JPH11253192A - 白血球（アルファ）インタ―フェロンの調製法 - Google Patents
白血球（アルファ）インタ―フェロンの調製法Info
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- JPH11253192A JPH11253192A JP11009879A JP987999A JPH11253192A JP H11253192 A JPH11253192 A JP H11253192A JP 11009879 A JP11009879 A JP 11009879A JP 987999 A JP987999 A JP 987999A JP H11253192 A JPH11253192 A JP H11253192A
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-
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 本願発明は、天然のヒトアルファインターフ
ェロンをヒト血液から塩化アンモニウム溶血及び生理食
塩水緩衝液で洗浄することによる精製、そして液体培地
に懸濁し、センダイウイルスにより誘導することに関す
る。 【解決手段】 本願発明による調製法は、白血球をヒト
血液から分離し、既知の方法で精製し、液体培地に懸濁
し、そしてセンダイウイルスにより誘導し、前処理を誘
導後30−40℃で60−90分間行い、培養を30℃またはそれ
以下の温度で継続し、培養終了時に追加分のセンダイウ
イルスを懸濁液に添加し、その後細胞を分離して上清の
ｐHを酸性にすることを特徴とする。
ェロンをヒト血液から塩化アンモニウム溶血及び生理食
塩水緩衝液で洗浄することによる精製、そして液体培地
に懸濁し、センダイウイルスにより誘導することに関す
る。 【解決手段】 本願発明による調製法は、白血球をヒト
血液から分離し、既知の方法で精製し、液体培地に懸濁
し、そしてセンダイウイルスにより誘導し、前処理を誘
導後30−40℃で60−90分間行い、培養を30℃またはそれ
以下の温度で継続し、培養終了時に追加分のセンダイウ
イルスを懸濁液に添加し、その後細胞を分離して上清の
ｐHを酸性にすることを特徴とする。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本願発明は天然のヒト白血球
(アルファ)インターフェロンの調製法に関する。
(アルファ)インターフェロンの調製法に関する。
【０００２】
【従来の技術】天然のヒトアルファ-インターフェロン
は生理学的な割合で存在する低分子量（18−26ｋD）の
タンパク質で構成されている（Gorenら，J. Interferon
Res.，6. pp323-329，1986）。この混合物は数種の異
なった生物学的活性を保持している。中でも、抗ウイル
ス作用（von Wussow & Jakschies，Interferon中， Nie
derle & von Wussow監修，Springer-Verlag，Berlin，p
p79-91，1990）、抗菌作用（Bukholmら，Antivir. Re
s.，1984，要旨1(3)，p70； Nieselら，J. Interferon
Res.，9(Suppl.2.)，p S223，1989）、細胞増殖阻止作
用（Samid，Interferons and Cytokines，11，pp38-4
0，1989； Clemens & McNurlan，J. Biochem.，226，pp
545-360，1985）、免疫機能促進作用（Maudsleyら，Imm
une Responses，Virus Infections and Disease，pp15-
33，Dimmock & Minor監修，IRL Press，Oxford，1989；
Vilcek & DeMayer監修，Interferon 2：Interferons a
nd the Immune System，Elsevier Science Publisher
s，1984； Virelizer，Immune Responses中，Virus Inf
ections and Disese，pp1-14，Dimmock & Minor監修，I
RL Press，Oxford，1989）及び抗炎症作用（Lemmel & O
bert，J. Interferon Res.，11(suppl.1)，p S76，199
1； Lemmelら，Rheumatology，7，pp127-132，1987； M
ecsら，the ARES Serono Symposium on the Interferon
Systemの要旨中，p122，1985）が知られている。
は生理学的な割合で存在する低分子量（18−26ｋD）の
タンパク質で構成されている（Gorenら，J. Interferon
Res.，6. pp323-329，1986）。この混合物は数種の異
なった生物学的活性を保持している。中でも、抗ウイル
ス作用（von Wussow & Jakschies，Interferon中， Nie
derle & von Wussow監修，Springer-Verlag，Berlin，p
p79-91，1990）、抗菌作用（Bukholmら，Antivir. Re
s.，1984，要旨1(3)，p70； Nieselら，J. Interferon
Res.，9(Suppl.2.)，p S223，1989）、細胞増殖阻止作
用（Samid，Interferons and Cytokines，11，pp38-4
0，1989； Clemens & McNurlan，J. Biochem.，226，pp
545-360，1985）、免疫機能促進作用（Maudsleyら，Imm
