JPH11258241A - ラテックス試薬 - Google Patents
ラテックス試薬Info
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- JPH11258241A JPH11258241A JP5657398A JP5657398A JPH11258241A JP H11258241 A JPH11258241 A JP H11258241A JP 5657398 A JP5657398 A JP 5657398A JP 5657398 A JP5657398 A JP 5657398A JP H11258241 A JPH11258241 A JP H11258241A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 保存安定性を向上させたラテックス試薬及び
それを用いた検査法を提供する。 【解決手段】 抗原あるいは抗体を感作したラテックス
粒子を凍結乾燥する。
それを用いた検査法を提供する。 【解決手段】 抗原あるいは抗体を感作したラテックス
粒子を凍結乾燥する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はラテックス凝集反応
系に用いるラテックス試薬、及びそれを用いた検査法に
関し、さらに詳しくは長期間安定に保存可能なラテック
ス試薬及びそれを用いたＣ型肝炎ウィルスの検査法に関
する。
系に用いるラテックス試薬、及びそれを用いた検査法に
関し、さらに詳しくは長期間安定に保存可能なラテック
ス試薬及びそれを用いたＣ型肝炎ウィルスの検査法に関
する。
【０００２】
【従来の技術】輸血後非Ａ非Ｂ型肝炎の主原因であるＣ
型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）の遺伝子が１９８９年に米国
カイロン社によりクローニングされた。その後、国立ガ
ンセンターの加藤等〔プロシーディングス オブ ナシ
ョナル アカデミー オブ サイエンス ユー・エス・
エー（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．
Ｓ．Ａ．），８７，９５２４−９５２８，１９９０〕、
阪大微研の高見沢等〔ジャーナル オブ ビロロジー
（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，６５，１
１０５−１１１３，１９９１）〕によって、Ｃ型肝炎ウ
イルスの構造タンパク質と非構造タンパク質の全遺伝子
の配列が発表された。Ｃ型肝炎ウイルスの全アミノ酸シ
ークエンスは、Ｃｈｏｏ等〔プロシーディングス オブ
ナショナルアカデミー オブ サイエンス ユー・エ
ス・エー（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ），８８，２４５１−２４５５，１９９１〕等にも
記載されている。
型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）の遺伝子が１９８９年に米国
カイロン社によりクローニングされた。その後、国立ガ
ンセンターの加藤等〔プロシーディングス オブ ナシ
ョナル アカデミー オブ サイエンス ユー・エス・
エー（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．
Ｓ．Ａ．），８７，９５２４−９５２８，１９９０〕、
阪大微研の高見沢等〔ジャーナル オブ ビロロジー
（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，６５，１
１０５−１１１３，１９９１）〕によって、Ｃ型肝炎ウ
イルスの構造タンパク質と非構造タンパク質の全遺伝子
の配列が発表された。Ｃ型肝炎ウイルスの全アミノ酸シ
ークエンスは、Ｃｈｏｏ等〔プロシーディングス オブ
ナショナルアカデミー オブ サイエンス ユー・エ
ス・エー（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ），８８，２４５１−２４５５，１９９１〕等にも
記載されている。
【０００３】カイロン社は、Ｃ型肝炎ウイルスの非構造
タンパク質の一部であるＮＳ３からＮＳ４にかけての領
域（３６３残基）のポリペプチドをＣ末端に持つ融合タ
ンパク質（Ｎ末端側は、ヒト・スーパーオキシドジスム
ターゼ）を酵母で発現させ（特表平２−５００８８０号
公報）、この組換え抗原を用いて、オルソ社と共同でＥ
ＬＩＳＡ〔エンザイム−リンクト イムノソルベント
アッセイ（ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏ
ｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ）〕を開発した。その後、
ＨＣＶ遺伝子の非構造領域あるいは構造領域に由来する
抗原を用いたＨＣＶ抗体検出系が種々開発された。ＨＣ
Ｖ抗体の検査には、ＨＣＶゲノムの非構造領域であるＮ
