JPH11271636A

JPH11271636A - 走査型レーザ顕微鏡

Info

Publication number: JPH11271636A
Application number: JP7450798A
Authority: JP
Inventors: Naoki Hayashi; 直樹林
Original assignee: Olympus Optical Co Ltd
Current assignee: Olympus Corp
Priority date: 1998-03-23
Filing date: 1998-03-23
Publication date: 1999-10-08
Anticipated expiration: 2018-03-23
Also published as: JP4262319B2

Abstract

(57)【要約】【課題】各蛍光波長ごとに共焦点効果及び明るさが最適
な像を取得することの可能な走査型レーザ顕微鏡を提
供。【解決手段】異なる波長（例えば４８８nm，５３０nm，
６４８nm）を有する複数のレーザ光を発するレーザ光源
(10)と、このレーザ光源(10)から発せられる各波長のレ
ーザ光から特定波長のレーザ光を選択するレーザ光選択
手段(30)と、このレーザ光選択手段(30)により選択され
たレーザ光をレーザ走査手段(5) を介して標本(9) に照
射する手段と、この手段により照射されたレーザ光によ
り励起された標本(9) が発した蛍光を通過させる如く標
本(9) の面と共役な位置に設置され前記蛍光の波長に対
応した開口径に切換え可能な共焦点ピンホール(42)と、
この共焦点ピンホール(42)の開口径を前記蛍光の波長
（５２０nm，６１５nm，６７０nm）にあわせて切換え制
御する制御装置(41)とを備えている。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、レーザ光源から発
したレーザ光を走査して標本に照射し、このレーザ光の
照射により励起された標本が発した蛍光を、共焦点光学
系を通して結像させ、これを各蛍光波長毎に分光して検
出するようにした走査型レーザ顕微鏡に関する。

【０００２】

【従来の技術】図２は従来の走査型レーザ顕微鏡の光学
系の構成を示す図である。図２において、１はレーザ光
源、２はレーザ光の光束径を拡大するためのビームエク
スパンダ、３はレーザ波長を選択するためのレーザライ
ンフィルタ、４はダイクロイックミラーである。また、
５はガルバノミラー等のＸ−Ｙレーザ走査光学系、６は
瞳リレーレンズ、７は観察光学系、８は対物レンズ、９
は標本である。

【０００３】１１は結像レンズ、１２は前記結像レンズ
１１の結像位置に配置された共焦点ピンホール、１３は
前記共焦点ピンホール１２を通過する発散光（広がり角
を持つ光）を平行光線にするコリメート光学系であり、
これら１１〜１３によって共焦点光学系を構成してい
る。１４および１５は分光用のダイクロイックミラー、
１６はミラー、２４，２５，２６は光検出器である。

【０００４】この走査型レーザ顕微鏡においては、レー
ザ光源１からレーザ光が発せられると、このレーザ光は
ビームエクスパンダ２で対物レンズ８のＮＡに応じた光
束径に拡大され、レーザラインフィルタ３により所望の
レーザ波長が選択された後、ダイクロイックミラー４で
反射され、Ｘ−Ｙレーザ走査光学系５でＸＹ偏向された
のち、瞳リレーレンズ６，観察光学系７，対物レンズ８
を介して標本９に照射される。

【０００５】この照射により励起された標本９が発した
所定波長の蛍光は、対物レンズ８からダイクロイックミ
ラー４までの経路を戻り、ダイクロイックミラー４を透
過する。ダイクロイックミラー４を透過した蛍光は、結
像レンズ１１で集光されて共焦点ピンホール１２を通過
する。共焦点ピンホール１２を通過した発散光（広がり
角を持つビーム）は、コリメート光学系１３を透過する
ことにより平行光線となる。この平行光線は、蛍光の波
長域毎に分光されて検出される。即ち第１レベル以下の
波長の光はダイクロイックミラー１４で反射されて光検
出器２４により検出される。第２レベル以下の波長の光
はダイクロイックミラー１５で反射されて光検出器２５
により検出される。そして第２レベルを越えた波長の光
はミラー１６で反射されて光検出器２６により検出され
る。

