JPH11318455A

JPH11318455A - ヒト癌退縮抗原タンパク質

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Publication number: JPH11318455A
Application number: JP10126398A
Authority: JP
Inventors: Kyogo Ito; 恭悟伊東; Masanaga Nakao; 真修中尾
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1998-05-08
Filing date: 1998-05-08
Publication date: 1999-11-24
Anticipated expiration: 2018-05-08
Also published as: JP4138073B2

Abstract

(57)【要約】【課題】扁平上皮癌等の幅広い腫瘍又は限られた腫瘍で
も多くの患者に応用でき、又は腫瘍の治療や診断を補完
しつつ各種腫瘍に応用できる癌療法の一助となる腫瘍抗
原タンパク質、腫瘍抗原ペプチド等を提供すること。【解決手段】タンパク質の一部がＭＨＣクラスＩ抗原と
結合してＴ細胞により認識される腫瘍抗原タンパク質を
コードするポリヌクレオチド分子、該ポリヌクレオチド
分子によりコードされる腫瘍抗原タンパク質、該ポリヌ
クレオチド分子の一部からなるオリゴヌクレオチド分
子、該オリゴヌクレオチド分子によりコードされる腫瘍
抗原ペプチド、該ポリヌクレオチド分子の塩基配列と相
補的な配列からなるオリゴヌクレオチド分子、該腫瘍抗
原タンパク質又はペプチドを含有する医薬、該腫瘍抗原
タンパク質又はペプチドに対する抗体、該ポリ又はオリ
ゴヌクレオチド分子を含有する医薬、該ポリ又はオリゴ
ヌクレオチド分子を有するプラスミド並びに該プラスミ
ドを含む形質転換体。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は医療分野に属し、詳
しくは癌または自己免疫疾患を処置する方法、さらに詳
しくは細胞傷害性Ｔ細胞によって攻撃を受けて退縮する
癌退縮抗原およびそれを利用する免疫療法等に関する。

【０００２】生体による腫瘍の排除には免疫系、特にＴ
細胞が重要な役割を果たしていることが知られている。
実際、ヒトの腫瘍局所には腫瘍細胞に対して傷害活性を
示すリンパ球の浸潤が認められ（Arch.Surg.126:200-20
5,1990）、メラノーマから自己の腫瘍細胞を認識する細
胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）が分離されている(Immunol.T
oday 8:385、1987、J.Immunol.138:989,1987、Int.J.Ca
ncer 52:52-59 、1992等) 。また、Ｔ細胞移入によるメ
ラノーマ治療の臨床結果も腫瘍排除によるＴ細胞の重要
性を示唆している(J.Natl.Cancer.Inst.86:1159,1994)
。

【０００３】自己の腫瘍細胞を攻撃するＣＴＬは、腫瘍
抗原ペプチドが主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）ク
ラスＩ抗原に結合した複合体をＴ細胞受容体（ＴＣＲ）
を用いて認識し、自己の腫瘍細胞を攻撃している。この
腫瘍抗原ペプチドは、腫瘍抗原（タンパク質）が細胞内
で合成された後、プロテオソームによって細胞質内でペ
プチドに分解されることによって生成される。一方、Ｍ
ＨＣクラスＩ抗原は、上記の腫瘍抗原ペプチドと結合
し、シスゴルジを経て成熟側のトランスゴルジへと移動
し細胞表面に発現する（臨床免疫27(9):1034-1042 、19
95）。

【０００４】

【従来の技術】ヒト癌細胞上のＭＨＣクラスＩ抗原上に
提示され、宿主Ｔ細胞の標的分子となる腫瘍抗原タンパ
ク質が1991年にT.Boonにより同定された(Science254:16
43-1647,1991) 。この抗原は、この抗原を発現する癌細
胞がＣＴＬによって攻撃を受け退縮することから癌退縮
抗原と呼ばれ、また、メラノーマ細胞から同定されたこ
とよりMelanoma antigen（ＭＡＧＥ）と名付けられてい
る。その後、ＣＴＬにより認識される腫瘍抗原タンパク
質がメラノーマ細胞などから相次いで同定された。今ま
でに同定された腫瘍抗原タンパク質はその由来、構造
（変異の有無）や発現様式により以下の４つのカテゴリ
ーに分類される(T.Boon et al.,J.Exp.Med.183:725-72
9,1996)：

【０００５】ｉ）腫瘍特異的共有抗原（Tumor −Specif
ic Shared Antigens）ここに分類される抗原は正常組織では睾丸と胎盤でのみ
発現され、腫瘍組織ではメラノーマ、頭頚部癌、非小細
胞性肺癌、膀胱癌など各種の癌に広範に発現が認められ
る一群のタンパク質である。このカテゴリーの腫瘍抗原
タンパク質としては、上記のＭＡＧＥ、その１２種類以
上の類似するファミリーを形成するタンパク質群(J.Ex
p.Med.178:489-495,1993)、ＢＡＧＥ（Immunity 2:167-
175、1995）およびＧＡＧＥ(J.Exp.Med.182:689-698,19
95)があり、いづれもメラノーマ細胞から同定されてい
る。また最近、メラノーマに限って広範に発現されるＮ
Ａ１７−Ａが報告された。それは、Ｎ−アセチルグルコ
サミニルトランスフェラーゼＶ遺伝子のイントロンに相
当する部分が翻訳され、ＨＬＡ−Ａ２拘束性に抗原ペプ
チド（ＶＬＰＯＶＦＩＲＣ）が癌退縮抗原として発現
し、ＣＴＬにより認識される。

【０００６】ii）分化抗原（Differentiation Antigen
s ）ここに分類される腫瘍抗原タンパク質は、正常組織では
メラノサイトで発現しており、腫瘍組織ではメラノーマ
でのみ発現が認められる一群のタンパク質である。これ
らの組織特異的なタンパク質は腫瘍細胞のメラノーマに
強度に発現しているが、他の組織型の癌（腺癌や扁平上
皮癌）には認められないことから、メラノーマに特異的
な腫瘍抗原タンパク質と考えられる。このカテゴリーの
腫瘍抗原タンパク質としては、チロシナーゼ(J.Exp.Me
d.178:489-495,1993)、ＭＡＲＴ−１(Proc.Natl.Acad.S
ci.USA 91: 3515, 1994）、ｇｐ１００(J.Exp.Med. 17
9: 1005-1009, 1994) ，ｇｐ７５(J.Exp.Med. 181: 799
-352, 1995）があり、これらの遺伝子はいづれもメラノ
ーマ細胞からクローニングされている。なお、他にMela
n-A （J.Exp.Med. 180: 35, 1994）が同定されたが、後
にＭＡＲＴ−１と同一の分子であることが判明した。ま
た、ここに分類される抗原は正常のメラノサイトにも発
現していることから、メラノサイト破壊性自己免疫疾患
での標的分子としての可能性が存在する。特にＭＡＲＴ
−１／melan-Ａはvon −小柳−原田氏病における標的分
子と考えられる（S.Sugita, et al., Int.Immunol.8:79
9-803,1996）。ｇｐ１００はそれを発現するメラノーマ
が免疫療法に高い感受性を示すので、in vivoでの癌退
縮抗原として作用している可能性がある。このカテゴリ
ーの腫瘍抗原タンパク質は、メラノーマ以外の腫瘍では
発現していないため、他の腫瘍に応用することはできな
い。

【０００７】iii ）個々の腫瘍に特異的な抗原（Antige
ns Specific for Individual Tumors ）この領域に分類される腫瘍抗原タンパク質は、正常細胞
が癌化する過程でおこる遺伝子変化に伴う癌特有の新し
い抗原である。遺伝子変化としては点突然変異（point
mutation、変異ＣＤＫ４抗原、変異β−Catenin 抗原、
ＭＵＭ−抗原）、alterative open reading frame
（変異ｇｐ７５抗原）がこれまでに知られている。した
がって、このような抗原は癌に特異的であり特異免疫の
成立が容易に成立するものと考えられる。しかしなが
ら、一方で各々の遺伝子変化は個々の腫瘍もしくは個々
の腫瘍細胞に限って発現していることが殆どである。し
たがって発現頻度はきわめて低く、癌治療を目的とした
ワクチン分子として臨床応用され難いという欠点を有す
る。

【０００８】iv）普遍性抗原（Ubiquitous Antigens）殆どの正常細胞や癌細胞に非変異体として普遍的に発現
される（ubiquitous）抗原がＣＴＬの癌認識分子になっ
ているケースとしては、ｐ１５が知られている。ｐ１５
分子はＨＬＡ−Ａ２４結合性ペプチドを有する。ｐ１５
は正常細胞に比して癌細胞により強く発現されている。
その観点からは、腺癌等に強発現している癌遺伝子タン
パク質であるＨＥＲ−２／ｎｅｕ抗原も同類として分類
される。即ち、ＨＥＲ−２／ｎｅｕはＨＬＡ−Ａ２結合
性ペプチドを有し、癌退縮抗原として宿主キラーＴ細胞
により認識される。ここに分類される抗原を腫瘍抗原タ
ンパク質とした場合、普遍的に発現しているために広範
な癌に応用可能と考えられるが、疾病特異性に乏しいた
め、正常組織に障害を与える可能性があり、またＣＴＬ
誘導が困難である可能性（トランスのため）が考えられ
る。

【０００９】ＭＨＣ−非拘束性と考えられていたＭＵＣ
−１抗原特異的ＣＴＬが同抗原由来ペプチドＳＴＡＰＰ
ＡＨＧＶをＨＬＡ−Ａ１１拘束性に認識すると報告さ
れ、またＭＡＧＥ−３ペプチドを用いての臨床試験の初
期成績が報告された（M.Marchand,et al., Int.J.Cance
r 63:883-885,1995 ）。これらは、癌退縮抗原を用いて
の癌ワクチン開発の可能性を示唆している。

