JPH11344490A - 干渉の起こらない鉄の測定方法および試薬 - Google Patents
干渉の起こらない鉄の測定方法および試薬Info
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- JPH11344490A JPH11344490A JP11114118A JP11411899A JPH11344490A JP H11344490 A JPH11344490 A JP H11344490A JP 11114118 A JP11114118 A JP 11114118A JP 11411899 A JP11411899 A JP 11411899A JP H11344490 A JPH11344490 A JP H11344490A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 生物学的サンプル中の鉄を測定するための方
法および試薬を提供する。 【解決手段】 結合鉄が放出され、この放出された鉄を
Fe2+に還元し、着色剤溶液を添加して形成された着色錯
体を光度測定する方法および試薬において、水溶性EDTA
錯形成化合物、特にインジウムおよび／またはスカンジ
ウム塩をサンプルに加えることを特徴とする。
法および試薬を提供する。 【解決手段】 結合鉄が放出され、この放出された鉄を
Fe2+に還元し、着色剤溶液を添加して形成された着色錯
体を光度測定する方法および試薬において、水溶性EDTA
錯形成化合物、特にインジウムおよび／またはスカンジ
ウム塩をサンプルに加えることを特徴とする。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、生物学的サンプル
中、特に血清中の鉄を測定するための干渉の起こらない
（interference-free）測定方法に関する。この方法に
おいて、結合鉄が放出され、この放出された鉄をFe2+に
還元し、着色剤溶液を添加して形成された着色複合体を
光度測定する。また、本発明は、特にEDTAが多量に存在
する場合において、干渉の起こらない鉄測定を行うのに
適した試薬の組み合わせに関する。
中、特に血清中の鉄を測定するための干渉の起こらない
（interference-free）測定方法に関する。この方法に
おいて、結合鉄が放出され、この放出された鉄をFe2+に
還元し、着色剤溶液を添加して形成された着色複合体を
光度測定する。また、本発明は、特にEDTAが多量に存在
する場合において、干渉の起こらない鉄測定を行うのに
適した試薬の組み合わせに関する。
【０００２】
【従来の技術】鉄代謝障害、特に鉄欠乏症および鉄吸収
障害が、特に女性の間で蔓延している。したがって体液
中、特に血清中の鉄の検出は、医学分析において標準的
な測定項目の１つである。鉄は食事により供給され、腸
粘膜を介して吸収される。鉄は、三価の状態でトランス
フェリンに結合したあと、骨髄に運ばれて、主にヘモグ
ロビン中に取り込まれる。吸収される鉄分が少なすぎる
と、貧血症状が現れる。
障害が、特に女性の間で蔓延している。したがって体液
中、特に血清中の鉄の検出は、医学分析において標準的
な測定項目の１つである。鉄は食事により供給され、腸
粘膜を介して吸収される。鉄は、三価の状態でトランス
フェリンに結合したあと、骨髄に運ばれて、主にヘモグ
ロビン中に取り込まれる。吸収される鉄分が少なすぎる
と、貧血症状が現れる。
【０００３】血清中の鉄の測定は、臨床診断法で最も頻
繁に行われる微量元素分析のうちの１つである。トラン
スフェリンからの鉄の放出に関し、２つの異なる基本的
な測定検査が知られている。このうち一方の検査では、
弱酸性pHで、界面活性剤混合物（例えばEP0130537）、
塩化グアニジウム（例えばEP0343592）または例えば尿
素含有変性剤（例えばDE4401754）を加えることにより
鉄を分離することができる。また、もう一方の試験で
は、強酸性（特にpH値約2.5以下）の媒体中でトランス
フェリンから鉄を分離することができる（Clin. Chem.
vol. 26 (1980), 327-331）。
繁に行われる微量元素分析のうちの１つである。トラン
スフェリンからの鉄の放出に関し、２つの異なる基本的
な測定検査が知られている。このうち一方の検査では、
弱酸性pHで、界面活性剤混合物（例えばEP0130537）、
塩化グアニジウム（例えばEP0343592）または例えば尿
素含有変性剤（例えばDE4401754）を加えることにより
鉄を分離することができる。また、もう一方の試験で
は、強酸性（特にpH値約2.5以下）の媒体中でトランス
フェリンから鉄を分離することができる（Clin. Chem.
