JPH11139994A

JPH11139994A - 抗腫瘍剤

Info

Publication number: JPH11139994A
Application number: JP9316128A
Authority: JP
Inventors: Kunitaka Hirose; 国孝広瀬; Mitsunori Hakozaki; 充徳箱崎; Yukako Ishida; 裕香子石田; Eiji Inoguchi; 英司井野口; Keiko Ishioka; 恵子石岡
Original assignee: Kureha Corp
Current assignee: Kureha Corp
Priority date: 1997-10-31
Filing date: 1997-10-31
Publication date: 1999-05-25

Abstract

(57)【要約】【課題】腫瘍を極めて有効に縮減させる抗腫瘍剤を提
供する。【解決手段】（１）ＩＬ−１８をコードする遺伝子、
又はＩＬ−１８のアミノ酸配列において１若しくは数個
のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されたアミノ酸
配列からなり、かつＩＬ−１８活性を有するタンパク質
をコードする遺伝子と、（２）リポゾームとの複合体を
含む。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、抗腫瘍剤に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】インターロイキン−１８（Ｉｎｔｅｒｌ
ｅｕｋｉｎ−１８；略称＝ＩＬ−１８）は、１９９５年
に岡村らによりマウス劇症肝炎モデルの肝組織中より同
定された〔Ｎａｔｕｒｅ，３７８，８８−９１（１９９
５）〕。ＩＬ−１８は、Ｔ細胞やＮＫ細胞に作用してＩ
ＦＮ−γ産生誘導活性をもつことから、発見当初はγ−
インターフェロン誘導因子（ＩＦＮ−γ Ｉｎｄｕｃｉ
ｎｇＦａｃｔｏｒ；略称＝ＩＧＩＦ）と称されてい
た。ＩＬ−１８の産生細胞は、マクロファージのみなら
ず、皮膚ケラチノサイトや副腎皮質細胞でもその発現が
認められている〔Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２，
２６５９５−２６６０３（１９９７）〕。また、インタ
ーロイキン−１２（略称＝ＩＬ−１２）との相乗効果に
より、γ−インターフェロン（略称＝ＩＦＮ−γ）の産
生誘導能が更に増強することも知られている〔Ｅｕｒ．
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６，１６４７−１６５１（１９
９６）〕。更に、構造上はインターロイキン−１β（略
称＝ＩＬ−１β）と類似点があり、ＩＬ−１β変換酵素
（ＩＬ−１β ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇｅｎｚｙｍｅ；
略称＝ＩＣＥ）によりプロセシングを受けて活性型とな
ることも知られている〔Ｎａｔｕｒｅ，３８６，６１９
−６２３（１９９７）〕。

【０００３】ＩＬ−１８には、前記のＩＦＮ−γ産生誘
導活性の他に、リンパ球のＦａｓリガンドの発現や機能
を増強する作用を有すること〔臨床免疫，２９（６），
６８３−６８９（１９９７）〕、あるいは顆粒球マクロ
ファージコロニー刺激因子（略称＝ＧＭ−ＣＳＦ）の産
生を誘導する作用を有すること〔Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．，１５６，４２７４−４２７９（１９９６）〕が知
られている。ＩＬ−１８の抗腫瘍作用については、腹水
型ＭｅｔｈＡザルコーマ担癌マウスに対して、ＩＬ−
１８（タンパク質）を全身投与した場合に、腫瘍を縮小
させる効果があることが報告されている〔Ｃａｎｃｅｒ
ＩｍｍｕｎｏｌＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，４３，３６
１−３６７（１９９７）〕。しかし、その他の抗腫瘍活
性、とりわけ、固形癌に対する抗腫瘍活性に関する報告
はない。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明者は、ＩＬ−１
８をコードする遺伝子を癌細胞内部に挿入させることに
より、癌を極めて有効に抑制することができることを見
出した。本発明は、こうした知見に基づくものである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】従って、本発明は、
（１）（ａ）インターロイキン−１８をコードする遺伝
子、又は（ｂ）インターロイキン−１８のアミノ酸配列
において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、若し
くは付加されたアミノ酸配列からなり、かつインターロ
イキン−１８活性を有するタンパク質（以下、インター
ロイキン−１８改変体又はＩＬ−１８改変体と称するこ
とがある）をコードする遺伝子と、（２）リポゾームと
の複合体を含むことを特徴とする、抗腫瘍剤に関するも
のである。