une Responses，Virus Infections and Disease，pp15-
33，Dimmock & Minor監修，IRL Press，Oxford，1989；
Vilcek & DeMayer監修，Interferon 2：Interferons a
nd the Immune System，Elsevier Science Publisher
s，1984； Virelizer，Immune Responses中，Virus Inf
ections and Disese，pp1-14，Dimmock & Minor監修，I
RL Press，Oxford，1989）及び抗炎症作用（Lemmel & O
bert，J. Interferon Res.，11(suppl.1)，p S76，199
1； Lemmelら，Rheumatology，7，pp127-132，1987； M
ecsら，the ARES Serono Symposium on the Interferon
Systemの要旨中，p122，1985）が知られている。
【０００３】上記の特性をもとにヒトインターフェロン
は、他の方法では治療できないまたは治療するのが非常
に難しい菌感染の場合（Badaroら，J. Interferon Re
s.，9(Suppl. 2.)，p S134，1989； Kaplanら，J. Inte
rferon Res. 9(Suppl. 2.)，pS133，1989； Gauci，Int
erferons Today and Tomorrow，8，pp37-38，1988）と
同様にウイルス感染（Eddleston & Dixon監修，Interfe
rons in the Treatmentof Chronic Virus Infection of
the Liver，Pennine Press，Macclesfield，1990； Le
vinら，Israel J. Med. Sci.，25，pp364-372； Arvin
ら，J. Infect. Dis.，133(Suppl)，pp A205-A210，197
6），腫瘍性疾病（Spiegel，Cancer，59，pp626-631，1
987； Roberts，Br. Med. J. 305，pp1243-1244，199
2； Goldstein & Laszlo，Cancer Res.，46，pp4315-43
29，1986）及び自己免疫が原因である炎症（Fierlbeck
& Rassner，J. Interferon Res.，9(Suppl. 2.)，p S22
1，1989； Boccaraら，J. Interferon Res.，11(Suppl.
1.)， p S242，1991； Faconら，Br. J. Haematol.，8
2，p 464，1991）を処置する治療剤として適用されてい
る。
は、他の方法では治療できないまたは治療するのが非常
に難しい菌感染の場合（Badaroら，J. Interferon Re
s.，9(Suppl. 2.)，p S134，1989； Kaplanら，J. Inte
rferon Res. 9(Suppl. 2.)，pS133，1989； Gauci，Int
erferons Today and Tomorrow，8，pp37-38，1988）と
同様にウイルス感染（Eddleston & Dixon監修，Interfe
rons in the Treatmentof Chronic Virus Infection of
the Liver，Pennine Press，Macclesfield，1990； Le
vinら，Israel J. Med. Sci.，25，pp364-372； Arvin
ら，J. Infect. Dis.，133(Suppl)，pp A205-A210，197
6），腫瘍性疾病（Spiegel，Cancer，59，pp626-631，1
987； Roberts，Br. Med. J. 305，pp1243-1244，199
2； Goldstein & Laszlo，Cancer Res.，46，pp4315-43
29，1986）及び自己免疫が原因である炎症（Fierlbeck
& Rassner，J. Interferon Res.，9(Suppl. 2.)，p S22
1，1989； Boccaraら，J. Interferon Res.，11(Suppl.
1.)， p S242，1991； Faconら，Br. J. Haematol.，8
2，p 464，1991）を処置する治療剤として適用されてい
る。
【０００４】ヒト白血球ではインターフェロン(IFN-ア
ルファ)の生産をウイルスや二本鎖RNAによって誘導でき
ることが知られている（Kikutaら，J. Gen. Virol.，6
5，pp837-841，1984； Robertsら，J. Immunol.，123，
pp365-369，1979； Sakselaら，Prog. Med. Virol.，3
0，pp78-86，1984）。
ルファ)の生産をウイルスや二本鎖RNAによって誘導でき
ることが知られている（Kikutaら，J. Gen. Virol.，6
5，pp837-841，1984； Robertsら，J. Immunol.，123，
pp365-369，1979； Sakselaら，Prog. Med. Virol.，3
0，pp78-86，1984）。
【０００５】天然のインターフェロンの生産は、十分な
量のIFNの調製にはかなりの数のドナーから白血球を採
取する必要があるという事実から、制限を受けることに
なる。慣用の方法（Cantellら，In Vitro Monograph，
3，pp35-38，1974； Mecsら，ハンガリー出願特許No.24
35/80； Toth M.ら，欧州特許8411.5123.6； Toth M.
