JPH11302179A - 抗アレルギー剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 医薬品としてまた食品に添加して摂取して効
果のある抗アレルギー剤の提供。 【解決手段】 一般式（Ｉ）： 【化１】 ［式中、Ｒ₁ はＨ、糖類の残基、Ｃ₁ 〜Ｃ₂₀アルキル、
Ｒ₂ とＲ₃ はＨ、ベンジル、Ｒ₄ 、Ｒ₅ 、Ｒ₆ はＨ、硫
酸基、リン酸基。］で表されるグルコサミン、グルコサ
ミン誘導体又はその塩を有効成分とする抗アレルギー
剤。 【効果】 Ｉ型アレルギーに効果を示す。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はグルコサミンあるい
はグルコサミン誘導体の低親和性ＩｇＥリセプター（Ｃ
Ｄ２３またはＦｃεＲII）への作用に基づく、抗アレル
ギー剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来より、気管支喘息、蕁麻疹などの疾
患の他、花粉症などのアレルギー性鼻炎や食品によるア
トピー性疾患などのアレルギーが深刻な問題となってい
る。これらのアレルギー疾患に対しては、ステロイド剤
に代表される薬剤による治療法があるが、望ましい効果
が得られなかったり強い副作用が起こることもあり問題
である。また、少量の抗原を投与させる減感作療法が行
われているが、治療に長期間かかり、副作用が現れた
り、望ましい効果が得られない場合もあるなど課題は多
い。

【０００３】上記のアレルギー性疾患はＩ型アレルギー
に分類されるが、このＩ型アレルギー原因抗体がＩｇＥ
抗体であることはよく知られている。低親和性のＩｇＥ
リセプター（ＦｃεＲIIあるいはＣＤ２３、以下ＣＤ２
３と略す）は分子サイズが、４５キロダルトンの膜たん
ぱく質で、Ｎ末端側が細胞の内側にあり、Ｃ末端側が細
胞の外に出ている。ＣＤ２３は、一次構造からＣａ²⁺依
存性（Ｃ−ｔｙｐｅ）レクチンのメンバーの一つとさ
れ、ＣＤ２３のＩｇＥ結合領域は、レクチン領域とほぼ
一致する。しかしながら、ＩｇＥとの結合には糖鎖を介
せず、比較的低い親和性（Ｋａ＝約１０⁷ ）で結合す
る。ＣＤ２３の細胞外領域のＣ末端側は切断され、３７
キロダルトンのフラグメントが生じる。これはさらに切
断され、３３キロダルトン、２５キロダルトン、１２キ
ロダルトンの分子種が生じる。これらの可溶性ＣＤ２３
（以下ｓＣＤ２３と略す）のうち２５キロダルトン以上
の分子サイズの分子種はＩｇＥ結合能を有する。

【０００４】ＣＤ２３は、主に活性化されたＢ細胞で発
現するが、Ｔ細胞、樹枝状細胞、単球、ランゲルハンス
細胞、好塩基球でも発現する。ＣＤ２３やｓＣＤ２３
は、アトピー性疾患などのアレルギーの原因となるＩｇ
Ｅ合成の調節に関与する。ＣＤ２３は、ＩｇＥの他に、
ＣＤ２１とも結合し、ＩｇＥ合成を調節する他、単球上
のＣＤ１１ｂあるいはＣＤ１１ｃとも結合し炎症反応に
も関与していると考えられている。

