JPH1135595A - アンチセンスオリゴヌクレオチド及びそれを用いた制癌剤 - Google Patents

アンチセンスオリゴヌクレオチド及びそれを用いた制癌剤

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JPH1135595A
JPH1135595A JP6324006A JP32400694A JPH1135595A JP H1135595 A JPH1135595 A JP H1135595A JP 6324006 A JP6324006 A JP 6324006A JP 32400694 A JP32400694 A JP 32400694A JP H1135595 A JPH1135595 A JP H1135595A
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正彦 土屋
G Gaiser Timothy
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Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】制癌作用を高めたプロテインキナーゼＡ−ＲＩ
αに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供す
る。 【構成】配列番号１に示すヒトプロテインキナーゼＡ−
ＲＩα遺伝子のコード鎖の一部の塩基配列に実質的に相
補的な塩基配列、またはこれらの遺伝子の非コード鎖の
一部の塩基配列に実質的に相補的な塩基配列を有し、一
般式（Ｉ）で表される構造を有するオリゴヌクレオチ
ド、ならびに当該オリゴヌクレオチドよりなる制癌剤。 （一般式（Ｉ）中、ｎは整数を表し、Ｒは水素原子又は
水酸基を表し、Ｂは核酸塩基を表す。）

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ヒトプロテインキナー
ゼＡ、特にヒトプロテインキナーゼＡ−ＲＩαに対する
アンチセンスオリゴヌクレオチド及びこのアンチセンス
オリゴヌクレオチドからなる制癌剤並びにこの制癌剤を
含有する医薬組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】癌は昔より不治の病として知られている
が、それは現在に至っても大きく変化していない。それ
は癌細胞が生物体自身に由来する、いわば反乱分子であ
り、基本的な生理機構は正常細胞と大して違いがないた
め、抗癌剤等で癌細胞を死滅させようとすれば、正常細
胞をも傷つけてしまい、副作用が発現されるためであ
る。かかる状況を鑑みて、選択的に癌のみを攻撃し治療
する方法が検討されてきた。例えば、癌細胞特有の抗原
に対するモノクロナール抗体あるいはリポソーム等の担
体を利用し、これらに薬剤を担持させる方法が考え出さ
れたが、これらには網内系による捕捉と分解の問題や、
モノクローナル抗体あるいは担体と薬剤との結合力の問
題や、リリースの問題があり、充分な効果を発揮できな
かった。
【０００３】１９８０年代前半より各種の遺伝子操作技
術が進歩し、癌治療の分野に応用されるようになってき
た。これらの内、癌の生理・増殖に特異的に必要な遺伝
子に対し、その遺伝子の一部に相補的な塩基配列を有す
るオリゴヌクレオチド（アンチセンスオリゴヌクレオチ
ド）を反応させ、いわば癌関連遺伝子に蓋をするアンチ
センス技術が考案され、このものについて種々の検討が
為されてきた。このアンチセンスオリゴヌクレオチドは
遺伝子発現を、癌細胞に対しても正常細胞に対しても無
差別に阻害する為、何の遺伝子発現を抑制するかが重要
なポイントになっている。
【０００４】これらのアンチセンスオリゴヌクレオチド
による制癌作用の中で、ユーン・スーン・チョウチュン
らがプロテインキナーゼＡが増殖期の癌細胞の分裂に必
要とされることに注目し、開発したプロテインキナーゼ
Ａ−ＲＩαに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドの
技術は、そのメカニズムの新規性から注目を集めていた
（特開平６−２１１８８９号）。しかしながら、そのイ
ン・ビボに於ける制癌作用は著しく優れているとは言え
ず、実効性には問題があった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明はかかる状況に
