JPH11142405A - 免疫分析用クロマトグラフィストリップ - Google Patents
免疫分析用クロマトグラフィストリップInfo
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- JPH11142405A JPH11142405A JP30521197A JP30521197A JPH11142405A JP H11142405 A JPH11142405 A JP H11142405A JP 30521197 A JP30521197 A JP 30521197A JP 30521197 A JP30521197 A JP 30521197A JP H11142405 A JPH11142405 A JP H11142405A
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- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 被検試料液のｐＨや分析対象物の量に影響さ
れることなく被検試料液が検出領域を通過したことを判
定でき、かつトレーサーの劣化又は失活があればそれを
同時に知ることができる対照領域を有するクロマトグラ
フィーストリップを提供する。 【解決手段】 分析対象物と特異的に結合する化合物Ａ
が固定されている検出領域の下流に設けられていて、化
合物Ｂと化合物Ｃとが固定されている対照領域を有し、
化合物Ｂは該分析対象物と特異的に結合する化合物Ｄが
着色微粒子により標識されてなるトレーサーの化合物Ｄ
と特異的に結合するものであり、化合物Ｃは該分析対象
物と特異的に結合するものである、免疫分析用クロマト
グラフィストリップ。
れることなく被検試料液が検出領域を通過したことを判
定でき、かつトレーサーの劣化又は失活があればそれを
同時に知ることができる対照領域を有するクロマトグラ
フィーストリップを提供する。 【解決手段】 分析対象物と特異的に結合する化合物Ａ
が固定されている検出領域の下流に設けられていて、化
合物Ｂと化合物Ｃとが固定されている対照領域を有し、
化合物Ｂは該分析対象物と特異的に結合する化合物Ｄが
着色微粒子により標識されてなるトレーサーの化合物Ｄ
と特異的に結合するものであり、化合物Ｃは該分析対象
物と特異的に結合するものである、免疫分析用クロマト
グラフィストリップ。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】この発明は、被検試料液中の
分析対象物の有無又は量を免疫反応を利用して検出又は
測定するための免疫分析用クロマトグラフィストリップ
に関する。詳しくは、上記免疫分析用クロマトグラフィ
ストリップの検出領域における分析対象物の検出又は測
定結果の有効性を調べるために設けられている対照領域
の改良に関する。
分析対象物の有無又は量を免疫反応を利用して検出又は
測定するための免疫分析用クロマトグラフィストリップ
に関する。詳しくは、上記免疫分析用クロマトグラフィ
ストリップの検出領域における分析対象物の検出又は測
定結果の有効性を調べるために設けられている対照領域
の改良に関する。
【０００２】
【従来の技術】よく知られているように、免疫分析用ク
ロマトグラフィストリップは、一方の端に分析対象物を
含む可能性がある被検試料液が添加される試料添加領域
を有する。添加された被検試料液は、クロマトグラフィ
ストリップ中を毛細管流により移動し、この被検試料液
の移動に伴って、分析対象物及び分析対象物と特異的に
結合する化合物が着色微粒子により標識されてなるトレ
ーサーが、クロマトグラフィストリップの下流方向に移
動する。
ロマトグラフィストリップは、一方の端に分析対象物を
含む可能性がある被検試料液が添加される試料添加領域
を有する。添加された被検試料液は、クロマトグラフィ
ストリップ中を毛細管流により移動し、この被検試料液
の移動に伴って、分析対象物及び分析対象物と特異的に
結合する化合物が着色微粒子により標識されてなるトレ
ーサーが、クロマトグラフィストリップの下流方向に移
動する。
【０００３】上記試料添加領域の下流には、分析対象物
と特異的に結合する化合物が固定されている検出領域が
