JPH1149768A

JPH1149768A - 新規抗生物質ｎａ３０８５１ａ、その製造法およびその用途

Info

Publication number: JPH1149768A
Application number: JP21836897A
Authority: JP
Inventors: Yutaka Watanabe; 豊渡辺; Mineko Kurotaki; 美音子黒滝; Mitsuyuki Nishide; 充之西出; Hiroshi Yoshida; 博吉田
Original assignee: Nippon Kayaku Co Ltd
Current assignee: Nippon Kayaku Co Ltd
Priority date: 1997-07-30
Filing date: 1997-07-30
Publication date: 1999-02-23

Abstract

(57)【要約】【課題】殺虫、殺菌活性を有する新規抗生物質の提供。【解決手段】ストレプトミセスエスピーＮＡ３０８
５１を培養して得られる環状デプシペプチド形化合物で
ある新規抗生物質ＮＡ３０８５１Ａ

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は新規抗生物質ＮＡ３
０８５１Ａ、その製造法およびそれを有効成分とする殺
虫剤、あるいは殺菌剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来、殺虫剤としては、有機リン剤、カ
ーバメート剤等が使用されている。殺菌剤としては、ベ
ンズイミダゾール剤、エルゴステロール合成阻害剤等が
使用されている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】従来、使用されている
殺虫剤、または殺菌剤は効力、毒性などの点で不十分で
あり、また抵抗性などの問題もあり、新しい殺虫剤、殺
菌剤が求められている。

【０００４】

【課題を解決するための手段】そこで発明者らは微生物
の代謝産物について種々検索した結果、ストレプトミセ
ス属に属する一菌株が後記の新規抗生物質ＮＡ３０８５
１Ａを産生すること及び該抗生物質が優れた殺虫活性お
よび殺菌活性を有することを見出した。本発明は上記知
見に基づいて完成されたものである。即ち本発明は新規
抗生物質ＮＡ３０８５１Ａを有効成分とする殺虫剤およ
び殺菌剤に関するものである。

【０００５】

【発明の実施の形態】上記新規抗生物質ＮＡ３０８５１
Ａはストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）
に属するＮＡ３０８５１Ａ生産菌を培養し、新規抗生物
質ＮＡ３０８５１Ａを生成蓄積せしめ、この培養物より
新規抗生物質ＮＡ３０８５１Ａを採取することにより得
られる。

【０００６】ＮＡ３０８５１Ａの生産菌の代表的なもの
として、土壌より分離したストレプトミセスエスピー
ＮＡ３０８５１（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓ
ｐ．ＮＡ３０８５１）株（ＦＥＲＭＰ−１６２１
４）が挙げられる。

【０００７】本発明における新規抗生物質ＮＡ３０８５
１Ａの生産菌はストレプトミセス（Streptomyces）属に
属するが、例えば、本発明者らが分離したＮＡ３０８
５１（寄託番号ＦＥＲＭＰ−１６２１４）菌株は、本
発明に最も有効に使用される菌株の一例である。新規抗
生物質ＮＡ３０８５１Ａの生産菌の代表的な１例は次の
菌学的および生理学的性質を有する。

【０００８】菌学的性質１．形態的性質２７℃で２週間後に観察した結果、気菌糸は単純分岐
し、その先端はらせん状で、輪生枝の形成は認められな
い。また、胞子嚢及び遊走子も認められない。胞子表面
は平滑で、胞子はシリンダー型で、大きさは０．９〜
０．６×０．８〜０．６μｍである。また、２０個以上
の連鎖をなして胞子が形成される。

【０００９】２．各種培地での生育各種培地上で２７℃、１４日間培養したときの生育状態
を表１に示す。

【００１０】

【表１】

【００１１】３生理学的性質生育温度範囲：２４〜３２℃ 硝酸塩の還元：陰性スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地）：
陽性脱脂牛乳の凝固：陰性脱脂牛乳のペプトン化：陽性メラニン様色素の生成：陰性４炭素源の利用性（プリドハム・ゴドリーブ寒天培地
上）Ｌ−アラビノース − Ｄ−キシロース＋Ｄ−グルコース＋Ｄ−フラクトース＋シュクロース＋イノシトール＋Ｌ−ラムノース − ラフィノース＋Ｄ−マンニトール＋

【００１２】５細胞壁中のジアミノピメリン酸ＬＬ−ジアミノピメリン酸である。以上を要約すると本
菌株は、細胞壁がジアミノピメリン酸であり、また、メ
ナキノンの種類は主に、ＭＫ−９（Ｈ６），ＭＫ−９
（Ｈ８）である。インターナショナル・ストレプトミセ
ス・プロジェクト（略称ＩＳＰ）の方法によれば、胞子
形成菌糸の形態は、ＳｅｃｔｉｏｎＳｐｉｒａｌｅｓ
に属し胞子表面は平滑で、成熟した菌糸の色は灰色系統
（Ｇｒａｙｃｏｌｏｒ−ｓｅｒｉｅｓ）でハイグロス
コピック（湿潤性）になる。メラニン様色素を生産せ
ず、いくつかの培地中に茶色味の可溶性色素を呈する。
また、基生菌糸の色は黄茶〜黄茶または紫味灰を呈す
る。炭素源としてはＤ−キシロース、Ｄ−グルコース、
Ｄ−フラクトース、シュクロース、イノシトール、ラフ
ィノース、Ｄ−マンニトールを利用する。

