JPH1090274A - リゾチームの検出法およびその試験片 - Google Patents
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 尿中のリゾチームを半定量分析する新規な手
段を提供する。 【解決手段】 そのアルキル基が炭素原子９〜１５個を
含む、直鎖状もしくは分岐鎖状アルカンスルホン酸また
はその塩を、蛋白質誤差指示薬中に添加する。
段を提供する。 【解決手段】 そのアルキル基が炭素原子９〜１５個を
含む、直鎖状もしくは分岐鎖状アルカンスルホン酸また
はその塩を、蛋白質誤差指示薬中に添加する。
Description
【０００１】本発明は、蛋白質誤差指示薬と緩衝剤とを
含有する試験系の使用による、水性液体、例えば尿中の
リゾチームの検出に関する。尿試料中の蛋白質の存在の
測定は、リゾチーム尿が腎臓の尿細管細胞に対する損傷
の有効な指針であるために、また、単球性もしくは骨髄
単球性白血病の診断補助として重要である。加えて、リ
ゾチーム尿は、腎盂腎炎、同種移植拒絶または重金属中
毒を示す場合がある。このように、しばしば、尿中のリ
ゾチームを定性的にまた定量的に測定することは必要で
ある。
含有する試験系の使用による、水性液体、例えば尿中の
リゾチームの検出に関する。尿試料中の蛋白質の存在の
測定は、リゾチーム尿が腎臓の尿細管細胞に対する損傷
の有効な指針であるために、また、単球性もしくは骨髄
単球性白血病の診断補助として重要である。加えて、リ
ゾチーム尿は、腎盂腎炎、同種移植拒絶または重金属中
毒を示す場合がある。このように、しばしば、尿中のリ
ゾチームを定性的にまた定量的に測定することは必要で
ある。
【０００２】尿中蛋白の存在を測定する種々の方法が知
られており、最も便利な方法は、蛋白質誤差指示薬と緩
衝剤とを含浸させた吸収ストリップを、少量の尿で湿潤
させる工程を含む。蛋白質誤差指示薬は、蛋白質の存在
下で置換されて検出可能な変色を示すイオン化しうる基
を含むpH指示薬である。これは、pH変化の影響下でその
指示薬が示すのと同じ変色であり、そのために、この試
験系中に緩衝剤を含有させてpH上昇を回避することが、
そのような上昇が蛋白質の不在下でその指示薬を変色さ
せて偽陽性という結果をもたらすため、重要である。
られており、最も便利な方法は、蛋白質誤差指示薬と緩
衝剤とを含浸させた吸収ストリップを、少量の尿で湿潤
させる工程を含む。蛋白質誤差指示薬は、蛋白質の存在
下で置換されて検出可能な変色を示すイオン化しうる基
を含むpH指示薬である。これは、pH変化の影響下でその
指示薬が示すのと同じ変色であり、そのために、この試
験系中に緩衝剤を含有させてpH上昇を回避することが、
そのような上昇が蛋白質の不在下でその指示薬を変色さ
せて偽陽性という結果をもたらすため、重要である。
【０００３】フェノールスルホンフタレイン染料のよう
な蛋白質誤差指示薬の結合に基づく蛋白質検出法は、相
対的に、蛋白質測定の非特異的手段である。本発明は、
リゾチームが正確に検出されうるように、蛋白質誤差指
示薬の結合に基づく方法の感度を向上させるための、ア
ルカンスルホン酸および／またはそれらの塩の使用に関
する。
な蛋白質誤差指示薬の結合に基づく蛋白質検出法は、相
対的に、蛋白質測定の非特異的手段である。本発明は、
リゾチームが正確に検出されうるように、蛋白質誤差指
示薬の結合に基づく方法の感度を向上させるための、ア
ルカンスルホン酸および／またはそれらの塩の使用に関
する。
【０００４】米国特許第５，１８７，１０４号明細書で
は、蛋白質検出法における５′，５″−ジニトロ−
３′，３″−ジヨード−３，４，５，６−テトラブロモ
フェノールスルホンフタレイン（ＤＩＤＮＴＢ）の使用
を検討しており、この試薬との併用の形で色増強ポリマ
ーの使用に言及している。言及された特定ポリマーは、
ポリプロピレングリコール、ポリ（プロピレンエーテル
カーボネート）およびポリビニルエーテルである。ま
た、バイエル社からのKOK10,002 と称するポリエーテル
カーボネート、バイエル社からFenoil D4030という商標
の下で入手可能な１，６−ジメチル−４−ノニルフェノ
ールのプロピレンオキシドおよびエチレンオキシド付加
物、並びにＢＡＳＦ社からのLutonal ISO 名の下で入手
可能なポリビニルエーテルにも言及している。
は、蛋白質検出法における５′，５″−ジニトロ−
３′，３″−ジヨード−３，４，５，６−テトラブロモ
フェノールスルホンフタレイン（ＤＩＤＮＴＢ）の使用
を検討しており、この試薬との併用の形で色増強ポリマ
ーの使用に言及している。言及された特定ポリマーは、
ポリプロピレングリコール、ポリ（プロピレンエーテル
カーボネート）およびポリビニルエーテルである。ま
た、バイエル社からのKOK10,002 と称するポリエーテル