【０００６】本明細書において、「抗腫瘍活性」とは、
腫瘍細胞若しくは組織の発生、成熟、増殖、若しくは拡
散を予防若しくは抑制する作用、又は腫瘍細胞若しくは
組織を退縮化させる作用を意味し、前記腫瘍には、例え
ば、癌腫又は肉腫などが含まれる。或る化合物が前記抗
腫瘍活性を有するか否かは、例えば、以下に示す方法に
より決定することができる。固形癌を移植した実験動物
（例えば、マウス）を用いる場合には、前記担癌動物に
被検化合物を或る期間投与した後に、被検化合物投与群
と対照群（すなわち、被検化合物非投与群）とからそれ
ぞれ腫瘍を切除し、それらの腫瘍重量を計測して、投与
群から切除した腫瘍重量と対照群から切除した腫瘍重量
との間に有為な重量差が認められるか否かによって、抗
腫瘍活性を有するか否かを決定することができる。ま
た、前記の腫瘍重量の計測に代えて、あるいは、腫瘍重
量の計測と併せて、切除した腫瘍病巣の病理学的所見に
よってもたらされる癌細胞の質的変化を比較することに
より、及び／又は延命率を比較することによっても、抗
腫瘍活性を有するか否かを決定することができる。ある
いは、腹水癌を移植した実験動物を用いる場合には、前
記担癌動物に被検化合物を或る期間投与した後に、被検
化合物投与群と対照群（すなわち、被検化合物非投与
群）とからそれぞれ腹水を採取し、それらの腹水に含ま
れる癌細胞数を計測して、投与群の腹水中の癌細胞数と
対照群の腹水中の癌細胞数との間に有為な差が認められ
るか否かによって、抗腫瘍活性を有するか否かを決定す
ることができる。

【０００７】

【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明による抗腫瘍剤において有効成分として用いる複
合体は、前記の遺伝子とリポゾームとを含む。前記の遺
伝子としては、ＩＬ−１８をコードする遺伝子を用いる
ことができる。ＩＬ−１８は、各種の動物、特には哺乳
動物（例えば、ヒト）のＩＬ−１８、例えば、ヒトＩＬ
−１８〔アミノ酸配列は、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５
６，４２７４−４２７９（１９９６）に記載〕、又はマ
ウスＩＬ−１８〔アミノ酸配列は、Ｎａｔｕｒｅ，３７
８，８８−９１（１９９５）に記載〕であることができ
る。前記の遺伝子としては、ＩＬ−１８改変体をコード
する遺伝子を用いることもできる。ＩＬ−１８改変体
は、前記ＩＬ−１８のアミノ酸配列において１若しくは
数個のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されたアミ
ノ酸配列からなり、かつインターロイキン−１８活性
（特には抗腫瘍活性）を有するタンパク質である。

【０００８】前記の各遺伝子をそれぞれ単独で、あるい
は適当に２種又はそれ以上を組合せて用いることができ
る。前記の各遺伝子は、成熟体をコードする遺伝子又は
前駆体をコードする遺伝子であることができる。また、
ＩＬ−１８、又はＩＬ−１８改変体と、他の適当なタン
パク質（例えば、ＩＬ−１２、ＩＣＥなど）との融合タ
ンパク質をコードする遺伝子であることもできる。

