JPH11299478A - 薬物代謝解析方法およびそのための器具 - Google Patents
薬物代謝解析方法およびそのための器具Info
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- JPH11299478A JPH11299478A JP10124098A JP12409898A JPH11299478A JP H11299478 A JPH11299478 A JP H11299478A JP 10124098 A JP10124098 A JP 10124098A JP 12409898 A JP12409898 A JP 12409898A JP H11299478 A JPH11299478 A JP H11299478A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 複数の組織片を、所定の物質が添加された複
数の培養液中で所定の雰囲気の下に培養し、その物質の
組織による代謝の解析を可能にする。 【課題の解決手段】 複数の組織片をそれぞれ、互いに
連結、固定された複数の培養容器中において培養液中で
個別かつ同時に培養し、２以上の時点においてそれぞ
れ、複数の組織片及び培養液の少なくとも一方から試料
を同時に採取するようにした。
数の培養液中で所定の雰囲気の下に培養し、その物質の
組織による代謝の解析を可能にする。 【課題の解決手段】 複数の組織片をそれぞれ、互いに
連結、固定された複数の培養容器中において培養液中で
個別かつ同時に培養し、２以上の時点においてそれぞ
れ、複数の組織片及び培養液の少なくとも一方から試料
を同時に採取するようにした。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は薬物代謝解析方法お
よびそのための器具に関し、特に微量の生体試料で肝臓
等の組織の薬物代謝に関する機能を直接に評価できる薬
物代謝解析方法およびそのための器具に関する。
よびそのための器具に関し、特に微量の生体試料で肝臓
等の組織の薬物代謝に関する機能を直接に評価できる薬
物代謝解析方法およびそのための器具に関する。
【０００２】
【従来の技術】新薬開発の途上、ヒトの代替物として実
験動物が多く用いられた。しかし、ヒトと実験動物で
は、薬物動態の大きな差が見られ、動物実験の結果安全
とされた薬物でも、ヒトには重篤な副作用が頻発してい
る。
験動物が多く用いられた。しかし、ヒトと実験動物で
は、薬物動態の大きな差が見られ、動物実験の結果安全
とされた薬物でも、ヒトには重篤な副作用が頻発してい
る。
【０００３】薬物の副作用は肝臓での代謝との間に深い
関係があり、肝臓を通過する際の吸収率、肝臓における
代謝率、肝臓からの排泄率を知ることは、その薬物の副
作用を含めた安全性を評価する上で極めて重要である。
これらの諸因子を把握するには、薬物自体（いわゆる未
変化体）および代謝物の残存量あるいは生成量の、時間
の経過に対する変化を追跡することが必要である。その
ための実験方法として、肝臓の一部（例えば肝小葉）
を、目的物質を含む培養液中で培養して、未変化体およ
び代謝物の量の時間的変化を追跡する方法が有用であ
る。
関係があり、肝臓を通過する際の吸収率、肝臓における
代謝率、肝臓からの排泄率を知ることは、その薬物の副
作用を含めた安全性を評価する上で極めて重要である。
これらの諸因子を把握するには、薬物自体（いわゆる未
変化体）および代謝物の残存量あるいは生成量の、時間
の経過に対する変化を追跡することが必要である。その
ための実験方法として、肝臓の一部（例えば肝小葉）
を、目的物質を含む培養液中で培養して、未変化体およ
び代謝物の量の時間的変化を追跡する方法が有用であ
る。
【０００４】このような培養試験において、目的物質の
濃度や培養液の組成の異なる培養を行なう際に、実験精
度を確保するためには、複数の培養液中の反応を同時に
進行させ、それらの培養液中から分析のための試料を、
多数時点においてそれぞれ同時に採取し、それらの試料
を分析することが望ましい。
濃度や培養液の組成の異なる培養を行なう際に、実験精
度を確保するためには、複数の培養液中の反応を同時に
進行させ、それらの培養液中から分析のための試料を、
多数時点においてそれぞれ同時に採取し、それらの試料
を分析することが望ましい。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかし、複数の培養液
の反応を同時に進行させることは容易でも、それぞれの
液から複数の試料を、多数時点で同時に採取し、かつ反
応を直ちに停止させるには、極めて複雑な、従って高価
な装置を必要とした。
の反応を同時に進行させることは容易でも、それぞれの
液から複数の試料を、多数時点で同時に採取し、かつ反
応を直ちに停止させるには、極めて複雑な、従って高価
な装置を必要とした。
【０００６】さらに、培養反応を所望の雰囲気中、例え
ば酸素や炭酸ガスの一定分圧下で、行なう場合には、反
応の同時進行が可能でも、その雰囲気中を通して試料を
多数かつ同時に採取することが、極めて困難であった。
ば酸素や炭酸ガスの一定分圧下で、行なう場合には、反
応の同時進行が可能でも、その雰囲気中を通して試料を
多数かつ同時に採取することが、極めて困難であった。
【０００７】それ故、本発明の目的は、複数の組織片
を、所定の物質が添加された複数の培養液中でそれぞれ
所定の雰囲気の下に培養し、培養中の組織によるその物
