JPH11292896A - 新規生理活性ペプチド - Google Patents
新規生理活性ペプチドInfo
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- JPH11292896A JPH11292896A JP10017797A JP1779798A JPH11292896A JP H11292896 A JPH11292896 A JP H11292896A JP 10017797 A JP10017797 A JP 10017797A JP 1779798 A JP1779798 A JP 1779798A JP H11292896 A JPH11292896 A JP H11292896A
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- Japan
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- cholesterol
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- leu
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 本発明は、血中コレステロール上昇抑制作用
を示す新規生理活性ペプチドを得る。 【解決手段】 Ｘ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−
Ａｒｇ（但し、ＸはＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、
Ｔｒｐのいずれか１つである。）なる新規生理活性ペプ
チド。
を示す新規生理活性ペプチドを得る。 【解決手段】 Ｘ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−
Ａｒｇ（但し、ＸはＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、
Ｔｒｐのいずれか１つである。）なる新規生理活性ペプ
チド。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、血中コレステロー
ル（総コレステロール、ヘパリン沈殿コレステロール）
の上昇を抑制するのに有用な新規ペプチドに関するもの
であり、医薬品などに利用可能である。
ル（総コレステロール、ヘパリン沈殿コレステロール）
の上昇を抑制するのに有用な新規ペプチドに関するもの
であり、医薬品などに利用可能である。
【０００２】
【従来の技術】近年、日本においても食生活が、高蛋
白、高脂肪の食物を過剰に摂取する欧米型の食生活に移
行しており、若年層を中心に血中コレステロール値の上
昇傾向が顕著となり、喫煙開始年齢の低下などとも相俟
って、虚心性心疾患が増加している。高コレステロール
血症は、虚心性心疾患の主要な危険因子として位置づけ
られているが、その危険性は特に血漿中のＬＤＬコレス
テロール濃度と関係が深いため、ＬＤＬコレステロール
の濃度によって危険度を３段階に分類することも行われ
ている。一方、単にＬＤＬコレステロール値だけに注目
するのではなく、ＨＤＬコレステロールの濃度の低下を
含めて問題にする考え方もあり、（ＬＤＬコレステロー
ル／ＨＤＬコレステロール）値により虚心性心疾患の発
生危険度を評価する方法やヘパリン沈殿コレステロール
（＝ＬＤＬコレステロール＋ＶＬＤＬコレステロール）
濃度の低下を評価する方法も知られている。
白、高脂肪の食物を過剰に摂取する欧米型の食生活に移
行しており、若年層を中心に血中コレステロール値の上
昇傾向が顕著となり、喫煙開始年齢の低下などとも相俟
って、虚心性心疾患が増加している。高コレステロール
血症は、虚心性心疾患の主要な危険因子として位置づけ
られているが、その危険性は特に血漿中のＬＤＬコレス
テロール濃度と関係が深いため、ＬＤＬコレステロール
の濃度によって危険度を３段階に分類することも行われ
ている。一方、単にＬＤＬコレステロール値だけに注目
するのではなく、ＨＤＬコレステロールの濃度の低下を
含めて問題にする考え方もあり、（ＬＤＬコレステロー
ル／ＨＤＬコレステロール）値により虚心性心疾患の発
生危険度を評価する方法やヘパリン沈殿コレステロール
（＝ＬＤＬコレステロール＋ＶＬＤＬコレステロール）
濃度の低下を評価する方法も知られている。
【０００３】虚心性心疾患は遺伝等の先天的な要因もあ
る一方で、高血圧、高コレステロール血症糖尿病、肥
満、喫煙等の生活習慣、食生活に関する要因に負う面が
大きく、その予防及び治療に種々の対策が提案されてい
る。近年、機能性食品素材を摂取して、上記のような成
