JPH11199A - 生理活性物質の新規なスクリーニング法 - Google Patents
生理活性物質の新規なスクリーニング法Info
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- JPH11199A JPH11199A JP16487297A JP16487297A JPH11199A JP H11199 A JPH11199 A JP H11199A JP 16487297 A JP16487297 A JP 16487297A JP 16487297 A JP16487297 A JP 16487297A JP H11199 A JPH11199 A JP H11199A
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Landscapes
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 免疫抑制剤、皮膚疾患治療剤又は脱毛防止剤
の新規なスクリーニング法の提供。 【解決手段】 被験物質の存在下及び非存在下でケラチ
ノサイトを培養し、該培養細胞からＲＮＡを抽出し、ホ
リスタチンをコードするｍＲＮＡを検出し、そして被験
物質の存在下と非存在下でホリスタチンをコードするｍ
ＲＮＡの量に差がある場合に、前記被験物質を免疫抑制
剤、皮膚疾患治療剤又は脱毛防止剤の候補として選択す
ることを特徴とする方法。 【効果】 上記の薬剤の候補を選択するための粗スクリ
ーニング法として有用である。
の新規なスクリーニング法の提供。 【解決手段】 被験物質の存在下及び非存在下でケラチ
ノサイトを培養し、該培養細胞からＲＮＡを抽出し、ホ
リスタチンをコードするｍＲＮＡを検出し、そして被験
物質の存在下と非存在下でホリスタチンをコードするｍ
ＲＮＡの量に差がある場合に、前記被験物質を免疫抑制
剤、皮膚疾患治療剤又は脱毛防止剤の候補として選択す
ることを特徴とする方法。 【効果】 上記の薬剤の候補を選択するための粗スクリ
ーニング法として有用である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は生理活性物質の新規
なスクリーニング方法に関し、特に免疫抑制剤、皮膚疾
患治療剤及び脱毛防止剤の候補物質を選択するための粗
スクリーニング法に関する。
なスクリーニング方法に関し、特に免疫抑制剤、皮膚疾
患治療剤及び脱毛防止剤の候補物質を選択するための粗
スクリーニング法に関する。
【０００２】
【従来の技術】サイクロスポリンＡが免疫抑制剤として
有効であること（Pediatr. Nephrol.5 (5) ：622-629
(1991)；Bone Marrow Transplant. 8 (2) ：105 ；111
(1991)）及び乾鮮（J. Am. Acad. Dermatol. 14 (5 Pt
1)：785-791 (1986)) やアトピー性皮膚炎（Br. J. Der
matol. 128 (2)：213-216 (1993)) のごとき皮膚疾患の
治療に有効であることはすでに知られている。Nature V
ol. 374, pp.360-363(1995）にはホリスタチン（Ｆｏｌ
ｌｉｓｔａｔｉｎ）の遺伝子を欠損したマウスにおいて
皮膚、特に毛の異状が生ずることが記載されている。し
かしながら、ケラチノサイトにおけるホリスタチン遺伝
子の転写を利用してサイクロスポリン様生理活性を有す
る物質をスクリーニングする方法は知られていない。
有効であること（Pediatr. Nephrol.5 (5) ：622-629
(1991)；Bone Marrow Transplant. 8 (2) ：105 ；111
(1991)）及び乾鮮（J. Am. Acad. Dermatol. 14 (5 Pt
1)：785-791 (1986)) やアトピー性皮膚炎（Br. J. Der
matol. 128 (2)：213-216 (1993)) のごとき皮膚疾患の
治療に有効であることはすでに知られている。Nature V
ol. 374, pp.360-363(1995）にはホリスタチン（Ｆｏｌ
ｌｉｓｔａｔｉｎ）の遺伝子を欠損したマウスにおいて
皮膚、特に毛の異状が生ずることが記載されている。し
かしながら、ケラチノサイトにおけるホリスタチン遺伝
子の転写を利用してサイクロスポリン様生理活性を有す