質の代謝を解析する方法を提供することにある。
を、所定の物質が添加された複数の培養液中でそれぞれ
所定の雰囲気の下に培養し、培養中の組織によるその物
質の代謝を解析する方法を提供することにある。
【０００８】本発明の目的は、さらに、複数の組織片
を、所定の物質が添加された複数の培養液中でそれぞれ
所定の雰囲気の下に同時進行的に培養し、２以上の時点
でそれぞれの液から試料を同時に採取し、反応を直ちに
停止させて、それらの試料を分析に供することができ、
複数試料の同時採取と反応停止が安価な装置で行なえる
よう改良された方法を提供することにある。
を、所定の物質が添加された複数の培養液中でそれぞれ
所定の雰囲気の下に同時進行的に培養し、２以上の時点
でそれぞれの液から試料を同時に採取し、反応を直ちに
停止させて、それらの試料を分析に供することができ、
複数試料の同時採取と反応停止が安価な装置で行なえる
よう改良された方法を提供することにある。
【０００９】本発明の他の目的（二）は、複数の組織片
を、所定の物質が添加された複数の培養液中でそれぞれ
所定の雰囲気の下に同時進行的に培養し、２以上の時点
でそれぞれの液から試料を同時に採取し、反応を直ちに
停止させて、それらの試料を分析に供することができ
る、簡便、従って安価な装置を提供することにある。
を、所定の物質が添加された複数の培養液中でそれぞれ
所定の雰囲気の下に同時進行的に培養し、２以上の時点
でそれぞれの液から試料を同時に採取し、反応を直ちに
停止させて、それらの試料を分析に供することができ
る、簡便、従って安価な装置を提供することにある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】本発明の上記目的は、所
定の薬物が添加された培養液中で組織片を培養し、２以
上の時点において組織片及び培養液の少なくとも一方か
ら試料を同時に採取し、薬物の吸収、代謝、及び排泄の
結果、試料中に経時的に残存又は生成した未変化体及び
代謝物の少なくとも一方を定量分析して、これら未変化
体及び代謝物の量の時間的変化を追跡することにより、
組織による薬物代謝を解析する方法において、複数の組
織片をそれぞれ、互いに連結、固定された複数の培養容
器中において培養液中で個別にしかし同時に培養し、２
以上の時点においてそれぞれ、複数の組織片及び培養液
の少なくとも一方から試料を同時に採取することを特徴
とする薬物代謝解析方法により、達成された。
定の薬物が添加された培養液中で組織片を培養し、２以
上の時点において組織片及び培養液の少なくとも一方か
ら試料を同時に採取し、薬物の吸収、代謝、及び排泄の
結果、試料中に経時的に残存又は生成した未変化体及び
代謝物の少なくとも一方を定量分析して、これら未変化
体及び代謝物の量の時間的変化を追跡することにより、
組織による薬物代謝を解析する方法において、複数の組
織片をそれぞれ、互いに連結、固定された複数の培養容
器中において培養液中で個別にしかし同時に培養し、２
以上の時点においてそれぞれ、複数の組織片及び培養液
の少なくとも一方から試料を同時に採取することを特徴
とする薬物代謝解析方法により、達成された。
【００１１】本発明の上記目的は、特に、互いに連結さ
れた培養容器が密閉可能な袋体又は箱体に収められ、そ
の一端に所定の気体を導入するための管が接続され、他
端にはこの袋体中の気体組成が所定の組成に保たれる程
度の大きさの排気孔が設けられており、この袋体中の気
体組成を所定の組成に保つよう、気体導入管から所定の
気体を導入しつつ培養を行なうようにした、上記薬物代
謝解析方法により、さらに効果的に達成された。
れた培養容器が密閉可能な袋体又は箱体に収められ、そ
の一端に所定の気体を導入するための管が接続され、他
端にはこの袋体中の気体組成が所定の組成に保たれる程
度の大きさの排気孔が設けられており、この袋体中の気
体組成を所定の組成に保つよう、気体導入管から所定の
気体を導入しつつ培養を行なうようにした、上記薬物代
謝解析方法により、さらに効果的に達成された。
【００１２】本発明の上記目的（二）は、互いに連結さ
れた培養容器を密閉可能な袋体又は箱体（筒状のものを
含む）に収め、その一端に所定の気体を導入するための
管を接続し、他端にはこの袋体または箱体中の気体組成
が所定の組成に保たれる程度の大きさの排気孔を設け、
この袋体又は箱体中の気体組成を所定の組成に保つよ
う、気体導入管から所定の気体を導入しつつ培養を行な
うようにした培養器具により、達成された。
れた培養容器を密閉可能な袋体又は箱体（筒状のものを
含む）に収め、その一端に所定の気体を導入するための
管を接続し、他端にはこの袋体または箱体中の気体組成
が所定の組成に保たれる程度の大きさの排気孔を設け、
この袋体又は箱体中の気体組成を所定の組成に保つよ
う、気体導入管から所定の気体を導入しつつ培養を行な
うようにした培養器具により、達成された。
【００１３】
【発明の実施の形態】薬物は、合成物に限らず、天然
物、生物体内在物質をも包含する。培養容器の数と組織
片の数は一致するとは限らず、一個の培養容器に２以上
の組織片を収容してもよい。組織片、培養液いずれかか
ら試料を採取してもよく、また組織片及び培養液の両方
から試料を採取してもよい。後者の場合、試料は組織片
及び培養液の両方から同時に採取する。
物、生物体内在物質をも包含する。培養容器の数と組織
片の数は一致するとは限らず、一個の培養容器に２以上
の組織片を収容してもよい。組織片、培養液いずれかか
