JPH11253186A

JPH11253186A - 新規オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ

Info

Publication number: JPH11253186A
Application number: JP10347733A
Authority: JP
Inventors: Magdalena Zalacain; マグダレーナ・サラカイン; James Raymond Brown; ジェイムズ・レイモンド・ブラウン
Original assignee: SmithKline Beecham Corp
Current assignee: SmithKline Beecham Corp
Priority date: 1997-10-30
Filing date: 1998-10-30
Publication date: 1999-09-21
Also published as: US6706508B1; US6165763A; EP0913476A3; EP0913476A2; CA2248996A1

Abstract

(57)【要約】【課題】オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼポ
リペプチドおよびオルニチンカルバモイルトランスフェ
ラーゼポリペプチドをコードしているＤＮＡ（ＲＮ
Ａ）、および組み換え法によるかかるポリペプチドの製
造方法、ならびに抗微生物化合物のスクリーニングのた
めのオルニチンカルバモイルトランスフェラーゼポリペ
プチドの使用方法を提供する。【解決手段】配列番号：２のアミノ酸配列に対して少
なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプ
チドならびに配列番号：２のポリペプチドに対して少な
くとも７０％のアミノ酸配列相同性を有するポリペプチ
ド。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新たに同定された
ポリヌクレオチドおよびポリペプチド、ならびにそれら
の製造および使用、ならびにそれらの変種、アゴニスト
およびアンタゴニスト、そしてそれらの使用に関する。
詳細には、これらの点および他の点に関して、本発明
は、ａｒｇＦ／ａｒｃＢ（オルニチンカルバモイルトラ
ンスフェラーゼ）ファミリーの新規ポリヌクレオチドお
よびポリペプチド（以下、「オルニチンカルバモイルト
ランスフェラーゼ」という）に関する。

【０００２】

【従来の技術】ストレプトコッカス属（Streptococci）
は医学的に重要な微生物属を形成しており、ヒトにおい
て、例えば中耳炎、結膜炎、肺炎、菌血症、髄膜炎、静
脈洞炎、膿胸および心内膜炎、最も詳細には例えば脳脊
髄液の感染のごとき髄膜炎を包含する、いくつかの型の
疾患を引き起こすことが知られている。ストレプトコッ
カス属の単離から１００年以上も経過しているため、ス
トレプトコッカス・ニューモニアエ（Streptococcus pn
eumoniae）は、より詳細な研究がなされた微生物の一つ
である。例えば、事実、ＤＮＡが遺伝物質であるという
初期の見解の大部分は、この微生物を用いたGriffithな
らびに、Avery、MacleodおよびMcCartyの研究において
述べられた。ストレプトコッカス・ニューモニアエに関
する研究は膨大であるにも関わらず、この微生物の毒性
に関しては多くの疑問が残されている。抗生物質の開発
のための標的としてストレプトコッカス属の遺伝子およ
び遺伝子産物を用いるのはとりわけ好ましいことであ
る。

【０００３】ストレプトコッカス・ニューモニアエ感染
の頻度は過去２０年間に劇的に上昇している。これは多
重抗生物質耐性株の出現、および免疫系が低下した人の
集団の増加に起因している。いくつかのまたは全ての標
準的な抗生物質に対して耐性を有するストレプトコッカ
ス・ニューモニアエ株を単離することはもはやめずらし
いことではない。この現象がこの生物に対する新しい抗
菌剤、ワクチンおよび診断試験についての必要性を形成
した。病原性に関連したある種のストレプトコッカスの
因子、例えば、きょう膜多糖、ペプチドグリカン、ニュ
ーモリシン、ＰｓｐＡ補体因子Ｈ結合成分、オートリシ
ン、ノイラミニダーゼ、ペプチドパーメアーゼ、過酸化
水素、ＩｇＡ１プロテアーゼが同定されているが、それ
らがすべてではない。さらに、哺乳動物宿主における感
染および疾病の進行中におけるかかる遺伝子の一時的発
現に関してはほとんどわかっていない。細菌は感染の異
なる段階、詳細には感染が確立された時に発現される可
能性がある細菌の遺伝子のセットを発見することは、発
症を妨害しうる新規抗微生物剤のスクリーニングおよび
特徴づけに関する重要な情報を提供する。かかるアプロ
ーチは、既知蛋白についてのより十分な理解を提供する
ことのほかに、従来認識されていなかった標的を同定す
るであろう。

【０００４】オルニチンカルバモイルトランスフェラー
ゼにより触媒される反応は、アルギニンの同化または異
化のいずれかに関与している可能性がある。シトルリン
を生じるオルニチンのカルバモイル化は生合成経路に含
まれており、その逆反応であるシトルリンの加リン酸分
解はアルギニンデイミナーゼ経路の第２段階である。こ
れらの機能の両方を実現している多くの微生物は、２つ
の異なるオルニチンカルバモイルトランスフェラーゼを
有することがわかっている。これらの種々の酵素の反応
論的特性が調べられている。役割には関係なく、それら
すべては細胞においてシトルリンの合成および分解の両
方を触媒する。アミノ酸の生合成または分解に関与する
酵素は細菌の１次代謝において重要な役割を果たしてお
り、それゆえ、これらの蛋白の阻害剤は感染プロセスを
妨害し、抗細菌剤として有用でありうる。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】明らかに、抗生物質活
性に関して化合物をスクリーニングするのに有用である
という目下の利益を有する、本発明新規化合物のごとき
因子に対する必要性がある。かかる因子は、感染、機能
不全および疾病の発生におけるそれらの役割を調べるの
にも有用である。感染、機能不全または疾病の予防、改
善または修正において役割を果たしうる、かかる因子な
らびにそれらのアンタゴニストおよびアゴニストに対す
る必要性もある。

【０００６】本発明ポリペプチドは、既知のラクトバチ
ルス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）のａ
ｒｇＦ蛋白に対するアミノ酸配列相同性を有する。

【０００７】

【課題を解決するための手段および発明の実施の形態】
表１（配列番号：２）に示すアミノ酸配列および既知ア
ミノ酸配列またはラクトバチルス・プランタルムのａｒ
ｇＦ蛋白のごとき他の蛋白の配列との間の相同性によ
り、新規オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼポ
リペプチドであると同定されたポリペプチド提供するこ
とが本発明の目的である。オルニチンカルバモイルトラ
ンスフェラーゼポリペプチドをコードしているポリヌク
レオチド、詳細には本明細書でオルニチンカルバモイル
トランスフェラーゼと命名されたポリペプチドをコード
しているポリヌクレオチドを提供することが本発明のさ
らなる目的である。本発明の特に好ましい具体例におい
て、ポリヌクレオチドは、表１（配列番号：１）に示す
配列を含むオルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ
ポリペプチドをコードする領域を含み、全長遺伝子また
はその変種が包含される。本発明のもう１つの特に好ま
しい具体例において、表１（配列番号：２）のアミノ酸
配列を含むストレプトコッカス・ニューモニアエ由来の
新規オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ蛋白、
またはその変種がある。本発明のもう１つの態様によれ
ば、寄託株に含まれるストレプトコッカス・ニューモニ
アエ0100993株により発現可能な成熟ポリペプチドをコ
ードしている単離核酸分子が提供される。

【０００８】本発明のさらなる態様は、オルニチンカル
バモイルトランスフェラーゼ、詳細にはストレプトコッ
カス・ニューモニアエのオルニチンカルバモイルトラン
スフェラーゼをコードしている単離核酸分子が提供さ
れ、それにはｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡが包含
される。本発明のさらなる具体例は、生物学的、診断学
的、予防的、臨床的もしくは治療的に有用なその変種、
およびそれらを含む組成物を包含する。本発明のもう１
つの態様によれば、治療または予防を目的とした、特に
遺伝学的免疫を目的とした、本発明ポリヌクレオチドの
使用が提供される。本発明の特に好ましい具体例には、
オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼの天然に存
在する対立遺伝子変種およびそれによりコードされるポ
リペプチドがある。

【０００９】本発明のもう１つの態様において、本明細
書においてオルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ
と称されるストレプトコッカス・ニューモニアエの新規
ポリペプチド、ならびに生物学的、診断学的、予防的、
臨床的もしくは治療的に有用なそのフラグメント、変種
および誘導体、および前記したフラグメントおよびアナ
ログの変種および誘導体、およびそれらを含む組成物が
提供される。本発明の特に好ましい具体例には、オルニ
チンカルバモイルトランスフェラーゼ遺伝子の天然に存
在する対立遺伝子によりコードされるオルニチンカルバ
モイルトランスフェラーゼポリペプチドの変種がある。
本発明の好ましい具体例において、上記オルニチンカル
バモイルトランスフェラーゼポリペプチドの製造方法が
ある。本発明のさらに別の態様によれば、例えば、抗体
を含め、抗細菌剤として有用なかかるポリペプチドの阻
害剤が提供される。

【００１０】本発明の特定の好ましい具体例によれば、
オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ発現の評
価、疾病の治療、例えば中耳炎、結膜炎、肺炎、菌血
症、髄膜炎、静脈洞炎、膿胸および心内膜炎、最も詳細
には例えば脳脊髄液の感染のごとき髄膜炎の治療、遺伝
学的変異のアッセイ、ならびに細菌、特にストレプトコ
ッカス・ニューモニアエ細菌に対する免疫学的応答を生
起するための生物へのオルニチンカルバモイルトランス
フェラーゼポリペプチドまたはポリヌクレオチドの投与
のための、製品、組成物および方法が提供される。

【００１１】本発明のこのおよび他の態様の特定の好ま
しい具体例によれば、特に、厳密な条件下でオルニチン
カルバモイルトランスフェラーゼポリヌクレオチド配列
にハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドが提供
される。本発明の特定の好ましい具体例において、オル
ニチンカルバモイルトランスフェラーゼポリペプチドに
対する抗体が提供される。本発明の他の具体例におい
て、本発明ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの結
合、あるいは相互作用して、それらの活性を阻害または
活性化する化合物の同定方法が提供され、該方法は、化
合物とポリペプチドまたはポリヌクレオチドとの間の結
合あるいは他の相互作用を可能にする条件下で、本発明
ポリペプチドまたはポリヌクレオチドをスクリーニング
すべき化合物と接触させて、化合物との結合あるいは他
の相互作用を評価し（かかる結合または相互作用は、ポ
リペプチドまたはポリヌクレオチドと化合物との結合あ
るいは相互作用に応答して検出可能なシグナルを提供す
ることのできる第２の化合物に関連している）、次い
で、化合物とポリペプチドまたはポリヌクレオチドとの
結合または相互作用から生じるシグナルの存在または不
存在を検出することにより、化合物がポリペプチドまた
はポリヌクレオチドに結合あるいは相互作用して、それ
らの活性を活性化または阻害するかどうかを決定するこ
とを含む。本発明のさらにもう１つの態様によれば、オ
ルニチンカルバモイルトランスフェラーゼのアゴニスト
およびアンタゴニスト、好ましくは静細菌性または殺細
菌性アゴニストおよびアンタゴニストが提供される。本
発明のさらなる態様において、単細胞または多細胞生物
に投与するための、オルニチンカルバモイルトランスフ
ェラーゼポリヌクレオチドまたはオルニチンカルバモイ
ルトランスフェラーゼポリペプチドを含む組成物が提供
される。開示した本発明の精神および範囲内での種々の
変更および修飾は、以下の記載を読むこと、および本明
細書のその他の部分を読むことにより、当業者に容易に
明らかとなろう。

【００１２】用語以下の説明は、本明細書、とりわけ実施例において汎用
される特定の用語の理解を容易にするために示すもので
ある。「宿主細胞」は外来性ポリヌクレオチド配列によ
り形質転換もしくはトランスフェクションされた、また
は形質転換またはトランスフェクションすることのでき
る細胞である。

【００１３】当該分野にて周知であるように「同一性」
は、配列を比較して測定されるような、二つまたはそれ
以上のポリペプチド配列間または二つまたはそれ以上の
ポリヌクレオチド配列間の関係である。当該分野におい
て、「同一性」とはまた、時には、かかる配列の２つの
鎖の間の合致により決定されるような２つのポリペプチ
ドまたはポリヌクレオチド配列間の関連性の程度をも意
味する。「同一性」および「類似性」はともに既知方法
により容易に算出できる（Computational Molecular Bi
ology，Lesk,A.M.編、オックスフォード・ユニバーシテ
ィー・プレス、ニューヨーク、1988年；Biocomputing：
Informatics and Genome Projects，Smith,D.W.編、ア
カデミック・プレス、ニューヨーク、1993年；Computer
Analysisof Sequence Data，パートＩ，Griffin,A.M.
およびGriffin,H.G.編、ヒューマナ・プレス、ニュージ
ャージー、1994年；Sequence Analysis in Molecular B
iology，von Heinje,G.、アカデミック・プレス、1987
年；およびSequence Analysis Primer，Gribskov,M.お
よびDevereux,J.編、Ｍストックトン・プレス、ニュー
ヨーク、1991年;およびCarillo,H.,およびLipman,D.,SI
AM J., Applied Math., 48:1073(1988)があるがこれら
に限らない）。同一性を決定するための好ましい方法
は、試験する２つの配列間で最も良く適合するように設
計される。同一性および類似性を測定する方法は、公に
利用できるコンピュータープログラムに集成されてい
る。二つの配列間の同一性および類似性を測定する好ま
しいコンピュータープログラム法は、ＧＣＧプログラム
パッケージ（Devereux,J.ら、NucleicAcids Research 1
2(1):387（1984）、BLASTP、BLASTNおよびFASTA（Atsch
ul,S.F.ら、J.Molec.Biol.215：403（1990）））を包含
するが、これらに限定されるものではない。一例とし
て、配列番号：１の対照ヌクレオチド配列に対して、例
えば少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配
列を有するポリヌクレオチドを挙げると、そのポリヌク
レオチド配列が配列番号：１の対照ヌクレオチド酸配列
のヌクレオチド１００個ごとに５個までのヌクレオチド
の変化を含みうることを除き、そのポリヌクレオチドの
ヌクレオチド配列は対照配列と同一である。言い換える
と、対照酸配列に対して少なくとも９５％同一であるヌ
クレオチド配列を有するポリペプチドを得るためには、
対照配列中の５％までのヌクレオチドが欠失または別の
ヌクレオチドと置換されていてもよく、あるいは対照配
列中の全ヌクレオチドのうち５％までの数のヌクレオチ
ドが対照配列に挿入されたものであってもよい。対照配
列のこれらの変異は、対照ヌクレオチド配列の５’また
は３’末端位置に存在していてもよく、あるいはそれら
の末端位置の間のいずれかの位置に存在していてもく、
対照配列のヌクレオチドに散在していてもよく、あるい
は対照配列内の１個またはそれ以上の一連の群となって
いてもよい。同様に、配列番号：２の対照アミノ酸配列
に対して少なくとも例えば９５％の同一性を有するアミ
ノ酸配列を有するポリペプチドを例に挙げると、そのポ
リペプチド配列が配列番号：２の対照アミノ酸配列のア
ミノ酸１００個ごとに５個までのアミノ酸の変化を含み
うることを除き、そのポリペプチドのアミノ酸配列は対
照配列と同一である。言い換えると、対照アミノ酸配列
に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有
するポリペプチドを得るためには、対照配列中のアミノ
酸の５％までが欠失または他のアミノ酸と置換していて
もよく、あるいは対照配列中の全アミノ酸のうち５％ま
での数のアミノ酸が対照配列中に挿入されたものであっ
てもよい。対照配列におけるこれらの変化は、対照アミ
ノ酸配列のアミノまたはカルボキシ末端位置に存在して
もよく、あるいはそれらの末端間のいずれかの位置に存
在してもよく、対照配列中に散在していてもよく、ある
いは対照配列内で１個またはそれ以上の一連の群をなし
ていてもよい。