vol. 26 (1980), 327-331）。
【０００４】しかし、前記試験方法の不利益は、（例え
ば対応する前処理を行った結果）しばしば生物学的サン
プル中に存在するEDTAの存在により、干渉が起こること
である。この理由は、EDTAが鉄と複合体を形成すること
ができること、したがってこのようにして結合した鉄は
着色複合体の形成には使用されないことである。このこ
とは、特にEDTA血漿をサンプル材料として使用した場合
に偽陰性鉄分値を導き出す結果につながり得る。さら
に、自動分析器でこのような測定が行われた場合、ピペ
ッティング装置や攪拌装置が不可欠であるためにまたは
反応容器が十分洗われていないために、他の試験液から
EDTAがもち込まれる危険性がある。これにより、色信号
が減少し、その結果鉄の回収が減少する。
ば対応する前処理を行った結果）しばしば生物学的サン
プル中に存在するEDTAの存在により、干渉が起こること
である。この理由は、EDTAが鉄と複合体を形成すること
ができること、したがってこのようにして結合した鉄は
着色複合体の形成には使用されないことである。このこ
とは、特にEDTA血漿をサンプル材料として使用した場合
に偽陰性鉄分値を導き出す結果につながり得る。さら
に、自動分析器でこのような測定が行われた場合、ピペ
ッティング装置や攪拌装置が不可欠であるためにまたは
反応容器が十分洗われていないために、他の試験液から
EDTAがもち込まれる危険性がある。これにより、色信号
が減少し、その結果鉄の回収が減少する。
【０００５】この不利益を排除するために、好適な変性
剤により鉄を放出する様々な試験体（test variants）
に亜鉛（II）塩を加える。EDTAの混入はZn2+イオンで遮
蔽する。このZn2+イオンはEDTAとFe2+イオンとの反応に
よる干渉を回避する。
剤により鉄を放出する様々な試験体（test variants）
に亜鉛（II）塩を加える。EDTAの混入はZn2+イオンで遮
蔽する。このZn2+イオンはEDTAとFe2+イオンとの反応に
よる干渉を回避する。
【０００６】これに対し、亜鉛（II）塩の添加によって
は、強酸性媒体中で鉄が放出される様々な試験体におい
てEDTAにより生じる干渉は排除されない。さらに、高濃
度の塩（約4mol/l）および/または高濃度の界面活性剤
（約7％）の存在下において、試薬瓶からの該試薬溶液
の“漏れ”が観察されることが判明した。これは、例え
ばバーコードラベルの破損や自動分析器中の金属部品の
腐食につながる。
は、強酸性媒体中で鉄が放出される様々な試験体におい
てEDTAにより生じる干渉は排除されない。さらに、高濃
度の塩（約4mol/l）および/または高濃度の界面活性剤
（約7％）の存在下において、試薬瓶からの該試薬溶液
の“漏れ”が観察されることが判明した。これは、例え
ばバーコードラベルの破損や自動分析器中の金属部品の
腐食につながる。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、強酸性pH値および/または高い塩もしくは界面活性
剤濃度を有する溶液中で鉄を放出させるのに適した、生
物学的サンプル材料中の鉄の測定方法および試薬を提供
することであり、本発明では、EDTAの存在下において本
質的に干渉は生じず、EDTAによって生じる鉄の回収の減
少が避けられる。
は、強酸性pH値および/または高い塩もしくは界面活性
剤濃度を有する溶液中で鉄を放出させるのに適した、生
物学的サンプル材料中の鉄の測定方法および試薬を提供
することであり、本発明では、EDTAの存在下において本
質的に干渉は生じず、EDTAによって生じる鉄の回収の減
少が避けられる。
【０００８】
【課題を解決するための手段】上記目的は、結合鉄が放
出され、この放出された鉄をFe2+に還元し、着色剤溶液
を添加して形成された着色錯体を光度測定することから
なる、生物学的サンプル中の鉄の測定方法によって達成
される。該方法において、該サンプルを、元素周期表の
第三主族および亜族（IIIa+b）の金属陽イオン、（たと
えばスカンジウム、インジウム、ランタニウム、または
ガリウムなど）からなる水溶性塩に接触させる。本発明
によれば、インジウムおよび／またはスカンジウム塩が
好ましい。本発明に従って添加する該塩の対イオンは、
水溶性塩が形成されるのであれば制限はない。特に二価
または三価の陽イオンおよび以下の酸性残基が好適であ
ることが判明した：ハロゲン化物、リン酸、硝酸、亜硫
酸、および硫酸（特に塩化物および硫酸が好ましい）。
出され、この放出された鉄をFe2+に還元し、着色剤溶液
を添加して形成された着色錯体を光度測定することから
なる、生物学的サンプル中の鉄の測定方法によって達成
される。該方法において、該サンプルを、元素周期表の
第三主族および亜族（IIIa+b）の金属陽イオン、（たと