ら試料を採取してもよく、また組織片及び培養液の両方
から試料を採取してもよい。後者の場合、試料は組織片
及び培養液の両方から同時に採取する。
【００１４】培養容器の形状は発明の効果に関係しない
が、底面が平な皿状（シャーレ状）が実用上便利であ
る。培養液のこぼれるのを防ぐため、培養容器は培養液
の体積の３倍以上の容積をもつことが好ましい。
が、底面が平な皿状（シャーレ状）が実用上便利であ
る。培養液のこぼれるのを防ぐため、培養容器は培養液
の体積の３倍以上の容積をもつことが好ましい。
【００１５】培養容器は、同一雰囲気、同一温度の条件
で、反応時間が共通のものを複数、互いに連結、固定す
る。ただし、必要に応じ、連結された２群以上に分けて
もよい（基板に固定する場合には、２枚以上に分けても
よい）。固定とは、着脱自在も含むものとする。連結さ
れた培養容器の配列は、１列でも、２列以上でも、また
円周上でもよく、任意である。１枚又は２枚以上の基板
に培養容器を固定して互いを連結する場合、基板は化学
的に安定なもの、そして反応温度で変形、変質しないも
のが、好ましい。
で、反応時間が共通のものを複数、互いに連結、固定す
る。ただし、必要に応じ、連結された２群以上に分けて
もよい（基板に固定する場合には、２枚以上に分けても
よい）。固定とは、着脱自在も含むものとする。連結さ
れた培養容器の配列は、１列でも、２列以上でも、また
円周上でもよく、任意である。１枚又は２枚以上の基板
に培養容器を固定して互いを連結する場合、基板は化学
的に安定なもの、そして反応温度で変形、変質しないも
のが、好ましい。
【００１６】培養は、培養容器内の培養液中で行なわれ
るが、必要に応じて、培養液を培養容器とも所望の雰囲
気中に置いて培養を行なう。この場合、雰囲気の気体組
成を一定に保つためには、培養液容器を適宜の形状の袋
又は箱（以下、袋等という）に収容し、袋等の一端から
所定の組成の気体を適宜の流量で導入し、他端に設けた
適宜の大きさの孔から外界に気体を排出する方法をとる
ことができる。袋等の他端に孔を設ける代わりに、多孔
性の袋（例えば紙袋）等を用いてもよい。培養液の液面
付近では、培養中の組織片から代謝および排泄の結果発
生する水、二酸化炭素、アンモニア、酸化窒素等の気体
の濃度が上昇する傾向があるから、気体の流通を促すと
ともに、所定の組成の気体を袋等に流通させる必要があ
る。密閉容器あるいは気体の出入口が１ヶ所しかない袋
等を用いると、培養液上の気体組成を一定に保つことは
困難である。袋等は、不透明あるいは半透明でもよい
が、透明のものが培養液を観察できて、便利である。半
透明または透明である場合、袋等は有色（波長選択性）
あるいは紫外線不透過性であってもよい。培養器具内部
の滅菌のためには、紫外線透過性であることが好まし
い。
るが、必要に応じて、培養液を培養容器とも所望の雰囲
気中に置いて培養を行なう。この場合、雰囲気の気体組
成を一定に保つためには、培養液容器を適宜の形状の袋
又は箱（以下、袋等という）に収容し、袋等の一端から
所定の組成の気体を適宜の流量で導入し、他端に設けた
適宜の大きさの孔から外界に気体を排出する方法をとる
ことができる。袋等の他端に孔を設ける代わりに、多孔
性の袋（例えば紙袋）等を用いてもよい。培養液の液面
付近では、培養中の組織片から代謝および排泄の結果発
生する水、二酸化炭素、アンモニア、酸化窒素等の気体
の濃度が上昇する傾向があるから、気体の流通を促すと
ともに、所定の組成の気体を袋等に流通させる必要があ
る。密閉容器あるいは気体の出入口が１ヶ所しかない袋
等を用いると、培養液上の気体組成を一定に保つことは
困難である。袋等は、不透明あるいは半透明でもよい
が、透明のものが培養液を観察できて、便利である。半
透明または透明である場合、袋等は有色（波長選択性）
あるいは紫外線不透過性であってもよい。培養器具内部
の滅菌のためには、紫外線透過性であることが好まし
い。
【００１７】培養液は、組織の要求する栄養素を十分含
むことが必要である。培養液の量は、組織片の体積の少
なくとも１０倍の体積を用いる必要があり、１５倍以上
とするのが好ましい。
むことが必要である。培養液の量は、組織片の体積の少
なくとも１０倍の体積を用いる必要があり、１５倍以上
とするのが好ましい。
【００１８】組織片の厚さは１ｍｍ以上、３ｍｍ以下と
することが好ましい。組織片の作製は、３℃以下で行な
うことが望ましく、０℃に近い温度が好ましい。しか
し、培養液が凍結する温度よりは高い温度とする。組織
片の作製は、２０分以内で終わるのが好ましい。組織片
の作製後培養開始までの時間は、１０分を超えないこと
が好ましい。
することが好ましい。組織片の作製は、３℃以下で行な
うことが望ましく、０℃に近い温度が好ましい。しか
し、培養液が凍結する温度よりは高い温度とする。組織
片の作製は、２０分以内で終わるのが好ましい。組織片
の作製後培養開始までの時間は、１０分を超えないこと
が好ましい。
【００１９】肝臓の組織片は、肝小葉を単位とし、複数
の肝小葉を含まないようにすることが好ましい。
の肝小葉を含まないようにすることが好ましい。
【００２０】各培養条件の組織片及び培養液から得た試
料から抽出された成分の分離は、例えば１枚の薄層クロ
マトグラフ板上で同時にクロマトグラフ展開を行なうな
ど、極力、同時進行的に行なうことが好ましい。
料から抽出された成分の分離は、例えば１枚の薄層クロ
マトグラフ板上で同時にクロマトグラフ展開を行なうな
ど、極力、同時進行的に行なうことが好ましい。
