JPH11193245A - コンドロイチナーゼａｂｃ組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 コンドロイチナーゼＡＢＣ及び造影剤を含有
する組成物において、コンドロイチナーゼＡＢＣ含量を
低減し、かつ椎間板ヘルニア症の動物の髄核融解効果は
保持し、種々のタイプの椎間板ヘルニアの治療及び治療
効果の確認に有用な組成物を提供する。 【解決手段】 コンドロイチナーゼＡＢＣ及び造影剤を
含有する組成物であって、組成物中のコンドロイチナー
ゼＡＢＣの濃度が約２５０ユニット／ｍｌであるコンド
ロイチナーゼＡＢＣ組成物を、椎間板ヘルニアの治療剤
として用いる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、コンドロイチナー
ゼＡＢＣ及び造影剤を含む組成物、及び該組成物からな
る椎間板ヘルニア治療剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】コンドロイチナーゼＡＢＣ(Chondroitin
ase ABC)〔EC 4.2.2.4〕は、コンドロイチン硫酸Ａ、コ
ンドロイチン硫酸Ｃ、コンドロイチン硫酸Ｂ（デルマタ
ン硫酸）、コンドロイチン及びヒアルロン酸に対して作
用し、これらを不飽和オリゴ糖および不飽和二糖に分解
する酵素である。

【０００３】近年、コンドロイチナーゼＡＢＣ等を椎間
板に投与して髄核を融解し、椎間板ヘルニアを治療する
試みが行なわれており、椎間板ヘルニアの治療薬として
の用途が期待されている〔米国特許第4696816号明細
書、 Clinical Orthopaedics, 253,301-308(1990)〕。

【０００４】またコンドロイチナーゼＡＢＣと造影剤と
を混合し、これを椎間板に投与する試みも行われている
(Spine,第21巻,第21号,第2405〜2411頁(1996年))。こ
の、Spine,第21巻,第21号,第2405〜2411頁(1996年)には
本発明に最も近い技術が記載されており、コンドロイチ
ナーゼＡＢＣ及び造影剤を含有する組成物についての記
載がある。このような組成物を用いてＸ線造影を行うこ
とによって、コンドロイチナーゼＡＢＣが所望部位に所
望量注入されたことが確認でき、また髄核融解効果を確
認することもできる。

【０００５】この組成物は、コンドロイチナーゼＡＢＣ
の濃度が４ユニット／１０μL(４００ユニット／ｍｌ)
であり、正常ウサギ椎間板の髄核を融解する効果がある
ことが記載されている。しかしながら、コンドロイチナ
ーゼＡＢＣと造影剤とを含有する組成物であって、コン
ドロイチナーゼＡＢＣの濃度が約２５０ユニット／ｍｌ
である組成物、及び当該組成物が椎間板ヘルニア症の動
物の髄核を融解する作用を有することについては、記載
もないし示唆もない。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】コンドロイチナーゼＡ
ＢＣは人工的に体内に投与される物質であることから、
コンドロイチナーゼＡＢＣを含有する組成物中のコンド
ロイチナーゼＡＢＣ含量は少しでも少ないほうが良い
が、一方で椎間板ヘルニア症の動物の髄核を確実に融解
し、椎間板ヘルニア症を治療できる効果は維持されなけ
ればならない。

【０００７】すなわち本発明の目的は、コンドロイチナ
ーゼＡＢＣ及び造影剤を含有する組成物において、コン
ドロイチナーゼＡＢＣ含量を低減し、かつ椎間板ヘルニ
ア症の動物の髄核融解効果は保持し、種々のタイプの椎
間板ヘルニアの治療及び治療効果の確認に有用な組成物
を提供することである。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、コンドロ
イチナーゼＡＢＣ及び造影剤を含有する組成物に関して
鋭意検討を行った結果、前記公知のコンドロイチナーゼ
ＡＢＣ組成物（コンドロイチナーゼＡＢＣの濃度が４０
０ユニット／ｍｌ）に比してコンドロイチナーゼＡＢＣ
含量を約１．６倍低減させた組成物が、椎間板ヘルニア
症の動物の髄核融解作用を有しており、かつ種々のタイ
プの椎間板ヘルニアの治療及び治療効果の確認に有用で
あることを見いだし、本発明を完成した。

【０００９】すなわち本発明は、コンドロイチナーゼＡ
ＢＣ及び造影剤を含有する組成物であって、組成物中の
コンドロイチナーゼＡＢＣの濃度が約２５０ユニット／
ｍｌであることを特徴とする、コンドロイチナーゼＡＢ
Ｃ組成物（以下、「本発明組成物」という）を提供する
ものである。

【００１０】本発明はまた、該組成物からなる椎間板ヘ
ルニア治療剤（以下、「本発明治療剤」ともいう）を提
供するものである。

【００１１】

【発明の実施の形態】以下、本発明の実施の形態につい
て説明する。

【００１２】＜１＞本発明組成物 （１）コンドロイチナーゼＡＢＣ 本発明組成物で用いるコンドロイチナーゼＡＢＣは、コ
ンドロイチナーゼＡＢＣとしての作用を有する限りにお
いてその由来は限定されないが、プロテウス・ブルガリ
ス(Proteus vulgaris)由来のコンドロイチナーゼＡＢＣ
が好ましい。