【００１０】これまでに同定された上記の抗原ペプチド
はＨＥＲ−２／ｎｅｕを除き、その殆どがメラノーマか
ら発見されており、発病頻度の高い扁平上皮癌や腺癌で
は全く報告されていない。しかし、我々は最近、食道扁
平上皮癌よりＨＬＡ２６０１拘束性の癌抗原ペプチドが
存在し宿主ＣＴＬによって認識されることを報告した
（M.Nakao, et al., Cancer Res. 55:4248-4252,199
5）。したがって、扁平上皮癌にも同様の抗原ペプチド
をコードする腫瘍抗原タンパク質の存在することが示唆
される。扁平上皮癌は、ヒトの癌で最も多く認められる
癌のひとつであり、特に食道癌や肺癌での扁平上皮癌は
現在の化学療法や放射線療法に比較的抵抗性を示すこと
が知られている。その点からも腫瘍抗原ペプチド等を用
いた特異的免疫療法の開発が期待される。

【００１１】

【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、扁平
上皮癌等の幅広い腫瘍に応用でき、または応用可能な腫
瘍が限られていてもその腫瘍の患者のうち多くの人に応
用でき、またはその腫瘍の治療や診断を補完しつつ各種
腫瘍に応用できる癌療法の一助となる腫瘍抗原タンパク
質、腫瘍抗原ペプチド等を提供することにある。また、
腫瘍において高発現している腫瘍抗原タンパク質は、一
方で、正常組織にも発現しその腫瘍抗原タンパク質に由
来する免疫反応が過剰に起こることで、自己免疫疾患を
引き起こしているとも考えられている。例えば、化学療
法剤とＩＬ−２を併用してメラノーマの治療を行った場
合、白斑症状の出現が認められるとの報告がある(J.Cli
n.Oncol.10:1338-1343,1992)。これは、メラノーマに出
現する腫瘍抗原タンパク質の断片ペプチドとＭＨＣ複合
体に対してＣＴＬまたは抗体が誘導、産生され、正常組
織である皮膚組織に作用することで自己免疫疾患様の症
状である白斑症状が出現したためと考えられる。腫瘍抗
原タンパク質に由来する特異的免疫が過剰に惹起される
ことにより自己免疫疾患が発症した場合には、腫瘍抗原
タンパク質をコードする遺伝子の発現を妨ぐアンチセン
スDNA や腫瘍抗原ペプチドのアンタゴニストなどを用い
て、免疫反応を特異的にブロックする治療法が期待され
る。

【００１２】

【課題を解決するための手段】メラノーマ細胞以外の腫
瘍細胞、特に扁平上皮癌等の治療や診断に幅広く応用で
きる腫瘍抗原タンパク質またはその対応する腫瘍抗原ペ
プチド等を得るために、扁平上皮癌からの腫瘍抗原タン
パク質の同定を試みた。本発明者らは食道癌患者の末梢
血リンパ球からリンパ球腫瘍混合培養法により、HLA-A2
402 拘束性の腫瘍抗原ペプチドを認識するＣＴＬ(KE-4-
CTL)を樹立した。このＣＴＬはHLA-A2402 陽性の食道癌
細胞株KE-4を強く障害する。そこで、サル腎細胞株COS7
細胞に、KE-4癌細胞株から作製したcDNAライブラリーの
組換えプラスミドとHLA-A2402 cDNAの組換えプラスミド
を同時にトランスフェクトし、そのトランスフェクタン
トにKE-4-CTL細胞を作用させ、KE-4-CTL細胞が活性化さ
れたか否かをIFN-γの産生量で測定しスクリーニングし
た。その結果、メラノーマ以外の腫瘍細胞KE-4から本発
明の腫瘍抗原タンパク質をコードする遺伝子をクローニ
ングすることに成功した。

【００１３】すなわち、本発明は、（１）配列番号：１
のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド分子、
（２）配列番号：１のアミノ酸配列において、１もしく
は複数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入または付加され
たタンパク質をコードするポリヌクレオチド分子、
（３）配列番号：１の塩基配列からなるポリヌクレオチ
ド分子、（４）配列番号：１の塩基配列において、１も
しくは複数個の塩基が置換、欠失、挿入または付加され
たポリヌクレオチド分子、および（５）前記（１）〜
（４）のいずれかのポリヌクレオチド分子にストリンジ
ェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド
分子からなる群より選択されるポリヌクレオチド分子で
あって、該ポリヌクレオチド分子がコードするタンパク
質の一部からなるペプチドが主要組織適合遺伝子複合体
（ＭＨＣ）クラスＩ抗原と結合してＴ細胞により認識さ
れる腫瘍抗原ペプチドであるポリヌクレオチド分子；本
発明のポリヌクレオチド分子によりコードされる腫瘍抗
原タンパク質；本発明の腫瘍抗原タンパク質の部分ペプ
チドであってＭＨＣクラスＩ抗原と結合してＴ細胞によ
り認識される腫瘍抗原ペプチドまたはその誘導体；本発
明の腫瘍抗原タンパク質または腫瘍抗原ペプチドもしく
はその誘導体を含有する医薬；本発明の腫瘍抗原タンパ
ク質または腫瘍抗原ペプチドもしくはその誘導体に対す
る抗体；本発明の腫瘍抗原ペプチドまたはその誘導体を
コードするオリゴヌクレオチド分子、好ましくは腫瘍抗
原タンパク質をコードしている塩基配列が配列番号：１
の塩基配列である該オリゴヌクレオチド分子；配列番
号：１の腫瘍抗原タンパク質をコードするポリヌクレオ
チド分子のコーディング配列またはその５' ノンコーデ
ィング配列中の塩基配列と相補的な配列からなるオリゴ
ヌクレオチド分子またはその化学的修飾体；本発明のポ
リヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド分子もしくは
その化学的修飾体を含有する医薬；本発明のポリヌクレ
オチドまたはオリゴヌクレオチド分子を有するプラスミ
ド；および本発明のプラスミドによって形質転換された
形質転換体、に関する。

【００１４】

【発明の実施の形態】本明細書中で使用している用語の
意義を明らかにするとともに、発明の実施形態を説明す
る。本発明のポリヌクレオチド分子は、新規な腫瘍抗原
タンパク質をコードするものであり、（１）配列番号：
１のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド分子、
（２）配列番号：１のアミノ酸配列において、１もしく
は複数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入または付加され
たタンパク質をコードするポリヌクレオチド分子、
（３）配列番号：１の塩基配列からなるポリヌクレオチ
ド分子、（４）配列番号：１の塩基配列において、１も
しくは複数個の塩基が置換、欠失、挿入または付加され
たポリヌクレオチド分子、および（５）前記（１）〜
（４）のいずれかのポリヌクレオチド分子にストリンジ
ェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド
分子、からなる群より選択され、該ポリヌクレオチド分
子がコードするタンパク質の一部からなるペプチドは、
主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ抗原と結
合してＴ細胞により認識される腫瘍抗原ペプチドであ
る。

【００１５】本発明のポリヌクレオチド分子はDNA また
はRNA の形態をとることができ、DNA にはcDNA、ゲノム
DNA および合成DNA が包含される。また、DNA およびRN
A は一本鎖または二本鎖であってよく、一本鎖の場合は
センス鎖またはアンチセンス鎖の両者が包含され得る。

【００１６】ある塩基配列のうち一部が置換、欠失、挿
入または付加されたポリヌクレオチド分子は、Molecula
r Cloning: A Laboratory Manual第２版第１−３巻 Sam
brook, J. ら著、Cold Spring Harber Labolatory Pres
s 出版 New York 1989年などに記載の方法によって製造
することができ、例えば部位特異的変異誘発やＰＣＲ法
などにより製造できる。本発明のポリヌクレオチド分子
はこれらの変異型ポリヌクレオチド分子も包含する。か
かる変異型ポリヌクレオチド分子としては、例えば、配
列番号：１の塩基配列において１もしくは複数個の塩基
が置換、欠失、挿入または付加されたポリヌクレオチド
分子が挙げられる。また、本発明のポリヌクレオチド分
子には「本発明のポリヌクレオチド分子にストリンジェ
ントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド分
子」も包含される。ポリヌクレオチド分子としてDNA 分
子を代表例にとると、「DNA 分子にストリンジェントな
条件下でハイブリダイズするDNA 分子」は、例えば前述
のMolecular Cloning に記載の方法によって得ることが
できる。ここで、「ストリンジェントな条件下でハイブ
リダイズする」とは、例えば、６×ＳＳＣ、０. ５％Ｓ
ＤＳおよび５０％ホルムアミドの溶液中で４２℃にて加
温した後、０. １×ＳＳＣ、０. ５％ＳＤＳの溶液中で
６８℃にて洗浄する条件でも依然として陽性のハイブリ
ダイズのシグナルが観察されることを表す。

【００１７】本発明の腫瘍抗原タンパク質は、前記ポリ
ヌクレオチド分子によりコードされるタンパク質であ
る。

【００１８】「本発明のポリヌクレオチド分子がコード
するタンパク質の一部からなるペプチドがＭＨＣクラス
Ｉ抗原と結合してＴ細胞により認識される腫瘍抗原ペプ
チド」とは、腫瘍抗原タンパク質の連続した少なくとも
７個、好ましくは７〜１０個、特に好ましくは９個の連
続するアミノ酸配列からなる部分ペプチドであって、細
胞表面のＭＨＣクラスＩ抗原と結合して細胞表面に提示
された場合、その結合体に対して特異的に結合するＴ細
胞が結合するとそのＴ細胞にシグナルを伝えることので
きる、即ちＴ細胞に認識されるＭＨＣクラスＩ抗原との
結合体を形成できるそのようなペプチドを意味する。な
お、ここでいう「結合」とは非共有結合である。

