JPH11116596A

JPH11116596A - ペプチド又はペプチド混合物

Info

Publication number: JPH11116596A
Application number: JP9291838A
Authority: JP
Inventors: Kenji Sato; 健司佐藤; Asuka Akaboshi; 亜朱香赤星; Takashi Nakamura; 考志中村; Kozo Otsuki; 耕三大槻; Motoi Matsuura; 基松浦
Original assignee: Meiji Milk Products Co Ltd
Current assignee: Meiji Dairies Corp
Priority date: 1997-10-09
Filing date: 1997-10-09
Publication date: 1999-04-27

Abstract

(57)【要約】【解決手段】たん白質をたん白質分解酵素で加水分解
して得られるペプチドの混合物であり、特定の等電点を
有する画分からなる成分を主体とするペプチド（混合
物）。【効果】グルタミンが豊富に含まれてはいるが、Ｎ−
末端がピロ化されていないペプチド（生体内で分解され
る）等各種目的に合致した有用ペプチドが得られ、飲食
品や医薬品に利用することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ペプチド又はペプ
チド混合物に関する。詳しくは、たん白質をたん白質分
解酵素によって加水分解したペプチド混合物より分画さ
れたペプチド又はペプチド混合物に関する。更に詳しく
は、食用たん白質をたん白質分解酵素で低分子化したペ
プチド又はペプチド混合物に関する。

【０００２】また本発明によれば、目的とするペプチド
又はペプチド混合物を自由に得ることができ、例えば、
グルタミンを豊富に含有するにもかかわらずＮ−末端が
封鎖されていないペプチド又はペプチド混合物を大量に
製造することが可能となり、各種生理活性を有するグル
タミンの供給源として飲食品や医薬品に広く利用するこ
とができる。

【０００３】

【従来の技術】たん白質をたん白質分解酵素によって加
水分解して低分子化し、ペプチドの形態に変化させる
と、その性状や溶解性を改変することが可能である。従
って、食品製造時の工程上の不備によって、本来の形状
では使用が困難であったり、使用が制限されていたたん
白質をペプチド態に変化させれば、食品への応用を拡大
することが可能である。

【０００４】たん白質をペプチド態に改変した場合で
も、本来のたん白質が食用であれば、それから得られる
ペプチドもまた食用に用いることが可能である。また、
個々のアミノ酸を化学的に合成してペプチドとして使用
するよりもはるかに安価な費用で、かつ、安全に食品製
造に用いることが可能である。また、個々のアミノ酸を
混合して食用に用いる場合には、添加アミノ酸の構成を
自由に調節できる半面、アミノ酸特有の異味や苦みがあ
り、個々のアミノ酸によって溶解性が異なり、添加アミ
ノ酸が容易に沈澱して食品の外観を損ね、利用上好まし
くない場合もある。また、アミノ酸は一般に反応性が高
く、食品製造の種々の工程中に共存する他の食品成分と
化学反応しやすく、その結果、最終製品に残存するアミ
ノ酸量が変動したり、好ましくない副生産物を生じるこ
ともあり、これらの点も商品設計上の困難さを高めた
り、あるいは消費者に受け入れられない不利益を生じる
場合がある。また、アミノ酸混合物を溶液の状態で摂取
する場合には浸透圧が高くなり、消化・吸収にとって好
ましくない場面も生じる。

【０００５】一方、ペプチド及びペプチド混合物につい
てみると、苦味の少ないペプチドの製造法も種々に開発
されている。また、加水分解の程度を種々に調節して生
成されるペプチドの分子量を調製することが可能とな
り、消費者の様々な要求に対応可能な機能と構造を有す
るペプチドの製造が可能となっている。従って、ペプチ
ドの使用は、アミノ酸を混合して用いる時の不利益をあ
る程度軽減することが可能である。