【０００５】近年、抗ＣＤ２３モノクローナル抗体がＩ
ｇＥの合成を抑制し（Bonnefoy etal., 1990, Eur. J.
Immunol. 20, 139; Flores-Romo et al., 1993, Scien
ce,261, 1038）、特にＣＤ２３のＩｇＥ結合領域に結合
する抗ＣＤ２３モノクローナル抗体が、ＩｇＥの生産を
抑制することから（Wakai et al., 1993, Hybridoma 1
2, 25）、ＣＤ２３のＩｇＥ結合領域（レクチン領域）
の作用を抑制する物質を見いだすことができれば、Ｉｇ
Ｅの合成を抑制することが可能であると考えられてき
た。グルコサミンは、関節炎の治療薬として用いられて
きた（Setnikar et al., 1991, Arzneim.-Forsch./Drug
Res., 41, 542）。また、炎症、自己免疫疾患、ガン転
移等の疾患に有効な抗炎症薬等としてグルコサミン誘導
体が開発されてきた（特開平９−３０１９８８号公
報）。さらに、グルコサミンのポリマーであるキトサン
は免疫賦活作用、抗腫瘍作用や抗菌作用などが報告され
（キチン、キトサン研究会編、キチン、キトサンの応
用、技報堂出版、１９９０年）、最近では、抗凝結作用
を持つスルホン化キトサンが開発されている（化学工業
日報、１９９８年１月６日記事）。しかしながら、グル
コサミンあるいはグルコサミン誘導体に、アレルギー、
特にＩ型アレルギーを抑える作用のあることは知られて
いなかった。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】上記のように、アレル
ギー疾患が問題となっているのにも関わらず、有効な抗
アレルギー剤は未だ開発されていない。また、ＣＤ２３
がアレルギーに関与するＩｇＥ抗体の生産を調節してい
ることがわかっているが、ＣＤ２３の作用を抑制する物
質は見出されていない。本発明は、ＣＤ２３の作用を抑
制し、副作用を伴わず、Ｉ型アレルギーの予防、治療に
有効な組成物を提供せんとするものである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、この目的
のために鋭意検討を続けてきた結果、特定のグルコサミ
ン誘導体が、ＣＤ２３に対して作用し、ＩｇＥとの結合
を阻害し、抗アレルギー剤として利用できることを見い
だし、本発明を完成した。従って、本発明の抗アレルギ
ー剤は、グルコサミンまたは一般式（Ｉ）：

【化２】 ［式中、Ｒ₁ は糖類の残基、炭素原子数１ないし２０の
アルキル基または水素原子を表し、Ｒ₂ およびＲ₃ は互
いに独立してベンジル基または水素原子を表し、Ｒ₄ 、
Ｒ₅ およびＲ₆ は互いに独立して硫酸基、リン酸基ある
いは水素原子を表す。］で表されるグルコサミン誘導体
もしくはそれらの塩を有効成分として含有することを特
徴とするものである。

【０００８】上記置換基の定義において、糖類の残基と
しては、グルコース、ガラクトース、マンノース、アラ
ビノースおよび上記の一般式（Ｉ）と同一構造を繰り返
し構造単位とするもので、例えば該構造単位が１ないし
５個、好ましくは１ないし３個結合したものなどが挙げ
られる。炭素原子数１ないし２０のアルキル基として
は、直鎖または枝分かれ鎖のいずれのものでもよい。好
ましくは、炭素原子数１〜１２、更に好ましくは１〜６
のアルキル基である。

【０００９】好ましい化合物としては、例えば、Ｒ₁ が
糖類の残基、アルキル基または水素原子を表し、Ｒ₂ お
よびＲ₃ が水素原子を表し、Ｒ₄ 、Ｒ₅ およびＲ₆ が互
いに独立して硫酸基、リン酸基あるいは水素原子を表す
化合物、または、Ｒ₁ が糖類の残基、アルキル基または
水素原子を表し、Ｒ₂ およびＲ₃ がベンジル基を表し、
Ｒ₄ 、Ｒ₅ およびＲ₆ は水素原子を表す化合物などが例
示できる。

【００１０】本発明のグルコサミンあるいはグルコサミ
ン誘導体は、ＣＤ２３中の活性領域に対して作用し、ア
レルギーと関係するＩｇＥやＣＤ２１とＣＤ２３の結合
を抑制することにより抗アレルギー作用を発揮するもの
と考えられる。さらにＣＤ２３は、単球上の糖蛋白質で
あるＣＤ１１ｂやＣＤ１１ｃと結合し、炎症作用に関わ
るが、この作用もグルコサミンあるいはグルコサミン誘
導体が阻害するものと考えられる。