【００１３】プロテウス・ブルガリス由来のコンドロイ
チナーゼＡＢＣについては、特開平６−１５３９４７号
公報、T. Yamagata, H. Saito, O. Habuchi, S. Suzuk
i, J.Biol. Chem., 243, 1523(1968)、S. Suzuki, H. S
aito, T. Yamagata, K. Anno, N. Seno, Y. Kawai, T.
Furuhashi, J. Biol. Chem., 243, 1543(1968)、J. Bio
l. Chem., 272, 9123-9130(1997)等に記載されている。
なお、J. Biol. Chem., 272, 9123-9130(1997)に記載さ
れている酵素は、コンドロイチン硫酸ＡＢＣエキソリア
ーゼ(chondroitin sulfate ABC exolyase)またはエキソ
コンドロイチナーゼＡＢＣ(exochondroitinase ABC)と
して知られており、その製造方法等も同文献中に記載さ
れている。

【００１４】コンドロイチナーゼＡＢＣは、プロテウス
・ブルガリスの菌体から抽出・精製したものを用いても
良く、またコンドロイチナーゼＡＢＣをコードするcDNA
等を用いて、遺伝子工学的手法により製造しても良い。

【００１５】コンドロイチナーゼＡＢＣは、医薬として
使用できる程度に精製され、医薬として混入が許されな
い物質を実質的に含まない酵素であることが好ましい。
すなわち、コンドロイチナーゼＡＢＣは、300ユニット/
mg蛋白以上の酵素活性を有する精製されたコンドロイチ
ナーゼＡＢＣであることが好ましく、300ユニット/mg蛋
白以上の酵素活性を有し、エンドトキシンを実質的に含
まず、核酸、プロテアーゼ含量が検出限界以下である精
製されたコンドロイチナーゼＡＢＣがより好ましい。な
お、本明細書においてコンドロイチナ−ゼＡＢＣの「１
ユニット」とは、pH8.0、37℃で、１分間にコンドロイ
チン硫酸Ｃから１マイクロモルの不飽和二糖を遊離させ
る酵素量を意味する。酵素活性が300ユニット/mg 蛋白
以上であるコンドロイチナーゼＡＢＣを使用することに
より、注射用医薬品として生体内に投与した際に周辺組
織に影響を与えること無く、目的部位（例えば椎間板ヘ
ルニア症の動物の椎間板）のプロテオグリカンを適切に
分解することができ、安全性と有効性が高い医薬とする
ことができる。このようなコンドロイチナーゼＡＢＣ
は、例えば、特開平６−１５３９４７号公報に記載の方
法で得ることができる。

【００１６】（２）造影剤 本発明組成物で用いる造影剤は、コンドロイチナーゼＡ
ＢＣの溶解が可能であり、かつコンドロイチナーゼＡＢ
Ｃの酵素活性に影響を与えないものである限りにおいて
特に限定されない。より具体的には、陽性造影剤である
ことが好ましく、水性のヨード造影剤であることがより
好ましく、水性の非イオン性のヨード造影剤であること
が特に好ましく、イオヘキソールを含有する水性の非イ
オン性のヨード造影剤であることが極めて好ましい。

【００１７】水性のヨード造影剤を用いる場合、当該造
影剤中のヨード濃度は、Ｘ線造影が可能な限りにおいて
特に限定されないが、140mg/ml〜350mg/ml程度が好まし
い。なおヨード濃度が比較的高い造影剤を用いると、Ｘ
線造影像が鮮明になり、また本発明組成物の投与体積を
減らすことができるので好ましい。具体的には造影剤中
のヨード濃度が300mg/ml〜350mg/ml程度のものがより好
ましく、350mg/ml程度のものが特に好ましい。

【００１８】例えば水性の非イオン性のヨード造影剤と
してイオヘキソールを含有する造影剤を用いる場合、当
該造影剤中のイオヘキソールの濃度は、300mg/ml〜755m
g/ml程度が好ましく、647mg/ml〜755mg/ml程度のものが
より好ましく、755mg/ml程度のものが特に好ましい。

【００１９】（３）組成物におけるコンドロイチナーゼ
ＡＢＣの濃度 本発明組成物は、組成物中のコンドロイチナーゼＡＢＣ
の濃度が約２５０ユニット／ｍｌであることを特徴とす
る。

【００２０】本発明組成物におけるコンドロイチナーゼ
ＡＢＣの組成物中の濃度で最も好ましいのは２５０ユニ
ット／ｍｌであるが、当該濃度から著しく逸脱せず、か
つ本発明組成物の効果が失われない限りにおいては、当
該濃度に多少の違いがあったとしても、本発明組成物に
包含されると理解されたい。

【００２１】このような濃度に多少の違いが生じる場合
としては、例えば、(1)本発明組成物の製造時における
コンドロイチナーゼＡＢＣや造影剤の秤量や混合の誤
差、(2)用いるコンドロイチナーゼＡＢＣの比活性のロ
ット間の差、(3)投与対象動物の種類、性別、年齢・週
齢、椎間板ヘルニアのタイプ、椎間板ヘルニアの病態進
行程度等に応じた濃度の多少の変更等が考えられる。