ら，Acta Microbiol. Hung.，31，pp61-67，1984）に従
って、白血球は、ドナーから採取された血液を遠心分離
して“バフィーコート(buffy coat)”と呼ばれる、白血
球に富む物質を分離することにより回収されている。一
人のドナーから採取できる血液量は、80−150 mlの粗精
製インターフェロンを調製するのに十分である。治療に
用いられる天然の IFN-アルファの量は、遺伝子工学的
な方法（Oberg & Alm，J. Interferon Res.，9(Suppl.
1.)，pp S45-S51，1989； von Wussowら，Lancet，i，p
p 882-883，1988； von Wussow & Jakchies，同書中）
により調製されるIFN-アルファの量よりも多いけれど
も、ドナーの数が制限されることと血液性のウイルス感
染（B型，C型，E型肝炎ウイルスやHIVなど）が増加して
いることから、生産可能な天然のIFN-アルファの量は限
られている。そのため、現在調製可能な天然のIFN-アル
ファの量は非常に不足しており、必要量を確保できてい
ない。
量のIFNの調製にはかなりの数のドナーから白血球を採
取する必要があるという事実から、制限を受けることに
なる。慣用の方法（Cantellら，In Vitro Monograph，
3，pp35-38，1974； Mecsら，ハンガリー出願特許No.24
35/80； Toth M.ら，欧州特許8411.5123.6； Toth M.
ら，Acta Microbiol. Hung.，31，pp61-67，1984）に従
って、白血球は、ドナーから採取された血液を遠心分離
して“バフィーコート(buffy coat)”と呼ばれる、白血
球に富む物質を分離することにより回収されている。一
人のドナーから採取できる血液量は、80−150 mlの粗精
製インターフェロンを調製するのに十分である。治療に
用いられる天然の IFN-アルファの量は、遺伝子工学的
な方法（Oberg & Alm，J. Interferon Res.，9(Suppl.
1.)，pp S45-S51，1989； von Wussowら，Lancet，i，p
p 882-883，1988； von Wussow & Jakchies，同書中）
により調製されるIFN-アルファの量よりも多いけれど
も、ドナーの数が制限されることと血液性のウイルス感
染（B型，C型，E型肝炎ウイルスやHIVなど）が増加して
いることから、生産可能な天然のIFN-アルファの量は限
られている。そのため、現在調製可能な天然のIFN-アル
ファの量は非常に不足しており、必要量を確保できてい
ない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】この問題を解決するた
めに2つの可能性があり、本願発明者は、一人のドナー
から得られる白血球の量、または一つの細胞が生産する
特定のIFN-アルファの量を増加させることを試みてい
る。本願発明の目的は、白血球の量を増加しかつ特定の
IFN-アルファの生産を増加することによってドナー一人
あたりのIFN-アルファの生産性を増大することである。
めに2つの可能性があり、本願発明者は、一人のドナー
から得られる白血球の量、または一つの細胞が生産する
特定のIFN-アルファの量を増加させることを試みてい
る。本願発明の目的は、白血球の量を増加しかつ特定の
IFN-アルファの生産を増加することによってドナー一人
あたりのIFN-アルファの生産性を増大することである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本願発明は幾つかの発見
に基づいている。第一に、一人のドナーから得られる白
血球の量は、そのドナーから血液そのものを採取するの
ではなく、通液型（flush-type）のローターで血液を遠
心分離することによって白血球を分離して他の血液成分
をドナーの体に戻すことによって十分に増加させること
ができる。第二に、IFNの生産の過程で、初めの90分間
の生産後に培養温度を37℃から30℃に低下させれば、IF
Nの生産を阻害する物質の生成を防ぐことができ、IFN-
アルファの量を増大することができる。第三に、白血球
を操作する際にストレスタンパク質が白血球中に形成さ
れるが、培養の終了時に細胞懸濁液にセンダイウイルス
を加えることによって白血球からストレスタンパク質を
遊離することができ、このタンパク質とともに、本願の
インターフェロン調製物も抗ウイルスの治療量を増大す
ることができる。
に基づいている。第一に、一人のドナーから得られる白
血球の量は、そのドナーから血液そのものを採取するの
