JPH11209324A

JPH11209324A - 抗骨粗鬆症剤及び（ｒ）−８−ヒドロキシ−２，６−ジメチル−２−オクテン酸

Info

Publication number: JPH11209324A
Application number: JP10013773A
Authority: JP
Inventors: Koji Yamaguchi; 宏二山口; Tomoko Tsuji; 智子辻; Tsutomu Shinohara; 力篠原; Yoshiaki Yada; 美日矢田; Mikiko Sodeoka; 幹子袖岡; Sachiko Kojima; 幸子小島
Original assignee: Sagami Chemical Research Institute
Current assignee: Sagami Chemical Research Institute
Priority date: 1998-01-27
Filing date: 1998-01-27
Publication date: 1999-08-03

Abstract

(57)【要約】【課題】骨粗鬆症の治療・予防に有用な治療剤とこれ
らの機能を有する物質を提供する。【解決手段】ニクジュヨウ抽出物を有効成分とする抗
骨粗鬆症剤、並びにニクジュヨウ抽出物の活性成分とし
て得られる下記式（１）【化１】で示される（Ｒ）−８−ヒドロキシ−２，６−ジメチル
−２−オクテン酸またはその薬理的に許容しうる塩。上
記式（１）で示される（Ｒ）−８−ヒドロキシ−２，６
−ジメチル−２−オクテン酸またはその薬理的に許容し
うる塩を有効成分とする骨粗鬆症治療剤。上記式（１）
で示される（Ｒ）−８−ヒドロキシ−２，６−ジメチル
−２−オクテン酸またはその薬理的に許容しうる塩を有
効成分とするインターロイキン６産生抑制剤。【効果】骨粗鬆症の予防および治療、並びにインター
ロイキン６が発症あるいは増悪の原因となっている自己
免疫疾患、カケクシア、炎症など種々の疾患の予防・治
療を行うことができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、骨粗鬆症等の骨疾
患に対する医薬、並びに新規な（Ｒ）−８−ヒドロキシ
−２，６−ジメチル−２−オクテン酸またはその薬理的
に許容しうる塩に関する。更にそれを有効成分とする抗
骨粗鬆症剤およびインターロイキン６産生抑制剤に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】骨粗鬆症は、代謝障害、内分泌障害、加
齢により骨吸収と骨形成のバランスが崩れたために骨量
が減少し、骨の粗鬆化をきたす疾病である。症状は激し
い腰背痛と骨の粗鬆化に起因する骨折を呈し、老人の場
合これを契機として寝たきりとなり、死亡に至ることも
ある。骨粗鬆症治療剤としては、腰背痛の緩和作用、骨
吸収抑制作用、骨形成促進作用を有する薬剤が考えら
れ、カルシトニン、ビタミンD、カルシウム剤などが使
用されているが、臨床上、薬効や副作用の点において十
分に満足できる薬剤は未だなく、効果が高く副作用の少
ない骨粗鬆症治療剤が望まれている。

【０００３】インターロイキン６（ＩＬ−６）は、単
球、Ｔ細胞、Ｂ細胞、血管内皮細胞、線維芽細胞、骨芽
細胞など種々の細胞から産生され、Ｂ細胞の抗体産生細
胞への分化誘導、肝細胞からの急性期蛋白質合成誘導、
脳神経系細胞の分化誘導、造血系細胞の増殖分化誘導、
破骨細胞の分化誘導などの多様な生理活性作用を有する
物質であることが知られている（実験医学、７巻、１
号、１９８９年）。ＩＬ−６と各種疾患との関連につい
ては、例えば、慢性間節リューマチ、キャッスルマン症
候群等の自己抗体産生が疾患の原因あるいは増悪に関わ
っていると考えられる自己免疫疾患があげられる（Euro
pean Journal of Immunology，１８巻、１７９７頁、実
験医学、７巻５０頁、１９８９年）。また、癌の領域に
おいてもＩＬ−６が、多発性骨髄腫のオ−トクライン増
殖因子であるとの報告（Nature，３３２巻、８３頁、１
９８８年）や癌悪液質（カケクシア）物質であるとの報
告もなされている（Endocrinology，１２８巻、２６５
７頁、１９９１年）。感染症の領域でも敗血症患者の
血液ＩＬ−６濃度が生存率と負の相関があること（Jour
nal of Experimental Medicine，１６９巻、３３３頁、
１９８９年、Blood，７４巻、１７０４頁、１９８９
年、）も報告されている。また、ＩＬ−６は、炎症反応
の急性期蛋白であり発熱、悪寒、倦怠感などの炎症によ
る諸症状、臓器摘出などの外科手術後の消耗、回復の遅
れを引き起こす原因とも考えられている。