【００２２】具体的には、コンドロイチナーゼＡＢＣの
濃度が、好ましくは２５０ユニット／ｍｌ±１００ユニ
ット／ｍｌ、より好ましくは２５０ユニット／ｍｌ±５
０ユニット／ｍｌ程度の範囲であれば、本発明組成物に
包含されると理解されたい。

【００２３】なお本発明組成物は、さらに通常の医薬の
製造に用いられる医薬担体を含有していても良い。医薬
担体としては、慣用の賦形剤、結合剤、滑沢剤、着色
剤、崩壊剤、緩衝剤、等張化剤、保存剤、無痛化剤等、
通常医薬に用いられる添加剤が例示される。

【００２４】また本発明組成物は、溶液状態、凍結状
態、凍結乾燥状態のいずれの状態であってもよい。本発
明組成物を溶液状態で提供する場合は、例えば、造影剤
にコンドロイチナーゼＡＢＣ及び必要に応じて医薬担体
等を添加して、コンドロイチナーゼＡＢＣの濃度が約２
５０ユニット／ｍｌとなるように調整し、必要に応じて
濾過滅菌を行うことによって製造することができる。ま
た、造影剤及びコンドロイチナーゼＡＢＣ並びに必要に
応じて医薬担体等を、適当な溶媒に溶解、混合すること
によっても、所望量のコンドロイチナーゼＡＢＣを含有
する組成物を調製することができる。

【００２５】本発明組成物を凍結状態で提供する場合
は、例えば、上記した溶液状態の本発明組成物を凍結さ
せることにより製造し、−80 〜−18℃程度の温度に保
持して提供することができる。

【００２６】本発明組成物を凍結乾燥状態で提供する場
合は、例えば、上記した溶液状態の本発明組成物を、凍
結乾燥処理することよって製造することができる。この
場合には、本発明で規定されるコンドロイチナーゼＡＢ
Ｃの濃度は、凍結乾燥状態の組成物を使用時に適当な溶
媒に溶解したときの濃度を指す。

【００２７】これらの中で、本発明組成物の好ましい状
態は凍結状態であり、−１８℃程度の温度に保持して提
供すると、コンドロイチナーゼＡＢＣ活性が９ヶ月以上
安定に保持することができることから好ましい。本発明
組成物は、そのまま医薬品として投与するための最終剤
形として用いることができ、あるいは他の最終剤形医薬
品、例えば、液剤、凍結乾燥剤等の原料として使用する
こともできる。

【００２８】本発明組成物は、注射用製剤として主に使
用される。本発明組成物を溶液状態の注射用製剤として
提供する場合、前記の方法で製造される溶液状態の本発
明組成物を、アンプル、バイアル、注射用シリンジ等の
適当な容器に充填・密封し、そのまま流通させあるいは
保存し、注射剤として投与に供することができる。

【００２９】本発明組成物を凍結状態の注射用製剤とし
て提供する場合、アンプル、バイアル、注射用シリンジ
等の適当な容器中に、前記の方法で製造される凍結状態
の本発明組成物を密封状態で保持させて、流通させある
いは保存し、投与前に融解させて注射剤として投与に供
することができる。

【００３０】なお、流通や保存は−80〜−18℃、特に−
１８℃程度の温度で行うことが好ましい。また、本発明
組成物を凍結乾燥状態の注射用製剤として提供する場
合、アンプル、バイアル、注射用シリンジ等の適当な容
器中に前記の方法で製造される乾燥状態の本発明組成物
を密封状態で保持させて、流通させあるいは保存し、投
与前に注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液また
はソルビトール水溶液等で溶解し、注射剤として投与に
供することができる。凍結乾燥状態の本発明組成物は、
溶解用の溶媒とセットで提供してもよい。

【００３１】また、コンドロイチナーゼＡＢＣの凍結乾
燥物と造影剤とをセットで提供し、投与前にコンドロイ
チナーゼＡＢＣの凍結乾燥物を造影剤で溶解し、注射剤
として投与に供することもできる。

【００３２】また、アンプル、バイアル、注射用シリン
ジ等の適当な容器に本発明組成物を充填あるいは密封す
る際、本発明組成物の化学反応、特に酸化を防ぐため
に、窒素ガスや希ガス等の不活性ガスを共に充填あるい
は密封しておいてもよい。

【００３３】本発明組成物を充填・密封することができ
るアンプル、バイアル、注射用シリンジ等の容器の材質
は、本発明組成物に影響を与えず、製剤学上許容される
材質であれば特に限定されない。

【００３４】コンドロイチナーゼＡＢＣの酵素活性は、
例えば、コンドロイチン硫酸Ｃを基質にして、コンドロ
イチナーゼＡＢＣを、pH8.0、３7℃条件下で作用させた
時に生成する紫外部に顕著な吸収を有する不飽和二糖類
を吸光光度法(例えば232nmの吸光度)で測定することに
より求めることができる。