ではなく、通液型（flush-type）のローターで血液を遠
心分離することによって白血球を分離して他の血液成分
をドナーの体に戻すことによって十分に増加させること
ができる。第二に、IFNの生産の過程で、初めの90分間
の生産後に培養温度を37℃から30℃に低下させれば、IF
Nの生産を阻害する物質の生成を防ぐことができ、IFN-
アルファの量を増大することができる。第三に、白血球
を操作する際にストレスタンパク質が白血球中に形成さ
れるが、培養の終了時に細胞懸濁液にセンダイウイルス
を加えることによって白血球からストレスタンパク質を
遊離することができ、このタンパク質とともに、本願の
インターフェロン調製物も抗ウイルスの治療量を増大す
ることができる。
【０００８】従って、本願発明の主題は、塩化アンモニ
ウムによって溶血し、生理食塩水緩衝液によって洗浄す
ることで精製し、液体培地に懸濁してセンダイウイルス
によって生産を誘導する、天然ヒトIFN-アルファの調製
法である。本願調製法の特徴は、白血球をヒト血液から
回収し、既知の方法で精製し、そして液体培地に懸濁し
てセンダイウイルスにより誘導化し、誘導後30−40℃で
60−90分間の前処理を行った後、30℃またはそれ以下の
温度で培養を続け、培養終了時に追加分のセンダイウイ
ルスを懸濁液に加えて細胞を分離し、上清のｐHを酸性
にすることである。上記で得られた天然IFN-アルファの
粗精製調製品は4℃または−20℃で保存する。
ウムによって溶血し、生理食塩水緩衝液によって洗浄す
ることで精製し、液体培地に懸濁してセンダイウイルス
によって生産を誘導する、天然ヒトIFN-アルファの調製
法である。本願調製法の特徴は、白血球をヒト血液から
回収し、既知の方法で精製し、そして液体培地に懸濁し
てセンダイウイルスにより誘導化し、誘導後30−40℃で
60−90分間の前処理を行った後、30℃またはそれ以下の
温度で培養を続け、培養終了時に追加分のセンダイウイ
ルスを懸濁液に加えて細胞を分離し、上清のｐHを酸性
にすることである。上記で得られた天然IFN-アルファの
粗精製調製品は4℃または−20℃で保存する。
【０００９】
【発明の実施の形態】本願発明の主題を以下の実施例で
説明する。
説明する。
【００１０】
【実施例】実施例１ 静脈カテーテルを健康なドナーの両腕に導入する。一方
のカテーテルから流出する血液を、白血球を分離するた
めの通液型のローター遠心機に導入し、血液の他の成分
をもう一方のカテーテルを介してドナーのもう一方の腕
に戻す。この方法で白血球は、一人のドナーからの血液
1−3.5リットル、好ましくは2.5リットルから回収さ
れ、その結果、白血球の回収量は既知の白血球回収技術
によって得られる量に比べて4−8倍多い量となる。回収
された白血球を勾配遠心分離（例えばフィコール(Ficol
l)，パーコール(Percoll)またはポリエチレングリコー
ルを適用する）、好ましくは塩化アンモニウムでの溶血
によって、残存する赤血球から分離する（Toth, M.ら，
ハンガリー特許明細書No.192254，1983）。溶血した赤
血球を白血球から分離し（例えば遠心分離によって）、
生理的溶液、好ましくは20ｍMKH2PO4溶液で緩衝能をも
たせた0.83％生理食塩水を用いて、細胞懸濁液1に対し
て生理食塩水緩衝液4−15の割合、好ましくは9の割合で
加えることによって、血清残渣を洗い去り、その混合物
を均一に懸濁し、適当な方法で（例えば遠心分離によっ
て）洗浄液を除去する。
のカテーテルから流出する血液を、白血球を分離するた
めの通液型のローター遠心機に導入し、血液の他の成分
をもう一方のカテーテルを介してドナーのもう一方の腕
に戻す。この方法で白血球は、一人のドナーからの血液
1−3.5リットル、好ましくは2.5リットルから回収さ
れ、その結果、白血球の回収量は既知の白血球回収技術
によって得られる量に比べて4−8倍多い量となる。回収
された白血球を勾配遠心分離（例えばフィコール(Ficol
l)，パーコール(Percoll)またはポリエチレングリコー
ルを適用する）、好ましくは塩化アンモニウムでの溶血
によって、残存する赤血球から分離する（Toth, M.ら，
ハンガリー特許明細書No.192254，1983）。溶血した赤
血球を白血球から分離し（例えば遠心分離によって）、
生理的溶液、好ましくは20ｍMKH2PO4溶液で緩衝能をも
たせた0.83％生理食塩水を用いて、細胞懸濁液1に対し
て生理食塩水緩衝液4−15の割合、好ましくは9の割合で
加えることによって、血清残渣を洗い去り、その混合物
を均一に懸濁し、適当な方法で（例えば遠心分離によっ
て）洗浄液を除去する。
【００１１】次に、白血球を維持するのに適した栄養液