【０００４】ニクジュヨウと総称される植物にはハマウ
ツボ科（Orobanchaceae）のホンオニク、オニク等が含
まれる。ホンオニク（Cistanche salsa）は中国に産
し、低木に寄生する全寄生植物であり、不老、強精の効
用があるとされている。また、日本産の同科植物オニク
（Boschniakia glabra）もホンオニクの代用として用い
られ、同様の効果があるとされている（廣川薬用植物大
事典、1963、廣川書店、和漢生薬、1971、廣川書店な
ど）。しかしニクジュヨウ抽出物が骨粗鬆症の治療・予
防に有効であるという報告は全く無い。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】骨粗鬆症の治療・予防
効果、及びインターロイキン６産生抑制作用を有する医
薬として有用な物質を提供することにある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】上記の課題を解決するた
めに鋭意検討を重ねた結果、ニクジュヨウの抽出物が骨
粗鬆症モデルマウスにおいて骨粗鬆症を抑制することを
見い出した。さらに下記式（１）で表わされる、ニクジ
ュヨウに含有される新規化合物が骨粗鬆症の治療に有効
であることを見い出し、またインターロイキン６の産生
を抑制することを見い出し本発明を完成した。

【０００７】すなわち本発明は、ニクジュヨウ抽出物を
有効成分とする抗骨粗鬆症剤を提供する。

【０００８】さらに本発明は、下記式（１）

【０００９】

【化２】

【００１０】で示される新規化合物（Ｒ）−８−ヒドロ
キシ−２，６−ジメチル−２−オクテン酸またはその薬
理的に許容しうる塩を有効成分とする抗骨粗鬆症剤およ
び上記式（１）で示される（Ｒ）−８−ヒドロキシ−
２，６−ジメチル−２−オクテン酸またはその薬理的に
許容しうる塩を有効成分とするインターロイキン６産生
抑制剤を提供する。

【００１１】

【発明の実施の形態】本発明の有効成分である抽出物を
得るために利用される原料は、前記のようにニクジュヨ
ウと総称されるものであるが、その例としてホンオニク
（Cistanchesalsa）、オニク（Boschniakia glabra）な
どが挙げられ、これらの効用は大体同様と考えられてい
る（廣川薬用植物大事典、1963、廣川書店、和漢生薬、
1971、廣川書店など）。従って、これらの植物を単独で
用いてもよく、混合して用いてもよい。これらの植物は
既に生薬として知られており、安全性において特に問題
になる点はないと考えられる。

【００１２】本発明の有効成分であるニクジュヨウ抽出
物は、上記植物体等の原料から、有効成分を効果的に抽
出し得る溶媒を用いて抽出し、また必要により、これら
を部分精製することにより得られる。この抽出において
使用される溶媒は、有効成分を効果的に抽出し得る溶媒
であれば特に限定されるものではないが、例えば、水
や、アセトン、もしくはメタノール、エタノール、プロ
パノール等の低級アルコール、またはそれらの混液、ク
ロロホルム等の含塩素有機溶媒、酢酸エチル等の低級脂
肪酸エステル等を用いることができる。

【００１３】本発明の有効成分を抽出するにあたって
は、有効成分を効果的に抽出し得る方法ならば特に限定
されるものではないが、植物体をそのまま抽出に供して
もよく、植物体の乾燥物を抽出に供してもよい。また、
原料をそのままの姿で抽出に供してもよいが、抽出効率
を高めるために、これらの原料を細かく裁断してから溶
媒で抽出することもできる。更に、抽出を２〜１０回程
度繰り返して抽出効率を高めることも可能である。抽出
は、有効成分を効果的に抽出し得る方法ならば特に限定
されるものではないが、期間は数時間から数ヵ月間、温
度は室温あるいは高温、場合によっては低温で行うこと
が可能である。

【００１４】更に、抽出物中の有効成分の濃度を高める
ために、所望により、得られた抽出物を更に、濃縮、液
液分配、吸着クロマトグラフィー、順相もしくは逆相ク
ロマトグラフィー等の手段に付すことも可能である。

