JPH1132777A - タンパク分解酵素阻害剤およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【解決手段】タンパク分解酵素阻害タンパク質の餌領域
のペプチド配列の一部を改変したタンパク分解酵素阻害
タンパク質。 【効果】従来適当な阻害剤がなかったタンパク分解酵素
に対して新たな阻害剤を提供することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】この発明は、阻害することを
目的とするタンパク分解酵素が分解する能力を有するペ
プチド配列を、タンパク分解酵素阻害性タンパク質のBa
it region（餌領域）に遺伝子工学的手法によって導入
し、しかる後に組換生産することによって得られる新規
なタンパク分解酵素阻害物質に関する。

【０００２】

【従来の技術】生体機能を維持する上で、治療薬とし
て、タンパク質分解酵素の製造行程における分離剤ある
いは補助剤として、また試薬として、不可欠なタンパク
分解酵素阻害物質には従来以下のようなものがある。

【０００３】即ち生体内には自己の生産するタンパク分
解酵素が過剰に作用することを防ぐ機能を有するさまざ
まなタンパク分解酵素阻害物質があり、アンチトロンビ
ン、α１アンチトリプシン、α２マクログロブリン、組
織プロテアーゼ阻害物質等はそれらを代表するものであ
る。また多くの生物は、外敵とする微生物等のタンパク
質分解酵素を介する攻撃から身を守るために、さまざま
なタンパク分解酵素阻害物質を生産しており、それらに
は卵白由来のオボマクログロブリン、微生物由来のペプ
スタチン、ロイペプチン等が含まれる。

【０００４】これらタンパク分解酵素阻害物質は、医薬
品製造業ならびに酵素工業において極めて重要な原料と
なってきた。すなわちすでに１９３０年に牛の臓器から
発見されたペプチド性タンパク分解酵素阻害物質である
トラジロールは急性循環不全の治療薬（アプロチニン）
として現在に至るまで長く使用され、ほかにアンチトロ
ンビンIII（ＤＩＣ治療薬）、ウリナスタチン(膵炎なら
びに急性循環不全治療薬)、メシル酸ガベキセート（膵
炎ならびにＤＩＣ治療薬）等が極めて多数の医薬品とし
て製造されているのが現状である。さらに最近にはＨＩ
Ｖ治療薬ならびに癌の治療薬としてタンパク分解酵素阻
害物質が注目されていることはゆうまでもない。またタ
ンパク分解酵素阻害物質はタンパク分解酵素の製造行程
における自己消化防御、あるいはアフィニティー精製等
の目的でも工業的に有用であり、さらにはタンパク分解
酵素の特性解析等のための試薬としても不可欠な存在で
ある。

【０００５】タンパク分解酵素阻害物質は従来、生体物
質あるいは微生物生産物質からタンパク分解酵素の阻害
活性を指標として分離、精製されたものである。また一
部についてはそれらの構造の一部を改変したものも含
む。これらタンパク分解酵素阻害物質は多数の成書に紹
介されているが、たとえば医薬品として利用されている
タンパク分解酵素阻害物質で日本において販売が認可さ
れているものについては”日本医薬品集、医療薬編、日
本医薬情報センター編、１９９６年１０月”に全てが記
載されている。また微生物由来のものを含む各種のタン
パク分解酵素阻害物質については”生化学データブック
Ｉ、日本生化学会編、東京化学同人社”等に記載されて
いる。

【０００６】従来発見され、製造され、また利用されて
きたタンパク分解酵素は、それぞれ特長があるが、その
利用性から見たとき、原理的に可能なすべての利用目的
に合致する物質が入手可能となっているとはいい難い。
すなわち目的とするタンパク分解酵素に対して活性を有
する阻害物質が未だに発見されていなかったり、あるい
は発見されていてもその製造方法が確立していなかった
り、またさらに発見され、製造方法が確立していても、
たとえば生体に対して毒性がある等の要因のために利用
することができなかったりすることがしばしばある。と
くに医薬品としての使用を念頭に置くとき、効果的なタ
ンパク分解酵素阻害物質でありながら、その毒性あるい
は副作用のために使用できなかったケースは少なくな
い。