る物質をスクリーニングする方法は知られていない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明は、ホ
リスタチン遺伝子の転写への影響を検出することにより
免疫抑制剤、皮膚疾患治療剤または脱毛防止剤の候補を
選択するための新規な方法を提供する。
リスタチン遺伝子の転写への影響を検出することにより
免疫抑制剤、皮膚疾患治療剤または脱毛防止剤の候補を
選択するための新規な方法を提供する。
【０００４】
【課題を解決するための手段】従って本発明は、被験物
質の存在下及び非存在下でケラチノサイトを培養し、該
培養細胞からＲＮＡを抽出し、ホリスタチンをコードす
るｍＲＮＡを検出し、そして被験物質の存在下と非存在
下でのホリスタチンをコードするｍＲＮＡに差がある場
合に、前記被験物質を免疫抑制剤、乾鮮やアトピー性皮
膚炎などの皮膚疾患の治療剤又は脱毛防止剤の候補とし
て選択することを特徴とする生理活性物質のスクリーニ
ング法を提供する。
質の存在下及び非存在下でケラチノサイトを培養し、該
培養細胞からＲＮＡを抽出し、ホリスタチンをコードす
るｍＲＮＡを検出し、そして被験物質の存在下と非存在
下でのホリスタチンをコードするｍＲＮＡに差がある場
合に、前記被験物質を免疫抑制剤、乾鮮やアトピー性皮
膚炎などの皮膚疾患の治療剤又は脱毛防止剤の候補とし
て選択することを特徴とする生理活性物質のスクリーニ
ング法を提供する。
【０００５】
【作用原理】サイクロスポリンＡが免疫抑制剤であるこ
とは周知であり、また乾鮮やアトピー性皮膚炎などの皮
膚疾患の治療剤として有用であることも知られている。
本発明者らは、サイクロスポリンＡの存在下及び非存在
下でケラチノサイトを培養し、培養細胞から全ＲＮＡを
抽出し、この全ＲＮＡから、ホリスタチン遺伝子のＰＣ
Ｒ増幅に適するプライマー対を用いてホリスタチン遺伝
子の増幅を用いてホリスタチン遺伝子の転写を検出し、
一定量以上のサイクロスポリンＡの存在下でホリスタチ
ン遺伝子の転写（従って発現）が抑制されることを見出
した。
とは周知であり、また乾鮮やアトピー性皮膚炎などの皮
膚疾患の治療剤として有用であることも知られている。
本発明者らは、サイクロスポリンＡの存在下及び非存在
下でケラチノサイトを培養し、培養細胞から全ＲＮＡを
抽出し、この全ＲＮＡから、ホリスタチン遺伝子のＰＣ
Ｒ増幅に適するプライマー対を用いてホリスタチン遺伝
子の増幅を用いてホリスタチン遺伝子の転写を検出し、
一定量以上のサイクロスポリンＡの存在下でホリスタチ
ン遺伝子の転写（従って発現）が抑制されることを見出
した。
【０００６】従って、サイクロスポリンＡの代りに被験
物質を用いて同様の実験を行い、サイクロスポリンＡと
同様の結果が得られる場合には、該被験物質が、サイク
ロスポリンＡと同様のメカニズムにより免疫抑制剤や皮
膚疾患治療剤として有用であることが合理的に推定され
る。また、ホリスタチン遺伝子の欠損により毛の発生が
阻害されるから、ホリスタチン遺伝子の移写を抑制する
物質は脱毛防止に有用であることが推定される。
物質を用いて同様の実験を行い、サイクロスポリンＡと
同様の結果が得られる場合には、該被験物質が、サイク
ロスポリンＡと同様のメカニズムにより免疫抑制剤や皮
膚疾患治療剤として有用であることが合理的に推定され
る。また、ホリスタチン遺伝子の欠損により毛の発生が
阻害されるから、ホリスタチン遺伝子の移写を抑制する
物質は脱毛防止に有用であることが推定される。
【０００７】
【発明の実施の形態】本発明において使用するケチチノ
サイトは、例えば、頭皮をコラーゲナーゼ及びディスパ
ーゼで処理することにより得られる。また、包皮由来の
ケラチノサイトは市販されており、例えばClonetics 社
から購入することができる。
サイトは、例えば、頭皮をコラーゲナーゼ及びディスパ
ーゼで処理することにより得られる。また、包皮由来の
ケラチノサイトは市販されており、例えばClonetics 社
から購入することができる。
【０００８】ケラチノサイトを培養するための培地とし
ては動物細胞培養用の培地であればよいが、例えばClon
etics 社のＫＧＭ（Clonetics 社の基礎培地ＫＢＭ５０
０mlに、２mlのウシ脳下垂体抽出液、最終濃度０．１μ
ｇ／mlの上皮成長因子（ＥＧＦ）、５．０mg／mlのイン
シュリン、０．５mg／mgのヒドロコルチゾン、５０mg／