【００１５】本発明に関わる抗骨粗鬆症剤を製造するに
は、上記のようにして得たニクジュヨウ抽出物を有効成
分とし、常法に従って公知の医薬用無毒性担体と組み合
わせて製剤化すればよい。本発明に関わる抗骨粗鬆症剤
は、種々の剤型での投与が可能であり、例えば、経口投
与剤としては錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等の固形
剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤等の液剤、凍結乾燥製剤等が
挙げられ、非経口投与剤としては、注射剤のほか、坐
剤、噴霧剤、経皮吸収剤等が挙げられ、これらの製剤は
製剤上の常套手段により調製することができる。上記の
医薬用無毒性担体としては、例えば、グルコース、乳
糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪
酸グリセリド、ポリエチレングリコール、ヒドロキシエ
チルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレ
ンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、アルブミン、
水、生理食塩水等が挙げられる。また、必要に応じて、
安定化剤、滑剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤等の慣用の添
加剤を適宜添加することができる。本発明に関わる骨粗
鬆症治療剤またはインターロイキン６産生抑制剤におい
て、有効成分の投与量は、患者の年齢、体重、症状、疾
患の程度、投与スケジュール、製剤形態等により、適宜
選択・決定されるが、例えば、一日あたり１〜５００g
／kg体重程度とされ、一日数回に分けて投与してもよ
い。

【００１６】本発明の新規物質（Ｒ）−８−ヒドロキシ
−２，６−ジメチル−２−オクテン酸は、上記のような
方法で得られたニクジュヨウ抽出物より、実施例に示し
たように、更に、濃縮、液液分配、吸着クロマトグラフ
ィー、順相もしくは逆相クロマトグラフィー等の手段で
単一になるまで精製を繰り返すことにより単離すること
ができる。得られた単一物質はその理化学的性質等よ
り、前記式（１）で示される（Ｒ）−８−ヒドロキシ−
２，６−ジメチル−２−オクテン酸（光学純度100% e
e）と決定された。対応する（Ｓ）−体は文献に報告が
あるが（Phytochemistry, 22巻, 255-258頁, 1983
年）、この（Ｒ）−体は文献未載の新規な化合物であ
る。

【００１７】また、本発明に関わる新規物質（Ｒ）−８
−ヒドロキシ−２，６−ジメチル−２−オクテン酸は、
例えば実施例に示したように市販の（＋）−（Ｒ）−シ
トロネロールを出発物質として、上記文献に記載の方法
に準じて、化学合成することもできる（合成例参照）。

【００１８】本発明において、塩として、ナトリウム
塩、カリウム塩、リチウム塩、カルシウム塩、アンモニ
ウム塩、エタノールアミンとの塩等を例示できる。

【００１９】本発明の（Ｒ）−８−ヒドロキシ−２，６
−ジメチル−２−オクテン酸またはその薬理的に許容し
うる塩を抗骨粗鬆症剤またはインターロイキン６産生阻
害剤として用いるには、上記のようにして得た（Ｒ）−
８−ヒドロキシ−２，６−ジメチル−２−オクテン酸ま
たはその薬理的に許容しうる塩を有効成分とし、常法に
従って公知の医薬用無毒性担体と組み合わせて製剤化す
ればよい。本発明に関わる抗骨粗鬆症剤およびインター
ロイキン６産生抑制剤は、種々の剤型での投与が可能で
あり、例えば、経口投与剤としては錠剤、顆粒剤、散
剤、カプセル剤等の固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤等の
液剤、凍結乾燥製剤等が挙げられ、非経口投与剤として
は、注射剤のほか、坐剤、噴霧剤、経皮吸収剤等が挙げ
られ、これらの製剤は製剤上の常套手段により調製する
ことができる。上記の医薬用無毒性担体としては、例え
ば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、
デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングリコ
ール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコー
ル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ア
ミノ酸、アルブミン、水、生理食塩水等が挙げられる。
また、必要に応じて、安定化剤、滑剤、湿潤剤、乳化
剤、結合剤等の慣用の添加剤を適宜添加することができ
る。本発明に関わる骨粗鬆症治療剤またはインターロイ
キン６産生抑制剤において、有効成分の投与量は、患者
の年齢、体重、症状、疾患の程度、投与スケジュール、
製剤形態等により、適宜選択・決定されるが、例えば、
一日あたり0.01〜1000μg／kg体重程度とされ、一日数
回に分けて投与してもよい。

【００２０】

【実施例】以下に本発明をより詳細に説明するために実
施例を挙げるが、本発明はこれらによって何ら限定され
るものではない。

【００２１】実施例１（ニクジュヨウ抽出物の調製）ニクジュヨウ（ウチダ和漢薬社製、ロット番号２２２６
２９、ホンオニク、Cistanche salsa）１００ｇをエタ
ノール１Ｌで抽出し、抽出液を減圧留去することによ
り、褐色油状物質約６ｇを得た。

【００２２】実施例２（（Ｒ）−８−ヒドロキシ−２，
６−ジメチル−２−オクテン酸の精製）ニクジュヨウ（ウチダ和漢薬社製、ロット番号２３２４
１９、ホンオニク、Cistanche salsa）４Ｋｇをエタノ
ール４０Ｌで抽出し、抽出液を減圧留去することによ
り、油状物質８０．１ｇを得た。この油状物質に水１Ｌ
を加え、クロロホルム１Ｌで４回抽出した。このクロロ
ホルム画分を濃縮乾固することにより６．８ｇの油状物
質を得た。