Ｓ３にコードされているタンパク質抗原の使用が臨床上
不可欠である。しかしながら該抗原にはシステイン残基
が存在するため還元性を有し、これが酸化を受けること
で急速に抗体との結合能を失うことが知られている。ま
た従来の検出系は、測定系に放射性同位元素を用いたラ
ジオイムノアッセイ系が主体であった。しかしながら、
ラジオイムノアッセイ系では検出時間が数時間以上と長
いことや、放射性同位元素を扱うことの出来る施設に制
限があるなど、臨床検査現場でのルーチン検査としては
適当ではない。
タンパク質の一部であるＮＳ３からＮＳ４にかけての領
域（３６３残基）のポリペプチドをＣ末端に持つ融合タ
ンパク質（Ｎ末端側は、ヒト・スーパーオキシドジスム
ターゼ）を酵母で発現させ（特表平２−５００８８０号
公報）、この組換え抗原を用いて、オルソ社と共同でＥ
ＬＩＳＡ〔エンザイム−リンクト イムノソルベント
アッセイ（ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏ
ｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ）〕を開発した。その後、
ＨＣＶ遺伝子の非構造領域あるいは構造領域に由来する
抗原を用いたＨＣＶ抗体検出系が種々開発された。ＨＣ
Ｖ抗体の検査には、ＨＣＶゲノムの非構造領域であるＮ
Ｓ３にコードされているタンパク質抗原の使用が臨床上
不可欠である。しかしながら該抗原にはシステイン残基
が存在するため還元性を有し、これが酸化を受けること
で急速に抗体との結合能を失うことが知られている。ま
た従来の検出系は、測定系に放射性同位元素を用いたラ
ジオイムノアッセイ系が主体であった。しかしながら、
ラジオイムノアッセイ系では検出時間が数時間以上と長
いことや、放射性同位元素を扱うことの出来る施設に制
限があるなど、臨床検査現場でのルーチン検査としては
適当ではない。
【０００４】一方、従来、ラテックス等の不溶性担体粒
子に担持させた抗体または抗原を抗原または抗体と液体
媒体中で反応させ、その反応の進行（ラテックス凝集）
に伴う反応混合物の透過率の減少、すなわち吸光度の増
加から検体中の抗原または抗体の濃度を定量する方法が
知られている（特公昭５８−１１５７５号公報、特許第
２５１０５５１号公報等に記載）。このラテックス凝集
法は、特別な施設を必要とせず、判定結果が迅速に得ら
れる方法であり、これを利用した臨床検査法がＨＣＶ抗
体の検査にも応用されてきている。しかし、ラテックス
試薬は感作した抗原あるいは抗体がラテックス表面から
剥離する等の原因により凝集活性を長期間維持すること
が元来困難である。また、上記ＮＳ３領域由来の抗原を
感作したラテックス試薬は感作抗原の酸化によりさらに
急速にその凝集活性が低下し、正確なＨＣＶ抗体の検出
を困難にしていた。
子に担持させた抗体または抗原を抗原または抗体と液体
媒体中で反応させ、その反応の進行（ラテックス凝集）
に伴う反応混合物の透過率の減少、すなわち吸光度の増
加から検体中の抗原または抗体の濃度を定量する方法が
知られている（特公昭５８−１１５７５号公報、特許第
２５１０５５１号公報等に記載）。このラテックス凝集
法は、特別な施設を必要とせず、判定結果が迅速に得ら
れる方法であり、これを利用した臨床検査法がＨＣＶ抗
体の検査にも応用されてきている。しかし、ラテックス
試薬は感作した抗原あるいは抗体がラテックス表面から
剥離する等の原因により凝集活性を長期間維持すること
が元来困難である。また、上記ＮＳ３領域由来の抗原を
感作したラテックス試薬は感作抗原の酸化によりさらに
急速にその凝集活性が低下し、正確なＨＣＶ抗体の検出
を困難にしていた。
【０００５】
【発明が解決しようとする技術】本発明は、試薬保存中
長期間にわたって正確な判定が可能なラテックス試薬及
びそれを用いたＨＣＶ抗体検査法の提供を目的としてな
されたものである。
長期間にわたって正確な判定が可能なラテックス試薬及
びそれを用いたＨＣＶ抗体検査法の提供を目的としてな
されたものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】上記の状況に鑑みて、本
発明者らは鋭意研究を行った結果、ＨＣＶ抗原を感作し
たラテックスの長期保存安定性を得るために、ラテック
スの分散安定化剤あるいは抗原の酸化防止剤を加え、凍
結乾燥を行う方法を確立した。さらに、このＨＣＶ抗原
感作ラテックスを用いることによりＨＣＶ感染症を迅速
かつ正確に捉えることが可能になった。すなわち、本発
明は抗原あるいは抗体を感作したラテックス粒子を凍結
乾燥したラテックス試薬及びそれを用いたＣ型肝炎ウイ
ルス検出方法に存する。
発明者らは鋭意研究を行った結果、ＨＣＶ抗原を感作し
たラテックスの長期保存安定性を得るために、ラテック
スの分散安定化剤あるいは抗原の酸化防止剤を加え、凍
結乾燥を行う方法を確立した。さらに、このＨＣＶ抗原
感作ラテックスを用いることによりＨＣＶ感染症を迅速
かつ正確に捉えることが可能になった。すなわち、本発
明は抗原あるいは抗体を感作したラテックス粒子を凍結