【００１４】「単離」とは、「人の手によって」天然の
状態から変化させられた、すなわち、天然物の場合、そ
の本来の環境から変化または除去あるいはその両方が行
われたことを意味する。例えば、天然において生体に存
在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、「単
離」されていないが、その天然状態で共存する物質から
分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプチド
は、本明細書に用いる用語としての「単離」がなされて
いる。

【００１５】「ポリヌクレオチド（複数でも可）」は、
一般に、修飾されていないＲＮＡもしくはＤＮＡ、また
は修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであってよい、ポリ
リボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチド
をも意味する。従って、「ポリヌクレオチド」は、とり
わけ一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖および二本鎖領
域の混合物または一本鎖、二本鎖および三本鎖領域の混
合物であるＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、ならび
に一本鎖および二本鎖領域の混合物であるＲＮＡ、一本
鎖もしくはより典型的には二本鎖もしくは三本鎖、また
は一本鎖および二本鎖領域の混合物であってもよいＤＮ
ＡおよびＲＮＡを含むハイブリッド分子を包含するがこ
れらに限らない。加えて、本明細書で用いる「ポリヌク
レオチド」は、ＲＮＡもしくはＤＮＡまたはＲＮＡとＤ
ＮＡの両方を含む三本鎖領域を意味する。かかる領域に
おける鎖は同一の分子または異なる分子由来のものでよ
い。この領域はこれらの分子の一つまたはそれ以上の全
てを含んでいてもよいが、より典型的にはいくつかの分
子の一領域のみを含む。三重らせん領域の分子の一つ
は、オリゴヌクレオチドであることがしばしばである。
本明細書で用いる場合、「ポリヌクレオチド」なる用語
は、一つまたはそれ以上の修飾した塩基を含有する、前
記したＤＮＡまたはＲＮＡを包含する。このように、安
定性または他の理由で修飾された骨格を有するＤＮＡま
たはＲＮＡも、本明細書が意図するろところの「ポリヌ
クレオチド」である。さらに、イノシン等の普通でない
塩基、またはトリチル化塩基等の修飾塩基を含むＤＮＡ
またはＲＮＡ（二つの例だけを示す）も、本明細書での
用語ポリペプチドである。当業者に既知の多くの有用な
目的を提供するＤＮＡおよびＲＮＡに、非常に多くの修
飾がなされていることは、明らかであろう。「ポリヌク
レオチド」なる用語は、本明細書で用いる場合、ポリヌ
クレオチドのこのような化学的、酵素的または代謝的に
修飾した形態、ならびにウイルス、とりわけ単純型細胞
および複雑型細胞を含む、細胞に特徴的なＤＮＡおよび
ＲＮＡの化学的形態を包含する。「ポリヌクレオチド」
は、しばしば、オリゴヌクレオチド（複数でも可）と称
される短鎖ポリヌクレオチドを包含する。

【００１６】本明細書で用いる「ポリペプチド」は、ペ
プチド結合により直鎖で互いに結合している２個または
それ以上のアミノ酸を含むペプチドまたは蛋白をいうの
に用いる。「ポリペプチド」は、当該分野で通常例えば
ペプチド、オリゴペプチドおよびオリゴマーとも称され
る短鎖、および多くの型があり、当該分野で一般的に蛋
白と称する長鎖の両方を意味する。ポリペプチドは、遺
伝子によりコードされる２０種のアミノ酸以外のアミノ
酸を含んでいてもよい。「ポリペプチド」は、プロセッ
シングおよび他の翻訳後修飾のような自然の工程によ
り、ならびに化学修飾によるものを包含する。かかる修
飾は基礎的なテキストおよびさらに詳細な論文ならびに
多数の研究文献にも詳しく記載されており、これらは当
業者に周知である。同じタイプの修飾がポリペプチド中
にいくつかの部位に同程度または種々の程度で存在して
もよいことが理解されるであろう。修飾は、ペプチド骨
格、アミノ酸側鎖、およびアミノもしくはカルボキシ末
端を包含するポリペプチドのいずれの場所にあってもよ
い。修飾としては、例えば、アセチル化、アシル化、Ａ
ＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘ
ム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘
導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホ
スホチジルイノシトールの共有結合、架橋結合、環化、
ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合架橋形
成、シスチン形成、ピログルタミン酸塩形成、ホルミル
化、ガンマー−カルボキシル化、糖鎖形成、ＧＰＩアン
カー形成、ヒドロキシル化、ヨード化、メチル化、ミリ
ストイル化、酸化、蛋白加水分解プロセッシング、リン
酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、
アルギニル化などの転移ＲＮＡ媒介の蛋白へのアミノ酸
付加、およびユビキチネーションがある。例えば、Prot
eins-Structure and Molecular Properties、第2版、T.
E.Creighton、W.H.Freeman and Company、ニューヨーク
（1993）に記載されている。例えば、Posttranslationa
l Covalent Modification of Proteins、B.C.Johnson
編、アカデミック・プレス、ニューヨーク（1983）のWo
ld,F., Posttranslational Protein Modifications：Pe
rspective and Prospects、1〜12頁；Seifterら、Meth.
Enzymol. 182:626-646（1990）およびRattanら、Protei
n Synthesis：Posttranslational Modifications and A
ging，Ann. N. Y. Acad. Sci. 663:48-62（1992）参
照。ポリペプチドは分枝状あるいは分枝ありまたはなし
の環状であってもよい。環状、分枝状、および分枝状か
つ環状のポリペプチドは、翻訳後の天然プロセスから生
じるものであってもよく、同様に全く合成的な方法によ
り製造されるものであってもよい。

【００１７】本明細書で用いる「変種」なる用語は、対
照ポリヌクレオチドまたはポリペプチドとは各々異なる
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドであるが、本質的
な特性は保持している。典型的なポリヌクレオチドの変
種は、別の対照ポリヌクレオチドとはヌクレオチド配列
が異なる。変種のヌクレオチド配列の変化は、対照ポリ
ヌクレオチドによりコードされるポリペプチドのアミノ
酸配列を変化させるものであってもよく、変化させない
ものであってもよい。以下に論じるように、ヌクレオチ
ドの変化は結果的に、対照配列によりコードされるポリ
ペプチドにおけるアミノ酸置換、付加、欠失、融合およ
び末端切断を招く。典型的なポリペプチドの変種は、別
の対照ポリペプチドとはアミノ酸配列が異なる。一般的
には、差異は、対照ポリペプチドおよび変種の配列が、
全体的に非常に類似しており、多くの領域で同一なもの
に限られる。変種および対照ポリペプチドは、１または
それ以上の置換、付加、欠失が任意の組み合わせで起こ
ることにより、アミノ酸配列が変化し得る。置換または
挿入されたアミノ酸残基は、遺伝学的コードによりコー
ドされたものであってもなくてもよい。ポリヌクレオチ
ドまたはポリペプチドの変種は、例えば対立遺伝子変種
のような自然発生的なものでもよく、または自然発生す
ることが知られていない変種でもよい。ポリヌクレオチ
ドおよびポリペプチドの非自然発生変種は、突然変異技
術または直接的合成、および当業者に知られた他の組み
換え法により製造できる。

【００１８】本発明は、とりわけ、以下に非常に詳細に
説明する、新規オルニチンカルバモイルトランスフェラ
ーゼポリペプチドおよびポリヌクレオチドに関する。詳
細には、本発明は、ラクトバチルス・プランタルムのａ
ｒｇＦポリペプチドに対するアミノ酸配列相同性により
関連付けられる、ストレプトコッカス・ニューモニアエ
の新規オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼのポ
リペプチドおよびポリヌクレオチドに関する。特に本発
明は、それぞれ表１（配列番号：１）および表１（配列
番号：２）に示すヌクレオチド配列およびアミノ酸配列
を有するオルニチンカルバモイルトランスフェラーゼに
関し、さらに寄託株中のＤＮＡのオルニチンカルバモイ
ルトランスフェラーゼヌクレオチド配列およびそれによ
りコードされるアミノ酸配列に関する。

【００１９】表１オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼのポリヌクレオチドおよびポリペプチド配列 (A) ストレプトコッカス・ニューモニアエのオルニチンカルバモイルトランスフェラーゼポリヌクレオチド配列由来の配列 [配列番号：1]. 5'-1 ATGACAAATT CAGTATTCCA AGGACGCAGC TTCTTAGCAG AAAAAGACTT 51 TACCCGTGCA GAGTTAGAAT ACCTTATTGG TCTTTCAGCT CACTTGAAAG 101 ATTTGAAAAA ACGCAATATT CAACACCACT ACCTTGCTGG CAAGAATATC 151 GCTCTCCTAT TTGAAAAAAC ATCTACTCGT ACTCGTGCAG CCTTTACAAC 201 TGCGGCTATC GACCTTGGTG CTCACCCAGA ATACCTCGGA GCAAATGATA 251 TTCAGTTGGG TAAAAAAGAA TCTACTGAAG ATACTGCTAA AGTATTGGGA 301 CGTATGTTTG ACGGGATTGA ATTCCGCGGA TTCAGCCAAC GTATGGTTGA 351 AGAATTGGCA GAATTCTCAG GCGTTCCAGT ATGGAACGGT CTAACTGACG 401 AATGGCACCC AACTCAAATG CTCGCTGACT ACTTGACTGT TCAAGAAAAC 451 TTCGGTCGCT TGGAAGGCTT GACATTGGTA TACTGTGGTG ATGGACGTAA 501 CAACGTTGCC AACAGCTTGC TCGTAACAGG TGCTATCCTT GGTGTCAATG 551 TTCACATCTT CTCACCAAAA GAACTCTTCC CAGAAAAAGA AATCGTTGAA 601 TTGGCAGAAG GATTTGCTAA AGAAAGTGGC GCACATGTTC TCATCACTGA 651 AGATGCTGAT GAAGCAGTTA AAGATGCAGA CGTTCTTTAC ACAGACGTTT 701 GGGTATCAAT GGGTGAAGAA GACAAATTCG CAGAACGTGT AGCTCTTCTT 751 AAACCTTACC AAGTCAATAT GGACTTAGTT AAAAAAGCAG GCAATGAAAA 801 CTTGATCTTC CTACACTGCT TGCCAGCATT CCACGATACT CACACTGTTT 851 ATGGTAAAGA CGTTGCTGAA AAATTTGGTG TAGAAGAAAT GGAAGTAACA 901 GACGAAGTCT TCCGCAGCAA GTACGCTCGC CACTTCGATC AAGCAGAAAA 951 CCGTATGCAC ACTATCAAAG CTGTTATGGC TGCTACACTT GGTAACCTTT 1001 ATATTCCTAA AGTATAA -3'

【００２０】 (B) この表中のポリヌクレオチド配列から推定されるオルニチンカルバモイルトランスフェラーゼポリペプチド配列 [配列番号：2]. NH₂-1 MTNSVFQGRS FLAEKDFTRA ELEYLIGLSA HLKDLKKRNI QHHYLAGKNI 51 ALLFEKTSTR TRAAFTTAAI DLGAHPEYLG ANDIQLGKKE STEDTAKVLG 101 RMFDGIEFRG FSQRMVEELA EFSGVPVWNG LTDEWHPTQM LADYLTVQEN 151 FGRLEGLTLV YCGDGRNNVA NSLLVTGAIL GVNVHIFSPK ELFPEKEIVE 201 LAEGFAKESG AHVLITEDAD EAVKDADVLY TDVWVSMGEE DKFAERVALL 251 KPYQVNMDLV KKAGNENLIF LHCLPAFHDT HTVYGKDVAE KFGVEEMEVT 301 DEVFRSKYAR HFDQAENRMH TIKAVMAATL GNLYIPKV -COOH

【００２１】 (C) ポリヌクレオチド配列の具体例 [配列番号：1]. X-(R1)n-1 ATGACAAATT CAGTATTCCA AGGACGCAGC TTCTTAGCAG AAAAAGACTT 51 TACCCGTGCA GAGTTAGAAT ACCTTATTGG TCTTTCAGCT CACTTGAAAG 101 ATTTGAAAAA ACGCAATATT CAACACCACT ACCTTGCTGG CAAGAATATC 151 GCTCTCCTAT TTGAAAAAAC ATCTACTCGT ACTCGTGCAG CCTTTACAAC 201 TGCGGCTATC GACCTTGGTG CTCACCCAGA ATACCTCGGA GCAAATGATA 251 TTCAGTTGGG TAAAAAAGAA TCTACTGAAG ATACTGCTAA AGTATTGGGA 301 CGTATGTTTG ACGGGATTGA ATTCCGCGGA TTCAGCCAAC GTATGGTTGA 351 AGAATTGGCA GAATTCTCAG GCGTTCCAGT ATGGAACGGT CTAACTGACG 401 AATGGCACCC AACTCAAATG CTCGCTGACT ACTTGACTGT TCAAGAAAAC 451 TTCGGTCGCT TGGAAGGCTT GACATTGGTA TACTGTGGTG ATGGACGTAA 501 CAACGTTGCC AACAGCTTGC TCGTAACAGG TGCTATCCTT GGTGTCAATG 551 TTCACATCTT CTCACCAAAA GAACTCTTCC CAGAAAAAGA AATCGTTGAA 601 TTGGCAGAAG GATTTGCTAA AGAAAGTGGC GCACATGTTC TCATCACTGA 651 AGATGCTGAT GAAGCAGTTA AAGATGCAGA CGTTCTTTAC ACAGACGTTT 701 GGGTATCAAT GGGTGAAGAA GACAAATTCG CAGAACGTGT AGCTCTTCTT 751 AAACCTTACC AAGTCAATAT GGACTTAGTT AAAAAAGCAG GCAATGAAAA 801 CTTGATCTTC CTACACTGCT TGCCAGCATT CCACGATACT CACACTGTTT 851 ATGGTAAAGA CGTTGCTGAA AAATTTGGTG TAGAAGAAAT GGAAGTAACA 901 GACGAAGTCT TCCGCAGCAA GTACGCTCGC CACTTCGATC AAGCAGAAAA 951 CCGTATGCAC ACTATCAAAG CTGTTATGGC TGCTACACTT GGTAACCTTT 1001 ATATTCCTAA AGTA -(R2)n-Y

【００２２】 (D) ポリペプチド配列の具体例 [配列番号：2]. X-(R1)n-1 MTNSVFQGRS FLAEKDFTRA ELEYLIGLSA HLKDLKKRNI QHHYLAGKNI 51 ALLFEKTSTR TRAAFTTAAI DLGAHPEYLG ANDIQLGKKE STEDTAKVLG 101 RMFDGIEFRG FSQRMVEELA EFSGVPVWNG LTDEWHPTQM LADYLTVQEN 151 FGRLEGLTLV YCGDGRNNVA NSLLVTGAIL GVNVHIFSPK ELFPEKEIVE 201 LAEGFAKESG AHVLITEDAD EAVKDADVLY TDVWVSMGEE DKFAERVALL 251 KPYQVNMDLV KKAGNENLIF LHCLPAFHDT HTVYGKDVAE KFGVEEMEVT 301 DEVFRSKYAR HFDQAENRMH TIKAVMAATL GNLYIPKV -(R2)n-Y