（例えばイーグル(Eagle)最少必須培地やそれと構成分
が異なるダルベッコ(Dulbecco)，グラスゴー(Glasgo
w)，イール(Earle)などの修飾イーグル培地，RPMI1640
培地）に精製した白血球を懸濁する。以下の単純栄養培
地は、オートクレーブに適したものだが、適宜使用され
る。 成分 量(mg/ml) CaCl2 100−400 KCl 250−600 MgSO4またはMgCl2 100−500 NaCl 4500−8000 NaHCO3 200−4000 NaH2PO4 10−250 ブドウ糖 0−6000 Fe(NO3)3 0−0.5 液体培地のタンパク質含量は0.2−5 mg/ml，好ましくは
1 mg/mlとして、ヒト血清、好ましくはヒト血清アルブ
ミン、特に好ましくはガンマグロブリンのないヒト血清
を補充する。液体培地にはまた、抗生物質、好ましくは
ゲンタミシン(gentamicin)やネオマイシン(neomycin)を
補充する。細胞数は106−108/ml，好ましくは生細胞数1
07/mlに設定する。
（例えばイーグル(Eagle)最少必須培地やそれと構成分
が異なるダルベッコ(Dulbecco)，グラスゴー(Glasgo
w)，イール(Earle)などの修飾イーグル培地，RPMI1640
培地）に精製した白血球を懸濁する。以下の単純栄養培
地は、オートクレーブに適したものだが、適宜使用され
る。 成分 量(mg/ml) CaCl2 100−400 KCl 250−600 MgSO4またはMgCl2 100−500 NaCl 4500−8000 NaHCO3 200−4000 NaH2PO4 10−250 ブドウ糖 0−6000 Fe(NO3)3 0−0.5 液体培地のタンパク質含量は0.2−5 mg/ml，好ましくは
1 mg/mlとして、ヒト血清、好ましくはヒト血清アルブ
ミン、特に好ましくはガンマグロブリンのないヒト血清
を補充する。液体培地にはまた、抗生物質、好ましくは
ゲンタミシン(gentamicin)やネオマイシン(neomycin)を
補充する。細胞数は106−108/ml，好ましくは生細胞数1
07/mlに設定する。
【００１２】次に、細胞をアルファ、ベータまたはガン
マIFN処理下に置く。この目的のために、誘導剤が存在
しないまたは精製されたIFNを終濃度10−1000IU/ml，好
ましくは200IU/mlで適用する。前処理は30−40℃，好ま
しくは37℃で、0.5−6時間，好ましくは2時間行う。粗
精製のまたは精製した生きているセンダイウイルスを細
胞懸濁液に、最終の赤血球凝集活性濃度が10−1000単位
／ml，好ましくは200単位／mlになるように添加する。
懸濁液を0.5−3時間，35−39℃，好ましくは37℃で培養
し、その後温度を28−30℃，好ましくは30℃で、6−36
時間，好ましくは15−18時間培養を続ける。培養終了時
に、更に10−1000単位／ml，好ましくは200単位／mlの
赤血球凝集活性のセンダイウイルスを混合液に添加し、
その後細胞を培養培地から遠心分離などによって分離す
る。上清を適当な試薬（例えば濃塩酸）でｐH2まで酸性
化して、4℃，6−48時間，好ましくは24時間保持する。
そして水素イオン濃度を5M水酸化ナトリウムでｐH6.5−
8.0，好ましくはｐH7.4に調整し、このようにして得ら
れた粗精製の天然IFN-アルファ調製物を次の使用まで4
℃または−20℃で保存する。
マIFN処理下に置く。この目的のために、誘導剤が存在
しないまたは精製されたIFNを終濃度10−1000IU/ml，好
ましくは200IU/mlで適用する。前処理は30−40℃，好ま
しくは37℃で、0.5−6時間，好ましくは2時間行う。粗
精製のまたは精製した生きているセンダイウイルスを細
胞懸濁液に、最終の赤血球凝集活性濃度が10−1000単位
／ml，好ましくは200単位／mlになるように添加する。
懸濁液を0.5−3時間，35−39℃，好ましくは37℃で培養
し、その後温度を28−30℃，好ましくは30℃で、6−36
時間，好ましくは15−18時間培養を続ける。培養終了時
に、更に10−1000単位／ml，好ましくは200単位／mlの
赤血球凝集活性のセンダイウイルスを混合液に添加し、
その後細胞を培養培地から遠心分離などによって分離す
る。上清を適当な試薬（例えば濃塩酸）でｐH2まで酸性
化して、4℃，6−48時間，好ましくは24時間保持する。
そして水素イオン濃度を5M水酸化ナトリウムでｐH6.5−
8.0，好ましくはｐH7.4に調整し、このようにして得ら
れた粗精製の天然IFN-アルファ調製物を次の使用まで4
℃または−20℃で保存する。
【００１３】実施例２ 天然のヒト白血球インターフェロンα生産の実施を以下