【０００９】また、前記の遺伝子は、デオキシヌクレオ
シド、リボヌクレオシド、及び／又はそれらの修飾リボ
ヌクレオシド（例えば、２’−Ｏ−修飾リボヌクレオシ
ド、好ましくは２’−Ｏ−メチルリボヌクレオシド）か
ら形成することができる。従って、本発明において用い
る遺伝子は、リボヌクレオシド及び／又は修飾リボヌク
レオシドからなるリボヌクレオチド（ＲＮＡ）、デオキ
シリボヌクレオシドのみからなるデオキシリボヌクレオ
チド（ＤＮＡ）、あるいはリボヌクレオシド（及び／又
は修飾リボヌクレオシド）とデオキシリボヌクレオシド
との両方からなるリボ／デオキシリボヌクレオチド（キ
メラＲＮＡ／ＤＮＡ）であることができ、デオキシリボ
ヌクレオシドのみからなるオリゴデオキシリボヌクレオ
チド（ＤＮＡ）が好ましい。

【００１０】本発明において用いる遺伝子において、各
ヌクレオシド間のインターヌクレオチド結合は、それぞ
れ独立に、リン酸ジエステル結合、又は修飾リン酸ジエ
ステル結合であることができる。修飾リン酸ジエステル
結合としては、例えば、リン酸ジエステル結合の非架橋
酸素原子２個のうちの酸素原子１個をメチル基に置換し
たメチルホスホネート型結合、リン酸ジエステル結合の
非架橋酸素原子２個のうちの酸素原子１個をアミノ基若
しくは置換アミノ基に置換したホスホロアミデート型結
合、リン酸ジエステル結合の非架橋酸素原子２個のうち
の酸素原子１個を硫黄原子に置換したホスホロチオエー
ト型結合、又はリン酸ジエステル結合の非架橋酸素原子
２個のうちの酸素原子２個を硫黄原子２個に置換したホ
スホロジチオエート型結合などを挙げることができ、そ
れらの１種又はそれ以上を、ヌクレオシド間の結合の１
箇所又はそれ以上の箇所に導入することができる。修飾
されたリン酸ジエステル結合を１箇所又はそれ以上の箇
所に含ませることによって、塩基配列特異性、二重鎖安
定性、抗ヌクレアーゼ耐性、細胞膜透過性、低細胞毒性
と適度な代謝性、及び簡便な調製法などを向上させるこ
とができる。生体内での安定性がよいことから、ホスホ
ロチオエート型結合が特に好ましい。更に、半分以上
（特には全部）のヌクレオシド間の結合が修飾されたリ
ン酸ジエステル結合（特には、ホスホロチオエート型結
合）であることが特に好ましい。

【００１１】本発明において用いる遺伝子は、公知の方
法で調製することができる。例えば、これに限定される
わけではないが、公知の塩基配列から適当なプライマー
を設計及び調製、適当なライブラリーから目的とする遺
伝子をＰＣＲ法などによって取得することができる。

【００１２】本発明で用いることのできるリポゾーム
は、例えば、リン脂質、糖脂質又はコレステロールなど
の脂質分子から調製されるリポゾームであり、一枚膜リ
ポゾーム又は多重膜リポゾームのいずれも有効である。
リポゾームを調製することのできるリン脂質としては、
一般的に、例えば、グリセロリン脂質（ホスファチジル
コリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチ
ジルセリン、ホスファチジン酸、ホスファチジルグリセ
ロール、ホスファチジルイノシトール、又はカルジオピ
ン）、あるいはスフィンゴリン脂質（スフィンゴミエリ
ン、セラミドホスホリルエタノールアミン、又はセラミ
ドホスホリルグリセロール）を挙げることができる。ま
た、リポゾームを調製することのできる糖脂質として
は、例えば、グリセロ糖脂質（ジガラクトシルジグリセ
リド、又はセミノリピド）、あるいはスフィンゴ糖脂質
（ガラクトシルセラミド、又はラクトシルセラミド）を
挙げることができる。