【００２３】（Ｅ）ストレプトコッカス・ニューモニアエのオルニチンカルバモイルトランスフェラーゼのポリヌクレオチドＯＲＦ配列由来の配列（配列番号：３） 5'-ATGACAAATTCAGTATTCCAAGGACGCAGCTTCTTAGCAGAAAAAGACTTTACCCGTGCAGAGTTAGAA TACCTTATTGG TCTTTCAGCTCACTTGAAAGATTTGAAAAAACGCAATATTCAACACCACTACCTTGCTGGCAAGAATATCGC TCTCCTAT TTGAAAAAACATCTACTCGTACTCGTGCAGCCTTTACAACTGCGGCTATCGACCTTGGTGCTCACCCAGAAT ACCTCGGA GCAAATGATATTCAGTTGGGTAAAAAAGAATCTACTGAAGATACTGCTAAAGTATTGGGACGTATGTTTGAC GGGATTGA ATTCCGCGGATTCAGCCAACGTTATGGTTGA-3'

【００２４】（Ｆ）この表中のポリヌクレオチドＯＲＦ配列から推定されるオルニチンカルバモイルトランスフェラーゼのポリペプチド配列（配列番号：４） NH₂MTNSVFQGRSFLAEKDFTRAELEYLIGLSAHLKDLKKRNIQHHYLAGKNIALLFEKTSTRTRAAFTTAA IDLGAHPEYLGANDIQLGKKESTEDTAKVLGRMFDGIEFRGFSQRYG -COOH

【００２５】寄託物質ストレプトコッカス・ニューモニアエ 0100993株を含有
する寄託物は、ナショナル・コレクション・オブ・イン
ダストリアル・アンド・マリン・バクテリア・リミテッ
ド（ＮＣＩＭＢという）、２３ストリート、マッカード
ライブ、アベルディーンＡＢ２１ＲＹ、スコットランド
に１９９６年４月１１日寄託し、ＮＣＩＭＢ受託番号４
０７９４が付与された。寄託したことにより、寄託株を
ストレプトコッカス・ニューモニアエ 0100993株とい
う。１９９６年４月１７日に、イー・コリ（E. coli）
中のストレプトコッカス・ニューモニアエ0100993ＤＮ
ＡライブラリーをＮＣＩＭＢに同様に寄託し、受託番号
４０８００を付与された。ストレプトコッカス・ニュー
モニアエ株寄託物を、本明細書では「寄託株」または
「寄託株のＤＮＡ」という。寄託株は全長のオルニチン
カルバモイルトランスフェラーゼ遺伝子を含んでいる。
寄託株中に含まれるポリヌクレオチド配列ならびにそれ
によりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列は、本
明細書の配列に関する任意の記載に矛盾する事象におい
て支配的である。寄託株の寄託は、特許手続き上の微生
物寄託の国際承認に関するブダペスト条約の条件下でな
されている。特許が発行されると何らの制限または条件
もなく、最終的に株は分譲される。寄託は当業者の便宜
のためにのみ提供され、３５Ｕ.Ｓ.Ｃ.１１２条のもと
に要求されるような、寄託が実施可能要件であることを
承認するものではない。寄託物を製造、使用または販売
するためにはライセンスが必要であるが、そのようなラ
イセンスはここでは賦与されていない。

【００２６】ポリペプチド本発明ポリペプチドは表１［配列番号：２］のポリペプ
チド（詳細には、成熟ポリペプチド）ならびにポリペプ
チドおよびフラグメント、詳細にはオルニチンカルバモ
イルトランスフェラーゼの生物学的活性を有するものを
包含し、さらに表１［配列番号：２および４］のポリペ
プチドまたはその重要部分に対して少なくとも７０％、
好ましくは表１［配列番号：２および４］のポリペプチ
ドに対して少なくとも８０％の同一性を有するポリペプ
チドおよびフラグメント、より好ましくは表１［配列番
号：２および４］のポリペプチドに対して少なくとも９
０％の類似性を有し（より好ましくは、少なくとも９０
％の同一性を有し）、さらにより好ましくは表１［配列
番号：２および４］のポリペプチドに対して少なくとも
９５％の類似性を有する（さらにより好ましくは少なく
とも９５％の同一性を有する）ポリペプチドおよびフラ
グメント、さらに通常には少なくとも３０個、より好ま
しくは少なくとも５０個のアミノ酸を含むかかるポリペ
プチドの部分を包含する。

【００２７】また本発明は表１（Ｄ）［配列番号：２］
に示す式のポリペプチドを包含し、式中のアミノ末端に
おいてＸは水素であり、カルボキシル末端においてＹは
水素または金属であり、Ｒ１およびＲ２はアミノ酸残
基、ｎは１ないし１０００の整数である。いずれかのＲ
基（Ｒは１個よりも多い）により示されるアミノ酸残基
の伸長部分はヘテロポリマーであってもホモポリマーで
あってもよく、好ましくはヘテロポリマーである。

【００２８】フラグメントは、前述のポリペプチドのア
ミノ酸配列のすべてではなく一部に対して全く同一であ
るアミノ酸配列を有する変種ポリペプチドである。オル
ニチンカルバモイルトランスフェラーゼポリペプチドに
ついては、フラグメントは「独立して存在（free stand
ing）」しているか、または一部分もしくは領域を形成
することにより、大型のポリペプチド内に含まれていて
もよく、最も好ましくは単一の連続した領域、すなわち
大型の単一ポリペプチドとして含まれる。好ましいフラ
グメントは、表１［配列番号：２および４］のアミノ酸
配列の一部分を有する末端切断されたポリペプチド、ま
たはそれらの変種を包含するが、その例としてはアミノ
末端を含む一連の残基を切断、またはカルボキシル末端
を含む一連の残基を切断したものがある。宿主、とりわ
けストレプトコッカス・ニューモニアエにおける、本発
明のポリペプチドの分解形態もまた好ましい。また、構
造的または機能的属性により特徴づけられたフラグメン
ト、例えばアルファーヘリックスおよびアルファーヘリ
ックス形成領域、ベータシートおよびベータシート形成
領域、ターンおよびターン形成領域、コイルおよびコイ
ル形成領域、親水性領域、疎水性領域、アルファー両親
媒性領域、ベータ両親媒性領域、可変領域、表面形成領
域、基質結合領域、および高抗原性指標領域を含むフラ
グメントなども好ましい。オルニチンカルバモイルトラ
ンスフェラーゼ活性を媒介し、あるいは活性を改善し、
望ましくない活性を減じられたフラグメントである生物
学的に活性のあるフラグメントも好ましい。動物、とり
わけヒトにおいて抗原的または免疫原的なフラグメント
もまた含まれる。個体、特にヒトにおけるストレプトコ
ッカス・ニューモニアエの生存に必須の機能、あるい
は疾病を開始または維持する能力を付与する酵素の受容
体またはドメインを含むフラグメントが特に好ましい。
本発明ポリペプチドのフラグメントである変種を、ペプ
チド合成による対応全長ポリペプチドの製造に使用して
もよく、それゆえ、これらの変種を全長のポリペプチド
製造のための中間体として用いてもよい。本発明ポリヌ
クレオチドのフラグメントである変種を用いて本発明の
全長のポリヌクレオチドを合成してもよい。

【００２９】ポリヌクレオチド本発明の別の態様は単離ポリヌクレオチドに関するもの
であり、それには表１［配列番号：２および４］の推定
アミノ酸配列を有するオルニチンカルバモイルトランス
フェラーゼポリペプチドをコードする全長遺伝子および
それに密接に関連するポリヌクレオチドおよびそれらの
変種が包含される。本明細書に提供される情報を用い
て、例えば表１［配列番号：１および３］に示すポリヌ
クレオチド配列を用い、出発物質ストレプトコッカス・
ニューモニアエ 0100993細胞からの染色体ＤＮＡフラグ
メントをクローニングおよび配列決定するために用いる
ような標準的なクローニングおよびスクリーニングを用
いて、オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼポリ
ペプチドをコードしている本発明ポリヌクレオチドを得
て、次いで、全長のクローンを得てもよい。例えば、本
発明ポリヌクレオチド配列、例えば表１［配列番号：１
および３］に示す配列を得るために、イー・コリ（E.co
li）またはいくつかの他の適切な宿主におけるストレプ
トコッカス・ニューモニアエ 0100993の染色体ＤＮＡの
クローンの典型的なライブラリーを、部分的配列に由来
する、好ましくは１７量体またはそれ以上の長さの放射
性標識化オリゴヌクレオチドにてプローブする。プロー
ブのＤＮＡに同一であるＤＮＡを担持するクローンは厳
密な条件を用いて区別できる。元の配列から設計した配
列決定プライマーを用いてこのように同定した個々のク
ローンを配列決定することにより、両方向で配列が伸長
できるようになり、全遺伝子配列を決定できる。このよ
うな配列決定は便宜的にプラスミドクローンから調製し
た変性二本鎖ＤＮＡを用いて実施する。適切な技法につ
いては、Maniatis,T.、Fitsch,F.F.およびSambrookら、
Molecular Cloning，A Laboratory Manual、第２版；コ
ールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレ
ス、コールド・スプリング・ハーバー、ニューヨーク
（1989）に記載されている（Screening ByHybridizatio
n 1.90およびSequencing Denatured Double-Stranded D
NA Templates 13.70参照）。本発明の典型例において、
表１［配列番号：１］に示すポリヌクレオチドが、スト
レプトコッカス・ニューモニアエ 0100993由来のＤＮＡ
ライブラリー中に見いだされた。

【００３０】表１［配列番号：１］に示すＤＮＡ配列
は、表１［配列番号：２］に示すアミノ酸残基数とほぼ
同数のアミノ酸からなる蛋白をコードしている読み枠を
含んでおり、蛋白の推定分子量は、当該分野でよく知ら
れたアミノ酸の分子量を用いて算出できる。ヌクレオチ
ド番号１から１０１４の間の配列番号：１のポリヌクレ
オチドは配列番号：２のポリペプチドをコードする。停
止コドンは配列番号：１のヌクレオチド番号１０１５か
ら開始する。本発明オルニチンカルバモイルトランスフ
ェラーゼ蛋白は、寄託株のオルニチンカルバモイルトラ
ンスフェラーゼをコードしているＤＮＡの配列決定結果
により示されるように、ａｒｇＦ／ａｒｃＢ（オルニチ
ンカルバモイルトランスフェラーゼ）ファミリーの他の
蛋白に構造的に関連している。本発明蛋白は、知られた
蛋白の中でもラクトバチルス・プランタルムのａｒｇＦ
蛋白（GenBank受託番号X99978）に対して最大の相同性
を示す。表１［配列番号：２］のオルニチンカルバモイ
ルトランスフェラーゼ蛋白は、ラクトバチルス・プラン
タルムのａｒｇＦポリペプチドのアミノ酸配列に対し
て、その全長にわたり約６１％の同一性、そしてその全
長にわたり約７６％の類似性を示す。

【００３１】本発明は、表１［配列番号：１］のコーデ
ィング配列に対して全長にわたり同一であるポリヌクレ
オチド配列を提供する。成熟ポリペプチドのコーディン
グ配列またはそれらのフラグメント、ならびにその他の
コーディング配列を有する読み枠中の成熟ポリペプチド
のコーディング配列またはそのフラグメント、例えばリ
ーダーまたは分泌配列、プレ、プロ、プレプロ蛋白配列
をコードする配列も本発明により提供される。ポリヌク
レオチドは、例えば、転写された非翻訳配列、終止シグ
ナル、リボソーム結合部位、ｍＲＮＡを安定化する配
列、イントロン、ポリアデニル化シグナル等の転写非翻
訳配列、および付加アミノ酸をコードする付加コーディ
ング配列等の非コーディング５'および３'配列等の非コ
ーディング配列をも含有しうるが、これらに限定するの
ではない。例えば、融合ポリペプチドの精製を促すマー
カー配列をコードすることもできる。本発明のある好ま
しい態様において、マーカー配列は、ｐＱＥベクター
（Qiagen, Inc.）中に提供されるようなヘキサ−ヒスチ
ジンペプチド（Gentzら、Proc. Natl. Acad. Sci., US
A， 86:821-824（1989）に記載される）またはＨＡタグ
（Wilsonら、Cell，37:767（1984））である。本発明の
ポリヌクレオチドはまた、構造遺伝子および遺伝子発現
を調節する天然の配列をも含むが、これらに限定するも
のではない。

【００３２】本発明の好ましい具体例は、オルニチンカ
ルバモイルトランスフェラーゼポリペプチドをコードし
ている、表１の配列番号：１に示すヌクレオチド１から
１０１４または１０１５までを含むポリヌクレオチドで
ある。

【００３３】また本発明は、表１（Ｃ）［配列番号：
１］に示す式のポリヌクレオチドを包含し、式中の５’
末端においてＸは水素であり、３’末端においてＹは水
素または金属であり、Ｒ１およびＲ２は核酸残基、ｎは
１ないし１０００の整数である。いずれかのＲ基（Ｒは
１個よりも多い）により示される核酸残基の伸長部分は
ヘテロポリマーであってもホモポリマーであってもよ
く、好ましくはヘテロポリマーである。

【００３４】上記した本明細書の用語「ポリペプチドを
コードしているポリヌクレオチド」は、本発明ポリペプ
チド配列をコードする配列を含むポリヌクレオチドを包
含し、詳細には、細菌のポリペプチド、より詳細には表
１［配列番号：２］に示すアミノ酸配列を有するストレ
プトコッカス・ニューモニアエのオルニチンカルバモイ
ルトランスフェラーゼのポリペプチドをコードする配列
を含むポリヌクレオチドを包含する。該用語は、コーデ
ィング配列および／または非コーディング配列を含んで
いてもよいさらなる領域を伴った、ポリペプチドをコー
ドしている単一の連続領域または不連続領域（例えば、
組み込まれたファージまたは配列の挿入または配列の編
集により分断されたもの）を含むポリヌクレオチドを包
含する。さらに本発明は、表１［配列番号：２］の推定
アミノ酸配列を有するポリペプチドの変種をコードする
上記ポリヌクレオチドの変種にも関する。本発明ポリヌ
クレオチドのフラグメントである変種を用いて本発明の
全長ポリヌクレオチドを合成してもよい。

【００３５】さらに特に好ましい具体例は、表１［配列
番号：２］のオルニチンカルバモイルトランスフェラー
ゼポリペプチドのアミノ酸配列を有するオルニチンカル
バモイルトランスフェラーゼ変種をコードするポリヌク
レオチドであり、その中には、いくつか、少しの、５な
いし１０、１ないし５、１ないし３、２、１または０個
のアミノ酸残基を置換、欠失または付加を任意の組み合
わせで施したアミノ酸配列を有する。中でもとりわけ好
ましいものは、オルニチンカルバモイルトランスフェラ
ーゼの特性および活性を変化させないサイレント置換、
付加および欠失である。

【００３６】本発明のさらに好ましい具体例は、表１
［配列番号：２および４］に示すアミノ酸配列を有する
オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼポリペプチ
ドをコードしているポリヌクレオチドに対して、その全
長にわたり少なくとも７０％の同一性があるポリヌクレ
オチド、およびかかるポリヌクレオチドに対して相補的
なポリヌクレオチドである。あるいはまた、寄託株のオ
ルニチンカルバモイルトランスフェラーゼポリペプチド
をコードしているポリヌクレオチドに対してその全長に
わたり少なくとも８０％同一である領域を含むポリヌク
レオチド、およびそれに対して相補的なポリヌクレオチ
ドが最も非常に好ましい。この点に関して、全長で少な
くとも９０％同一であるポリヌクレオチドがとりわけ好
ましく、中でも少なくとも９５％の同一性を有するもの
が特に好ましく、さらに少なくとも９５％の同一性を有
するものの中でも少なくとも９７％であるのがより好ま
しく、中でも少なくとも９８％および少なくとも９９％
であるのが特に好ましく、さらに少なくとも９９％であ
るのがより好ましい。特に好ましい具体例は、表１［配
列番号：１］のＤＮＡによりコードされる成熟ポリペプ
チドと実質的に同じ生物学的機能または活性を保持する
ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドであ
る。