の方法を用いて行った。 a)混合ヒト白血球懸濁液（無作為の血液群の少なくとも
35人の異なったドナーから得られた白血球細胞）をイー
グル最少必須培地中で濃度107細胞数／mlとし、処理前
に200国際抗ウイルス活性単位／ml HuIFN-αによる2時
間のプライミングを行い、200赤血球凝集活性単位／ml
のセンダイウイルス（カンテル種，Cantellstrain）に
より誘導し、マグネチックスターラーにより60rpmで攪
拌し続けながら37℃，16時間培養した。バッチサイズは
1−1.2リットルであった。 b) a)において、イーグル最少必須培地の代わりに本願
記載の単純栄養培地を適用した。 c) b)において、生産物を回収する前に（16時間の培養
後）、更に200赤血球凝集活性単位／mlのセンダイウイ
ルスを加えることによって2回目のウイルスによる誘導
を行った。第2ロットのセンダイウイルスの添加直後に
遠心分離（300ｇ，+4℃，30分）によって回収した。 同じロットの白血球混合物を上記の異なった条件下で使
用するために分割して、生産の比較を行った。各条件
は、少なくとも5回の別個の生産を実施して試験した。
得られたデータは図1に表した。
の方法を用いて行った。 a)混合ヒト白血球懸濁液（無作為の血液群の少なくとも
35人の異なったドナーから得られた白血球細胞）をイー
グル最少必須培地中で濃度107細胞数／mlとし、処理前
に200国際抗ウイルス活性単位／ml HuIFN-αによる2時
間のプライミングを行い、200赤血球凝集活性単位／ml
のセンダイウイルス（カンテル種，Cantellstrain）に
より誘導し、マグネチックスターラーにより60rpmで攪
拌し続けながら37℃，16時間培養した。バッチサイズは
1−1.2リットルであった。 b) a)において、イーグル最少必須培地の代わりに本願
記載の単純栄養培地を適用した。 c) b)において、生産物を回収する前に（16時間の培養
後）、更に200赤血球凝集活性単位／mlのセンダイウイ
ルスを加えることによって2回目のウイルスによる誘導
を行った。第2ロットのセンダイウイルスの添加直後に
遠心分離（300ｇ，+4℃，30分）によって回収した。 同じロットの白血球混合物を上記の異なった条件下で使
用するために分割して、生産の比較を行った。各条件
は、少なくとも5回の別個の生産を実施して試験した。
得られたデータは図1に表した。
【００１４】実施例３ 天然のヒト白血球インターフェロンαの生産は実施例2
の項目c)に記載されているようにして行い、文献に記載
された他の幾つかの生産率と比較した。図2は、幾つか
の市販している生産原料（EGIS製薬会社，ハンガリー；
フィンランド赤十字社；ザグレブ大学免疫学部門，クロ
アチア；東レ株式会社，日本）の粗精製のインターフェ
ロンの力価と上記のプロトコールによって得られた力価
との比較を表している。図３は、本願発明者が文献（Be
ladiら，The Clinical Potential of Interferons中，
R. KonoとI. Vilcek監修，東京大学出版，pp31-38，198
2； Cantell K.&Hirvonen S.，Tex. Rep. Biol. Med.，
35，pp138-144，1977； Fournierら，J.Immunol.，99，
pp1036-1041，1967； Mecsら，ハンガリー特許No.2435/
80，1980； Robertsら，J．Immunol.，123，pp365-36
9，1979； Toth M.ら，Acta Microbiol. Hung.，31
(1)，pp61-67）に記載の別の方法により生産した天然の
ヒトインターフェロンαの抗ウイルス力価を、実施例2
の項目c)の方法による力価と比較して表している。
の項目c)に記載されているようにして行い、文献に記載
された他の幾つかの生産率と比較した。図2は、幾つか
の市販している生産原料（EGIS製薬会社，ハンガリー；
フィンランド赤十字社；ザグレブ大学免疫学部門，クロ
アチア；東レ株式会社，日本）の粗精製のインターフェ
ロンの力価と上記のプロトコールによって得られた力価
との比較を表している。図３は、本願発明者が文献（Be
ladiら，The Clinical Potential of Interferons中，
R. KonoとI. Vilcek監修，東京大学出版，pp31-38，198
2； Cantell K.&Hirvonen S.，Tex. Rep. Biol. Med.，
35，pp138-144，1977； Fournierら，J.Immunol.，99，
pp1036-1041，1967； Mecsら，ハンガリー特許No.2435/