【００１３】リポゾームは極性部の電荷の状態により、
中性リポゾーム、カチオン性リポゾーム、アニオン性リ
ポゾーム、ｐＨ感受性リポゾームなどを挙げることがで
きる。複合体の一方の構成成分である遺伝子が負荷電を
帯びており、しかも、腫瘍細胞の表面も負荷電を帯びて
いるため、カチオン性リポゾームが好ましい。例えば、
カチオン性リポゾームは、カチオン性をもつ頭部（ヘッ
ド）の脂質と、ヘルパー脂質との人工混合物であり、例
えば、（１）（ａ）モノカチオン性ヘッド、例えば、Ｄ
ＯＴＭＡ｛すなわち、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイル
オキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリエチルアンモニ
ウム｝、ＤＭＲＩＥ｛すなわち、Ｎ−［１−（２，３−
ジミリスチルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−
Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アンモニウムブロマイ
ド｝、ＤＯＴＡＰ｛すなわち、１，２−ジオレイルオキ
シ−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン｝、ＤＤＡ
Ｂ｛すなわち、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブ
ロマイド｝、ＰＣ−コレステロール｛すなわち、３β−
［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバ
モイル］コレステロール｝、若しくはＤＯＴＩＭ｛すな
わち、１−［２−９（Ｚ）−オクタデセノイルオキシ）
−エチル−２−（８（Ｚ）−ヘプタデセニル）−３−
（２−ヒドロキシエチル）−イミダゾリニウムクロライ
ド｝、又は（ｂ）ポリカチオン性ヘッド、例えば、ＤＯ
ＧＳ｛すなわち、ジオクタデシルアミドグリシルスペル
ミン｝若しくはＤＯＳＰＡ｛すなわち、２，３−ジオレ
イルオキシ−Ｎ−［２−（スペミンカルボキサミド）エ
チル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアンモニウム
トリフルオロアセテート｝と、（２）ヘルパー脂質、例
えば、ＤＯＰＥ｛すなわち、ジオレオイル−ホスファチ
ジルエタノールアミン｝若しくはＤＯＰＣ｛すなわち、
ジオレイルホスファチジルクロライン｝とからなるカチ
オン性リポゾームを用いることができる。

【００１４】本発明による抗腫瘍剤においては、前記の
遺伝子とリポゾームとが同時に複合体（ｃｏｍｐｌｅ
ｘ）の形で含有されていれば、それらの存在形態は特に
限定されるものではない。前記の複合体としては、例え
ば、前記の遺伝子とリポゾームとの混合物、リポゾーム
による遺伝子の包埋体若しくはカプセル化物等の形態を
挙げることができ、包埋体が好ましい。前記の複合体
は、例えば、遺伝子とリポゾームとを静電気的な結合を
利用して複合体とする方法、すなわちリポフェクション
法と呼ばれる方法で、両者を試験管の中でゆっくり混ぜ
た後、放置することによって調製することができる。

【００１５】前記の包埋体は、例えば、遺伝子をリポゾ
ーム内に封入した形とする方法で調製することができ
る。すなわち、ホスファチジルセリン等の脂質類を用い
て、ボルテックスミキサー等で多重層のリポゾームを調
製し、次に超音波処理して一枚膜のリポゾームを調製す
る。得られた一枚膜リポゾームに遺伝子を加え、軽くボ
ルテックスミキサー等にかけた後、約３７℃で約１０分
間インキュベートするか、あるいは凍結乾燥して再水和
することによって調製することができる。前記のカプセ
ル化物も公知の方法によって調製することができる。