【００３７】本発明はさらに本明細書上述の配列にハイ
ブリダイズするポリヌクレオチドに関する。この点に関
して、本発明は特に厳密な条件で本明細書上述のポリヌ
クレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドに関
する。本明細書で用いる「厳密な条件」および「厳密な
ハイブリダイゼーション条件」なる用語は、配列間の同
一性が少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％
である場合のみに起こるハイブリダイゼーションを意味
する。厳密なハイブリダイゼーション条件の例として
は、５０％ホルムアミド。５ｘＳＳＣ（１５０ｍＭＮ
ａＣｌ、１５ｍＭクエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭリ
ン酸ナトリウム（ｐＨ７.６）、５ｘデンハーツ溶液、
１０％硫酸デキストラン、および２０μｇ／ｍｌの変性
し、剪断されたサケ精子ＤＮＡを含有する溶液中、４２
℃で一晩インキュベーションし、続いて約６５℃で０.
１ｘＳＳＣ中でフィルターを洗浄するものである。ハイ
ブリダイゼーションおよび洗浄条件は周知であり、Samb
rookら、Molecular Cloning，A Laboratory Manual、第
２版；コールド・スプリング・ハーバー、ニューヨーク
（1989）、とりわけその第１１章に実例が示されてい
る。

【００３８】本発明はまた、厳密なハイブリダイゼーシ
ョン条件で、配列番号：１または配列番号：３に示すポ
リヌクレオチド配列に関する完全遺伝子を含む適当なラ
イブラリーを、配列番号：１に示す上記ポリヌクレオチ
ド配列またはそのフラグメントの配列を有するプローブ
でスクリーニングし、ＤＮＡ配列を単離することにより
得ることのできるポリヌクレオチド配列を本質的に含む
ポリヌクレオチドをも提供する。かかるポリヌクレオチ
ドを得るために有用なフラグメントには、例えば本明細
書の別の箇所において説明するプローブおよびプライマ
ー等がある。

【００３９】本発明のポリヌクレオチドアッセイに関し
てここでさらに論じるが、例えば上述の本発明のポリヌ
クレオチドを、オルニチンカルバモイルトランスフェラ
ーゼをコードするｃＤＮＡ全長およびゲノムクローンを
単離するための、およびオルニチンカルバモイルトラン
スフェラーゼ遺伝子に高度な配列類似性を有するその他
の遺伝子のｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離するた
めの、ＲＮＡ、ｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ用のハイブ
リダイゼーションプローブとして使用することができ
る。このようなプローブは通常少なくとも１５塩基を含
む。好ましくはこのようなプローブは少なくとも３０塩
基を有し、少なくとも５０塩基を有していてもよい。と
りわけ好ましいプローブは少なくとも３０塩基を有し、
５０塩基またはそれ以下である。例えば、オルニチンカ
ルバモイルトランスフェラーゼ遺伝子のコーディング領
域は、配列番号：１に示すＤＮＡ配列を用いてオリゴヌ
クレオチドプローブを合成してスクリーニングすること
により単離できる。次いで、本発明の遺伝子の配列に相
補的な配列を有する標識オリゴヌクレオチドを、ｃＤＮ
Ａ、ゲノムＤＮＡまたはｍＲＮＡのライブラリーのスク
リーニングに用い、プローブがライブラリーのいずれの
メンバーにハイブリダイゼーションするのかを決定す
る。

【００４０】本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプ
チドは、例えば、疾病とりわけヒトの疾病の治療法およ
び診断法の発見のための研究試薬および材料として使用
でき、とりわけポリヌクレオチドアッセイに関連して本
明細書でさらに論じる。配列番号：１および／または２
の配列由来のオリゴヌクレオチドである本発明ポリヌク
レオチドを本明細書記載の方法に使用してもよいが、好
ましくはＰＣＲに使用して、本明細書で同定したポリヌ
クレオチドの全体または一部が感染した組織に転写され
るかどうかを決定する。かかる配列が、病原体が達成し
た感染段階および感染型の診断にも有用であることが理
解される。

【００４１】また本発明は、さらなるアミノもしくはカ
ルボキシル末端アミノ酸、または成熟ポリペプチドに内
在するアミノ酸を加えた成熟蛋白であるポリペプチドを
コードできるポリヌクレオチドも提供する（例えば成熟
形態が一つ以上のポリペプチド鎖を有する場合）。この
ような配列は、前駆体から成熟形態への蛋白のプロセッ
シングに役割を担い、蛋白の輸送を可能にし、蛋白の半
減期を延長もしくは短縮し、またはとりわけアッセイも
しくは製造のための蛋白の操作を容易にすることができ
る。一般的にインビボの場合、付加アミノ酸は、細胞性
酵素によりプロセッシングされ、成熟蛋白から取り除か
れる。１またはそれ以上のプロ配列と融合した成熟形態
のポリペプチドを有する前駆蛋白は、ポリペプチドの不
活性形態でありうる。プロ配列が除去されると、通常に
はこのような不活性前駆体が活性化される。プロ配列の
いくつかまたはすべてを活性化の前に除去できる。通
常、このような前駆体はプロ蛋白と称される。要する
に、本発明のポリヌクレオチドは成熟蛋白、リーダー配
列を加えた成熟蛋白（プレ蛋白と称することができ
る）、プレ蛋白のリーダー配列ではない１またはそれ以
上のプロ配列を有する成熟蛋白の前駆体、またはリーダ
ー配列および１またはそれ以上のプロ配列を有するプロ
蛋白の前駆体であるプレプロ蛋白をコードしていてもよ
く、プロ配列は通常ポリペプチドの活性および成熟形態
を生成するプロセッシング段階で除去される。

【００４２】ベクター、宿主細胞、発現本発明はまた、ポリヌクレオチドまたは本発明のポリヌ
クレオチドを含むベクター、本発明ベクターで遺伝子操
作される宿主細胞および組換え技法による本発明のポリ
ペプチドの製造にも関する。本発明ＤＮＡ構築物に由来
するＲＮＡを用い、無細胞翻訳系を用いてこのような蛋
白を製造できる。組換え体を製造するために、宿主細胞
を遺伝子操作して、発現系もしくはそれらの一部、また
は本発明のポリヌクレオチドを組み込むことができる。
ポリヌクレオチドの宿主細胞への導入は、例えば、Davi
sら、Basic Methods in Molecular Biology（1986）；S
ambrookら、Molecular Cloning；A Laboratory Manua
l、第２版；コールド・スプリング・ハーバー・ラボラ
トリー・プレス、コールド・スプリング・ハーバー、ニ
ューヨーク（1989）のように、多くの標準的な実験マニ
ュアルに記載される方法により行うことができ、例えば
リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デ
キストラン媒介トランスフェクション、トランスベクシ
ョン、マイクロインジェクション、陽イオン脂質媒介ト
ランスフェクション、エレクトロポレーション、トラン
スダクション、スクレープ負荷、バリスティック導入お
よび感染等がある。

【００４３】適当な宿主の代表的なものには、細菌細
胞、例えばストレプトコッカス属（Streptococci）、ス
タフィロコッカス属（Staphylococci）、エンテロコッ
カス属（Enterococci）、イー・コリ（E.coli）、スト
レプトミセス（Streptomyces）およびバチルス・ズブチ
リス（Bacillus subtiis）細胞；真菌細胞、例えば酵母
細胞およびアスペルギルス属（Aspergillus）細胞；昆
虫細胞、例えばドロソフィラＳ２（Drosophila S2）お
よびスポドプテラＳｆ９（Spodoptera Sf9）細胞；動物
細胞、例えばＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ１２７、３
Ｔ３、ＢＨＫ、２９３およびボウズ（Bows）黒色腫細
胞；ならびに植物細胞等がある。

【００４４】本発明のポリペプチドを製造するために非
常に多くの発現系を使用できる。このようなベクターに
は、染色体、エピソームおよびウイルス由来のベクタ
ー、例えば細菌プラスミド由来、バクテリオファージ由
来、トランスポゾン由来、酵母エピソーム由来、挿入エ
レメント由来、酵母染色体エレメント由来、例えばバキ
ュロウイルス、パポバウイルス、例えばＳＶ４０、ワク
シニアウイルス、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性
狂犬病ウイルスおよびレトロウイルス等のウイルス由来
のベクター、ならびにそれらを組み合わせたものに由来
するベクター、例えばプラスミドおよびバクテリオファ
ージの遺伝学的エレメント由来のベクター、例えばコス
ミドおよびファージミド等がある。発現系の構築物は発
現を制御および引き起こす調節領域を含有していてもよ
い。この点に関して、一般的には、宿主中にポリヌクレ
オチドを保持、伸長または発現するのに、および／また
はポリペプチドを発現するのに適した任意の系またはベ
クターを発現に使用できる。周知のおよび通常的な種々
の任意の技術により、適当なＤＮＡ配列を発現系に挿入
してもよく、例えばSambrookら、Molecular Cloning，A
Laboratory Manual（上述）に記載されている。

【００４５】翻訳蛋白を、小胞体内腔、ペリプラスミッ
クスペースまたは細胞外環境へ分泌させるために、適当
な分泌シグナルを発現するポリペプチドに組み込むこと
ができる。これらのシグナルはポリペプチドに本来的な
ものであってもく、あるいは異種性のシグナルでもよ
い。

【００４６】本発明のポリペプチドは周知の方法によ
り、組換え細胞培養物から回収および精製でき、その方
法には、例えば硫酸アンモニウムまたはエタノール沈
殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラ
フィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性
相互作用クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィ
ー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよび
レクチンクロマトグラフィー等がある。高速液体クロマ
トグラフィーを精製に用いるのが最も好ましい。ポリペ
プチドが単離および／または精製中に変性した場合、再
び活性なコンホーメーションにするために、蛋白再生の
ための周知の技法を用いることができる。

【００４７】診断アッセイ本発明はまた診断試薬として使用するための本発明のオ
ルニチンカルバモイルトランスフェラーゼポリヌクレオ
チドの使用にも関する。真核生物とりわけ哺乳動物、特
にヒトにおけるオルニチンカルバモイルトランスフェラ
ーゼの検出は、疾患の診断のための診断法を提供する。
オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ遺伝子を含
む生物に感染した、あるいは感染の可能性のある真核生
物（本明細書において「個体」とも称する）とりわけ哺
乳動物、特にヒトを種々の方法によりＤＮＡレベルで検
出できる。診断用の核酸は、感染した個体の細胞および
組織、例えば骨、血液、筋肉、軟骨および皮膚より得る
ことができる。ゲノムＤＮＡを直接検出に使用してもよ
く、あるいは分析の前にＰＣＲもしくはその他の増幅法
を用いることにより酵素的に増幅できる。ＲＮＡまたは
ｃＤＮＡもまた同じ方法で用いることができる。増幅法
を用いると、真核生物とりわけ哺乳動物、特にヒトに存
在する原核生物株を、原核生物遺伝子の遺伝子型の分析
により特徴づけすることができる。対照配列の遺伝子型
と比較した場合の増幅産物の大きさの変化により、欠失
および挿入を検出できる。点突然変異は、増幅ＤＮＡを
標識化オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼポリ
ヌクレオチド配列にハイブリダイズさせることにより同
定できる。完全に対合した配列はＲＮアーゼ消化によ
り、または融解温度の差により、誤対合二重らせんから
区別できる。変性剤含有または不含ゲル中のＤＮＡフラ
グメントの電気泳動の移動度の変化を検出することによ
り、または直接的なＤＮＡの配列決定により、ＤＮＡ配
列の差を検出してもよい。例えばMeyersら、Science，2
30:1242（1985）参照。また、特異的な位置での配列の
変化を、ヌクレアーゼ保護アッセイ、例えばＲＮアーゼ
およびＳ１保護または化学的切断法によって明らかにし
てもよい。例えばCottonら、Proc. Natl. Acad. Sci.,
USA， 85:4397-4401 （1985）参照。

【００４８】本発明の遺伝子の突然変異または多型性を
担持する細胞を、種々の技術により、ＤＮＡレベルで、
例えばセロタイピングすることにより検出してもよい。
例えば、ＲＴ−ＰＣＲを用いて突然変異を検出すること
ができる。ＲＴ−ＰＣＲは自動検出系、例えばGeneScan
等と組み合わせて用いるのがとりわけ好ましい。ＲＮＡ
またはｃＤＮＡを同じ目的でＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲ
に用いてもよい。例を挙げると、オルニチンカルバモイ
ルトランスフェラーゼをコードする核酸に相補的なＰＣ
Ｒプライマーは、突然変異を同定および分析するのに用
いることができる。典型的なプライマーの例を下表２に
示す。

【００４９】表２オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼポリヌクレ
オチド増幅用プライマー配列番号：プライマー配列 5 5' AAAAACGCAATATTCAACACCACT -3' 6 5' TCCTTCTGCCAATTCAACGAT -3'

【００５０】本発明はまた、５'および／または３'末端
から１、２、３または４個のヌクレオチド除去したプラ
イマーをも提供する。該プライマーを用いて、感染個体
から単離された遺伝子を増幅してもよく、次いで、該遺
伝子をＤＮＡ配列を調べるための種々の技法に供しても
よい。このように、ＤＮＡ配列における突然変異を検出
し、感染の診断および感染性物質のセロタイピングおよ
び／または分類に使用することができる。

【００５１】本発明はまた、疾患、好ましくは細菌感
染、より好ましくはストレプトコッカス・ニューモニア
エによる感染、および最も好ましくは、中耳炎、結膜
炎、肺炎、菌血症、髄膜炎、静脈洞炎、膿胸および心内
膜炎、最も詳細には例えば脳脊髄液の感染のごとき髄膜
炎のような疾病の診断方法を提供し、該方法は、表１
［配列番号：１］の配列を有するポリヌクレオチドのの
発現レベルの上昇を個体由来の試料から検出することを
特徴とする。オルニチンカルバモイルトランスフェラー
ゼポリヌクレオチドの発現の増加または低下は、ポリヌ
クレオチドの定量法として当該分野でよく知られたいず
れかの方法、例えば増幅、ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＮ
アーゼ保護、ノーザンブロッティングおよびその他のハ
イブリダイゼーション法を用いて測定できる。

【００５２】さらに、正常対照組織サンプルと比較し
て、オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ蛋白の
過剰発現を検出するための本発明診断アッセイを用い
て、例えば感染の存在を検出してもよい。宿主由来のサ
ンプル中のオルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ
蛋白のレベルを決定するために用いることができるアッ
セイ技法は、当業者に周知である。かかるアッセイ法に
は、ラジオイムノアッセイ、競争結合アッセイ、ウェス
タンブロット分析およびＥＬＩＳＡアッセイ等がある。

【００５３】抗体本発明のポリペプチドもしくはそれらの変種、またはそ
れらを発現する細胞を免疫源として用いて、かかるポリ
ペプチドに免疫特異的な抗体を得ることができる。本明
細書で用いる「抗体」には、モノクローナルおよびポリ
クローナル抗体、キメラ、一本鎖、サル化抗体およびヒ
ト化抗体、ならびにＦａｂフラグメントが包含され、さ
らに免疫グロブリン発現ライブラリーの産物等のＦａｂ
フラグメントも包含される。本発明のポリペプチドに対
して生じる抗体は、ポリペプチドまたはエピトープが付
いたフラグメント、アナログまたは細胞を、好ましくは
ヒトはでない動物に通常の実験法を用いて投与すること
により得ることができる。連続的細胞系培養により産生
される抗体を提供する、当業者周知の技術を用いて、モ
ノクローナル抗体を調製することができる。例として
は、Kohler， G.およびMilstein, C.，Nature， 256:49
5-497 （1975）； Kozborら、Immunology Today， 4:72
（1983）；Coleら、Monoclonal Antibodies and Cance
r Therapy, Alan R Liss, Inc.、77-96頁（1985）に記
載されるような種々の技法がある。一本鎖抗体の産生の
ために記載された技術（米国特許第４９４６７７８号）
を適用して、本発明ポリペプチドに対する一本鎖抗体を
得ることができる。また、トランスジェニックマウスま
たはその他の生物、例えばその他の哺乳動物を用いてヒ
ト化抗体等の抗体を発現させてもよい。