【０００６】かくしてこの走査型レーザ顕微鏡によれ
ば、共焦点ピンホール１２を通過した後の蛍光が所定波
長毎に分光され、複数の異なる波長の光として光検出器
２４、２５、２６でそれぞれ検出され、測光される。そ
の輝度情報をそれぞれの走査ポイントに対応させて、モ
ニタ上に二次元表示した画像が得られていた。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】上述した従来の走査型
レーザ顕微鏡には次のような問題点がある。上記構成の
走査型レーザ顕微鏡では、標本９を多重染色により蛍光
観察する場合、複数種の波長の蛍光が一つの共焦点ピン
ホール１２を通過することになる。一つの共焦点ピンホ
ール１２を回折径の異なる複数の蛍光が通るということ
は、下記の（１）式を満たす回折径Ｄのうち、一つの蛍
光波長λの回折径Ｄのみが上記共焦点ピンホール径に適
合するだけである。つまりその他の蛍光波長にとって
は、最適なピンホール径ｄではないために、共焦点効果
の弱い像あるいは明るさをロスした像になってしまう。

【０００８】Ｄ＝１．２２（λ／ＮＡ） …（１）ただし、Ｄ…回折径 λ…蛍光波長ＮＡ…共焦点ピンホールへ入射する光の開口数ここでピンホール径ｄと回折径Ｄとが、ｄ≦Ｄの場合
は、共焦点効果は変わらないが明るさが減少する。また
ｄ＞Ｄの場合は、明るくはなるが共焦点効果は低下す
る。従って短波長でｄ＝Ｄにすると、長波長では明るさ
が失われてしまう。逆に長波長でｄ＝Ｄにすると、短波
長では明るくはなるが共焦点効果が低下してしまう。

【０００９】本発明の目的は、観察したい標本から発す
る全ての蛍光波長に対し、共焦点効果が高く且つ明るさ
損失の少ない像を、得ることのできる走査型レーザ顕微
鏡を提供することにある。

【００１０】

【課題を解決するための手段】前記課題を解決し目的を
達成するために、本発明の走査型レーザ顕微鏡は以下に
示す如く構成されている。（１）本発明の走査型レーザ顕微鏡は、異なる波長を有
する複数のレーザ光を発するレーザ光源と、このレーザ
光源から発せられる各波長のレーザ光から特定波長のレ
ーザ光を選択するレーザ光選択手段と、このレーザ光選
択手段により選択されたレーザ光を走査して標本に照射
する手段と、この照射手段により照射されたレーザ光に
より励起された前記標本が発した蛍光を通過させる如く
前記標本の面と共役な位置に設置され前記蛍光の波長に
対応した開口径に切換え可能な共焦点ピンホールと、こ
の共焦点ピンホールの開口径を前記蛍光の波長にあわせ
て切換え制御する制御装置とを備えたことを特徴として
いる。（２）本発明の走査型レーザ顕微鏡は、上記（１）に記
載した顕微鏡であって、上記制御装置は、レーザ光源か
ら発せられるレーザ光の波長情報または標本の蛍光色素
情報に基づいて、標本が発する蛍光波長の回折径を算出
し、この算出結果に基づいて共焦点ピンホールの開口径
を切換え制御するものであることを特徴としている。

【００１１】

【発明の実施の形態】（第１実施形態）図１は本発明の
第１実施形態に係る走査型レーザ顕微鏡の光学系の構成
を示す図である。なお図２と同一機能を有する部分には
同一符号を付し、詳しい説明は省く。図１に示す光学系
の特徴点の一つは、ビームエクスパンダ２とダイクロイ
ックミラー４との間に、４８８ｎｍ用レーザラインフィ
ルタ３１、５３０ｎｍ用レーザラインフィルタ３２、６
４８ｎｍ用レーザラインフィルタ３３、を光路に対し選
択的に挿脱可能なレーザ光選択手段３０を設けた点であ
る。他の特徴点はレーザ光選択手段３０のフィルタの種
類に応じて制御装置４１が、結像レンズ１１の結像位置
に配置された共焦点ピンホール４２の開口径を蛍光の波
長に応じた径に切換え制御すると共に、これに連動して
光検出器２４，２５，２６の各受光部にそれぞれ配置さ
れたシャッター４４，４５，４６を開閉制御する共焦点
制御系４０を設けた点である。なお、共焦点ピンホール
４２としては単一のピンホールの径が拡大または縮小す
るものや、回転円板上に配設された径の異なる複数のピ
ンホールが選択的に光路に挿入されるもの等を用いるこ
とができる。