【０００７】一方、生体内にはα2-マクログロブリン、
ならびにそのファミリー物質であるプレグナンシーゾー
ンプロテイン(PZP)、α１-マクログロブリン等、天然の
タンパク分解酵素阻害活性を有するタンパク質がある。
これら一群のタンパク質は、タンパク分解酵素に対して
かなり廣い基質特異性を有し、生体内でタンパク分解酵
素の過剰な作用を抑制制御している。これらα2-マクロ
グロブリンファミリーのタンパク質は生体由来であるた
めに、外部から与えた場合に起きるかも知れない障害性
も極めて少ないものと推察される。

【０００８】ヒトのα２-マクログロブリン（ｈα２
Ｍ）を例にとって、そのタンパク分解酵素阻害の機構を
今少し詳述すれば以下の通りである。すなわちｈα２Ｍ
は分子量１８万の同じザフユニット４個よりなる分子量
約７２万の４量体糖タンパク質で、肝により合成され、
血液中に３mg/ml程度含有される。ｈα２Ｍは極めて多
種のプロテアーゼの活性を阻害する能力を有し、それら
にはプロテアーゼの全ての群、すなわちセリンプロテア
ーゼ、システインプロテアーゼ、金属プロテアーゼ、な
らびにアスパラギン酸プロテアーゼを含んでいる。ｈα
２Ｍのそれぞれのサブユニットにはｂａｉｔ ｒｅｇｉ
ｏｎ（餌領域）とよばれる各種のタンパク分解酵素に切
断されやすい配列を含んだペプチド領域と、別にペプチ
ド鎖の側鎖をチオールエステル結合で環状に結んだチオ
ールエステル結合部位がある。ここであるタンパク分解
酵素が餌領域のペプチドを切断すると、ｈα２Ｍの別の
領域にあるチオールエステル結合部位が自動的に切断さ
れ、４量体のｈα２Ｍがその立体構造を大きく変化させ
て、餌領域を切断したタンパク分解酵素を罠に取り込む
ように囲み、複合体を形成する。ｈα２Ｍはトリプシ
ン、キモトリプシン、トロンビン等もともと生体由来の
タンパク分解酵素を阻害するばかりでなく、微生物由来
のタンパク分解酵素である、サーモライシン、ズブチリ
シン、スタフィロコッカスＶ８、ストレプトミセストリ
プシン等も阻害し（Mortensen,S.B., et al, FEBS lett
ers, 135, 295-300(1981))、炎症時や感染時における生
体防御に大きな役割を負っていることが推察されている
（図１参照）。

【０００９】さて、このようにして形成された複合体に
はいままで分子内に隠されていたレセプター結合部位が
露出し、レセプター結合部位を露出した複合体は血流に
乗って肝に至り、肝細胞のレセプターに結合し、細胞内
に取り込まれてリソゾームで分解される。哺乳動物は勿
論、ｈα２Ｍに構造的にもまた機能的にも類似したタン
パク質は脊椎動物、無脊椎動物を含めて廣く分布し、ま
た個体のなかにも一種類でなく、類似タンパク質が複数
存在するのが普通である。たとえばヒトの妊娠時の血液
中に顕在するプレグナンシーゾーンプロテイン(PZP)は
構造的にもまた機能的にもｈα２Ｍと極めて類似してお
り、さらに補体Ｃ３，Ｃ４も餌領域とチオールエステル
結合を有する類似タンパク質である。

【００１０】α−２マクログロブリン、ならびにその類
似タンパク質はこのように生体内でタンパク分解酵素の
過剰な活性を抑制することを通じて極めて重要な働きを
しているものと考えられているが、しかしその阻害活性
はかならずしもオールマイティーなものでない。たとえ
ば外傷から侵入し、組織を浸潤する致死的な感染を引き
起こすClostridium histolyticumは結合組織を分解する
コラゲナーゼを分泌するが、α−２マクログロブリンの
餌領域ペプチドはこのタンパク分解酵素の基質特異性と
遙かにかけはなれたものであるために、分解は極めて遅
く、従ってこのコラゲナーゼの活性を殆ど阻害すること
ができない(Sottrup-Jensen,l., J. Biol. Chem., 264,
393-401(1989))。他にも基質特異性の高い多くのタン
パク分解酵素をα−２マクログロブリンは阻害できない
ことは容易に推察される。たとえばベイト領域の中心部
にはリジンやプロリンが存在しないために、これらのア
ミノ酸のＮ末あるいはＣ末側のペプチド結合を特異的に
切断するタンパク分解酵素はα−２マクログロブリンの
阻害を受けないことが推察される。実際、後述するよう
にAchromobactor由来のリジルエンドペプチダーゼはα
−２マクログロブリンによって阻害されない。