設けられている。分析対象物は検出領域に固定されてい
る化合物とトレーサーが有する化合物の両方に特異的に
結合するので、分析対象物が検出領域に到着すると分析
対象物の量に比例してトレーサーが検出領域に蓄積され
る。
と特異的に結合する化合物が固定されている検出領域が
設けられている。分析対象物は検出領域に固定されてい
る化合物とトレーサーが有する化合物の両方に特異的に
結合するので、分析対象物が検出領域に到着すると分析
対象物の量に比例してトレーサーが検出領域に蓄積され
る。
【０００４】トレーサーは着色微粒子を有するので、検
出領域はトレーサーの蓄積量に応じて発色する。すなわ
ち、検出領域の発色程度により、被検試料液中の分析対
象物の有無又は量を検出又は測定することができる。
出領域はトレーサーの蓄積量に応じて発色する。すなわ
ち、検出領域の発色程度により、被検試料液中の分析対
象物の有無又は量を検出又は測定することができる。
【０００５】このような免疫分析用クロマトグラフィー
ストリップは、特開昭６１−１４５４５９、特開昭６４
−３２１６９、特開平１−１１３６６２、特開平１−２
４４３７０、特開平１−６３８６５及び特表平１−５０
３１７４等に記載されていて、これらの記載も、本明細
書の記載の一部とする。
ストリップは、特開昭６１−１４５４５９、特開昭６４
−３２１６９、特開平１−１１３６６２、特開平１−２
４４３７０、特開平１−６３８６５及び特表平１−５０
３１７４等に記載されていて、これらの記載も、本明細
書の記載の一部とする。
【０００６】上記免疫分析用クロマトグラフィーストリ
ップにおいては、もちろん、検出領域を被検試料液が通
過しないと、被検試料液中に分析対象物が存在していて
も検出領域は発色しない。そこで、試料液体が検出領域
を通過したことを知るために、検出領域の下流に対照領
域を設けて、被検試料液が対照領域に到達したら、対照
領域が発色するようにされている。例えば、対照領域に
はｐＨ指示薬を固定し、試料液のｐＨにより発色させ
る。あるいは、対照領域にトレーサーが有する化合物と
特異的に結合する化合物を固定し、トレーサーを対照領
域に蓄積させ、対照領域を発色させる。
ップにおいては、もちろん、検出領域を被検試料液が通
過しないと、被検試料液中に分析対象物が存在していて
も検出領域は発色しない。そこで、試料液体が検出領域
を通過したことを知るために、検出領域の下流に対照領
域を設けて、被検試料液が対照領域に到達したら、対照
領域が発色するようにされている。例えば、対照領域に
はｐＨ指示薬を固定し、試料液のｐＨにより発色させ
る。あるいは、対照領域にトレーサーが有する化合物と
特異的に結合する化合物を固定し、トレーサーを対照領
域に蓄積させ、対照領域を発色させる。
【０００７】しかし、従来の免疫分析装置においては、
例えば、ｐＨ指示薬を使用した場合、被検試料液のｐＨ
により、色合いが変動したり、あるいは充分な発色が得
られないこともある。また、ｐＨ指示薬を使用した場合
には、トレーサーの劣化又は失活を知ることができな
い。トレーサーが有する化合物と特異的に結合する化合
物を固定した場合、被検試料液中の分析対象物の量によ
って対照領域のトレーサーの蓄積量が変動し、対照領域
の発色が変動するという欠点があった。
例えば、ｐＨ指示薬を使用した場合、被検試料液のｐＨ
により、色合いが変動したり、あるいは充分な発色が得
られないこともある。また、ｐＨ指示薬を使用した場合
には、トレーサーの劣化又は失活を知ることができな
い。トレーサーが有する化合物と特異的に結合する化合
物を固定した場合、被検試料液中の分析対象物の量によ
って対照領域のトレーサーの蓄積量が変動し、対照領域
の発色が変動するという欠点があった。
【０００８】このように、従来の対照領域は改善する必
要があった。
要があった。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】この発明の目的は、上
記従来のクロマトグラフィーストリップの対照領域にお
ける問題を解決し、被検試料液のｐＨや分析対象物の量
に影響されることなく被検試料液が検出領域を通過した
ことを判定でき、かつトレーサーが有する化合物の劣化
又は失活を、もしあれば、同時に知ることができる対照
領域を有するクロマトグラフィーストリップを提供する