鑑みて為されたものであり、制癌作用を高めたプロテイ
ンキナーゼＡ遺伝子に対するアンチセンスオリゴヌクレ
オチドを提供する事を課題とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記実状を
踏まえ、プロテインキナーゼＡ遺伝子に対するアンチセ
ンスオリゴヌクレオチドの制癌作用を実用可能な程度に
高めるため、鋭意研究を重ねた結果、ヌクレオチド間の
結合をフォスフォルアミデートにすることで、制癌作用
が著しく高まる事を見いだして発明を完成させた。
【０００７】すなわち本発明は、ヒトプロテインキナー
ゼＡ遺伝子の配列の全部又は一部に対して、少なくとも
一部が相補的な塩基配列を有し、一般式（Ｉ）で表され
る構造を有するオリゴヌクレオチドである。
【０００８】
【化２】
【０００９】（一般式（Ｉ）中、ｎは整数を表し、Ｒ1
は水素原子又は水酸基を表し、Ｂは核酸塩基を表す。） ヒトプロテインキナーゼＡ遺伝子の一部としては、ヒト
プロテインキナーゼＡのレギュラトリー部分またはその
一部をコードする配列が挙げられる。さらに、レギュラ
トリー部分としては、ＲＩ−αが挙げられる。
【００１０】さらに本発明は、上記オリゴヌクレオチド
からなる制癌剤、及びこの制癌剤から選ばれる１種以上
を含有する癌治療用の医薬組成物を提供する。
【００１１】尚、本明細書において、「アンチセンスオ
リゴヌクレオチド」とは、遺伝子又はｍＲＮＡにハイブ
リダイズすることによってその遺伝子の発現を抑制する
オリゴヌクレオチドをいい、遺伝子ＤＮＡのコード鎖
（＋鎖）あるいはｍＲＮＡに相補的な塩基配列を有する
オリゴヌクレオチドのみでなく、非コード鎖（（−）
鎖）に相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドも
含まれる。
【００１２】以下、本発明について詳細に説明する。
【００１３】（１）本発明のアンチセンスオリゴヌクレ
オチド 本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトプロ
テインキナーゼＡ遺伝子の配列の全部又は一部に対し
て、少なくとも一部が相補的な塩基配列を有するオリゴ
ヌクレオチドである。ヒトプロテインキナーゼＡ遺伝子
の配列の一部としては、ヒトプロテインキナーゼＡのレ
ギュラトリー部分またはその一部をコードする配列が挙
げられる。さらに、レギュラトリー部分としては、ＲＩ
−αが挙げられる。本発明のアンチセンスオリゴヌクレ
オチドは、上記のような塩基配列を有し、且つ、オリゴ
ヌクレオチドを構成する各ヌクレオチド間の結合様式
が、一般式（Ｉ）に示される様なフォスフォルアミデー
ト結合によるものである。
【００１４】オリゴヌクレオチドの鎖長の長さは、プロ
テインキナーゼＡ遺伝子に対する特異性が維持されれば
特段の限定は受けない。好ましい鎖長としては塩基数に
して９〜４０である。これは、９未満では遺伝子に対す
る特異性が少なくなり制癌作用を充分に発揮できない場
合があり、４０を越えると、塩基配列をコントロールし
て合成する事が著しく困難になるからである。より好ま
しい鎖長は、効果と経済性のバランスが最も良い、塩基
数で１５〜２４のものである。
【００１５】本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド
は、プロテインキナーゼＡ−ＲＩαの生合成に係わる遺
伝子に相補的な配列を有する核酸であれば、その種類は
問わない。すなわち、ヌクレオチド間の結合がフォスフ
ォルアミデート結合である限り、ＤＮＡ型（一般式
（Ｉ）中、Ｒ1が水素原子）のオリゴヌクレオチドであ
っても、ＲＮＡ型（一般式（Ｉ）中、Ｒ1が水酸基）の
オリゴヌクレオチドであってもよい。
【００１６】プロテインキナーゼＡ−ＲＩαに対するア
ンチセンスオリゴヌクレオチドの配列としては、プロテ
インキナーゼＡ−ＲＩα遺伝子のコード鎖または非コー
ド鎖の塩基配列の一部と実質的に相補的な配列、言い換
えれば非コード鎖またはコード鎖の塩基配列の一部と実
質的に同一な配列であれば、プロテインキナーゼＡ−Ｒ
Ｉαの生合成を抑制できることが期待される。プロテイ
ンキナーゼＡ−ＲＩα遺伝子の塩基配列の一部として
は、遺伝子のどの部位であっても上記の効果は期待でき
るが、より完全にプロテインキナーゼＡ−ＲＩα活性の