【００２３】この油状物質をクロロホルム―メタノール
（２：１）９０ｍＬに溶解後、シリカゲル粉末１３．４
ｇを加えてよく攪拌混合し、減圧下溶媒を除去した。こ
のシリカゲル粉末を予めヘキサンで充填したシリカゲル
カラム（φ４×３９ｃｍ）にチャージした。ヘキサン―
アセトン（９０：１０）の混合溶媒６．７Ｌで溶出され
る画分を除いた。次いで、ヘキサン―アセトン（８０：
２０）の混合溶媒で溶出を行い、５００ｍＬずつ分画し
た。フラクションＮｏ．６―Ｎｏ．８に（Ｒ）−８−ヒ
ドロキシ−２，６−ジメチル−２−オクテン酸は溶出さ
れた。これらの画分を集めて減圧乾固し、８９ｍｇの油
状物質を得た。

【００２４】この油状物質をクロロホルム―メタノール
（２：１）1ｍＬに溶解し、以下の条件で行った高速液
体カラムクロマトグラフィーの試料とした（カラムサイ
ズ；φ２０×３００ｍｍ、担体；ＴＳＫｇｅｌＯＤＳ
−８０ＴＳ（東ソー社製）、溶媒組成；４０％メタノー
ル、６０％水、流速；２０ｍＬ／ｍｉｎ、温度；２３
℃、検出波長；２１０ｎｍ、装置；東ソーＨＬＣ−８
０７０）。保持時間４８〜５８分の画分を分取し、減圧
下溶媒を留去した後、酢酸エチルで抽出し、濃縮乾固す
ることにより無色油状物質として８．５ｍｇの（Ｒ）−
８−ヒドロキシ−２，６−ジメチル−２−オクテン酸を
得た。高速液体カラムクロマトグラフィー、¹Ｈ−ＮＭ
Ｒ等の機器分析の結果、純度９９％以上であることが確
認された。得られた（Ｒ）−８−ヒドロキシ−２，６−
ジメチル−２−オクテン酸の理化学的性質は以下のとお
りである。（ａ）質量分析値：ＥＩマススペクトルｍ／ｚ１６
８（Ｍ−Ｈ₂Ｏ）、ＳＩＭＳｍ／ｚ１８７（Ｍ＋
Ｈ）、２０９（Ｍ＋Ｎａ）（ｂ）高分解能質量分析値：ＨＲＥＩマススペクトル
実測値ｍ／ｚ１６８．１１５１（Ｍ−Ｈ₂Ｏ）、理
論値ｍ／ｚ１６８．１１４９（Ｃ₁₀Ｈ₁₆Ｏ₂として
計算）（ｃ）比旋光度：［α］_D ²² ＋５．６゜（ｃ＝０．４
２５、クロロホルム）（ｄ）紫外線吸収スペクトル：メタノール λｍａｘ
ｎｍ（ε）２１５（９８９０）。（ｅ）赤外線吸収スペクトル：ＮａＣｌ（Ｎｅａｔ）
３４４０、２９３０、１６８８、１６４２、１２８１、
１０５７ｃｍ^ー1 （ｆ）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル：（４００ＭＨｚ、ＣＤ
Ｃｌ₃）δ ０．９２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ）、
１．３０（１Ｈ，ｍ）、１．４１（１Ｈ，ｍ）、１．４
６（１Ｈ，ｍ）、１．６１（１Ｈ，ｍ）、１．６２（１
Ｈ，ｍ）、１．８３（３Ｈ，ｓ）、２．２１（２Ｈ，
ｍ）、３．７０（２Ｈ，ｍ）、６．８８（１Ｈ，ｔ，Ｊ
＝７．１Ｈｚ）（ｇ）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル：（１００ＭＨｚ、ＣＤ
Ｃｌ₃）δ １７３．１、１４４．９、１２７．１、６
０．９、３９．６、３５．６、２９．３、２６．４、１
９．３、１２．０