えばスカンジウム、インジウム、ランタニウム、または
ガリウムなど）からなる水溶性塩に接触させる。本発明
によれば、インジウムおよび／またはスカンジウム塩が
好ましい。本発明に従って添加する該塩の対イオンは、
水溶性塩が形成されるのであれば制限はない。特に二価
または三価の陽イオンおよび以下の酸性残基が好適であ
ることが判明した：ハロゲン化物、リン酸、硝酸、亜硫
酸、および硫酸（特に塩化物および硫酸が好ましい）。
【０００９】試薬溶液中における第三主族もしくは亜族
の本発明の塩濃度（試験中の最終濃度）は、少なくとも
約0.1mmol/lであり、約0.1〜50mmol/lが好ましく、約1
〜20mmol/lが特に好ましい。
の本発明の塩濃度（試験中の最終濃度）は、少なくとも
約0.1mmol/lであり、約0.1〜50mmol/lが好ましく、約1
〜20mmol/lが特に好ましい。
【００１０】本発明の方法において、鉄放出物質を添加
しない場合、結合鉄は原則として、好適な界面活性剤混
合物（例えばEP0130537、DE2724757またはDE3729502）
や塩化グアニジウムなどの変性剤（例えばEP0343592）
を一般にpH値3〜6または強酸性pH値で加えたりするな
ど、当業者に知られた方法により放出することができ
る。本発明に従って、強酸性媒体中で鉄を分離する場
合、pH0〜3が有利であることが判明した。
しない場合、結合鉄は原則として、好適な界面活性剤混
合物（例えばEP0130537、DE2724757またはDE3729502）
や塩化グアニジウムなどの変性剤（例えばEP0343592）
を一般にpH値3〜6または強酸性pH値で加えたりするな
ど、当業者に知られた方法により放出することができ
る。本発明に従って、強酸性媒体中で鉄を分離する場
合、pH0〜3が有利であることが判明した。
【００１１】本発明の方法を実施するために、サンプル
または試薬混合物を好ましくは弱〜強酸性、特に好まし
くはpH0〜pH6の範囲に維持する。pK値が2.5〜6であって
鉄と錯形成しないまたはほとんどしない化合物が、緩衝
物質として好適である。例えば酢酸、クエン酸、リン酸
または琥珀酸緩衝液が適している。鉄を放出するための
他の好適な物質は、まず酸性pH値（特にこのましくはpH
3〜pH6）に調節し、続いて鉄を検出するために選択され
た着色系を有する最適の着色レベルを与えるpH値に再緩
衝するものである。このために適したpH値は、当業者に
公知である（例えば、Fielding、Methods in Hamatolog
y 1(Iron), 15-49(1980)を参照のこと）。結合鉄を強酸
性媒体（特にpH0〜3）中で放出させる場合、EDTA-錯形
成物質を加えることが特に好ましい。好適なEDTA-錯形
成物質は、特に、周期表のIIIa、IIIb、IVa、VIII族お
よび／またはスカンジウム、インジウム、ジルコニウ
ム、ニッケル、イッテルビウムおよびルテチウムなどの
ランタニドからなる二価または三価の陽イオンからなる
塩である。このうち、スカンジウムおよび／またはイン
ジウムが好ましい。
または試薬混合物を好ましくは弱〜強酸性、特に好まし
くはpH0〜pH6の範囲に維持する。pK値が2.5〜6であって
鉄と錯形成しないまたはほとんどしない化合物が、緩衝
物質として好適である。例えば酢酸、クエン酸、リン酸
または琥珀酸緩衝液が適している。鉄を放出するための
他の好適な物質は、まず酸性pH値（特にこのましくはpH
3〜pH6）に調節し、続いて鉄を検出するために選択され
た着色系を有する最適の着色レベルを与えるpH値に再緩
衝するものである。このために適したpH値は、当業者に
公知である（例えば、Fielding、Methods in Hamatolog
y 1(Iron), 15-49(1980)を参照のこと）。結合鉄を強酸
性媒体（特にpH0〜3）中で放出させる場合、EDTA-錯形
成物質を加えることが特に好ましい。好適なEDTA-錯形
成物質は、特に、周期表のIIIa、IIIb、IVa、VIII族お
よび／またはスカンジウム、インジウム、ジルコニウ
ム、ニッケル、イッテルビウムおよびルテチウムなどの
ランタニドからなる二価または三価の陽イオンからなる
塩である。このうち、スカンジウムおよび／またはイン
ジウムが好ましい。
【００１２】緩衝物質として、好ましくは酢酸またはク
エン酸緩衝液を使用する。該緩衝液は、好ましくは20〜
500mmol/l、特に好ましくは50〜250mmol/lの濃度で使用
される。これは特に、緩衝液が約200mmol/lのクエン酸
を含む場合に好ましい。本発明の鉄試験の第一溶液中
に、この緩衝物質を含むことができる。この第一溶液
は、さらに変性剤および任意で（すなわち必要に応じ
て）脂肪アルコールポリグリコールエーテルを含むこと
ができる。さらに、本発明の鉄試験の他の溶液（単数ま
