５
％以上を除去し得ることが分かる。実施例２ポリエチレンイミン（分子量７万）１００ppmを含むリ
ン酸緩衝液（８ｍＭＮａＨ₂ＰＯ₄＋１２ｍＭＮａ₂ＨＰ
Ｏ₄＋０.１ＭＮａＣｌ、pH７.２）の溶液１００mlが入
ったビーカー、キトサン（分子量１０万）１００ppmを
含むリン酸緩衝液の溶液１００mlが入ったビーカー及び
ポリビニルアミジン（分子量３００万）１００ppmを含
むリン酸緩衝液の溶液１００mlが入ったビーカーをそれ
ぞれ２個ずつ用意した。これら中の１個ずつに、ポリリ
ン酸ナトリウムを濃度が２００ppmになるように加え撹
拌した。室温で１時間静置したのち、カオリンを溶液に
対して０.４重量％になるように添加して１分間撹拌し
た。実施例１と同様に、孔径５μｍのフィルターでカオ
リンを除去して、ろ液中のＴＯＣを測定した。また、ポ
リエチレンイミン、キトサン又はポリビニルアミジンを
含むリン酸緩衝液について、なんら処理することなくＴ
ＯＣを測定した。ポリリン酸ナトリウム及びカオリンを
添加したとき、ＴＯＣの値は、ポリエチレンイミンを含
む溶液が５.３ppm、キトサンを含む溶液が４.３ppm、ポ
リビニルアミジンを含む溶液が４.８ppmであった。ま
た、無処理の場合、ＴＯＣの値は、ポリエチレンイミン
を含む溶液が５６ppm、キトサンを含む溶液が４４ppm、
ポリビニルアミジンを含む溶液が５０ppmであった。結
果を第２表に示す。

【００１１】

【表２】

【００１２】それぞれの溶液のＴＯＣの値は、溶液中に
存在する高分子凝集剤の量にほぼ比例する。第２表の結
果から、ポリリン酸ナトリウムをカチオン性を有する高
分子凝集剤の溶液に添加し、さらにカオリンを添加して
処理することにより、液中の高分子凝集剤の９０％以上
を除去し得ることが分かる。実施例３ポリエチレンイミン（分子量７万）１００ppmを含むリ
ン酸緩衝液（８ｍＭＮａＨ₂ＰＯ₄＋１２ｍＭＮａ₂ＨＰ
Ｏ₄＋０.１ＭＮａＣｌ、pH７.２）の溶液１００mlが入
ったビーカーを６個用意し、それぞれに、ポリリン酸ナ
トリウムを濃度が２００ppmになるように加え撹拌し
た。室温で１時間静置したのち、それぞれのビーカー
に、カオリン［キシダ化学(株)］、珪藻土［キシダ化学
(株)］、粒状活性炭［クラレキミカル(株)］、シリカゲ
ル［Ｅ．Ｍｅｒｃｋ］、セパビーズＳＰ２０６［スチレ
ンジビニルベンゼン共重合体、三菱化学(株)］及びＫＣ
フロック［パルプ粉末、日本製紙(株)］を溶液に対して
０.４重量％になるように添加して１分間撹拌した。実
施例１と同様にして、孔径５μｍのフィルターで粒子を
除去し、ろ液中のＴＯＣを測定した。さらに、ポリエチ
レンイミン（分子量７万）１００ppmを含むリン酸緩衝
液の溶液及びポリエチレンイミンを含まないリン酸緩衝
液についても、同様にしてＴＯＣを測定した。ＴＯＣの
値は、カオリンを添加した液が５.４ppm、珪藻土を添加
した液が７.９ppm、粒状活性炭を添加した液が１７pp
m、シリカゲルを添加した液が１６ppm、セパビーズを添
加した液が１２ppm、ＫＣフロックを添加した液が１５p
pmであった。一方、ポリエチレンイミンを含むリン酸緩
衝液の溶液のＴＯＣは５６ppmであり、ポリエチレンイ
ミンを含まないリン酸緩衝液のＴＯＣは０.４ppmであっ
た。結果を第３表に示す。