【００２５】合成例１（（Ｒ）−および（Ｓ）−８−ヒ
ドロキシ−２，６−ジメチル−２−オクテン酸の合成）公知の方法（Phytochemistry, 22巻, 255-258頁, 1983
年）に従って市販の（＋）−（Ｒ）−シトロネロールか
ら合成した（Ｒ）−８−ヒドロキシ−２，６−ジメチル
−２−オクテナール (170 mg, 1.0 mmol) をtert-ブチ
ルアルコール (20 mL) に溶解し、2-メチル-2-ブテン
(5 mL)を加えた。そこへ亜塩素酸ナトリウム (833 mg,
9.2 mmol) 並びにリン酸二水素ナトリウム (833 mg, 6.
9 mmol) を水 (8.3 mL) に溶解したものを３０分かけて
滴下し、室温でさらに３時間撹拌した。反応液を減圧下
濃縮したのち、さらに水を加えエーテル抽出を行い、希
塩酸を用いて水層を酸性にした後、さらにエーテル抽出
をくりかえした。得られた有機層をあわせて水洗後硫酸
ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去して得られる
残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（３％〜１
０％メタノール-クロロホルム）により精製することに
より、（Ｒ）−８−ヒドロキシ−２，６−ジメチル−２
−オクテン酸(160 mg, 86%) が無色油状物として得られ
た。このものの比旋光度以外の各種スペクトルデータは
天然から得られた（Ｒ）−８−ヒドロキシ−２，６−ジ
メチル−２−オクテン酸と完全に一致した。[α]_D ²⁰ +
7.9゜ (c 0.455, CHCl₃)

【００２６】上記と同様の方法で市販の（−）−（Ｓ）
−シトロネロールから（Ｓ）−８−ヒドロキシ−２，６
−ジメチル−２−オクテン酸を合成した。[α]_D ²⁰ -5.7
゜ (c 0.525, CHCl₃)（光学純度65% ee）

【００２７】参考例１（ニクジュヨウから得られた
（Ｒ）−８−ヒドロキシ−２，６−ジメチル−２−オク
テン酸の立体化学構造の確認）上記の化学合成法により得られた（Ｒ）−８−ヒドロキ
シ−２，６−ジメチル−２−オクテン酸 (10.3 mg, 0.0
553 mmol) のエーテル溶液 (1.4 mL) に室温でジアゾメ
タンのエーテル溶液を原料が消失するまで加えた。少量
の酢酸で過剰のジアゾメタンをクエンチ後、反応液を飽
和炭酸水素ナトリウム溶液、飽和食塩水で洗浄し、硫酸
ナトリウムで乾燥後溶媒を減圧濃縮した。残留物をシリ
カゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチ
ル＝２：１）で精製することにより、（Ｒ）−８−ヒド
ロキシ−２，６−ジメチル−２−オクテン酸メチル
(8.7mg, 79%) が無色油状物として得られた。

【００２８】¹H-NMR (200 MHz) (CDCl₃) : δ0.86 (3H,
d, J=6.3Hz), 1.38 (5H, m), 1.77(3H, d, J=1.2 Hz),
2.12 (2H, dt, J=7.4, 7.4Hz), 3.62 (6H, m), 6.68
(1H,dt, J=1.2, 7.4Hz).

【００２９】得られた（Ｒ）−８−ヒドロキシ−２，
６−ジメチル−２−オクテン酸メチル (2.2 mg, 0.011
mmol) のジクロロメタン溶液 (0.20 mL) に、０℃でピ
リジン (8.0 μL, 0.10 mmol)、塩化ベンゾイル (4.0
μL, 0.034 mmol) を加え、室温で４時間撹拌した。反
応液に氷冷下飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、エ
ーテル抽出を行った。有機層を飽和食塩水で洗浄後、溶
媒を減圧留去して得られる残留物を、シリカゲル薄層ク
ロマトグラフィー（クロロホルム）で精製することによ
り、（Ｒ）−８−ベンゾイルオキシ−２，６−ジメチ
ル−２−オクテン酸メチル (4.5 mg, 69%) が無色油状
物として得られた。

【００３０】¹H-NMR (200 MHz) (CDCl₃) : δ1.00 (3H,
d, J=6.2Hz), 1.50 (5H, m), 1.84(3H, d, J=1.2 Hz),
2.22 (2H, dt, J=7.4, 7.4Hz), 3.72 (3H, s), 4.37
(2H,dt, J=1.5, 7.3Hz), 6.76 (1H, dt, J=1.2, 7.4H
z), 7.50 (3H, m), 8.06 (2H,td, J=1.5, 6.9Hz).