ことにある。
記従来のクロマトグラフィーストリップの対照領域にお
ける問題を解決し、被検試料液のｐＨや分析対象物の量
に影響されることなく被検試料液が検出領域を通過した
ことを判定でき、かつトレーサーが有する化合物の劣化
又は失活を、もしあれば、同時に知ることができる対照
領域を有するクロマトグラフィーストリップを提供する
ことにある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、対照領域
に、分析対象物と特異的に結合する化合物Ｄが着色微粒
子により標識されているトレーサーの化合物Ｄと特異的
に結合する化合物Ｂと、分析対象物に特異的に結合する
化合物Ｃの両方を固定することにより、被検試料液が検
出領域を通過したことを被検試料液のｐＨや分析対象物
の量に影響されることなく知ることができ、かつトレー
サーの劣化又は失活を同時に知ることができることを、
見いだした。すなわちこの発明は、分析対象物と特異的
に結合する化合物Ａが固定されている検出領域の下流に
設けられていて、化合物Ｂと化合物Ｃとが固定されてい
る対照領域を有し、化合物Ｂは該分析対象物と特異的に
結合する化合物Ｄが着色微粒子により標識されてなるト
レーサーの化合物Ｄと特異的に結合するものであり、化
合物Ｃは該分析対象物と特異的に結合するものである、
免疫分析用クロマトグラフィストリップである。
に、分析対象物と特異的に結合する化合物Ｄが着色微粒
子により標識されているトレーサーの化合物Ｄと特異的
に結合する化合物Ｂと、分析対象物に特異的に結合する
化合物Ｃの両方を固定することにより、被検試料液が検
出領域を通過したことを被検試料液のｐＨや分析対象物
の量に影響されることなく知ることができ、かつトレー
サーの劣化又は失活を同時に知ることができることを、
見いだした。すなわちこの発明は、分析対象物と特異的
に結合する化合物Ａが固定されている検出領域の下流に
設けられていて、化合物Ｂと化合物Ｃとが固定されてい
る対照領域を有し、化合物Ｂは該分析対象物と特異的に
結合する化合物Ｄが着色微粒子により標識されてなるト
レーサーの化合物Ｄと特異的に結合するものであり、化
合物Ｃは該分析対象物と特異的に結合するものである、
免疫分析用クロマトグラフィストリップである。
【００１１】
【発明の実施の形態】本発明の免疫分析用クロマトグラ
フィストリップは、以下に説明する特定の対照領域を有
する以外は、通常のものである。
フィストリップは、以下に説明する特定の対照領域を有
する以外は、通常のものである。
【００１２】すなわち、クロマトグラフィストリップ
は、よく知られているように、分析対象物及び後記トレ
ーサー等の分析試薬を、分析対象物を含む可能性がある
被検試料液のクロマトグラフィストリップ中の毛細管流
による移動により、下流に移動させることができるもの
である。本発明のクロマトグラフィストリップのクロマ
トグラフィ担体として、このような性質を有する知られ
ているいずれの担体も使用できる。
は、よく知られているように、分析対象物及び後記トレ
ーサー等の分析試薬を、分析対象物を含む可能性がある
被検試料液のクロマトグラフィストリップ中の毛細管流
による移動により、下流に移動させることができるもの
である。本発明のクロマトグラフィストリップのクロマ
トグラフィ担体として、このような性質を有する知られ
ているいずれの担体も使用できる。
【００１３】また、本発明のクロマトグラフィストリッ
プは、通常のものと同様、被検試料液が添加される試料
添加領域、及び分析対象物と特異的に結合する化合物Ａ
が固定されている検出領域を、少なくとも有する。試料
添加領域はクロマトグラフィストリップの一端（最上
流）に配置され、検出領域は試料添加領域の下流に配置
される。
プは、通常のものと同様、被検試料液が添加される試料
添加領域、及び分析対象物と特異的に結合する化合物Ａ
が固定されている検出領域を、少なくとも有する。試料
添加領域はクロマトグラフィストリップの一端（最上
流）に配置され、検出領域は試料添加領域の下流に配置
される。
【００１４】さらに、クロマトグラフィストリップは、
試料添加領域と検出領域との間に、トレーサーが毛細管
流により移動可能なように置かれている標識領域を有す