80，1980； Robertsら，J．Immunol.，123，pp365-36
9，1979； Toth M.ら，Acta Microbiol. Hung.，31
(1)，pp61-67）に記載の別の方法により生産した天然の
ヒトインターフェロンαの抗ウイルス力価を、実施例2
の項目c)の方法による力価と比較して表している。
【図１】実施例２において、同じロットの白血球混合物
をa)〜c)の生産実施案で得られるインターフェロンの生
産量を、抗ウイルス力価で表したグラフである。
をa)〜c)の生産実施案で得られるインターフェロンの生
産量を、抗ウイルス力価で表したグラフである。
【図２】実施例３において、市販の4種類の生産原料か
ら得られる粗精製のインターフェロンの生産量を抗ウイ
ルス力価として表し、実施例2のc)の方法で得られるも
のと比較したグラフである。
ら得られる粗精製のインターフェロンの生産量を抗ウイ
ルス力価として表し、実施例2のc)の方法で得られるも
のと比較したグラフである。
【図３】実施例３において、本願発明者が6つの文献に
記載されている方法に従って得られるインターフェロン
の生産量を抗ウイルス力価として表し、実施例２のc)の
方法で得られるものと比較したグラフである。
記載されている方法に従って得られるインターフェロン
の生産量を抗ウイルス力価として表し、実施例２のc)の
方法で得られるものと比較したグラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 マーバト アッタラ ミクハエル エジプト国 カイロ，ブスタン エル マ ハメジイ ラムシス ストリート ２
Claims (4)
- 【請求項１】 ヒトアルファ-インターフェロンのヒト
血液からの調製法であって、塩化アンモニウム溶血及び
生理食塩水緩衝液で洗浄することによる精製、そして液
体培地に懸濁させ、センダイウイルスにより誘導するこ
とからなり、白血球をヒト血液から分離し、既知の方法
で精製し、そして液体培地に懸濁させた白血球をセンダ
イウイルスで誘導し、前処理は誘導後に30−40℃で60−
90分間行い、培養を30℃またはそれ以下の温度で継続
し、培養終了時に追加分のセンダイウイルスを懸濁液に
加え、その後細胞を分離し、上清のｐHを酸性にするこ
とを特徴とする調製法。 - 【請求項２】 培養終了時に追加分として、200赤血球
凝集活性単位／mlのセンダイウイルスを細胞懸濁液に加
えることを特徴とする請求項1記載の調製法。 - 【請求項３】 培養を100−400mg/mlのCaCl2，250−600
mg/mlのKCl，100−500mg/mlのMgSO4またはMgCl2，4500
−8000mg/mlのNaCl，200−4000mg/mlのNaHCO3，10−250
mg/mlのNaH2PO4，0−6000mg/mlのブドウ糖，0−0.5mg/m
lのFe(NO3)3，を含有する水溶性液体培地で行い、培地
のタンパク質濃度をヒト血清アルブミン、またはガンマ
グロブリンのないヒト血清で1mg/mlに設定することを特
徴とする請求項1または2記載の調製法。 - 【請求項４】 液体培地に抗生物質を補充することを特
徴とする請求項3記載の調製法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU9800554A HU222980B1 (hu) | 1998-03-13 | 1998-03-13 | Eljárás humán Alfa-interferon előállítására |
| HU9800554 | 1998-03-13 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11253192A true JPH11253192A (ja) | 1999-09-21 |
Family
ID=89996253
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11009879A Pending JPH11253192A (ja) | 1998-03-13 | 1999-01-18 | 白血球（アルファ）インタ―フェロンの調製法 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6156542A (ja) |
| EP (1) | EP0945463B1 (ja) |
| JP (1) | JPH11253192A (ja) |
| AT (1) | ATE299893T1 (ja) |
| CA (1) | CA2234396C (ja) |
| DE (1) | DE69830895D1 (ja) |