【００５４】別法として、ファージディスプレイ技法を
用いて、抗−ポリペプチドを有することにつきスクリー
ニングされたヒト・リンパ球のＰＣＲ増幅されたｖ遺伝
子のレパートリーから、抗−オルニチンカルバモイルト
ランスフェラーゼを有することについてスクリーニング
されたヒトから、あるいは無処理のライブラリーから、
ポリペプチドに対する結合活性を有する抗体遺伝子を選
別することもできる（McCafferty, J.ら、Nature 348:5
52-554 （1990）； Marks, J.ら、Biotechnology 10:77
9-783 （1992））。これらの抗体の親和性はチェインシ
ャフリング（chain shuffling）により改善することも
できる（Clackson, T.ら、Nature 352:624-628 （199
1））。

【００５５】二つの抗原結合ドメインが存在する場合、
各ドメインは「二特異性」抗体と称する異なるエピトー
プに対して指向される。

【００５６】上記抗体を用いてポリペプチドを発現する
クローンを単離または同定してもよく、上記抗体を親和
性クロマトグラフィーにより精製することができる。従
って、とりわけオルニチンカルバモイルトランスフェラ
ーゼに対する抗体を、感染、とりわけ細菌感染、特に中
耳炎、結膜炎、肺炎、菌血症、髄膜炎、静脈洞炎、膿胸
および心内膜炎、最も詳細には例えば脳脊髄液の感染の
ごとき髄膜炎のような疾病の治療に用いてもよい。

【００５７】ポリペプチド変種には抗原的、エピトープ
的または免疫学的に等価な変種等があり、本発明の特定
の態様である。本明細書で用いる「抗原的に等価な誘導
体」なる用語は、本発明により蛋白またはポリペプチド
に対して生成した場合、病原および哺乳動物宿主間での
即時的な物理的相互作用を妨害する特定の抗体により特
異的に認識されるポリペプチドまたはその同等物を包含
する。本明細書で用いる「免疫学的に等価な誘導体」な
る用語は、脊椎動物において抗体を産生させるのに適し
た処方を用いた場合、抗体が病原および哺乳動物宿主間
での即時的な物理的相互作用を妨害するように作用する
ペプチドまたはその等価物を包含する。

【００５８】ポリペプチド、例えば抗原的、免疫学的に
等価な誘導体、またはそれらの融合蛋白は、マウスまた
はその他の動物例えばラットもしくはニワトリを免疫す
るための抗原として使用できる。融合蛋白はポリペプチ
ドに安定性を付与できる。抗原は、例えば抱合すること
により、免疫原性キャリヤ蛋白、例えばウシ血清アルブ
ミン（ＢＳＡ）またはキーホール・リンペット・ヘモシ
アニン（keyholelimpet haemocyanin：ＫＬＨ）に結合
することができる。あるいはまた、蛋白もしくはポリペ
プチド、またはそれらに抗原的もしくは免疫学的に等価
なポリペプチドの多重コピーを含む多重抗原ペプチド
は、免疫原性を改良するための十分な抗原性を有してい
るので、キャリヤーを使用しなくてすむ。

【００５９】好ましくは、抗体またはそれらの変種を、
個体における免疫原性を減じるために修飾する。例え
ば、個体がヒトである場合、最も好ましくは、抗体は
「ヒト化」されており；この場合、ハイブリドーマ由来
の抗体の相補性決定領域がヒト・モノクローナル抗体に
移植されており、例えばJones,P.ら、Nature 321:522-5
25（1986）またはTempestら、Biotechnology 9:266-273
（1991）に記載されている。本発明のポリヌクレオチド
を遺伝学的免疫において使用する場合、例えばプラスミ
ドＤＮＡの筋肉への直接注射（Wolffら、Hum.Mol.Gene
t.1:363（1992）；Manthorpeら、Hum.Gene Ther.4:419
（1963））、特異的蛋白キャリヤーとＤＮＡとの複合体
の送達（Wuら、J.Biol.Chem.264:16985（1989））、リ
ン酸カルシウムとのＤＮＡ共沈（Benvenisty & Reshe
f、PNAS 83:9551（1986））、種々の形態のリポソーム
中へのＤＮＡ封入（Kanedaら、Science 243:375（198
9））、微粒子爆撃（Tangら、Nature 356:152（199
2）；Eisenbraunら、DNA Cell Biol.12:791（1993））
およびクローン化レトロウイルスベクターを用いたイン
ビボ感染（Seegerら、PNAS 81:5849（1984））等の適切
な送達方法を用いるのが好ましい。

【００６０】アンタゴニストおよびアゴニスト−アッセ
イおよび分子本発明ポリペプチドを用いて、例えば、細胞、無細胞標
品、化学ライブラリー、および天然産物混合物中におけ
る小型分子基質およびリガンドの結合を評価してもよ
い。これらの基質およびリガンドは天然基質およびリガ
ンドであってもよく、構造上または機能上の模倣物であ
ってもよい。例えば、Coligan et al.,Current Protoco
ls in Immunology 1(2):Chapter 5 (1991)参照。

【００６１】また本発明は、オルニチンカルバモイルト
ランスフェラーゼポリペプチドまたはポリヌクレオチド
の作用を増強（アゴニスト）または阻害（アンタゴニス
ト）する化合物、詳細には、静菌性および／または殺菌
性化合物を同定するための、化合物のスクリーニング方
法をも提供する。該スクリーニング方法は高処理量の方
法である。例えば、アゴニストまたはアンタゴニストを
スクリーニングするために、合成反応混合物、膜、細胞
エンベロープもしくは細胞壁のごとき細胞コンパートメ
ント、またはオルニチンカルバモイルトランスフェラー
ゼポリペプチドおよび標識基質もしくはかかるポリペプ
チドのリガンドを含むそれらの調合物を、オルニチンカ
ルバモイルトランスフェラーゼゴニストまたはアンタゴ
ニストである可能性のある候補化合物の不存在下または
存在下でインキュベーションする。候補分子がオルニチ
ンカルバモイルトランスフェラーゼポリペプチドにアゴ
ナイズまたはアンタゴナイズする能力は、標識化リガン
ドの結合の低下またはこのような基質からの生成物の産
生の低下に反映される。結合しても影響を及ぼさない分
子、すなわちオルニチンカルバモイルトランスフェラー
ゼの効果を誘導しない分子は、最も良好なアンタゴニス
トである可能性がある。結合性が良好で、基質からの生
成物の生成速度を高める分子はアゴニストである。基質
からの生成物の生成速度またはレベルはリポーターシス
テムを用いることにより強調できる。この点に関して有
用なリポーターシステムには、生成物に転換される比色
測定用標識化基質、オルニチンカルバモイルトランスフ
ェラーゼポリヌクレオチドまたはポリペプチド活性の変
化に応答するリポーター遺伝子、および当該分野で周知
の結合アッセイ等があるが、これらに限定するものでは
ない。

【００６２】オルニチンカルバモイルトランスフェラー
ゼンタゴニストのアッセイのもう１つの例は競争アッセ
イであり、競争阻害アッセイに適した条件下で、オルニ
チンカルバモイルトランスフェラーゼおよび潜在的アン
タゴニストを、オルニチンカルバモイルトランスフェラ
ーゼ結合分子、組換えオルニチンカルバモイルトランス
フェラーゼ結合分子、天然基質もしくはリガンド、また
は基質もしくはリガンド模倣物と混合する。例えば放射
活性または比色測定用化合物によりオルニチンカルバモ
イルトランスフェラーゼを標識し、結合分子に結合し
た、または生成物に変換されたオルニチンカルバモイル
トランスフェラーゼ分子の数を正確に決定して、潜在的
なアンタゴニストの効果を評価できる。

【００６３】潜在的アンタゴニストには、本発明ポリペ
プチドに結合し、そのことによりその活性を阻害し消失
させる小型有機分子、ペプチド、ポリペプチドおよび抗
体などがある。また、潜在的アンタゴニストは、密接に
関連した蛋白または抗体のごとき小型有機分子、ペプチ
ド、ポリペプチドであってもよく、それらは結合分子の
同じ部位に結合するが、オルニチンカルバモイルトラン
スフェラーゼにより誘導される活性を誘導せず、それゆ
えオルニチンカルバモイルトランスフェラーゼを結合か
ら排除することによりオルニチンカルバモイルトランス
フェラーゼの作用を妨害する。潜在的アンタゴニストに
は、ポリペプチドの結合部位に結合し、およびそれを占
領し、それにより細胞性結合分子への結合を妨害して、
正常の生物学的活性を妨害する小型分子等がある。小型
分子の例としては、小型有機分子、ペプチド、ペプチド
様分子等があるが、これらに限定するものではない。そ
の他の潜在的アンタゴニストにはアンチセンス分子等が
ある（これらの分子についての記載に関してはOkano,
J.，Neurochem.56:560（1991）；Oligodeoxy-nucleotid
es as Antisense Inhibitors of Gene Expression，Ｃ
ＲＣプレス、ボッカラートン、フロリダ州（1988）参
照）。好ましい潜在的アンタゴニストには、オルニチン
カルバモイルトランスフェラーゼ関連化合物およびオル
ニチンカルバモイルトランスフェラーゼ変種等がある。

【００６４】本明細書に示す各ＤＮＡ配列を、抗細菌化
合物の発見および開発に使用してもよい。コードされて
いる蛋白は、発現した場合、抗細菌剤のスクリーニング
のための標的として使用されうる。さらに、コードされ
ている蛋白のアミノ末端領域または各ｍＲＮＡのシャイ
ン−ダルガノ配列または他の翻訳容易化配列をコードし
ているＤＮＡ配列を用いてアンチセンス配列を構築し、
目的コーディング配列の発現を制御することもできる。

【００６５】本発明は、感染の続発症に関与する病因お
よび哺乳動物宿主間の最初の物理的相互作用を妨害する
ための本発明ポリペプチド、ポリヌクレオチドまたは阻
害物質の使用を提供する。とりわけ本発明分子を、内在
デバイス上の哺乳動物細胞外マトリックス蛋白または傷
における細胞外マトリックス蛋白への細菌の付着、詳細
にはグラム陽性細菌の付着の防止；例えば、哺乳動物チ
ロシンキナーゼのホスホリレーションを開始することに
よる、オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ蛋白
により媒介される哺乳動物細胞への侵入のブロック（Ro
senshine et al., Infect. Immunol. 60: 2211 (199
2)）；哺乳動物細胞外マトリックス蛋白と細菌オルニチ
ンカルバモイルトランスフェラーゼ蛋白との間の、組織
ダメージを媒介する細菌付着のブロック；内在デバイス
の移植または他の外科的方法以外により開始される、感
染における通常の病状の進行のブロックに使用すること
ができる。

【００６６】本発明アンタゴニストおよびアゴニスト
を、例えば、感染、とりわけ細菌感染、特に中耳炎、結
膜炎、肺炎、菌血症、髄膜炎、静脈洞炎、膿胸および心
内膜炎、最も詳細には例えば脳脊髄液の感染のごとき髄
膜炎のような疾病の抑制および治療に用いてもよい。

【００６７】ヘリコバクター・ピロリ（Ｈelicobacter
pylori）（本明細書中、エッチ・ピロリともいう）菌
は、胃癌、潰瘍、胃炎を発病している世界中の人々の３
分の１以上の胃に感染している（国際癌研究機関（Inte
rnational Agency for Research on Cancer）（1994）S
chistomoses，Liver Flukes and Helicobacter Pylori
（International Agency for Research on Cancer，Lyo
n，France；http：／／www．uicc．ch／ecp／ecp2904．
htm））。さらに、この国際癌研究機関は、最近になっ
て、ヘリコバクター・ピロリと胃腺癌の間の因果関係を
認識し、その細菌をグループＩ（限定的）発癌物質と分
類した。本発明により提供されるスクリーニング法を用
いて見出される本発明の好ましい抗菌化合物（ヒスチジ
ンキナーゼポリペプチドおよび／またはポリヌクレオチ
ドのアゴニストおよびアンタゴニスト）、特に広スペク
トルの抗生物質は、ヘリコバクター・ピロリ感染の治療
に有用である。このような治療はヘリコバクター・ピロ
リ誘発性癌、例えば胃腸癌の出現を減少させる。かかる
治療はまた胃潰瘍および胃炎も治癒する。

【００６８】ワクチン本発明の別の態様は、個体とりわけ哺乳動物における免
疫学的反応を誘導する方法に関し、該方法は、感染、詳
細には細菌感染、最も詳細にはストレプトコッカス・ニ
ューモニアエ感染から個体を防御するための抗体および
／またはＴ細胞免疫応答を生じさせるに十分なオルニチ
ンカルバモイルトランスフェラーゼまたはそのフラグメ
ントもしくは変種を個体に接種することを特徴とする。
かかる免疫学的応答が細菌の複製を遅らせる方法も提供
される。本発明のさらにもう１つの態様は、個体におけ
る免疫学的応答の誘導方法に関し、該方法は、疾病が個
体においてすでに確立されているか否かにかかわらず、
インビボでオルニチンカルバモイルトランスフェラー
ゼ、またはそのフラグメントもしくは変種を発現させる
ためにオルニチンカルバモイルトランスフェラーゼまた
はそのフラグメントもしくは変種の発現を指令する核酸
ベクターをかかる個体に送達して、例えば、抗体および
／またはＴ細胞免疫応答（例えば、サイトカイン産生Ｔ
細胞または細胞毒性Ｔ細胞）を生じさせる免疫学的応答
を誘導して、該個体を疾病から防御する抗体を産生させ
ることを特徴とする。迅速に遺伝子を所望細胞中に投与
する方法としては、粒子上にコーディングすること等が
ある。かかる核酸ベクターはＤＮＡ、ＲＮＡ、修飾核
酸、またはＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドを含んでいても
よい。

【００６９】本発明のさらなる態様は、免疫学的反応を
宿主内に誘導できる、または誘導されたた宿主に導入し
た場合、オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼま
たはそれによりコードされている蛋白に対する免疫学的
反応を該宿主に誘導する免疫学的組成物に関し、その組
成物は組換えオルニチンカルバモイルトランスフェラー
ゼまたはそれによりコードされている蛋白を含み、オル
ニチンカルバモイルトランスフェラーゼまたはそれによ
りコードされている蛋白に対する抗原をコードし発現す
るＤＮＡを含む。免疫学的応答を治療的または予防的に
用いてもよく、また免疫学的応答はＣＴＬまたはＣＤ４
＋Ｔ細胞から生じるような抗体免疫または細胞性免疫の
形態であってもよい。