人病を予防あるいは治療しようとする試みがなされてい
る。機能性ペプチドについても様々な報告があり、本発
明者も特開平７−２５８２８８号公報で、米の蛋白質に
含まれる機能性ペプチドが抗オピオイド活性、ファゴサ
イトーシス活性、インターロイキン−１産生促進活性を
もつことを開示している。そこで該ペプチドについて血
中コレステロール上昇抑制作用について検討してみた。
る一方で、高血圧、高コレステロール血症糖尿病、肥
満、喫煙等の生活習慣、食生活に関する要因に負う面が
大きく、その予防及び治療に種々の対策が提案されてい
る。近年、機能性食品素材を摂取して、上記のような成
人病を予防あるいは治療しようとする試みがなされてい
る。機能性ペプチドについても様々な報告があり、本発
明者も特開平７−２５８２８８号公報で、米の蛋白質に
含まれる機能性ペプチドが抗オピオイド活性、ファゴサ
イトーシス活性、インターロイキン−１産生促進活性を
もつことを開示している。そこで該ペプチドについて血
中コレステロール上昇抑制作用について検討してみた。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、米の蛋
白質由来のペプチド及びそのフラグメントペプチドにつ
いては、血中コレステロール上昇抑制作用は示さなかっ
た。そこで該ペプチドの誘導体についても検討し、血中
コレステロール上昇抑制作用を示すペプチドを鋭意探索
した。
白質由来のペプチド及びそのフラグメントペプチドにつ
いては、血中コレステロール上昇抑制作用は示さなかっ
た。そこで該ペプチドの誘導体についても検討し、血中
コレステロール上昇抑制作用を示すペプチドを鋭意探索
した。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者は、米の蛋白質
由来のペプチドの誘導体について探索した結果、下記一
般式（１）で示される新規生理活性ペプチドが血中コレ
ステロール上昇抑制作用を示すことを見いだし本発明を
完成した。 Ｘ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ・・・（１） （但し、ＸはＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ
のいずれか１つである。）
由来のペプチドの誘導体について探索した結果、下記一
般式（１）で示される新規生理活性ペプチドが血中コレ
ステロール上昇抑制作用を示すことを見いだし本発明を
完成した。 Ｘ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ・・・（１） （但し、ＸはＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ
のいずれか１つである。）
【０００６】該ペプチドは、ペプチド合成の常套手段を
適用して合成することによって製造することができる。
上記でいうＰｒｏはプロリン、Ｌｅｕはロイシン、Ａｒ
ｇはアルギニン、Ｉｌｅはイソロイシン、Ｍｅｔはメチ
オニン、Ｐｈｅはフェニルアラニン、Ｔｒｐはトリプト
ファンを示す。かかるアミノ酸はいずれもＬ−体であ
る。
適用して合成することによって製造することができる。
上記でいうＰｒｏはプロリン、Ｌｅｕはロイシン、Ａｒ
ｇはアルギニン、Ｉｌｅはイソロイシン、Ｍｅｔはメチ
オニン、Ｐｈｅはフェニルアラニン、Ｔｒｐはトリプト
ファンを示す。かかるアミノ酸はいずれもＬ−体であ
る。
【０００７】本発明のペプチドは、ペプチド合成法で取
得でき、ペプチド合成に通常用いられる方法、即ち液相
法または固相法でペプチド結合の任意の位置で二分され
る２種のフラグメントの一方に相当する反応性カルボキ
シル基を有する原料と、他方のフラグメントに相当する
反応性アミノ基を有する原料とを2-(1H-Benzotriazole-
1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophospha
te（ＨＢＴＵ）等の活性エステルを用いた方法、カルボ
ジイミドを用いた方法等を用いて縮合させ、生成する縮
合物が保護基を有する場合、その保護基を除去させるこ
とによっても製造し得る。
得でき、ペプチド合成に通常用いられる方法、即ち液相
法または固相法でペプチド結合の任意の位置で二分され
る２種のフラグメントの一方に相当する反応性カルボキ
シル基を有する原料と、他方のフラグメントに相当する
反応性アミノ基を有する原料とを2-(1H-Benzotriazole-
1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophospha
te（ＨＢＴＵ）等の活性エステルを用いた方法、カルボ
ジイミドを用いた方法等を用いて縮合させ、生成する縮