たは複数）を緩衝することもでき、安定化のためおよび
／または望ましくない反応を排除または低減させるため
の更なる補助物質を加えることもできる。したがって、
例えば脂肪アルコールポリグリコールエーテルまたはア
ルキルポリエチレングリコールエーテル（DE4401754）
を加えることにより、脂血症の生物学的サンプルによる
干渉を回避することができる。本発明の方法の更なる有
利な実施の態様は、チオ尿素（特に好ましくは10〜200m
M）を試薬に加える場合である。これにより、特に銅の
干渉を排除することができる。
エン酸緩衝液を使用する。該緩衝液は、好ましくは20〜
500mmol/l、特に好ましくは50〜250mmol/lの濃度で使用
される。これは特に、緩衝液が約200mmol/lのクエン酸
を含む場合に好ましい。本発明の鉄試験の第一溶液中
に、この緩衝物質を含むことができる。この第一溶液
は、さらに変性剤および任意で（すなわち必要に応じ
て）脂肪アルコールポリグリコールエーテルを含むこと
ができる。さらに、本発明の鉄試験の他の溶液（単数ま
たは複数）を緩衝することもでき、安定化のためおよび
／または望ましくない反応を排除または低減させるため
の更なる補助物質を加えることもできる。したがって、
例えば脂肪アルコールポリグリコールエーテルまたはア
ルキルポリエチレングリコールエーテル（DE4401754）
を加えることにより、脂血症の生物学的サンプルによる
干渉を回避することができる。本発明の方法の更なる有
利な実施の態様は、チオ尿素（特に好ましくは10〜200m
M）を試薬に加える場合である。これにより、特に銅の
干渉を排除することができる。
【００１３】鉄を測定するために、還元剤（例えばアス
コルビン酸、亜ジチオン酸またはヒドロキシルアミンな
ど）を公知方法によりサンプル溶液に加え、三価の形態
で存在する放出鉄を二価の形態に還元する。該第一溶液
および第二溶液（第二溶液も鉄を検出するための好適な
着色系を含む）に、任意で使用される変性剤とともに還
元剤を加えることができる。しかし、還元剤は、好まし
くは第二溶液に加えられる。さらに、試薬が還元剤を安
定化させる物質、例えば好適な保存料（例えばGermall
II）などを含むことが好ましい。
コルビン酸、亜ジチオン酸またはヒドロキシルアミンな
ど）を公知方法によりサンプル溶液に加え、三価の形態
で存在する放出鉄を二価の形態に還元する。該第一溶液
および第二溶液（第二溶液も鉄を検出するための好適な
着色系を含む）に、任意で使用される変性剤とともに還
元剤を加えることができる。しかし、還元剤は、好まし
くは第二溶液に加えられる。さらに、試薬が還元剤を安
定化させる物質、例えば好適な保存料（例えばGermall
II）などを含むことが好ましい。
【００１４】鉄を検出するための着色系は、例えばEP02
28060号、Clin. Biochem. 14(1981), 311-315およびCli
n. Chem. 23(1979), 234-240に記載されている。測光評
価することができる鉄含有染料を生成するフェロイン型
の錯化剤が特に適している。好適な物質は、バソフェナ
ントロリンおよびフェロジン（Ferrozine）(3'(2'-ピリ
ジル)-5,6-ジフェニル-1,2,4-トリアジン-スルホン酸ジ
ナトリウム塩または3'(2'-ピリジル)-5,6-ビス（4-フェ
ニル-スルホン酸）-1,2,4-トリアジンモノナトリウム
塩)である。この方法において、染料の形成は、サンプ
ル中の鉄の含有量に比例し、公知方法により測光評価す
ることができる。
28060号、Clin. Biochem. 14(1981), 311-315およびCli
n. Chem. 23(1979), 234-240に記載されている。測光評
価することができる鉄含有染料を生成するフェロイン型
の錯化剤が特に適している。好適な物質は、バソフェナ
ントロリンおよびフェロジン（Ferrozine）(3'(2'-ピリ
ジル)-5,6-ジフェニル-1,2,4-トリアジン-スルホン酸ジ
ナトリウム塩または3'(2'-ピリジル)-5,6-ビス（4-フェ
ニル-スルホン酸）-1,2,4-トリアジンモノナトリウム
塩)である。この方法において、染料の形成は、サンプ
ル中の鉄の含有量に比例し、公知方法により測光評価す
ることができる。
【００１５】本発明は、鉄の光度測定における、そして
特に強酸性試薬溶液中における、EDTAによる干渉を回避
することに初めて成功した。
特に強酸性試薬溶液中における、EDTAによる干渉を回避
することに初めて成功した。
【００１６】従って、本発明の更なる主題は、生物学的
サンプル中の鉄の光度測定においてEDTAが存在すること
により生じる干渉を防ぐための、水溶性インジウムおよ
び／またはスカンジウム塩の使用である。
サンプル中の鉄の光度測定においてEDTAが存在すること