【００１２】また本実施形態におけるレーザ光源１０
は、例えば４８８ｎｍ、５３０ｎｍ、６４８ｎｍ、の各
波長のレーザ光を同時発振可能なＫｒ−Ａｒ多波長発振
レーザ光源である。また標本９は蛍光色素ＦＩＴＣ，Ｐ
Ｉ，ＣＹ５で染色されているものとする。

【００１３】なお、本実施形態では共焦点ピンホール４
２の開口径の切換え制御をレーザ光選択手段３０に連動
させていたが、これに限られるものではなく、例えばレ
ーザ光選択手段３０とは独立して、共焦点ピンホール４
２の開口径の切換え制御を制御装置４１に行なわせるよ
うにしてもよい。

【００１４】制御装置４１は、レーザ光源１０から出力
されるレーザ光の波長情報（例えば４８８ｎｍ、５３０
ｎｍ、６４８ｎｍ）あるいは標本９の蛍光色素情報（Ｆ
ＩＴＣ、ＰＩ、ＣＹ５）を、例えば内蔵のメモリに記憶
し、かつ記憶されたこれらの情報に基づいて標本９が発
する蛍光波長の回折径を演算して求め、求めた回折径に
応じて共焦点ピンホール４２の大きさを可変制御する如
く構成されている。

【００１５】このように構成された本実施形態によれ
ば、レーザ光源１０から出力されたレーザ光はビームエ
クスパンダ２を通ることにより、対物レンズ８のＮＡに
応じた光束径に拡大された後、レーザ光選択手段３０に
より下記の如く所定のレーザ波長を持つレーザ光のみが
選択される。

【００１６】まず、例えばレーザラインフィルタ３１が
光路に挿入されると、４８８ｎｍの波長のレーザ光が選
択される。この選択されたレーザ光はダイクロイックミ
ラー４で反射され、ガルバノミラー等のＸ−Ｙレーザ走
査光学系５でＸＹ偏向されたのち、瞳リレーレンズ６、
観察光学系７、対物レンズ８を介して標本９上に照射さ
れる。つまり波長４８８ｎｍのレーザ光のみが標本９へ
照射され、二次元走査が行なわれる。

【００１７】波長４８８ｎｍのレーザ光の照射により、
標本９の蛍光色素が励起されると、主として約５２０ｎ
ｍの波長のＦＩＴＣ蛍光色素（以下、ＦＩＴＣと称す）
が発せられる。このＦＩＴＣの蛍光は、対物レンズ８か
らダイクロイックミラー４に至る経路を戻り、ダイクロ
イックミラー４を透過する。ダイクロイックミラー４を
透過した上記蛍光は、結像レンズ１１で集光され、当該
結像レンズの結像位置に配置された共焦点ピンホール４
２を通過する。

【００１８】制御装置４１はレーザ光選択手段３０のフ
ィルタがレーザラインフィルタ３１であることに基づい
て、標本９から発せられるＦＩＴＣの蛍光波長（約５２
０ｎｍ）の回折径を算出し、その回折径に応じて共焦点
ピンホール４２の大きさ（ピンホール径ｄ）を可変設定
している。したがってこの共焦点ピンホール４２を通過
した約５２０ｎｍの波長の蛍光は、フレアの少ない即ち
共焦点効果の高い、しかも光量ロスの少ないものとな
る。このため良好な像が得られる。

【００１９】共焦点ピンホール４２を通過した発散光
（広がり角を持つビーム）は、コリメート光学系１３を
透過することにより平行光線となる。この平行光線は、
波長５７５ｎｍ以下の光を反射するダイクロイックミラ
ー１４で反射され、制御装置４１により開状態とされて
いるシャッタ４４を通過し光検出器２４で検出される。
なおこのとき標本９は、５７５ｎｍを越えた波長の蛍光
も発するが、この蛍光はダイクロイックミラー１４を透
過し、ダイクロイックミラー１５，ミラー１６で分光な
いし反射され、光検出器２５，２６に入射しようとす
る。しかるにこのときはシャッター４５，４６は制御装
置４１により閉状態とされているため光検出器２５，２
６に余計な光が入射するおそれはない。

【００２０】したがって、共焦点ピンホール４２を通過
した約５２０ｎｍの波長を有するＦＩＴＣの蛍光のみ
が、ダイクロイックミラー１４，シャッタ４４により分
離抽出されて対応する光検出器２４で検出され、輝度情
報を得ることになる。