ることがある。クロマトグラフィストリップが標識領域
を有しない場合には、トレーサーは、被検試料液と共に
試料添加領域に添加される。
試料添加領域と検出領域との間に、トレーサーが毛細管
流により移動可能なように置かれている標識領域を有す
ることがある。クロマトグラフィストリップが標識領域
を有しない場合には、トレーサーは、被検試料液と共に
試料添加領域に添加される。
【００１５】通常の免疫分析用クロマトグラフィストリ
ップと同様、本発明の免疫分析用クロマトグラフィスト
リップも、試料添加領域の反対の端（最下流）に、添加
された被検試料液の全部を吸収するのに充分な容量の吸
収領域を有する。
ップと同様、本発明の免疫分析用クロマトグラフィスト
リップも、試料添加領域の反対の端（最下流）に、添加
された被検試料液の全部を吸収するのに充分な容量の吸
収領域を有する。
【００１６】本発明の分析対象物には、生体試料中等に
含まれている抗原又は抗体等、通常の免疫反応を利用し
たクロマトグラフィストリップにより検出又は測定され
る分析対象物のいずれも含まれる。
含まれている抗原又は抗体等、通常の免疫反応を利用し
たクロマトグラフィストリップにより検出又は測定され
る分析対象物のいずれも含まれる。
【００１７】化合物Ａは、よく知られているように、分
析対象物が抗原である場合には、その抗原と特異的に結
合する、抗体、又はその抗体のフラグメントである。分
析対象物が抗体である場合には、その抗体と特異的に結
合する抗原、又はその抗原の誘導体、その抗原のフラグ
メント若しくはそのフラグメントの誘導体、又は分析対
象物の抗体により異種動物を感作して得た抗体である。
ここで「異種動物」とは、分析対象物の抗体を産生した
動物種と異なる種の動物をいう。
析対象物が抗原である場合には、その抗原と特異的に結
合する、抗体、又はその抗体のフラグメントである。分
析対象物が抗体である場合には、その抗体と特異的に結
合する抗原、又はその抗原の誘導体、その抗原のフラグ
メント若しくはそのフラグメントの誘導体、又は分析対
象物の抗体により異種動物を感作して得た抗体である。
ここで「異種動物」とは、分析対象物の抗体を産生した
動物種と異なる種の動物をいう。
【００１８】化合物Ａをクロマトグラフィ担体に固定す
るには、知られているいずれの方法も使用できる。例え
ば、微小ビーズに化合物Ａを固定して、このビーズをク
ロマトグラフィ担体に固定したり、又は化合物Ａをクロ
マトグラフィ担体に直接あるいはリンカーを介して結合
させたりする。
るには、知られているいずれの方法も使用できる。例え
ば、微小ビーズに化合物Ａを固定して、このビーズをク
ロマトグラフィ担体に固定したり、又は化合物Ａをクロ
マトグラフィ担体に直接あるいはリンカーを介して結合
させたりする。
【００１９】トレーサーは、分析対象物と特異的に結合
する化合物Ｄを着色微粒子で標識したものである。
する化合物Ｄを着色微粒子で標識したものである。
【００２０】着色微粒子としては、セレニウムコロイド
等の非金属コロイド、金コロイド等の金属コロイド、着
色樹脂粒子、染料コロイド及び着色リポソーム等が知ら
れている。
等の非金属コロイド、金コロイド等の金属コロイド、着
色樹脂粒子、染料コロイド及び着色リポソーム等が知ら
れている。
【００２１】化合物Ｄもよく知られているように、分析
対象物が抗原である場合には、その抗原と特異的に結合
する、抗体又はその抗体のフラグメントである。分析対
象物が抗体である場合には、その抗体と特異的に結合す
る、抗原、又はその抗原の誘導体、その抗原のフラグメ
ント若しくはそのフラグメントの誘導体、又は分析対象
物の抗体により異種動物を感作して得た抗体である。ま
た、化合物Ｄは、化合物Ａと同じものであっても良い
が、異なるものであってもよい。
対象物が抗原である場合には、その抗原と特異的に結合
する、抗体又はその抗体のフラグメントである。分析対
象物が抗体である場合には、その抗体と特異的に結合す
る、抗原、又はその抗原の誘導体、その抗原のフラグメ
ント若しくはそのフラグメントの誘導体、又は分析対象
物の抗体により異種動物を感作して得た抗体である。ま
た、化合物Ｄは、化合物Ａと同じものであっても良い
が、異なるものであってもよい。
【００２２】化合物Ｄを着色微粒子で標識するには、知
