JPH11304804A

JPH11304804A - 過酸化活性物質検出用組成物

Info

Publication number: JPH11304804A
Application number: JP14203198A
Authority: JP
Inventors: Kanki Kagawa; 環樹香川
Original assignee: KDK Corp; Kyoto Daiichi Kagaku KK
Current assignee: Arkray Inc
Priority date: 1998-04-15
Filing date: 1998-04-15
Publication date: 1999-11-05

Abstract

(57)【要約】【課題】試料中のアスコルビン酸などの還元性物質によ
る影響を排除できる過酸化活性物質検出用組成物を提供
すること。【解決手段】有機ヒドロパーオキシド、色原体、およ
び一般式：［（ＯＯＣ−Ｘ−ＣＯＯ）_３Ｆｅ］^３− ［式中、Ｘはアリーレン基（ａｒｙｌｅｎｅ）であ
る。］で表される鉄（ＩＩＩ）錯体を含有させる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、液体試料中のアス
コルビン酸などの還元性物質による影響を排除できる過
酸化活性物質検出用組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】液体試料中のヘモグロビンといった過酸
化活性を有する物質を検出または定量する場合、試料中
に存在するアスコルビン酸などは強還元剤として作用す
るので、過酸化活性物質の測定に種々の悪影響を与える
ことが知られている。このようなアスコルビン酸などの
還元性物質の影響を回避する為に、金属イオンを酸化剤
として用いる技術が開発されてきている。

【０００３】まず、ザ・ジャーナル・オブ・ジ・アメ
リカン・ケミカル・ソサエティ（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．
Ｓｏｃ），８９，４１７６（１９６７）と、同８９，７
１０４（１９６７）；９０，３３８６（１９６８）で
は、鉄及び銅キレートの存在下、ｐＨによるアスコルビ
ン酸の酸化の動的研究を記載しており、金属イオンがア
スコルビン酸を酸化することを明らかにしている。しか
し、は測定系でのアスコルビン酸の挙動を研究したも
のではない。

【０００４】特公昭６３−３９８７１号公報では、ア
スコルビン酸塩の悪影響を避ける為に、分析用組成物に
水銀（ＩＩ）サルコシネートを加えている。しかし、有
機ヒドロパーオキシド及び指示薬を含む反応系中へこの
水銀錯体を配合すると、指示薬と金属錯体が反応して偽
陽性を生じてしまう。また、水銀錯体は有害な水銀を含
むので好ましくない。

【０００５】特公昭６３−６７１３９号公報は、アス
コルビン酸の妨害作用に抵抗する化合物として、コバル
ト（ＩＩＩ）錯体を開示している。しかし、有機ヒドロ
パーオキシド及び指示薬を含む反応系中へこのコバルト
錯体を配合すると、指示薬と金属錯体が反応して偽陽性
を生じてしまう。

【０００６】特開平２−２８６０９９号公報は、アス
コルビン酸の妨害を低減する為に、銅（ＩＩ）錯体を生
成する水溶性ポリマーからなる第一酸化体及び無機酸化
体、有機過酸化物または有機Ｎ−ハロ誘導体から選択さ
れる第二の酸化体を包含する系を提案している。しかし
銅（ＩＩ）錯体の酸化速度は遅く、有効な手段ではな
い。

【０００７】特公平１−４１２２３号公報は、体液成
分測定においてアスコルビン酸を消去する為に、式：Ｒ
_１Ｒ_２ＮＣＨ_２ＣＯＯＨまたはＲ_３Ｒ_４ＮＸＮＲ_５ＣＨ
_２ＣＯＯＨで表される化合物の鉄２価もしくは３価の錯
体、またはグルコン酸の鉄２価若しくは３価の錯体を添
加することを提案している。

【０００８】特公平４−１８６３０号公報は、過酸化
活性物質検出用組成物に、ポリカルボキシアルキルアミ
ン誘導体の３価の鉄キレートを含ませることを提案して
いる。

【０００９】特開平６−１４８１６８号公報には、
式：［（ＯＯＣ−Ｘ−ＣＯＯ）_３Ｆｅ］Ｍ_３（式中、Ｘ
は−（ＣＨ）_ｎ−（ここで、ｎは０〜５の整数）で表さ
れるアルキレン基（ａｌｋｙｌｅｎｅ）またはアリル基
（ａｌｌｙｌ）であり、Ｍは一価のカチオンである。）
で表される鉄（ＩＩＩ）錯体が、本出願人により開示さ
れている。

【００１０】またその他の方法として、カナダ特許第
８４４５６４号は、グルコース応答性試薬で含浸した多
孔性部分の他部分に、尿中に存在するアスコルビン酸を
吸着することが出来るイオン交換物質を含む尿試料を受
理する付加部分を有する試験材を提案している。しか
し、イオン交換物質を有するこの試験材は、複雑な構造
をしている上に、分析時間が従来の分析法よりかかると
いう欠点がある。