【００２１】次に、例えばレーザラインフィルタ３２が
光路に挿入されると、今度は５３０ｎｍの波長のレーザ
光が選択される。選択されたレーザ光は前述の場合と同
様にダイクロイックミラー４で反射され、ガルバノミラ
ー等のＸ−Ｙレーザ走査光学系５でＸＹ偏向され、瞳リ
レーレンズ６、観察光学系７、対物レンズ８を介して標
本９上に照射される。

【００２２】波長５３０ｎｍのレーザ光が照射されるこ
とにより、標本９の蛍光色素が励起され、主として約６
１５ｎｍの波長を有するＰＩの蛍光が発せられる。この
ＰＩの蛍光は、対物レンズ８からダイクロイックミラー
４に至る経路を戻り、ダイクロイックミラー４を透過す
る。ダイクロイックミラー４を透過した蛍光は、結像レ
ンズ１１で集光され、当該結像レンズの結像位置に配置
された共焦点ピンホール４２を通過する。

【００２３】制御装置４１は、レーザ光選択手段３０の
フィルタがレーザラインフィルタ３２であることに基づ
いて標本９から発せられるＰＩの蛍光波長（約６１５ｎ
ｍ）の回折径を算出し、その回折径に応じて共焦点ピン
ホール４２の大きさを可変設定している。したがって、
この共焦点ピンホール４２を通過した約６１５ｎｍの波
長の蛍光は、やはりフレアの少ないすなわち共焦点効果
の高い、しかも光量ロスの少ないものとなり、良好な像
となる。

【００２４】そして前述の場合と同様に、共焦点ピンホ
ール４２を通過した６１５ｎｍの波長を有するＰＩの蛍
光は、コリメート光学系１３により平行光線とされる。
この平行光線は、ダイクロイックミラー１４を透過した
のち、波長６４０ｎｍ以下の光を反射するダイクロイッ
クミラー１５で反射され、この場合は開状態となってい
るシャッタ４５を通過し光検出器２５で検出される。な
おこのときも、前述したのと同様に、波長５７５ｎｍ以
下の蛍光はダイクロイックミラー１４で反射されると共
に、波長が６４０ｎｍを越えた蛍光はダイクロイックミ
ラー１５を透過した後、ミラー１６で反射され、それぞ
れ光検出器２４，２６に入射しようとする。しかるにこ
のときシャッター４４，４６はいずれも閉じているた
め、光検出器２４，２６に余計な光が入射するおそれは
ない。

【００２５】次いで更に、例えばレーザラインフィルタ
３３が光路に挿入されると、今度は６４８ｎｍの波長の
レーザ光が選択される。選択されたレーザ光は前述の場
合と同様にダイクロイックミラー４で反射され、ガルバ
ノミラー等のＸ−Ｙレーザ走査光学系５でＸＹ偏向さ
れ、瞳リレーレンズ６、観察光学系７、対物レンズ８を
介して標本９上に照射される。

【００２６】波長６４８ｎｍのレーザ光が照射されるこ
とにより、標本９の蛍光色素が励起され、主として約６
７０ｎｍの波長を有するＣＹ５の蛍光が発せられる。こ
の蛍光は、対物レンズ８からダイクロイックミラー４に
至る経路を戻り、ダイクロイックミラー４を透過する。
ダイクロイックミラー４を透過した蛍光は、結像レンズ
１１で集光され、当該結像レンズの結像位置に配置され
た共焦点ピンホール４２を通過する。

【００２７】制御装置４１は、レーザ光選択手段３０の
フィルタがレーザラインフィルタ３３であることに基づ
いて、標本９から発せられるＣＹ５の蛍光波長（約６７
０ｎｍ）の回折径を算出し、その回折径に応じて共焦点
ピンホール４２の大きさを可変設定している。したがっ
て、この共焦点ピンホール４２を通過した波長が約６７
０ｎｍの蛍光は、やはりフレアの少ないすなわち共焦点
効果の高い、しかも光量ロスの少ないものとなり良好な
像となる。

【００２８】そして前述の場合と同様に、共焦点ピンホ
ール４２を通過した約６７０約ｎｍの波長を有するＣＹ
５の蛍光は、コリメート光学系１３によって平行光線と
される。

【００２９】この平行光線は、ダイクロイックミラー１
４を透過し、更にダイクロイックミラー１５を透過した
のち、ミラー１６で反射され、この場合は開状態となっ
ているシャッタ４６を通過し光検出器２６で検出され
る。なおこのときも前述したのと同様に、波長が５７５
ｎｍ以下の蛍光は、ダイクロイックミラー１４で反射さ
れ、波長６４０ｎｍ以下の蛍光はダイクロイックミラー
１５で反射され、それぞれ光検出器２４，２５に入射し
ようとする。しかるにこのときシャッター４４，４５は
いずれも閉じているため、光検出器２４，２５に余計な
光が入射するおそれはない。