合物が保護基を有する場合、その保護基を除去させるこ
とによっても製造し得る。
【０００８】この反応工程において反応に関与すべきで
ない官能基は、保護基により保護される。アミノ基の保
護基としては、例えばベンジルオキシカルボニル（Ｂ
ｚ）、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ｐ−ビ
フェニルイソプロピロオキシカルボニル、９−フルオレ
ニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）等が挙げられ
る。カルボキシル基の保護基としては例えばアルキルエ
ステル、ベンジルエステル等を形成し得る基が挙げられ
るが固相法の場合は、Ｃ末端のカルボキシル基はクロロ
トリチル樹脂、クロルメチル樹脂、オキシメチル樹脂、
Ｐ−アルコキシベンジルアルコール樹脂等の担体に結合
している。縮合反応は、カルボジイミド等の縮合剤の存
在下にあるいはＮ−保護アミノ酸活性エステルまたはペ
プチド活性エステルを用いて実施する。
ない官能基は、保護基により保護される。アミノ基の保
護基としては、例えばベンジルオキシカルボニル（Ｂ
ｚ）、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ｐ−ビ
フェニルイソプロピロオキシカルボニル、９−フルオレ
ニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）等が挙げられ
る。カルボキシル基の保護基としては例えばアルキルエ
ステル、ベンジルエステル等を形成し得る基が挙げられ
るが固相法の場合は、Ｃ末端のカルボキシル基はクロロ
トリチル樹脂、クロルメチル樹脂、オキシメチル樹脂、
Ｐ−アルコキシベンジルアルコール樹脂等の担体に結合
している。縮合反応は、カルボジイミド等の縮合剤の存
在下にあるいはＮ−保護アミノ酸活性エステルまたはペ
プチド活性エステルを用いて実施する。
【０００９】縮合反応終了後、保護基は除去されるが、
固相法の場合はさらにペプチドのＣ末端と樹脂との結合
を切断する。更に、本発明のペプチドは通常の方法に従
い精製される。例えばイオン交換クロマトグラフィー、
逆相液体クロマトグラフィー、アフィニティークロマト
グラフィー等が挙げられる。合成したペプチドの合成は
エドマン分解法でＣ−末端からアミノ酸配列を読み取る
プロティンシークエンサー、ＧＣ−ＭＳ等で分析され
る。
固相法の場合はさらにペプチドのＣ末端と樹脂との結合
を切断する。更に、本発明のペプチドは通常の方法に従
い精製される。例えばイオン交換クロマトグラフィー、
逆相液体クロマトグラフィー、アフィニティークロマト
グラフィー等が挙げられる。合成したペプチドの合成は
エドマン分解法でＣ−末端からアミノ酸配列を読み取る
プロティンシークエンサー、ＧＣ−ＭＳ等で分析され
る。
【００１０】本発明のペプチドは、医薬として有用であ
り、また本発明のペプチドの配列をもつ蛋白質を（分解
して）食品として摂取することも可能である。またコレ
ステロール低下の作用機作を研究するための医薬品開発
のためのリード物質としても用いられるが、以下医薬品
として用いる場合について説明する。本発明で使用する
ペプチドの投与経路としては、経口投与、非経口投与、
直腸内投与のいずれでもよいが、経口投与が好ましい。
本発明のペプチドの投与量は化合物の種類、投与方法、
患者の症状・年令等により異なるが、通常１回０.１〜
１０００ｍｇ、好ましくは１〜１００ｍｇを１日当たり
１〜３回である。本発明のペプチドは通常、製剤用担体
と混合して調製した製剤の形で投与される。製剤用担体
としては、製剤分野において常用され、かつ本発明のペ
プチドと反応しない物質が用いられる。
り、また本発明のペプチドの配列をもつ蛋白質を（分解
して）食品として摂取することも可能である。またコレ
ステロール低下の作用機作を研究するための医薬品開発
のためのリード物質としても用いられるが、以下医薬品
として用いる場合について説明する。本発明で使用する
ペプチドの投与経路としては、経口投与、非経口投与、
直腸内投与のいずれでもよいが、経口投与が好ましい。
本発明のペプチドの投与量は化合物の種類、投与方法、
患者の症状・年令等により異なるが、通常１回０.１〜
１０００ｍｇ、好ましくは１〜１００ｍｇを１日当たり
１〜３回である。本発明のペプチドは通常、製剤用担体
と混合して調製した製剤の形で投与される。製剤用担体
としては、製剤分野において常用され、かつ本発明のペ
プチドと反応しない物質が用いられる。
【００１１】具体的には、例えば乳糖、ブドウ糖、マン
ニット、デキストリン、シクロデキストリン、デンプ
ン、庶糖、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケ
イ酸アルミニウム、カルボキシメチルセルロースナトリ
ウム、ヒドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチル
セルロースカルシウム、イオン交換樹脂、メチルセルロ
ース、ゼラチン、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセ
ルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリ
ビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、軽質無水ケ
イ酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク、トラガン
ト、ベントナイト、ビーガム、酸化チタン、ソルビタン
脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリ
ン、脂肪酸グリセリンエステル、精製ラノリン、グリセ
ロゼラチン、ポリソルベート、マクロゴール、植物油、
ロウ、流動パラフィン、白色ワセリン、フルオロカーボ
ン、非イオン界面活性剤、プロピレングリコール、水等
が挙げられる。
ニット、デキストリン、シクロデキストリン、デンプ
ン、庶糖、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケ
イ酸アルミニウム、カルボキシメチルセルロースナトリ
ウム、ヒドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチル
セルロースカルシウム、イオン交換樹脂、メチルセルロ
ース、ゼラチン、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセ
ルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリ
ビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、軽質無水ケ
イ酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク、トラガン
ト、ベントナイト、ビーガム、酸化チタン、ソルビタン
脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリ
ン、脂肪酸グリセリンエステル、精製ラノリン、グリセ
ロゼラチン、ポリソルベート、マクロゴール、植物油、
ロウ、流動パラフィン、白色ワセリン、フルオロカーボ
ン、非イオン界面活性剤、プロピレングリコール、水等
が挙げられる。
【００１２】剤型としては、錠剤、カプセル剤、顆粒
剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、坐剤、軟膏、クリーム
剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤、注射剤等が挙げられる。
これらの製剤は常法に従って調製される。尚、液体製剤
にあっては、用時、水又は他の適当な媒体に溶解又は懸
濁する形であってもよい。また錠剤、顆粒剤は周知の方
法でコーティングしてもよい。注射剤の場合には、本発
明のペプチドを水に溶解させて調製されるが、必要に応
じて生理食塩水あるいはブドウ糖溶液に溶解させてもよ
く、また緩衝剤や保存剤を添加してもよい。
剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、坐剤、軟膏、クリーム
剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤、注射剤等が挙げられる。
これらの製剤は常法に従って調製される。尚、液体製剤
にあっては、用時、水又は他の適当な媒体に溶解又は懸
濁する形であってもよい。また錠剤、顆粒剤は周知の方
法でコーティングしてもよい。注射剤の場合には、本発
明のペプチドを水に溶解させて調製されるが、必要に応
じて生理食塩水あるいはブドウ糖溶液に溶解させてもよ
く、また緩衝剤や保存剤を添加してもよい。
【００１３】これらの製剤は、本発明のペプチドを０．
０１重量％以上、好ましくは０．５〜７０重量％の割合
で含有することができる。これらの製剤はまた、治療上
価値ある他の成分を含有していてもよい。
０１重量％以上、好ましくは０．５〜７０重量％の割合
で含有することができる。これらの製剤はまた、治療上
価値ある他の成分を含有していてもよい。
【００１４】
【実施例】次に実例を挙げて本発明を更に具体的に説明
する。なお実施例中「％」とあるのは断りのない限り重