【０００６】更に、近年ペプチドが有する種々の生理機
能に関心が高まっており、生理機能を有するペプチドを
添加した食品の開発・販売もなされている。特に、経
口、経腸・経管栄養剤等の高付加価値商品の場合にはこ
の傾向が顕著であり、卵たん白質、大豆たん白質、小麦
たん白質、乳たん白質等の種々のたん白質を加水分解し
たペプチドが製造され、調製粉乳、経腸栄養剤、経管栄
養剤、特定保険用食品等に使用される場面が多く見られ
ている。

【０００７】その例として、例えば、グルタミンの経腸
栄養剤への使用が挙げられる。グルタミンは小腸上皮細
胞のエネルギー源となり、増殖促進効果を有するため、
近年経腸・経管栄養剤に添加されている。しかし、グル
タミンは溶液中では不安定であり、アミノ酸の形態で経
腸栄養剤に添加された場合には、溶液中で急速に分解さ
れる。この対策として、経腸栄養剤投与直前に粉態のグ
ルタミンを溶解して添加する方法があるが、医療現場で
の溶解・添加作業が必要であり、特に緊急を要する医療
現場としては好ましくない。

【０００８】また、グルタミンをアミノ酸の形態で経腸
栄養剤へ添加すると、経腸・経管栄養剤の浸透圧が高く
なり、消化吸収にとって好ましくない。この対策とし
て、グルタミンを多く含む小麦グルテンをたん白質分解
酵素で加水分解して生成されたペプチドを用いている場
合がある。

【０００９】小麦たん白質であるグルテンは、約３７％
のグルタミンを含有している。グルテンは水に溶けない
ために、グルテンの形態で経腸・経管栄養剤に添加する
と、栄養剤のグルタミン量は多くなるものの、沈澱を生
じ、使用に支障をきたす。しかし、グルテンを加水分解
し、ペプチドの形態に変換すれば、溶解性が増し、経腸
・経管栄養剤に添加してもグルタミンの含量が増加し、
かつ、沈澱も生じない。このような考えに基づいて、小
麦ペプチドを添加した、経腸・経管栄養剤が開発され、
一部は実用化されて販売されている。

【００１０】しかしながら、予期せざることに、従来の
製品はグルタミンの含有量が理論値よりも低く、所期の
目的が達成されないことを本発明者らははじめて見出
し、この点が本発明を開始する端緒のひとつとなったの
である。

【００１１】すなわち、本発明者らは、食品中の個々の
アミノ酸含量を正確に知る目的で高精度なアミノ酸定量
を行うための試料処理方法と個々のアミノ酸定量法を組
み合わせ、種々のペプチド食品のアミノ酸量を定量した
（K．Sato，Y．Tsukamasa，C．Imai，K．Ohtsuki，Y．S
himizu，M．Kawabata；J．Agricultural and Food Chem
istry，40，806-810（1992））。その結果、従来の技術
では、小麦ペプチドを添加した商品中のグルタミンの定
量法が適切でなく、商品開発者が期待し、設計したより
もはるかに少ない量のグルタミンしか含有していないこ
とを本発明者らは発見したのである。

【００１２】すなわち、一般に商品中のアミノ酸量を定
量する場合には、対象商品を塩酸加水分解し、個々のア
ミノ酸へと分解した後に、アミノ酸分析計などを用いて
定量している。しかし、グルタミンは塩酸加水分解によ
ってグルタミン酸へと変化し、既存のグルタミン酸と判
別不能となる。また、グルタミンが商品中で既に別の形
態に変化していた場合にも判別不能である。従来のアミ
ノ酸分析法で定量した場合には、小麦ペプチドの添加後
は定量されたグルタミン酸の量が大幅に増加し、商品開
発者が期待した値と近似したために増加分はグルタミン
由来のものであると判断したと推定される。しかしなが
ら、本発明者らの方法によると、小麦ペプチドを添加し
た商品中のグルタミン量は予想される値の半分しかない
ことが判明した。そして残りの半分はペプチドのＮ−末
端がピロ化された形状をしていることが判明した（佐藤
健司、西村良子、阿部典子、大西美則、大槻耕三、河端
信：１９９５年度日本農芸化学会大会講演要旨集、ｐｐ
１３１、札幌、（１９９５））。