乾燥したラテックス試薬及びそれを用いたＣ型肝炎ウイ
ルス検出方法に存する。
【０００７】
【発明の実施の形態】本発明で用いるラテックス粒子と
しては、抗原あるいは抗体を担持しうるものであれば特
に制限されないが、通常、試料溶液に不溶性の有機高分
子物質を使用することが好ましい。かかる有機高分子物
質よりなる微粒子としては、ポリスチレン、スチレン−
マレイン酸共重合体、スチレン−メタクリル酸共重合
体、アクリル酸−スチレン共重合体、スチレン−アクリ
ル酸−アクリルアクリレート共重合体、酢酸ビニル−ア
クリル酸共重合体、スチレン−ブタジエン共重合体、ポ
リアクリル酸エステル、ポリメタクリル酸エステル等の
合成ポリマーよりなるラテックス粒子が例示できる。こ
れらの中で、特にポリスチレンラテックス粒子が好まし
い。また、ラテックス粒子の直径は、０．１〜１０μｍ
のものが使用可能であるが、通常０．１〜１μｍの範囲
内が好ましい。
しては、抗原あるいは抗体を担持しうるものであれば特
に制限されないが、通常、試料溶液に不溶性の有機高分
子物質を使用することが好ましい。かかる有機高分子物
質よりなる微粒子としては、ポリスチレン、スチレン−
マレイン酸共重合体、スチレン−メタクリル酸共重合
体、アクリル酸−スチレン共重合体、スチレン−アクリ
ル酸−アクリルアクリレート共重合体、酢酸ビニル−ア
クリル酸共重合体、スチレン−ブタジエン共重合体、ポ
リアクリル酸エステル、ポリメタクリル酸エステル等の
合成ポリマーよりなるラテックス粒子が例示できる。こ
れらの中で、特にポリスチレンラテックス粒子が好まし
い。また、ラテックス粒子の直径は、０．１〜１０μｍ
のものが使用可能であるが、通常０．１〜１μｍの範囲
内が好ましい。
【０００８】上記担体に感作する抗原あるいは抗体は、
被検検体中に存在する抗体あるいは抗原と反応しうるも
のであれば特に制限はない。感作抗体として用いられる
ものは、例えば抗原を免疫した兎の血液から精製して得
られる。抗体は既知の精製方法、硫酸アンモニウムによ
る塩析、プロテインＡアフィニィティークロマトグラフ
ィー、イオン交換クロマトグラフィー、ゲルクロマトグ
ラフィー、電気泳動などにより精製して用いることが出
来る。得られた抗体は、適当な緩衝液や生理的食塩水で
希釈してラテックス感作に用いることが出来る。用いら
れる緩衝液としてはトリス塩酸緩衝液、リン酸緩衝液、
ホウ酸緩衝液等があげられる。
被検検体中に存在する抗体あるいは抗原と反応しうるも
のであれば特に制限はない。感作抗体として用いられる
ものは、例えば抗原を免疫した兎の血液から精製して得
られる。抗体は既知の精製方法、硫酸アンモニウムによ
る塩析、プロテインＡアフィニィティークロマトグラフ
ィー、イオン交換クロマトグラフィー、ゲルクロマトグ
ラフィー、電気泳動などにより精製して用いることが出
来る。得られた抗体は、適当な緩衝液や生理的食塩水で
希釈してラテックス感作に用いることが出来る。用いら
れる緩衝液としてはトリス塩酸緩衝液、リン酸緩衝液、
ホウ酸緩衝液等があげられる。
【０００９】また、上記担体に担持する抗原としては、
例えばＨＣＶ抗原があげられる。用いるＨＣＶ抗原はＨ
ＣＶ感染者の血液中に存在するＨＣＶ抗体と反応しうる
ものであれば特に制限はない。ＨＣＶ抗原として用いら
れるものとしてはＮＳ３、ＮＳ４及びコア領域由来のＣ
２５抗原、ＮＳ３領域由来のＣ３３ｃ抗原、ＮＳ４領域
由来のＣ１００抗原、ＮＳ３及びＮＳ４領域由来のＣ２
００抗原、ＮＳ５領域由来のＮＳ５抗原、コア領域由来
のＣ２２−３抗原等の組換え抗原があげられる。（Ｃ２
５、Ｃ３３ｃ、Ｃ２００、Ｃ２２−３、ＮＳ５の各抗原
については、奥田勲 他：ＣＬＥＩＡ法によるＨＣＶ抗
体測定の意義、医学と薬学、３７（５），１１８１−１
１８８，１９９７参照）これらの抗原は、例えば組換え
遺伝子を酵母で発現させる等、公知の方法により得られ
る。得られた抗原は精製することなくそのまま、或いは
既知の精製方法により精製して用いることが出来る。ラ
テックス凝集系での非特異の反応を防止するため、必要
に応じて抗原を修飾しても良い。得られた精製または未
精製ＨＣＶ抗原は、適当な緩衝液や生理的食塩水で希釈
してラテックス感作に用いることが出来る。
例えばＨＣＶ抗原があげられる。用いるＨＣＶ抗原はＨ
ＣＶ感染者の血液中に存在するＨＣＶ抗体と反応しうる
ものであれば特に制限はない。ＨＣＶ抗原として用いら
れるものとしてはＮＳ３、ＮＳ４及びコア領域由来のＣ
２５抗原、ＮＳ３領域由来のＣ３３ｃ抗原、ＮＳ４領域
由来のＣ１００抗原、ＮＳ３及びＮＳ４領域由来のＣ２
００抗原、ＮＳ５領域由来のＮＳ５抗原、コア領域由来
のＣ２２−３抗原等の組換え抗原があげられる。（Ｃ２
５、Ｃ３３ｃ、Ｃ２００、Ｃ２２−３、ＮＳ５の各抗原
については、奥田勲 他：ＣＬＥＩＡ法によるＨＣＶ抗
体測定の意義、医学と薬学、３７（５），１１８１−１
１８８，１９９７参照）これらの抗原は、例えば組換え
遺伝子を酵母で発現させる等、公知の方法により得られ
る。得られた抗原は精製することなくそのまま、或いは