【００１９】ペプチドがＭＨＣクラスＩ抗原に結合して
Ｔ細胞に認識されることを確かめる方法としては、例え
ば、ペプチドを適当な細胞に内因性に発現させるか、ま
たは外部から加える（パルスする）ことによりＭＨＣク
ラスＩ抗原に結合させることで細胞表面にペプチドを提
示させ、つづいて、そのペプチド提示細胞に対して腫瘍
抗原タンパク質特異的なＴ細胞を作用させ、そのペプチ
ド提示細胞が傷害を受けた際に産生されるサイトカイン
（インターフェロンαやＴＮＦα、およびＣＴＬが産生
するサイトカイン）を測定する方法などがある。また、
ペプチド提示細胞の傷害を測定する方法として、⁵¹Ｃｒ
で標識したペプチド提示細胞を用いる方法も使用でき
る。ここで、認識するＴ細胞としては、ＣＴＬを用いる
のが好ましい。

【００２０】本発明に係る腫瘍抗原タンパク質または腫
瘍抗原ペプチドは例えば、以下のようにして同定するこ
とができる。まず、これらの同定に際し、ＭＨＣ−クラ
スＩアレルの一致した腫瘍細胞およびこの細胞を攻撃す
るＣＴＬのセットを用意する。次いで、腫瘍細胞のＭＨ
ＣクラスＩ抗原に結合している腫瘍抗原ペプチドを酸性
化して抽出し、高速液体クロマトグラフィーで分離され
た種々のペプチドを、抗原提示ＭＨＣを発現しているが
腫瘍抗原タンパク質を発現していない細胞（例えば、同
一患者のＢ細胞など）にパルスし、ＣＴＬの反応を調べ
ることにより腫瘍抗原ペプチドを同定し、さらにマスス
ペクトロメタリーなどを用いて配列を決定する方法であ
る。この方法によって、メラノーマ細胞からｇｐ１００
と同一分子のPme117由来の腫瘍抗原ペプチドが同定され
ている(Science 264: 716-719, 1994)。

【００２１】あるいは、上記のような腫瘍抗原ペプチド
を直接同定する方法とは異なり、腫瘍抗原タンパク質を
コードする遺伝子を決定してさらにその対応する腫瘍抗
原ペプチドを同定する方法もある。これは、分子生物学
的手法を用いて腫瘍抗原タンパク質をコードする遺伝子
をクローニングするものである。腫瘍細胞からcDNAを調
製し、そのcDNAを腫瘍抗原タンパク質を発現していない
細胞（例えばCOS 細胞など）に抗原提示ＭＨＣクラスＩ
抗原遺伝子とともにトランスフェクトして一過的にそれ
らを発現させ、それに対するＣＴＬの反応性によりスク
リーニングを繰り返し行い、腫瘍抗原タンパク質をコー
ドする遺伝子を単離する。この方法により、上記のＭＡ
ＧＥ、チロシナーゼ、ＭＡＲＴ−１、ｇｐ１００、ｇｐ
７５の遺伝子がクローニングされている。

【００２２】この腫瘍抗原遺伝子の情報から実際にＭＨ
ＣクラスＩ抗原に結合して提示されている腫瘍抗原ペプ
チドを推定、同定するためには次のような方法を用い
る。まず、ＰＣＲ、エキソヌクレアーゼ、制限酵素など
により様々なサイズの腫瘍抗原タンパク質をコードする
遺伝子のフラグメントを作製し、抗原提示ＭＨＣクラス
Ｉ抗原遺伝子とともに腫瘍抗原タンパク質を発現してい
ない細胞（例えばCOS 細胞など）にトランスフェクトし
て一過性に発現させ、ＣＴＬの反応性により腫瘍抗原ペ
プチドを含む領域を限定する。その後、ペプチドを合成
し、抗原提示ＭＨＣクラスＩ抗原は発現しているが腫瘍
抗原タンパク質を発現していない細胞にパルスし、同様
にＣＴＬの反応を調べることにより腫瘍抗原ペプチドを
同定できる(J.Exp.Med. 176: 1453, 1992 、J.Exp.Med.
179: 24,759、1994) 。

【００２３】また、HLA-A1，-A0201，-A0205，-A11，A3
1 ，-A6801，-B7 ，-B8 ，-B2705，-37 ，-Cw0401 ，-C
w0602 などのＭＨＣクラスＩ抗原の型については、結合
して提示されるペプチドの配列の規則性（モチーフ）が
判明しており (seminars inIMMUNOLOGY 5: 81-94, 199
3)、それを参考にして腫瘍抗原ペプチドの候補を調べ、
そのペプチドを結合して上記と同様な方法で確認する方
法も用いられる(Eur.J.Immunol,24: 759,1994, J.Exp.M
ed.180: 347,1994) 。

【００２４】本発明においては、配列番号：１のアミノ
酸配列において、HLA-A24 抗原に結合して提示される９
マーのモチーフを参考にして腫瘍抗原ペプチドの候補を
調べたところ、それぞれ配列番号：２〜１１に示される
Ｐ１〜Ｐ１０のペプチドが腫瘍抗原ペプチドの候補とし
て挙げられる（表１）。ＣＴＬの反応性という観点か
ら、Ｐ２（配列番号：３）、Ｐ３（配列番号：４）、Ｐ
８（配列番号：９）、Ｐ９（配列番号：１０）およびＰ
１０（配列番号：１１）のペプチドが好ましく、Ｐ９の
ペプチドがより好ましい。

【００２５】

【表１】

【００２６】この様にして決定されたペプチドは、通常
のペプチド化学において知られている方法で製造するこ
とができる。例えば、"Peptide Synthesis", Interscie
nce,New York. 1996、"The Proteins", Vol.2, Academi
c Press Inc., New York. 1976、「ペプチド合成」丸善
（株) 、1975、「ペプチド合成の基礎と実験」丸善
（株) 、1985、等に記載されている方法等が挙げられ
る。すなわち、Ｃ末端部位の構成により液相法、固相法
のいずれかを選択して合成することができ、なかでも液
相法がより好ましい。すなわち、アミノ酸の官能基を適
当な保護基で適宜保護および脱保護を行い、アミノ酸
を、１残基または数残基づつ結合させることでペプチド
を製造することができる。なお、アミノ酸の官能基の保
護基については、例えば前述のペプチド化学について記
載する書籍等に記載されている。

【００２７】本明細書中、「本発明の腫瘍抗原ペプチド
の誘導体」とは、本発明の腫瘍抗原ペプチドのアミノ酸
配列のうち１つまたは複数個が置換、欠失、挿入または
付加されたペプチドを意味する。好ましい誘導体として
は、腫瘍抗原ペプチドのうちでＣＴＬとの結合に関与す
るエピトープ領域はそのままであってＭＨＣクラスＩ抗
原との結合に関与するアミノ酸残基が置換、欠失、挿入
または付加された誘導体が挙げられ、さらに好ましくは
その誘導体であって一つのアミノ酸残基のみを置換した
ものが挙げられる（Immunol. 84: 298-303,1995 ）。か
かる誘導体は、ＣＴＬとの結合性はそのまま維持しつ
つ、ＭＨＣクラスＩ抗原により強く結合可能であるた
め、さらに有用な腫瘍抗原ペプチドとして適用ができ
る。

【００２８】このような誘導体は、例えばMolecular Cl
oning: A Laboratory Manual第２版第１−３巻 Sambroo
k,J.ら著、Cold Spring Harber Labolatory Press 出版
NewYork 1989年に記載の方法で調製することができ、
部位特異的変異誘発やＰＣＲ法などの方法によって調製
することができる。

【００２９】従って、本発明の腫瘍抗原ペプチドまたは
その誘導体は、後述の本発明のオリゴヌクレオチド分子
によりコードされるものである。

【００３０】また、「本発明の誘導体」には、本発明の
腫瘍抗原ペプチドまたは該ペプチドの一部のアミノ酸残
基を置換、欠失、挿入または付加した誘導体のアミノ基
もしくはカルボキシル基を修飾した誘導体も包含され
る。

【００３１】アミノ基の修飾基としては、例えばアシル
基が挙げられ、具体的には炭素数１から６のアルカノイ
ル基、フェニル基で置換された炭素数１から６のアルカ
ノイル基、炭素数５から７のシクロアルキル基で置換さ
れたカルボニル基、炭素数１から６のアルキルスルホニ
ル基、フェニルスルホニル基等が挙げられる。

【００３２】カルボキシル基の修飾基としては、例えば
エステル基およびアミド基が挙げられ、エステル基の具
体例としては、炭素数１から６のアルキルエステル基、
フェニル基で置換された炭素数０から６のアルキルエス
テル基、炭素数５から７のシクロアルキルエステル基等
が挙げられ、アミド基の具体例としては、アミド基、炭
素数１から６のアルキル基１つまたは２つで置換された
アミド基、フェニル基で置換された炭素数０から６のア
ルキル基１つまたは２つで置換されたアミド基、アミド
基の窒素原子を含んで５から７員環のアザシクロアルカ
ンを形成するアミド基等が挙げられる。