【００１１】本発明の抗アレルギー剤として使用できる
化合物は、グルコサミンあるいはグルコサミン誘導体で
あり、天然あるいは合成品のいずれも使用できる。本発
明品を得るための製造法にはなんら制限がなく、化学
的、酵素的、あるいは生物学的に製造することができ
る。例えば、キチンやキトサン、糖蛋白質糖鎖、グリコ
サミノグリカンなどの天然物の化学的あるいは酵素的な
分解により得ることができ、天然物の分解物をさらにリ
ン酸化や硫酸化、エステル化、グリコシル化などの化学
処理することによって得ることができる。天然物の場
合、その由来は制限されない。例えば、かに殻などから
得られるキチンを酸により加水分解して得られるグルコ
サミンなどを利用することができる。

【００１２】グルコサミン誘導体の製造法は特に限定さ
れないが、例えば、グルコサミン−６−硫酸の場合、Br
uce らの方法（Bruce et al., 1985, Eur. J. Biochem.
152, 75-82 ）で化学合成することができる。また、グ
ルコサミン−６−リン酸の場合、Szymona らの方法（Sz
ymona et al., 1980, Ann. Univ. Mariae Curie-Sklodo
wska, Sect. D. 35, 1-6）で酵素合成できる。また、
Ｎ，Ｎ−ジベンジルグルコサミンの場合は、例えば次の
方法で合成できる。Ｄ−グルコサミン塩酸塩１ｍｍｏｌ
（２１６ｍｇ）、ベンズアルデヒド２ｍｍｏｌ（２１２
ｍｇ）、シアノ水素化ホウ素ナトリウム３ｍｍｏｌ（１
８９ｍｇ）を５０％メタノール水溶液５ｍｌに溶解し、
２５℃で１６時間振とうし、生成物を逆相クロマトグラ
フィーで精製して、目的物１９０ｍｇ（収率５３％）を
得る。これらの化合物の構造はプロトンＮＭＲで確認し
た。

【００１３】本発明にかかるグルコサミンの塩型は、特
に限定されず、例えばグルコサミン塩酸塩、グルコサミ
ン硫酸塩などが使用できる。さらに、グルコサミン誘導
体の場合においても、塩型は何ら限定されない。例え
ば、リン酸化グルコサミン、硫酸化グルコサミンの塩型
は限定されず、ナトリウム、カリウム、バリウム、カル
シウムなどの塩が利用される。グルコサミンは自然界に
広く存在するため、安全性が極めて高い。従って、医薬
品として利用できるだけでなく、健康食品、栄養素食
品、機能性食品などのほか広く一般食品に添加すること
ができる。

【００１４】本発明による組成物は、有効成分としてグ
ルコサミンあるいはグルコサミン誘導体が含まれている
ことが重要であって、他の医薬品、化学薬品、成型用の
助剤、食品成分や食品添加物が含まれていても差し支え
ない。例えば、乳糖、コーンスターチ、白糖、ブドウ
糖、マンニトール、ソルビット、結晶セルロース、ポリ
ビニルアルコール、メチルセルロース、エチルセルロー
ス、アラビアガム、トラガント、ゼラチン、シェラッ
ク、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシ
プロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリプロ
ピレングリコール・ポリオキシエチレン・ブロックポリ
マー、メグルミン、澱粉、寒天、ゼラチン末、結晶セル
ロース、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、クエン
酸カルシウム、デキストリン、ペクチン等を添加しても
構わない。また、ｐＨ調整剤、溶解剤、等張化剤、或い
は必要に応じて溶解補助剤、安定化剤などを加えて製品
化することができる。

【００１５】また、必要に応じて、他の抗アレルギー作
用を有する成分、消炎作用を有する成分、免疫賦活作用
を有する成分、ビタミン類、タンパク質、糖類、トリグ
リセライド、脂肪酸、ステロールなどの油脂、アミノ
酸、保湿剤、角質溶解剤などの成分を配合することもで
きる。