既知の精製方法により精製して用いることが出来る。ラ
テックス凝集系での非特異の反応を防止するため、必要
に応じて抗原を修飾しても良い。得られた精製または未
精製ＨＣＶ抗原は、適当な緩衝液や生理的食塩水で希釈
してラテックス感作に用いることが出来る。
【００１０】上記抗原あるいは抗体のラテックス粒子へ
の感作は、通常用いられる方法、例えばラテックス粒子
と抗原あるいは抗体の溶液とを混合することによって起
こる物理的な吸着を用いる物理吸着法、カルボジイミド
などのカップリング剤により、ラテックス粒子表面のカ
ルボキシル基やアミノ基と抗原あるいは抗体とを化学的
に結合させる化学結合法等により行える。また、抗原あ
るいは抗体をスペーサー分子を介してラテックス粒子に
結合させても良い。さらに、アルブミンなどのタンパク
質に化学結合法を用いて結合させた後に、そのタンパク
質をラテックス粒子に結合させても良い。ラテックス粒
子への抗原あるいは抗体の感作量に特に制限はないが、
ラテックス粒子の場合、通常はラテックス懸濁液１ｍｌ
に対して０．０１〜２ｍｇが適当であるが、例えばＨＣ
ＶのＣ２５抗原では、ラテックス懸濁液１ｍｌに対して
０．０２〜０．１ｍｇが好ましい。
の感作は、通常用いられる方法、例えばラテックス粒子
と抗原あるいは抗体の溶液とを混合することによって起
こる物理的な吸着を用いる物理吸着法、カルボジイミド
などのカップリング剤により、ラテックス粒子表面のカ
ルボキシル基やアミノ基と抗原あるいは抗体とを化学的
に結合させる化学結合法等により行える。また、抗原あ
るいは抗体をスペーサー分子を介してラテックス粒子に
結合させても良い。さらに、アルブミンなどのタンパク
質に化学結合法を用いて結合させた後に、そのタンパク
質をラテックス粒子に結合させても良い。ラテックス粒
子への抗原あるいは抗体の感作量に特に制限はないが、
ラテックス粒子の場合、通常はラテックス懸濁液１ｍｌ
に対して０．０１〜２ｍｇが適当であるが、例えばＨＣ
ＶのＣ２５抗原では、ラテックス懸濁液１ｍｌに対して
０．０２〜０．１ｍｇが好ましい。
【００１１】上記抗原あるいは抗体を感作したラテック
ス粒子の懸濁液としては、純水あるいは適当な緩衝液、
例えばＭＥＳ緩衝液、トリス塩酸緩衝液、リン酸緩衝
液、ホウ酸緩衝液等を用いる。凍結乾燥する前のラテッ
クス粒子の懸濁液に分散安定化剤を添加してもよい。ラ
テックス粒子を凍結乾燥すると、復水した場合にラテッ
クス粒子が凝集してしまうことがある。分散安定剤はこ
れを防ぐために好ましい。本発明において使用される分
散安定剤としては、糖類及び／又は界面活性剤が挙げら
れる。糖類としては、例えばスクロース、ラクトース、
マンニトールなどが挙げられ、界面活性剤としてはドデ
シル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、Ｔｗｅｅｎ ８０、Ｔ
ｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、Ｎ−ドデカノイルサルコシン
酸ナトリウムなどが挙げられる。糖類を使用する場合、
ラテックス粒子の懸濁液に対して通常１〜２０％、好ま
しくは２〜１０％が添加される。界面活性剤を使用する
場合、ラテックス粒子の懸濁液に対して通常０．００５
〜０．２％、好ましくは０．０１〜０．１％が添加され
る。
ス粒子の懸濁液としては、純水あるいは適当な緩衝液、
例えばＭＥＳ緩衝液、トリス塩酸緩衝液、リン酸緩衝
液、ホウ酸緩衝液等を用いる。凍結乾燥する前のラテッ
クス粒子の懸濁液に分散安定化剤を添加してもよい。ラ
テックス粒子を凍結乾燥すると、復水した場合にラテッ
クス粒子が凝集してしまうことがある。分散安定剤はこ
れを防ぐために好ましい。本発明において使用される分
散安定剤としては、糖類及び／又は界面活性剤が挙げら
れる。糖類としては、例えばスクロース、ラクトース、
マンニトールなどが挙げられ、界面活性剤としてはドデ
シル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、Ｔｗｅｅｎ ８０、Ｔ
ｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、Ｎ−ドデカノイルサルコシン
酸ナトリウムなどが挙げられる。糖類を使用する場合、
ラテックス粒子の懸濁液に対して通常１〜２０％、好ま
しくは２〜１０％が添加される。界面活性剤を使用する
場合、ラテックス粒子の懸濁液に対して通常０．００５
〜０．２％、好ましくは０．０１〜０．１％が添加され
る。
【００１２】本発明のラテックス粒子の懸濁液には、さ
らに酸化防止剤を加えても良い。酸化防止剤の添加は、
ラテックス粒子に感作する抗原として、還元性抗原、例
えばＨＣＶのＣ２５抗原、Ｃ３３ｃ抗原等を使用する場
合、特に有効である。酸化防止剤としては、例えばジチ
オスレイトール（ＤＴＴ）、Ｎ−アセチル−Ｌ−システ
イン、Ｌ−アルギニン、亜硫酸ナトリウム、アスコルビ
ン酸ナトリウム、グルタチオン等が挙げられる。酸化防
止剤の添加量は、使用する抗原等によっても異なるが、