量基準を意味する。 実施例１ 〔ペプチドの合成〕 市販のＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｌｋｏ樹脂（置
換率０．５ｍｅｑ／ｇ）０．８ｇをＰＳ３型ペプチド合
成機（Protein Technologies社製）の反応槽に分取し、
以下のように合成を行った。尚、Ｐｍｃとは２，２，
５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルフォニル
基を示す。まず、上記の樹脂を反応容器に入れて、１ｍ
ｍｏｌのＦｍｏｃ−Ｐｒｏと、活性化剤として、１ｍｍ
ｏｌのＨＢＴＵを１０ｍｌの０．４Ｍ Ｎ−メチルモル
フォリンを含むジメチルフォルムアミドに溶解したもの
を反応槽に加え、室温にて２０分撹拌反応させた。得ら
れた樹脂を２０％ピペリジンを含むジメチルフォルムア
ミド２０ｍｌ中で、Ｆｍｏｃ基を除去し、ついで上記の
Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏをカップリングさせた方法と同様にＣ
末端から順次Ｆｍｏｃ−アミノ酸をカップルさせて、Ｌ
ｅｕ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）樹脂
を得た。該樹脂を１０ｍｌの脱保護液（８２容量％トリ
フルオロ酢酸、５容量％チオアニソール、３容量％エタ
ンジチオール、２容量％エチルメチルスルフィド、３容
量％フェノール、５容量％水）中で室温にて４時間撹拌
し、ペプチドを樹脂から遊離させた。
する。なお実施例中「％」とあるのは断りのない限り重
量基準を意味する。 実施例１ 〔ペプチドの合成〕 市販のＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｌｋｏ樹脂（置
換率０．５ｍｅｑ／ｇ）０．８ｇをＰＳ３型ペプチド合
成機（Protein Technologies社製）の反応槽に分取し、
以下のように合成を行った。尚、Ｐｍｃとは２，２，
５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルフォニル
基を示す。まず、上記の樹脂を反応容器に入れて、１ｍ
ｍｏｌのＦｍｏｃ−Ｐｒｏと、活性化剤として、１ｍｍ
ｏｌのＨＢＴＵを１０ｍｌの０．４Ｍ Ｎ−メチルモル
フォリンを含むジメチルフォルムアミドに溶解したもの
を反応槽に加え、室温にて２０分撹拌反応させた。得ら
れた樹脂を２０％ピペリジンを含むジメチルフォルムア
ミド２０ｍｌ中で、Ｆｍｏｃ基を除去し、ついで上記の
Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏをカップリングさせた方法と同様にＣ
末端から順次Ｆｍｏｃ−アミノ酸をカップルさせて、Ｌ
ｅｕ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）樹脂
を得た。該樹脂を１０ｍｌの脱保護液（８２容量％トリ
フルオロ酢酸、５容量％チオアニソール、３容量％エタ
ンジチオール、２容量％エチルメチルスルフィド、３容
量％フェノール、５容量％水）中で室温にて４時間撹拌
し、ペプチドを樹脂から遊離させた。
【００１５】ここに４０ｍｌの冷エーテルを添加し、ペ
プチドを沈殿させ、さらに冷エーテルにて３回洗浄し粗
ペプチドを得た。これをＯＤＳカラム（Ｃｏｓｍｏｓｉ
ｌ５Ｃ18−ＡＲ，２０×２５０ｍｍ）による逆相クロマ
トグラフィーにより０．１重量％トリフルオロ酢酸を含
むアセトニトリルの直線的濃度勾配にて展開、精製し、
Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇの配列を有す
るペプチドを得た。尚、本品をプロテインシーケンサー
（アプライド バイオシステムズ社製４７７Ａ型）によ
り分析して、上記の組成であることを確認した。
プチドを沈殿させ、さらに冷エーテルにて３回洗浄し粗
ペプチドを得た。これをＯＤＳカラム（Ｃｏｓｍｏｓｉ
ｌ５Ｃ18−ＡＲ，２０×２５０ｍｍ）による逆相クロマ
トグラフィーにより０．１重量％トリフルオロ酢酸を含
むアセトニトリルの直線的濃度勾配にて展開、精製し、
Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇの配列を有す
るペプチドを得た。尚、本品をプロテインシーケンサー
（アプライド バイオシステムズ社製４７７Ａ型）によ
り分析して、上記の組成であることを確認した。
【００１６】＜血中コレステロールの測定＞血中コレス
テロールの測定は、マウスにペプチドを与えた群と与え
なかった群について、総コレステロール及びヘパリン沈
殿コレステロールを測定した。 （試験群）ＩＣＲ種マウス（雄４週齢、体重約２０〜２
４ｇ、１群８匹）に高コレステロール食（蔗糖１５％、