【００１３】小麦グルテンをたん白質分解酵素で処理す
ると、種々のペプチドが生じる。グルテンはグルタミン
の含量が多いために、ペプチドのＮ−末端に位置する確
率も高くなる。グルタミンがＮ−末端に位置したペプチ
ドの場合には、その後の食品の製造工程中の加熱などの
処理により、容易にグルタミンの側鎖のカルボキシ基が
アミノ基と環状構造を形成し（ピロ化）、生体内の消化
酵素では消化不可能な形態へと変化する。しかし、アミ
ノ酸分析を目的として、対象試料を塩酸加水分解をして
グルタミン酸を定量した場合には、ピロ化したグルタミ
ンもグルタミン酸に変化し、従来のアミノ酸定量法では
検知し得なかったと考えられる。この現象は小麦グルテ
ンに限ったことではなく、グルタミンをある程度含有す
るたん白質を加水分解して低分子し、ペプチドとして用
いる場合には常に起こり得ると考えられる。

【００１４】Ｎ−末端がピロ化したペプチド（すなわ
ち、Ｎ−末端封鎖ペプチド）は、人体の消化管内に分泌
されるたん白質分解酵素では全く消化されない。それど
ころか、構造によっては生理活性さえ有するペプチドと
もなり得る。例えば、PyroGlu−His−Pro−NH₂の形態
は、Thyrotropin−releasing factor（TRF）と呼ばれる
ホルモン様のペプチドであるが、この構造は本発明者ら
が小麦ペプチドを添加した経腸栄養剤から分離・解析し
たペプチドと非常に近似した構造をしていた。これ以外
にも、細胞の増殖阻害活性を示すペプチドやNeuropepti
de様の活性を示すペプチドに類似した構造のペプチドが
検出された。また、医薬品として使用されている経腸栄
養剤中に含まれるＮ−末端がピロ化されたペプチド量と
患者が下痢等の症状を起こす報告例との間には強い相関
があることも判明した（K. Sato, A. Kurata, C. Tanak
a, H. Yoshikawa, M. Kotaru, M. Kawabata, Y. Nakamu
ra,K. Ohtsuki;16th International Congress of Nutri
tion, Abstract pp145, July27-August1, 1997, Montre
al, Canada )。

【００１５】即ち、通常の食事が不可能な患者が摂取す
る経腸・経管栄養剤は本来安全であるべきものである
が、その中に、生理作用が不明な形態を有するＮ−末端
がピロ化されたペプチドが多く含まれており、これによ
って患者の病状が悪化する危険があることに本発明者ら
は新たに着目したのである。

【００１６】

【発明が解決しようとする課題】グルタミンが飲食品に
おいて必要なアミノ酸のひとつであることはもとより、
既述のように特に経腸・経管栄養剤へ添加する必要性が
認められている。しかしながら、粉体のグルタミンを投
与直前に溶解し、添加する方法は医療現場に負担が大き
い。また、従来のようにグルタミンを多く含有するたん
白質を加水分解して経腸・経管栄養剤に用いる場合に
は、Ｎ−末端がピロ化されたペプチドを摂取する危険性
がある。グルタミンを多く含むものの、それがペプチド
のＮ−端にないようなペプチドもしくはペプチド混合物
を得ることが可能であれば、これを経腸・経管栄養剤に
グルタミン強化の目的で使用しても、製造工程中に不都
合な産物を生じることがないであろうと考えるに至っ
た。また、その他、各種目的に応じたペプチド（混合
物）を製造することも当業界において強く希求されてい
る。

【００１７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上述した
課題を解決するために各方面から検討した結果、Ｎ−末
端がピロ化されたペプチドあるいはペプチド混合物は等
電点電気泳動によって、酸性側へ泳動されることに着目
し、ペプチド混合物よりＮ−末端がピロ化されたペプチ
ドあるいはペプチド混合物を分離することにはじめて成
功した。また、等電点電気泳動によれば、性質の異なる
ペプチド（混合物）を効率よく分画・濃縮できることも
発見し、このようにして各種ペプチドを工業的に分離、
製造することに成功し、これ（ら）をそれぞれの目的に
使用可能なことも確認し、本発明を完成するに至った。