カーボネート、バイエル社からFenoil D4030という商標
の下で入手可能な１，６−ジメチル−４−ノニルフェノ
ールのプロピレンオキシドおよびエチレンオキシド付加
物、並びにＢＡＳＦ社からのLutonal ISO 名の下で入手
可能なポリビニルエーテルにも言及している。
【０００５】米国特許第５，１２４，２６６号明細書に
は、バックグラウンド色の形成を抑制し試験片の感度を
改良するために、蛋白質誤差指示薬と緩衝剤とを含有す
る吸収性支持体マトリックスが重合ウレタンベースの化
合物で処理されている、尿中蛋白質のための試験片の使
用が記載されている。
は、バックグラウンド色の形成を抑制し試験片の感度を
改良するために、蛋白質誤差指示薬と緩衝剤とを含有す
る吸収性支持体マトリックスが重合ウレタンベースの化
合物で処理されている、尿中蛋白質のための試験片の使
用が記載されている。
【０００６】金属キレート染料に基づく蛋白質試験との
関連で、ポリビニルアルコールの使用が、Y. Fujiti に
より分析化学(32)379-386 頁(1983)中に記載されてい
る。この文献には、独立気泡形成のための適当な非イオ
ン界面活性剤として、ポリビニルアルコールおよびポリ
ビニルピロリドンが記載されているが、特定の蛋白質に
対する特異性におけるいかなる増大にも言及していな
い。
関連で、ポリビニルアルコールの使用が、Y. Fujiti に
より分析化学(32)379-386 頁(1983)中に記載されてい
る。この文献には、独立気泡形成のための適当な非イオ
ン界面活性剤として、ポリビニルアルコールおよびポリ
ビニルピロリドンが記載されているが、特定の蛋白質に
対する特異性におけるいかなる増大にも言及していな
い。
【０００７】蛋白質への蛋白質誤差指示薬の結合におけ
る長鎖アルキル基の影響に関して、様々な研究がなされ
ている。蛋白質誤差指示薬の結合における、パルミチン
酸のような長鎖アルキルカルボン酸の影響が、Kragh-Ha
nsenらによりBiophysics Acta(365), 360-371 (1974)に
記載されている。パルミチン酸は、アルビミンへのフェ
ノールレッドの結合において、適度の抑制作用を有する
ものとして示されていたが、別の蛋白質に関しては研究
されなかった。これに基づき、当業者は、アルキル基、
長鎖ないしは他の方法が、特異性を変更するものである
と期待しないであろう。
る長鎖アルキル基の影響に関して、様々な研究がなされ
ている。蛋白質誤差指示薬の結合における、パルミチン
酸のような長鎖アルキルカルボン酸の影響が、Kragh-Ha
nsenらによりBiophysics Acta(365), 360-371 (1974)に
記載されている。パルミチン酸は、アルビミンへのフェ
ノールレッドの結合において、適度の抑制作用を有する
ものとして示されていたが、別の蛋白質に関しては研究
されなかった。これに基づき、当業者は、アルキル基、
長鎖ないしは他の方法が、特異性を変更するものである
と期待しないであろう。
【０００８】別の研究は、ドデシル硫酸ナトリウムのよ
うな長鎖アルカンスルホン酸が蛋白質誤差指示薬の結合
に影響することを示している。MacartらによるClinica
Chimica Acta(144), 7-84 (1984)およびPeriniらによる
Clinica Chimica Acta(143),321-323 (1984) 中で記載
された研究では、ドデシルスルホン酸ナトリウムは、様
々な蛋白質に対するクマシーブリリアントブルー（ＣＢ
Ｂ）の感受性における相違を均等にし、またアルブミン
に関する試験の特異性を減少させたが、別の蛋白質に関
してはその感受性を増大させるものはなかった。
うな長鎖アルカンスルホン酸が蛋白質誤差指示薬の結合
に影響することを示している。MacartらによるClinica
Chimica Acta(144), 7-84 (1984)およびPeriniらによる
Clinica Chimica Acta(143),321-323 (1984) 中で記載
された研究では、ドデシルスルホン酸ナトリウムは、様
々な蛋白質に対するクマシーブリリアントブルー（ＣＢ
Ｂ）の感受性における相違を均等にし、またアルブミン
に関する試験の特異性を減少させたが、別の蛋白質に関
してはその感受性を増大させるものはなかった。
【０００９】本発明は、水性試料中のリゾチームの半定
量分析に関し、この分析は、リゾチームを含有する疑い
のある液体を、緩衝溶液中で蛋白質と接触させた際に検
出可能な変色を示す蛋白質誤差指示薬を含有する試験試
薬と接触させることにより実施される。炭素原子を９〜
１５個有するアルカンスルホン酸またはそのスルホン酸
塩を試薬に添加する工程を含み、ここで、前記アルキル
基の大きさや水性試料中での前記アルカンスルホン酸濃