mlのゲンタマイシン及び５０μｇ／mlのアンフォテリシ
ンＢを添加したもの）が使用される。
ては動物細胞培養用の培地であればよいが、例えばClon
etics 社のＫＧＭ（Clonetics 社の基礎培地ＫＢＭ５０
０mlに、２mlのウシ脳下垂体抽出液、最終濃度０．１μ
ｇ／mlの上皮成長因子（ＥＧＦ）、５．０mg／mlのイン
シュリン、０．５mg／mgのヒドロコルチゾン、５０mg／
mlのゲンタマイシン及び５０μｇ／mlのアンフォテリシ
ンＢを添加したもの）が使用される。
【０００９】培養は、動物細胞培養のための常法に従っ
て液体静置培養を約３７℃にて行い、およそ５０〜８０
％のコンフルエントに達成するまで培養を続ける。次
に、ある量の被験物質を培地に加え、さらに例えば約２
４時間インキュベートする。被験物質の量は、被験物質
の活性に異り、０〜１００μｇ／ml程度の範囲にわたっ
て数段階の濃度で行うのがよい。
て液体静置培養を約３７℃にて行い、およそ５０〜８０
％のコンフルエントに達成するまで培養を続ける。次
に、ある量の被験物質を培地に加え、さらに例えば約２
４時間インキュベートする。被験物質の量は、被験物質
の活性に異り、０〜１００μｇ／ml程度の範囲にわたっ
て数段階の濃度で行うのがよい。
【００１０】次に、インキュベーションが終った後、生
理的食塩水で１度洗浄し、常法に従って、例えばＩｓｏ
ｇｅｎ（日本ジーン社製）を加えて全ＲＮＡを抽出す
る。次に、この全ＲＮＡに対するｃＤＮＡを常法に従っ
て合成し、ホリスタチン遺伝子を特異的に増幅すること
ができるプライマー対を用いて、前記ｃＤＮＡを鋳型と
してＰＣＲ増幅を行う。
理的食塩水で１度洗浄し、常法に従って、例えばＩｓｏ
ｇｅｎ（日本ジーン社製）を加えて全ＲＮＡを抽出す
る。次に、この全ＲＮＡに対するｃＤＮＡを常法に従っ
て合成し、ホリスタチン遺伝子を特異的に増幅すること
ができるプライマー対を用いて、前記ｃＤＮＡを鋳型と
してＰＣＲ増幅を行う。
【００１１】この場合のプライマーとしては、例えば、
５′−CTCCTGCTGCTGCTGCTCTGC −３′（配列番号：１）
及び５′−TCCTCTTCCTCGGTGTCTTCC −３′（配列番号：
２）のプライマー対を用いることができる。ホリスタチ
ン遺伝子は、スプライシングにより２種類のｍＲＮＡに
転写されるので、９９４ｂｐと１２０８ｂｐのＰＣＲ増
幅されたＤＮＡが期待される。ＰＣＲ反応生成物を、例
えば１％アガロースゲル電気泳動にかけ、エチジウムブ
ロミド染色後、ＵＶ照射により検出することができる。
あるいは、標識したオリゴヌクレオチドプライマーによ
り検出することもできる。
５′−CTCCTGCTGCTGCTGCTCTGC −３′（配列番号：１）
及び５′−TCCTCTTCCTCGGTGTCTTCC −３′（配列番号：
２）のプライマー対を用いることができる。ホリスタチ
ン遺伝子は、スプライシングにより２種類のｍＲＮＡに
転写されるので、９９４ｂｐと１２０８ｂｐのＰＣＲ増
幅されたＤＮＡが期待される。ＰＣＲ反応生成物を、例
えば１％アガロースゲル電気泳動にかけ、エチジウムブ
ロミド染色後、ＵＶ照射により検出することができる。
あるいは、標識したオリゴヌクレオチドプライマーによ
り検出することもできる。
【００１２】なお、定量的にホリスタチン遺伝子のｍＲ
ＮＡ発現を調べる方法としては、ＲＴ−ＰＣＲ以外に、
ノザンブロット法、ＲＮａｓｅプロテクションアッセイ
法も使用できる。また、抗ホリスタチン抗体を用い、チ
ラチノサイト細胞培養上清に分泌されるホルスタチンを
ＥＬＩＳＡ法、ウエスタンブロット法などにより定量す
ることも可能である。
ＮＡ発現を調べる方法としては、ＲＴ−ＰＣＲ以外に、
ノザンブロット法、ＲＮａｓｅプロテクションアッセイ
法も使用できる。また、抗ホリスタチン抗体を用い、チ
ラチノサイト細胞培養上清に分泌されるホルスタチンを
ＥＬＩＳＡ法、ウエスタンブロット法などにより定量す
ることも可能である。
【００１３】上記の方法において、被験物質添加量ゼロ
（無添加）の場合に比べて被験物質を添加した場合に検
出されるＤＮＡの量が少い場合、すなわちホリスタチン
遺伝子から転写されるｍＲＮＡの量が少い場合、被験物
質は、免疫抑制剤、乾鮮やアトピー性皮膚炎等の皮膚疾
患の治療剤、又は脱毛防止剤の候補として選択される。
この方法は上記の薬剤の粗スクリーニング法として有用