【００１８】すなわち本発明は、Ｎ−末端封鎖ペプチド
を含まないペプチド（混合物）、あるいはこれとは逆に
Ｎ−末端封鎖ペプチドを主成分とするペプチド（混合
物）、また、等電点電気泳動法等によって分画・濃縮し
てなる特定の等電点を有する画分からなるペプチド（混
合物）に関するものである。以下、本発明について詳述
する。

【００１９】原料として用いるたん白質は摂食可能なも
のであれば特に限定する必要はないが、本発明の目的に
近いたん白質としては、小麦グルテン、乳カゼイン等が
挙げられる。原料たん白質をたん白質分解酵素によって
加水分解し、ペプチドを製造する。この工程において
も、ある程度のＮ−末端がピロ化されたペプチドあるい
はペプチド混合物が生成されていると推定されるが、こ
の後、用いたたん白質分解酵素を熱失活させる工程や生
成したペプチドを乾燥させる工程において、グルタミン
がＮ−末端に位置するペプチドの大半がピロ化するもの
と推定される。

【００２０】生成したペプチド中のＮ−末端がピロ化さ
れたペプチドあるいはペプチド混合物は極性が他のペプ
チドとは大きく異なっている為、等電点電気泳動やイオ
ン交換樹脂などによって他のペプチドと分画することが
可能である。分画の方法は特に規定しないが、分画を行
う工程を少なくし、かつ、分画には食品製造に認められ
ている試薬のみを使用する場合には、先に本発明者が出
願した等電点電気泳動の原理を利用した分画・濃縮法が
好適例として示される（特願平９−２５２６００）。

【００２１】上記した本発明者らの発明に係る分画・濃
縮法は、等電点電気泳動の原理を利用したものであっ
て、大量のペプチドを安全且つ効率的に分画してそれぞ
れ回収するものであって、次のような態様が例示され
る。

【００２２】（１）複数の導管によって、複数の分離室
を直鎖状に結合し、この中にたん白質をたん白質分解酵
素で分解した溶液を満たし、一端にアルカリ溶液を満た
して透析膜で仕切った電極を接合し、他の一端に酸溶液
を満たして透析膜で仕切った電極を接合し、両電極に直
流電流を定電力で電圧の上昇がなくなるまで通電し、た
ん白質分解物中のペプチドが移動しなくなった時点で各
々の分離室中に留まったペプチドを回収すること、を特
徴とする食用ペプチドの分画・濃縮法。

【００２３】（２）複数の導管によって、複数の分離室
を直鎖状に結合し、この中にたん白質をたん白質分解酵
素で分解した溶液を満たし、一端にアルカリ溶液を満た
して透析膜で包んだ電極を入れ、他の一端に酸溶液を満
たして透析膜で包んだ電極を入れ、両電極に直流電流を
定電力で電圧の上昇がなくなるまで通電し、たん白質分
解物中のペプチドが移動しなくなった時点で各々の分離
室中に留まったペプチドを回収すること、を特徴とする
食用ペプチドの分画・濃縮法。

【００２４】上記した方法を実施するには、例えば図５
に示した装置を利用すればよい。本分画装置は、例えば
図５に示すように、分離室１（例えば５００ｍｌ容のプ
ラスチック製セル）を導管３によって数個接続するとと
もに、その両端に電極槽４、５を１つずつ接続してな
る、泳動槽から構成される。

【００２５】分離室１は、その形状、大きさ、材質等に
格別な限定はなく、例えば上部を開放した直方体からな
るプラスチック製のセルとしてもよい。分離室１には、
導管接続するための開口部２をその表裏両面に設ける。
開口部２は、その形状、大きさ、設置数等に格別な限定
はなく、例えば、図示するように、直径１５ｍｍの円形
開口部を４個ずつ設けてもよい。