【００１６】本発明の抗腫瘍剤は、前記遺伝子と前記リ
ポゾームとの複合体を有効成分として含有し、所望によ
り、製剤学的若しくは獣医学的に許容することのできる
通常の担体を含有することができる。本発明の抗腫瘍剤
の投与剤型としては、特に限定がなく、例えば、散剤、
細粒剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジ
ョン剤、シロップ剤、エキス剤、若しくは丸剤等の経口
剤、又は注射剤、外用液剤、軟膏剤、坐剤、局所投与の
クリーム、若しくは点眼薬などの非経口剤を挙げること
ができ、特に、腫瘍の局所に投与する薬剤（例えば、注
射剤又は徐放性ペレットなど）が好ましい。

【００１７】前記の経口剤は、例えば、ゼラチン、アル
ギン酸ナトリウム、澱粉、コーンスターチ、白糖、乳
糖、ぶどう糖、マンニット、カルボキシメチルセルロー
ス、デキストリン、ポリビニルピロリドン、結晶セルロ
ース、大豆レシチン、ショ糖、脂肪酸エステル、タル
ク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコー
ル、ケイ酸マグネシウム、無水ケイ酸、又は合成ケイ酸
アルミニウムなどの賦形剤、結合剤、崩壊剤、界面活性
剤、滑沢剤、流動性促進剤、希釈剤、保存剤、着色剤、
香料、矯味剤、安定化剤、保湿剤、防腐剤、又は酸化防
止剤等を用いて、常法に従って製造することができる。

【００１８】非経口投与方法としては、注射（皮下、静
脈内等）、又は直腸投与等が例示される。これらのなか
で、注射剤が最も好適に用いられる。例えば、注射剤の
調製においては、有効成分としての前記複合体の他に、
例えば、生理食塩水若しくはリンゲル液等の水溶性溶
剤、植物油若しくは脂肪酸エステル等の非水溶性溶剤、
ブドウ糖若しくは塩化ナトリウム等の等張化剤、溶解補
助剤、安定化剤、防腐剤、懸濁化剤、又は乳化剤等を任
意に用いることができる。

【００１９】また、本発明の抗腫瘍剤は、徐放性ポリマ
ーなどを用いた徐放性製剤の手法を用いて投与すること
ができる。例えば、本発明の抗腫瘍剤をエチレンビニル
酢酸ポリマーのペレットに取り込ませて、このペレット
を治療すべき組織中に外科的に移植することができる。

【００２０】本発明の抗腫瘍剤は、有効成分として、こ
れに限定されるものではないが、例えば、遺伝子を、
０．０１〜１０重量％、好ましくは０．１〜１０重量
％、より好ましくは１〜１０重量％の量で含有すること
ができる。

【００２１】本発明の抗腫瘍剤は、動物、好ましくは哺
乳動物（特にはヒト）に投与することができる。本発明
の抗腫瘍剤を用いる場合の投与量は、投与対象である動
物の種類、年齢、性別、若しくは体重、疾病の種類、又
は投与方法などにより異なり、特に制限はないが、遺伝
子量として通常成人１人当り１μｇ／ｋｇ〜１００００
μｇ／ｋｇ、好ましくは１０μｇ／ｋｇ〜１０００μｇ
／ｋｇ、より好ましくは５０μｇ／ｋｇ〜５００μｇ／
ｋｇ程度を、１日１〜４回程度にわけて、経口的に又は
好ましくは非経口的（特に局所）に投与する。

【００２２】本発明の抗腫瘍剤は、動物、好ましくは哺
乳動物（特にはヒト）における任意の腫瘍に適用するこ
とができるが、特には癌、好ましくは、固形癌、例え
ば、頭頚部癌、皮膚癌、悪性黒色腫、又は脳腫瘍などの
治療に有効に適用することができる。