食塩２％、椰子油１０％、コレステロール０．６％、コ
ール酸０．２％。塩化コリン０．３％、標準飼料７１．
９％）を３日間与えた。本発明のペプチドを、上記３日
間の飼育中、２日目と３日目の実験開始と同時刻に、５
０ｍｇ／ｋｇとなるような重量を生理食塩水に溶かし
て、ゾンデ針で経口投与した（合計１００ｍｇ／ｋｇ投
与）。なおペプチド投与中も高コレステロール食を与
え、２回目のペプチド投与後２４時間絶食させた後、心
臓採血法により血液を採取した。回収した血液を３７℃
で３０分間インキュベーションした後、３０００ｇで１
０分間遠心し上澄みに血清を得た。得られた血清を酵素
法により処理し、総コレステロール及びヘパリン沈殿コ
レステロールの濃度を測定キット（和光純薬工業株式会
社製、コレステロール Ｅ−テストワコー及びＨＤＬコ
レステロール沈殿試薬セット）により６００ｎｍの吸光
度を測定することにより測定した。
テロールの測定は、マウスにペプチドを与えた群と与え
なかった群について、総コレステロール及びヘパリン沈
殿コレステロールを測定した。 （試験群）ＩＣＲ種マウス（雄４週齢、体重約２０〜２
４ｇ、１群８匹）に高コレステロール食（蔗糖１５％、
食塩２％、椰子油１０％、コレステロール０．６％、コ
ール酸０．２％。塩化コリン０．３％、標準飼料７１．
９％）を３日間与えた。本発明のペプチドを、上記３日
間の飼育中、２日目と３日目の実験開始と同時刻に、５
０ｍｇ／ｋｇとなるような重量を生理食塩水に溶かし
て、ゾンデ針で経口投与した（合計１００ｍｇ／ｋｇ投
与）。なおペプチド投与中も高コレステロール食を与
え、２回目のペプチド投与後２４時間絶食させた後、心
臓採血法により血液を採取した。回収した血液を３７℃
で３０分間インキュベーションした後、３０００ｇで１
０分間遠心し上澄みに血清を得た。得られた血清を酵素
法により処理し、総コレステロール及びヘパリン沈殿コ
レステロールの濃度を測定キット（和光純薬工業株式会
社製、コレステロール Ｅ−テストワコー及びＨＤＬコ
レステロール沈殿試薬セット）により６００ｎｍの吸光
度を測定することにより測定した。
【００１７】（コントロール群）ＩＣＲ種マウス（雄４
週齢、体重約２０〜２４ｇ、１群８匹）に、高コレステ
ロール食（蔗糖１５％、食塩２％、椰子油１０％、コレ
ステロール０．６％、コール酸０．２％。塩化コリン
０．３％、標準飼料７１．９％）で３日間飼育し、２４
時間絶食させた後、心臓採血法により血液を採取し、同
様にして総コレステロール及びヘパリン沈殿コレステロ
ールの濃度を求めた。 （評価）試験群とコントロール群の総コレステロール及
びヘパリン沈殿コレステロールの濃度の平均値を求め、
降下率（％）を算出した。なお降下率（％）はコントロ
ール群の平均値から試験群の平均値を引いた値をコント
ロール群の平均値で割って百分率で表した。さらに試験
群（８匹）とコントロール群（８匹）との総コレステロ
ール及びヘパリン沈殿コレステロールの濃度の降下率
（％）の有意差を検定した。降下値が大きい程、また有
意水準（Ｐ）が高い程、上昇抑制作用が大きいことを示
す。
週齢、体重約２０〜２４ｇ、１群８匹）に、高コレステ
ロール食（蔗糖１５％、食塩２％、椰子油１０％、コレ
ステロール０．６％、コール酸０．２％。塩化コリン
０．３％、標準飼料７１．９％）で３日間飼育し、２４
時間絶食させた後、心臓採血法により血液を採取し、同
様にして総コレステロール及びヘパリン沈殿コレステロ
ールの濃度を求めた。 （評価）試験群とコントロール群の総コレステロール及
びヘパリン沈殿コレステロールの濃度の平均値を求め、
降下率（％）を算出した。なお降下率（％）はコントロ
ール群の平均値から試験群の平均値を引いた値をコント
ロール群の平均値で割って百分率で表した。さらに試験
群（８匹）とコントロール群（８匹）との総コレステロ
ール及びヘパリン沈殿コレステロールの濃度の降下率
（％）の有意差を検定した。降下値が大きい程、また有
意水準（Ｐ）が高い程、上昇抑制作用が大きいことを示
す。
【００１８】実施例２〜５、比較例１、２ 実施例１で最終ステップのＦｍｏｃアミノ酸をＦｍｏｃ
−Ｉｌｅ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｒｐ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）、Ｆｍｏｃ
−Ｖａｌを同モル用いて実施例１と同様にして表１に示
すペプチドを合成し、プロティンシークエンサーで配列
を確認した。尚、ｔＢｕは三級ブチル基を示す。これら
のペプチドについても実施例１と同様に評価し、結果を
表２に示した。
−Ｉｌｅ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｒｐ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）、Ｆｍｏｃ