られている通常の方法が使用できる。
られている通常の方法が使用できる。
【００２３】本発明の対照領域は、検出領域の下流に配
置され、化合物Ｄと特異的に結合する化合物Ｂと分析対
象物と特異的に結合する化合物Ｃとが固定されている領
域である。
置され、化合物Ｄと特異的に結合する化合物Ｂと分析対
象物と特異的に結合する化合物Ｃとが固定されている領
域である。
【００２４】化合物Ｂは、化合物Ｄが抗原又はその誘導
体等である場合には、その抗原又は抗原誘導体等と特異
的に結合する、抗体又はその抗体のフラグメントであ
り、化合物Ｄが抗体又はそのフラグメントである場合に
は、その抗体又は抗体フラグメントと特異的に結合す
る、抗原、又はその抗原の誘導体、その抗原のフラグメ
ント若しくはそのフラグメントの誘導体、又はその抗体
により異種動物を感作して得た抗体である。
体等である場合には、その抗原又は抗原誘導体等と特異
的に結合する、抗体又はその抗体のフラグメントであ
り、化合物Ｄが抗体又はそのフラグメントである場合に
は、その抗体又は抗体フラグメントと特異的に結合す
る、抗原、又はその抗原の誘導体、その抗原のフラグメ
ント若しくはそのフラグメントの誘導体、又はその抗体
により異種動物を感作して得た抗体である。
【００２５】化合物Ｃは、分析対象物が抗原である場合
には、その抗原と特異的に結合する、抗体又はその抗体
のフラグメントである。分析対象物が抗体である場合に
は、その抗体と特異的に結合する、抗原、又はその抗原
の誘導体、その抗原のフラグメント若しくはそのフラグ
メントの誘導体、又はその抗体により異種動物を感作し
て得た抗体である。また、化合物Ｃは、化合物ＡとＤの
いずれか一方又は両方と同じものであっても良いが、異
なるものであってもよい。
には、その抗原と特異的に結合する、抗体又はその抗体
のフラグメントである。分析対象物が抗体である場合に
は、その抗体と特異的に結合する、抗原、又はその抗原
の誘導体、その抗原のフラグメント若しくはそのフラグ
メントの誘導体、又はその抗体により異種動物を感作し
て得た抗体である。また、化合物Ｃは、化合物ＡとＤの
いずれか一方又は両方と同じものであっても良いが、異
なるものであってもよい。
【００２６】対照領域に化合物Ｂ及びＣを固定する方法
は、検出領域に化合物Ａを固定する方法と同じ方法であ
ってもよいし、異なる方法であってもよい。例えば、リ
ンカーを介してクロマトグラフィ担体に抗体及び抗原を
共有結合させる方法、微粒子表面に抗体または抗原を吸
着させてその微粒子を対照領域に置く方法等がある。
は、検出領域に化合物Ａを固定する方法と同じ方法であ
ってもよいし、異なる方法であってもよい。例えば、リ
ンカーを介してクロマトグラフィ担体に抗体及び抗原を
共有結合させる方法、微粒子表面に抗体または抗原を吸
着させてその微粒子を対照領域に置く方法等がある。
【００２７】本発明の免疫分析用クロマトグラフィスト
リップを用いて分析対象物を検出又は測定する方法は、
従来の免疫分析用クロマトグラフィストリップを用いる
場合と変わるところはない。ただし、対照領域の発色
が、被検試料のｐＨや被検試料中の分析対象物の量に影
響されることがないので、検出領域は被検試料液が通過
したことを判定するために、被検試料のｐＨや被検試料
中の分析対象物の量を管理する必要はない。
リップを用いて分析対象物を検出又は測定する方法は、
従来の免疫分析用クロマトグラフィストリップを用いる
場合と変わるところはない。ただし、対照領域の発色
が、被検試料のｐＨや被検試料中の分析対象物の量に影
響されることがないので、検出領域は被検試料液が通過
したことを判定するために、被検試料のｐＨや被検試料
中の分析対象物の量を管理する必要はない。
【００２８】以下、実施例により、さらに本発明を説明
する。
する。
【００２９】
【実施例】トレーサーを次のように調製した。９１ｍＭ
のＬ−アスコルビン酸ナトリウムと３２ｍＭの酸化セレ
ニウムとを、約４℃で１５分、次いで約４２℃で７０時
間攪拌して、セレニウムコロイドを調製した。得られた
セレニウムコロイドを５５０ｎｍにおける吸光度が３０
になるように１０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）