【００３５】＜２＞本発明治療剤 本発明組成物は、例えば椎間板ヘルニアの治療に使用す
ることができ、これにより本発明治療剤が提供される。
本発明治療剤は、注射剤としてヘルニア症の動物の椎間
板に注入し、髄核を溶解して治療する椎間板溶解療法に
用いることができる。

【００３６】本発明組成物または本発明治療剤の投与量
は、投与対象動物の種類、性別、年齢・週齢、椎間板ヘ
ルニアのタイプ、椎間板ヘルニアの病態進行程度等によ
って個別に設定されるべきものであり、特に限定されな
いが、例えばイヌの椎間板１つあたり、通常１回１〜２
０ユニット程度、好ましくは１０〜１５ユニット程度、
より好ましくは１２．５ユニット程度のコンドロイチナ
ーゼＡＢＣに相当する量の治療剤を注入することができ
る。

【００３７】本発明組成物または本発明治療剤は、ヒト
を含む動物、具体的には哺乳動物に投与することができ
る。哺乳動物の中でもヒト以外の哺乳動物が好ましく、
家畜として飼育されている哺乳動物がより好ましく、な
かでもイヌが特に好ましい。なお本発明には、本発明組
成物または本発明治療剤を、椎間板ヘルニア症のヒト以
外の哺乳動物（特にイヌ）に投与することを特徴とす
る、椎間板ヘルニアの治療方法も包含される。

【００３８】本発明組成物及び本発明治療剤は、後述す
る実施例の結果からも、その安全性が確認できる。

【００３９】

【実施例】次に、実施例により本発明をさらに具体的に
説明するが、この実施例は本発明の一例を示すものであ
り、これに限定されるものではない。

【００４０】＜１＞本実施例に用いた材料及び方法 （１）コンドロイチナーゼＡＢＣ 本実施例で用いたコンドロイチナーゼＡＢＣは、特開平
６−１５３９４７号公報に記載の方法で製造したもので
ある。

【００４１】このコンドロイチナーゼＡＢＣは、ドデシ
ル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動(S
DS-PAGE)おいて単一のバンドを示し、また、高速液体ク
ロマトグラフィー（ゲル濾過およびカチオン交換）にお
いても単一のピークを示した。これらの結果から、この
コンドロイチナーゼＡＢＣは完全に精製されているもの
であることが確認された。

【００４２】このコンドロイチナーゼＡＢＣ 100ユニッ
トあたりのエンドトキシン含量は、トキシカラーシステ
ム（生化学工業株式会社製）を用いて測定した結果3.4p
g（0.00986EU；EUはエンドトキシン単位を意味し、1pg
＝0.0029EUである）と極微量であり、エンドトキシンを
実質的に含有していなかった。

【００４３】このコンドロイチナーゼＡＢＣ中の核酸
（ＤＮＡ）について、スレッシュホールド法（ＤＮＡ測
定装置：スレッシュホールド（モレキュラーデバイス社
製））で測定したが、ＤＮＡは検出されなかった。

【００４４】このコンドロイチナーゼＡＢＣ中のプロテ
アーゼを、FITC（フルオレセインイソチオシアネート）
-カゼインを基質として測定した結果、プロテアーゼは
検出されなかった。

【００４５】コンドロイチナーゼＡＢＣの酵素活性は以
下の方法で測定した。コンドロイチン硫酸Ｃ 1.2mgを基
質にして、50mM酢酸ナトリウムを含有する50mMトリス−
塩酸緩衝液(pH８)とカゼイン10μgに、酵素試料(コンド
ロイチナーゼＡＢＣ)を加え、37℃で１０分間反応さ
せ、pH1.8の0.05M塩酸を加えて反応を止め、紫外部（23
2nm）の吸光度で測定した。一方、対照として熱変性さ
せた酵素試料を上記組成の基質溶液中に保持し、同様の
処理を行って232nmにおける吸収を測定した。コンドロ
イチナーゼＡＢＣの作用により生成する不飽和二糖の量
は、対照に対する吸収の増加から計算した。なお、2-ア
セトアミド-2-デオキシ-3-0-(β-D-グルコ-4-エンピラ
ノシルウロン酸)-6-0-スルフォ-D-ガラクトースのミリ
モル分子吸光係数を5.5とし、１単位(ユニット) の酵素
量は、上記反応条件下において１分間に不飽和二糖を１
マイクロモル遊離する反応を触媒する酵素量と定義し
た。

【００４６】この結果、上記のコンドロイチナーゼＡＢ
Ｃは300ユニット/mg蛋白以上の比活性を有することが確
認された。

【００４７】上記コンドロイチナーゼＡＢＣを、イオヘ
キソールを含有する水性の非イオン性のヨード造影剤
（オムニパーク、第一製薬、東京）と混合し、コンドロ
イチナーゼＡＢＣの濃度が５０ユニット／２００μＬと
なるように調整し、バイアル瓶に分注した。この組成物
は、−１８℃で凍結保存し、使用直前に融解した。尚、
この組成物は、−１８℃で９ケ月以上安定であった。以
下、この組成物を、単に「コンドロイチナーゼＡＢＣ組
成物」という。