【００２６】導管３は、導電性ハイドロゲル６で仕切ら
れている。導電性ハイドロゲルの仕切り６は、そのまま
でもよいが、ナイロン製その他適宜の材料からなるメッ
シュ等の支持部材で支持、サポートしておくのが好適で
ある。導電性ハイドロゲルとしては、本技術分野で常用
されるハイドロゲルがすべて使用可能であるが、例えば
寒天、もしくは寒天の純化物であるアガロース等が例示
される。なお、本実施例においては、導電性ハイドロゲ
ルとして、ナイロンメッシュで支持したアガロースゲル
（１．５％）を使用した。

【００２７】また、分離室（セル）１と電極槽（４、
５）の間は、それぞれ透析膜７で仕切った。透析膜７と
しては、すべての透析膜が使用可能であるが、本実施例
においてはセルロースの透析膜で仕切った。電極槽
（４、５）にはそれぞれ電極液を収容した。電極液とし
ては、常用される電極液がすべて使用可能であるが、陰
極には０．１ＭのＮａＯＨ、陽極には０．１ＭのＨ₃Ｐ
Ｏ₄を用いた。そして、アノードセル４及びカソードセ
ル５には、プラチナ電極その他常用される電極をそれぞ
れ挿入した。

【００２８】本装置の構造は、基本的には、上記したよ
うに電極槽−分離室−電極槽からなるものであって、各
種の態様が広く包含され、例えば、その態様として、電
極液を電極槽内に収容したタイプのもの（タイプＩある
いは単にＩということもある）、及び、電極液を透析膜
内に収容したタイプのもの（タイプIIあるいは単にIIと
いうこともある）が例示され、それぞれ図５の上段及び
下段に図示した。

【００２９】本発明を実施するには、分離室（セル）内
にたん白質をたん白質分解酵素で加水分解した溶液を入
れ、両電極に直流電流を通電することにより、ペプチド
を分画することができ、しかも大量処理が可能である。

【００３０】例えば、サンプルとしてカゼインをトリプ
シン分解したものを用い、ペプチドの分離は、逆相ＨＰ
ＬＣの溶離パターンでモニターした結果、５個のサンプ
ルセルを用いて行った場合、ｐＨ約２〜１０の範囲でｐ
Ｈグラジェントが形成された。また、逆相ＨＰＬＣによ
る各画分の溶出パターンの比較を行ったところ、ｐＨの
違いによってそのパターンが各画分で異なるという結果
が得られた。これは、わずか５個のサンプルセルにより
数Ｌのサンプルのペプチドの分画が行われたことを示す
ものである。

【００３１】また更に、サンプルセルの個数を増加させ
ても、同じｐＨを示す画分では、同じペプチド成分が含
まれていること、及び分画の終了は、定電力で電圧の上
昇がなくなったところであること、をそれぞれ見出し、
本装置を使用することによって、各種ペプチドを大量に
且つ効率的に分画できることが確認された。

【００３２】このような方法、あるいはクロマト分離そ
の他既知の方法によって分画・濃縮したＮ−末端がピロ
化されていないペプチドあるいはペプチド混合物はオー
トクレーブ等の厳しい加熱条件を負荷してもＮ−末端が
ピロ化されたペプチドあるいはペプチド混合物が生成さ
れることがなかった。また、加熱の前後で本ペプチドあ
るいはペプチド混合物のグルタミン量は変化しなかっ
た。従って、本分画ペプチドあるいはペプチド混合物
は、グルタミン強化の目的で経腸・経管栄養剤に使用す
ることが可能であることが判明した。

【００３３】一方、生成されたＮ−末端がピロ化された
ペプチドあるいはペプチド混合物は、我々が摂食しても
生体内で分解されない為、食用などには使用不能であ
る。しかし、たん白質の変性防止剤や種々の生理活性ペ
プチドの原料等として使用可能であって、各種の有用な
用途が更に期待される。

【００３４】飲食品として使用する場合には、分画・濃
縮したペプチドを有効成分とし、これをそのまま、使用
したり、他の食品ないし食品成分と併用したりして適宜
常法に従って使用できる。本有効成分を用いる本発明に
係る飲食品は、固体状（粉末、顆粒状その他）、ペース
ト状、液状ないし懸濁状のいずれでもよいが、甘味料、
酸味料、ビタミン剤その他ドリンク剤製造に常用される
各種成分を用いて、健康ドリンク等に製剤化すると好適
である。