【００１６】本発明品を投与する形態は、食品に用いる
場合は経口であるが、その他薬として利用する場合は、
経口の他、経皮投与、あるいは注射による投与が可能で
ある。食品に添加する場合以外の投与剤型としては、カ
プセル剤、錠剤、顆粒剤などの経口製剤、軟膏、貼付剤
等の外用剤および注射剤が考えられる。本発明の有効成
分を摂取あるいは投与する場合の量は、症状、年齢など
により異なり、特に限定されないが、通常成人一日当た
り５０ｍｇ〜５０００ｍｇであり、好ましくは１００ｍ
ｇ〜３０００ｍｇ、さらに好ましくは２００ｍｇ〜２０
００ｍｇである。

【００１７】

【発明の実施の形態】以下に本発明の実施の態様を示す
が、本発明の趣旨はもとよりこれらに限定されるもので
はない。

【００１８】

【性能評価】１．ＣＤ２３とＩｇＥの結合阻害試験 (1) 試験方法 ＣＤ２３とＩｇＥの結合阻害試験は、佐藤らの方法（Sa
to et al., 1997, J.Immunol. Methods, 209, 59-66）
によって行った。この方法は、ＣＤ２３分子を多く発現
する細胞とＩｇＥおよび被験サンプルを混合し、結合し
たＩｇＥの量を比較することで、被験サンプルがどの程
度ＩｇＥとＣＤ２３の結合を阻害するかをみる方法であ
る。以下、試験方法を簡単に説明する。本試験には着脱
可能なメンブレンフィルターカップ付きのマイクロ遠心
チューブを利用する。試験前に次の溶液を準備する。 ５０μｌのＩｇＥ溶液（５μｇ ＩｇＥ／ｍｌＴＢＳ
（トリス塩酸緩衝液）：１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，
ｐＨ７．３／１４０ｍＭ ＮａＣｌ／２ｍＭＣａＣｌ₂
／ｌ ｍＭ ＭｇＣｌ₂ ）、 被験サンプル溶液 ５０μｌ、 Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓによって形質
転換されたヒトＢ細胞株Ｌ−ＫＴ９の懸濁液（１．５×
１０⁵ 細胞／１００μｌＴＢＳ）。

【００１９】のＩｇＥ溶液を５０μｌ、のサンプル
溶液を５０μｌ、のＬ−ＫＴ９細胞懸濁液を１００μ
ｌフィルターカップ内で混合し、４℃で２時間放置し
た。インキュベーション後、２０００×Ｇにて５分間遠
心し、細胞と結合していない余分なＩｇＥを除去した。
さらに、細胞を洗浄するために２００μｌのＴＢＳを加
え、すぐに遠心した。この洗浄操作を２度繰り返した
後、２００μｌの０．１ＭＥＤＴＡ／０．１Ｍ ＰＢＳ
（リン酸緩衝液ｐＨ７．３）により細胞上のＣＤ２３と
結合しているＩｇＥを溶出した。溶出されたＩｇＥの量
をＥＬＩＳＡによって分析した。の被験サンプル溶液
のかわりに、ＴＢＳだけを使用したものをコントロール
とし、コントロールの結果と被験サンプルの結果を比べ
て結合がどれだけ阻害されたかを観察した。被験サンプ
ルとして、抗ＣＤ２３モノクローナル抗体（９Ｐ２５）
（コスモバイオ社製）、マンノース、ガラクトース、グ
ルコース、ラクトース、グルコサミン、グルコサミン−
６−リン酸、グルコサミン−６−硫酸、Ｎ，Ｎ−ジベン
ジルグルコサミンを試験した。