【００１１】このようにα２マクログロブリンならびに
その類似タンパク質がタンパク分解酵素阻害物質として
特長ある機能を有するにも関わらず、その基質特異性の
限界のために医薬利用等の利用性が現実性をもって論ぜ
られることなく、現在に至った。

【００１２】

【発明が解決しようとする課題】従って本発明は、目的
とするタンパク分解酵素の基質特異性に合わせて設計し
た餌領域を有し、当該タンパク分解酵素を阻害する活性
を有する新規なタンパク分解酵素阻害タンパク質を提供
することを目的とする。

【００１３】

【課題を解決するための手段】発明者らは、以上にある
ようなα２マクログロブリンならびにその類似タンパク
質のタンパク分解酵素阻害の基質特異性を技術的に解決
するために鋭意工夫を重ね、餌領域のペプチド配列を遺
伝子工学的に改変した変異体を作成、製造し、そのよう
な変異体がタンパク分解酵素阻害物質として異なった基
質特異性を示すことを発見して、本発明に到達した。即
ち、本発明は、特許請求の範囲の各請求項に記載の発明
からなる。

【００１４】α2-マクログロブリンまたは類似の（餌領
域とチオールエステル結合を有する）タンパク分解酵素
阻害物質に対し、その構成要素の一部である餌領域のペ
プチド構造を遺伝子工学的手法によって変更した変異体
を作成することにより、目的とするタンパク分解酵素に
対して阻害活性を有するタンパク分解酵素阻害活性を得
る。

【００１５】

【発明の実施の形態】本発明によるタンパク分解酵素阻
害物質は、たとえば以下のようにして合成される。

【００１６】．目的とする新規タンパク分解酵素の素
材とする原材料として、餌領域とチオールエステル結合
を有するタンパク分解酵素阻害物質（ProtoX）を選択す
る。ProtoXとしてはたとえばｈα２Ｍが選択できるが、
当業者であれば当然推察がつくような他の物質で行うこ
とも当然本発明に含まれる。ProtoXの多数についてすで
にcDNA配列は決定されているので、これらについては既
知の配列を利用してcDNAを分離すればよい(Kan. C-C.,
et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 82, 2282-2286(198
5))。

【００１７】．ProtoXのcDNAを単離し、その配列構造
を決定し、餌領域の配列を割り出す。餌領域とチオール
エステル結合を有するタンパク分解酵素の多数のものに
ついて、すでに餌領域の配列は決定されており、これら
については既知の配列を利用すればよい(Isaac, L and
Isenman, D.E., J. Biol. Chem., 267, 10062-10069(19
92))。

【００１８】．目的とするタンパク分解酵素の基質特
異性に合ったペプチド配列が餌領域内に実現するように
塩基配列を変更したｃＤＮＡを設計し、遺伝子工学的な
手法を用いて餌領域の塩基配列を変更したｃＤＮＡ（X
cDNA）を得る。

【００１９】．変更した塩基配列を有するｃＤＮＡを
組み込んだ組換え発現系を構築し、宿主細胞に組み込ん
で、転写、翻訳させ、変異型のタンパク分解酵素阻害物
質（Ｘ）を得る。

【００２０】上記のようにして得た新規タンパク分解酵
素阻害物質（X）は以下のように作用する。 餌領域
のペプチド配列は、目的とするタンパク分解酵素（Ｐ）
の基質となるように設計されているので、目的とするタ
ンパク分解酵素の作用を受けた場合に餌領域が開裂す
る。

【００２１】 餌領域が開裂したＸ（Ｘ’）は、チオ
ールエステル結合部位その他の部位が原タンパク分解酵
素阻害物質（ProtoX）と同様に構成されているので、チ
オールエステル結合が切断される（Ｘ”）。

【００２２】 チオールエステル結合が切断されたＸ
（すなわちＸ”）は、ProtoXがすると同様に目的とする
タンパク分解酵素（Ｐ）を取り囲むように複合体（たと
えばをPX"₄）を形成し、Ｐの活性を阻害する。