発現を抑制するという観点からは、該遺伝子のコード鎖
の５’末端側、好ましくは開始コドンから１００番目の
コドンまでの３００ヌクレオチドからなる配列の一部で
あることが好ましい。このプロテインキナーゼＡ−ＲＩ
α遺伝子のコード領域の３００ヌクレオチドの配列を配
列番号１に示す。また、この配列に対するアンチセンス
配列（非コード鎖の配列と同じ）を配列番号６に示す。
ここで、配列番号１に示す配列と配列番号６に示す配列
の関係は相補的関係にあり、遺伝子のどちらの鎖に対す
るアンチセンスオリゴヌクレオチドであっても制癌作用
は期待できる。
【００１７】また、配列番号１又は６に示す塩基配列の
一部としては、配列番号１においては５’末端側であ
り、配列番号６については３’末端側であることが好ま
しい。
【００１８】ここで、「実質的に相補的」とは、オリゴ
ヌクレオチド中の全てのヌクレオチドがプロテインキナ
ーゼＡ遺伝子に対して相補的であることを必要とするも
のではなく、オリゴヌクレオチドが遺伝子ＤＮＡまたは
ｍＲＮＡの相当する部位にハイブリダイズし、転写また
は翻訳を阻害することができる程度に相補的であればよ
いことを意味する。したがって、生理条件下で特異的な
ハイブリダイゼーションが阻害されない限り、ヌクレオ
チド鎖中の一部のヌクレオチドの置換、欠失または挿入
があっても良い。
【００１９】アンチセンスオリゴヌクレオチド中で置き
変わってもよいヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの
長さや配列によって異なるが、一般的にオリゴヌクレオ
チドの両端部近辺は、内部に比べて置換、欠失及び挿入
の影響が少なく、ＡＴ（又はＡＵ）塩基対の方がＧＣ塩
基対に比べて置換の影響が少ない。核酸のハイブリダイ
ゼーション強度の計算方法は公知であり、当業者にとっ
て、配列番号１及び６に示す配列をもとに、生理条件下
でのハイブリダイゼーションが損なわれないように一部
の配列を改変することは容易である。具体的には、プロ
テインキナーゼＡ遺伝子に対して９０％以上のホモロジ
ーを有しているものは、多少なりとも所期の効果が期待
でき、実質的に相補的であると定義できる。さらに、こ
のようなオリゴヌクレオチドの５’末端又は３’末端に
非特異的な配列を有するオリゴヌクレオチドが付加され
ていても、実質的に影響を受けない。
【００２０】又、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオ
チドを構成するヌクレオチドの種類としては、塩基をチ
ミン、アデニン、シトシン、グアニンとし、糖をデオキ
シリボースとしたＤＮＡ構成ヌクレオチド類縁体でもよ
く、塩基をウラシル、アデニン、シトシン、グアニンと
し、糖をリボースとしたＲＮＡ構成ヌクレオチド類縁体
でも構わない。さらに、イノシンのように非特異的に他
の塩基と水素結合が可能な塩基を含んでいてもよい。最
も好ましいものは、配列番号１の塩基配列に対して相補
的な、ＤＮＡ構成ヌクレオチド類縁体のオリゴヌクレオ
チドである。
【００２１】プロテインキナーゼＡ−ＲＩαに対するア
ンチセンスオリゴヌクレオチドの配列としては、配列番
号１に示す塩基配列の一部と相補的な配列、すなわち配
列番号６に示す配列の一部と同一の配列を有するものと
して具体的には、配列番号２、３、４、５に示す塩基配
列を有するオリゴヌクレオチドが挙げられる。また、配
列番号６に示す塩基配列の一部と相補的な配列、すなわ
ち配列番号１に示す配列の一部と同一の配列を有するも
のとして具体的には配列番号７、８、９に示すオリゴヌ
クレオチドが挙げられる。これらのオリゴヌクレオチド
の配列番号１または６に示す配列上の位置を次に示す。
【００２２】 配列番号２：配列番号６の塩基番号２８０〜３００ 配列番号３：配列番号６の塩基番号４６〜５７ 配列番号４：配列番号６の塩基番号１４８〜１６５ 配列番号５：配列番号６の塩基番号２５０〜２７９ 配列番号７：配列番号１の塩基番号１〜２１ 配列番号８：配列番号１の塩基番号２４４〜２５５ 配列番号９：配列番号１の塩基番号１３６〜１５３ 配列番号10：配列番号６の塩基番号２８０〜３００
【００２３】本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド
は、ヌクレオチド同士を一般式（Ｉ）に示す様に窒素−
燐結合でつなぐ事を特徴とする。この様な一般式に表さ
れるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、後記実施例に
示すように、従来のホスホロチオエート等の結合様式を
有するアンチセンスオリゴヌクレオチドよりも優れた癌
抑制効果を有する。
【００２４】（２）本発明のアンチセンスオリゴヌクレ
オチドの製造方法 本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、反応式
（II）に従って、順次ヌクレオチドを伸長することによ
り、塩基配列を制御しながら合成することが出来る。
【００２５】
【化３】
【００２６】（ただし、式中Ｐｏはポリマー残基を表
し、Ｒは水素原子又はアシロキシ基を表し、Ｂは核酸塩
基を表す。）
【００２７】即ち、ポリマー等の固相にエステル結合で
固定したジメチルトリチル化したヌクレオシドを、ジク
ロロ酢酸で脱トリチル化し、（２−シアノエトキシ）−
（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）クロロホスフィンと
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを反応させてフォ
スフィチル化することにより、シアノエトキシヌクレオ
チドとし、これにテトラゾールを反応させた後、更にト
リエチルアミン存在下、３’−アミノ−５’−ジメチル
トリチルデオキシリボヌクレオチドの３’−アミノ基で
テトラゾールを置換し、このジメチルトリチル体につい
て同様に３’−アミノ−５’−ジメチルトリチルデオキ
シリボヌクレオシドを縮合させる操作を繰り返せば、エ
トキシシアノフォスフォルアミデート結合で結合したポ
リマー上にエステル結合で固定された任意の塩基配列の
オリゴヌクレオチドが得られる。これをアンモニアを用
いて脱ジメチルトリチル化及び脱エステル化すれば一般
式（Ｉ）で表される構造を有するオリゴヌクレオチドが
得られる。
【００２８】上記一連の反応は、市販されているＤＮＡ
シンセサイザー、及び上記の反応試薬を用いる事によ
り、自動的に任意の塩基配列のオリゴヌクレオチドを得
る事が可能である。上記の反応において、糖鎖部分を
２’−アシル−３’−アミノ−５’−ジメチルトリチル
リボースで置き換えたヌクレオシドを用いれば、ＲＮＡ
類似のアンチセンスオリゴヌクレオチドが得られる。
【００２９】（３）本発明の制癌剤 本発明の制癌剤は、上記記載のオリゴヌクレオチドから
選ばれる１種以上からなる。オリゴヌクレオチドは、二
種以上の混合物として用いると、より高い制癌作用が得
られる場合がある。
【００３０】本発明の制癌剤は後記実施例に示すよう
に、各種の癌細胞に対して優れた制癌作用を示す。本発
明の制癌剤が有効な癌は、ヒトの癌であれば特に限定は
ない。動物の癌に対しては、本発明の制癌剤であるアン
チセンスオリゴヌクレオチドがヒトのプロテインキナー
ゼＡ−ＲＩα遺伝子に対するアンチセンスオリゴヌクレ
オチドであるため、有効でない場合があることも予想さ
れる。
【００３１】本発明の制癌剤が有効な癌としては、具体
的に例示すれば、白血病、肺癌、胃ガン、肝臓癌、腎臓
癌、悪性リンパ腫、舌癌、食道癌、乳ガン、咽頭癌、脳
腫瘍、悪性筋腫、メラノーマ、子宮頸癌等が挙げられ
る。本発明の制癌剤の好ましい投与量であるが、病種や
病状、年齢、体重、性別、体調などにより異なるが、お
およそ成人一人一日当たり、１０ｍｇ〜２０００００ｍ
ｇを一回ないしは数回に分けて投与するのが適当であ
る。投与経路としては、静脈内、動脈内、門脈内、皮
下、皮内、筋肉内、病巣内等へ投与する注射による投
与、経口投与等が例示できる。
【００３２】（４）本発明の制癌用の医薬組成物 本発明の医薬組成物は上記制癌剤と剤形上の任意成分と
からなる。剤形上の任意成分は通常医薬組成物に用いら
れているものであれば特に制限無く用いることができ
る。例えば、経口製剤としては、増量剤、結合剤、嬌味
嬌臭剤、崩壊剤、滑沢剤、被覆剤、糖衣剤等が例示で
き、注射剤としては、ｐＨ調節剤、等張剤、安定剤等が
例示できる。また、他の制癌作用が知られている薬剤と
ともに製剤化してもよい。これらの制癌剤と任意成分を
剤形化する方法は、通常の方法によれば良い。
【００３３】
【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的