【００１３】

【表３】

【００１４】ポリリン酸ナトリウム及び水不溶性の粒子
を添加していない試料のＴＯＣ５６ppmが、溶液中のポ
リエチレンイミン１００ppmに対応し、ポリエチレンイ
ミンを含有しない試料のＴＯＣ０.４ppmがポリエチレン
イミン０ppmに対応する。ＴＯＣの値から、ポリエチレ
ンイミン溶液にポリリン酸ナトリウムを添加し、さらに
水不溶性の粒子を添加して処理することにより、溶液中
のポリエチレンイミンの７０％以上を除去し得ることが
分かる。比較例１ポリリン酸ナトリウムを加えない以外は、実施例３と同
じ操作を繰り返した。ＴＯＣの値は、カオリンを添加し
た液が４５ppm、珪藻土を添加した液が４３ppm、粒状活
性炭を添加した液が５４ppm、シリカゲルを添加した液
が４９ppm、セパビーズを添加した液が５４ppm、ＫＣフ
ロックを添加した液が５２ppmであった。結果を第４表
に示す。

【００１５】

【表４】

【００１６】ＴＯＣの値から、ポリエチレンイミン溶液
にポリリン酸ナトリウムを添加しないと、水不溶性の粒
子を添加して処理しても、溶液中のポリエチレンイミン
は効果的に除去されないことが分かる。実施例４ウシ血清アルブミン［フラクションＶ、生化学工業
(株)］１００ppmを含むリン酸緩衝液（８ｍＭＮａＨ₂Ｐ
Ｏ₄＋１２ｍＭＮａ₂ＨＰＯ₄＋０.１ＭＮａＣｌ、pH７.
２）の溶液に、ポリエチレンイミン（分子量７万）を濃
度が１００ppmになるよう添加した。この溶液に、ポリ
リン酸ナトリウムを濃度が２００ppmになるように加え
撹拌した。室温で１時間静置したのち、カオリンを溶液
に対して０.４重量％になるように添加して１分間撹拌
した。実施例１と同様に、孔径５μｍのフィルターで粒
子を除去し、ろ液中のＴＯＣを測定した。また、紫外可
視分光光度計［ＵＶ−１６００、(株)島津製作所］を用
いて、ろ液中のアルブミンの波長２８０ｎｍでの紫外線
吸光度を測定した。ＴＯＣは５１ppmであり、吸光度は
０.０５７であった。ウシ血清アルブミン１００ppmを含
むリン酸緩衝液の溶液、ポリエチレンイミン１００ppm
を含むリン酸緩衝液の溶液、ウシ血清アルブミン１００
ppmとポリエチレンイミン１００ppmを含むリン酸緩衝液
の溶液について、同様にしてＴＯＣと吸光度を測定し
た。ウシ血清アルブミンを含む液のＴＯＣは５０ppm、
吸光度は０.０５９であり、ポリエチレンイミンを含む
液のＴＯＣは５６ppm、吸光度は０.０００であり、ウシ
血清アルブミンとポリエチレンイミンを含む液のＴＯＣ
は１０２ppmであり、吸光度は０.０５９であった。結果
を第５表に示す。