【００３３】本発明はさらに、本発明の腫瘍抗原タンパ
ク質または腫瘍抗原ペプチドもしくはその誘導体を含有
する医薬を提供する。本発明の腫瘍抗原タンパク質およ
び腫瘍抗原ペプチドは、細胞性免疫が効果的に成立する
ようにアジュバントとともに投与したり、粒子状の剤型
にして投与することができる。アジュバントとしては、
文献（Clin. Microbiol.Rev.7:277-289、1994）に記載
のものなどが応用可能である。また、剤型としては、リ
ポソーム製剤、直径数μm のビーズに結合させた粒子状
の製剤、リピッド（脂質）を結合させた製剤など外因性
の抗原ペプチドをＭＨＣクラスＩ抗原へ効率良く抗原提
示させうる投与法が用いられる。また、腫瘍抗原ペプチ
ドをパルスした樹状細胞やマイクロファージなどの抗原
提示細胞や腫瘍抗原タンパク質をコードするDNA を導入
した細胞を投与する方法も考えられる。製剤中の本発明
の腫瘍抗原タンパク質および腫瘍抗原ペプチドの投与量
は、治療目的の疾患、患者の年齢、体重等により適宜調
整することができるが、通常0.0001mg〜1000mg、好まし
くは0.001mg 〜1000mgであり、これを数日ないし数月に
１回投与するのが好ましい。

【００３４】本発明の腫瘍抗原タンパク質または腫瘍抗
原ペプチドもしくはその誘導体に対する「抗体」は、例
えば、Antibodies; A Laboratory Manual, Lane.H.
D.ら編、Cold Spring Harber Laboratory Press 出
版 New York 1989年などに記載の方法により、腫瘍抗
原タンパク質またはその断片ペプチドを用いて適切な方
法で適切な動物を免疫することにより、腫瘍抗原タンパ
ク質を認識する抗体、あるいはその活性を中和する抗体
を容易に作製できる。抗体の用途としては、アフィニテ
ィークロマトグラフィー、cDNAライブラリーのスクリー
ニング、免疫学的診断法、医薬等が挙げられる。免疫学
的診断法は、イムノブロット法、放射免疫測定法（ＲＩ
Ａ）、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、蛍光あるいは発
光測定法等より適宜選択できる。

【００３５】本発明はさらに、本発明の腫瘍抗原ペプチ
ドまたはその誘導体をコードするオリゴヌクレオチド分
子に関する。本発明のオリゴヌクレオチド分子はDNA ま
たはRNA の形態をとることができ、DNA にはcDNA、ゲノ
ムDNA および合成DNA が包含される。また、DNA および
RNA は一本鎖または二本鎖であってよく、一本鎖の場合
はセンス鎖またはアンチセンス鎖の両者が包含され得
る。

【００３６】ある塩基配列のうち一部が置換、欠失、挿
入または付加されたオリゴヌクレオチド分子は、前記ポ
リヌクレオチド分子と同様の部位特異的変異誘発やＰＣ
Ｒ法などにより製造できる。本発明のオリゴヌクレオチ
ド分子は、これらの変異型オリゴヌクレオチド分子も包
含する。かかる変異型オリゴヌクレオチド分子として
は、例えば、配列番号：１の塩基配列において１もしく
は複数個の塩基が置換、欠失、挿入または付加されたオ
リゴヌクレオチド分子が挙げられる。また、本発明のオ
リゴヌクレオチド分子には「本発明のオリゴヌクレオチ
ド分子にストリンジェントな条件下でハイブリダイズす
るオリゴヌクレオチド分子」も包含される。オリゴヌク
レオチド分子としてDNA 分子を代表例にとると、「DNA
分子にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする
DNA 分子」は、例えば前記ポリヌクレオチド分子と同様
の条件によって得ることができ、ここで、「ストリンジ
ェントな条件下でハイブリダイズする」とは、例えば、
前記ポリヌクレオチド分子において記載された条件が挙
げられる。

【００３７】また、本発明の腫瘍抗原タンパク質または
腫瘍抗原ペプチドをコードするDNAを発現させることに
よって、腫瘍抗原タンパク質または腫瘍抗原ペプチドを
大量に製造することが可能となる。

【００３８】DNA を発現してタンパク質を生産するに
は、例えば、前述のMolecular Cloning 等の多くの成書
や文献に基づいて実施することができる。発現させたい
DNA の上流に翻訳開始コドンを、下流には翻訳終始コド
ンを付加し、転写を制御するプロモーター配列（例え
ば、ｔｒｐ、ｌａｃ、Ｔ７、ＳＶ４０初期プロモータ
ー）等の制御遺伝子を付加し、適当なベクター（例え
ば、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１９、ｐＳＶ・ＳＰＯＲＴ１
など）に組み込むことにより、宿主細胞内で複製し、機
能する発現プラスミドを作製する。

【００３９】次に、発現プラスミドを適当な宿主細胞に
導入して形質転換体細胞を得る。宿主細胞としては、大
腸菌などの原核生物、酵母のような単細胞真核生物、昆
虫、動物などの多細胞真核生物の細胞などが挙げられ
る。また、宿主細胞への遺伝子導入法としては、リン酸
カルシウム法、ＤＥＡＥ−デキストラン法、電気パルス
法などがある。形質転換体は、適当な培地で培養するこ
とによって目的とするタンパク質を生産する。以上のよ
うにして得られたタンパク質は一般的な生化学的方法に
よって単離精製することができる。

【００４０】これらの本発明のプラスミドによって形質
転換された形質転換体も本発明の範囲に包含される。

【００４１】本発明はさらに、本発明のポリヌクレオチ
ド分子またはオリゴヌクレオチド分子もしくはその化学
的修飾体を含有する医薬に関する。本発明のポリヌクレ
オチド分子またはオリゴヌクレオチド分子を含有する
「医薬」は、例えば、本発明のDNA を腫瘍患者等に投与
することで腫瘍を治療または予防することができる。本
発明のDNA を投与し細胞内に導入する方法としては、ウ
イルスベクターによる方法およびその他の方法（日経サ
イエンス、1994年4 月号、20-45 頁、月刊薬事、36(1)2
3-48(1994)、実験医学増刊、12(15)、(1994)、およびこ
れらの引用文献等) のいずれの方法も適用することがで
きる。

【００４２】ウイルスベクターによる方法としては、例
えばレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイ
ルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、ポック
スウイルス、ポリオウイルス、シンドビスウイルス等の
RNA ウイルスまたはDNA ウイルスに本発明のDNA を組み
込んで導入する方法が挙げられる。この中で、レトロウ
イルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、ワクシ
ニアウイルス等を用いた方法が特に好ましい。

【００４３】その他の方法としては、発現プラスミドを
直接筋肉内に投与する方法（DNA ワクチン法）、リポソ
ーム法、リポフェクチン法、マイクロインジェクション
法、リン酸カルシウム法、エレクトロポレーション法等
が挙げられ、特にDNA ワクチン法、リポソーム法が好ま
しい。

【００４４】これらの本発明のポリヌクレオチド分子ま
たはオリゴヌクレオチド分子を有するプラスミドも本発
明の範囲に含まれる。

【００４５】本発明の腫瘍抗原ペプチドをコードする遺
伝子を実際に医薬として作用させるには、遺伝子を直接
体内に導入するin vivo方法、およびヒトからある種の
細胞を採取し体外で遺伝子を該細胞に導入しその細胞を
体内に戻すex vivo方法がある（日経サイエンス、1994
年4 月号、20-45 頁、月刊薬事、36(1)23-48(1994)、実
験医学増刊、12(15)、(1994)、およびこれらの引用文献
等）。in vivo方法がより好ましい。

【００４６】in vivo方法により投与する場合は、治療
目的の疾患、症状等に応じた適当な投与経路により投与
され得る。例えば、静脈、動脈、皮下、筋肉内などに投
与することが出来る。in vivo方法により投与する場合
は、例えば、液剤等の製剤形態をとりうるが、一般的に
は有効成分である本発明のDNA を含有する注射剤等とさ
れ、必要に応じて、慣用の担体を加えてもよい。また、
本発明のDNA を含有するリポソームまたは膜融合リポソ
ーム（センダイウイルス（ＨＶＪ）−リポソーム等）に
おいては、懸濁剤、凍結剤、遠心分離濃縮凍結剤等のリ
ポソーム製剤の形態とすることができる。

【００４７】製剤中の本発明のDNA 含量は、治療目的の
疾患、患者の年齢、体重等により適宜調整することがで
きるが、通常本発明のDNA として、0.0001mg〜100mg 、
好ましくは0.001mg 〜10mgであり、これを数日ないし数
月に１回投与するのが好ましい。

【００４８】本発明はさらに、配列番号：１のアミノ酸
配列を有する腫瘍抗原タンパク質をコードするポリヌク
レオチド分子のコーディング配列またはその５' ノンコ
ーディング配列中の塩基配列と相補的な配列からなるオ
リゴヌクレオチド分子またはその化学的修飾体に関す
る。好ましくは、配列番号：１の塩基配列（構造遺伝子
部分）からなるポリヌクレオチド分子のコーディング配
列またはその５' ノンコーディング配列中の塩基配列と
相補的な配列をもつ９塩基以上からなるDNA もしくはRN
A である。このようなDNA もしくはRNA とは、二本鎖DN
A のアンチセンス鎖のDNA またはそのアンチセンス鎖の
DNA に対応するRNA であって９塩基以上からなるもの
（以下、アンチセンスオリゴヌクレオチドという）をい
う。

【００４９】このアンチセンスオリゴヌクレオチドは、
例えば本発明の腫瘍抗原タンパク質をコードする遺伝子
の塩基配列を基にしてDNA として製造するか、またこの
DNAをアンチセンスの向きに遺伝子発現プラスミドに組
み込むことで容易に対応するRNA を製造することができ
る。

【００５０】このアンチセンスオリゴヌクレオチドは、
本発明の遺伝子であるcDNAのコーディング部分、５' ノ
ンコーディング部分のいずれの部分の相補的な配列であ
ってもよいが、好ましくは転写開始部位、翻訳開始部
位、５' 非翻訳領域、エクソンとイントロンとの境界領
域もしくは5'CAP 領域に相補的配列であることが望まし
い。