【００３０】前記三つの波長の蛍光に基づく像を重ね合
わせると、短波長の蛍光から長波長の蛍光まで、全て共
焦点効果が高くかつ明るさロスの少ない像が得られる。
この結果、良好な多重染色観察を行なうことができる。

【００３１】また、このような方法による多重染色像の
取得に際しては、一つの励起光に対応する蛍光波長の光
のみが各検出器にとり込まれるので、短波長側の蛍光が
長波長側の蛍光に重なることを避けることができ、所謂
クロスオーバーのないＳ／Ｎの良い像を得ることができ
る。

【００３２】（第２実施形態）共焦点ピンホール４２の
ピンホール径ｄが回折径Ｄの面内分解能が飽和するま
で、例えば、１／３に低下するまでは蛍光量が減少し暗
くなるが、面内分解能を向上させ得ることが判明してい
る。そして観察したい標本によっては、ピンホール径ｄ
を回折径Ｄまで絞っても充分に明るい条件の下では、さ
らにピンホール径ｄを絞り込んで面内分解能を上げたい
場合もあるし、回折径Ｄまで絞ると暗くなりＳ／Ｎが悪
くなる条件の下では、ピンホール径ｄをひろげ、共焦点
効果を犠牲にしても明るさを優先させたい場合もある。

【００３３】そこで第２実施形態においては、蛍光が充
分に明るい場合に、共焦点ピンホール４２のピンホール
径ｄと各蛍光の回折径Ｄとの大小関係を、観察標本の条
件に応じて可変設定する手段を付加したことを特徴とし
ている。

【００３４】すなわち、回折径Ｄは前記（１）式に適当
な係数Ｋを乗じるように変形した下記の（２）式を用い
て求めるものとした。Ｄ＝１．２２（λ／ＮＡ）Ｋ …（２）ただし、Ｋ…条件に応じて設定される係数上記係数Ｋを蛍光波長の如何に拘らず同じにすること
で、各蛍光波長の共焦点効果と明るさとのバランスを一
定化することができる。

【００３５】（実施形態についての特徴点）［１］実施形態に示された走査型レーザ顕微鏡は、異な
る波長（例えば４８８ｎｍ，５３０ｎｍ，６４８ｎｍ）
を有する複数のレーザ光を発するレーザ光源(10)と、こ
のレーザ光源(10)から発せられる各波長のレーザ光から
特定波長のレーザ光を選択するレーザ光選択手段(30)
と、このレーザ光選択手段(30)により選択されたレーザ
光をレーザ走査手段(5) を介して標本(9) に照射する手
段と、この手段により照射されたレーザ光により励起さ
れた前記標本(9) が発した蛍光を通過させる如く前記標
本(9) の面と共役な位置に設置され記蛍光の波長に対応
した開口径に切換え可能な共焦点ピンホール(42)と、こ
の共焦点ピンホール(42)の開口径を前記蛍光の波長（例
えば５２０ｎｍ，６１５ｎｍ，６７０ｎｍ）にあわせて
切換え制御する制御装置(41)と、を備えたことを特徴と
している。

【００３６】上記走査型レーザ顕微鏡においては、制御
装置(41)が入力された情報に基づいて標本(9) から発せ
られた各蛍光波長（ＦＩＴＣの蛍光は約５２０ｎｍ，Ｐ
Ｉの蛍光は約６１５ｎｍ，ＣＹ５の蛍光は約６７０ｎ
ｍ）の回折径Ｄを算出し、その回折径Ｄに応じて、共焦
点ピンホール(42)の大きさを可変設定する。したがって
ピンホール径(d) が回折径(D) に適合したものとなり、
共焦点ピンホール(42)を通過した特定波長の蛍光は、フ
レアの少ないすなわち共焦点効果の高い、しかも光量ロ
スの少ないものとなり、良好な像となる。