で希釈した。この希釈液にＨＩＶ―１ｐ４１抗原（１
％）を添加し（トレーサーＡ）、又は添加せずに（トレ
ーサーＢ、トレーサー劣化のモデル）、室温で１時間攪
拌した。それぞれに、アルカリカゼイン（０．２％）を
加えて室温で１時間攪拌して、セレニウムコロイドをア
ルカリカゼインで被覆し、次いで１０ｍＭトリス塩酸緩
衝液（ｐＨ７．４）で洗浄した。
のＬ−アスコルビン酸ナトリウムと３２ｍＭの酸化セレ
ニウムとを、約４℃で１５分、次いで約４２℃で７０時
間攪拌して、セレニウムコロイドを調製した。得られた
セレニウムコロイドを５５０ｎｍにおける吸光度が３０
になるように１０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）
で希釈した。この希釈液にＨＩＶ―１ｐ４１抗原（１
％）を添加し（トレーサーＡ）、又は添加せずに（トレ
ーサーＢ、トレーサー劣化のモデル）、室温で１時間攪
拌した。それぞれに、アルカリカゼイン（０．２％）を
加えて室温で１時間攪拌して、セレニウムコロイドをア
ルカリカゼインで被覆し、次いで１０ｍＭトリス塩酸緩
衝液（ｐＨ７．４）で洗浄した。
【００３０】標識領域を次のように調製した。上記トレ
ーサーＡ又はトレーサーＢを１％カゼイン含有１０ｍＭ
トリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）に入れ、波長５５０ｎ
ｍの吸光度が３．０になるようにしてトレーサー懸濁液
を得た。この懸濁液中にガラス繊維膜（米国ＬＹＤＡＬ
Ｌ社製「Ｌｙｐｏｒｅ９５２４」を浸し懸濁液を充分し
み込ませた後、ガラス繊維膜を乾燥した。
ーサーＡ又はトレーサーＢを１％カゼイン含有１０ｍＭ
トリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）に入れ、波長５５０ｎ
ｍの吸光度が３．０になるようにしてトレーサー懸濁液
を得た。この懸濁液中にガラス繊維膜（米国ＬＹＤＡＬ
Ｌ社製「Ｌｙｐｏｒｅ９５２４」を浸し懸濁液を充分し
み込ませた後、ガラス繊維膜を乾燥した。
【００３１】検出領域を次のように調製した。ＨＩＶ―
１ｐ４１抗原を、０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ７．４）中
に０．１５ｍｇ／ｍｌの濃度になるように調製した。一
方、クロマトグラフィ担体として０．４ｘ４．５ｃｍの
長方形の細孔５μｍのニトロセルロース膜（米国Ｍｉｌ
ｌｉｐｏｒｅ社製）を、０．４ｘ６．０ｃｍの水不透性
のストリップ支持体に長い辺を縦としたときに上端が揃
うように貼付した。ストリップ支持体に貼付したニトロ
セルロース膜の下端から約１ｃｍのところに線状にＨＩ
Ｖ−１ｐ４１抗原の溶液を滴下した後、充分乾燥させ、
ＨＩＶ―１ｐ４１抗原を固定した。
１ｐ４１抗原を、０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ７．４）中
に０．１５ｍｇ／ｍｌの濃度になるように調製した。一
方、クロマトグラフィ担体として０．４ｘ４．５ｃｍの
長方形の細孔５μｍのニトロセルロース膜（米国Ｍｉｌ
ｌｉｐｏｒｅ社製）を、０．４ｘ６．０ｃｍの水不透性
のストリップ支持体に長い辺を縦としたときに上端が揃
うように貼付した。ストリップ支持体に貼付したニトロ
セルロース膜の下端から約１ｃｍのところに線状にＨＩ
Ｖ−１ｐ４１抗原の溶液を滴下した後、充分乾燥させ、
ＨＩＶ―１ｐ４１抗原を固定した。
【００３２】対照領域として、抗ＨＩＶ―１ｐ４１抗体
とＨＩＶ―１ｐ４１抗原の両方が固定されている対照領
域Ｃ、及び抗ＨＩＶ―１ｐ４１抗体のみが固定されてい
る対照領域Ｄを調製した。抗ＨＩＶ―１ｐ４１抗体及び
ＨＩＶ―１ｐ４１抗原の両方又は抗ＨＩＶ―１ｐ４１抗
体を、０．０１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ７．４）中に各１ｍ
ｇ／ｍｌの濃度になるようにし、これを上記ニトロセル
ロース膜の検出領域から約１ｃｍ離れた上端側に線状に
滴下した後、ニトロセルロース膜を充分乾燥させた。ｐ
Ｈ指示薬を固定した対照領域Ｅは次のように調製した。
０．１３％ブロモチモールブルー、４．０％ヒドロキシ
エチルセルロース、０．５％ビニルブチラール樹脂を含