であり、この方法により候補とされた被験物質は、さら
に直接的な上記治療剤用の選択試験にかけられる。
（無添加）の場合に比べて被験物質を添加した場合に検
出されるＤＮＡの量が少い場合、すなわちホリスタチン
遺伝子から転写されるｍＲＮＡの量が少い場合、被験物
質は、免疫抑制剤、乾鮮やアトピー性皮膚炎等の皮膚疾
患の治療剤、又は脱毛防止剤の候補として選択される。
この方法は上記の薬剤の粗スクリーニング法として有用
であり、この方法により候補とされた被験物質は、さら
に直接的な上記治療剤用の選択試験にかけられる。
【００１４】また、被験物質により、被験物質非存在下
におけるよりも増幅されたＤＮＡが多い場合、すなわち
ホリスタチン遺伝子から移写されるｍＲＮＡの量が多い
場合、あるいは、これらの量が被験物質の添加量に依存
して逆の傾向を示す場合も、該被験物質は、新たな生理
活性を有するものとして期待される。
におけるよりも増幅されたＤＮＡが多い場合、すなわち
ホリスタチン遺伝子から移写されるｍＲＮＡの量が多い
場合、あるいは、これらの量が被験物質の添加量に依存
して逆の傾向を示す場合も、該被験物質は、新たな生理
活性を有するものとして期待される。
【００１５】
【実施例】次に、本願発明を実施例によりさらに具体的
に説明する。実施例１． サイクロスポリンＡによりモデル実験 ヒトの頭皮から、ケラチノサイトを次のようにして調製
した。頭皮由来表皮細胞は以下に示す通りに行った。手
術副産物として得られたヒト頭皮禿頭部（３０歳男性、
頭頂部）の真皮層下半分、毛髪を取り除き、表皮層・真
皮層上半分を５mm幅で短冊状に切り、０．２５％ｔｒｙ
ｐｓｉｎ−０．０２％ＥＤＴＡ溶液で４℃、１８時間処
理した。角層をピンセットで取り除き、ＰＢＳ中にて真
皮シート上面をピンセットで軽くこすり、表皮基底細胞
を浮遊させ、遠心して細胞を回収した後に、０．５％の
血清を含むＫ−ＧＭ(Keratinocyte Growth Medium, clo
netics）にて１日培養し、以後は血清を含まないＫ−Ｇ
Ｍにて培養した。以後、２日おきに培地交換を行った。
に説明する。実施例１． サイクロスポリンＡによりモデル実験 ヒトの頭皮から、ケラチノサイトを次のようにして調製
した。頭皮由来表皮細胞は以下に示す通りに行った。手
術副産物として得られたヒト頭皮禿頭部（３０歳男性、
頭頂部）の真皮層下半分、毛髪を取り除き、表皮層・真
皮層上半分を５mm幅で短冊状に切り、０．２５％ｔｒｙ
ｐｓｉｎ−０．０２％ＥＤＴＡ溶液で４℃、１８時間処
理した。角層をピンセットで取り除き、ＰＢＳ中にて真
皮シート上面をピンセットで軽くこすり、表皮基底細胞
を浮遊させ、遠心して細胞を回収した後に、０．５％の
血清を含むＫ−ＧＭ(Keratinocyte Growth Medium, clo
netics）にて１日培養し、以後は血清を含まないＫ−Ｇ
Ｍにて培養した。以後、２日おきに培地交換を行った。
【００１６】増殖した細胞を０．０５％ｔｒｙｐｓｉｎ
−０．０２％ＥＤＴＡ溶液にて３７℃、５分間処理した
のち、等量の０．１％ｔｒｙｐｓｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔ
ｏｒで反応を止め、遠心して細胞を回収した。細胞を無
血清培地に浮遊させ５，０００細胞／cm2 の密度で培養
皿に播種した。上記のようにして調製したケラチノサイ
トを、Clonetics 社製の培地ＫＧＭ（５００mlの基礎培
地（Clonetics 社製ＫＢＭ培地、組成不明）に２mlのウ
シ脳下垂体抽出液、最終濃度０．１μｇ／mlのＥＧＦ、
５．０mg／mlのインシュリン、０．５mg／mlのヒドロコ
ルチゾン、５０mg／mlのゲンタマイシン及び５０μｇ／
mlのアンフォテリシンＢを添加したもの）中で、７５cm
2 フラスコ内で３７℃にてＣＯ2 インキュベーター中で
培養し、約８０％のコンフルエントとした。
−０．０２％ＥＤＴＡ溶液にて３７℃、５分間処理した
のち、等量の０．１％ｔｒｙｐｓｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔ
ｏｒで反応を止め、遠心して細胞を回収した。細胞を無
血清培地に浮遊させ５，０００細胞／cm2 の密度で培養
皿に播種した。上記のようにして調製したケラチノサイ
トを、Clonetics 社製の培地ＫＧＭ（５００mlの基礎培
地（Clonetics 社製ＫＢＭ培地、組成不明）に２mlのウ