【００１１】特公昭５６−３９１９８号公報および米
国特許第４１６８２０５号は、試験紙の処方にアスコル
ビン酸オキシダーゼを配合することにより、アスコルビ
ン酸の影響を排除している。この方法は非常に有効では
あるが、アスコルビン酸の妨害を除去するためには多量
のアスコルビン酸オキシダーゼを必要とするために、不
経済である。また、アスコルビン酸オキシダーゼは、ア
スコルビン酸とは反応するが他の還元性物質とは反応し
ないし、その上非常に不安定な酵素である。

【００１２】また、▲１０▼特公平１−１５２８０号公
報では、還元性妨害物質の影響を避ける為に試料を沃素
酸あるいは沃素酸塩で処理している。しかし、還元性物
質と反応して生成する遊離沃素が、多くの指示薬を酸化
してしまい、偽陽性を示す。また、沃素酸塩も指示薬を
酸化し、バックグラウンドの着色が生じる。

【００１３】本出願人は、▲１１▼特開平６−１４８１
６８号公報中に、一般式：［（ＯＯＣ−Ｘ−ＣＯＯ）_３
Ｆｅ］Ｍ_３（式中、Ｘは−（ＣＨ）_ｎ−（ここで、ｎは
０〜５の整数）で表されるアルキレン基（ａｌｋｙｌｅ
ｎｅ）またはアリル基（ａｌｌｙｌ）であり、Ｍは一価
のカチオンである。）で表される鉄（ＩＩＩ）錯体を開
示している。

【００１４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、従来技術に
伴うそれぞれの欠点を解決するための、従来にはない構
造の錯体を含有する過酸化活性物質検出用組成物を提供
しようとするものである。

【００１５】

【課題を解決するための手段】本発明は、有機ヒドロパ
ーオキシド、色原体、および一般式：［（ＯＯＣ−Ｘ−ＣＯＯ）_３Ｆｅ］^３− ［式中、Ｘはアリーレン基（ａｒｙｌｅｎｅ）であ
る。］で表される鉄（ＩＩＩ）錯体を含有することを特
徴とする過酸化活性物質検出用組成物を提供する。

【００１６】一般に、銅（ＩＩ）及び鉄（ＩＩＩ）イオ
ンは、その酸化能力によってアスコルビン酸をデヒドロ
アスコルビン酸に酸化することが知られている。銅（Ｉ
Ｉ）イオンは、鉄（ＩＩＩ）イオンに比べてその酸化反
応の速度が遅いため、アスコルビン酸による妨害を除去
する能力が鉄（ＩＩＩ）イオンに比べて乏しい。そこ
で、体液成分の測定におけるアスコルビン酸の妨害を克
服するためには、鉄（ＩＩＩ）イオン化合物を使用する
ことが望ましいと考えられる。

【００１７】鉄（ＩＩＩ）イオン化合物は多種類存在す
るが、一般的な水溶性の鉄（ＩＩＩ）イオン化合物（た
とえば塩化鉄等）を用いた場合、鉄（ＩＩＩ）イオンは
低ｐＨにおいても水溶液中に存在する水分子と速やかに
反応してアコ鉄（ＩＩＩ）錯体を形成する。このアコ鉄
（ＩＩＩ）錯体の酸化還元電位は０．７７Ｖと非常に高
いため、体液成分の測定に用いられる酸化還元系指示薬
と反応してしまい、偽陽性を示す。そのため、上記のよ
うな単なる鉄（ＩＩＩ）イオン化合物は好ましくない。

【００１８】ところが、本発明の一般式で表される新規
の鉄（ＩＩＩ）錯体は、体液成分の測定試薬に存在して
も偽陽性結果を生じることなしに、試料中のアスコルビ
ン酸などの還元性物質の妨害を克服することができる。

【００１９】

【発明の実施の形態】本発明の一般式中のＸはアリーレ
ン基（ａｒｙｌｅｎｅ）、すなわち二価の芳香族炭化水
素である。本発明の一般式で表される新規の鉄（ＩＩ
Ｉ）錯体の好ましい例は、Ｘがフェニレン基のフタル酸
鉄（ＩＩＩ）錯体であり、この化合物を例にとって説明
すると、尿中の潜血を検出する試験紙の場合、試験紙作
成時の含浸溶液中にフタル酸鉄（ＩＩＩ）錯体が１ｍｍ
ｏｌ／ｌ以上、好ましくは１０〜１００ｍｍｏｌ／ｌ含
まれるのが良い。また、その測定系のｐＨは、３〜８、
好ましくは５〜７が良い。