に説明するが、本発明がこれら実施例に何等限定を受け
ない事は言うまでもない。
【００３４】
【実施例１】 アンチセンスオリゴヌクレオチドの製造
例（１） 上記に述べた方法により、核酸合成機ＡＢＩ３８４シン
セサイザー（アプライドバイオシステムズ社製）を用い
て、配列番号２、３、４、５、７、８、９に示す塩基配
列を有するＤＮＡ型のオリゴヌクレオチドを合成した。
即ち、ポリマーにエステル結合で固定した各配列の３’
末端塩基を有するジメチルトリチル化したヌクレオシド
を、ジクロロ酢酸の３％塩化メチレン溶液を用い１．５
分間処理して脱ジメチルトリチル化反応を行った。さら
に０．２モルの（２−シアノエトキシ）−（Ｎ，Ｎ−ジ
イソプロピルアミノ）クロロホスフィンと０．２モルの
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの塩化メチレン溶
液を用いてフォスフィチル化反応を１０分間行い、シア
ノエトキシヌクレオチドとした。これに０．４モルのテ
トラゾールの９０％アセトニトリル水溶液に溶解した溶
液を用いて５分間反応させたてテトラゾリル化した後、
３’末端から２番目の塩基を有する０．２モルの３’−
アミノ−５’−ジメチルトリチルデオキシリボヌクレオ
シドと０．２モルのトリエチルアミンの５０％四塩炭ア
セトニトリル溶液を用いてこれらのヌクレオシドのカッ
プリングを２０分間行った。
【００３５】上記と同様にして、各塩基配列に従って順
次ヌクレオシドを結合させ、最後にアンモニアのメタノ
ール飽和溶液を用いて５’末端のヌクレオチドの脱ジメ
チルトリチル化、脱シアノエトキシ化及びエステルの加
水分解によるポリマーからのオリゴヌクレオチドの離脱
を行った。塩基配列は予め自動合成機にインプットして
おいた。
【００３６】
【実施例２】 アンチセンスオリゴヌクレオチドの製造
例（２） モノマーヌクレオシドを、２’−アセチル−３’−アミ
ノ−５’−ジメチルトリチルリボヌクレオシドに変えた
以外は実施例１と同様にして反応を行い、配列番号１０
に示す配列を有するＲＮＡ型のオリゴヌクレオチドを作
製した。
【００３７】
【実施例３】 アンチセンスオリゴヌクレオチドの製造
例（３） 実施例１と同様にして、配列番号２に示す塩基配列の
５’末端の２塩基ＧＧをＴＴに置き換えた配列のＤＮＡ
型オリゴヌクレオチドを合成した。
【００３８】
【実施例４】 白血病細胞に対する制癌作用（イン・ビ
トロ） 実施例１〜３で作製したオリゴヌクレオチドについて、
ＨＬ−６０白血病細胞を用いて増殖抑制作用を調べた。
即ち、１０％ＦＢＳ（牛胎仔血清）を添加したＲＰＭＩ
１６４０培地中で培養した後、ＰＢＳ（燐酸緩衝生理食
塩水）で２回洗浄した細胞を、１０％ＦＢＳ添加ＲＰＭ
Ｉ１６４０培地で希釈し２×１０5個／ｍｌの濃度に調
整した。これに最終濃度が所定の濃度になるように調整
した、各種濃度の実施例１〜３で製造したオリゴヌクレ
オチドの生理食塩水溶液を加えた。その後１週間５％炭
酸ガス混合ガス雰囲気で３７℃の温度で培養し、毎日細
胞数をカウントした。培養開始７日後の細胞数より、細
胞増殖を１００％抑制する最小濃度を決定した。尚、ポ
ジティブコントロールとしては、特開平６−２１１８８
９号記載の配列番号１のチオオリゴヌクレオチド（２１
マー）、即ち、本発明の実施例１の配列番号２のオリゴ
ヌクレオチドの結合様式をフォスフォルアミデートから
ホスホロチオエーテルに変えたものを用いた。結果を表
１に示す。
【００３９】この結果より、本発明のオリゴヌクレオチ
ドが制癌作用を有している事及び本発明のオリゴヌクレ
オチドが従来のオリゴヌクレオチドよりすぐれた制癌作
用を有する事が判る。
【００４０】
【表１】
【００４１】
【実施例５】 結腸癌細胞に対する制癌作用（イン・ビ
トロ） 実施例４と同様に、結腸癌由来細胞ＬＳ１７４Ｔを用い
て増殖抑制作用を見た。完全増殖抑制最小濃度を表２に
示す。これより、本発明のオリゴヌクレオチドは結腸癌
に対しても白血病と同様の作用を示す事が判る。
【００４２】
【表２】
【００４３】
【実施例６】 結腸癌細胞に対する制癌作用（イン・ビ
ボ） 結腸癌由来細胞ＬＳ１７４Ｔを用いて、これをヌードマ
ウス（雄性、１群５匹）に移植し、その増殖に対する本
発明の抑制作用を調べた。即ち、前培養し濃度を２×１
０7個／ｍｌに調整した癌の分散液を０．１ｍｌ右側背
部皮膚に注射して癌細胞を移植し、７日飼育した後、実