度は、検出可能な変色が、試料中のリゾチームにより引
き起こされ、ヒト血清アルブミンおよび／またはＩｇＧ
あるいは試料中に存在する他の尿蛋白により引き起こさ
れないようにする。
量分析に関し、この分析は、リゾチームを含有する疑い
のある液体を、緩衝溶液中で蛋白質と接触させた際に検
出可能な変色を示す蛋白質誤差指示薬を含有する試験試
薬と接触させることにより実施される。炭素原子を９〜
１５個有するアルカンスルホン酸またはそのスルホン酸
塩を試薬に添加する工程を含み、ここで、前記アルキル
基の大きさや水性試料中での前記アルカンスルホン酸濃
度は、検出可能な変色が、試料中のリゾチームにより引
き起こされ、ヒト血清アルブミンおよび／またはＩｇＧ
あるいは試料中に存在する他の尿蛋白により引き起こさ
れないようにする。
【００１０】本発明によると、ある種のアルカンスルホ
ン酸および／またはその塩が、リゾチームに対するタン
パク質誤差指示薬の応答を向上させ、ヒト血清アルブミ
ン、ＩｇＧおよび別の尿中蛋白質に対する応答を引き下
げることが判明した。ヒト血清アルブミンは通常尿中に
存在するので（通常は少量であるが）、本発明のアルカ
ンスルホン酸の使用は、他の尿中蛋白質の存在下でのリ
ゾチームの検出法を提供する。リゾチームに対する蛋白
質誤差指示薬応答を向上させながらヒト血清アルブミン
および／またはＩｇＧに対する応答を抑制することがで
きるこれら選択的抑制物質が、その系が提供するリゾチ
ームに対する特異性を向上させるため、リゾチーム濃度
を測定するための試薬にとり望ましい添加物である。本
発明に係る物質の効果は抑制のみでなく、これら物質は
リゾチーム応答をも向上（活性化）させる。本発明にお
いて有効なこれら物質は、炭素原子数９〜１５の直鎖ま
たは分岐鎖アルカンスルホン酸であり、炭素数１０〜１
２の鎖長が好ましい。前記アルカンスルホン酸の塩も、
本発明の使用において好適である。これに関し、適当な
カチオンは、ナトリウム、カリウム、リチウム、マグネ
シウムまたはカルシウムであるが、これらに限定されな
い。
ン酸および／またはその塩が、リゾチームに対するタン
パク質誤差指示薬の応答を向上させ、ヒト血清アルブミ
ン、ＩｇＧおよび別の尿中蛋白質に対する応答を引き下
げることが判明した。ヒト血清アルブミンは通常尿中に
存在するので（通常は少量であるが）、本発明のアルカ
ンスルホン酸の使用は、他の尿中蛋白質の存在下でのリ
ゾチームの検出法を提供する。リゾチームに対する蛋白
質誤差指示薬応答を向上させながらヒト血清アルブミン
および／またはＩｇＧに対する応答を抑制することがで
きるこれら選択的抑制物質が、その系が提供するリゾチ
ームに対する特異性を向上させるため、リゾチーム濃度
を測定するための試薬にとり望ましい添加物である。本
発明に係る物質の効果は抑制のみでなく、これら物質は
リゾチーム応答をも向上（活性化）させる。本発明にお
いて有効なこれら物質は、炭素原子数９〜１５の直鎖ま
たは分岐鎖アルカンスルホン酸であり、炭素数１０〜１
２の鎖長が好ましい。前記アルカンスルホン酸の塩も、
本発明の使用において好適である。これに関し、適当な
カチオンは、ナトリウム、カリウム、リチウム、マグネ
シウムまたはカルシウムであるが、これらに限定されな
い。
【００１１】本発明の一面は、尿中のリゾチームの検出
のための分析試験片に向けられており、この試験片は、
適当な蛋白質誤差指示薬、適当な緩衝剤およびアルカン
スルホン酸もしくはスルホン酸塩を含浸させた吸収支持
体を含む。適当な蛋白質誤差指示薬には、テトラブロモ
フェノールブルー（ＴＢＰＢ）、前記のＤＩＤＮＴＢ、
クマシーブリリアントブルー、ファーストグリーン Ｆ
ＣＦ、ライトグリーンＳＦ、ピロガロールレッドおよび
ピロカテコールバイオレットが含まれる。加えて、メロ
シアニンおよびニトロまたはニトロソ置換ポリハロゲン
化フェノールスルホンフタレイン（米国特許第５，２７
９，７９０号明細書に開示）が使用されうる。
のための分析試験片に向けられており、この試験片は、
適当な蛋白質誤差指示薬、適当な緩衝剤およびアルカン
スルホン酸もしくはスルホン酸塩を含浸させた吸収支持
体を含む。適当な蛋白質誤差指示薬には、テトラブロモ
フェノールブルー（ＴＢＰＢ）、前記のＤＩＤＮＴＢ、
クマシーブリリアントブルー、ファーストグリーン Ｆ
ＣＦ、ライトグリーンＳＦ、ピロガロールレッドおよび
ピロカテコールバイオレットが含まれる。加えて、メロ
シアニンおよびニトロまたはニトロソ置換ポリハロゲン
化フェノールスルホンフタレイン（米国特許第５，２７
９，７９０号明細書に開示）が使用されうる。
【００１２】試験片の吸収支持体は、好ましくは濾紙で
ある。吸収支持体として有効な別の材料には、米国特許
第３，８４６，２４７号明細書記載の、ガラス繊維織物
またはマットガラス繊維、フェルトおよび多孔質セラミ