【００３１】上記と同様の方法により、天然から得られ
た（Ｒ）−８−ヒドロキシ−２，６−ジメチル−２−オ
クテン酸、ならびに化学合成した（Ｓ）−８−ヒドロキ
シ−２，６−ジメチル−２−オクテン酸もそれぞれ８−
ベンゾイルオキシ−２，６−ジメチル−２−オクテン酸
メチルへと導き、これらを分析用光学異性体分離カラム
を用いたHPLC (DAICEL CHIRALCEL OD, カラムサイズφ
0.46×25 cm, ヘキサン：イソプロピルアルコール＝
９：１, 0.5 mL/min) により分析した。その結果、合成
（Ｒ）−体及び天然から得られた（Ｒ）−８−ヒドロキ
シ−２，６−ジメチル−２−オクテン酸由来のものは保
持時間15.4分の単一ピークを示した。この結果より、天
然から得られた（Ｒ）−８−ヒドロキシ−２，６−ジメ
チル−２−オクテン酸は光学純度が100% ee であること
が判明した。これに対して合成（Ｓ）−体のサンプル
は、保持時間12.6分にメジャーピーク、15.4分にマイナ
ーピークを示し、光学純度が65% ee 程度であることを
示した。そこでこの（Ｒ）−体が混入していた(S)-体サ
ンプル (98.8 mg) を分取用カラム (DAICEL CHIRALCELO
D, カラムサイズφ2×25 cm, ヘキサン：イソプロピル
アルコール＝９：１, 6mL/min) で分離し、光学的に純
粋な(S)-8-ベンゾイルオキシ-2,6-ジメチル-2-オクテン
酸メチルを73.6 mg、（Ｒ）−８−ベンゾイルオキシ−
２，６−ジメチル−２−オクテン酸メチルを15.2 mg を
得た。

【００３２】参考例２（光学的に純粋な（Ｓ）−８−ヒ
ドロキシ−２，６−ジメチル−２−オクテン酸の製造）参考例１で得られた光学的に純粋な（Ｓ）−８−ベンゾ
イルオキシ−２，６−ジメチル−２-オクテン酸メチル
(72.3 mg, 0.24 mmol) をメタノール (2.0 mL)に溶解
し、1N水酸化ナトリウム (1.0 mL, 1.0 mmol) を加えて
室温で18.5 時間撹拌した。水で希釈後エーテル抽出を
行い、水層はさらに1N塩酸で酸性にpHを調整後エーテル
抽出を繰り返した。有機層を合わせ、水及び飽和食塩水
で洗浄後硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去して
得られる残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１〜１：１）で精製する
ことにより、光学的に純粋な（Ｓ）−８−ヒドロキシ−
２，６−ジメチル−２−オクテン酸（42.4 mg, 96%)
が無色油状物として得られた。 [α]_D ²⁰ -8.3゜ (c 0.505, CHCl₃)

【００３３】試験例１（ニクジュヨウ抽出物の骨粗鬆症
抑制効果）マウスの卵巣を摘出すると、骨粗鬆症が発症し、その病
因・病態がヒトの閉経後骨粗鬆症に類似していることか
ら、卵巣摘出マウスは骨粗鬆症モデル動物として使用さ
れている。そこで、ニクジュヨウ抽出物の骨粗鬆症に対
する効果を調べるために以下の試験を行った。４週齢の
ddYマウス（メス）の卵巣を塩酸ケタミン麻酔下で摘出
した。卵巣摘出翌日より、実施例１の方法で得られたニ
クジュヨウ抽出物を経口投与した。ニクジュヨウ抽出物
は１０％クレモホア（シグマ社製）水溶液に懸濁し16mg
／0.2ml／マウス／日の投与量で週５回、４週間連続し
て経口投与した。各群３匹のマウスを用いた。４週間後
に、体重測定後、屠殺し大腿骨乾燥重量を測定した。表
１に各群の大腿骨乾燥重量／体重の平均値±標準誤差を
示した。

【００３４】

【表１】表１．体重あたりの大腿骨乾燥重量 ────────────────────────────────── 群大腿骨乾燥重量／体重（mg／g） ────────────────────────────────── １．偽手術対照群 1.41±0.02 ２．卵巣摘出対照群 1.32±0.04 ３．ニクジュヨウ抽出物投与群 1.44±0.03 ──────────────────────────────────