通常０．０１〜１０ｍＭ、好ましくは０．１〜５ｍＭで
ある。上記抗原あるいは抗体を感作したラテックス粒子
懸濁液の凍結乾燥は、タンパク質水溶液等の凍結乾燥と
同様に通常の凍結乾燥機によって行い、その方法に特に
制限はない。ラテックス懸濁液の場合、試料温度−３０
℃以下で予備凍結を２時間以上行った後、凍結乾燥機槽
内を減圧し、圧力０．１Ｔｏｒｒ以下になってから試料
棚の温度をを２０時間程度かけて室温まで上昇させるこ
とで抗原あるいは抗体感作ラテックスを乾燥する。
らに酸化防止剤を加えても良い。酸化防止剤の添加は、
ラテックス粒子に感作する抗原として、還元性抗原、例
えばＨＣＶのＣ２５抗原、Ｃ３３ｃ抗原等を使用する場
合、特に有効である。酸化防止剤としては、例えばジチ
オスレイトール（ＤＴＴ）、Ｎ−アセチル−Ｌ−システ
イン、Ｌ−アルギニン、亜硫酸ナトリウム、アスコルビ
ン酸ナトリウム、グルタチオン等が挙げられる。酸化防
止剤の添加量は、使用する抗原等によっても異なるが、
通常０．０１〜１０ｍＭ、好ましくは０．１〜５ｍＭで
ある。上記抗原あるいは抗体を感作したラテックス粒子
懸濁液の凍結乾燥は、タンパク質水溶液等の凍結乾燥と
同様に通常の凍結乾燥機によって行い、その方法に特に
制限はない。ラテックス懸濁液の場合、試料温度−３０
℃以下で予備凍結を２時間以上行った後、凍結乾燥機槽
内を減圧し、圧力０．１Ｔｏｒｒ以下になってから試料
棚の温度をを２０時間程度かけて室温まで上昇させるこ
とで抗原あるいは抗体感作ラテックスを乾燥する。
【００１３】上記抗原あるいは抗体を感作したラテック
ス粒子の凍結乾燥品の復水には、純水あるいは適当な緩
衝液、例えばＭＥＳ緩衝液、トリス塩酸緩衝液、リン酸
緩衝液、ホウ酸緩衝液等を用いる。また、復水時のラテ
ックス粒子の分散性を向上させるために界面活性剤、例
えばドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、Ｔｗｅｅｎ２
０、Ｔｗｅｅｎ ８０、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、Ｎ
−ドデカノイルサルコシン酸ナトリウム等を復水液に加
えても良い。本発明で用いられる生体成分としては、血
液から分離した血清、血漿、鼻汁、尿等であるが、一般
的には血液から分離した血清または血漿である。血清ま
たは血漿の分離は、既知の遠心法などにより被検検体中
の抗原あるいは抗体を失うことなく実施できる。
ス粒子の凍結乾燥品の復水には、純水あるいは適当な緩
衝液、例えばＭＥＳ緩衝液、トリス塩酸緩衝液、リン酸
緩衝液、ホウ酸緩衝液等を用いる。また、復水時のラテ
ックス粒子の分散性を向上させるために界面活性剤、例
えばドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、Ｔｗｅｅｎ２
０、Ｔｗｅｅｎ ８０、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、Ｎ
−ドデカノイルサルコシン酸ナトリウム等を復水液に加
えても良い。本発明で用いられる生体成分としては、血
液から分離した血清、血漿、鼻汁、尿等であるが、一般
的には血液から分離した血清または血漿である。血清ま
たは血漿の分離は、既知の遠心法などにより被検検体中
の抗原あるいは抗体を失うことなく実施できる。
【００１４】かくして得られる抗原あるいは抗体を感作
したラテックス粒子と、血清や血漿等の試料溶液とを混
合し、試料中の目的とする抗体あるいは抗原と、ラテッ
クス粒子に感作された抗原あるいは抗体とを反応せし
め、反応によって生じるラテックス粒子の凝集の程度を
測定し、試料中の抗体あるいは抗原の存在の検出又は濃
度の算出を行う。例えば、ＨＣＶのＣ２５抗原を感作し
たラテックスを用いた場合、被検検体中の抗Ｃ２５抗体
との反応によるラテックス粒子の凝集の程度により抗Ｃ
２５抗体濃度を算出し、ＨＣＶ感染の有無を判定する。
上記反応は通常、プラスチックセル若しくはガラスセル
内で行われる。この場合、セル外部より可視光から近赤
外域の光、例えば通常４００〜２４００ｎｍ、好ましく
は６００〜１０００ｎｍの光を照射し、吸光度変化又は
散乱光の強度変化を検出してラテックス粒子の凝集の程
度を測定する。この時、あらかじめ作成した検量線を用
いれば、試料中の抗原あるいは抗体の濃度が算出でき
る。
したラテックス粒子と、血清や血漿等の試料溶液とを混
合し、試料中の目的とする抗体あるいは抗原と、ラテッ
クス粒子に感作された抗原あるいは抗体とを反応せし
め、反応によって生じるラテックス粒子の凝集の程度を
測定し、試料中の抗体あるいは抗原の存在の検出又は濃
度の算出を行う。例えば、ＨＣＶのＣ２５抗原を感作し
たラテックスを用いた場合、被検検体中の抗Ｃ２５抗体
との反応によるラテックス粒子の凝集の程度により抗Ｃ
２５抗体濃度を算出し、ＨＣＶ感染の有無を判定する。
上記反応は通常、プラスチックセル若しくはガラスセル
内で行われる。この場合、セル外部より可視光から近赤
外域の光、例えば通常４００〜２４００ｎｍ、好ましく