【００２１】図１に本発明に用いる培養容器の連結体を
示す。培養液（図示せず）を入れた培養シャーレ１は、
平らな底を有し、平らな基板２に固定されることにより
一体に連結されている。
示す。培養液（図示せず）を入れた培養シャーレ１は、
平らな底を有し、平らな基板２に固定されることにより
一体に連結されている。
【００２２】図２に、培養液を一定雰囲気下に置くため
の袋体を具える、本発明に用いる培養器具を示す。培養
シャーレ１は平らな基板２に一列に固定され、筒状の袋
３に収められている。袋３は一端にガス導入管４を、他
端上部に小さい孔５および排気管６を有する。培養のた
めの所望の組成のガスを、ガス導入管４から袋３に供給
する。袋３中の気体の一部は孔５から排気管６を通じて
袋の外へ徐々に放出される。
の袋体を具える、本発明に用いる培養器具を示す。培養
シャーレ１は平らな基板２に一列に固定され、筒状の袋
３に収められている。袋３は一端にガス導入管４を、他
端上部に小さい孔５および排気管６を有する。培養のた
めの所望の組成のガスを、ガス導入管４から袋３に供給
する。袋３中の気体の一部は孔５から排気管６を通じて
袋の外へ徐々に放出される。
【００２３】図３に、本発明に用いる培養装置を示す。
基板２に固定された培養シャーレ１を収容した袋３を、
基板２が水平になるように支持台８に載せ、所望の温度
の恒温槽７に収め、図示しない動揺手段で全体を動揺さ
せながら、所要の時間、培養反応を行なわせる。
基板２に固定された培養シャーレ１を収容した袋３を、
基板２が水平になるように支持台８に載せ、所望の温度
の恒温槽７に収め、図示しない動揺手段で全体を動揺さ
せながら、所要の時間、培養反応を行なわせる。
【００２４】
【実施例】以下に実施例を示し、本発明をより具体的に
説明する。 ［実施例１］５％のキシリトール及び10ー8 mol/Lのメシ
ル酸ナファモスタットを含むWaymouth培養液（生理的緩
衝塩類、必須アミノ酸、ビタミン類を含む）を準備し、
温度を０℃とした（以下、培養液Ａという）。
説明する。 ［実施例１］５％のキシリトール及び10ー8 mol/Lのメシ
ル酸ナファモスタットを含むWaymouth培養液（生理的緩
衝塩類、必須アミノ酸、ビタミン類を含む）を準備し、
温度を０℃とした（以下、培養液Ａという）。
【００２５】ヒトから手術の際に採取された肝臓の一部
（肝小葉）を、下記組成の潅流液で潅流して組織中の血
液を除去した後、０℃付近の温度に保って輸送した。輸
送の所要時間は約５０時間であった。
（肝小葉）を、下記組成の潅流液で潅流して組織中の血
液を除去した後、０℃付近の温度に保って輸送した。輸
送の所要時間は約５０時間であった。
【００２６】到着後直ちに、肝臓組織をスライス液Ｂ中
で厚さ２ mm 、重量約100 mgの薄片にスライスし、液中
に浮遊させた。組織片の重量を測定し、100 mg当たり 1
0 pgのDiazepam（３.7ｋBqの2ー14Ｃを含む）を、組織片
を浮遊させたスライス液Ｂに加え、図１に示すように培
養シャーレ１に入れ、それを基板２に着脱自在に固定し
た。
で厚さ２ mm 、重量約100 mgの薄片にスライスし、液中
に浮遊させた。組織片の重量を測定し、100 mg当たり 1
0 pgのDiazepam（３.7ｋBqの2ー14Ｃを含む）を、組織片
を浮遊させたスライス液Ｂに加え、図１に示すように培
養シャーレ１に入れ、それを基板２に着脱自在に固定し
た。
【００２７】
【００２８】基板２を、図２に示すようにポリエチレン
製の筒状の袋３で包み、ガス導入管４から酸素ガスを毎
分100 ミリリットルの液量で供給した。図３に示すように、温
度28℃の恒温槽中で培養反応を開始させた。反応時間
中、基板２上の培養シャーレ１を、図示しない動揺装置
で動揺させて、培養液を攪拌した。
製の筒状の袋３で包み、ガス導入管４から酸素ガスを毎
分100 ミリリットルの液量で供給した。図３に示すように、温
度28℃の恒温槽中で培養反応を開始させた。反応時間
中、基板２上の培養シャーレ１を、図示しない動揺装置
で動揺させて、培養液を攪拌した。
【００２９】反応開始から15分、１，２，４，２４時間
後に、それぞれの反応時間に対応する基板上の培養容器
群を取り出し、培養液に２ミリリットルのメタノールを添加し
て、反応を停止させた。組織片を培養液から取り出し、
0.5 ミリリットルのメタノール中で温度−25℃で16時間抽出
し、抽出を５回繰り返した後、抽出液を併せ、減圧下に
溶媒を除去した後、20マイクロリットルのメタノールで再溶解
し、各濃縮抽出液をシリカゲル薄層クロマトグラフ板
（Merck 社No. 60F254 ）（以下、ＴＬＣ板）の下端か
ら10 mm の位置に点着した。培養液は遠心分離して、そ
の上清をＴＬＣ板に点着した。
後に、それぞれの反応時間に対応する基板上の培養容器
群を取り出し、培養液に２ミリリットルのメタノールを添加し
て、反応を停止させた。組織片を培養液から取り出し、
0.5 ミリリットルのメタノール中で温度−25℃で16時間抽出
し、抽出を５回繰り返した後、抽出液を併せ、減圧下に
溶媒を除去した後、20マイクロリットルのメタノールで再溶解
し、各濃縮抽出液をシリカゲル薄層クロマトグラフ板
（Merck 社No. 60F254 ）（以下、ＴＬＣ板）の下端か
ら10 mm の位置に点着した。培養液は遠心分離して、そ
の上清をＴＬＣ板に点着した。
【００３０】薄層クロマトグラフ板を下記組成の展開溶
媒で展開し、乾燥させ、イメージングプレート（富士写