ック片が含まれる。米国特許第３，５５２，９２８号明
細書記載の、粘土質物質、木、布およびスポンジ材料も
また好ましい。あるいはまた、吸収支持体は、ポリマー
フィルムもしくはガラスのような、非多孔質材料製であ
ってもよい。
ある。吸収支持体として有効な別の材料には、米国特許
第３，８４６，２４７号明細書記載の、ガラス繊維織物
またはマットガラス繊維、フェルトおよび多孔質セラミ
ック片が含まれる。米国特許第３，５５２，９２８号明
細書記載の、粘土質物質、木、布およびスポンジ材料も
また好ましい。あるいはまた、吸収支持体は、ポリマー
フィルムもしくはガラスのような、非多孔質材料製であ
ってもよい。
【００１３】試験片の製造において、蛋白質誤差指示薬
と、緩衝剤と、選択的抑制物質との溶液に、吸収支持体
を含浸させる。この含浸は、通常２回浸漬法により実施
される。最初の浸漬は、緩衝剤が溶解している、水また
は水／極性有機溶媒混合液を含む。乾燥後、典型的には
約０．２〜５．０mM濃度で存在する蛋白質誤差指示薬と
前記スルホン酸もしくはスルホン酸塩抑制物質とが溶解
している有機溶媒の第二溶液に、試験片を含浸させる。
と、緩衝剤と、選択的抑制物質との溶液に、吸収支持体
を含浸させる。この含浸は、通常２回浸漬法により実施
される。最初の浸漬は、緩衝剤が溶解している、水また
は水／極性有機溶媒混合液を含む。乾燥後、典型的には
約０．２〜５．０mM濃度で存在する蛋白質誤差指示薬と
前記スルホン酸もしくはスルホン酸塩抑制物質とが溶解
している有機溶媒の第二溶液に、試験片を含浸させる。
【００１４】含浸および乾燥後、この試験片は、試験片
を尿試料中に浸漬する工程と、指示薬の変色に起因する
応答を読み取る工程（この読み取り工程は、マニュアル
で、または、より良好な定量のために反射型分光光度計
を使用することにより実施される）とを通常は含む使用
の待機状態にある。
を尿試料中に浸漬する工程と、指示薬の変色に起因する
応答を読み取る工程（この読み取り工程は、マニュアル
で、または、より良好な定量のために反射型分光光度計
を使用することにより実施される）とを通常は含む使用
の待機状態にある。
【００１５】この検定が実施されるpHは、試薬配合物中
で使用される、前記蛋白質誤差指示薬染料に依存するで
あろう。その染料と最も適合している緩衝剤は、既知で
あるか、日常実験を通して容易に決定されうる。
で使用される、前記蛋白質誤差指示薬染料に依存するで
あろう。その染料と最も適合している緩衝剤は、既知で
あるか、日常実験を通して容易に決定されうる。
【００１６】本発明を実施する方法を、以下の実施例に
より更に説明する。リゾチームに関する染料結合法の感
度を向上させ、これにより尿のリゾチーム測定値を高め
るために、前記アルカンスルホン酸もしくはスルホン酸
塩を使用する必要性があることを、これら実施例および
含まれるデータは示す。本発明は、他の尿中蛋白質によ
る影響なしに、リゾチームを測定する方法を提供する。
より更に説明する。リゾチームに関する染料結合法の感
度を向上させ、これにより尿のリゾチーム測定値を高め
るために、前記アルカンスルホン酸もしくはスルホン酸
塩を使用する必要性があることを、これら実施例および
含まれるデータは示す。本発明は、他の尿中蛋白質によ
る影響なしに、リゾチームを測定する方法を提供する。
【００１７】実施例１ ＤＩＤＮＴＢ蛋白質試薬を、Alhstrom 204濾紙の２回飽
和工程から得た。第一の飽和工程は、緩衝剤として酒石
酸並びにバックグラウンド染料としてメチルレッドを含
有する水性エタノール混合液を用いて実施した。水酸化
ナトリウムおよび／または塩酸を用いて、混合液のpHを
２．１に調節した。第二の飽和工程は、蛋白質指示薬染
料と、ＤＩＤＮＴＢと、増強ポリマーとしてLutanol M4
0 〔ポリビニルエーテル〕とを含有するトルエン／ＴＨ
Ｆ混合液を用いて実施した。各成分の機能、濃度および
許容範囲を表１に示す。アルカンスルホン酸およびスル
ホン酸塩を、溶解度に依存して、水性溶媒か有機溶媒混
合液のいずれかに添加した。
和工程から得た。第一の飽和工程は、緩衝剤として酒石
酸並びにバックグラウンド染料としてメチルレッドを含
有する水性エタノール混合液を用いて実施した。水酸化
ナトリウムおよび／または塩酸を用いて、混合液のpHを
２．１に調節した。第二の飽和工程は、蛋白質指示薬染
料と、ＤＩＤＮＴＢと、増強ポリマーとしてLutanol M4
0 〔ポリビニルエーテル〕とを含有するトルエン／ＴＨ
Ｆ混合液を用いて実施した。各成分の機能、濃度および
許容範囲を表１に示す。アルカンスルホン酸およびスル
ホン酸塩を、溶解度に依存して、水性溶媒か有機溶媒混
合液のいずれかに添加した。
【００１８】
【表１】
【００１９】この濃度範囲の下端において、ほとんどの