【００２３】

【実施例】以下、実施例によって本発明を具体的に説明
するが、これらは本発明の範囲を限定するものではな
い。

【実施例１】この実施例では、ＰＣＲ法を用いて、マウ
ス脾臓ｃＤＮＡライブラリー〔ＣｌｏｎｔｅｃｈＬａ
ｂ．Ｉｎｃ．，パロアルト，カリフォルニア州，米国〕
からマウスＩＬ−１８ｃＤＮＡを単離した。マウスＩＬ
−１８（ＩＧＩＦ）ｃＤＮＡ配列をもとにして、プライ
マーを以下のように設計した。フォワードプライマー：５’−ＣＡＣＡＡＧＣＴＴＧＧＡＡＣＡＡＴＧＧＣＴＧ
ＣＣＡＴＧＴＣＡＧＡＡ−３’ リバースプライマー：５’−ＧＴＧＧＧＡＴＣＣＣＣＴＡＡＣＴＴＴＧＡＴＧ
ＴＡＡＧＴＴＡＧＴＧＡＧＡＧ−３’。ＰＣＲの操作は、９４℃にて１分間、５５℃にて４５秒
間、及び７２℃にて２分間の処理を１サイクルとして、
サーマルサイクラー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社，米
国）を用いて３５サイクル実施した。ＰＣＲ産物をゲル
抽出し、抽出物をクローニング用プラスミド（ｐＣＲ
２．１；ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＣｏｒｐ．，サンディ
エゴ，カリフォルニア州，米国）に挿入した後、その組
換えプラスミドによってコンピーテントＪＭ１０９細胞
（宝酒造，京都，日本）の形質転換を行った。アンピシ
リン耐性コロニーを選別し、ＬＢ培地にて一晩培養した
後、アルカリＰＥＧ法によってプラスミドＤＮＡを調製
し、自動配列決定機（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社，米
国）により塩基配列を確認したところ、マウスＩＬ−１
８成熟体ｃＤＮＡが挿入されていた。

【００２４】

【実施例２】この実施例では、マウスＩＬ−１８ｃＤＮ
Ａをリポゾームとの包埋体の形で、ルイス肺癌細胞に遺
伝子導入した。前記実施例１で調製したプラスミドＤＮ
Ａを制限酸素ＨｉｎｄＩＩＩ及びＢｓｔＸＩで切断し、
動物細胞発現用べクターｐＲＣ／ＣＭＶ（Ｉｎｖｉｔｒ
ｏｇｅｎＣｏｒｐ．，サンディエゴ，カリフォルニア
州，米国）のＨｉｎｄＩＩＩ−ＢｓｔＸＩ部位へ常法に
従って挿入した後、大腸菌ＨＢ１０１株（宝酒造，京
都，日本）に導入し、ＩＬ−１８発現プラスミドＤＮＡ
を調製した。皿（直径＝１０ｃｍ）の中でルイス肺癌細
胞（ＬＬＨ）（ＡＴＣＣＣＲＬ１６４２）を、１０％
ウシ胎児血清（ＦＣＳ）（ＧＩＢＣＯＢＲＬ社，ゲイ
ザーズバーグ，メリーランド州，米国）を含むＲＰＭＩ
１６４０培地（ＧＩＢＣＯＢＲＬ社，ゲイザーズバー
グ，メリーランド州，米国）で一晩培養した後、Ｏｐｔ
ｉ−ＭＥＭ（ＧＩＢＣＯＢＲＬ社，ゲイザーズバー
グ，メリーランド州，米国）で５回洗浄して、最終的に
Ｏｐｔｉ−ＭＥＭを５ｍｌ入れた。