真フイルム社、東京）に密着させ、画像解析装置ＢＡＳ
2000（富士写真フイルム社、東京）で解析した。上記密
着の時間は２４時間、４８時間、７２時間の３段階と
し、所要の画像について最適のものの数値を用いた。 ［展開溶媒の組成］ クロロホルム 95 部 メタノール 5 部 アンモニア水 0.1部
媒で展開し、乾燥させ、イメージングプレート（富士写
真フイルム社、東京）に密着させ、画像解析装置ＢＡＳ
2000（富士写真フイルム社、東京）で解析した。上記密
着の時間は２４時間、４８時間、７２時間の３段階と
し、所要の画像について最適のものの数値を用いた。 ［展開溶媒の組成］ クロロホルム 95 部 メタノール 5 部 アンモニア水 0.1部
【００３１】画像解析により得た各ＴＬＣ板上の画分の
相対的放射能濃度を、培養開始時点の培養液中放射能濃
度を１００とした相対値として表示した。結果は表１及
び表２に示す通りであった。
相対的放射能濃度を、培養開始時点の培養液中放射能濃
度を１００とした相対値として表示した。結果は表１及
び表２に示す通りであった。
【００３２】 表１ 培養液中の放射能 培養時間(hr) 0.25 １ ２ ４ 24 未変化体 84.82 0.00 0.00 0.00 0.00 代謝物 Ｍ１ 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 Ｍ２ 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 Ｍ３ 0.25 94.7 91.0 91.4 83.8
【００３３】 表２ 組織片中の放射能 培養時間(hr) 0.25 １ ２ ４ 24 未変化体 U 14.75 0.13 0.20 0.08 0.21 代謝物 Ｍ１ 0.07 0.00 0.02 0.01 0.01 Ｍ２ 0.07 0.005 0.007 0.01 0.04 Ｍ３ 0.05 5.17 8.95 7.98 13.90 代謝物合計 0.19 5.17 8.98 8.00 13.95 未変化体＋代謝物 T 14.94 5.30 9.18 8.08 14.16 100 U / T 98.7 2.45 2.18 0.99 1.48
【００３４】表１及び表２に見られるように、反応時間
15分で肝臓組織に取り込まれた薬物は、培養液に加えら
れた薬物の約15％（14.94 ＋0.25％）、組織中の未変化
体は14.75 ％である。この時点で肝臓に吸収された薬物
のうち約 99 ％は未変化体のままで存在し（100U/Tの欄
参照）、薬物のごく一部が代謝されたに過ぎない。
15分で肝臓組織に取り込まれた薬物は、培養液に加えら
れた薬物の約15％（14.94 ＋0.25％）、組織中の未変化
体は14.75 ％である。この時点で肝臓に吸収された薬物
のうち約 99 ％は未変化体のままで存在し（100U/Tの欄
参照）、薬物のごく一部が代謝されたに過ぎない。
【００３５】１時間経過後には、添加薬物の全てが肝臓
組織内に取り込まれた。そのうち未変化体として組織中
に留まる分は少なく、代謝物Ｍ３として大部分が培養液
中に排出されるが、代謝物Ｍ３の一部は組織中に残る。
２時間以降でも同様である。他の代謝物Ｍ１，Ｍ２は、
培養液中にはほとんど認められない。１時間以後組織中
の代謝物Ｍ３は増加するが、Ｍ１，Ｍ２は減少する。
組織内に取り込まれた。そのうち未変化体として組織中
に留まる分は少なく、代謝物Ｍ３として大部分が培養液
中に排出されるが、代謝物Ｍ３の一部は組織中に残る。
２時間以降でも同様である。他の代謝物Ｍ１，Ｍ２は、
培養液中にはほとんど認められない。１時間以後組織中
の代謝物Ｍ３は増加するが、Ｍ１，Ｍ２は減少する。
【００３６】［実施例２］実施例１の［2ー14Ｃ］Diazep
amの代わりに ringー14Ｃ標識 7-ethoxycoumarinを用い
て、同様の実験及び解析を行なった。展開液として、n-
ヘキサン６部と酢酸エチル４部の混合液を用いた。ＴＬ
Ｃ板上の放射能の画像解析により得た各画分の相対的放
射能濃度を、培養開始時点の培養液中放射能濃度を１０
０とする相対値として表示した結果を、表３及び表４に
示す。３種の代謝物をＭ11、Ｍ12、Ｍ13とした。
amの代わりに ringー14Ｃ標識 7-ethoxycoumarinを用い
て、同様の実験及び解析を行なった。展開液として、n-
ヘキサン６部と酢酸エチル４部の混合液を用いた。ＴＬ
Ｃ板上の放射能の画像解析により得た各画分の相対的放
射能濃度を、培養開始時点の培養液中放射能濃度を１０
０とする相対値として表示した結果を、表３及び表４に
示す。３種の代謝物をＭ11、Ｍ12、Ｍ13とした。
【００３７】 表 ３ 培養液中の放射能 培養時間(hr) 0.25 １ ２ ４ 24 未変化体 85.2 78.84 57.15 26.25 0.77 代謝物 Ｍ11 0.58 1.21 3.34 5.60 1.89 Ｍ12 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 Ｍ13 1.79 4.21 11.27 29.22 80.45
【００３８】 表 ４ 組織片中の放射能 培養時間(hr) 0.25 １ ２ ４ 24 未変化体 11.35 16.83 13.63 15.16 0.91 代謝物 Ｍ11 0.098 0.034 0.61 0.62 0.24 Ｍ12 0.073 0.315 0.82 1.08 0.53 Ｍ13 0.915 4.77 13.29 21.70 14.56 代謝物合計 1.086 5.12 14.72 23.40 15.33 未変化体＋代謝物 12.44 21.95 28.35 38.56 16.24