アルカンスルホン酸／スルホン酸塩は、水に可溶である
と予想される。より複雑なアルキル基の場合での、より
高い濃度においては、有機溶媒が好ましい。混合溶液を
使用してその濾紙を飽和し、各飽和処理の後７分間乾燥
した。結果的に得られた乾燥試薬を、試験片の形態に加
工した。０もしくは３０mg/dl ヒト血清アルブミン（Ｈ
ＳＡ）、あるいは、タム・ホースフォール、α−１−ミ
クログロブリン、糖蛋白質、トランスフェリンまたはα
−１−糖蛋白質のような他の尿中蛋白質（混合）８０mg
/dl を、リゾチームおよびＩｇＧの各々３００mg/dl と
共に含む尿に浸漬させた後、CLINITEK-200+ （商標）計
器上で試験した。
アルカンスルホン酸／スルホン酸塩は、水に可溶である
と予想される。より複雑なアルキル基の場合での、より
高い濃度においては、有機溶媒が好ましい。混合溶液を
使用してその濾紙を飽和し、各飽和処理の後７分間乾燥
した。結果的に得られた乾燥試薬を、試験片の形態に加
工した。０もしくは３０mg/dl ヒト血清アルブミン（Ｈ
ＳＡ）、あるいは、タム・ホースフォール、α−１−ミ
クログロブリン、糖蛋白質、トランスフェリンまたはα
−１−糖蛋白質のような他の尿中蛋白質（混合）８０mg
/dl を、リゾチームおよびＩｇＧの各々３００mg/dl と
共に含む尿に浸漬させた後、CLINITEK-200+ （商標）計
器上で試験した。
【００２０】ＨＳＡ含有尿試料を、１０KDa 分子量分離
の限外濾過膜で濾過し、３０mg/dlＨＳＡの添加に先立
ち、天然起源のＨＳＡを除去した。
の限外濾過膜で濾過し、３０mg/dlＨＳＡの添加に先立
ち、天然起源のＨＳＡを除去した。
【００２１】免疫学的ＨＳＡ検定とクマシーブリリアン
トブルーＣＢＢ法を用いて全蛋白質含有尿試料を採取
し、広範のALBUSTIX（商標）結果を提供する１７５個の
臨床試料をスクリーニングした。１７５個のうち４標本
が、免疫学的検定により、アルブミン、ＩｇＧおよびリ
ゾチームが１．２mg/dl 未満のものとして同定された。
尿をプールし、４０または８０mg/dl 蛋白質に希釈し
た。試薬応答を、１，０００×（６１０nmでの反射率）
／（６９０nmでの反射率）％の結果として、CLINITEK-2
00+ （商標）で測定した。陰性尿および蛋白質含有尿間
での相違を、蛋白質応答として採用した。アルカンスル
ホン酸塩の欠如する対照配合物の応答をアルカンスルホ
ン酸塩を含有する組成物と比較し、応答における％変化
を決定した。この実験からのデータを表２に示す。
トブルーＣＢＢ法を用いて全蛋白質含有尿試料を採取
し、広範のALBUSTIX（商標）結果を提供する１７５個の
臨床試料をスクリーニングした。１７５個のうち４標本
が、免疫学的検定により、アルブミン、ＩｇＧおよびリ
ゾチームが１．２mg/dl 未満のものとして同定された。
尿をプールし、４０または８０mg/dl 蛋白質に希釈し
た。試薬応答を、１，０００×（６１０nmでの反射率）
／（６９０nmでの反射率）％の結果として、CLINITEK-2
00+ （商標）で測定した。陰性尿および蛋白質含有尿間
での相違を、蛋白質応答として採用した。アルカンスル
ホン酸塩の欠如する対照配合物の応答をアルカンスルホ
ン酸塩を含有する組成物と比較し、応答における％変化
を決定した。この実験からのデータを表２に示す。
【００２２】
【表２】
【００２３】表２から、デカンまたはドデカンを含むア
ルキル基を有するスルホン酸が、ＨＳＡや他の尿中蛋白
質の応答を抑制しながら、リゾチーム応答を高めるのに
効果的であると判断することができる。これらデータか
ら、そのアルキル基がＣ9 〜Ｃ15である、直鎖または分
岐鎖アルカンスルホン酸が、ＨＳＡや他の蛋白質の応答
を抑制しながら、リゾチーム応答を高めるという点で効
果的であろうことを、当業者は適正に推定することがで
きる。Ｃ12アルカリ基を有するスルホン酸塩やスルホン
酸が好ましいであろう。１５mg/dl のものに対するその
試薬の応答は、５３２decodes であった。ＩｇＧの場
合、低下した応答が３００mg/dl で見られた。検出可能
な応答は、５０mg/dl ＩｇＧまたは４０mg/dl 尿中蛋白
質では見られなかった。アルカンスルホン酸に加えて、
Ｃ9 〜Ｃ15アルカンスルホン酸塩（そのカチオンは、例
えば、Ｎａ、Ｋ、Ｌｉ、ＭｇまたはＣａである）が、本
発明での使用に適している。反対に、ヘキサデカンカル
ボン酸やデカンカルボン酸のようなアルキルカルボン酸
は、リゾチームを抑制したが、ＨＳＡや他の尿中蛋白質
を抑制しなかった。ポリマー添加物であるポリ（ビニル
スルホン酸）は、ＨＳＡ応答を抑制しながら、リゾチー
ムに影響を与えないことが分かった。
ルキル基を有するスルホン酸が、ＨＳＡや他の尿中蛋白
質の応答を抑制しながら、リゾチーム応答を高めるのに