験に使用した。即ち、オリゴヌクレオチドを最終濃度で
１０ｍｇ／ｍｌになるように、４９．５％のピーナッツ
オイルと４９．５％の生理食塩水と１％のツィーン８０
を混合、乳化したベヒクルに混ぜ込んだ検体を０．０１
ｍｌ腫瘍と左側背部皮膚に皮下投与し、投与後腫瘍の大
きさを測定した。オリゴヌクレオチド投与群の腫瘍の平
均体積を無投与群の腫瘍の平均体積から減じ、この値を
無投与群の腫瘍の平均体積で除したものに１００を乗じ
た数値を増殖抑制率とした。
【００４４】本発明のオリゴヌクレオチドとしては、配
列番号２に示す配列を有するオリゴヌクレオチドを、対
照品としては実施例１に示したホスホロチオエートタイ
プのオリゴヌクレオチドを用いた。本発明のオリゴヌク
レオチドの増殖抑制率が７１％であったのに対し、対照
品のオリゴヌクレオチドは３５％であった。これより、
本発明のオリゴヌクレオチドがイン・ビボに於いても優
れた制癌作用を有する事が判る。又、オリゴヌクレオチ
ドを投与した後も好ましくない毒性は観察されておら
ず、安全性並びに毒性に対する効果濃度で示される治療
係数も高いものである事が判る。
【００４５】
【実施例７】 複数のアンチセンスオリゴヌクレオチド
の併用効果 実施例４と同様に配列番号２に示す配列を有する本発明
のオリゴヌクレオチドと配列番号３に示す配列を有する
本発明のオリゴヌクレオチドの等モル混合物について、
ＨＬ−６０に対する制癌作用を調べた。細胞増殖抑制最
小濃度は０．４μＭ（０．２μＭの配列番号２の本発明
のオリゴヌクレオチドと０．２μＭの配列番号３の本発
明のオリゴヌクレオチドの混合物）で、相加効果以上の
効果がある事が判る。
【００４６】
【発明の効果】本発明のプロテインキナーゼＡ遺伝子に
対するアンチセンスオリゴヌクレオチドは制癌作用が高
いので、制癌剤、癌治療用の医療用組成物としてたいへ
ん有用である。
【００４７】
【配列表】
配列番号１ 配列の長さ：３００ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：genomic DNA アンチセンス：NO 配列 ATGGAGTCTG GCAGTACCGC CGCCAGTGAG GAGGCACGCA GCCTTCGAGA ATGTGAGCTC 60 TACGTCCAGA AGCATAACAT TCAAGCACTG CTCAAAGATT CTATTGTGCA GTTGTGCACT 120 GCTCGACCTG AGAGACCCAT GGCATTCCTC AGGGAATACT TTGAGAGGTT GGAGAAGGAG 180 GAGGCAAAAC AGATTCAGAA TCTGCAGAAA GCAGGCACTC GTACAGACTC AAGGGAGGAT 240 GAGATTTCTC CTCCTCCACC CAACCCAGTG GTTAAAGGTA GGAGGCGACG AGGTGCTATC 300
【００４８】配列番号２ 配列の長さ：２１ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成オリコ゛ヌクレオチト゛ アンチセンス：YES 配列 GGCGGTACTG CCAGACTCCA T 21
【００４９】配列番号３ 配列の長さ：１２ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成オリコ゛ヌクレオチト゛ アンチセンス：YES 配列 AGGAGGAGAA AT 12
【００５０】配列番号４ 配列の長さ：１８ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成オリコ゛ヌクレオチト゛ アンチセンス：YES 配列 CCTGAGGAAT GCCATGGG 18
【００５１】配列番号５ 配列の長さ：３０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成オリコ゛ヌクレオチト゛ アンチセンス：YES 配列 TTCTCGAAGG CTGCGTGCC TCCTCACTGGC 30