【００２３】 さらに複合体においては、ProtoXが形
成した複合体の場合と同様にレセプター結合部位が露出
する。

【００２４】 レセプター結合部位が露出した複合体
は、血流によって肝に運ばれ、肝細胞の受容体に結合し
て細胞内に取り込まれ、リソゾームにおいて分解され
る。

【００２５】

【実施例】以下に本発明の実施例を記載するが、本発明
はこれらの実施例に限定されない。

【００２６】実施例１ ヒトα２マクログロブリンｃＤ
ＮＡ（ｈα２ＭｃＤＮＡ）クローンの分離 ヒト肝癌由来培養細胞株Ｈｅｐ−Ｇ２(ATCC)よりｈα２
ＭｃＤＮＡクローンを分離した。すでにＨｅｐＧ２細胞
はヒトα２マクログロブリン（ｈα２Ｍ）を分泌してい
ることが知られており、またそのｃＤＮＡの配列も決定
されている(Kan, C-C., et al., Proc. Natl. Acad. Sc
i., 82, 2282-2286(1985), Boel, E., et al., Biochem
istry, 29, 4081-4087(1990))。そこで知られたｃＤＮ
Ａ配列の小部分を合成し、これらをプライマーとしてＨ
ｅｐ−Ｇ２細胞から得られたｍＲＮＡをＲＴ−ＰＣＲす
ることによってｈα２ＭｃＤＮＡの配列の大断片を得
た。これら大断片をプローブとして使用することによ
り、Ｈｅｐ−Ｇ２細胞由来ｍＲＮＡを鋳型にして作製し
たｃＤＮＡライブラリーからｈα２ＭｃＤＮＡをクロー
ニングした。得られた複数のクローンから完全長（約
４．６Ｋｂ）のものを再構成し、塩基配列を決定した。

【００２７】ここで使用したＤＮＡ断片の合成法、ＲＴ
−ＰＣＲ法、ｃＤＮＡライブラリーの作成法、塩基配列
の決定法、ならびにＰＣＲ法による完全長配列の選択に
ついては、常法に従って行った(Molecular Cloning, Ma
nitis, T., et al., Cold Spring harbor Laborator
y)。

【００２８】実施例２ 野生型ｈα２Ｍ生産組換ＣＨＯ
細胞の構築 持続的に野生型ｈα２ＭをＣＨＯ細胞に生産させるため
に、ｐｃＤＬｓＲα△−ｎｅｏ△１１発現ベクター(Tak
ebe, Y., et al., Mol. Cell. Biol., 8, 466-472(198
8), Noda, A., et al., Exp. Cell. Res., 211, 92-98
(1994))に野生型ｈα２ＭｃＤＮＡを導入した（ｐｃＤ
ＬｓＲα△−ｎｅｏ△１１／α２Ｍ）。このようにして
構築したｐｃＤＬｓＲα△−ｎｅｏ△１１／α２ＭのＤ
ＮＡを大量調製し、ＣＨＯ細胞へ燐酸カルシウム法によ
って遺伝子導入した。さらに遺伝子導入した細胞から野
生型ｈα２Ｍを生産する細胞クローンを分離した。ここ
でα２Ｍ生産はＥＩＡ法によって測定した。発現ベクタ
ーの構築法、プラスミドの増殖ならびにＤＮＡ分離、遺
伝子導入法、組換細胞クローンの分離法、ならびに生産
されるｈα２Ｍ量のＥＩＡ法による定量は常法に従って
行った。

【００２９】実施例３ 野生型ｈα２Ｍの組換生産 野生型ｈα２Ｍ組換ＣＨＯ細胞は１０％牛胎児血清を含
むEagleのＭＥＭ培地(非必須アミノ酸100μM添加、GIBC
O BRL社製)、150cm²のフラスコを用いて静置培養して増
殖させた。さらに細胞を1750cm²のローラーボトルに播
種し、血清添加培地で２日間ローラー培養した後、ＰＳ
Ｂで２回洗浄し、無血清培地（SFM-II、Gibco BRL社)
中でさらに２日間無血清培養した。このようにして4.8l
の無血清培養液を回収した。

【００３０】培養上清からの野生型ｈα２Ｍの精製は亜
鉛クロマトグラフィー法(ChelatingSepharose FF,ファ
ルマシア社製)、ゲル濾過クロマトグラフィー(Sepharos
e CL6B,ファルマシア社製)によって行った。即ち常法に
従い、培養上清のｐＨを塩酸で６．０に調製し、亜鉛ク
ロマトカラムに負荷した後、ｐＨ５．０の溶出液で溶出
させることによって精製した。精製したα２Ｍは約２５
ｍｇであった。精製した野生型組換α２Ｍを電気泳動
し、ニトロセルロース膜に転写した後、抗体によって染
色することにより、その均一性を確認し、またヒト血漿
より精製したｈα２Ｍならびにウシ血漿からのα２Ｍ
（ｂα２Ｍ）とを並列にさまざまな条件で電気泳動的に
比較し、ヒト血漿由来のｈα２Ｍと挙動をともにするこ
とを確認した。さらにＮ末端解析を行うことにより、ウ
シ型でなく、ヒト型であることを確認した。