【００４８】（２）被検動物 椎間板ヘルニアの臨床的症状を示した５９頭のイヌを被
検動物に用いた。これらのイヌは、頚部あるいは腰部の
単純な疼痛症状から、前肢、後肢、四肢あるいは躯幹全
体の麻痺まで種々の症状を呈していた。ヘルニアの診断
は、最初に畜主から稟告を聴取後、姿勢、歩様を観察
し、次いでＸ線学的ならびに神経学的検査を実施して行
った。Ｘ線学的には、脊椎（症例により頚椎あるいは
胸、腰椎）の側方および背腹方の単純Ｘ線写真、および
ヨード造影剤を用いて、同方向からの脊髄造影Ｘ線写真
を撮影した。イヌの示した症状が、脊髄造影Ｘ線写真上
の脊髄圧迫像に帰結し得ると判断された場合に、椎間板
ヘルニアと診断した。また。脊髄造影Ｘ線写真上で、Ｈ
ａｎｓｅｎの方法（Acta Orthop Scand, 1952, 20:28
0）に従って椎間板ヘルニアの型別を行った。いくつか
の症例では、椎間板を挟んで向かい合う２つの椎体間の
外腹側に骨形成が見られ、椎体同士がこの新生骨を介し
て癒合し、変形性脊椎症を示した。また。多くの症例で
は、脊髄造影Ｘ線写真で、複数の椎間板部位で脊髄圧迫
像が認められた。

【００４９】（３）コンドロイチナーゼＡＢＣ組成物の
被検動物への投与方法 被検動物は、ハロセン（１〜４％、武田薬品工業）の吸
入により麻酔し、症例により腰背部あるいは側頚部ない
し腹頚部の皮膚を剃毛した。この後、７０％エタノール
とヨード（イソジン、明治製菓、東京）により剃毛部皮
膚を消毒した。イヌをＸ線検査台上に側臥位に保定し、
Ｘ線透視下で側方あるいは背側方から、マンドリン付き
の２３ゲージ脊髄針をヘルニア椎間板に刺入した。脊髄
針の先端が線維輪に到達した段階でマンドリンを抜去
し、マンドリンより約７ｍｍ長い３１ゲージの内針を脊
髄針に挿入し、内針をもって線維輪を貫通させた。次い
で、マイクロシリンジを用い、コンドロイチナーゼＡＢ
Ｃ組成物５０μＬ（コンドロイチナーゼＡＢＣの含有量
は１２．５ユニット）を椎間板内に注入した。変形性脊
椎症を伴う頸椎椎間板ヘルニアの症例には、腹側正中か
ら針を刺入した。脊髄造影Ｘ線写真上、複数の椎間板で
脊髄圧迫像が認められた症例では、症状発現の原因を１
ケ所の椎間板に特定することは不可能であった。このよ
うな場合は、脊髄圧迫像の見られる部位の全ての椎間板
にコンドロイチナーゼＡＢＣ組成物を投与した。なお、
可能な症例においては、一定期間のケージ内飼育による
安静保持の後に、コンドロイチナーゼＡＢＣの椎間板内
注射を実施した。

【００５０】（４）臨床症状の観察 臨床的な椎間板ヘルニア症状として、姿勢および歩様の
観察、皮膚疼痛領域、体動時の皮膚、筋肉、椎間関節の
疼痛発生部位、躯幹あるいは四肢の麻痺発生部位の特定
を行った。また。イヌにはＣｈｒｉｓｍａｎの方法（Ch
risman CL, Thephysical and neurologic examination
s. In: Chrisman CL, ed. Problems inSmall Animal Ne
urology. 2nd ed. Philadelphia: Lea & Febiger, 199
1: 41-72）に従って、以下の神経学的検査を実施した。

【００５１】盲目条件および非盲目条件下での跳び直り
および踏み直り反応、固有知覚検査、屈曲および伸展反
応、深部痛覚、交叉伸展反応、膝蓋腱反射、肛門反射、
尾の自発運動、排尿。

【００５２】上記の所見は以下のように評点化した。 −：消失、 ＋：減弱、 ＋＋：正常、 ＋＋＋：過剰反応

【００５３】個々の検査項目の評点と一般観察所見に基
づき、イヌの椎間板ヘルニア症状の程度を表１に示すご
とく１から５までに類別した。この椎間板ヘルニア症状
の程度の判定は、コンドロイチナーゼＡＢＣ組成物投与
前に少なくとも１回、投与後１週間はイヌの状態にかか
わらず可能な限り１〜３日に１回行った。投与後１週間
以降、特にイヌの状態が良い場合は、１〜３週に１回、
投与後６０日まで判定を行った。投与後６０日以降は、
歩様観察のみを実施した。治療効果の評価は、投与前と
投与後７日の椎間板ヘルニア症状の程度の差を指標とし
て行った。評価カテゴリーを表２に示した。

【００５４】

【表１】

【００５５】

【表２】 表２ 臨床症状改善程度の評価方法 ───────────────────────────── 改善程度 ヘルニア症状の改善内容 ───────────────────────────── 著明 投与後7日にへルニア症状消失 投与前と投与後7日の症状の程度の差が３以上 中等度 投与前と投与後7日の症状の程度の差が２ 軽度 投与前と投与後7日の症状の程度の差が１ 不変 投与前と投与後7日の症状の程度の差が０ ─────────────────────────────