【００５１】「オリゴヌクレオチド分子の化学的修飾
体」とは、DNA またはRNA の細胞内への移行性または細
胞内での安定性を高めることができる化学的修飾体を表
し、例えば、ホスホチオエート、ホスホロジチオエー
ト、アルキルホスホトリエステル、アルキルホスホナー
ト、アルキルホスホアミデート等の誘導体（"Antisense
RNA and DNA" WILEY −LISS刊 1992 P.1-50）が挙げら
れる。この化学的修飾体は、同文献等に従って製造する
ことができる。

【００５２】本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド
またはその化学的修飾体を用いて、腫瘍抗原タンパク質
をコードする遺伝子の発現を制御することができる。こ
の方法によって腫瘍抗原タンパク質の生産量を減らすこ
とで、自己免疫疾患を治療または予防することができ
る。このようなアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有
する医薬も本発明に包含される。

【００５３】アンチセンスオリゴヌクレオチドをそのま
ま投与する場合は、このアンチセンスオリゴヌクレオチ
ドの好ましい長さとしては、例えば５〜２００塩基のも
のが挙げられる。

【００５４】また、アンチセンスオリゴヌクレオチドを
発現プラスミドに組み込む場合は、このアンチセンスオ
リゴヌクレオチドの好ましい長さとしては、例えば１０
０塩基以上が挙げられ、好ましくは３００塩基以上が挙
げられ、さらに好ましくは５００塩基以上が挙げられ
る。

【００５５】アンチセンスオリゴヌクレオチドを発現プ
ラスミドに組み込む場合、このアンチセンスオリゴヌク
レオチドを細胞に導入する方法としては例えば、実験医
学12巻 1994年に述べられている方法が挙げられ、リポ
ソームや組換えウイルスなどを利用した方法が挙げられ
る。アンチセンスオリゴヌクレオチドの発現プラスミド
は通常の発現ベクターを用いてプロモーターの後ろに逆
向きに、すなわち本発明の遺伝子が３' から５' の向き
に転写されるように、本発明の遺伝子をつなぐだけで簡
単に作製できる。

【００５６】このようなアンチセンスオリゴヌクレオチ
ドを有するプラスミドも本発明に包含される。アンチセ
ンスオリゴヌクレオチドまたはその化学的修飾体をその
まま投与する場合、安定化剤、緩衝液、溶媒などと混合
して製剤された後、投与時には抗生物質、抗炎症剤、麻
酔薬などと同時に用いることもできる。こうして作製さ
れた製剤は様々な方法で投与可能である。投与は連日ま
たは数日から数週間おきになされるのが好ましい。ま
た、この様な頻回の投与を避けるために徐放性のミニペ
レット製剤を作製し患部近くに埋め込むことも可能であ
る。あるいはオスモチックポンプなどを用いて患者に連
続的に徐々に投与することも可能である。通常投与量は
作用部位における濃度が0.1nM-10μM になるように調製
する。

【００５７】このようなアンチセンスオリゴヌクレオチ
ドまたはその化学的修飾体を含有する医薬も本発明に包
含される。

【００５８】

【実施例】以下、実施例により本発明をさらに詳しく説
明するが、本発明はこれらの実施例によってなんら限定
されるものではない。

【００５９】参考例１食道癌細胞株に対する細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）株の
樹立６７歳男性の食道癌患者末梢血リンパ球をリンパ球腫瘍
混合培養法により、インターロイキン２存在下で約６０
日間、５％炭酸ガス（９５％空気）培養器にて培養し
た。その間、培養２８日目以降、頻回に培養して増殖す
るＴ細胞の各種癌細胞に対する細胞障害能を⁵¹Ｃｒ遊離
法とＩＦＮ−γ測定法にて解析した。その結果、培養３
９日目〜４９日目のＴ細胞がＣＤ８陽性のキラーＴ細胞
を主体とし、かつＭＨＣクラスＩ抗原のうちのHLA-A240
2 拘束性のＣＴＬ活性を示すことが判明した。HLA-A240
2 陽性の癌細胞中、扁平上皮癌であるKE-4細胞株（M.Na
kaoら, Cancer Research 55,4248-4252, 1995）が最も
高い感受性を上記ＣＴＬに対して示した。そこで、上記
ＣＴＬ（KE-4-CTLと命名）を大量に液体窒素添加細胞凍
結保存用タンクに保存し、ＣＴＬの認識する癌退縮抗原
遺伝子のクローニングに備えた。

【００６０】参考例２ HLA-A2402 cDNAの組換えプラスミドの調製中尾ら著、Cancer Res.55:4248-252(1995)の教示に従
い、KE-4細胞由来のHLA-A2402 cDNAを発現ベクターpCR3
（INVITROGEN社製）に組込み、組換えプラスミドを作製
した。

【００６１】参考例３ KE-4細胞cDNAライブラリー作製 mRNA精製システム（ファルマシアバイオテク社製）を用
い添付のプロトコールに従い、KE-4細胞から全RNA 画分
の分離およびオリゴ(dT)カラムによるポリ(A) ⁺mRNAの
調製を行った。mRNAよりスーパースクリプトプラスミド
システム(GIBCOBRL 社製) を用い添付のプロトコールに
従い、両端にNot １アダプターとSal１アダプターを連
結したcDNAを作製した後、このcDNAを発現ベクターpSV-
SPORT1（GIBCO BRL社製）の制限酵素Not １およびSal
１の切断部位に連結して組換えプラスミドを得た。この
組換えプラスミドをジーンパルサー(Bio-Rad社製) を用
いて25μF, 200Ω, 2.5kV の条件で、電気パルスにより
大腸菌のエレクトロマックスDH10B/p3^TMセル（GIBCO B
RL社製）に導入し、アンピシリン（50μｇ／ml）を含む
LB培地（１％バクトトリプトン^TM、0.5%NaCl、pH7.3 ）
上にて組換えプラスミドが導入されている形質転換体を
選択した。

【００６２】参考例４インターフェロン−γの定量インターフェロン−γ（IFN-γ）の定量は、エンザイム
イムノアッセイ（ELISA ）により行った。９６ウェルマ
イクロプレートに一次抗体として抗ヒトIFN-γマウスモ
ノクロール抗体を吸着させ、ウシ血清アルブミンで非特
異的結合をブロックした後、検体中のIFN-γを抗体に結
合させた。次に二次抗体として抗ヒトIFN-γウサギポリ
クロール抗体を結合させ、さらにペルオキシダーゼ標識
した抗ウサギ免疫グロブリンロバ抗体を結合した後、発
色剤としてＴＭＢＺ（テトラメチルベンジディン）を反
応させ、2N H₂SO₄ を等量加えて反応を停止させた後、
吸光度(450 nm)を測定した。これを標準品のIFN-γより
得られた値と比較することにより定量した。

【００６３】実施例１腫瘍抗原タンパク質遺伝子のスクリーニングまず、参考例３にて調製した形質転換体のプールから組
換えプラスミドDNA を回収する。アンピシリン（50μｇ
／ml）を含むLB培地の入った96ウェルＵ底マイクロプレ
ートにウェルあたり100-200 個の形質転換体を加え培養
後、その一部をウェル当たり0.3ml のTYGPN 培地（F.M.
Ausubelら編、CURRENT PROTCOLS IN MOLECULARBIOLOG
Y, John Wiley & Sons, Inc.）の入った別の96ウェルＵ
底マイクロプレートに移して３７℃で４８時間培養し、
残りのLB培地のマイクロプレートは凍結保存した。TYGP
N 培地で培養した形質転換体の組換えプラスミドDNA
は、マイクロプレートでアルカリ溶解法（F.M. Ausubel
ら編、CURRENT PROTCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, John
Wiley & Sons, Inc.）により調製した。イソプロパノー
ル沈殿で回収した組換えプラスミドDNA は、50μｌの20
ng ／ml RN アーゼを含む10mMTris ，1mM EDTA，pH7.4
溶液に懸濁した。

【００６４】次に、上記にて調製した組換えプラスミド
DNA と参考例２にて調製したHLA-A2402 cDNAの組換えプ
ラスミドをCOS7細胞（Gluzan,Y. Cell,23: 175-182, 19
81）にリポフェクチン法により同時にトランスフェクト
する。COS7細胞を96ウェル平底マイクロプレートのウェ
ル当たり1 ×10⁴個を加え、100 μｌの10％FCS を含む
RPMI培養液で1 日培養した。形質転換体約100 個分のKE
-4cDNAの組換えプラスミド25μｌに参考例２にて調製し
たHLA-A2402 cDNAの組換えプラスミド100 ngを加え、さ
らに約100 倍に希釈したリポフェクチン試薬（リポフェ
クタミン、GIBCO-BRL 社製）25μｌを加えた。得られた
混合液 50 μｌ（リポソームと組換えプラスミドの融合
懸濁液）を、培養したCOS7細胞に加えてダブルトランス
フェクトした。トランスフェクタントは2 点ずつ用意し
た。トランスフェクタントは48〜72時間、37℃で培養し
た後、培養液を除去し、ウェル当たり1 ×10⁴個のKE-4
ＣＴＬを加えて100 μｌの10％ヒト血清と50Ｕ／mlのIL
-2を含む培養液で37℃で16〜24時間培養した。培養液を
回収し、IFN-γをELISA で測定した。