【００３５】医薬品として使用する場合、本有効成分
は、種々の形態で投与される。その投与形態としては例
えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等に
よる経口投与をあげることができる。これらの各種製剤
は、常法に従って主薬に賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢
剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤
などの医薬の製剤技術分野において通常使用しうる既知
の補助剤を用いて製剤化することができる。その使用量
は症状、年令、体重、投与方法および剤型等によって異
なるが、例えば実施例１で分画したペプチドの場合、成
人に対して１回約０．１ｍｇ〜１，０００ｍｇを投与す
ることができる。しかもこのペプチドは小麦ペプチド由
来でＮ−末端がピロ化されていないため安全性について
は全く問題がなく、現にラットに対して１日当り５００
ｍｇ経口投与したが急性毒性は全く認められなかった。

【００３６】以下、本発明の実施例について述べるが、
これによって本発明が限定されるものではない。

【００３７】

【実施例１】（１）小麦ペプチド（日清製粉社製商品名 NN-10)の１
％水溶液約２Ｌを先に示した５つの分画セルを有する分
画装置（図５）に供し、５０Ｗ定電力で２４時間泳動し
た。泳動後、Poly HYDROXYETHYL A カラム（２００×
９．４ｍｍ）(Poly LC, Inc 社製)を用い、分画物の組
成を分析に供し、図１に示す結果を得た。Ｎ−末端がピ
ロ化されたペプチドあるいはペプチド混合物は、全ペプ
チド中の約１３％を占めていた。

【００３８】（２）また、上記分画装置で得た分画物を
AG 50W-X8 イオン交換樹脂（バイオラッド社製）で処理
した後に、未吸着部分を図１の場合と同様にPoly HYDRO
XYETHYL A カラム（２００×９．４ｍｍ）(Poly LC, In
c 社製)を用いた分析に供し、図２に示す結果を得た。
その結果から明らかなように、図１に見られた下向きの
矢印で示した保持時間よりも早く出現するピークは消失
し、下向きの矢印で示した保持時間より遅く表われるピ
ークのみからなっている。これらのピークは、Ｎ−末端
がピロ化されたペプチドあるいはペプチド混合物であ
る。

【００３９】従って、フラクションＮｏ．４及びＮｏ．
５にはＮ−末端がピロ化されたペプチドあるいはペプチ
ド混合物を含まないことが示されている。なお、フラク
ションＮｏ．４においては、グルタミン酸が0.456μmol
/mg、グルタミンが2.276μmol/mg含有されており、フラ
クションＮｏ．５においては、グルタミン酸が0.095μm
ol/mg、グルタミンが1.314μmol/mg含有されていた。ま
た、AG 50W-X8 イオン交換樹脂（バイオラッド社製）の
処理によりフラクションＮｏ．１，Ｎｏ．２及びＮｏ．
３の画分からＮ−末端がピロ化されたペプチドあるいは
ペプチド混合物が選択的に溶出されたことを示してい
る。

【００４０】（３）上記第（１）項において分画装置で
得た分画物より、Ｎ−末端がピロ化されたペプチドある
いはペプチド混合物を含まない画分を得た（フラクショ
ンＮｏ．４及びＮｏ．５）。これらのフラクション及び
第（２）項で得たフラクションＮｏ．４及びＮｏ．５に
ついて、その一部を沸とう水中で１０分間加熱した。そ
の後、第（１）項の場合と同様に、Poly HYDROXYETHYL
A カラム（２００×９．４ｍｍ）(Poly LC, Inc 社製)
を用いた分析に供し、図３の結果を得た。その結果から
明らかなように、下向きの矢印で示した保持時間より遅
く表われるピークは認められず、これらの加熱によりＮ
−末端がピロ化されたペプチドあるいはペプチド混合物
が生成されていないことが確認された。