−Ｖａｌを同モル用いて実施例１と同様にして表１に示
すペプチドを合成し、プロティンシークエンサーで配列
を確認した。尚、ｔＢｕは三級ブチル基を示す。これら
のペプチドについても実施例１と同様に評価し、結果を
表２に示した。
【００１９】
【表１】ペプチド配列 実施例１ Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ 実施例２ Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ 実施例３ Ｍｅｔ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ 実施例４ Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ実施例５ Ｔｒｐ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ 比較例１ Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ比較例２ Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ Ｔｙｒ：チロシン、Ｖａｌ：バリン
【００２０】
【表２】 降下率（％） 投与量 総コレステロ ヘパリン沈殿 (mg/kg) ール コレステロール 実施例１ 100 25.0±3.5* 33.0±4.3* 実施例２ 100 17.0±3.2* 24.7±5.0* 実施例３ 100 15.4±4.0* 22.0±4.9* 実施例４ 100 20.3±2.5** 23.2±4.5* 実施例５ 100 15.5±3.0* 29.7±6.6* 比較例１ 100 1.6±5.4 11.1±8.5 比較例２ 100 7.0±6.2 5.6±9.0 ヘパリン沈殿コレステロール＝ＬＤＬコレステロール＋ＶＬＤＬコレステロール ＊Ｐ＜０．０５ ＊＊Ｐ＜０．０１
【００２１】
【発明の効果】本発明の新規生理活性ペプチドは血中コ
レステロール上昇抑制作用を示し、医薬品として有用な
ものである。
レステロール上昇抑制作用を示し、医薬品として有用な
ものである。
Claims (1)
- 【請求項１】 下記一般式（１）で示される新規生理活
性ペプチド。 Ｘ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ・・・（１） （但し、ＸはＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ
のいずれか１つである。）
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10017797A JPH11292896A (ja) | 1998-01-14 | 1998-01-14 | 新規生理活性ペプチド |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10017797A JPH11292896A (ja) | 1998-01-14 | 1998-01-14 | 新規生理活性ペプチド |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11292896A true JPH11292896A (ja) | 1999-10-26 |
Family
ID=11953717
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10017797A Pending JPH11292896A (ja) | 1998-01-14 | 1998-01-14 | 新規生理活性ペプチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11292896A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2019151581A (ja) * | 2018-03-02 | 2019-09-12 | 伊藤ハム株式会社 | 脂質代謝改善剤 |
-
1998
- 1998-01-14 JP JP10017797A patent/JPH11292896A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2019151581A (ja) * | 2018-03-02 | 2019-09-12 | 伊藤ハム株式会社 | 脂質代謝改善剤 |
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