効果的であると判断することができる。これらデータか
ら、そのアルキル基がＣ9 〜Ｃ15である、直鎖または分
岐鎖アルカンスルホン酸が、ＨＳＡや他の蛋白質の応答
を抑制しながら、リゾチーム応答を高めるという点で効
果的であろうことを、当業者は適正に推定することがで
きる。Ｃ12アルカリ基を有するスルホン酸塩やスルホン
酸が好ましいであろう。１５mg/dl のものに対するその
試薬の応答は、５３２decodes であった。ＩｇＧの場
合、低下した応答が３００mg/dl で見られた。検出可能
な応答は、５０mg/dl ＩｇＧまたは４０mg/dl 尿中蛋白
質では見られなかった。アルカンスルホン酸に加えて、
Ｃ9 〜Ｃ15アルカンスルホン酸塩（そのカチオンは、例
えば、Ｎａ、Ｋ、Ｌｉ、ＭｇまたはＣａである）が、本
発明での使用に適している。反対に、ヘキサデカンカル
ボン酸やデカンカルボン酸のようなアルキルカルボン酸
は、リゾチームを抑制したが、ＨＳＡや他の尿中蛋白質
を抑制しなかった。ポリマー添加物であるポリ（ビニル
スルホン酸）は、ＨＳＡ応答を抑制しながら、リゾチー
ムに影響を与えないことが分かった。
【００２４】実施例２ 効果的にするために要求されるドデカンスルホン酸ナト
リウムの濃度を上記のように試験し、その結果を表３に
示した。ＤＩＤＮＴＢ指示薬濃度が０．８mMすなわち２
５％を超える濃度において、その作用は注目される。過
剰のドデカンスルホン酸ナトリウムにより、その作用は
低下せず、２００％のＤＩＤＮＴＢ指示薬濃度におい
て、最大の効果を奏した。
リウムの濃度を上記のように試験し、その結果を表３に
示した。ＤＩＤＮＴＢ指示薬濃度が０．８mMすなわち２
５％を超える濃度において、その作用は注目される。過
剰のドデカンスルホン酸ナトリウムにより、その作用は
低下せず、２００％のＤＩＤＮＴＢ指示薬濃度におい
て、最大の効果を奏した。
【００２５】
【表３】
【００２６】実施例３ ドデカンスルホン酸ナトリウムの影響を、別の界面活性
剤である、Air Product Corporation からのスルホニル
（Surfonyl、登録商標）ポリエチレンオキシドと比較し
た。表４に示したデータから分かるように、スルホニル
は、典型的な界面活性剤として試薬系に添加可能ではあ
ったが、リゾチームの検出において何の改善も示さなか
った。
剤である、Air Product Corporation からのスルホニル
（Surfonyl、登録商標）ポリエチレンオキシドと比較し
た。表４に示したデータから分かるように、スルホニル
は、典型的な界面活性剤として試薬系に添加可能ではあ
ったが、リゾチームの検出において何の改善も示さなか
った。
【００２７】
【表４】
【００２８】ドデカンスルホン酸ナトリウムまたはスル
ホニルを含有する溶液の表面張力を比較した。０．５％
スルホニル溶液の表面張力は２．０mMドデカンスルホン
酸塩含有溶液のそれと同一であるが、アルブミン応答の
抑制はないということをこの比較は示し、そのために、
ドデシルスルホン酸ナトリウムによって示されたリゾチ
ーム測定におけるその効果は、単に表面的性質によるも
のではないということが分かる。
ホニルを含有する溶液の表面張力を比較した。０．５％
スルホニル溶液の表面張力は２．０mMドデカンスルホン
酸塩含有溶液のそれと同一であるが、アルブミン応答の
抑制はないということをこの比較は示し、そのために、
ドデシルスルホン酸ナトリウムによって示されたリゾチ
ーム測定におけるその効果は、単に表面的性質によるも
のではないということが分かる。
Claims (10)
- 【請求項１】 ヒト血清アルブミンおよび他の蛋白質と
共にリゾチームを含有する疑いのある水性試料の、リゾ
チームに関する半定量分析法であり、また、これら蛋白
質を含有する疑いのある水性試料を、これら蛋白質と接
触させたときに検出可能な変色を示す蛋白質誤差指示薬
染料と緩衝剤とを含む試薬と接触させることにより実施
する分析法であって、 該試薬中に、そのアルキル基が炭素原子９〜１５個を含
む、直鎖状もしくは分岐鎖状アルカンスルホン酸または
その塩を含有させる工程を含み、該アルカンスルホン酸
またはスルホン酸塩が、該試料中に存在するリゾチーム
に起因する検出可能な変色を増強し、それにより分析感
度を向上させることを特徴とする分析法。 - 【請求項２】 水性試料が尿である、請求項１記載の分
析法。 - 【請求項３】 該アルキル基がｎ−ドデシルである、請
求項１記載の分析法。 - 【請求項４】 該アルカンスルホン酸の塩が、ナトリウ
ム、カリウム、リチウム、マグネシウムまたはカルシウ
ム塩である、請求項１記載の分析法。 - 【請求項５】 蛋白質誤差指示薬染料が、メロシアニン
またはニトロもしくはニトロソ置換ポリハロゲン化フェ
ノールスルホンフタレインである、請求項１記載の分析