【００４１】（４）第（１）、（２）項で分画して得た
フラクションＮｏ．４及びＮｏ．５の一部を１２０℃、
１５分間のオートクレーブ処理に供した。得られた生成
物を、第（１）項の場合と同様に、Poly HYDROXYETHYL
A カラム（２００×９．４ｍｍ）(Poly LC, Inc 社製)
を用いた分析に供し、図４の結果を得た。

【００４２】図中、Ｆｒ．４及びＦｒ．５は、オートク
レーブ処理に先立ってｐＨを中和した場合を示し、Ｆ
ｒ．４’及びＦｒ．５’は、中和しなかった場合を示し
ており、これらの結果から、下向きの矢印で示した保持
時間より遅く表れるピークは認められず、これらの処理
及び加熱によりＮ−末端がピロ化されたペプチドあるい
はペプチド混合物が新たに生成されていないことが確認
された。

【００４３】（５）上記操作により、Ｎ−末端がピロ化
されたペプチド（混合物）及びＮ−末端がピロ化されて
いないペプチド（混合物）をそれぞれ得ることができ
た。

【００４４】

【実施例２】実施例１で得たＮ−末端がピロ化されてい
ないペプチドのスプレードライ粉末１００ｇ、糖類１５
０ｇ、蜂蜜１５ｇ、アスコルビン酸１ｇ、クエン酸０．
５ｇ、香料適量に水を加えて１ｋｇとし、これを９５℃
で２０分間殺菌し、１００ｍｌずつ無菌的にビンに充填
して、飲食品タイプのドリンクを製造した。

【００４５】

【実施例３】実施例１で得たＮ−末端がピロ化されてい
ないペプチドの５０％水懸濁液２００ｇ、酢酸トコフェ
ロール５ｇ、硝酸チアミン１０ｇ、ニコチン酸アミド２
０ｇ、無水カフェイン５０ｇ、安息香酸塩及び香料適量
に脱イオン水を加えて３０Ｌとし、殺菌した後、３０ｍ
ｌずつ無菌的にビンに充填して、医薬品としてのドリン
ク剤を製造した。

【００４６】

【発明の効果】本発明により、経腸、経口、経管栄養剤
に使用可能で、製造工程中の加熱などにより生理効果が
不明なＮ−末端がピロ化されたペプチドあるいはペプチ
ド混合物が形成されない、安全な原料を得ることが可能
となる。また、副産物である、Ｎ−末端がピロ化された
ペプチドあるいはペプチド混合物はたん白質分解酵素や
ペプチド分解酵素によって加水分解されない。安定なペ
プチド及びペプチド混合物はたん白質の変性防止剤や種
々の生理活性ペプチドの原料として使用可能である。ま
た更に、その他目的とする性質を有するペプチドも効率
的に大量生産することができ、各種の用途に使用するこ
とができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１に示した小麦ペプチドの１％水溶液を
分画に供し、２４時間後に各々の分画セルに泳動された
分画物をPoly HYDROXYETHYL A カラム（２００×９．４
ｍｍ）(Poly LC, Inc 社製)を用いた分析に供した結果
である。溶媒は５０ｍＭ蟻酸溶液を用い、２１９ｎｍの
吸光値を測定することによってカラムからの溶出図形を
得た。なお、横軸はカラムの保持時間を示す。また、図
中のＦｒ．１〜Ｆｒ．５は各々の分画セルを示す。

【図２】図１に示したのと同じ試料を AG 50W-X8イオン
交換樹脂（バイオラッド社製）で処理した後に未吸着部
分を図１と同様にPoly HYDROXYETHYL A カラム（２００
×９．４ｍｍ）(Poly LC, Inc 社製)を用いた分析に供
した結果を示す。

【図３】図１及び図２に示したフラクションＮｏ．４及
びＮｏ．５の一部を沸とう水中で１０分間加熱した後、
図１と同様にPoly HYDROXYETHYL A カラム（２００×
９．４ｍｍ）(Poly LC, Inc 社製)を用いた分析に供し
た結果を示す。