【００７０】オルニチンカルバモイルトランスフェラー
ゼポリペプチドまたはそれらのフラグメントを、それ自
身は抗体を産生しないが、第１の蛋白を安定化し、免疫
原的および保護特性を有する融合蛋白を産生する能力の
ある共存蛋白（co-protein）と融合させてもよい。好ま
しくは、かかる融合組換え蛋白は、抗原補蛋白、例えば
ヘモフィルス・インフルエンザエ（Hemophilus influen
zae）由来のリポ蛋白Ｄ、グルタチオン−Ｓ−トランス
フェラーゼ（ＧＳＴ）またはベーターガラクトシダーゼ
のごとき共存蛋白、蛋白を可溶化してそれらの産生およ
び精製を促進する比較的大きな共存蛋白等を含む。さら
に、共存蛋白は免疫系において普遍的な刺激を提供する
という意味で、アジュバントとして作用することができ
る。共存蛋白は第１の蛋白のアミノまたはカルボキシい
ずれの末端に結合していてもよい。

【００７１】本発明は、本発明のポリペプチドまたはポ
リヌクレオチドおよびSato Y.ら、Science 273:352 (19
66)に記載されているような免疫刺激ＤＮＡ配列を含む
組成物、とりわけワクチン組成物、および方法を提供す
る。

【００７２】また、本発明は、ストレプトコッカス・ニ
ューモニアエに感染した動物モデルにおいて、かかる遺
伝的免疫化実験に用られるＤＮＡ構築物中の細菌細胞表
面蛋白の不変領域をコードすることが示されている、説
明したポリヌクレオチドまたはとりわけそれらのフラグ
メントを用いる方法を提供し、これらはとりわけ予防的
または治療的免疫反応を刺激することができる蛋白エピ
トープを同定するのに有用である。この研究は、哺乳動
物、とりわけヒトにおける細菌感染とりわけストレプト
コッカス・ニューモニアエ感染の予防薬または治療的処
置の開発のために、感染に抵抗しこれを一掃するのに成
功した動物の必須器官から特に価値あるモノクローナル
抗体をうまく調製することを可能にすると思われる。

【００７３】ポリペプチドを宿主接種用抗原として用い
て、例えば損傷組織への細菌の付着を阻害することによ
り細菌の侵入に対して防御する特異的抗体を得てもよ
い。組織損傷の例としては、例えば機械的、化学的もし
くは熱的ダメージにより、または内在デバイスの埋め込
みにより引き起こされた皮膚または結合組織の創傷、ま
たは粘膜、例えば口、乳腺、尿道または膣の創傷等があ
る。

【００７４】また本発明は、適切な担体と一緒になった
免疫原性組換え蛋白を含有するワクチン処方を包含す
る。蛋白は胃で分解されうるので、非経口的に、例えば
皮下、筋肉内、静脈内または皮膚内等に投与するのが好
ましい。非経口投与に適した処方には、抗酸化剤、緩衝
液、静細菌剤、および処方を個体の体液（好ましくは血
液）と等張にする溶質を含有していてもよい水性または
非水性滅菌注射液、および懸濁化剤または増粘剤を含有
していてもよい水性または非水性滅菌懸濁液等がある。
処方は１回投与または多回投与用容器、例えばシールし
たアンプルおよびバイアルに入れてよく、使用直前に滅
菌液体担体の添加のみを必要とする凍結乾燥状態として
保存してもよい。ワクチン処方は処方の免疫原性を高め
るアジュバント系を含有していてもよく、例えば水中油
系または当該分野で周知のその他の系等がある。投与量
はワクチンの特異的活性に依存し、通常の実験法により
容易に決定できる。

【００７５】本発明を特定のオルニチンカルバモイルト
ランスフェラーゼ蛋白に関して説明したが、本発明は天
然に存在する蛋白および、実質的に組換え蛋白の免疫原
特性に影響しない付加、欠失または置換を施した類似の
蛋白のフラグメントを包含することが理解されよう。

【００７６】組成物、キットおよび投与本発明はまた上述のポリヌクレオチドもしくはポリペプ
チド、またはそれらのアゴニストもしくはアンタゴニス
トを含む組成物にも関する。本発明ポリペプチドを、細
胞、組織もしくは生物に用いられる未滅菌もしくは滅菌
済み担体と混合して、例えば対象への投与に適した医薬
的担体と混合して用いることができる。このような組成
物は、例えば溶媒添加物または治療上有効量の本発明ポ
リペプチド、および医薬的に許容できる担体または賦形
剤を含む。このような担体には生理食塩水、緩衝化生理
食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノー
ルおよびそれらの組み合わせ等があるが、これらに限定
するものではない。処方は投与法に適したものにすべき
である。さらに本発明は、１またはそれ以上の上記本発
明組成物成分を充填した１またはそれ以上の容器を含む
診断用および医薬用パックおよびキットにも関する。

【００７７】本発明ポリペプチドおよびその他の化合物
を、単独で、あるいは治療用化合物等のその他の化合物
と組み合わせて用いてもよい。いずれかの有効かつ利便
的な方法、例えば、とりわけ局所、経口、経膣、静脈
内、腹膜腔内、筋肉内、皮下、鼻腔内、または皮膚内の
経路で医薬組成物を投与してもよい。治療において、ま
たは予防薬として、活性物質を注射用組成物として、例
えば好ましくは等張の滅菌水性分散物として個体に投与
できる。別法として、組成物を局所適用用、例えば軟
膏、クリーム、ローション、眼軟膏、点眼液、点耳液、
洗口剤、含浸包帯および縫合用の糸、ならびにエアロゾ
ール等の形態に処方してもよく、適当な慣用的な添加
物、例えば保存剤、薬物の浸透を補助する溶媒、ならび
に軟膏およびクリームには軟化剤を含有していてもよ
い。かかる局所用処方は、適合した慣用的な担体、例え
ばクリームまたは軟膏基剤、およびローションにはエタ
ノールまたはオレイルアルコールを含有していてもよ
い。このような担体は重量で処方の約１％から約９８％
であってよく、より通常には重量で処方の約８０％まで
とする。哺乳動物とりわけヒトに投与するために、活性
物質の１日あたりの投与量は、０.０１ｍｇ／ｋｇから
１０ｍｇ／ｋｇであり、典型的には約１ｍｇ／ｋｇであ
る。医者はあらゆる場合、個体に最も適した実際の投与
量を決定し、年齢、体重および特に個体の反応性に応じ
て変化させる。上述の投与量は、平均的なケースの典型
例である。もちろん、高用量および低用量の範囲が適合
する個々の例もあり、かかる例は本発明の範囲内であ
る。

【００７８】内在デバイスには外科的インプラント、補
てつデバイスおよびカテーテル等があり、即ち個体の体
に導入し、長時間その位置に存在するものである。この
ようなデバイスには、例えば人工関節、心臓弁、ペース
メーカー、血管移植片、血管カテーテル、脳脊髄液シャ
ント、尿カテーテル、継続的歩行可能腹膜透析（contin
uous ambulatory peritoneal dialysis：ＣＡＰＤ）カ
テーテル等がある。本発明の組成物を注射により投与
し、内在デバイスの挿入の直前に、関連細菌に対する全
身的な効果を得てもよい。手術後、デバイスが体内に存
在する期間中、処置を続けてもよい。さらに、外科的手
技中に広げるカバーに用いて、細菌性創傷感染、とりわ
けストレプトコッカス・ニューモニアエの創傷感染を防
御することもできる。

【００７９】多くの整形外科医は、補てつ関節を有する
ヒトについては、菌血症を生じうる歯科的処置の前に抗
生物質予防法を考慮すべきであると考えている。遅延性
の重篤な感染は、時々補てつ関節を失うに至る深刻な合
併症であり、有意性のある罹病率および死亡率を伴う。
それゆえ、この状況において、予防的な抗生物質に代わ
るものとして、活性物質の使用を拡張することが可能で
ある。

【００８０】上述の治療に加え、一般的には本発明組成
物を創傷の治療薬として使用して、創傷組織において曝
露されたマトリックス蛋白に細菌が付着するのを防いで
もよく、歯科治療においては抗生物質による予防法に代
えて、またはそれと組み合わせて予防的に使用してもよ
い。

【００８１】別法として、本発明の組成物を用いて挿入
直前の内在デバイスを浸してもよい。創傷または内在デ
バイスを浸すためには、活性物質は１μｇ／ｍｌから１
０ｍｇ／ｍｌの濃度であるのが好ましい。ワクチン組成
物を便宜的に注射可能な形態にする。慣用的なアジュバ
ントを用いて免疫反応を高めてもよい。ワクチン化に適
した単位投与量は、抗原０.５〜５μｇ／ｋｇであり、
このような投与量は１〜３週間隔で１〜３回投与するの
が好ましい。本発明化合物については、指示した投与量
範囲では、適切な個体への投与を妨げるような不利な毒
性効果は観察されない。本明細書に開示した各文献を、
参照によりその全体が本明細書に記載されているものと
みなす。本願が優先権を主張しているいずれの特許出願
も、参照によりその全体が本明細書に記載されているも
のとみなす。

【００８２】

【実施例】以下の実施例は、詳細に説明したこと以外
は、当業者に周知で通常的な標準的な技法を用いて実施
する。実施例は説明のためにのみ示すもので、本発明を
限定するものではない。実施例１：菌株の選択、ライブラリーの製造および配列
決定配列番号：１に示すＤＮＡ配列を有するポリヌクレオチ
ドを、イー・コリ（E.coli）中のストレプトコッカス・
ニューモニアエの染色体ＤＮＡのクローンのライブラリ
ーから得た。重複するストレプトコッカス・ニューモニ
アエのＤＮＡを含有する２個またはそれ以上のクローン
からの配列決定データを用いて配列番号：１の隣接ＤＮ
Ａ配列を構築した場合もある。通常の方法、例えば以下
の方法１および２によりライブラリーを製造できる。全
細胞ＤＮＡは、ストレプトコッカス・ニューモニアエ 0
100993から、標準法に準じて単離し、二つの方法のどち
らかによりサイズ分画する。

【００８３】方法１標準法に準じてサイズ分画化するために、全細胞ＤＮＡ
を注射針に通して機械的に剪断する。１１ｋｂｐまでの
大きさのフラグメントを、エクソヌクレアーゼおよびＤ
ＮＡポリメラーゼで処理することにより、平滑末端化
し、ＥｃｏＲＩリンカーを加える。フラグメントを、Ｅ
ｃｏＲＩで切断されているベクターラムダＺａｐＩＩに
連結し、標準法によりライブラリーをパッケージング
し、次いでパッケージングしたライブラリーでE. coli
を感染させる。ライブラリーは標準法により増幅する。

【００８４】方法２全細胞ＤＮＡは、ライブラリーベクター（例えば、Ｒｓ
ａＩ、ＰａｌＩ、ＡｌｕＩ、Ｂｓｈｌ２３５Ｉ）にクロ
ーニングするための一連のフラグメントを適切に生じる
１の制限酵素または制限酵素の組み合わせで部分的加水
分解し、かかるフラグメントを標準法に準じてサイズ分
画化する。ＥｃｏＲＩリンカーをＤＮＡおよびフラグメ
ントに連結し、次いでＥｃｏＲＩで切断されているベク
ターラムダＺａｐＩＩに連結し、標準法によりライブラ
リーをパッケージングし、次いでパッケージングしたラ
イブラリーでE. coliを感染させる。ライブラリーを標
準法により増幅する。

【００８５】実施例２ストレプトコッカス・ニューモニアエ由来の遺伝子の感
染の間における発現の決定マウスのストレプトコッカス・ニューモニアエ０１００
９９３での気道感染４８時間目の切除肺を効果的に破砕
し、カオトロピック剤およびＲＮＡａｓｅ阻害剤の存在
下で処理して動物および細菌のＲＮＡ混合物を得る。安
定な調合物および高収率の細菌ＲＮＡを得るための破砕
および処理の最適条件は、その後のノーザンブロット上
におけるストレプトコッカス・ニューモニアエ１６Ｓ
ＲＮＡに特異的な放射性標識オリゴヌクレオチドとのハ
イブリダイゼーションの使用にも用いる。得られたＲＮ
ＡについてのＲＮＡａｓｅ不含、ＤＮＡａｓｅ不含、Ｄ
ＮＡおよび蛋白不含の調合物は、ストレプトコッカス・
ニューモニアエ０１００９９３の各遺伝子の配列から設
計されたユニークなプライマーペアーを用いる逆転写Ｐ
ＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）に適する。

【００８６】ａ）感染（肺）のマウス動物モデルからの
ストレプトコッカス・ニューモニアエ０１００９９３感
染組織の単離ウマ血液プレートまたはＡＧＣＨ培地のいずれかで、３
７℃、５％ＣＯ₂で一晩ストレプトコッカス・ニューモ
ニアエ０１００９９３を増殖させる。次いで、細菌を集
め、リン酸塩緩衝化セイライン中に再懸濁してＡ₆₀₀を
約０．４とする。イソフルオランでマウスを麻酔し、５
０ｍｌの細菌懸濁液（約２ｘ１０⁵個）をピペットマン
を用いて鼻腔内投与する。マウスを回復させ、エサおよ
び水を自由に取らせる。４８時間後、過剰量の二酸化炭
素によりマウスを安楽死させ、肺を無菌的に切除し、液
体窒素中で素早く凍結する。

【００８７】ｂ）感染組織試料からストレプトコッカス
・ニューモニアエ０１００９９３の単離２ｍｌの凍結保存チューブ中の感染組織試料を−８０℃
の貯蔵庫からドライアイス−エタノール浴中に取り出
す。微生物安全キャビネット中で試料を破砕し、残った
試料をドライアイス−エタノール浴中で保存する。組織
試料中の細菌を破砕するために、５０〜１００ｍｇの組
織をシリカ／セラミックマトリックス（BIO 101）を入
れたFastRNAチューブに移す。すぐに抽出試薬（FastRNA
試薬，BIO 101）１ｍｌを添加して試料対試薬の比を約
１対２０とする。６０００ｒｐｍの往復震盪機（FastPr
ep FR120, BIO 101）で２０〜１２０秒チューブを振盪
する。粗ＲＮＡ調合物をクロロホルム／イソアミルアル
コールで抽出し、ＤＥＰＣ−処理イソプロパン−ル沈殿
溶液（Bio 101）で沈殿させる。必要ならば、−８０℃
においてＲＮＡ調合物をこのイソプロパノール溶液中に
保存する。ＲＮＡをペレット化し（１２０００ｇ、１０
分）、７５％（ＤＥＰＣ−処理水中ｖ／ｖ）エタノール
で洗浄し、５〜１０分風乾し、次いで、ＤＥＰＣ処理水
０．１ｍｌに再懸濁し、その後、５５℃で５〜１０分置
く。最後に、氷上に少なくとも１分置き、２００ユニッ
トのＲｎａｓｉｎ（Promega）を添加する。ＲＮＡ調合
物は−８０℃で１カ月まで保存される。長期保存には、
プロトコールの洗浄段階における７５％エタノール中の
ＲＮＡ沈殿は−２０℃で少なくとも１年保存できる。１
％アガロースゲル上に試料を泳動することにより単離Ｒ
ＮＡの品質を評価する。臭化エチジウム染色した１ｘＴ
ＢＥゲルを用いて収集全ＲＮＡを可視化する。感染組織
からの細菌ＲＮＡの単離を示すために、１ｘＭＯＰＳ、
２．２Ｍホルムアルデヒドゲルで泳動を行い、Hybond-N
（Amersham）に減圧ブロッティングする。次いで、ブロ
ットを、ストレプトコッカス・ニューモニアの１６Ｓ
ｒＲＮＡに特異的な³²Ｐ標識オリゴヌクレオチドプロー
ブ（５’AACTGAGACT GGCTTTAAGA GATTA３’［配列番
号：７］）とハイブリダイゼーションさせる。ハイブリ
ダイゼーションしているバンドのサイズを、インビボ増
殖したストレプトコッカス・ニューモニアエ０１００９
９から単離された対照ＲＮＡのものとノーザンブロット
において比較する。全ＲＮＡ試料中において正しいサイ
ズの細菌１６ＳｒＲＮＡバンドが検出でき、ＴＢＥゲ
ル上で可視化した場合、哺乳動物ＲＮＡの分解が示され
る。