【００３９】ringー14Ｃ標識 7-ethoxycoumarin の組織
取り込み及び代謝について、表３及び表４から、未変化
体が組織に取り込まれるにつれ、培養液中の未変化体が
減少し、組織中の未変化体は一旦増加するが、２４時間
後には大きく減少すること、組織中で生ずる代謝物は主
にＭ13であること、組織中の代謝物は各成分とも４時間
まで増加するが、２４時間では減少する一方、組織中の
未変化体とＭ13の減少に対応して培養液中のＭ13が２４
時間では著しく増すことがわかる。
取り込み及び代謝について、表３及び表４から、未変化
体が組織に取り込まれるにつれ、培養液中の未変化体が
減少し、組織中の未変化体は一旦増加するが、２４時間
後には大きく減少すること、組織中で生ずる代謝物は主
にＭ13であること、組織中の代謝物は各成分とも４時間
まで増加するが、２４時間では減少する一方、組織中の
未変化体とＭ13の減少に対応して培養液中のＭ13が２４
時間では著しく増すことがわかる。
【００４０】
【発明の効果】複数の組織片をそれぞれ、互いに連結、
固定された複数の培養容器中において培養液中で個別に
しかし同時に培養し、２以上の時点においてそれぞれ、
複数の組織片及び培養液の少なくとも一方から試料を同
時に採取するようにしたことによって、複数の組織片
を、所定の物質が添加された複数の培養液中でそれぞれ
所定の雰囲気の下に培養し、培養中の組織によるその物
質の代謝を解析することが可能となった。
固定された複数の培養容器中において培養液中で個別に
しかし同時に培養し、２以上の時点においてそれぞれ、
複数の組織片及び培養液の少なくとも一方から試料を同
時に採取するようにしたことによって、複数の組織片
を、所定の物質が添加された複数の培養液中でそれぞれ
所定の雰囲気の下に培養し、培養中の組織によるその物
質の代謝を解析することが可能となった。
【００４１】特に、互いに連結された培養容器を密閉可
能な袋体又は箱体に収め、その一端に所定の気体を導入
するための管を接続し、他端にはこの袋体（又は箱体）
中の気体組成が所定の組成に保たれる程度の大きさの排
気孔を設け、この袋体（又は箱体）中の気体組成を所定
の組成に保つよう、気体導入管から所定の気体を導入し
つつ培養を行なうようにした培養器具を用いることによ
り、複数の組織片を、所定の物質が添加された複数の培
養液中でそれぞれ所定の雰囲気の下に培養し、培養中の
組織による物質の代謝を解析することが、簡便かつ安価
にできるようになった。
能な袋体又は箱体に収め、その一端に所定の気体を導入
するための管を接続し、他端にはこの袋体（又は箱体）
中の気体組成が所定の組成に保たれる程度の大きさの排
気孔を設け、この袋体（又は箱体）中の気体組成を所定
の組成に保つよう、気体導入管から所定の気体を導入し
つつ培養を行なうようにした培養器具を用いることによ
り、複数の組織片を、所定の物質が添加された複数の培
養液中でそれぞれ所定の雰囲気の下に培養し、培養中の
組織による物質の代謝を解析することが、簡便かつ安価
にできるようになった。
【図１】 本発明に用いる培養容器の連結体の断面図。
【図２】 本発明に用いる培養器具の断面図。
【図３】 本発明に用いる培養装置の説明図。
１ 培養シャーレ ２ 基板 ３ 袋 ４ ガス導入管 ５ 孔 ６ 排気管 ７ 恒温槽 ８ 支持台
Claims (13)
- 【請求項１】 所定の薬物が添加された培養液中で組織
片を培養し、２以上の時点において前記組織片及び培養
液の少なくとも一方から試料を採取し、組織での前記薬
物の吸収、代謝、及び排泄の結果、前記試料中に経時的
に残存又は生成した未変化体及び代謝物の少なくとも一
方を定量分析して、前記未変化体及び代謝物の量の時間
的変化を追跡することにより、組織による薬物代謝を解
析する方法において、 複数の組織片をそれぞれ、互いに連結し固定された複数
の培養容器中において前記培養液中で個別にしかし同時
に培養し、２以上の時点においてそれぞれ、前記複数の
組織片及び培養液の少なくとも一方から試料を同時に採
取することを特徴とする、薬物代謝解析方法。 - 【請求項２】 前記複数の組織片および培養液の両方か
ら試料を同時に採取する、請求項１の薬物代謝解析方
法。 - 【請求項３】 前記培養容器が平坦な底を有し、平坦な
基板の上に固定される、請求項１又は２の薬物代謝解析
方法。 - 【請求項４】 前記薬物が放射性標識薬物である、請求
項１、２又は３の薬物代謝解析方法。 - 【請求項５】 前記培養容器が密閉可能な袋体または箱
体に収められ、その一端に所定の気体を導入するための
管が接続され、この袋体または箱体はその中の気体組成
が所定の組成に保たれる程度の大きさの排気孔を有し、
前記袋体または箱体の中の気体組成を所定の組成に保つ
よう、前記管から所定の気体を導入しつつ、前記培養を
行なう、請求項１ないし４のいずれかの薬物代謝解析方
法。 - 【請求項６】 前記複数の培養容器を培養時間を同じく
する群に分け、各群の培養容器をそれぞれ互いに連結、
固定して、群別に前記袋体または箱体に収め、所定の培
養時間が経過したとき、他の群から分離して培養を終了
する、請求項５の薬物代謝解析方法。 - 【請求項７】 前記袋体又は箱体にそれぞれ収めた前記
培養容器の複数の群を、同一の恒温槽中で共通の器具に