【図４】図１及び図２に示したフラクションＮｏ．４及
びＮｏ．５の一部を１２０℃、１５分間のオートクレー
ブ処理に供した後、図１と同様にPoly HYDROXYETHYL A
カラム（２００×９．４ｍｍ）(Poly LC, Inc 社製)を
用いた分析に供した結果を示す。

【図５】ペプチドの分画装置（タイプＩ、タイプII）を
示す。

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【手続補正書】

【提出日】平成９年１１月２７日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３７

【補正方法】変更

【補正内容】

【００３７】

【実施例１】（１）小麦ペプチド（特開平６−２４５７９０号公報の
実施例１に記載の方法により製造した。）の１％水溶液
約２Ｌを先に示した５つの分画セルを有する分画装置
（図５）に供し、５０Ｗ定電力で２４時間泳動した。泳
動後、ＰｏｌｙＨＹＤＲＯＸＹＥＴＨＹＬＡカラム
（２００×９．４ｍｍ）（ＰｏｌｙＬＣ，Ｉｎｃ社
製）を用い、分画物の組成を分析に供し、図１に示す結
果を得た。Ｎ−末端がピロ化されたペプチドあるいはペ
プチド混合物は、全ペプチド中の約１３％を占めてい
た。

フロントページの続き (72)発明者大槻耕三京都市左京区下鴨半木町１−５京都府立大学食品科学講座内 (72)発明者松浦基小田原市成田540番地明治乳業株式会社栄養科学研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】Ｎ−末端封鎖ペプチドを含まないペプチ
ド又はペプチド混合物。
【請求項２】グルタミンが豊富に含有されていること
を特徴とする請求項１に記載のペプチド又はペプチド混
合物。
【請求項３】小麦たん白質及び／又はグルテン由来の
請求項１又は２に記載のペプチド又はペプチド混合物。
【請求項４】通常の食品もしくは医薬品製造工程中に
Ｎ−末端封鎖ペプチドを生成しないこと、を特徴とする
請求項１〜３のいずれか１項に記載のペプチド又はペプ
チド混合物。
【請求項５】たん白質をたん白質分解酵素処理を施し
た後に生成されるたん白質の加水分解物、即ちペプチド
の混合物であり、特定の等電点を有する画分からなる成
分を主体とするペプチド又はペプチド混合物。
【請求項６】たん白質をたん白質分解酵素処理を施し
た後に生成されるたん白質の加水分解物、即ちペプチド
の混合物であり、特定の等電点を有する画分が除去され
た成分からなるペプチド又はペプチド混合物。
【請求項７】複数の導管によって、複数の分離室を直
鎖状に結合し、この中にたん白質をたん白質分解酵素で
分解した溶液を満たし、一端にアルカリ溶液を満たして
透析膜で仕切った電極を接合し、他の一端に酸溶液を満
たして透析膜で仕切った電極を接合し、両電極に直流電
流を定電力で電圧の上昇がなくなるまで通電し、たん白
質分解物中のペプチドが移動しなくなった時点で各々の
分離室中に留まったペプチドを回収して得たこと、を特
徴とする請求項１〜６のいずれか１項に記載のペプチド
又はペプチド混合物。
【請求項８】複数の導管によって、複数の分離室を直
鎖状に結合し、この中にたん白質をたん白質分解酵素で
分解した溶液を満たし、一端にアルカリ溶液を満たして
透析膜で包んだ電極を入れ、他の一端に酸溶液を満たし
て透析膜で包んだ電極を入れ、両電極に直流電流を定電
力で電圧の上昇がなくなるまで通電し、たん白質分解物
中のペプチドが移動しなくなった時点で各々の分離室中
に留まったペプチドを回収して得たこと、を特徴とする
請求項１〜６のいずれか１項に記載のペプチド又はペプ
チド混合物。
【請求項９】請求項１〜８のいずれか１項に記載のペ
プチド又はペプチド混合物を含有してなること、を特徴
とする飲食品、あるいは、経口、経腸もしくは経管投与
医薬品。
【請求項１０】Ｎ−末端封鎖ペプチドを主成分として
なるペプチド又はペプチド混合物。