は６００〜１０００ｎｍの光を照射し、吸光度変化又は
散乱光の強度変化を検出してラテックス粒子の凝集の程
度を測定する。この時、あらかじめ作成した検量線を用
いれば、試料中の抗原あるいは抗体の濃度が算出でき
る。
【００１５】このような凝集測定を行う装置として、三
菱化学株式会社の全自動免疫血清検査システムＬＰＩＡ
−Ａ７００、ロシュ・ダイアグノスティックス・システ
ムズ社のＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡ、及び日立製作所社の７
０７０型日立自動分析装置等があげられる。また、上記
ラテックス粒子の凝集反応は、通常、生理的食塩水、ｐ
Ｈ５〜１０程度の適当な緩衝液、例えばトリス塩酸緩衝
液、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液等の溶液中で行われ
る。また、ラテックス粒子と試料中のタンパク質との非
特異的結合を抑制するために、適当な界面活性剤、例え
ばドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、Ｔｗｅｅｎ ２
０、Ｔｗｅｅｎ ８０、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００等の
吸着抑制剤を反応液に添加しても良い。上記反応及び測
定工程等を含む免疫検査に用いるための試薬キットは、
それ自体既知の通常用いられる方法により調製できる。
このようなキットは、通常の免疫凝集反応を利用したキ
ットと同様の構成によって提供される。すなわち、本発
明の試薬キットは、少なくとも、抗原あるいは抗体が感
作された凍結乾燥状態のラテックス試薬を含み、さらに
任意の要素として、試料希釈液（復水液）、標準物質等
を含む。具体例としては、凍結乾燥したラテックス試
薬、緩衝液及び復水液の３つの成分を含むキットが挙げ
られる。このキットの場合、緩衝液は安定化剤として用
いられる。
菱化学株式会社の全自動免疫血清検査システムＬＰＩＡ
−Ａ７００、ロシュ・ダイアグノスティックス・システ
ムズ社のＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡ、及び日立製作所社の７
０７０型日立自動分析装置等があげられる。また、上記
ラテックス粒子の凝集反応は、通常、生理的食塩水、ｐ
Ｈ５〜１０程度の適当な緩衝液、例えばトリス塩酸緩衝
液、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液等の溶液中で行われ
る。また、ラテックス粒子と試料中のタンパク質との非
特異的結合を抑制するために、適当な界面活性剤、例え
ばドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、Ｔｗｅｅｎ ２
０、Ｔｗｅｅｎ ８０、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００等の
吸着抑制剤を反応液に添加しても良い。上記反応及び測
定工程等を含む免疫検査に用いるための試薬キットは、
それ自体既知の通常用いられる方法により調製できる。
このようなキットは、通常の免疫凝集反応を利用したキ
ットと同様の構成によって提供される。すなわち、本発
明の試薬キットは、少なくとも、抗原あるいは抗体が感
作された凍結乾燥状態のラテックス試薬を含み、さらに
任意の要素として、試料希釈液（復水液）、標準物質等
を含む。具体例としては、凍結乾燥したラテックス試
薬、緩衝液及び復水液の３つの成分を含むキットが挙げ
られる。このキットの場合、緩衝液は安定化剤として用
いられる。
【００１６】
【実施例】以下、本発明を実施例により更に具体的に説
明するが、本発明はこれらにより制限されるものではな
い。 実施例１ 凍結乾燥ＨＣＶ抗原ラテックス試薬の調製 ＨＣＶ Ｃ２５抗原を直径０．４８μｍのポリスチレン
ラテックス（１０％懸濁液；ＪＳＲ社製）表面に以下の
方法により感作し、ラテックス試薬とした。１％、２０
ｍＬのラテックス懸濁液に０．１ｍｇ／ｍＬのＣ２５抗
原を加え３０分間室温にて反応を行った。上記ラテック
スを遠心後、０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）に
て３０分間ブロッキングを行い、遠心後、４％ スクロ
ース、０．０１％ ＳＤＳ、０．１ｍＭ ＤＴＴを含む
ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６）に懸濁させラテックス試薬溶液
とした。１０ｍＬガラスバイアル中に上記ラテックス試
薬溶液３ｍＬを分注し、凍結乾燥を行い、凍結乾燥ＨＣ
Ｖ抗原ラテックス試薬とし、４℃にて保存した。
明するが、本発明はこれらにより制限されるものではな
い。 実施例１ 凍結乾燥ＨＣＶ抗原ラテックス試薬の調製 ＨＣＶ Ｃ２５抗原を直径０．４８μｍのポリスチレン
ラテックス（１０％懸濁液；ＪＳＲ社製）表面に以下の
方法により感作し、ラテックス試薬とした。１％、２０
ｍＬのラテックス懸濁液に０．１ｍｇ／ｍＬのＣ２５抗