む１２０ｍＭニトリロートリス（メチレンスルホン酸）
溶液をニトロセルロース膜の検出領域から約１ｃｍ離れ
た上端側に線状に滴下し、ニトロセルロース膜を充分乾
燥した。
とＨＩＶ―１ｐ４１抗原の両方が固定されている対照領
域Ｃ、及び抗ＨＩＶ―１ｐ４１抗体のみが固定されてい
る対照領域Ｄを調製した。抗ＨＩＶ―１ｐ４１抗体及び
ＨＩＶ―１ｐ４１抗原の両方又は抗ＨＩＶ―１ｐ４１抗
体を、０．０１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ７．４）中に各１ｍ
ｇ／ｍｌの濃度になるようにし、これを上記ニトロセル
ロース膜の検出領域から約１ｃｍ離れた上端側に線状に
滴下した後、ニトロセルロース膜を充分乾燥させた。ｐ
Ｈ指示薬を固定した対照領域Ｅは次のように調製した。
０．１３％ブロモチモールブルー、４．０％ヒドロキシ
エチルセルロース、０．５％ビニルブチラール樹脂を含
む１２０ｍＭニトリロートリス（メチレンスルホン酸）
溶液をニトロセルロース膜の検出領域から約１ｃｍ離れ
た上端側に線状に滴下し、ニトロセルロース膜を充分乾
燥した。
【００３３】クロマトグラフィストリップを次のように
調製した。上記検出領域としたニトロセルロース膜の下
端部のストリップ支持体上に、０．４ｘ０．４ｃｍの正
方形に切断した上記標識領域（トレーサーＡ及びＢ）
を、ニトロセルロース膜と僅かに接するように貼付し
た。標識領域下端のストリップ支持体上に試料添加領域
として、０．４ｘ１．３ｃｍの不織布（米国Ｄｕｐｏｎ
ｔ社製「Ｓｏｎｔａｒａ８８０１」）を標識領域と接す
るように貼付した。さらに、０．４ｘ５．１ｃｍの長方
形の保護膜フィルム（Ｌｉｎｔｅｃ社製「ＰＥＴ２５
ＰＥ ＬＲ００７４Ａ」）を長い辺を縦としたときに上
辺がニトロセルロース膜の上端に揃うように貼付し、こ
れをクロマトグラフィストリップとした。
調製した。上記検出領域としたニトロセルロース膜の下
端部のストリップ支持体上に、０．４ｘ０．４ｃｍの正
方形に切断した上記標識領域（トレーサーＡ及びＢ）
を、ニトロセルロース膜と僅かに接するように貼付し
た。標識領域下端のストリップ支持体上に試料添加領域
として、０．４ｘ１．３ｃｍの不織布（米国Ｄｕｐｏｎ
ｔ社製「Ｓｏｎｔａｒａ８８０１」）を標識領域と接す
るように貼付した。さらに、０．４ｘ５．１ｃｍの長方
形の保護膜フィルム（Ｌｉｎｔｅｃ社製「ＰＥＴ２５
ＰＥ ＬＲ００７４Ａ」）を長い辺を縦としたときに上
辺がニトロセルロース膜の上端に揃うように貼付し、こ
れをクロマトグラフィストリップとした。
【００３４】使用された被検試料液は、ＨＩＶ抗体強陽
性であることが予め確認されているヒト血清０．５ｍｌ
と２０ｍＭリン酸ｐＨ緩衝液（ｐＨ７．４）０．５ｍｌ
とが混合された被検試料液Ｆ及び上記ヒト血清０．１ｍ
ｌと上記ｐＨ緩衝液９．９ｍｌとが混合された被検試料
液Ｇである。
性であることが予め確認されているヒト血清０．５ｍｌ
と２０ｍＭリン酸ｐＨ緩衝液（ｐＨ７．４）０．５ｍｌ
とが混合された被検試料液Ｆ及び上記ヒト血清０．１ｍ
ｌと上記ｐＨ緩衝液９．９ｍｌとが混合された被検試料
液Ｇである。
【００３５】各被検試料液５０μＬを上記クロマトグラ
フィストリップの試料添加領域に添加し、１５分後に検
出領域及び対照領域の発色を目視により測定した。
フィストリップの試料添加領域に添加し、１５分後に検
出領域及び対照領域の発色を目視により測定した。
【００３６】結果を下表に示す。
【００３７】
【表１】
【００３８】表から明らかなように、本発明の対照領域
である対照領域Ｃを用いた場合には（実験番号１及び
２）、被検試料中の分析対象物の濃度とは無関係に対照
領域は強く発色したが、対照領域がＤである場合には
（実験番号３、４）、分析対象物の濃度に依存して対照
領域の発色程度が異なった。また、トレーサーが分析対
象物と結合できない場合、本発明の対照領域の場合は
（実験番号５）、対照領域は発色しなく異常があること
を知らせたが、ｐＨ指示薬を固定した対照領域Ｅでは
（実験番号６）、対照領域が発色し異常を知らせなかっ
た。
である対照領域Ｃを用いた場合には（実験番号１及び
２）、被検試料中の分析対象物の濃度とは無関係に対照
領域は強く発色したが、対照領域がＤである場合には