【００３５】この結果からニクジュヨウ抽出物が骨粗鬆
症の治療に有効であることが判明した。

【００３６】試験例２（（Ｒ）−８−ヒドロキシ−２，
６−ジメチル−２−オクテン酸の骨粗鬆症抑制効果）ニクジュヨウから得られた（Ｒ）−８−ヒドロキシ−
２，６−ジメチル−２−オクテン酸の骨粗鬆症に対する
効果を調べるために以下の試験を行った。４週齢のddY
マウス（メス）の卵巣を塩酸ケタミン麻酔下で摘出し
た。卵巣摘出翌日より、実施例２の方法でニクジュヨ
ウから精製した（Ｒ）−８−ヒドロキシ−２，６−ジメ
チル−２−オクテン酸（(R)-HDOA）を0.32、1.6、8μg
／kg／日の投与量で週５回、４週間連続して腹腔内投与
した。化合物（Ｒ）−８−ヒドロキシ−２，６−ジメチ
ル−２−オクテン酸は10％DMSO水溶液に溶解し、マウス
１匹あたり0.2ml／日を腹腔内投与し、偽手術対照群及
び卵巣摘出対照群にも10％DMSO水溶液をマウス１匹あた
り0.2ml／日、腹腔内投与した。各群５匹のマウスを用
いた。４週間後に、体重測定後、屠殺し大腿骨乾燥重量
を測定した。また骨硬度試験機TKー252C（室町機械株式
会社製）を用いて、３点折曲げ試験により大腿骨強度を
測定した。表２に各群の大腿骨乾燥重量／体重、表３に
骨強度の指標となる骨破断力（failure load）、及び表
４に骨破断エネルギー（yield energy）の平均値±標準
誤差を示した。各群の卵巣摘出対照群に対する有意差の
検定はStudent's t-testにより行った。特に記述のない
群は卵巣摘出対照群に対して有意差なし（p≧0.05）で
ある。

【００３７】

【表２】表２．体重あたりの大腿骨乾燥重量 ────────────────────────────────── 群大腿骨乾燥重量／体重（mg／g） ─────────────────────────────────── １．偽手術対照群 1.43 ± 0.03 （p<0.005）２．卵巣摘出対照群 1.21 ± 0.03 ３．(R)-HDOA投与群（0.32μg／kg／日） 1.28 ± 0.03 ４．(R)-HDOA投与群（1.6μg／kg／日） 1.34 ± 0.03（p<0.05）５．(R)-HDOA投与群（8μg／kg／日） 1.36 ± 0.03（p<0.01） ──────────────────────────────────

【００３８】

【表３】表３．骨破断力 ──────────────────────────────── 群骨破断力（N） ──────────────────────────────── １．偽手術対照群 14.4 ± 0.8（p<0.05）２．卵巣摘出対照群 12.7 ± 0.2 ３．(R)-HDOA投与群（0.32μg／kg／日） 13.1 ± 0.7 ４．(R)-HDOA投与群（1.6μg／kg／日） 14.1 ± 0.2（p<0.005）５．(R)-HDOA投与群（8μg／kg／日） 13.5 ± 0.5 ────────────────────────────────

【００３９】

【表４】表４．骨破断エネルギー ─────────────────────────────── 群骨破断エネルギー（mJ） ─────────────────────────────── １．偽手術対照群 3.35 ± 0.26 ２．卵巣摘出対照群 2.90 ± 0.22 ３．(R)-HDOA投与群（0.32μg／kg／日） 3.46 ± 0.31 ４．(R)-HDOA投与群（1.6μg／kg／日） 3.46 ± 0.05（p<0.05）５．(R)-HDOA投与群（8μg／kg／日） 3.38 ± 0.20 ────────────────────────────────

【００４０】これらの結果から、本発明の化合物（Ｒ）
−８−ヒドロキシ−２，６−ジメチル−２−オクテン酸
が骨粗鬆症の治療に有効であることが判明した。

【００４１】試験例３（（Ｓ）−および（Ｒ）−８−ヒ
ドロキシ−２，６−ジメチル−２−オクテン酸の骨粗鬆
症抑制効果）（Ｓ）−および（Ｒ）−８−ヒドロキシ−２，６−ジメ
チル−２−オクテン酸の骨粗鬆症に対する効果を調べる
ために以下の試験を行った。４週齢のddYマウス（メ
ス）の卵巣を塩酸ケタミン麻酔下で摘出した。卵巣摘
出翌日より、合成例２及び参考例２に記述した方法で得
られた（Ｒ）−８−ヒドロキシ−２，６−ジメチル−２
−オクテン酸（光学純度100% ee）および（Ｓ）−８−
ヒドロキシ−２，６−ジメチル−２−オクテン酸（光学
純度100% ee）を8、16、32μg／kg／日の投与量で週５
回、４週間連続して腹腔内投与した。被験化合物は10％
DMSO水溶液に溶解し、マウス１匹あたり0.2ml／日を腹
腔内投与し、偽手術対照群及び卵巣摘出対照群にも10％
DMSO水溶液をマウス１匹あたり0.2ml／日、腹腔内投与
した。各群５匹のマウスを用いた。４週間後に、体重測
定後、屠殺し大腿骨乾燥重量を測定した。表５、６に各
群の大腿骨乾燥重量／体重の平均値±標準誤差を示し
た。表５は（Ｒ）−８−ヒドロキシ−２，６−ジメチル
−２−オクテン酸（(R)-HDOA）の、表６は（Ｓ）−８−
ヒドロキシ−２，６−ジメチル−２−オクテン酸（(S)-
HDOA）の試験結果を示す。各群の卵巣摘出対照群に対す
る有意差の検定はStudent's t-testにより行った。特に
記述のない群は卵巣摘出対照群に対して有意差なし（p
≧0.05）である。