【００６５】次いで、ELISA によって高いIFN −γ産生
が認められた８群について、該当する凍結保存しておい
たKE-4cDNAの組換えプラスミドによる形質転換体約100
〜200 クローン／ウェルのプールを用いてさらに以下の
ようにスクリーニングを行う。形質転換体のプ―ルを約
６時間LB（アンピシリン50μg ／mlを含む）培地にて培
養し、さらに培養物をアンピシリン（50μg ／ml）を含
むLB寒天培地のプレートにまいて１日培養し、得られた
単一コロニー各群200 コロニー、合計8 ×200コロニー
をそれぞれ９６穴マイクロプレートの各ウェルに移し、
ウェル当たりの形質転換体が１種類となる条件で上記と
同様の方法で培養し、KE-4 cDNA の組換えプラスミドDN
A を調製した。さらに上記と同様な方法によりKE-4 cDN
A の組換えプラスミドとHLA-A2402 cDNAの組換えプラス
ミドとをCOS7細胞にダブルトランスフェクトし、引き続
いてKE-4- ＣＴＬとの混合培養を行い、KE-4- ＣＴＬが
反応して産生した培養液中のIFN-γを定量し、陽性プラ
スミドを選択した。この操作により、KE-4- ＣＴＬと反
応するKE-4細胞cDNA組換えプラスミドクローンが選択さ
れ、SART-2と命名した。SART-2について、さらにもう一
度、同様な操作を繰り返してKE-4- ＣＴＬによるIFN-γ
の産生を確認した。

【００６６】実施例２腫瘍抗原遺伝子の塩基配列決定目的の腫瘍抗原遺伝子のcDNAが組み込まれた組換えプラ
スミドを持つ形質転換体SART-2をそれぞれ、500ml のア
ンピシリン（50μg ／ml）を含むLB培地で37℃で14〜16
時間培養し、遠心分離にて菌体を回収した。菌体からPL
ASMID MAXI キット（QIAGEN社製）に従い、組換えプラ
スミドを回収した。cDNAは、SP6 RNAポリメラーゼプロ
モーター配列とT7 RNA ポリメラーゼプロモーター配列
に挟まれた部位に組み込まれている。そこで文献（DNA
4: 165,1985 ）に記載のSP6 プロモータープライマーお
よびT7プロモータープライマーを合成した。次に、SP6
プロモータープライマーまたはT7プロモータープライマ
ーをFluore-dATP LabelingMix（ファルマシアバイオテ
ク社製）およびAutoRead Sequencing Kit （ファルマシ
アバイオテク社製）と組み合わせてジデオキシシークエ
ンシング反応を行い、蛍光DNA シーケンサー（ファルマ
シアバイオテク社製）を使用し、両端からcDNAの塩基配
列を決定した。SART-2cDNAの塩基配列は全長が3998塩基
対と決定され、配列番号：１の通りであった。また、SA
RT-2cDNAの塩基配列から推定される最長のオープンリー
ディングフレームを有するアミノ酸配列を配列番号：１
および図１に示す。

【００６７】Gene Worksデーターベースを使用し、配列
番号：１に記載の塩基配列の検索を行った。その結果、
SART-2遺伝子は、第６染色体長腕（６ｑ２２）上に存在
していた。

【００６８】実施例３ SART-2クローンの活性断片の特定実施例２で得られたSART-2cDNAから、様々なサイズのＣ
末端欠失変異体腫瘍抗原タンパク質をコードする遺伝子
の断片を作製した。この断片を含む組換えプラスミドDN
A と参考例２にて調製したHLA-A2402 cDNAの組換えプラ
スミドをCOS7細胞に実施例１に記載の手法によりダブル
トランスフェクトし、IFN-γ産生量をELISA によって測
定した。得られた結果は、トリプリケートの平均値を示
し、関連性のない遺伝子をHLA-A2402 遺伝子とダブルト
ランスフェクトしたネガティブコントロールへの反応性
に対して、いずれも有意差（ｐ＜0.05）が認められた
（図３）。

【００６９】図３より、Ｃ末端欠失変異体腫瘍抗原タン
パク質は、全長のSART-2腫瘍抗原タンパク質に比べてIF
N-γ産生量が低下しており、低下の程度からSART-2の腫
瘍抗原ペプチドは、Ｎ末端側とＣ末端側に存在している
ことが示唆された。

【００７０】また、HLA-A24 のＭＨＣクラスＩ抗原の型
については、結合して提示されるペプチドの配列の規則
性（モチーフ）が判明しており(seminars in IMMUNOL
OGY5:81-94,1993)、それを参考にして腫瘍抗原ペプチド
の候補を調べたところ、表１に示される10個のペプチド
Ｐ１〜Ｐ１０（配列番号：２〜１１）が腫瘍抗原ペプチ
ドの候補として挙げられた。

【００７１】前記ペプチドを常法により合成し、最終濃
度10μg/mlとなるように10％FCS 添加RPMI640 培養液に
加え、HLA-A2402 cDNAをトランスフェクトしたCOS7細胞
にパルスし、前記と同様にIFN-γ産生量を調べることに
より腫瘍抗原ペプチドを同定した（図４）。

【００７２】図４より、Ｐ２（配列番号：３）、Ｐ３
（配列番号：４）、Ｐ８（配列番号：９）、Ｐ９（配列
番号：１０）およびＰ１０（配列番号：１１）が活性が
あり、このうちＰ９が最も活性が高いことが示された。

【００７３】実施例４腫瘍抗原タンパク質のHLA-A2402 拘束性の同定異なる量（0 〜400ng/ウエル) のSART-2遺伝子を含むプ
ラスミドベクターを、一定量（100ng/ウエル) のHLA-A2
402 cDNAまたはHLA-A2601 cDNAとダブルトランスフェク
トしたCOS7細胞それぞれに対して、KE-4- ＣＴＬが用量
依存的に反応するかどうかをIFN-γ産生量を調べること
により検討した（図５）。

【００７４】図５より、SART-2腫瘍抗原タンパク質は、
HLA-A2402 拘束性であることが示された。

【００７５】

【発明の効果】本発明の腫瘍抗原タンパク質および腫瘍
抗原ペプチドを用いた抗腫瘍免疫を活性化するための医
薬、本発明の腫瘍抗原タンパク質に対する抗体等を用い
た自己免疫疾患を治療するための医薬、および腫瘍抗原
タンパク質をコードするDNA 等を含有する医薬を提供す
ることができ、また腫瘍または自己免疫疾患の診断方法
を提供することができる。