| HU (1) | HU222980B1 (ja) |
| ZA (1) | ZA9811554B (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6472208B1 (en) * | 1999-12-13 | 2002-10-29 | Héma-Québec | Method of producing human IFN-α using sendai virus-infected hematopoietic stem cells |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3800035A (en) * | 1971-12-07 | 1974-03-26 | Smithkline Corp | Production of interferon from human leukocytes in the absence of serum |
| HU192254B (en) * | 1983-12-13 | 1987-05-28 | Egyt Gyogyszervegyeszeti Gyar | Process for producing human leucocite and human gamma interferons in consecutive steps |
| HUT40576A (en) * | 1984-09-21 | 1987-01-28 | Vnii Chistykh Bio | Process for producing human leucocite interferon |
| JP2888443B2 (ja) * | 1989-12-07 | 1999-05-10 | 日本ケミカルリサーチ株式会社 | ヒト白血球インターフェロン亜種の抗体の製造法及び測定法 |
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- 1998-03-13 HU HU9800554A patent/HU222980B1/hu not_active IP Right Cessation
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- 1998-05-08 AT AT98108457T patent/ATE299893T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-05-08 EP EP98108457A patent/EP0945463B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-05-08 CA CA002234396A patent/CA2234396C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-05-12 US US09/076,194 patent/US6156542A/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-12-17 ZA ZA9811554A patent/ZA9811554B/xx unknown
-
1999
- 1999-01-18 JP JP11009879A patent/JPH11253192A/ja active Pending
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|---|---|
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| EP0945463A3 (en) | 2001-02-07 |
| HU9800554D0 (en) | 1998-05-28 |
| CA2234396C (en) | 2002-11-05 |
| EP0945463A2 (en) | 1999-09-29 |
| DE69830895D1 (de) | 2005-08-25 |
| HUP9800554A3 (en) | 2000-12-28 |
| EP0945463B1 (en) | 2005-07-20 |
| CA2234396A1 (en) | 1999-09-13 |
| HUP9800554A2 (hu) | 1999-12-28 |
| ZA9811554B (en) | 1999-02-17 |
| HU222980B1 (hu) | 2004-01-28 |
| ATE299893T1 (de) | 2005-08-15 |
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