原を加え３０分間室温にて反応を行った。上記ラテック
スを遠心後、０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）に
て３０分間ブロッキングを行い、遠心後、４％ スクロ
ース、０．０１％ ＳＤＳ、０．１ｍＭ ＤＴＴを含む
ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６）に懸濁させラテックス試薬溶液
とした。１０ｍＬガラスバイアル中に上記ラテックス試
薬溶液３ｍＬを分注し、凍結乾燥を行い、凍結乾燥ＨＣ
Ｖ抗原ラテックス試薬とし、４℃にて保存した。
【００１７】比較例１ 対照として、上記ＨＣＶ抗原ラテックスをＭＥＳ緩衝液
（ｐＨ６）のみにて懸濁し、凍結乾燥しない状態にて４
℃保存した試薬を調整した。
（ｐＨ６）のみにて懸濁し、凍結乾燥しない状態にて４
℃保存した試薬を調整した。
【００１８】実施例２及び比較例２ ＨＣＶ抗体の自動
測定 ＨＣＶ抗体陽性検体について検討を行った。検体３０μ
Ｌ、ＢＳＡ含有トリス塩酸緩衝液１４０μＬ、実施例１
で得られた凍結乾燥ＨＣＶ抗原ラテックス試薬を０．０
２％ ＳＤＳを含むＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６）にて復水し
たもの２０μＬを混合し反応キュベットに自動分注後、
近赤外光（８００ｎｍ）の吸収の増加を１０分間測定す
ることにより免疫反応を測定した。同様に実施例１に示
した対照ラテックス試薬も同様に測定した。測定は全自
動免疫血清検査システムＬＰＩＡ−Ａ７００を用いて行
った。測定は凍結乾燥ＨＣＶ抗原ラテックス試薬及び対
照ラテックス試薬を、それぞれ調製した日から８週の間
で経時的に行った。結果を図１に示す。ＨＣＶ抗体陽性
検体に対する反応性は、凍結乾燥を行ったＨＣＶ抗原ラ
テックスの場合は８週間まで変化が認められなかった。
一方、凍結乾燥を行っていないＨＣＶ抗原ラテックスの
場合は１週間でその反応性は著しく低下し、測定に有効
な感度を失った。
測定 ＨＣＶ抗体陽性検体について検討を行った。検体３０μ
Ｌ、ＢＳＡ含有トリス塩酸緩衝液１４０μＬ、実施例１
で得られた凍結乾燥ＨＣＶ抗原ラテックス試薬を０．０
２％ ＳＤＳを含むＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６）にて復水し
たもの２０μＬを混合し反応キュベットに自動分注後、
近赤外光（８００ｎｍ）の吸収の増加を１０分間測定す
ることにより免疫反応を測定した。同様に実施例１に示
した対照ラテックス試薬も同様に測定した。測定は全自
動免疫血清検査システムＬＰＩＡ−Ａ７００を用いて行
った。測定は凍結乾燥ＨＣＶ抗原ラテックス試薬及び対
照ラテックス試薬を、それぞれ調製した日から８週の間
で経時的に行った。結果を図１に示す。ＨＣＶ抗体陽性
検体に対する反応性は、凍結乾燥を行ったＨＣＶ抗原ラ
テックスの場合は８週間まで変化が認められなかった。
一方、凍結乾燥を行っていないＨＣＶ抗原ラテックスの
場合は１週間でその反応性は著しく低下し、測定に有効
な感度を失った。
【００１９】
【発明の効果】本発明によれば、抗原あるいは抗体を感
作したラテックス試薬を凍結乾燥することで、簡便かつ
試薬保存中長期間にわたって正確に抗体あるいは抗原の
測定が可能となる。上記特徴を有する本発明の方法は、
従来困難であった活性を失いやすい抗原等を感作したラ
テックス試薬の長期保存においても、安定性向上のため
有効である。
作したラテックス試薬を凍結乾燥することで、簡便かつ
試薬保存中長期間にわたって正確に抗体あるいは抗原の
測定が可能となる。上記特徴を有する本発明の方法は、
従来困難であった活性を失いやすい抗原等を感作したラ
テックス試薬の長期保存においても、安定性向上のため
有効である。
【図１】ＨＣＶ抗原ラテックス試薬の凍結乾燥が反応性
の経時変化に及ぼす影響を示した図である。縦軸は測定
吸光度の時間当たりの変化に係数を乗じた値である。
の経時変化に及ぼす影響を示した図である。縦軸は測定
吸光度の時間当たりの変化に係数を乗じた値である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 鷲巣 正吉 茨城県稲敷郡阿見町中央八丁目５番１号 株式会社ユカ・メディアス開発センター内
Claims (8)
- 【請求項１】 抗原あるいは抗体を感作したラテックス
粒子を凍結乾燥してなるラテックス試薬。 - 【請求項２】 抗原あるいは抗体を感作したラテックス
粒子の懸濁液に、分散安定化剤を添加した後、凍結乾燥
してなるラテックス試薬。 - 【請求項３】 分散安定剤が、糖類及び／または界面活
性剤である請求項２のラテックス試薬。 - 【請求項４】 抗原あるいは抗体を感作してなるラテッ
クス粒子の懸濁液に、酸化防止剤を添加した後、凍結乾
燥してなる請求項１ないし請求項３記載のラテックス試
薬。 - 【請求項５】 抗原がＣ型肝炎ウィルス抗原である請求
項１ないし請求項４記載のラテックス試薬。 - 【請求項６】 抗原がＣ型肝炎ウィルスのＣ２５抗原で