【００３７】前記三つの波長の蛍光に基づく像を重ねる
と、短波長の蛍光から長波長の蛍光まですべて共焦点効
果が高く、かつ明るさロスのない像が得られる。この結
果、良好な多重染色観察が可能である。［２］実施形態に示された走査型レーザ顕微鏡は、前記
［１］と同様の顕微鏡であって、制御装置(41)は、レー
ザ光源(10)から発せられるレーザ光の波長情報または標
本(9) からの蛍光色素情報に基づいて、標本(9) が発す
る蛍光波長の回折径(D)を算出し、この算出結果に基づ
いて共焦点ピンホール(42)の開口径を切換え制御するも
のであることを特徴としている。

【００３８】上記走査型レーザ顕微鏡においては前記
［１］と同様の作用効果を奏する上、共焦点ピンホール
の大きさを可変制御するための具現手段が明確に特定さ
れていることから、実施しやすい利点がある。［３］実施形態に示された走査型レーザ顕微鏡は、前記
［１］と同様の顕微鏡であって、光検出器(24,25,26)の
各受光部にそれぞれシャッタ(44,45,46)を配置し、これ
らのシャッタ(44,45,46)を、共焦点ピンホール(42)の開
口径の切換え制御に連動して開閉制御することにより、
検出すべき蛍光のみを所定の光検出器(24,25,26の一つ)
に入射させるようにしたことを特徴としている。

【００３９】上記走査型レーザ顕微鏡においては前記
［１］と同様の作用効果を奏する上、多重染色像を得る
に際し、一つの励起光に対応する蛍光波長以外の蛍光は
シャットアウトされ、検出すべき蛍光のみが検出器(24,
25,26)の一つにとり込まれることになる。かくして短波
長側の蛍光が長波長側の蛍光に重なることを避けること
ができ、所謂クロスオーバーのないＳ／Ｎの良い像を得
ることができる。［４］実施形態に示された走査型レーザ顕微鏡は、前記
［１］と同様の顕微鏡であって、共焦点ピンホール(42)
のピンホール径(d) と各蛍光の回折径(D) との大小関係
を、観察標本の条件に応じて可変設定する手段を備えた
ことを特徴としている。

【００４０】上記走査型レーザ顕微鏡においては前記
［１］と同様の作用効果を奏する上、共焦点ピンホール
(42)のピンホール径(d) が、観察標本の条件に適合した
状況の下で可変制御されることになる。

【００４１】

【発明の効果】本発明によれば、共焦点ピンホールの開
口径が、制御装置によって、標本から発せられた蛍光の
波長に応じて可変制御されるので、各蛍光波長ごとに共
焦点効果及び明るさが最適な像を取得することのできる
走査型レーザ顕微鏡を提供できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の第１実施形態に係る走査型レーザ顕微
鏡の光学系の構成を示す図。

【図２】従来例に係る走査型レーザ顕微鏡の光学系の構
成を示す図。

【符号の説明】

１…レーザ光源２…ビームエクスパンダ３…レーザラインフィルタ４…ダイクロイックミラー５…ＸＹレーザ走査光学系６…瞳リレーレンズ７…観察光学系８…対物レンズ９…標本１０…多波長発振レーザ光源１１…結像レンズ１２…共焦点ピンホール、１３…コリメータ光学系１４，１５…ダイクロイックミラー１６…ミラー２４，２５，２６…光検出器３０……レーザ光選択手段３１…４８８ｎｍ用レーザラインフィルタ３２…５３０ｎｍ用レーザラインフィルタ４０…共焦点制御系４１…制御装置４２…共焦点ピンホール４４〜４６…シャッタ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】異なる波長を有する複数のレーザ光を発す
るレーザ光源と、このレーザ光源から発せられる各波長のレーザ光から特
定波長のレーザ光を選択するレーザ光選択手段と、このレーザ光選択手段により選択されたレーザ光を走査
して標本に照射する手段と、この照射手段により照射されたレーザ光により励起され
た前記標本が発した蛍光を通過させる如く前記標本の面
と共役な位置に設置され前記蛍光の波長に対応した開口
径に切換え可能な共焦点ピンホールと、この共焦点ピンホールの開口径を前記蛍光の波長にあわ
せて切換え制御する制御装置と、を備えたことを特徴とする走査型レーザ顕微鏡。
【請求項２】上記制御装置は、レーザ光源から発せられ
るレーザ光の波長情報または標本の蛍光色素情報に基づ
いて、標本が発する蛍光波長の回折径を算出し、この算
出結果に基づいて共焦点ピンホールの開口径を切換え制
御するものであることを特徴とする請求項１に記載の走
査型レーザ顕微鏡。