により生じる干渉を防ぐための、水溶性インジウムおよ
び／またはスカンジウム塩の使用である。
【００１７】EDTAの干渉を回避する試薬の有効性を、サ
ンプル／試薬の比率1：5〜1：25、好ましくは1：10〜
1：15で測光的に調べることができる。鉄の回収は約10
％偏差のみで達成可能である。測定は通常、ブランクと
しての試薬溶液に対して光路1cmのキュベットを用い
て、温度約37℃、波長約570-580nmで行われる。
ンプル／試薬の比率1：5〜1：25、好ましくは1：10〜
1：15で測光的に調べることができる。鉄の回収は約10
％偏差のみで達成可能である。測定は通常、ブランクと
しての試薬溶液に対して光路1cmのキュベットを用い
て、温度約37℃、波長約570-580nmで行われる。
【００１８】本発明のさらなる主題は、生物学的サンプ
ル中の鉄を測定するための試薬の組み合わせであって、
結合鉄を放出することができ且つ第III主族および/また
は亜族、好ましくはインジウムおよび/またはスカンジ
ウム塩の金属陽イオンからなる少なくとも0.1mmol/lの
水溶性塩を含む第一試薬、および第一試薬から分離され
た、0.5〜50mmol/l染料を含む第二試薬により特徴付け
られ、これらの試薬は、水溶液もしくは水溶液の調製に
適した乾燥混合物の形で存在する。これらの試薬は２つ
ともまたは第一試薬のみが、さらに20〜500mmol/lの干
渉物質を含むことができる。
ル中の鉄を測定するための試薬の組み合わせであって、
結合鉄を放出することができ且つ第III主族および/また
は亜族、好ましくはインジウムおよび/またはスカンジ
ウム塩の金属陽イオンからなる少なくとも0.1mmol/lの
水溶性塩を含む第一試薬、および第一試薬から分離され
た、0.5〜50mmol/l染料を含む第二試薬により特徴付け
られ、これらの試薬は、水溶液もしくは水溶液の調製に
適した乾燥混合物の形で存在する。これらの試薬は２つ
ともまたは第一試薬のみが、さらに20〜500mmol/lの干
渉物質を含むことができる。
【００１９】特に、第一試薬は、さらに補助物質を含む
ことができる。例えば脂血性干渉を避けるために好適な
界面活性剤、好ましくは約1％〜10％（w/v）アルキルポ
リエチレングリコールエーテル（例えばGenapol X-80：
イソトリデシルポリ（エチレングリコールエーテル）n,
n=8）、または、銅による干渉を避ける場合には10〜20
0mMチオ尿素が好ましい。
ことができる。例えば脂血性干渉を避けるために好適な
界面活性剤、好ましくは約1％〜10％（w/v）アルキルポ
リエチレングリコールエーテル（例えばGenapol X-80：
イソトリデシルポリ（エチレングリコールエーテル）n,
n=8）、または、銅による干渉を避ける場合には10〜20
0mMチオ尿素が好ましい。
【００２０】第二試薬はさらに、例えばアスコルビン
酸、亜ジチオン酸またはヒドロキシルアミンなどの還元
剤（濃度20〜200mmol/l）を含むことができる。第二試
薬は、任意で、還元剤を安定化する物質または混合物質
（たとえば市販されている物質Germall II, Germall 11
5, Oxaban A または Oxaban E：濃度0.5〜6.0g/l、好ま
しくは1〜3g/l）を含むことができる。さらに、液体試
薬を使用する直前まで還元剤を加えないことも可能であ
る。
酸、亜ジチオン酸またはヒドロキシルアミンなどの還元
剤（濃度20〜200mmol/l）を含むことができる。第二試
薬は、任意で、還元剤を安定化する物質または混合物質
（たとえば市販されている物質Germall II, Germall 11
5, Oxaban A または Oxaban E：濃度0.5〜6.0g/l、好ま
しくは1〜3g/l）を含むことができる。さらに、液体試
薬を使用する直前まで還元剤を加えないことも可能であ
る。
【００２１】これら２つの試薬は、水溶液の形態で、ま
たは水溶液の調製に適した乾燥混合物（凍結乾燥体（ly
ophilisate））として存在することができる。
たは水溶液の調製に適した乾燥混合物（凍結乾燥体（ly
ophilisate））として存在することができる。
【００２２】試薬の組み合わせはさらに、驚くほど高い
安定性によって特徴付けられる。42℃で24時間、または
35℃で3週間保存したあと（2〜8℃で実時間18ヶ月のス
トレスモデルに相当する）でも、該試薬は、品質や活性
を損なうことなく干渉を起こさない鉄測定で使用するこ
とができる。
安定性によって特徴付けられる。42℃で24時間、または
35℃で3週間保存したあと（2〜8℃で実時間18ヶ月のス
トレスモデルに相当する）でも、該試薬は、品質や活性
を損なうことなく干渉を起こさない鉄測定で使用するこ
とができる。
【００２３】
【発明の実施の形態】本発明について、以下の実施例に
よりさらに説明する。