【００２５】前記の発現プラスミド５μｌ（５μｇ）に
滅菌水４５μｌとリポフェクチン（ＧＩＢＣＯＢＲＬ
社，ゲイザーズバーグ，メリーランド州，米国）５０μ
ｌとを添加して混合した後、室温にて静置した。１５分
後、混合液をルイス肺癌細胞の入った皿に添加し、３７
℃にて５％ＣＯ₂存在下でインキュベーター中で培養し
た。５時間後、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０を５
ｍｌ添加して培養した。翌日、ネオマイシン（Ｇ４１
８；ＧＩＢＣＯＢＲＬ社，ゲイザーズバーグ，メリー
ランド州，米国）を最終濃度１００μｇ／ｍｌになるよ
うに添加し、１０日後に、コロニーを形成したＧ４１８
耐性クローン株を得た。１０コロニーをトリプシン／Ｅ
ＤＴＡ溶液（ＧＩＢＣＯＢＲＬ社，ゲイザーズバー
グ，メリーランド州，米国）により回収し、それぞれの
コロニー由来Ｇ４１８耐性株（細胞）を培養し、常法に
よりＲＮＡを抽出した後、³²ＰラベルＩＬ−１８ｃＲＮ
Ａを用いてノーザンブロット法を実施した。こうしてＩ
Ｌ−１８遺伝子を最も高レベルで発現しているＩＬ−１
８遺伝子導入ルイス肺癌細胞株（ＬＬＨ／ＩＬ−１８）
を選択した。

【００２６】

【実施例３】この実施例では、ＩＬ−１８導入−ルイス
肺癌細胞株（ＬＬＨ／ＩＬ−１８）をマウスに移植し
て、抗腫瘍活性を調べた。前記実施例２で選択したＩＬ
−１８導入−ルイス肺癌細胞株（ＬＬＨ／ＩＬ−１８）
を、更に１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地にて培
養し続けた後、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（８週令，雄性）
９匹の右側腹部に１×１０⁶個ずつの量で皮下移植した
〔以下、ＩＬ−１８群と称する〕。コントロールとし
て、動物細胞発現用べクターｐＲＣ／ＣＭＶのみを導入
したルイス肺癌細胞も、同様に、１×１０⁶個ずつの量
で皮下移植した〔以下、コントロール群と称する〕。移
植後４日目までは、コントロール群及びＩＬ−１８群の
両方とも、腫瘍の生着が認められなかった。移植後７日
目及び移植後１１日目に、腫瘍径を計測し、推定腫瘍重
量を式：Ｌ×（Ｗ）²／２（式中、Ｌは腫瘍の長さであり、Ｗは腫瘍の幅である）
によって算出した。結果は以下の表１に示すとおりであ
る。

【表１】７日目の推定腫瘍重量１１日目の推定腫瘍重量コントロール群０．２５±０．１４ｇ１．０３±０．４９ｇＩＬ−１８群０．０８±０．０２ｇ０．２０±０．１０ｇ

【００２７】移植後１７日目にはコントロール群のマウ
スのうち２匹が腫瘍の増大により死亡したが、ＩＬ−１
８群は全例生存していた。移植後１９日目にマウスを頸
椎脱臼にて屠殺し、腫瘍を摘出し、最終腫瘍重量を測定
した。その結果を表２に示す。

【表２】以上のように、ＩＬ−１８群において有意な腫瘍増殖抑
制効果が認められた。また、腫瘍を肉眼的に観察したと
ころ、一部のコントロール群マウスにおいては表皮外ま
での発育を認めたが、ＩＬ−１８群マウスにおいては、
そのような表皮外までの発育は認められなかった。更
に、両群間で脾臓の大きさに差は認められず、両群共
に、腹腔内あるいは胸腔内に明らかな転移巣は存在しな
かった。

【００２８】

【発明の効果】本発明による抗腫瘍剤は遺伝子それ自体
を含有し、その抗腫瘍剤を特に局所へ投与することによ
り、腫瘍（特に固形癌）を極めて有効に縮減させること
ができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者井野口英司群馬県館林市北成島町734の２ (72)発明者石岡恵子東京都小平市鈴木町２丁目180番８号棟 103号

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】（１）インターロイキン−１８をコード
する遺伝子、又はインターロイキン−１８のアミノ酸配
列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、若
しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつインター
ロイキン−１８活性を有するタンパク質をコードする遺
伝子と、（２）リポゾームとの複合体を含むことを特徴
とする、抗腫瘍剤。