（実験番号３、４）、分析対象物の濃度に依存して対照
領域の発色程度が異なった。また、トレーサーが分析対
象物と結合できない場合、本発明の対照領域の場合は
（実験番号５）、対照領域は発色しなく異常があること
を知らせたが、ｐＨ指示薬を固定した対照領域Ｅでは
（実験番号６）、対照領域が発色し異常を知らせなかっ
た。
【００３９】
【発明の効果】以上述べたように、本発明の免疫分析用
クロマトグラフィーストリップを用いることにより、被
検試料液が検出領域を通過したことを、被検試料のｐＨ
や被検試料液中分析対象物の濃度に影響されることなく
判定することができる。加えて、トレーサーの劣化又は
失活があれば、同時に知ることができる。
クロマトグラフィーストリップを用いることにより、被
検試料液が検出領域を通過したことを、被検試料のｐＨ
や被検試料液中分析対象物の濃度に影響されることなく
判定することができる。加えて、トレーサーの劣化又は
失活があれば、同時に知ることができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 片岩 俊次 千葉県松戸市稔台344 ダイナボット株式 会社総合研究所内 (72)発明者 小林 譲 千葉県松戸市稔台344 ダイナボット株式 会社総合研究所内
Claims (1)
- 【請求項１】 分析対象物と特異的に結合する化合物Ａ
が固定されている検出領域の下流に設けられていて、化
合物Ｂと化合物Ｃとが固定されている対照領域を有し、
化合物Ｂは該分析対象物と特異的に結合する化合物Ｄが
着色微粒子により標識されてなるトレーサーの化合物Ｄ
と特異的に結合するものであり、化合物Ｃは該分析対象
物と特異的に結合するものである、免疫分析用クロマト
グラフィストリップ。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30521197A JP3773339B2 (ja) | 1997-11-07 | 1997-11-07 | 免疫分析用クロマトグラフィストリップ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30521197A JP3773339B2 (ja) | 1997-11-07 | 1997-11-07 | 免疫分析用クロマトグラフィストリップ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11142405A true JPH11142405A (ja) | 1999-05-28 |
| JP3773339B2 JP3773339B2 (ja) | 2006-05-10 |
Family
ID=17942395
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP30521197A Expired - Lifetime JP3773339B2 (ja) | 1997-11-07 | 1997-11-07 | 免疫分析用クロマトグラフィストリップ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3773339B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4851321B2 (ja) * | 2003-06-06 | 2012-01-11 | アドバンテイジ ダイアグノスティックス コーポレイション | サンプル中の分析物についての診断試験 |
-
1997
- 1997-11-07 JP JP30521197A patent/JP3773339B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4851321B2 (ja) * | 2003-06-06 | 2012-01-11 | アドバンテイジ ダイアグノスティックス コーポレイション | サンプル中の分析物についての診断試験 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3773339B2 (ja) | 2006-05-10 |
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