ある請求項５記載のラテックス試薬。 - 【請求項７】 請求項５または請求項６記載のラテック
ス試薬をラテックス凝集系に用いるＣ型肝炎ウイルス抗
体検査法。 - 【請求項８】 ３つの成分Ａ、Ｂ及びＣを含むキットで
あって、成分Ａは請求項１ないし請求項６記載のいずれ
かに記載のラテックス試薬を含み、成分Ｂは緩衝液を含
み、成分Ｃは復水液を含むことを特徴とするキット。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5657398A JPH11258241A (ja) | 1998-03-09 | 1998-03-09 | ラテックス試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5657398A JPH11258241A (ja) | 1998-03-09 | 1998-03-09 | ラテックス試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11258241A true JPH11258241A (ja) | 1999-09-24 |
Family
ID=13030901
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5657398A Pending JPH11258241A (ja) | 1998-03-09 | 1998-03-09 | ラテックス試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11258241A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002365297A (ja) * | 2001-06-08 | 2002-12-18 | Sekisui Chem Co Ltd | 抗リン脂質抗体測定試薬 |
| WO2010007857A1 (ja) * | 2008-07-14 | 2010-01-21 | アルフレッサファーマ株式会社 | 反応性物質が結合した微小粒子の安定化方法および該微小粒子含有試薬 |
| JP2010204037A (ja) * | 2009-03-05 | 2010-09-16 | Fujifilm Corp | 結合性物質を固定化した乾燥粒子の製造方法 |
| WO2014132833A1 (ja) | 2013-03-01 | 2014-09-04 | 富士レビオ株式会社 | 未感作ラテックス試薬の劣化防止方法 |
| JP2018105716A (ja) * | 2016-12-27 | 2018-07-05 | Jsr株式会社 | ラテックス粒子分散液の保管方法 |
-
1998
- 1998-03-09 JP JP5657398A patent/JPH11258241A/ja active Pending
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002365297A (ja) * | 2001-06-08 | 2002-12-18 | Sekisui Chem Co Ltd | 抗リン脂質抗体測定試薬 |
| WO2010007857A1 (ja) * | 2008-07-14 | 2010-01-21 | アルフレッサファーマ株式会社 | 反応性物質が結合した微小粒子の安定化方法および該微小粒子含有試薬 |
| JP2010204037A (ja) * | 2009-03-05 | 2010-09-16 | Fujifilm Corp | 結合性物質を固定化した乾燥粒子の製造方法 |
| WO2014132833A1 (ja) | 2013-03-01 | 2014-09-04 | 富士レビオ株式会社 | 未感作ラテックス試薬の劣化防止方法 |
| JP2018105716A (ja) * | 2016-12-27 | 2018-07-05 | Jsr株式会社 | ラテックス粒子分散液の保管方法 |
| WO2018124203A1 (ja) * | 2016-12-27 | 2018-07-05 | Jsr株式会社 | ラテックス粒子分散液の保管方法 |
| US12222348B2 (en) | 2016-12-27 | 2025-02-11 | Jsr Corporation | Method of storing latex particle dispersion liquid |
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| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20040723 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20040803 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20050208 |