より揺動して培養する、請求項５の薬物代謝解析方法。 - 【請求項８】 前記各群の培養容器を、同じ基板上に一
列に並べて配置する、請求項６又は７の薬物代謝解析方
法。 - 【請求項９】 前記組織が肝臓である、請求項１ないし
８いずれかの薬物代謝解析方法。 - 【請求項１０】 前記組織片が肝臓スライスから得たも
のである、請求項９の薬物代謝解析方法。 - 【請求項１１】 互いに連結された複数の培養容器と、
これを収める密閉可能な袋体又は箱体と、その一端に接
続された所定の気体を導入するための管と、前記袋体又
は箱体の他端に設けた排気孔から成り、 この排気孔は前記袋体又は箱体中の気体組成を所定の組
成に保ち得る程度の大きさであり、前記袋体又は箱体中
の気体組成を所定の組成に保つよう、気体導入管から所
定の気体を導入しつつ培養を行なうための、培養器具。 - 【請求項１２】 前記培養容器を同じ基板上に配置し
た、請求項１１の培養器具。 - 【請求項１３】 互いに連結された複数の培養容器と、
これを収める密閉可能な袋体又は箱体と、その一端に接
続された所定の気体を導入するための管と、前記袋体又
は箱体の他端に設けた、前記袋体又は箱体中の気体組成
を所定の組成に保ち得る程度の大きさの排気孔から成る
培養器具と、この培養器具を一定温度に保つための恒温
液槽と、前記培養容器を揺動するための揺動手段を具え
る、培養装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10124098A JPH11299478A (ja) | 1998-04-17 | 1998-04-17 | 薬物代謝解析方法およびそのための器具 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10124098A JPH11299478A (ja) | 1998-04-17 | 1998-04-17 | 薬物代謝解析方法およびそのための器具 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11299478A true JPH11299478A (ja) | 1999-11-02 |
Family
ID=14876883
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10124098A Pending JPH11299478A (ja) | 1998-04-17 | 1998-04-17 | 薬物代謝解析方法およびそのための器具 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11299478A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2012075410A (ja) * | 2010-10-04 | 2012-04-19 | Microbio Corp | 嫌気性菌培養キット |
| US9005971B2 (en) | 2005-04-22 | 2015-04-14 | Life Technologies Corporation | Gas spargers and related container systems |
| US9376655B2 (en) | 2011-09-29 | 2016-06-28 | Life Technologies Corporation | Filter systems for separating microcarriers from cell culture solutions |
| US9643133B2 (en) | 2011-09-30 | 2017-05-09 | Life Technologies Corporation | Container with film sparger |
| US10123940B2 (en) | 2014-06-26 | 2018-11-13 | Advanced Scientific, Inc. | Bag assembly and system for use with a fluid |
| US10589197B2 (en) | 2016-12-01 | 2020-03-17 | Life Technologies Corporation | Microcarrier filter bag assemblies and methods of use |
-
1998
- 1998-04-17 JP JP10124098A patent/JPH11299478A/ja active Pending
Cited By (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9005971B2 (en) | 2005-04-22 | 2015-04-14 | Life Technologies Corporation | Gas spargers and related container systems |
| US9259692B2 (en) | 2005-04-22 | 2016-02-16 | Life Technologies Corporation | Gas spargers and related container systems |
| US9475012B2 (en) | 2005-04-22 | 2016-10-25 | Life Technologies Corporation | Gas spargers and related container systems |