シ脳下垂体抽出液、最終濃度０．１μｇ／mlのＥＧＦ、
５．０mg／mlのインシュリン、０．５mg／mlのヒドロコ
ルチゾン、５０mg／mlのゲンタマイシン及び５０μｇ／
mlのアンフォテリシンＢを添加したもの）中で、７５cm
2 フラスコ内で３７℃にてＣＯ2 インキュベーター中で
培養し、約８０％のコンフルエントとした。
【００１７】次に、上記の培養物に、最終濃度が０．
０，１．０、及び１０μｇ／mlとなるようにサイクロス
ポリンＡを加え、ＣＯ2 インキュベーター中で３７℃に
て２４時間インキュベートした。次に、細胞を生理食塩
水にて１回洗浄した後、３mlのＩｓｏｇｅｎ（日本ジー
ン社製）を加えて全ＲＮＡを抽出した。次に、この全Ｒ
ＮＡに基き、常法に従ってｃＤＮＡを合成した。このｃ
ＤＮＡを鋳型とし、ホリスタチン増幅用プライマー対配
列番号：１及び配列番号：２を用いて常法に従ってＰＣ
Ｒ増幅を行った。
０，１．０、及び１０μｇ／mlとなるようにサイクロス
ポリンＡを加え、ＣＯ2 インキュベーター中で３７℃に
て２４時間インキュベートした。次に、細胞を生理食塩
水にて１回洗浄した後、３mlのＩｓｏｇｅｎ（日本ジー
ン社製）を加えて全ＲＮＡを抽出した。次に、この全Ｒ
ＮＡに基き、常法に従ってｃＤＮＡを合成した。このｃ
ＤＮＡを鋳型とし、ホリスタチン増幅用プライマー対配
列番号：１及び配列番号：２を用いて常法に従ってＰＣ
Ｒ増幅を行った。
【００１８】この増幅生成物を１．０％アガロースゲル
電気泳動にかけて増幅されたＤＮＡを分離した後、エチ
ジウムブロミド染色及びＵＶ照射により増幅されたＤＮ
Ａを検出した。この結果を図１に示す。この図から明ら
かな通り、サイクロスポリンＡを１０μｇ／ml添加した
場合、ホリスタチン遺伝子の転写が抑制された。
電気泳動にかけて増幅されたＤＮＡを分離した後、エチ
ジウムブロミド染色及びＵＶ照射により増幅されたＤＮ
Ａを検出した。この結果を図１に示す。この図から明ら
かな通り、サイクロスポリンＡを１０μｇ／ml添加した
場合、ホリスタチン遺伝子の転写が抑制された。
【００１９】実施例２． コンフルエントの程度の影響 実施例１の方法を反復したが、サイクロスポリンＡを無
添加とし、ケラチノサイト培養における細胞増殖の程度
を、５０％コンフルエント、８０％コンフルエント、１
００％コンフルエント、及び１００％コンフルエント後
さらに２日間培養の４種類とした。
添加とし、ケラチノサイト培養における細胞増殖の程度
を、５０％コンフルエント、８０％コンフルエント、１
００％コンフルエント、及び１００％コンフルエント後
さらに２日間培養の４種類とした。
【００２０】この結果を図２に示す。この図から明らか
な通り、５０％コンフルエント及び８０％コンフルエン
トではサイクロスポリンＡの非存在下でホリスタチン遺
伝子の転写が認められたが、１００％コンフルエントに
達して細胞増殖が停止した後はホリスタチン遺伝子の転
写は減少し、１００％コンフルエント後さらに２日間培
養した場合には、ホリスタチン遺伝子の転写は生じなか
った。
な通り、５０％コンフルエント及び８０％コンフルエン
トではサイクロスポリンＡの非存在下でホリスタチン遺
伝子の転写が認められたが、１００％コンフルエントに
達して細胞増殖が停止した後はホリスタチン遺伝子の転
写は減少し、１００％コンフルエント後さらに２日間培
養した場合には、ホリスタチン遺伝子の転写は生じなか
った。
【００２１】
配列番号：１ 配列の長さ：２１ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｓｙｎＤＮＡ 配列 CTCCTGCTGC TGCTGCTCTG C 21
【００２２】配列番号：２ 配列の長さ：２１ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｓｙｎＤＮＡ 配列 TCCTCTTCCT CGGTGTCTTC C 21
【図１】図１は、ケラチノサイトにおけるホリスタチン
遺伝子の転写をサイクロスポリンＡが量依存的に阻害す
ることを示す図であり、電気泳動図を示す図面代用写真
である。
遺伝子の転写をサイクロスポリンＡが量依存的に阻害す
ることを示す図であり、電気泳動図を示す図面代用写真
である。
【図２】図２は、ケラチノサイトにおけるホリスタチン
遺伝子の転写が該細胞のコンフルエントの程度により異