【００８８】ｃ）ストレプトコッカス・ニューモニアエ
由来のＲＮＡからのＤＮＡの除去最終体積５７μｌのバッファー中で２０ユニットのＲＮ
Ａａｓｅ不含ＤＮＡａｓｅＩ（GenHunter）を用いて３
７℃で３０分処理することにより、５０マイクログラム
のＲＮＡ試料からＤＮＡを除去した。製造者のプロトコ
ールに従ってTRIzol LS試薬（Gibco BRL, Life Technol
ogies）によりＤＮＡａｓｅを不活性化し除去した。Ｄ
ＮＡａｓｅ処理したＲＮＡを上記Ｒｎａｓｉｎを添加し
たＤＰＥＣ処理水１００マイクロリットル中に再懸濁し
た。

【００８９】ｄ）感染組織由来のＲＮＡ試料からのｃＤ
ＮＡの調製製造者の指示に従って、ＤＮＡａｓｅ処理したＲＮＡの
試料３マイクログラムを、First Strand cDNA合成キッ
ト用のSuperScript Preamplification System（Gibco B
RL, Life Technologies）を用いて逆転写する。１５０
ナノグラムのランダムヘキサマーを用いて各反応を開始
する。SuperScriptII逆転写酵素を添加しない対照も反
応させる。＋／−ＲＴ双方の試料をＲＮａｓｅＨで処理
し、次いで、ＰＣＲ反応に供する。

【００９０】ｅ）細菌ｃＤＮＡ種の存在を調べるための
ＰＣＲの使用下記成分を添加することにより氷上で０．２ｍｌのチュ
ーブにおいてＰＣＲ反応物をセットアップする：４３マ
イクロリットルのPCR Master Mix（Advanced Biotechno
logies Ltd.）；１マイクロリットルのＰＣＲプライマ
ー（最適には、１８〜２５塩基対の長さで、類似のアニ
ーリング温度を有するように設計されたもの）（各プラ
イマーは初発濃度１０ｍＭ）；および５マイクロリット
ルのｃＤＮＡ。Perkin Elmer GeneAmp PCR System 9600
においてＰＣＲ反応を行った：９４℃で２分、次いでそ
れぞれ９４℃、５０℃そして７２℃で３０秒を５０サイ
クル、その後７２℃で７分、次いで、保持温度２０℃と
する（最適には、ＰＣＲ生成物の出現または欠乏を決定
するためのサイクル数は３０〜５０回、ＲＴ反応からの
初発ｃＤＮＡ量の評価を行う場合には、最適には８〜３
０サイクル）。次いで、１０マイクロリットルの部分試
料を１％ＴＢＥゲルで泳動し、臭化エチジウム染色す
る。ＰＣＲ生成物については、存在するならば、１００
ｂｐのＤＮＡラダー（Gibco BRL, Life Technologies）
との比較によりサイズを評価する。別法として、便利に
は、標識ＰＣＲプライマー（例えば、５’末端を標識し
たもの）を用いてＰＣＲ生成物を標識し、ＰＣＲ生成物
の適当な部分試料をポリアクリルアミドゲルで泳動し、
適当なゲルスキャンニングシステム（例えば、Perkin E
lmerにより提供されるGeneScanTMソフトウェアを用いた
ABI PrismTM 377 Sequencer）を用いてその存在および
量を調べる。ＲＴ／ＰＣＲ対照は＋／−逆転写酵素反応
物、非転写ストレプトコッカス・ニューモニアエ０１０
０９９３ゲノム配列からＰＣＲ生成物を生じるように設
計された１６ＳｒＲＮＡプライマーもしくはＤＮＡ特
異的プライマーペアーを含んでいてもよい。プライマー
ペアーの効率を試験するために、それらをストレプトコ
ッカス・ニューモニアエ０１００９９３全ＤＮＡを用い
るＤＮＡＰＣＲに使用する。ＰＣＲ反応をセットアッ
プし、ｃＤＮＡの代わりに約１マイクログラムのＤＮＡ
を用いて上記のごとく反応を行う。ＤＮＡＰＣＲまた
はＰＴ／ＰＣＲのいずれにおいても予想サイズの生成物
を生じないプライマーペアーはＰＣＲ反応できず、その
ようなものとしては不均一である。ＤＮＡＰＣＲで正
しいサイズの生成物を生じるものは２つのクラスに分類
される：１．インビボで転写されない遺伝子であって、
ＲＴ／ＰＣＲにおいて生成物を生じる再現性がないも
の；および２．インビボで転写される遺伝子であって、
ＲＴ／ＰＣＲにおいて正しいサイズの生成物を再現性を
もって生じ、＋ＲＴ試料において−ＲＴ対照におけるシ
グナル（生じた場合には）よりも強力なシグナルを生じ
るもの。

【００９１】

【配列表】（１）一般的情報：（ｉ）出願人：（Ａ）名称：SmithKline Beecham Corporation （Ｂ）通り名：One Franklin Plaza （Ｃ）都市名：Philadelphia （Ｄ）州名：PA （Ｅ）国名：アメリカ合衆国（Ｆ）郵便番号：１９１０３（ｉｉ）発明の名称：新規オルニチンカルバモイルトラ
ンスフェラーゼ（ｉｉｉ）配列の数：７（ｉｖ）コンピューター・リーダブル・フォーム：（Ａ）媒体タイプ：ディスケット（Ｂ）コンピューター：ＩＢＭコンパチブル（Ｃ）作動システム：Ｗｉｎｄｏｗｓ（Ｄ）Windows用FastSEQバージョン２．０ｂ（ｖ）現出願データ：（Ａ）出願番号：

【００９２】（２）配列番号：１に関する情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：２８００塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：２本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｘｉ）配列の記載：配列番号：１： AAAATCGATT GATTTTCAAG AAAGATCCTT TTTCTCGGAG AAGAAGGTCA ATAGCCTGTC 60 AAGTATGCCA GACGTCGCTA TAGAGAAATA CGTCAAAAAT GGTTGAAAGA GGGAGAGTAA 120 GAAGATGAGA ATATTTGTTT TAGAAGATGA TTTTTCCCAA CAGACTAGAA TTGAAACGAC 180 GATTGAGAAA CTTTTGAAAG CACATCATAT CATTCCTAGC TCTTTTGAGG TATTTGGCAA 240 GCCGGACCAA CTGCTGGCAG AGGTACATGA GAAGGGGGCC CATCAGCTAT TCTTTTTGGA 300 TATTGAGATT CGAAATGAAG AGATGAAGGG ACTGGAAGTA GCTAGAAAGA TTCGGGAACA 360 AGACCCTTAT GCCCTAATCG TCTTTGTGAC GACTCACTCG GAGTTTATGC CTCTGTCCTT 420 TCGCTACCAA GTGTCAGCTT TGGACTACAT TGATAAGGCC CTTTCGGCAG AGGAGTTTGA 480 ATCTCGTATC GAGACAGCCC TCCTCTATGC CAATAGTCAA GATAGTAAAA GTCTGGCGGA 540 AGATTGCTTT TACTTTAAAT CAAAATTTGC CCAATTCCAA TATCCTTTCA AAGAGGTTTA 600 CTATCTCGAA ACATCCCCAA GACCCCATCG TGTTATTCTC TATACCAAGA CGGACAGGCT 660 AGAATTTACG GCGAGTTTAG AGGAGGTTTT TAAGCAGGAA CCCAGTCTCT TGCAGTGCCA 720 TCGCTCTTTT CTCATCAATC CTGCAAATGT GGTGCATTTG GATAAGAAAG AAAAACTCCT 780 TTTCTTTCCC AATGGTGGAA GCTGTCTGAT CGCGCGTTAT AAGGTCAGGG AAGTGTCTGA 840 GGCTATTAAT AACTTACACT GAGCTAGGAG AGTTTATGAA CATTGCTTGG ATATTGTTGT 900 ATGCACTTGT TATTAATGGA CTAAAAATTG TCATTTTCTT TAAAGTAAAT GGAATTGGTC 960 TCACTTTCGA TAGAATTTTT AAGGCCTTTC TTCTGAAATT TCTTCTAGGG ATCATTTTTA 1020 CGACTTTTCA ATTTTTGGCT GTAAGTAAAT ATTTGTCCTA TTTTATAGAA CCTTTGTTCG 1080 GTATAGGTCT ATCTTTCTTA TTGTTAAGAG GGCTTCCTAA AAAAATCCTT ATTTTTTATG 1140 GTCTCTTCCC AATGATATTA GTAGAGCTCT TTTACAGAGG TGTTTCCTAT TTTGTGCTTC 1200 CATTTTTGGG GCAAGGAATT GTAGATGGGG ATGGCAATCC TATCTTTTTA TTGATTATGA 1260 TATTCGTTTG CTTCATAGTT TTAGTCTTTT TGAAATGGTT AGACTATGAT TTCACTAGAT 1320 TGAGAAGGGA GTTTCTAGAT ACAGGTTTTC AAAAGTCTCT TACTAAGATT AACTGGGCAA 1380 TGGGGGCTTA TTATCTAGTG ATGCAAAGTC TATCTTACCT TGAATATGAA CAAGGTATTC 1440 AATCAACGAC TGTTCGCCAT CTCATCCTAG TGTTTTACCT ACTCTTTTTT ATGGGGGGTA 1500 TCAAGAAATT GGATACCTAT TTGAAGGAAA AACTTCAGGA GGAACTGAAC CAAGAGCAGA 1560 CCTTGCGCTA CAGAGATATG GAACGCTATA GTCGGCATAT AGAGGAACTT TACAAGGAAA 1620 TTCGGAGTTT TCGCCATGAC TACACTAACC TCTTAACCAG CTTACGTTTG GGCATTGAAG 1680 AGGAGGATAT GGAGCAGATA AAAGAGATCT ACGACTCGGT CTTAAGGGAT TCCAGTCAGA 1740 AATTGCAGGA CAATAAATAT GACCTGGGCA GATTGGTGAA TATTCGTGAC CGTGCCCTCA 1800 AGAGTCTCCT AGCTGGAAAA TTTATAAAAG CTAGAGAAAA GAACATTGTC TTTAATGTTG 1860 AAGTTCCTGA GGAGATTCAG GTTGAGGGGA TGAGCCTACT TGATTTTCTA ACCATTGTGT 1920 CTATCCTTTG TGACAATGCT ATTGAAGTTA GTGCAGAGGC CAGTCAACCT CATGTTTCAA 1980 TCGCCTTTTT AAAAAATGGA GCACAGGAGA CTTTTATCAT TGAAAACTCC ATCAAAGAAG 2040 AGGGCATCGA TATTTCTGAA ATCTTCTCCT TTGGAGCAAG TTCTAAAGGG GAGGAGAGAG 2100 GAGTTGGTCT CTATACCGTT ATGAAAATTG TGGAAAGTCA TCCCAATACC AATCTAAATA 2160 CTACCTGCCA AAATCAAGTC TTTCGTCAGG TACTTACTGT GATACATGCA GAATGATAAA 2220 AAACAAGACC GAGAGTTCTT GTTTCTCGGT CTTGTTTTTA TAGCTGAATA GGTAGTTCAA 2280 GTGCTTTTGT GATTTTAAAT TTACTTAAAA TTGTTTCATG TAAGAGTTCT TCCCACCATT 2340 CTCCACCTGT AATTTGGTTG AGTTCGGTAG TTGTTAGTTC TTGAAATGAA GTTAGGTTTT 2400 GTTTCTTATC CATGTTATGA TTCTCCTTTT TGATAAGATA ATAAATAGTT ATAGAGTGTT 2460 ATCTGAAAAT TAATCAGAAT GGGTTAAAAT TTTATCTTTG AAATAATCAA AATATGTTTT 2520 CTTTGCAGTT ACACTAGTGA CGCGACCTTG TAAGCCATAT TGGATGAGTT TACTATCCTC 2580 ATTAGATAGT TTTGCAAGAG CGGTTAATTT AAAGAGATTG CCTTGCTCTG TTCTGGTAGG 2640 AGTTTGATCA ATTGTCTGAA GTTGGCCGAT GATGGTAATG CCGTGATTTC CAATCTTCTC 2700 CAGTTTTAAT CTTACAGTTT GTCCTTTATC TAGTAGAGGT AGATAGTCAG AAGCTACGTA 2760 GTAAGTGATT AGTACTTCTC TTGTATCTGT GATGATAGGG 2800

【００９３】（２）配列番号：２に関する情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：２４５アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｃ）鎖の数：１本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｘｉ）配列の記載：配列番号：２： Met Arg Ile Phe Val Leu Glu Asp Asp Phe Ser Gln Gln Thr Arg Ile 1 5 10 15 Glu Thr Thr Ile Glu Lys Leu Leu Lys Ala His His Ile Ile Pro Ser 20 25 30 Ser Phe Glu Val Phe Gly Lys Pro Asp Gln Leu Leu Ala Glu Val His 35 40 45 Glu Lys Gly Ala His Gln Leu Phe Phe Leu Asp Ile Glu Ile Arg Asn 50 55 60 Glu Glu Met Lys Gly Leu Glu Val Ala Arg Lys Ile Arg Glu Gln Asp 65 70 75 80 Pro Tyr Ala Leu Ile Val Phe Val Thr Thr His Ser Glu Phe Met Pro 85 90 95 Leu Ser Phe Arg Tyr Gln Val Ser Ala Leu Asp Tyr Ile Asp Lys Ala 100 105 110 Leu Ser Ala Glu Glu Phe Glu Ser Arg Ile Glu Thr Ala Leu Leu Tyr 115 120 125 Ala Asn Ser Gln Asp Ser Lys Ser Leu Ala Glu Asp Cys Phe Tyr Phe 130 135 140 Lys Ser Lys Phe Ala Gln Phe Gln Tyr Pro Phe Lys Glu Val Tyr Tyr 145 150 155 160 Leu Glu Thr Ser Pro Arg Pro His Arg Val Ile Leu Tyr Thr Lys Thr 165 170 175 Asp Arg Leu Glu Phe Thr Ala Ser Leu Glu Glu Val Phe Lys Gln Glu 180 185 190 Pro Ser Leu Leu Gln Cys His Arg Ser Phe Leu Ile Asn Pro Ala Asn 195 200 205 Val Val His Leu Asp Lys Lys Glu Lys Leu Leu Phe Phe Pro Asn Gly 210 215 220 Gly Ser Cys Leu Ile Ala Arg Tyr Lys Val Arg Glu Val Ser Glu Ala 225 230 235 240 Ile Asn Asn Leu His 245