| US9682353B2 (en) | 2005-04-22 | 2017-06-20 | Life Technologies Corporation | Gas spargers and related container systems |
| US10328404B2 (en) | 2005-04-22 | 2019-06-25 | Life Technologies Corporation | Gas spargers and related container systems |
| JP2012075410A (ja) * | 2010-10-04 | 2012-04-19 | Microbio Corp | 嫌気性菌培養キット |
| US10934514B2 (en) | 2011-09-29 | 2021-03-02 | Life Technologies Corporation | Filter systems for separating microcarriers from cell culture solutions |
| US9376655B2 (en) | 2011-09-29 | 2016-06-28 | Life Technologies Corporation | Filter systems for separating microcarriers from cell culture solutions |
| US12234439B2 (en) | 2011-09-29 | 2025-02-25 | Life Technologies Corporation | Filter systems for separating microcarriers from cell culture solutions |
| US11840684B2 (en) | 2011-09-29 | 2023-12-12 | Life Technologies Corporation | Filter systems for separating microcarriers from cell culture solutions |
| US10301585B2 (en) | 2011-09-29 | 2019-05-28 | Life Technologies Corporation | Filter systems for separating microcarriers from cell culture solutions |
| US10350554B2 (en) | 2011-09-30 | 2019-07-16 | Life Technologies Corporation | Container with film Sparger |
| US10843141B2 (en) | 2011-09-30 | 2020-11-24 | Life Technologies Corporation | Container with film sparger |
| US12128367B2 (en) | 2011-09-30 | 2024-10-29 | Life Technologies Corporation | Container with film sparger |
| US9643133B2 (en) | 2011-09-30 | 2017-05-09 | Life Technologies Corporation | Container with film sparger |
| US10463571B2 (en) | 2014-06-26 | 2019-11-05 | Advanced Scientifics, Inc. | Bag assembly and bag system for use with a fluid |
| US10123940B2 (en) | 2014-06-26 | 2018-11-13 | Advanced Scientific, Inc. | Bag assembly and system for use with a fluid |
| US10589197B2 (en) | 2016-12-01 | 2020-03-17 | Life Technologies Corporation | Microcarrier filter bag assemblies and methods of use |
| US11344827B2 (en) | 2016-12-01 | 2022-05-31 | Life Technologies Corporation | Microcarrier filter bag assemblies and methods of use |
| US11890557B2 (en) | 2016-12-01 | 2024-02-06 | Life Technologies Corporation | Microcarrier filter bag assemblies and methods of use |
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|---|---|---|---|
| A02 | Decision of refusal |
Effective date: 20040512 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 |