【００７６】

【配列表】配列番号：１配列の長さ：3998 配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA 起源生物名：ヒト（Homo sapiens）組織の種類：食道癌組織配列の特徴特徴を表す記号：ＣＤＳ存在位置：150..3023 特徴を決定した方法：Ｐ配列： CCGGGAGCCC GGGCGCCCTG GAGTGAGGAG GACCGGGAGC TGGCTCTGGA GGCTGCGGAG 60 GCGACGCCGG AGAGAACGAA GCCTCGGCTG GGAGCGGATC TTTCGAAGAT GGTTTGGCTG 120 CCTTGGAGAT TTGGAGATCT GATGCCACG ATG AGG ACT CAC ACA CGG GGG GCT 173 Met Arg Thr His Thr Arg Gly Ala 5 CCC AGT GTG TTT TTC ATA TAT TTG CTT TGC TTT GTG TCA GCC TAC ATC 221 Pro Ser Val Phe Phe Ile Tyr Leu Leu Cys Phe Val Ser Ala Tyr Ile 10 15 20 ACC GAC GAG AAC CCA GAA GTT ATG ATT CCC TTC ACC AAT GCC AAC TAC 269 Thr Asp Glu Asn Pro Glu Val Met Ile Pro Phe Thr Asn Ala Asn Tyr 25 30 35 40 GAC AGC CAT CCC ATG CTG TAC TTC TCC AGG GCA GAA GTG GCG GAG CTG 317 Asp Ser His Pro Met Leu Tyr Phe Ser Arg Ala Glu Val Ala Glu Leu 45 50 55 CAG CTC AGG GCT GCC AGC TCG CAC GAG CAC ATT GCA GCC CGC CTC ACG 365 Gln Leu Arg Ala Ala Ser Ser His Glu His Ile Ala Ala Arg Leu Thr 60 65 70 GAG GCT GTG CAC ACG ATG CTG TCC AGC CCC TTG GAA TAC CTC CCT CCC 413 Glu Ala Val His Thr Met Leu Ser Ser Pro Leu Glu Tyr Leu Pro Pro 75 80 85 TGG GAT CCC AAG GAC TAC AGT GCC CGC TGG AAT GAA ATT TTT GGA AAC 461 Trp Asp Pro Lys Asp Tyr Ser Ala Arg Trp Asn Glu Ile Phe Gly Asn 90 95 100 AAC TTG GGT GCC TTG GCA ATG TTC TGT GTG CTG TAT CCT GAG AAC ATT 509 Asn Leu Gly Ala Leu Ala Met Phe Cys Val Leu Tyr Pro Glu Asn Ile 105 110 115 120 GAA GCC CGA GAC ATG GCC AAA GAC TAC ATG GAG AGG ATG GCA GCG CAG 557 Glu Ala Arg Asp Met Ala Lys Asp Tyr Met Glu Arg Met Ala Ala Gln 125 130 135 CCT AGT TGG TTG GTG AAA GAT GCT CCT TGG GAT GAG GTC CCG CTT GCT 605 Pro Ser Trp Leu Val Lys Asp Ala Pro Trp Asp Glu Val Pro Leu Ala 140 145 150 CAC TCC CTG GTT GGT TTT GCC ACT GCT TAT GAC TTC TTG TAC AAC TAC 653 His Ser Leu Val Gly Phe Ala Thr Ala Tyr Asp Phe Leu Tyr Asn Tyr 155 160 165 CTG AGC AAG ACA CAA CAG GAG AAG TTT CTT GAA GTG ATT GCC AAT GCC 701 Leu Ser Lys Thr Gln Gln Glu Lys Phe Leu Glu Val Ile Ala Asn Ala 170 175 180 TCA GGG TAT ATG TAT GAA ACT TCA TAC AGG AGA GGA TGG GGA TTT CAA 749 Ser Gly Tyr Met Tyr Glu Thr Ser Tyr Arg Arg Gly Trp Gly Phe Gln 185 190 195 200 TAC CTG CAC AAT CAT CAG CCC ACC AAC TGT ATG GCT TTG CTC ACG GGA 797 Tyr Leu His Asn His Gln Pro Thr Asn Cys Met Ala Leu Leu Thr Gly 205 210 215 AGC CTA GTC CTG ATG AAT CAA GGA TAT CTT CAA GAA GCC TAC TTA TGG 845 Ser Leu Val Leu Met Asn Gln Gly Tyr Leu Gln Glu Ala Tyr Leu Trp 220 225 230 ACC AAA CAA GTT CTG ACC ATC ATG GAG AAA TCT CTG GTC TTG CTC AGG 893 Thr Lys Gln Val Leu Thr Ile Met Glu Lys Ser Leu Val Leu Leu Arg 235 240 245 GAG GTG ACG GAT GGC TCC CTC TAT GAA GGA GTT GCG TAT GGC AGC TAC 941 Glu Val Thr Asp Gly Ser Leu Tyr Glu Gly Val Ala Tyr Gly Ser Tyr 250 255 260 ACC ACT AGA TCA CTC TTC CAA TAC ATG TTT CTC GTC CAG AGG CAC TTC 989 Thr Thr Arg Ser Leu Phe Gln Tyr Met Phe Leu Val Gln Arg His Phe 265 270 275 280 AAC ATC AAC CAC TTT GGC CAT CCG TGG CTT AAA CAA CAC TTT GCA TTT 1037 Asn Ile Asn His Phe Gly His Pro Trp Leu Lys Gln His Phe Ala Phe 285 290 295 ATG TAT AGA ACC ATC CTG CCA GGG TTT CAA AGG ACT GTG GCT ATT GCG 1085 Met Tyr Arg Thr Ile Leu Pro Gly Phe Gln Arg Thr Val Ala Ile Ala 300 305 310 GAC TCA AAT TAC AAC TGG TTT TAT GGT CCA GAA AGC CAA TTA GTG TTC 1133 Asp Ser Asn Tyr Asn Trp Phe Tyr Gly Pro Glu Ser Gln Leu Val Phe 315 320 325 CTT GAT AAA TTT GTC ATG CGT AAT GGC AGT GGT AAC TGG CTA GCT GAC 1181 Leu Asp Lys Phe Val Met Arg Asn Gly Ser Gly Asn Trp Leu Ala Asp 330 335 340 CAA ATC AGA AGG AAC CGT GTG GTG GAA GGT CCA GGA ACA CCA TCC AAA 1229 Gln Ile Arg Arg Asn Arg Val Val Glu Gly Pro Gly Thr Pro Ser Lys 345 350 355 360 GGG CAG CGC TGG TGC ACT CTG CAC ACA GAA TTT CTC TGG TAT GAT GGC 1277 Gly Gln Arg Trp Cys Thr Leu His Thr Glu Phe Leu Trp Tyr Asp Gly 365 370 375 AGC TTG AAA TCG GTT CCT CCT CCA GAC TTT GGC ACC CCT ACA CTG CAT 1325 Ser Leu Lys Ser Val Pro Pro Pro Asp Phe Gly Thr Pro Thr Leu His 380 385 390 TAT TTT GAA GAC TGG GGT GTC GTG ACT TAT GGA AGT GCA CTA CCT GCA 1373 Tyr Phe Glu Asp Trp Gly Val Val Thr Tyr Gly Ser Ala Leu Pro Ala 395 400 405 GAA ATC AAT AGA TCT TTC CTT TCC TTC AAG TCT GGA AAA CTG GGG GGA 1421 Glu Ile Asn Arg Ser Phe Leu Ser Phe Lys Ser Gly Lys Leu Gly Gly 410 415 420 CGT GCA ATA TAT GAC ATT GTC CAC AGA AAC AAA TAC AAA GAT TGG ATC 1469 Arg Ala Ile Tyr Asp Ile Val His Arg Asn Lys Tyr Lys Asp Trp Ile 425 430 435 440 AAA GGA TGG AGA AAT TTT AAT GCA GGG CAT GAA CAT CCT GAT CAA AAC 1517 Lys Gly Trp Arg Asn Phe Asn Ala Gly His Glu His Pro Asp Gln Asn 445 450 455 TCA TTT ACT TTT GCT CCC AAT GGT GTG CCT TTC ATT ACT GAG GCT CTG 1565 Ser Phe Thr Phe Ala Pro Asn Gly Val Pro Phe Ile Thr Glu Ala Leu 460 465 470 TAC GGG CCA AAG TAC ACC TTC TTC AAC AAT GTT TTG ATG TTT TCC CCA 1613 Tyr Gly Pro Lys Tyr Thr Phe Phe Asn Asn Val Leu Met Phe Ser Pro 475 480 485 GCT GTG TCA AAG AGC TGC TTT TCT CCC TGG GTG GGT CAG GTC ACA GAA 1661 Ala Val Ser Lys Ser Cys Phe Ser Pro Trp Val Gly Gln Val Thr Glu 490 495 500 GAC TGC TCA TCA AAA TGG TCT AAA TAC AAG CAT GAC CTG GCA GCT AGT 1709 Asp Cys Ser Ser Lys Trp Ser Lys Tyr Lys His Asp Leu Ala Ala Ser 505 510 515 520 TGT CAG GGG AGG GTG GTT GCA GCA GAG GAG AAA AAT GGG GTG GTT TTC 1757 Cys Gln Gly Arg Val Val Ala Ala Glu Glu Lys Asn Gly Val Val Phe 525 530 535 ATC CGA GGA GAA GGT GTG GGA GCT TAT AAC CCC CAG CTC AAC CTG AAG 1805 Ile Arg Gly Glu Gly Val Gly Ala Tyr Asn Pro Gln Leu Asn Leu Lys 540 545 550 AAT GTT CAG AGG AAT CTC ATC CTC CTA CAT CCA CAG CTG CTT CTC CTT 1853 Asn Val Gln Arg Asn Leu Ile Leu Leu His Pro Gln Leu Leu Leu Leu 555 560 565 GTA GAC CAA ATA CAC CTG GGA GAG GAG AGT CCC TTG GAG ACA GCA GCG 1901 Val Asp Gln Ile His Leu Gly Glu Glu Ser Pro Leu Glu Thr Ala Ala 570 575 580 AGC TTC TTC CAT AAT GTG GAT GTT CCT TTT GAG GAG ACT GTG GTA GAT 1949 Ser Phe Phe His Asn Val Asp Val Pro Phe Glu Glu Thr Val Val Asp 585 590 595 600 GGT GTC CAT GGG GCT TTC ATC AGG CAG AGA GAT GGT CTC TAT AAA ATG 1997 Gly Val His Gly Ala Phe Ile Arg Gln Arg Asp Gly Leu Tyr Lys Met 605 610 615 TAC TGG ATG GAC GAT ACT GGC TAC AGC GAG AAA GCA ACC TTT GCC TCA 2045 Tyr Trp Met Asp Asp Thr Gly Tyr Ser Glu Lys Ala Thr Phe Ala Ser 620 625 630 GTG ACA TAT CCT CGG GGC TAT CCC TAC AAC GGG ACA AAC TAT GTG AAT 2093 Val Thr Tyr Pro Arg Gly Tyr Pro Tyr Asn Gly Thr Asn Tyr Val Asn 635 640 645 GTC ACC ATG CAC CTC CGA AGT CCC ATC ACC AGG GCA GCT TAC CTC TTC 2141 Val Thr Met His Leu Arg Ser Pro Ile Thr Arg Ala Ala Tyr Leu Phe 650 655 660 ATA GGG CCA TCT ATA GAT GTT CAG AGC TTC ACT GTC CAC GGA GAC TCT 2189 Ile Gly Pro Ser Ile Asp Val Gln Ser Phe Thr Val His Gly Asp Ser 665 670 675 680 CAG CAA CTG GAT GTG TTC ATA GCC ACC AGC AAA CAT GCC TAC GCC ACA 2237 Gln Gln Leu Asp Val Phe Ile Ala Thr Ser Lys His Ala Tyr Ala Thr 685 690 695 TAC CTG TGG ACA GGT GAG GCC ACA GGA CAG TCT GCC TTT GCA CAG GTC 2285 Tyr Leu Trp Thr Gly Glu Ala Thr Gly Gln Ser Ala Phe Ala Gln Val 700 705 710 ATT GCT GAT CGT CAC AAA ATT CTG TTT GAC CGG AAT TCA GCC ATC AAG 2333 Ile Ala Asp Arg His Lys Ile Leu Phe Asp Arg Asn Ser Ala Ile Lys 715 720 725 AGC AGC ATT GTC CCT GAG GTG AAG GAC TAT GCT GCT ATT GTG GAA CAG 2381 Ser Ser Ile Val Pro Glu Val Lys Asp Tyr Ala Ala Ile Val Glu Gln 730 735 740 AAC TTG CAG CAT TTT AAA CCA GTG TTT CAG CTG CTG GAG AAG CAG ATA 2429 Asn Leu Gln His Phe Lys Pro Val Phe Gln Leu Leu Glu Lys Gln Ile 745 750 755 760 CTG TCC CGA GTC CGG AAC ACA GCT AGC TTT AGG AAG ACT GCT GAA CGC 2477 Leu Ser Arg Val Arg Asn Thr Ala Ser Phe Arg Lys Thr Ala Glu Arg 765 770 775 CTG CTG AGA TTT TCA GAT AAG AGA CAG ACT GAG GAG GCC ATT GAC AGG 2525 Leu Leu Arg Phe Ser Asp Lys Arg Gln Thr Glu Glu Ala Ile Asp Arg 780 785 790 ATT TTT GCC ATA TCA CAG CAA CAG CAG CAG CAA AGC AAG TCA AAG AAA 2573 Ile Phe Ala Ile Ser Gln Gln Gln Gln Gln Gln Ser Lys Ser Lys Lys 795 800 805 AAC CGA AGG GCA GGC AAA CGC TAT AAA TTT GTG GAT GCT GTC CCT GAT 2621 Asn Arg Arg Ala Gly Lys Arg Tyr Lys Phe Vla Asp Ala Val Pro Asp 810 815 820 ATT TTT GCA CAG ATT GAA GTC AAT GAG AAA AAG ATT AGA CAG AAA GCT 2669 Ile Phe Ala Gln Ile Glu Val Asn Glu Lys Lys Ile Arg Gln Lys Ala 825 830 835 840 CAG ATT TTG GCA CAG AAA GAA CTA CCC ATA GAT GAA GAT GAA GAA ATG 2717 Gln Ile Leu Ala Gln Lys Glu Leu Pro Ile Asp Glu Asp Glu Glu Met 845 850 855 AAA GAC CTT TTA GAT TTT GCA GAT GTA ACA TAC GAG AAA CAT AAA AAT 2765 Lys Asp Leu Leu Asp Phe Ala Asp Val Thr Tyr Glu Lys His Lys Asn 860 865 870 GGG GGC TTG ATT AAA GGC CGG TTT GGA CAG GCA CGG ATG GTG ACA ACT 2813 Gly Gly Leu Ile Lys Gly Arg Phe Gly Gln Ala Arg Met Val Thr Thr 875 880 885 ACA CAC AGC AGG GCC CCA TCA CTG TCT GCT TCC TAT ACC AGG TTG TTC 2861 Thr His Ser Arg Ala Pro Ser Leu Ser Ala Ser Tyr Thr Arg Leu Phe 890 895 900 CTG ATT CTG AAC ATT GCT ATT TTC TTT GTC ATG TTG GCA ATG CAA CTG 2909 Leu Ile Leu Asn Ile Ala Ile Phe Phe Val Met Leu Ala Met Gln Leu 905 910 915 920 ACT TAT TTC CAG AGG GCC CAG AGC CTA CAT GGC CAA AGA TGT CTT TAT 2957 Thr Tyr Phe Gln Arg Ala Gln Ser Leu His Gly Gln Arg Cys Leu Tyr 925 930 935 GCA GTT CTT CTC ATA GAT AGC TGT ATT TTA TTA TGG TTG TAC TCT TCT 3005 Ala Val Leu Leu Ile Asp Ser Cys Ile Leu Leu Trp Leu Tyr Ser Ser 940 945 950 TGT TCC CAA TCA CAG TGT TAGCACTGAA GCTATAAATT ACCTGGT 3050 Cys Ser Gln Ser Gln Cys 955 CATTTTGTGA TCACAAGAGT CTATGCAAAA AAAAAAATTT CTTTACCCCA GATTATCAGA 3110 TTTTTTTCCC TCAGATTCAT TTTAACAAAT TAAGGGAAGA TATTTTGACA CAAGAAAGCA 3170 GGAACGTGGA GAAATTGGAG CAGGAAAAGA AATTATCAAA GCAATAGAAA TAGCTTGGTG 3230 GTCCTATGGT GTTTTTGGAA GTATTTGGCA TTGCTAATTG AGCAGTCCAT ATAGTACTAC 3290 TTTTAGAAGA AACAAAAAGT CTATTTTTTA AAGTAATGTT TTTTCTTATG AGAAAAAGGT 3350 TTAGATAGAA TTGGGTTTTA TTAATATTAA TTTAATGCTA TTAGCAATTT CCATATACTA 3410 TATTGTGGAA AAGACTGAAG AATACAATTC TGAGAAATAT AAAAAAATTT TAATGGTATA 3470 CTCATGTTGA AAGATAAATG TTGCTAAGTC CTGGTATGAT GGTGTGAGCT TCCTTGGGGA 3530 AGTACTTCTT GAGTTATGTA ACTAACAGGA TGTTTTACTA CAGATCTGGA TGGCTATTCA 3590 GATAACATGG CAAAAAATGA TAGCAGAAGA TCATTAAAAA CTTAAAATAT ATTTTATTAG 3650 AAAACATTTA TCTATGAATG AATATTTCCT TGATGCTGGT CTCTGCACAC ATATGCTTGG 3710 TTACTTGCAT GCATTCATTG GTTGTTCAAT AAGTGAGATG ATTACAGATA ATACTGTATT 3770 TTCCTTATAT GGAAAACCGT TATAGACCCA ATAACAACTA AACCTTTCAA AAGAAAATAT 3830 TTTCTATTAT GAATGTTGAT TTTCATACCA AAGAAGATGG AGAGTCTAAA ATTTGGATAT 3890 GATTCTTATG TTTTTTTAAT AGAAAACCTT CTTCAAGTTT ATTTTCCTAA ATAAACATCA 3950 TAATTGTGAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAA 3998