【００２０】(2) 試験結果 試験結果を図１に示す。図１の結果から、ＣＤ２３とＩ
ｇＥの結合が、グルコサミン、グルコサミン誘導体、特
にリン酸化グルコサミン、硫酸化グルコサミン、Ｎ，Ｎ
−ジベンジルグルコサミンによって阻害されることがわ
かる（図中に阻止率として表示）。ＣＤ２３がレクチン
領域をもつことから、本性能評価の対照としては糖類を
中心に調べた。しかしながら、マンノース、ガラクトー
ス、グルコース、ラクトースでは、ＣＤ２３とＩｇＥの
結合に影響を与えなかった。一方、抗ＣＤ２３モノクロ
ーナル抗体と同様、本発明のグルコサミン、グルコサミ
ン−６−リン酸、グルコサミン−６−硫酸およびＮ，Ｎ
−ジベンジルグルコサミンによって、ＣＤ２３とＩｇＥ
の結合は明確に阻害された。この結果により、グルコサ
ミンおよびグルコサミン誘導体が、アレルギーの原因と
なるＩｇＥ抗体生産に関わるＣＤ２３に作用することが
明確となった。

【００２１】２．ＰＣＡ（ラット受動皮膚アナフィラキ
シー）反応試験 グルコサミン誘導体の一つであるＮ，Ｎ−ジベンジルグ
ルコサミンをマウスに投与し、トリニトロフェニル−ア
スカリス（ＴＮＰ−Ａｓ）を水酸化アルミニウムＬゲル
（Alum）とともに感作した際のＩｇＥ抗体産生能に対す
る作用を、ラットＰＣＡ反応による漏出色素班を指標に
検討した。

【００２２】(1) 試験方法 感作動物として日本チャールズ・リバー株式会社より８
週齢のＢＡＬＢ／ｃＡｎＮ Ｃｒｊ系雌性マウスを、Ｐ
ＣＡ反応用の受身動物として日本エスエルシー株式会社
より８週齢のＳｌｃ：Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラットを購入
して使用した。入荷後、一週間以上の検疫訓化期間中に
一般状態の観察および体重測定を行い、健康と判断した
動物を試験に使用した。マウスの感作は１群５匹とし、
Ｎ，Ｎ−ジベンジルグルコサミンの２０および１００ｍ
ｇ／ｋｇと媒体（生理食塩水）投与の対照群の計３群を
設定した。Ｎ，Ｎ−ジベンジルグルコサミンの投与は、
注射針を用いて腹腔内に投与し、投与容量はいずれも１
０ｍｌ／ｋｇとした。群分けは感作のためのマウスは被
検物質投与前の体重を基に層別連続無作為化法で、惹起
試験のラットは皮内投与前に体重の重い方から使用し
た。

【００２３】マウスにＴＮＰ−Ａｓ ５μｇを吸着させ
たＡｌｕｍ １ｍｇを含む生理食塩水０．２ｍｌを腹腔
内に１回投与して感作した。被検物質投与群および対照
群では感作直後から１日１回５日間被検物質または媒体
を投与し、感作１０日後に採血した。得られた血清を用
いてラットＰＣＡ反応（一定倍率希釈血清法：タイタ
ー）により、ＴＮＰ−ＩｇＥ抗体の産生量を求めた。

【００２４】抗ＴＮＰ−Ａｓマウス血清を生理食塩液で
２の倍乗となるように希釈し、予め、刈毛されたラット
の背部に０．０５ｍｌ／ｓｉｔｅ皮内投与した。なお、
各血清とも２匹のラットを用いた。皮内投与の２４時間
後、ＴＮＰ−ＢＳＡ１ｍｇとエバンスブルー５ｍｇを含
む生理食塩液１ｍｌを尾静脈より投与して反応を惹起し
た。ＰＣＡ反応惹起３０分後にエーテル麻酔下で放血致
死させ、背部皮膚を剥離して反応部位の青染円の長径お
よび短径を測定し、平均直径［（長径＋短径）／２］が
５ｍｍ以上のものを陽性と判定した。ＰＣＡ反応陽性を
示す最高希釈倍数をＰＣＡ反応抗体価とした。得られた
試験成績は、平均値および標準誤差で表し、対照群と各
被検物質群については分散分析を行い、群間の差が有意
な場合は Dunnett’multiple test を行った。いずれの
検定においても有意水準は５％以下とした。

【００２５】(2) 試験結果 試験結果を下表に示す。

【表１】 ＃ 平均値±標準誤差 ＊ Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１； コントロール（投与量０）と比較して有意差あり（Dunnett's multiple test ）