【００２０】本出願人は、特開平６−１４８１６８号公
報中に、一般式：［（ＯＯＣ−Ｘ−ＣＯＯ）_３Ｆｅ］Ｍ
_３（式中、Ｘは−（ＣＨ）_ｎ−（ここで、ｎは０〜５の
整数）で表されるアルキレン基（ａｌｋｙｌｅｎｅ）ま
たはアリル基（ａｌｌｙｌ）であり、Ｍは一価のカチオ
ンである。）で表される鉄（ＩＩＩ）錯体を開示した。
しかし本願鉄（ＩＩＩ）錯体は、この特開平６−１４８
１６８号開示の錯体と比較しても、より強力に還元性物
質の影響を除去できる。

【００２１】本願発明で使用される鉄（ＩＩＩ）錯体
は、一般式：［（ＯＯＣ−Ｘ−ＣＯＯ）_３Ｆｅ］Ｍ
_３（式中、Ｍは一価のカチオンである。）で表される様
な電解質状態でもよいし、例えばフタル酸塩と鉄化合物
（例えば塩化鉄）を水溶液中で混合して錯体を形成させ
たものを使用してもよい。

【００２２】

【実施例】次に、実施例を示し、本発明を具体的に説明
する。

【００２３】尿中潜血の検出用試験片１．試験片の作製ワットマン社製濾紙（３ｍｍＣｈｒ；２０×２０ｃｍ）
に後述の組成の溶液１を含浸し、６０℃で２０分間乾燥
させた。さらに溶液２を含浸し、５０℃で１５分間乾燥
させた。得られた試験紙を両面テープを用いてポリエチ
レンテレフタレート（ＰＥＴ）シートに貼り、最終的に
５×５ｍｍの試験紙部分を先端に有する短冊状の試験片
を作成した。また、同様にしてフタル酸鉄（ＩＩＩ）錯
体を含まない試験片を作製した。

【００２４】フタル酸鉄（ＩＩＩ）錯体は、緩衝液中
で、塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物とフタル酸二ナトリウム
とを混合することにより形成される。以下の分量によ
り、２６ｍｍｏｌ／ｌ相当量のフタル酸鉄（ＩＩＩ）錯
体を含有する含浸溶液が調製できる。溶液１：塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物０．７０ｇフタル酸二ナトリウム１．６４ｍｇ３Ｍトリス−マロン酸緩衝液（ｐＨ６．５）３６．６ｍｌラウリル硫酸ナトリウム３００ｍｇクメンヒドロパーオキシド４ｍｌ精製水９．４ｍｌエタノール５０ｍｌ総計１００ｍｌ溶液２３，３，５’，５’−テトラメチルベンチジン２ｇ６−メトキシキノリン１ｍｌ２０％ポリビニルピロリドン・エタノール溶液３０ｍｌトルエン６９ｍｌ総計１００ｍｌ

【００２５】２．試料プール尿に人血ヘモグロビンおよびアスコルビン酸を表
１に示す濃度で添加、溶解させ、試験尿溶液を調製し
た。

【００２６】３．測定試験尿溶液中に試験片を漬け、一定時間反応させた後、
高速分光光度計ＣＭＳ−３５ＦＳ（株式会社村上色彩技
術研究所製）を用い、６４０ｎｍの反射率を測定した。

【００２７】結果を表１にまとめた。反射率値が小さい
ほど着色が濃いことを示し、大きいほど着色が失われて
いることを示す。着色が失われているということは、ア
スコルビン酸の影響を受けていることを示す。

【００２８】

【表１】

【００２９】フタル酸鉄（ＩＩＩ）錯体を含む含まない
に係わらず、アスコルビン酸を含まない状態では両試験
片ともに、人血ヘモグロビン０．０８ｍｇ／ｄｌ含有試
験尿溶液によって良好に青色に発色した。しかし、その
試験尿溶液にアスコルビン酸を２０ｍｇ／ｄｌ添加する
と、フタル酸鉄（ＩＩＩ）錯体の含浸されていない試験
片の場合、青色の発色はほとんど失われた。

【００３０】一方、フタル酸鉄（ＩＩＩ）錯体が含まれ
た試験片ではほとんどアスコルビン酸の影響はなく、さ
らには、アスコルビン酸７５ｍｇ／ｄｌ含有という高濃
度の場合においても良好な青色発色が認められた。

【００３１】

【発明の効果】以上詳細に説明したように、本願発明を
用いると、試料中の高濃度の還元性物質を良好に排除で
きる。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】有機ヒドロパーオキシド、色原体、およ
び一般式：［（ＯＯＣ−Ｘ−ＣＯＯ）_３Ｆｅ］^３− ［式中、Ｘはアリーレン基（ａｒｙｌｅｎｅ）であ
る。］で表される鉄（ＩＩＩ）錯体を含有することを特
徴とする、過酸化活性物質検出用組成物。
【請求項２】Ｘがフェニレン基である、特許請求の範
囲第１項に記載の過酸化活性物質検出用組成物。