【００５２】配列番号６ 配列の長さ：３００ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA アンチセンス：YES 配列 GATAGCACCT CGTCGCCTCC TACCTTTAAC CACTGGGTTG GGTGGAGGAG GAGAAATCTC 60 ATCCTCCCTT GAGTCTGTAC GAGTGCCTGC TTTCTGCAGA TTCTGAATCT GTTTTGCCTC 120 CTCCTTCTCC AACCTCTCAA AGTATTCCCT GAGGAATGCC ATGGGTCTCT CAGGTCGAGC 180 AGTGCACAAC TGCACAATAG AATCTTTGAG CAGTGCTTGA ATGTTATGCT TCTGGACGTA 240 GAGCTCACAT TCTCGAAGGC TGCGTGCCTC CTCACTGGCG GCGGTACTGC CAGACTCCAT 300
【００５３】配列番号７ 配列の長さ：２１ 配列の型：核酸 鎖の長さ：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成オリコ゛ヌクレオチト゛ アンチセンス：No 配列 ATGGAGTCTG GCAGTACCGC C 21
【００５４】配列番号８ 配列の長さ：１２ 配列の型：核酸 鎖の長さ：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成オリコ゛ヌクレオチト゛ アンチセンス：No 配列 ATTTCTCCTC CT 12
【００５５】配列番号９ 配列の長さ：１８ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 アンチセンス：No 配列の種類：他の核酸 合成オリコ゛ヌクレオチト゛ 配列 CCCATGGCAT TCCTCAGG 18
【００５６】配列番号１０ 配列の長さ：２１ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成オリコ゛ヌクレオチト゛ アンチセンス：YES 配列 GGCGGUACUG CCAGACUCCA U 21

Claims (12)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ヒトプロテインキナーゼＡ遺伝子の配列
    の全部又は一部に対して、少なくとも一部が相補的な塩
    基配列を有し、一般式（Ｉ）で表される構造を有するオ
    リゴヌクレオチド。 【化１】 （一般式（Ｉ）中、ｎは整数を表し、Ｒ1は水素原子又
    は水酸基を表し、Ｂは核酸塩基を表す。）
  2. 【請求項２】 ヒトプロテインキナーゼＡ遺伝子の一部
    がヒトプロテインキナーゼＡのレギュラトリー部分また
    はその一部をコードする配列である請求項１記載のオリ
    ゴヌクレオチド。
  3. 【請求項３】 レギュラトリー部分がＲＩ−αである請
    求項１又は２記載のオリゴヌクレオチド。
  4. 【請求項４】 配列番号１に示すヒトプロテインキナー
    ゼＡ−ＲＩα遺伝子のコード鎖の塩基配列に、少なくと
    も一部が相補的な塩基配列を有する請求項３記載のオリ
    ゴヌクレオチド。
  5. 【請求項５】 配列番号６に示すヒトプロテインキナー
    ゼＡ−ＲＩα遺伝子の非コード鎖の塩基配列に、少なく
    とも一部が相補的な塩基配列を有する、請求項３記載の
    オリゴヌクレオチド。
  6. 【請求項６】 大きさが９マー以上４０マー以下である
    事を特徴とする請求項１〜５の何れか一項に記載のオリ
    ゴヌクレオチド。
  7. 【請求項７】 配列番号２〜５又は１０に示す塩基配列
    と実質的に同一の塩基配列を有する請求項４記載のオリ
    ゴヌクレオチド。
  8. 【請求項８】 塩基配列が配列番号２〜５又は１０に示
    す塩基配列の何れかである請求項７記載のオリゴヌクレ
    オチド。
  9. 【請求項９】 配列番号７〜９に示す塩基配列と実質的
    に同一の塩基配列を有する請求項５記載のオリゴヌクレ
    オチド。
  10. 【請求項１０】 塩基配列が配列番号７〜９に示す塩基
    配列の何れかである請求項９記載のオリゴヌクレオチ
    ド。
  11. 【請求項１１】 請求項１〜１０の何れか一項に記載の
    オリゴヌクレオチドからなる制癌剤。
  12. 【請求項１２】 請求項１１記載の制癌剤から選ばれる
    １種以上を含有する癌治療用の医薬組成物。
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