【００４２】

【表５】表５．（Ｒ）−８−ヒドロキシ−２，６−ジメチル−２−オクテン酸（(R)-HD OA）の活性（大腿骨乾燥重量／体重） ────────────────────────────────── 群大腿骨乾燥重量／体重（mg／g） ────────────────────────────────── １．偽手術対照群 1.54 ± 0.04 （p<0.01）２．卵巣摘出対照群 1.34 ± 0.02 ３．(R)-HDOA投与群（8μg／kg／日） 1.32 ± 0.02 ４．(R)-HDOA投与群（16μg／kg／日） 1.42 ± 0.01 （p<0.05）５．(R)-HDOA投与群（32μg／kg／日） 1.43 ± 0.01 （p<0.05） ──────────────────────────────────

【００４３】

【表６】表６．（Ｓ）−８−ヒドロキシ−２，６−ジメチル−２−オクテン酸（(S)-HD OA）の活性（大腿骨乾燥重量／体重） ────────────────────────────────── 群大腿骨乾燥重量／体重（mg／g） ────────────────────────────────── １．偽手術対照群 1.60 ± 0.06 （p<0.01）２．卵巣摘出対照群 1.39 ± 0.01 ３．(S)-HDOA投与群（8μg／kg／日） 1.31 ± 0.03 ４．(S)-HDOA投与群（16μg／kg／日） 1.35 ± 0.06 ５．(S)-HDOA投与群（32μg／kg／日） 1.34 ± 0.03 ───────────────────────────────────

【００４４】これらの結果から、（Ｒ）−８−ヒドロキ
シ−２，６−ジメチル−２−オクテン酸が骨粗鬆症の治
療に有効であり、一方光学異性体の（Ｓ）−８−ヒドロ
キシ−２，６−ジメチル−２−オクテン酸には顕著な効
果が認められず、骨粗鬆症治療効果が(R)-体特異的であ
ることが判明した。

【００４５】試験例４インターロイキン６（ＩＬ−６）生産抑制活性試験９６穴マルチプレートに、１×１０⁴／mlのマウス前骨
芽細胞MC３T３Ｅ１（培地；１０％牛胎児血清含有アル
ファＭＥＭ）を入れて３日間常法に従いＣＯ₂インキュ
ベーターで培養した。細胞が集密的になったことを確認
し、副甲状腺ホルモン（PTH）２０ｎg／ml、あるいは、
PTHと希釈列に従った（Ｒ）−８−ヒドロキシ−２，６
−ジメチル−２−オクテン酸の両方を含む上記培地に交
換した。さらに１日培養した後、培養上清中に生成され
たＩＬ−６の濃度をバイオアッセイにより定量した。Ｉ
Ｌ−６の定量は、ＩＬ−６依存的に増殖するマウスハイ
ブリドーマMH６０を用いて常法に従って行った。PTH刺
激によって生産されるＩＬ−６の量に対し、これを５０
％抑制するのに必要な阻害剤の濃度をＩＣ₅₀値とし
た。（Ｒ）−８−ヒドロキシ−２，６−ジメチル−２−
オクテン酸のＩＬ−６生産抑制活性のＩＣ₅₀値は、２７
μg／mlであった。この結果から、（Ｒ）−８−ヒドロ
キシ−２，６−ジメチル−２−オクテン酸が、インター
ロイキン６生産抑制活性を有することが判明した。

【００４６】

【発明の効果】本発明により、骨粗鬆症の予防および治
療、並びにインターロイキン６が発症あるいは増悪の原
因となっている自己免疫疾患、カケクシア、炎症など種
々の疾患の予防・治療を行うことができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者小島幸子東京都八王子市小門町10−３

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ニクジュヨウ抽出物を有効成分とする抗
骨粗鬆症剤。
【請求項２】下記式（１）【化１】で示される（Ｒ）−８−ヒドロキシ−２，６−ジメチル
−２−オクテン酸。
【請求項３】上記式（１）で示される（Ｒ）−８−ヒ
ドロキシ−２，６−ジメチル−２−オクテン酸またはそ
の薬理的に許容しうる塩を有効成分とする抗骨粗鬆症
剤。
【請求項４】上記式（１）で示される（Ｒ）−８−ヒ
ドロキシ−２，６−ジメチル−２−オクテン酸またはそ
の薬理的に許容しうる塩を有効成分とするインターロイ
キン６産生抑制剤。