【００５６】（５）椎間板のＸ線検査 コンドロイチナーゼＡＢＣ組成物投与前、投与直後およ
び投与後７日に脊椎の側方Ｘ線写真を撮影した。これら
Ｘ線写真上で中山らの方法（中山正成ら、「Chymopapai
nによる椎間板内注入療法」日本臨床獣医学会（近畿）
講演要旨集：126-127、1989）で椎間板高度（椎間板の
幅に対する椎間板の高さの比率；ＤＨＲ）を測定した。
すなわち、側方単純Ｘ線写真上で、椎間板に隣接する椎
体の背側縁、腹側縁に２本の接線を引き、この接線の背
側および腹側接点間を結ぶ直線を引き、頭側椎体の尾背
側縁の交点をＡ、頭側椎体の尾腹側縁の交点をＢ、尾側
椎体の頭背側縁の交点をＣ、尾側椎体の頭腹側縁の交点
をＤとし、ＡＢ、ＡＣ、ＢＤの長さを測定し、以下の式
から数値を求めた。 椎間板高度＝（ＡＣ＋ＢＤ）／２ＡＢ ＤＨＲの減少は、投与前のＤＨＲに対する投与後７日の
ＤＨＲの百分率として計算した。

【００５７】＜２＞結果 （１）イヌ椎間板ヘルニアの発生状況 コンドロイチナーゼＡＢＣ組成物を投与した全動物を材
料として、イヌにおける椎間板ヘルニアの発生状況を検
討した。検索例の性別は雄が５９％、雌が３９％、不明
が３％であった。これらの年齢、品種の分布は表３に示
した。

【００５８】

【表３】 表３ ──────────────────────────────────── 年齢 品種 ──────────────────────────────────── １ 柴犬1 ヘ゜キニース゛1 ２ ハ゛ク゛1 ３ ヒ゛ーク゛ル1 ４ ヘ゜キニース゛1 シース゛ー1 ホ゜メラニアン2 ヨークシャーテリア1 マルチース゛1 ヒ゛ーク゛ル1 タ゛ックスフント2 ５ ミニチュアヒ゜ンシェル1 ハ゜ク゛1 マルチース゛1 ヒ゛ーク゛ル2 タ゛ックスフント1 ６ トイフ゜ート゛ル1 ヨークシャーテリア1 ヒ゛ーク゛ル2 タ゛ックスフント1 ７ シェトラント゛シーフ゜ト゛ック゛1 シース゛ー1 タ゛ックスフント2 ８ 柴犬1 シース゛ー1 雑種2 ヨークシャーテリア2 マルチース゛1 ヒ゛ーク゛ル2 タ゛ックスフント4 ９ ラフ゛ラト゛ールリトリハ゛ー1 ミニチュアヒ゜ンシェル1 シェトラント゛シーフ゜ト゛ック゛1 シース゛ー1 マルチース゛1 ヒ゛ーク゛ル1 １０ ヘ゜キニース゛1 ホ゜メラニアン2 雑種1 マルチース゛1 タ゛ックスフント2 １１ 雑種1 マルチース゛1 １２ 雑種1 １３ １４ ヨークシャーテリア1 不明 タ゛ックスフント1 ────────────────────────────────────

【００５９】年齢は１から１４歳の間にあり、４〜１０
歳の年齢が最も多かった。一方、発生の最も多かった品
種はダックスフント（２２％）で、次いでビーグル（１
５％）。マルチーズ（１０％）の順の発生であった。軟
骨異栄養症型犬種とされているダックスフント種、ビー
グル種においての発生率は高く、これら２品種で全体の
３７％を占めた。

【００６０】ヘルニアと診断された椎間板の分布を図１
に示した。総計２１９個の椎間板にコンドロイチナーゼ
ＡＢＣ組成物を注入した。これらの椎間板は脊髄を圧迫
していると診断されたものであり、１頭当たりの平均圧
迫椎間板数は３．７個であった。各個体の椎間板におけ
るへルニアの発生率は下部胸椎から腰椎椎間板において
最も高く、Ｔ１１／１２とＬ４／５の間の椎間板におけ
る発生率は８３．６％であった。また。頚椎椎間板にお
けるへルニア発生率は１０％であった。

【００６１】（２）椎間板ヘルニア症状の推移 コンドロイチナーゼＡＢＣ組成物を投与した５９症例の
うち７例においては、コンドロイチナーゼＡＢＣ組成物
注入と同時に半椎弓切除術や造窓術などの外科手術療法
も行われた。これらの症例における治療後の症状の変化
は、外科手術の効果によるものとコンドロイチナーゼＡ
ＢＣ組成物の効果によるものを区別し得ないため、コン
ドロイチナーゼＡＢＣ組成物の効果の評価対象から除外
した。さらに、これら以外の４例も、コンドロイチナー
ゼＡＢＣ組成物投与後の検査が実施されなかったり、あ
るいは不十分であったため評価対象から除外した。残り
の４８症例をコンドロイチナーゼＡＢＣ組成物による髄
核融解療法の効果の評価に用いた。