よりさらに説明する。
【００２４】
【実施例】実施例１ 血清中の鉄を測定するために、以下の試薬を使用する。 （試薬１） 200mmol/l クエン酸 100mmol/l チオ尿素 7％（w/v）アルキルポリエチレングリコールエーテル 10mmol/l塩化インジウム（III） （試薬２） 150mmol/l アスコルビン酸ナトリウム 6mmol/l 3'(2'-ピリジイル)-5,6-ビス（4-フェニルスル
ホン酸）-1,2,3-トリアジンモノナトリウム塩
ホン酸）-1,2,3-トリアジンモノナトリウム塩
【００２５】測定温度37℃で、Hitachi717自動分析器、
Boehringer Mannheim GmbHを用いて測定を行った。この
測定は、基準波長700nmに対して波長570nmで行った。測
定波長と基準波長の差を評価した。
Boehringer Mannheim GmbHを用いて測定を行った。この
測定は、基準波長700nmに対して波長570nmで行った。測
定波長と基準波長の差を評価した。
【００２６】血清サンプル（20μl）および試薬１（250
μl）をキュベットの中にピペッティングし、混合した
あと37℃でインキュベートした。5分後、第一吸光度を
測定した。次に、試薬2（50μl）をピペットにより加
え、混合し、さらに5分間インキュベートしたあと、第
二吸光度を測定した。これら２つの吸光度値の差を測定
することにより、評価を行った。
μl）をキュベットの中にピペッティングし、混合した
あと37℃でインキュベートした。5分後、第一吸光度を
測定した。次に、試薬2（50μl）をピペットにより加
え、混合し、さらに5分間インキュベートしたあと、第
二吸光度を測定した。これら２つの吸光度値の差を測定
することにより、評価を行った。
【００２７】サンプルとして0.9％食塩水を用いたブラ
ンクと、所定の鉄含有量を有する較正物質を同様に分析
した。これら２つのサンプルから一次較正曲線を確立
し、つぎにこれから既知のサンプルについてのものを読
み取った。
ンクと、所定の鉄含有量を有する較正物質を同様に分析
した。これら２つのサンプルから一次較正曲線を確立
し、つぎにこれから既知のサンプルについてのものを読
み取った。
【００２８】結果 EDTA-K3（3mg/ml：EDTA血漿の典型的な濃度）をヒト血
清に加え、サンプルとして使用した。EDTA- K3非含有
（unspiked）ヒト血清プールを基準値（または参照値）
として測定し、このEDTA- K3非含有サンプルに対するED
TA- K3含有（spiked）サンプルの回収率を計算した。
清に加え、サンプルとして使用した。EDTA- K3非含有
（unspiked）ヒト血清プールを基準値（または参照値）
として測定し、このEDTA- K3非含有サンプルに対するED
TA- K3含有（spiked）サンプルの回収率を計算した。
【００２９】
【表１】
【図１】 0〜10mg/ml EDTA三カリウム塩の存在下にお
ける鉄の回収率（％）。サンプルはヒト血清プール約77
μg/dl鉄。以下の添加物：10mM硫酸インジウム、10mM硫
酸スカンジウム、20mM硫酸ニッケル、10mM硫酸イッテル
ビウム、10mM硫酸ジルコニウム、10mM硫酸ルテチウム。
他の曲線は、添加物または無効添加物なし。
ける鉄の回収率（％）。サンプルはヒト血清プール約77
μg/dl鉄。以下の添加物：10mM硫酸インジウム、10mM硫
酸スカンジウム、20mM硫酸ニッケル、10mM硫酸イッテル
ビウム、10mM硫酸ジルコニウム、10mM硫酸ルテチウム。
他の曲線は、添加物または無効添加物なし。
Claims (11)
- 【請求項１】 生物学的サンプル中の鉄を測定するため
の方法であって、結合鉄が放出され、放出された鉄をFe
2+に還元し、着色剤溶液を加えて形成された着色錯体を
光度測定する、ここで第三主族および／または亜族から
の金属陽イオンからなる水溶性の塩を前記サンプルに加
える、鉄測定方法。 - 【請求項２】 前記金属塩の濃度が0.1〜50mmol/lであ
る、請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 インジウムおよび／またはスカンジウム
塩が加えられる、請求項１または２に記載の方法。 - 【請求項４】 安定化のためまたは望ましくない反応を
回避または低減するために補助物質を加える、請求項１
〜３のいずれかに記載の方法。 - 【請求項５】 試験溶液のpH値が0〜3の間である、請求
項１〜４のいずれかに記載の方法。 - 【請求項６】 サンプル中の鉄の光度測定における、ED
TAが存在することにより生じる干渉を回避するための第
三主族および／または亜族の金属陽イオンからなる水溶
性塩の使用。 - 【請求項７】 生物学的サンプル中の鉄を測定するため
の試薬の組み合わせであって、結合鉄を放出することが