【００７７】配列番号：２配列の長さ：９配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド

【００７８】配列番号：３配列の長さ：９配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド

【００７９】配列番号：４配列の長さ：９配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド

【００８０】配列番号：５配列の長さ：９配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド

【００８１】配列番号：６配列の長さ：９配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド

【００８２】配列番号：７配列の長さ：９配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド

【００８３】配列番号：８配列の長さ：９配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド

【００８４】配列番号：９配列の長さ：９配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド

【００８５】配列番号：10 配列の長さ：９配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド

【００８６】配列番号：11 配列の長さ：９配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、SART-2cDNAおよびそれから推定される
最長のオープンリーディングフレームを有するアミノ酸
配列（１文字標記）を示す。

【図２】図２は、SART-2遺伝子の構造を示す模式図であ
る。ＯＲＦは、オープンリーディングフレームを示す。

【図３】図３は、SART-2遺伝子欠失変異体を用いてIFN-
γ産生量をELISA によって測定したグラフである。図
中、NCはネガティブコントロールを示す。

【図４】図４は、表１に示す推定HLA-A24 結合ペプチド
を用いてIFN-γ産生量をELISAによって測定したグラフ
である。

【図５】図５は、SART-2遺伝子がコードする腫瘍抗原タ
ンパク質がHLA-A2402 拘束性であることを示すグラフで
ある。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ０７Ｋ 14/47 Ｃ０７Ｋ 16/18 16/18 Ｃ１２Ｐ 21/02 ＦＣ１２Ｎ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/574 ＡＣ１２Ｐ 21/02 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＤＵ // Ｇ０１Ｎ 33/574 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】（１）配列番号：１のアミノ酸配列をコ
ードするポリヌクレオチド分子、（２）配列番号：１の
アミノ酸配列において、１もしくは複数個のアミノ酸が
置換、欠失、挿入または付加されたタンパク質をコード
するポリヌクレオチド分子、（３）配列番号：１の塩基
配列からなるポリヌクレオチド分子、（４）配列番号：
１の塩基配列において、１もしくは複数個の塩基が置
換、欠失、挿入または付加されたポリヌクレオチド分
子、および（５）前記（１）〜（４）のいずれかのポリ
ヌクレオチド分子にストリンジェントな条件下でハイブ
リダイズするポリヌクレオチド分子、からなる群より選
択されるポリヌクレオチド分子であって、該ポリヌクレ
オチド分子がコードするタンパク質の一部からなるペプ
チドが主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ抗
原と結合してＴ細胞により認識される腫瘍抗原ペプチド
であるポリヌクレオチド分子。
【請求項２】請求項１記載のポリヌクレオチド分子に
よりコードされる腫瘍抗原タンパク質。
【請求項３】請求項１記載のポリヌクレオチド分子の
一部からなるオリゴヌクレオチド分子であって、ＭＨＣ
クラスＩ抗原と結合してＴ細胞により認識される腫瘍抗
原ペプチドをコードするオリゴヌクレオチド分子。
【請求項４】配列番号：１のアミノ酸配列中、連続し
た少なくとも７個のアミノ酸残基を含む腫瘍抗原ペプチ
ドをコードする請求項３記載のオリゴヌクレオチド分
子。
【請求項５】配列番号：１のアミノ酸配列を有する腫
瘍抗原タンパク質をコードするポリヌクレオチド分子の
コーディング配列またはその５' ノンコーディング配列
中の塩基配列と相補的な配列からなるオリゴヌクレオチ
ド分子またはその化学的修飾体。
【請求項６】請求項３または４記載のオリゴヌクレオ
チド分子によりコードされる腫瘍抗原ペプチドまたはそ
の誘導体。
【請求項７】請求項２記載の腫瘍抗原タンパク質また
は請求項６記載の腫瘍抗原ペプチドもしくはその誘導体
を含有する医薬。
【請求項８】請求項２記載の腫瘍抗原タンパク質また
は請求項６記載の腫瘍抗原ペプチドもしくはその誘導体
に対する抗体。
【請求項９】請求項１記載のポリヌクレオチド分子、
請求項３もしくは４記載のオリゴヌクレオチド分子また
は請求項５記載のオリゴヌクレオチド分子もしくはその
化学的修飾体を含有する医薬。
【請求項１０】請求項１記載のポリヌクレオチド分子
または請求項３〜５いずれか記載のオリゴヌクレオチド
分子を有するプラスミド。
【請求項１１】請求項１０記載のプラスミドによって
形質転換された形質転換体。