法。 - 【請求項６】 蛋白質誤差指示薬染料が、テトラブロモ
フェノールブルー、ＤＩＤＮＴＢ、クマシーブリリアン
トブルー、ファーストグリーン ＦＣＦ、ライトグリー
ン ＳＦ、ピロガロールレッドまたはピロカテコールバ
イオレットである、請求項１記載の分析法。 - 【請求項７】 水性試料中のリゾチームを検出するため
の分析試験片であって、蛋白質誤差指示薬と、緩衝剤
と、炭素原子を９〜１５個含む、直鎖状もしくは分岐鎖
状アルカンスルホン酸またはその塩とを含浸させた吸収
支持体を含むことを特徴とする試験片。 - 【請求項８】 該アルカンスルホン酸またはその塩のア
ルキル基がｎ−ドデシルである、請求項７記載の試験
片。 - 【請求項９】 該吸収材料が濾紙である、請求項７記載
の試験片。 - 【請求項１０】 蛋白質誤差指示薬染料が、テトラブロ
モフェノールブルー、ＤＩＤＮＴＢ、クマシーブリリア
ントブルー、ファーストグリーン ＦＣＦ、ライトグリ
ーン ＳＦ、ピロガロールレッドまたはピロカテコール
バイオレットである、請求項７記載の試験片。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/709229 | 1996-09-03 | ||
| US08/709,229 US5753455A (en) | 1996-09-03 | 1996-09-03 | Method for the detection of lysozyme using a protein error indicator dye in conjunction with an alkane sulfonic acid |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1090274A true JPH1090274A (ja) | 1998-04-10 |
Family
ID=24848981
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9222142A Ceased JPH1090274A (ja) | 1996-09-03 | 1997-08-19 | リゾチームの検出法およびその試験片 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5753455A (ja) |
| EP (1) | EP0828159B1 (ja) |
| JP (1) | JPH1090274A (ja) |
| CA (1) | CA2214400C (ja) |
| DE (1) | DE69713973T2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2012517594A (ja) * | 2009-02-06 | 2012-08-02 | アスチュート メディカル，インコーポレイテッド | 腎損傷および腎不全の診断および予後診断のための方法および組成物 |
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| CA2770393A1 (en) | 2009-08-07 | 2011-02-10 | Astute Medical, Inc. | Methods and compositions for diagnosis and prognosis of renal injury and renal failure |
| EP2496942B1 (en) | 2009-11-07 | 2017-03-22 | Astute Medical, Inc. | Methods and compositions for diagnosis and prognosis of renal injury and renal failure |
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| PT2666872T (pt) | 2010-02-05 | 2016-07-08 | Astute Medical Inc | Processos e composições para o diagnóstico e o prognóstico de lesões renais e de insuficiência renal |
| EP3070474A3 (en) | 2010-02-26 | 2016-12-07 | Astute Medical, Inc. | Methods and compositions for diagnosis and prognosis of renal injury and renal failure |
| IN2012MN02812A (ja) | 2010-06-23 | 2015-05-22 | Astute Medical Inc | |