でき且つ第三主族および／または亜族の金属陽イオンか
らなる水溶性塩約0.1mmol/l〜50mmol/lを含む第一試薬
と、第一試薬から分離された、染料約0.5〜50mmol/lを
含む第二試薬とにより特徴付けられ、これらの試薬が水
溶液または水溶液を調製するのに適した乾燥混合物の形
態で存在する、試薬の組み合わせ。 - 【請求項８】 前記第一試薬が約1％〜10％（w/v）のア
ルキルポリエチレングリコールエーテルを含む、請求項
７に記載の試薬の組み合わせ。 - 【請求項９】 前記第二試薬が約20〜200mmol/lの還元
剤および任意で前記還元剤を安定化する物質を含む、請
求項７または８に記載の試薬の組み合わせ。 - 【請求項１０】 前記第一試薬あるいは前記第一試薬と
前記第二試薬がpH値0〜3を有する、請求項７〜９のいず
れかに記載の試薬の組み合わせ。 - 【請求項１１】 生物学的サンプル中の鉄を測定するた
めの方法であって、結合鉄が放出され、この放出された
前記鉄をFe2+に還元し、着色剤溶液を加えて形成された
着色錯体を光度測定する、ここで前記結合鉄はpH値3未
満で放出され、および水溶性EDTA錯形成化合物が添加さ
れる、鉄測定方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19817963A DE19817963A1 (de) | 1998-04-22 | 1998-04-22 | Verfahren und Reagenz zur störungsfreien Bestimmung von Eisen |
| DE19817963:4 | 1998-04-22 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11344490A true JPH11344490A (ja) | 1999-12-14 |
Family
ID=7865437
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11114118A Pending JPH11344490A (ja) | 1998-04-22 | 1999-04-21 | 干渉の起こらない鉄の測定方法および試薬 |
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|---|---|
| US (1) | US6274382B1 (ja) |
| EP (1) | EP0952453B1 (ja) |
| JP (1) | JPH11344490A (ja) |
| AT (1) | ATE226730T1 (ja) |
| CA (1) | CA2269403A1 (ja) |
| DE (2) | DE19817963A1 (ja) |
| ES (1) | ES2186274T3 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008070188A (ja) * | 2006-09-13 | 2008-03-27 | Miura Co Ltd | 鉄の定量方法 |
| JP2008070121A (ja) * | 2006-09-12 | 2008-03-27 | Miura Co Ltd | 鉄の定量方法 |
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| WO2006121027A1 (ja) * | 2005-05-12 | 2006-11-16 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | 鉄濃度測定法 |
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| CN104641232A (zh) * | 2012-04-24 | 2015-05-20 | 阿克森斯公司 | 用于表征和/或测定样品的方法 |
| WO2018130476A1 (en) * | 2017-01-11 | 2018-07-19 | Akzo Nobel Chemicals International B.V. | Method for determining iron |
| CN112714870A (zh) * | 2018-11-08 | 2021-04-27 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 检测血液样本中的铁含量的方法及试剂盒 |
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| US3925020A (en) * | 1973-03-05 | 1975-12-09 | Mallinckrodt Inc | Method for determining the total iron-binding capacity of blood serum |