【００６２】コンドロイチナーゼＡＢＣ組成物を１回投
与後、６０日までのへルニア症状の経時的変化を図２に
示した。コンドロイチナーゼＡＢＣ組成物投与前の症状
の程度が５、４、３、２および１の動物の数と比率はそ
れぞれ０（０％）、７（１４．６％）、１５（３１．３
％）、８（１６．７％）、および１８（３７．５％）で
あった。これらのうち、投与後７日には２４例（５０
％）が、投与後５９日には３６例（７５％）が正常であ
つた。

【００６３】１１例についてはコンドロイチナーゼＡＢ
Ｃ組成物投与後１年以上追跡し得た。これらのうち１０
例では椎間板ヘルニア症状の再発は見られず、コンドロ
イチナーゼＡＢＣ組成物による治療効果が１年以上持続
していた。上記結果から、コンドロイチナーゼＡＢＣ組
成物投与前に長期間ヘルニア症状を呈した症例に対して
も、コンドロイチナーゼＡＢＣ組成物による治療が有効
であることが示された。これは、ヘルニア塊による神経
組織圧迫には、炎症により修飾を受けた脱出部分のみな
らず、脱出部分をさらに下から加圧する残存髄核が重要
な役割を果たしているためと考えられた。しかし、１例
ではコンドロイチナーゼＡＢＣ組成物投与後８ケ月に、
コンドロイチナーゼＡＢＣ組成物を投与した６椎間板の
うちの１箇所（Ｌ１／２）に椎間板ヘルニアが再発し
た。全追跡期間にわたり、コンドロイチナーゼＡＢＣ組
成物に起因する副作用は見られなかった。

【００６４】コンドロイチナーゼＡＢＣ組成物投与前の
椎間板ヘルニア症状の持続期間は１〜６３５日で、平均
５４．４日であった。図３にコンドロイチナーゼＡＢＣ
組成物投与前の椎間板ヘルニア発症期間と投与後のへル
ニア症状の程度の変化との関係を示した。概して発症期
間の長い症例ほど症状の程度が低い傾向にあった。これ
は、症状の程度の低い症例は、長期にわたって保存療法
を受けていることを反映しているのかも知れない。椎間
板ヘルニア発症期間の長短にかかわらず、コンドロイチ
ナーゼＡＢＣ組成物を１回椎間板に投与した後、ヘルニ
ア症状の程度は確実に改善した。

【００６５】４８症例中、９例はＨａｎｓｅｎ Ｉ型の
椎間板ヘルニアがあると診断された。残りの３９症例は
Ｈａｎｓｅｎ II型のへルニアのみと診断された。コン
ドロイチナーゼＡＢＣ組成物は、ヘルニア病巣周囲の神
経組織や軟膜の毛細血管に接触しても安全であると考え
られたため、このような症例に対してもコンドロイチナ
ーゼＡＢＣ組成物による髄核融解療法を試みた。

【００６６】図４にこれら２ヘルニア型それぞれの、コ
ンドロイチナーゼＡＢＣ組成物投与後のへルニア症状の
程度の推移を示した。いずれのへル二ア型においても、
ヘルニア症状の改善程度は同一であった。Ｈａｎｓｅｎ
Ｉ型ヘルニア症例においては、Ｈａｎｓｅｎ II型ヘル
ニア症例に比較して、コンドロイチナーゼＡＢＣ組成物
投与前のへルニア症状の程度がより高かった。これは、
Ｈａｎｓｅｎ Ｉ型ヘルニアでは、脱出して神経組織を
圧迫する髄核量が多いためと考えらる。しかし、コンド
ロイチナーゼＡＢＣ組成物は、そのような症例に対して
も有効であった。コンドロイチナーゼＡＢＣ組成物投与
後７日における投与椎間板の椎間板高度（ＤＨＲ）は、
図５に示すように、投与前の７６．０から８７．２％の
間にあった。

【００６７】コンドロイチナーゼＡＢＣ組成物投与後７
日には、４８例中４４例（９１．７％）に軽度以上の改
善が見られた。図６に投与後７日における投与前のへル
ニア症状の程度ごとの改善度合を示した。コンドロイチ
ナーゼＡＢＣ組成物投与後７日には投与前の症状の程度
が１であった例の９４．７％、投与前の症状の程度が２
であった例の７５．０％が「著明」に改善した。投与前
にへルニア症状の程度が３であった１５例のうち８０．
０％は「著明」に改善し、２０．０％は「中等度」に改
善した。さらに、投与した症例の５０．０％は臨床症状
を示さないまでに改善された。一方、コンドロイチナー
ゼＡＢＣ組成物投与前のヘルニア症状の程度が４であっ
た７症例では、２８．６％のみが「著明」に改善した。
しかし、「中等度」、「軽度」の改善を含めると、投与
前のヘルニア症状の程度４の症例の８５．７％が何らか
の改善を示した。上記のことは、コンドロイチナーゼＡ
ＢＣ組成物による髄核融解過程は投与後７日以内にほぼ
完了することを示すものと考えられる。