【００９４】（２）配列番号：３に関する情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：２８０２塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：１本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｘｉ）配列の記載：配列番号：３： AAAATCGATT GATTTTCAAG AAAGATCCTT TTTCTCGGAG AAGAAGGTCA ATAGCCTGTC 60 AAGTATGCCA GACGTCGCTA TAGAGAAATA CGTCAAAAAT GGTTGAAAGA GGGAGAGTAA 120 GAAGATGAGA ATATTTGTTT TAGAAGATGA TTTTTCCCAA CAGACTAGAA TTGAAACGAC 180 GATTGAGAAA CTTTTGAAAG CACATCATAT CATTCCTAGC TCTTTTGAGG TATTTGGCAA 240 GCCGGACCAA CTGCTGGCAG AGGTACATGA GAAGGGGGCC CATCAGCTAT TCTTTTTGGA 300 TATTGAGATT CGAAATGAAG AGATGAAGGG ACTGGAAGTA GCTAGAAAGA TTCGGGAACA 360 AGACCCTTAT GCCCTAATCG TCTTTGTGAC GACTCACTCG GAGTTTATGC CTCTGTCCTT 420 TCGCTACCAA GTGTCAGCTT TGGACTACAT TGATAAGGCC CTTTCGGCAG AGGAGTTTGA 480 ATCTCGTATC GAGACAGCCC TCCTCTATGC CAATAGTCAA GATAGTAAAA GTCTGGCGGA 540 AGATTGCTTT TACTTTAAAT CAAAATTTGC CCAATTCCAA TATCCTTTCA AAGAGGTTTA 600 CTATCTCGAA ACATCCCCAA GACCCCATCG TGTTATTCTC TATACCAAGA CGGACAGGCT 660 AGAATTTACG GCGAGTTTAG AGGAGGTTTT TAAGCAGGAA CCCAGTCTCT TGCAGTGCCA 720 TCGCTCTTTT CTCATCAATC CTGCAAATGT GGTGCATTTG GATAAGAAAG AAAAACTCCT 780 TTTCTTTCCC AATGGTGGAA GCTGTCTGAT CGCGCGTTAT AAGGTCAGGG AAGTGTCTGA 840 GGCTATTAAT AACTTACACT GAGCTAGGAG AGTTTATGAA CATTGCTTGG ATATTGTTGT 900 ATGCACTTGT TATTAATGGA CTAAAAATTG TCATTTTCTT TAAAGTAAAT GGAATTGGTC 960 TCACTTTCGA TAGAATTTTT AAGGCCTTTC TTCTGAAATT TCTTCTAGGG ATCATTTTTA 1020 CGACTTTTCA ATTTTTGGCT GTAAGTAAAT ATTTGTCCTA TTTTATAGAA CCTTTGTTCG 1080 GTATAGGTCT ATCTTTCTTA TTGTTAAGAG GGCTTCCTAA AAAAATCCTT ATTTTTTATG 1140 GTCTCTTCCC AATGATATTA GTAGAGCTCT TTTACAGAGG TGTTTCCTAT TTTGTGCTTC 1200 CATTTTTGGG GCAAGGAATT GTAGATGGGG ATGGCAATCC TATCTTTTTA TTGATTATGA 1260 TATTCGTTTG CTTCATAGTT TTAGTCTTTT TGAAATGGTT AGACTATGAT TTCACTAGAT 1320 TGAGAAGGGA GTTTCTAGAT ACAGGTTTTC AAAAGTCTCT TACTAAGATT AACTGGGCAA 1380 TGGGGGCTTA TTATCTAGTG ATGCAAAGTC TATCTTACCT TGAATATGAA CAAGGTATTC 1440 AATCAACGAC TGTTCGCCAT CTCATCCTAG TGTTTTACCT ACTCTTTTTT ATGGGGGGTA 1500 TCAAGAAATT GGATACCTAT TTGAAGGAAA AACTTCAGGA GGAACTGAAC CAAGAGCAGA 1560 CCTTGCGCTA CAGAGATATG GAACGCTATA GTCGGCATAT AGAGGAACTT TACAAGGAAA 1620 TTCGGAGTTT TCGCCATGAC TACACTAACC TCTTAACCAG CTTACGTTTG GGCATTGAAG 1680 AGGAGGATAT GGAGCAGATA AAAGAGATCT ACGACTCGGT CTTAAGGGAT TCCAGTCAGA 1740 AATTGCAGGA CAATAAATAT GACCTGGGCA GATTGGTGAA TATTCGTGAC CGTGCCCTCA 1800 AGAGTCTCCT AGCTGGAAAA TTTATAAAAG CTAGAGAAAA GAACATTGTC TTTAATGTTG 1860 AAGTTCCTGA GGAGATTCAG GTTGAGGGGA TGAGCCTACT TGATTTTCTA ACCATTGTGT 1920 CTATCCTTTG TGACAATGCT ATTGAAGTTA GTGCAGAGGC CAGTCAACCT CATGTTTCAA 1980 TCGCCTTTTT AAAAAATGGA GCACAGGAGA CTTTTATCAT TGAAAACTCC ATCAAAGAAG 2040 AGGGCATCGA TATTTCTGAA ATCTTCTCCT TTGGAGCAAG TTCTAAAGGG GAGGAGAGAG 2100 GAGTTGGTCT CTATACCGTT ATGAAAATTG TGGAAAGTCA TCCCAATACC AATCTAAATA 2160 CTACCTGCCA AAATCAAGTC TTTCGTCAGG TACTTACTGT GATACATGCA GAATGATAAA 2220 AAACAAGACC GAGAGTTCTT GTTTCTCGGT CTTGTTTTTA TAGCTGAATA GGTAGTTCAA 2280 GTGCTTTTGT GATTTTAAAT TTACTTAAAA TTGTTTCATG TAAGAGTTCT TCCCACCATT 2340 CTCCACCTGT AATTTGGTTG AGTTCGGTAG TTGTTAGTTC TTGAAATGAA GTTAGGTTTT 2400 GTTTCTTATC CATGTTATGA TTCTCCTTTT TGATAAGATA ATAAATAGTT ATAGAGTGTT 2460 ATCTGAAAAT TAATCAGAAT GGGTTAAAAT TTTATCTTTG AAATAATCAA AATATGTTTT 2520 CTTTGCAGTT ACACTAGTGA CGCGACCTTG TAAGCCATAT TGGATGAGTT TACTATCCTC 2580 ATTAGATAGT TTTGCAAGAG CGGTTAATTT AAAGAGATTG CCTTGCTCTG TTCTGGTAGG 2640 AGTTTGATCA ATTGTCTGAA GTTGGCCGAT GATGGTAATG CCGTGATTTC CAATCTTCTC 2700 CAGTTTTAAT CTTACAGTTT GTCCTTTATC TAGTAGAGGT AGATAGTCAG AAGCTACGTA 2760 GTAAGTGATT AGTACTTCTC TTGTATCTGT GATGATAGGG -' 2802

【００９５】（２）配列番号：４に関する情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：４４７アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｃ）鎖の数：１本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｘｉ）配列の記載：配列番号：４： Met Asn Ile Ala Trp Ile Leu Leu Tyr Ala Leu Val Ile Asn Gly Leu 1 5 10 15 Lys Ile Val Ile Phe Phe Lys Val Asn Gly Ile Gly Leu Thr Phe Asp 20 25 30 Arg Ile Phe Lys Ala Phe Leu Leu Lys Phe Leu Leu Gly Ile Ile Phe 35 40 45 Thr Thr Phe Gln Phe Leu Ala Val Ser Lys Tyr Leu Ser Tyr Phe Ile 50 55 60 Glu Pro Leu Phe Gly Ile Gly Leu Ser Phe Leu Leu Leu Arg Gly Leu 65 70 75 80 Pro Lys Lys Ile Leu Ile Phe Tyr Gly Leu Phe Pro Met Ile Leu Val 85 90 95 Glu Leu Phe Tyr Arg Gly Val Ser Tyr Phe Val Leu Pro Phe Leu Gly 100 105 110 Gln Gly Ile Val Asp Gly Asp Gly Asn Pro Ile Phe Leu Leu Ile Met 115 120 125 Ile Phe Val Cys Phe Ile Val Leu Val Phe Leu Lys Trp Leu Asp Tyr 130 135 140 Asp Phe Thr Arg Leu Arg Arg Glu Phe Leu Asp Thr Gly Phe Gln Lys 145 150 155 160 Ser Leu Thr Lys Ile Asn Trp Ala Met Gly Ala Tyr Tyr Leu Val Met 165 170 175 Gln Ser Leu Ser Tyr Leu Glu Tyr Glu Gln Gly Ile Gln Ser Thr Thr 180 185 190 Val Arg His Leu Ile Leu Val Phe Tyr Leu Leu Phe Phe Met Gly Gly 195 200 205 Ile Lys Lys Leu Asp Thr Tyr Leu Lys Glu Lys Leu Gln Glu Glu Leu 210 215 220 Asn Gln Glu Gln Thr Leu Arg Tyr Arg Asp Met Glu Arg Tyr Ser Arg 225 230 235 240 His Ile Glu Glu Leu Tyr Lys Glu Ile Arg Ser Phe Arg His Asp Tyr 245 250 255 Thr Asn Leu Leu Thr Ser Leu Arg Leu Gly Ile Glu Glu Glu Asp Met 260 265 270 Glu Gln Ile Lys Glu Ile Tyr Asp Ser Val Leu Arg Asp Ser Ser Gln 275 280 285 Lys Leu Gln Asp Asn Lys Tyr Asp Leu Gly Arg Leu Val Asn Ile Arg 290 295 300 Asp Arg Ala Leu Lys Ser Leu Leu Ala Gly Lys Phe Ile Lys Ala Arg 305 310 315 320 Glu Lys Asn Ile Val Phe Asn Val Glu Val Pro Glu Glu Ile Gln Val 325 330 335 Glu Gly Met Ser Leu Leu Asp Phe Leu Thr Ile Val Ser Ile Leu Cys 340 345 350 Asp Asn Ala Ile Glu Val Ser Ala Glu Ala Ser Gln Pro His Val Ser 355 360 365 Ile Ala Phe Leu Lys Asn Gly Ala Gln Glu Thr Phe Ile Ile Glu Asn 370 375 380 Ser Ile Lys Glu Glu Gly Ile Asp Ile Ser Glu Ile Phe Ser Phe Gly 385 390 395 400 Ala Ser Ser Lys Gly Glu Glu Arg Gly Val Gly Leu Tyr Thr Val Met 405 410 415 Lys Ile Val Glu Ser His Pro Asn Thr Asn Leu Asn Thr Thr Cys Gln 420 425 430 Asn Gln Val Phe Arg Gln Val Leu Thr Val Ile His Ala Glu 435 440 445

【００９６】（２）配列番号：５に関する情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：２４塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：１本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｘｉ）配列の記載：配列番号：５： AAAAACGCAA TATTCAACAC CACT 24

【００９７】（２）配列番号：６に関する情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：２１塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：１本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｘｉ）配列の記載：配列番号：６： TCCTTCTGCC AATTCAACGA T 21

【００９８】（２）配列番号：７に関する情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：２５塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：１本（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｘｉ）配列の記載：配列番号：７： AACTGAGACT GGCTTTAAGA GATTA 25

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 31/00 ６２９Ａ６１Ｋ 31/00 ６２９６３１６３１Ｃ 38/00 39/07 39/07 39/395 Ｄ 39/395 Ｒ 45/00 45/00 48/00 48/00 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/19 1/19 1/21 1/21 9/10 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/48 9/10 Ｇ０１Ｎ 33/15 ＺＣ１２Ｑ 1/48 33/50 ＴＧ０１Ｎ 33/15 Ｐ 33/50 33/566 33/68 33/566 Ａ６１Ｋ 37/02 33/68 Ｃ１２Ｎ 5/00 ＢＣ (72)発明者ジェイムズ・レイモンド・ブラウンアメリカ合衆国19312ペンシルベニア州バーウィン、ロビンズ・レイン９番

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むポ
リペプチドコードしているポリヌクレオチドに対して少
なくとも７０％の同一性を有するポリヌクレオチド；（ｂ）寄託株のストレプトコッカス・ニューモニアエ中
に含まれるオルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ
遺伝子により発現されるのと同じ成熟ポリペプチドをコ
ードしているポリヌクレオチドに対して少なくとも７０
％の同一性を有するポリヌクレオチド；（ｃ）配列番号：２のアミノ酸配列に対して少なくとも
７０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコ
ードしているポリヌクレオチド；（ｄ）（ａ）、（ｂ）または（ｃ）のポリヌクレオチド
に対して相捕的であるポリヌクレオチド；および（ｅ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）のポリヌク
レオチドの少なくとも１５個の連続した塩基を含むポリ
ヌクレオチドからなる群より選択されるポリヌクレオチ
ド配列を含む単離ポリヌクレオチド。
【請求項２】ＤＮＡである請求項１のポリヌクレオチ
ド。
【請求項３】ＲＮＡである請求項１のポリヌクレオチ
ド。
【請求項４】配列番号１に示す核酸配列を含む請求項
２のポリヌクレオチド。
【請求項５】配列番号１に示すヌクレオチド１から１
０１４までを含む請求項２のポリヌクレオチド。
【請求項６】配列番号：２のアミノ酸配列を含むポリ
ペプチドをコードしている請求項２のポリヌクレオチ
ド。
【請求項７】請求項１のポリヌクレオチドを含むベク
ター。
【請求項８】請求項７のベクターを含む宿主細胞。
【請求項９】請求項８の宿主細胞から上記ＤＮＡによ
りコードされているポリペプチドを発現させることを含
む、ポリペプチドの製造方法。
【請求項１０】オルニチンカルバモイルトランスフェ
ラーゼポリペプチドまたはフラグメントの製造方法であ
って、該ポリペプチドまたはフラグメントの生成に十分
な条件下で請求項８の宿主を培養することを含む方法。
【請求項１１】配列番号：２のアミノ酸配列に対して
少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペ
プチド。
【請求項１２】配列番号：２に示すアミノ酸配列を含
むポリペプチド。
【請求項１３】請求項１１のポリペプチドに対する抗
体。
【請求項１４】請求項１１のポリペプチドの活性また
は発現を阻害するアンタゴニスト。
【請求項１５】治療上有効量の請求項１１のポリペプ
チドを個体に投与することを含む、オルニチンカルバモ
イルトランスフェラーゼポリペプチドを必要とする個体
の治療方法。
【請求項１６】治療上有効量の請求項１４のアンタゴ
ニストを個体に投与することを含む、オルニチンカルバ
モイルトランスフェラーゼポリペプチドの阻害を必要と
する個体の治療方法。
【請求項１７】個体における請求項１１のポリペプチ
ドの発現または活性に関連した疾病の診断方法であっ
て、（ａ）該ポリペプチドをコードしている核酸配列を決定
すること、および／または（ｂ）個体由来の試料中の該
ポリペプチドの存在または量について分析することを含
む方法。
【請求項１８】請求項１１のポリペプチドと相互作用
して、その活性を阻害または活性化する化合物の同定方
法であって、化合物とポリペプチドとの間の相互作用を可能にする条
件下で、ポリペプチドとスクリーニングすべき化合物と
を接触させて化合物の相互作用を評価し（かかる相互作
用はポリペプチドと化合物との相互作用に応答した検出
可能シグナルを提供しうる第２の成分に関連したもので
ある）、次いで、化合物とポリペプチドとの相互作用により生じ
るシグナルの存在または不存在を検出することにより、
化合物がポリペプチドと相互作用して、その活性を活性
化または阻害するかどうかを決定することを含む方法。
【請求項１９】哺乳動物における免疫学的応答を誘導
する方法であって、抗体および／またはＴ細胞免疫応答
を生じさせて動物を疾病から防御するに十分な請求項１
１のオルニチンカルバモイルトランスフェラーゼポリペ
プチドまたはそのフラグメントもしくは変種を哺乳動物
に接種することを含む方法。
【請求項２０】哺乳動物における免疫学的応答を誘導
する方法であって、オルニチンカルバモイルトランスフ
ェラーゼポリペプチドまたはそのフラグメントもしくは
変種をインビボで発現させて、抗体および／またはＴ細
胞免疫応答を生じさせる免疫学的応答を誘導して該動物
を疾病から防御するするために、請求項１１のオルニチ
ンカルバモイルトランスフェラーゼポリペプチドまたは
そのフラグメントもしくは変種の発現を指令する核酸ベ
クターを送達することを含む方法。