| IT1100475B (it) * | 1978-11-08 | 1985-09-28 | R C O Ricerche Di Chimica Clin | Metodo e composizioni per la determinazione diretta del ferro mel stero ematico |
| JPS6069557A (ja) * | 1983-09-26 | 1985-04-20 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 不飽和鉄結合能の測定方法 |
| DE3729502A1 (de) * | 1987-09-03 | 1989-03-23 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur bestimmung von eisen |
| DE3817907A1 (de) * | 1988-05-26 | 1989-11-30 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur bestimmung von eisen |
| US5219760A (en) * | 1988-05-26 | 1993-06-15 | Boehringer Mannheim Gmbh | Process for the determination of iron |
| US5925570A (en) * | 1991-12-25 | 1999-07-20 | Iatron Laboratories, Inc. | Method of measuring metals in samples of living body |
| DE4401754A1 (de) * | 1994-01-21 | 1995-07-27 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und Reagenz zur Bestimmung von Eisen |
-
1998
- 1998-04-22 DE DE19817963A patent/DE19817963A1/de not_active Withdrawn
-
1999
- 1999-04-16 AT AT99107620T patent/ATE226730T1/de not_active IP Right Cessation
- 1999-04-16 EP EP99107620A patent/EP0952453B1/de not_active Revoked
- 1999-04-16 DE DE59903142T patent/DE59903142D1/de not_active Revoked
- 1999-04-16 ES ES99107620T patent/ES2186274T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-04-20 CA CA002269403A patent/CA2269403A1/en not_active Abandoned
- 1999-04-21 JP JP11114118A patent/JPH11344490A/ja active Pending
- 1999-04-22 US US09/296,920 patent/US6274382B1/en not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008070121A (ja) * | 2006-09-12 | 2008-03-27 | Miura Co Ltd | 鉄の定量方法 |
| JP2008070188A (ja) * | 2006-09-13 | 2008-03-27 | Miura Co Ltd | 鉄の定量方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE59903142D1 (de) | 2002-11-28 |
| US6274382B1 (en) | 2001-08-14 |
| EP0952453B1 (de) | 2002-10-23 |
| EP0952453A1 (de) | 1999-10-27 |
| ATE226730T1 (de) | 2002-11-15 |
| CA2269403A1 (en) | 1999-10-22 |
| DE19817963A1 (de) | 1999-10-28 |
| ES2186274T3 (es) | 2003-05-01 |
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