| NZ605698A (en) | 2010-06-23 | 2015-03-27 | Astute Medical Inc | Methods and compositions for diagnosis and prognosis of renal injury and renal failure |
| ES2734494T3 (es) | 2011-12-08 | 2019-12-10 | Astute Medical Inc | Métodos y usos para el diagnóstico de una lesión renal y de una insuficiencia renal |
| TR201807542T4 (tr) | 2013-01-17 | 2018-06-21 | Astute Medical Inc | Böbrek hasarı ve böbrek yetmezliği teşhisi ve prognozuna yönelik metotlar ve bileşimler. |
| EP3465201A4 (en) | 2016-06-06 | 2020-08-26 | Astute Medical, Inc. | MANAGEMENT OF ACUTE KIDNEY DAMAGE USING INSULINOMIMETIC GROWTH FACTOR BINDING PROTEIN 7 AND TISSUE METALLOPROTEINASE 2 INHIBITOR |
Family Cites Families (4)
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| ES2092595T3 (es) * | 1991-06-06 | 1996-12-01 | Bayer Ag | Tira de ensayo que contiene merocianina y fenolsulfonoftaleinas polihalogenadas nitro o nitroso sustituidas como indicadores de proteinas. |
| US5424215A (en) * | 1994-02-07 | 1995-06-13 | Miles Inc. | Assay for the determination of protein in a biological sample |
| US5593895A (en) * | 1995-04-27 | 1997-01-14 | Bayer Corporation | Method for the detection of protein in urine |
-
1996
- 1996-09-03 US US08/709,229 patent/US5753455A/en not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-08-19 JP JP9222142A patent/JPH1090274A/ja not_active Ceased
- 1997-08-21 DE DE69713973T patent/DE69713973T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1997-08-21 EP EP97114435A patent/EP0828159B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-09-03 CA CA002214400A patent/CA2214400C/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2012517594A (ja) * | 2009-02-06 | 2012-08-02 | アスチュート メディカル，インコーポレイテッド | 腎損傷および腎不全の診断および予後診断のための方法および組成物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2214400A1 (en) | 1998-03-03 |
| EP0828159A1 (en) | 1998-03-11 |
| CA2214400C (en) | 2002-11-12 |
| EP0828159B1 (en) | 2002-07-17 |
| DE69713973T2 (de) | 2003-02-27 |
| US5753455A (en) | 1998-05-19 |
| DE69713973D1 (de) | 2002-08-22 |
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