ることを示す図であり、電気泳動の結果を示す図面代用
写真である。
遺伝子の転写が該細胞のコンフルエントの程度により異
ることを示す図であり、電気泳動の結果を示す図面代用
写真である。
フロントページの続き (72)発明者 相馬 勤 神奈川県横浜市金沢区福浦２−12−１ 株 式会社資生堂第二リサーチセンター内 (72)発明者 日比野 利彦 神奈川県横浜市金沢区福浦２−12−１ 株 式会社資生堂第二リサーチセンター内
Claims (3)
- 【請求項１】 被験物質の存在下及び非存在下でケラチ
ノサイトを培養し、該培養細胞からＲＮＡを抽出し、ホ
リスタチンをコードするｍＲＮＡを検出し、そして被験
物質の存在下と非存在下でホリスタチンをコードするｍ
ＲＮＡの量に差がある場合に、前記被験物質を免疫抑制
剤、皮膚疾患の治療剤又は脱毛防止剤の候補として選択
することを特徴とする生理活性物質のスクリーニング
法。 - 【請求項２】 請求項１の手順において、被験物質の非
存在下よりも存在下においてホリスタチンをコードする
ｍＲＮＡが少い場合に該被験物質を候補として選択す
る、請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 ホリスタチンをコードするｍＲＮＡの検
出を、プライマー対CTCCTGCTGCTGCTCTGC（配列番号：
１）及びTCCTCTTCCTCGGTGTCTTCC （配列番号：２）を用
いるＰＣＲ増幅法により行う、請求項１又は２に記載の
方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16487297A JPH11199A (ja) | 1997-06-09 | 1997-06-09 | 生理活性物質の新規なスクリーニング法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16487297A JPH11199A (ja) | 1997-06-09 | 1997-06-09 | 生理活性物質の新規なスクリーニング法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11199A true JPH11199A (ja) | 1999-01-06 |
Family
ID=15801536
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP16487297A Withdrawn JPH11199A (ja) | 1997-06-09 | 1997-06-09 | 生理活性物質の新規なスクリーニング法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11199A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1302546A3 (en) * | 2001-10-10 | 2003-11-26 | Tosoh Corporation | Method of evaluating drug efficacy and toxicity |
| JP2014518099A (ja) * | 2011-05-30 | 2014-07-28 | ロレアル | 再構成頭皮モデルおよび活性分子のスクリーニング方法 |
-
1997
- 1997-06-09 JP JP16487297A patent/JPH11199A/ja not_active Withdrawn
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1302546A3 (en) * | 2001-10-10 | 2003-11-26 | Tosoh Corporation | Method of evaluating drug efficacy and toxicity |
| JP2014518099A (ja) * | 2011-05-30 | 2014-07-28 | ロレアル | 再構成頭皮モデルおよび活性分子のスクリーニング方法 |
| JP2017113030A (ja) * | 2011-05-30 | 2017-06-29 | ロレアル | 再構成頭皮モデルおよび活性分子のスクリーニング方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20040907 |