【００６８】１７例では５日間から１ケ月間のケージレ
ストを行い、症状の改善が認められないことを確認した
後にコンドロイチナーゼＡＢＣ組成物投与を行った。こ
のため、コンドロイチナーゼＡＢＣ組成物投与による効
果とケージレストによる効果を区別し得たと考えられ
る。今回検索した外科手術併用例も含む全ての症例に
は、コンドロイチナーゼＡＢＣ組成物投与に起因すると
考えられる副作用は認められなかた。

【００６９】（３）椎間板のＸ線像の推移 コンドロイチナーゼＡＢＣ組成物投与前後に、椎間板の
ＤＨＲを計測し得たのは１２８椎間板であった。このう
ち、１１５椎間板ではＤＨＲの減少が見られた（８９．
８％）。１３椎間板では投与後にＤＨＲの増加が見られ
たが、このうち２椎間板（いずれも同一の症例）では、
投与後さらに時間が経過した後、再度Ｘ線写真撮影を行
って計測した結果、投与前に比較してＤＨＲの減少が見
られた。

【００７０】コンドロイチナーゼＡＢＣ組成物投与後
に、再度脊髄造影を行い得たのは１０例であった。これ
らのうち、脊髄圧迫像の判読が可能であったものは７例
であった。脊髄圧迫像の改善を確認し得たのは２例（１
例では２椎間板、他の例では３椎間板）のみであった。
この他、手術併用例の１例（２椎間板）にも脊髄圧迫像
の改善が見られた（表４）。

【００７１】

【表４】 表４ コンドロイチナーゼＡＢＣ組成物投与後の脊髄造影所見 ──────────────────────────────────── 症例番号 ────────────────────────── 9 12 13 22 24 25 29 30 32 33 52^* ──────────────────────────────────── 投与後造影実施日 7 7 7 8 22 10 7 7 7 7 54 脊髄圧迫像判読 不 可 不 可 可 可 不 可 不 可 可 投与椎間板数 5 3 4 2 6 3 4 圧迫像改善椎間板数 2 0 0 0 0 3 2 圧迫像不変椎間板数 3 3 4 2 6 0 2 投与前の症状の程度 3 3 3 3 3 1 4 投与後の症状の程度 0 0 0 0 0 0 4 ──────────────────────────────────── *：手術併用例

【００７２】

【発明の効果】本発明組成物は、コンドロイチナーゼＡ
ＢＣ及び造影剤を含有する組成物において、公知の組成
物に比してコンドロイチナーゼＡＢＣ含量を約１．６倍
低減させたものであり、これにより安全性がより一層高
まることが期待される。また本発明組成物の製造に用い
るコンドロイチナーゼＡＢＣ量を低減させることができ
るので、公知の組成物に比してより安価に提供すること
ができる。本発明治療剤は本発明組成物と同様の効果を
有している。さらに本発明治療剤は、椎間板ヘルニア症
の動物の髄核を効果的に融解することができ、種々のタ
イプの椎間板ヘルニアの治療に有効である。またＸ線造
影を行うことによって、投与位置の確認ができ、本発明
治療剤が所望部位に所望量、的確に注入されたことが確
認できる。さらに髄核融解効果も確認することができ、
これにより椎間板ヘルニアの治療効果を確認することが
できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】 ヘルニアに罹患した椎間板の分布を示すグラ
フ図。

【図２】 コンドロイチナーゼＡＢＣ組成物を１回投与
後、６０日までのへルニア症状の経時的変化を示すグラ
フ図。

【図３】 コンドロイチナーゼＡＢＣ組成物投与前の椎
間板ヘルニア発症期間と投与後のへルニア症状の程度の
変化との関係を示すグラフ図。「ＰＲＥ」投与前を、
「ｄ」は日を、「ｗ」は週を表す。「＊」印は、１日〜
３日のグループと３週以上のグループのスチューデント
のｔ検定による有意差を示す（Ｐ＜０．０１）。

【図４】 Ｈａｎｓｅｎ Ｉ型及びＨａｎｓｅｎ II型に
おけるコンドロイチナーゼＡＢＣ組成物投与後のヘルニ
ア症例の程度の推移を示すグラフ図。「ＰＲＥ」投与前
を、「ｄ」は日を、「ｗ」は週を表す。「**」印及び
「##」印は、各々のグループのスチューデント（**）又
はアスピン−ワイヒ（Aspin-Weich）（##）のｔ検定に
よる有意差を示す（Ｐ＜０．０１）。

【図５】 コンドロイチナーゼＡＢＣ組成物投与後７日
における症状改善度と椎間板高度（ＤＨＲ）変化率との
関係を示すグラフ図。

【図６】 コンドロイチナーゼＡＢＣ組成物投与後７日
における投与前のへルニア症状の程度ごとの改善度合を
示す図。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 コンドロイチナーゼＡＢＣ及び造影剤を
   含有する組成物であって、組成物全量に対するコンドロ
   イチナーゼＡＢＣの濃度が約２５０ユニット／ｍｌであ
   ることを特徴とする、コンドロイチナーゼＡＢＣ組成
   物。
2. 【請求項２】 コンドロイチナーゼＡＢＣの濃度が２５
   ０±１００ユニット／ｍｌである請求項１記載の組成
   物。
3. 【請求項３】 請求項１又は２記載の組成物からなる、
   椎間板ヘルニア治療剤。