【００３１】実施例４ ｈα２ＭｃＤＮＡの餌領域の変
更 変異型のα２Ｍを得るために、餌領域配列の変更を行っ
た。即ち、さきに野生型ｈα２ＭｃＤＮＡを導入したｐ
ｃＤＬｓＲα△−ｎｅｏ△１１／α２ＭからＫｐｎＩな
らびにＰｓｔＩによって餌領域を含むＤＮＡ断片を切り
出し、この断片をｐＵＣ１９にサブクローニングした。
断片を導入したｐＵＣ１９プラスミドＤＮＡ上でU.S.E.
Mutagenesis法によって餌領域にある６９６番目のアル
ギニンをリジンに変えるために塩基配列の２１９８番−
２２００番の５’−ＣＧＣ−３’を５’−ＡＡＡ−３’
へ変換した。変換が正しく行われたことを塩基配列によ
って確認し、再度ｐＵＣ１９プラスミドから断片を切り
出して、もとのｐｃＤＬｓＲα△−ｎｅｏ△１１ベクタ
ーの餌領域にもどし、再度塩基配列を確認して、プラス
ミドベクターＤＮＡの大量調製を行った。

【００３２】

【図１】

【００３３】実施例５ 変異型ｈα２Ｍ生産組換ＣＨＯ
細胞の樹立 変異型ｈα２Ｍ生産組換ＣＨＯ細胞の樹立は、野生型ｈ
α２Ｍ生産組換ＣＨＯ細胞の構築と同様にして行い変異
型ｈα２Ｍを安定に発現している細胞株（Ｋ６９６）を
得た。

【００３４】実施例６ 変異型ｈα２Ｍの組換生産 変異型ｈα２Ｍ組換ＣＨＯ細胞は野生型ｈα２Ｍ組換Ｃ
ＨＯ細胞と同様に行った。先ず、１０％牛胎児血清を含
む培地中で増殖させ、その後ローラーボトルに播種して
血清添加培地で２日間ローラー培養した後、ＰＳＢで２
回洗浄し、無血清培地で２日間培養して培養上清を得
た。無血清培養中での非特異的分解を避けるために、ペ
ーファブロック（メルク社）を添加し、５ιの無血清培
養上清を収穫した。

【００３５】培養上清からの変異型ｈα２Ｍの精製は野
生型ｈα２Ｍの場合と同様に亜鉛クロマトグラフィー法
(Chelating Sepharose FF,ファルマシア社製)、ゲル濾
過クロマトグラフィー(Sepharose CL6B,ファルマシア社
製)によって行った。精製したＫ６９６型のα２Ｍは約1
mgであった。

【００３６】実施例７ 野生型組換ｈα２Ｍ、Ｋ６９６
変異型組換ｈα２Ｍ、ならびにヒト血漿由来野生型ｈα
２Ｍの酵素阻害活性の測定 それぞれのタンパク質の酵素阻害活性はハイドアズール
を基質とした色素溶出法(Arakawa, H., et al., J. Bio
l. Chem., 264, 2350-2356(1989))よって、トリプシン
(ブタ膵臓由来、シグマ社製)ならびにAchromobactor ly
ticus由来リシルエンドペプチダーゼ(M-497-1、和光社
製)に対して行った（図２）。反応は酵素濃度（トリプ
シン0.2μg/1.25ml, リシルエンドペプチダーゼ0.28μg
/1.25ml）、PBS中、37℃で行い、色素溶出は波長575nm
で定量した。

【００３７】トリプシン阻害活性で見たとき、上記３種
のｈα２Ｍはいずれもｈα２Ｍ／プロテアーゼ比２以下
で完全な阻害を示した。この結果から、野生型組換ｈα
２Ｍ、Ｋ６９６変異型組換ｈα２Ｍ酵素ともトリプシン
に対して阻害活性を有することが確認された。この結果
はＫ６９６変異型組換ｈα２Ｍを含めて３種のｈα２Ｍ
ともその餌領域にトリプシン感受性の配列を有している
ことから容易に推察される推論を裏付けたものである。