【００１７】

【表５】

【００１８】ウシ血清アルブミンとポリエチレンイミン
を含む溶液に、ポリリン酸ナトリウムを添加し、さらに
カオリンを添加して処理することにより、アルブミンに
由来する吸光度は変化せず、ＴＯＣが２分の１に減少し
た。この結果から、溶液中のアルブミンに影響を与える
ことなく、ポリエチレンイミンのみが選択的に高い除去
率で除去されていることが分かる。実施例５ (１)標識化ポリエチレンイミンの製造ポリエチレンイミン（分子量７万）１.０ｇを、炭酸水
素ナトリウム１.０ｇを含む蒸留水１００mlに加えて、
撹拌し溶解した。この溶液に、４−フルオロ−７−ニト
ロベンゾフラザン［和光純薬(株)］２００mgをエタノー
ル１００mlに溶解した溶液を撹拌しながら加えた。この
混合溶液に光があたらないようにアルミホイルを被せ、
その後６０℃で１０分間反応させた。反応終了後の液
を、アセトン１リットル中に添加してポリマーを析出さ
せ、ろ過して得られたポリマーを再度蒸留水に溶解さ
せ、この液を再度アセトン１リットル中に添加してポリ
マーを析出させた。ろ過して得られたポリマーを一晩真
空デシケーター中で真空乾燥して、標識化ポリエチレン
イミン０.１２ｇ（蛍光物質０.５モル％）を得た。 (２)培養液の調製Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓＩＦＯ１３７１９を、５００ml
培養用フラスコを用いて、３７℃で、２日間培養した。
培養液としては、でんぷんを２重量％、ポリペプトンを
２重量％、ＫＨ₂ＰＯ₄を０.１重量％、ＭｇＳＯ₄・７Ｈ
₂Ｏを０.０５重量％、酵母エキスを０.１重量％の組成
の液を用いた。 (３)蛍光測定前記のように調製した培養液を、６,０００rpmで、２５
分間遠心分離して、固形分を除いた清澄な液に、標識化
ポリエチレンイミンを濃度が１０ppmになるように添加
した。この液を光路長１０mmの石英セルに入れ、分光蛍
光光度計［Ｆ−４０１０型、(株)日立製作所］を用い
て、励起波長４７０ｎｍ、蛍光波長５３３ｎｍで測定し
た。蛍光強度は５３.２であった。なお、標識化ポリエ
チレンイミンを添加していない液の蛍光強度は１.５で
あった。この結果から、培養液中の標識化ポリエチレン
イミンを、蛍光強度により定量できることが分かった。 (４)ポリエチレンイミン除去試験−１前記のように培養した液中の固形分濃度は、５,０００p
pmであった。この培養液に、標識化ポリエチレンイミン
を濃度が５００ppmになるように添加した。培養液中に
懸濁していた固形分が、凝集して沈降した。この液を
３,０００rpmで、２５分間遠心分離して、凝集した固形
分を除いた清澄な液の蛍光強度を、前記と同じ条件で測
定した。あらかじめ作成しておいた検量線から、残留す
る標識化ポリエチレンイミンの濃度は４２ppmであるこ
とが分かった。また、遠心分離後の液中の全蛋白質量
を、プロテインアッセイ［バイオ・ラッド・ラボラトリ
ーズ］を用いて測定したところ、７,２００ppmであっ
た。次に、遠心分離後の液にポリリン酸ナトリウムを濃
度が１５０ppmになるように添加して撹拌し、１時間静
置した。この溶液に、カオリンを溶液に対して０.４重
量％になるように添加し、１分間撹拌した。孔径５μｍ
のフィルターを用いてカオリンを除去し、ろ液の蛍光強
度を測定した。あらかじめ作成しておいた検量線から、
残留する標識化ポリエチレンイミンの濃度は３.５ppmで
あることが分かった。また、カオリンを除去した液中の
全蛋白質を測定したところ、７,０００ppmであった。 (５)ポリエチレンイミン除去試験−２ポリエチレンイミン除去試験−１と同様に、培養液に標
識化ポリエチレンイミンを濃度が５００ppmになるよう
に添加した。培養液中に懸濁した固形分が凝集して沈降
した。次に、凝集塊が懸濁した液にポリリン酸ナトリウ
ムを濃度が１５０ppmになるように添加して１分間撹拌
した。この液を３,０００rpmで、２５分間遠心分離し
て、凝集した固形分を除いた液の蛍光強度を測定した。
あらかじめ作成しておいた検量線から、残留する標識化
ポリエチレンイミンの濃度は４.３ppmであることが分か
った。また、遠心分離後の液中の全蛋白質を測定したと
ころ、７,１００ppmであった。比較例２実施例５において調製した標識化ポリエチレンイミン及
び培養液を用い、ポリリン酸ナトリウムを添加すること
なく処理を行った。培養液に標識化ポリエチレンイミン
を濃度が５００ppmになるように添加した。培養液中に
懸濁した固形分が凝集して沈降した。この液を３,００
０rpmで、２５分間遠心分離して、凝集した固形分を除
いた。この溶液に、カオリンを溶液に対して０.４重量
％になるように添加して１分間撹拌した。孔径５μｍの
フィルターを用いてカオリンを除去し、ろ液の蛍光強度
を測定した。あらかじめ作成しておいた検量線から、残
留する標識化ポリエチレンイミンの濃度は３２ppmであ
ることが分かった。また、遠心分離後の液中の全蛋白質
を測定したところ、７,１００ppmであった。実施例５及
び比較例２の結果から、ポリリン酸ナトリウムを添加す
ることにより、培養液中の菌体分離に使用したポリエチ
レンイミンの残留物を、蛋白質の回収率を低下させるこ
となく効率よく除去することができることが分かった。
なお、実施例１〜実施例４の結果から、標識化ポリエチ
レンイミンでない通常のカチオン性を有する高分子凝集
剤を用いても、同様の効果が得られることは明白であ
る。

【００１９】

【発明の効果】本発明方法によれば、発酵生産物と菌体
の分離において、発酵液中の菌体をカチオン性を有する
高分子凝集剤により凝集分離したのち、縮合リン酸塩を
添加することにより、発酵生産物の活性及び回収率を低
下させることなく、液中に残留する高分子凝集剤を選択
的に除去することができる。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】発酵生産物と菌体とを含む液に、カチオン
性を有する高分子凝集剤を添加して菌体を分離する方法
において、高分子凝集剤が残留する液に、縮合リン酸塩
を添加することを特徴とする菌体の分離方法。