【００２６】対照群（投与量０）のマウス血清（抗ＴＮ
Ｐ−ＩｇＥ抗体）のラットＰＣＡ抗体価は１６６倍であ
った。Ｎ，Ｎ−ジベンジルグルコサミンの２０および１
００ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与ではＰＣＡ抗体価が１２２お
よび１０９倍と用量依存的に抗ＴＮＰ−ＩｇＥ抗体産生
を抑制した。このことから、Ｎ，Ｎ−ジベンジルグルコ
サミンが、Ｉ型アレルギーの原因となる特異的ＩｇＥの
産生を抑制することが明らかとなった。Ｎ，Ｎ−ジベン
ジルグルコサミン以外の他のグルコサミン誘導体も同様
の結果を示した。

【００２７】

【実施例】以下に本発明の実施例を示すが、本発明はこ
れらに限定されるものではない。 実施例１ カプセル剤内容物 ［処方］ 原料 配合量（ｍｇ） （１）グルコサミン ５０ （２）ＤＨＡオイル ５０ （３）シソ油 ５０ （４）ｄ−αトコフェロール ２０ （５）大豆レシチン ５０ （６）乾燥酵母粉末 ２ （７）ミツロウ ４０ これらを混合した後、ゼラチンを用いてカプセル化す
る。

【００２８】 実施例２ 錠剤 ［処方］ 原料 配合量（ｍｇ） （１）グルコサミン−６−硫酸 １０ （２）セルロース粉末 ５０ （３）乳糖 １００ （４）還元麦芽糖 １０ （５）トウモロコシデンプン １０ （６）炭酸カルシウム １ （７）キシリトール １０ これらを混合した後、打錠して錠剤とする。

【００２９】 実施例３ 粉末剤 ［処方］ 原料 配合量（ｍｇ） （１）グルコサミン−６−リン酸 ２００ （２）Ｄ−マンニトール ３００ （３）乳糖 １５０ （４）トウモロコシデンプン １０ （５）還元麦芽糖 １０ （６）セルロース粉末 １０

【００３０】 実施例３ 外用剤 ［処方］ 原料 配合量（ｍｇ） （１）グルコサミン １．０ （２）グリセリン １０．０ （３）スクワラン ５．０ （４）Ｄ−ソルビトール ５．０ （５）ショ糖脂肪酸エステル ５．０ （６）キサンタンガム ２．０ （７）ステアリン酸モノグリセリン ２．０ （８）精製水 ７０．０

【００３１】

【発明の効果】本発明に従って処方された抗アレルギー
剤は、グルコサミンあるいはグルコサミン誘導体を含
み、ＣＤ２３の作用を抑制することにより、良好な抗ア
レルギー作用が得られる。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＣＤ２３とＩｇＥの結合阻害試験の結果を示す
グラフである。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式（Ｉ）： 【化１】 ［式中、Ｒ₁ は糖類の残基、炭素原子数１ないし２０の
   アルキル基または水素原子を表し、Ｒ₂ およびＲ₃ は互
   いに独立してベンジル基または水素原子を表し、Ｒ₄ 、
   Ｒ₅ およびＲ₆ は互いに独立して硫酸基、リン酸基ある
   いは水素原子を表す。］で表されるグルコサミンあるい
   はグルコサミン誘導体またはその塩を有効成分とする抗
   アレルギー剤。
2. 【請求項２】 Ｒ₁ が糖類の残基、炭素原子数１ないし
   ２０のアルキル基または水素原子を表し、Ｒ₂ およびＲ
   ₃ が水素原子を示すとき、Ｒ₄ 、Ｒ₅ およびＲ₆ は互い
   に独立して硫酸基、リン酸基あるいは水素原子を表し、
   Ｒ₂ およびＲ ₃ がベンジル基を示すとき、Ｒ₄ 、Ｒ₅ お
   よびＲ₆ は水素原子を表す請求項１記載の抗アレルギー
   剤。
3. 【請求項３】 アレルギーがＩ型アレルギーである請求
   項１記載の抗アレルギー剤。