【００３８】一方、リシルエンドペプチダーゼに対して
は野生型組換ｈα２ＭＫと６９６変異型組換ｈα２Ｍと
は全くことなった挙動を示した。即ち野生型組換ｈα２
Ｍはリシルエンドペプチダーゼを全く阻害しなかったの
に対し、６９６変異型組換ｈα２Ｍは、トリプシンに対
してよりは弱いがしかし顕著な阻害活性を示した。この
結果は、ｈα２Ｍのアミノ酸配列上６９６番目にある餌
領域のアルギニンをリジンに置換したことにより、この
変異型ｈα２Ｍの餌領域がリシルエンドペプチダーゼに
よって切断され、その結果チオールエステル領域が開裂
してｈα２Ｍの構造変換を来たし、結果としてリシルエ
ンドペプチダーゼがｈα２Ｍに捕捉されて、その酵素活
性が阻害されるという推論に証拠を与えたものである。

【００３９】

【図２】

【００４０】

【発明の効果】本発明にある新規タンパク分解酵素阻害
物質は、目的とするタンパク分解酵素の基質の配列をそ
の餌領域に導入することによって、目的とするタンパク
分解酵素を阻害するように自由に設計することができ、
従来適当な阻害剤がなかったタンパク分解酵素に対して
新たに阻害剤を提供することが可能となる。

【００４１】本発明にある新規タンパク分解酵素阻害物
質は、目的とする動物に由来する原材料を選択すること
により、その動物に投与した場合にも免疫的に排除され
たり、生体内で免疫的な異常反応を引き起こすことがな
く、医薬品として使用できると期待される。

【００４２】本発明にある新規タンパク分解酵素阻害物
質は、目的とするタンパク分解酵素と結合して複合体を
形成した後、生体内では肝臓に運ばれて分解され、生体
内に長期に残留することによる障害が起きないことが期
待される。

【００４３】本発明にある新規タンパク分解酵素阻害物
質は原材料として使用するタンパク分解酵素阻害物質が
阻害するタンパク分解酵素を切断したり失活させること
なく、単に複合体を形成するのみであるので、アフィニ
ティー精製等の方法によるタンパク分解酵素の精製に利
用することが期待される。

【００４４】

【図面の簡単な説明】

【図１】（Ａ）野生型ヒトα２マクログロブリン餌領域
の餌領域(Bait region)のアミノ酸配列を示す。縦線部
位は各種プロテアーゼ、すなわちＴ(トリプシン)，ＳＧ
Ｔ(ストレプトミセストリプシン)，ＰＡ(パパイン)，Ｅ
(エラスターゼ)，ＣＳ(キモシン)，ＣＴ(キモトリプシ
ン)，ＳＰ(スタフィロコッカスＶ８)，ＰＬ(プラスミ
ン)，ＴＨ(トロンビン)，ＴＬ(サーモライシン)，Ｓ(ズ
ブチリシ)、およびＳＧＢ(ストレプトミセスプロテアー
ゼＢ)の作用部位を示す。（Ｂ）変異型ヒトα２マクロ
グロブリン餌領域の餌領域(Bait region)のアミノ酸配
列を示す。

【図２】血漿由来ヒトα２マクログロブリン、野生型組
換ヒトα２マクログロブリン、および６９６Ｋ変異型ヒ
トα２マクログロブリンのトリプシンおよび、リジルエ
ンドペプチダーゼに対する阻害活性を示す図である。

【手続補正書】

【提出日】平成９年１０月７日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】発明の名称

【補正方法】変更

【補正内容】

【発明の名称】 タンパク分解酵素阻害剤およびその
製造法

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｎ 9/98 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ //(Ｃ１２Ｎ 9/50 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｎ 9/98 Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】タンパク分解酵素阻害タンパク質の餌領域
   (Bait region)のペプチド配列の一部を改変した新規な
   タンパク分解酵素阻害タンパク質。
2. 【請求項２】餌領域のペプチド配列が、α2-マクログロ
   ブリン、α1-マクログロブリン、あるいはプレグナンシ
   ーゾーンプロテイン（ＰＺＰ）由来である請求項１記載
   の新規なタンパク分解酵素阻害タンパク質。
3. 【請求項３】図１（Ｂ）のアミノ酸配列で示される餌領
   域を有する請求項１記載の新規なタンパク分解酵素阻害
   タンパク質。