【００１３】以上の性質をもとにアール・イー・ブッフ
ァナン・アンド・エヌ・イー・ギボンズ編、バージーズ
・マニュアル・オブ・デタミネーティブ・バクテリオロ
ジー（Ｂｅｒｇｅｙ‘ｓＭａｎｕａｌｏｆＤｅｔ
ｅｒｎｉｎａｔｅｖｅＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第
８版、１９７４年に従って検索を行った結果、上記ＮＡ
３０８５１株はストレプトミセス属に属することが判
明した。よって、本菌をストレプトミセス・エスピー
（Ｓｔｒｅｐｔｏｎｙｃｅｓｓｐ．）ＮＡ３０８５
１株と命名した。該菌株は、工業技術院生命工学工業技
術研究所に寄託番号ＦＥＲＭＰ−１６２１４として寄
託されている。

【００１４】本発明の新規抗生物質は、上記ストレプト
ミセス・エスピーＮＡ３０８５１株を利用して有利に
製造できる。また、一般に放線菌は自然にまたは人工的
にその性状が変異しやすいものであり、本発明新規抗生
物質はＮＡ３０８５１株の変異株を利用しても製造す
ることができ、さらに上記に限らずストレプトミセス属
に属する公知の各種菌を利用することによっても製造す
ることができる。

【００１５】本発明により新規抗生物質ＮＡ３０８５１
Ａを製造するには、先ずストレプトミセス・エスピーＮ
Ａ３０８５１株を放線菌が利用し得る栄養物を含有す
る培地で好気的に培養する。栄養源としては、従来から
放線菌の培養に利用されている公知のものが使用でき、
例えば、炭素源としてはグルコース、フラクトース、グ
リセリン、シュクロース、デキストリン、ガラクトー
ス、有機酸など単独かまたは組み合せて用いることがで
きる。無機および有機窒素源としては塩化アンモニウ
ム、硫酸アンモニウム、尿素、硝酸アンモニウム、硝酸
ナトリウム、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵
母、コーン・スチープ・リカー、大豆粉、綿実油カス、
カザミノ酸、バクトソイトン、ソリュブル、ベジタブ
ル、プロテイン、オートミールなどを単独または組み合
せて用いることができる。その他必要に応じて食塩、炭
酸カルシウム、硫酸マグネシウム、硫酸銅、硫酸鉄、硫
酸亜鉛、塩化マンガン、燐酸塩などの無機塩類を加える
ことができるほか、有機物、たとえばアミノ酸類、ビタ
ミン類、核酸類や無機物を適当に添加することができ
る。必要に応じてシリコン、植物油あるいは合成消泡剤
を培地に添加し発泡を防ぐことも有効である。培養法と
しては固体静地培養、液体静地培養、液体振盪培養、特
に深部攪拌培養法が最も適している。培養温度は２０〜
４５℃、ｐＨは弱酸性ないし微アルカリ性で培養を行う
ことが望ましい。液体培養では通常１〜５日間培養を行
うと新規抗生物質ＮＡ３０８５１Ａ物質が培養液中に生
成蓄積される。培養液中の生成量が最大に達したときに
培養を停止し、培養液より目的物を単離・精製する。

【００１６】培養液からの本物質の単離・精製には一般
に微生物代謝産物をその培養液から単離するために用い
られる分離精製の方法が用いられる。例えば、培養濾液
よりは酢酸エチル、ブタノール等の水不混和性の有機溶
媒で抽出することができる。菌体画分よりはアセトン、
メタノールなどの水混和性有機溶媒で抽出することがで
きる。抽出物はさらに精製に通常用いられる公知の方
法、例えば、シリカゲル、アルミナ、フロリジル、セフ
ァデックス等を用いるクロマトグラフィー、多孔性高分
子樹脂等を用いるクロマトグラフィー、あるいは遠心向
流分配クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィ
ー等を単独にまたは適宜組み合わせることにより精製し
純粋に採取することができる。

【００１７】即ち、培養液（２．５Ｌ）に等量のエタノ
ールを加えて活性成分を抽出し、さらにエタノールを留
去して得られた水溶液に酢酸エチル（２Ｌ）を加えて抽
出し、抽出液を濃縮乾固して粗抽出物を得る。これをシ
リカゲル、ＯＤＳを用いたカラムクロマトグラフィーで
分画し、新規抗生物質ＮＡ３０８５１Ａ（８０ｍｇ）を
得る。

【００１８】上記のようにして得られた新規抗生物質Ｎ
Ａ３０８５１Ａの理化学的性質を下記に示す。１）外観；淡黄色粉末２）分子量；６７０ＦＡＢ−ＭＳｍ／ｚ６７１（Ｍ＋Ｈ）＋ｍ／ｚ６６９（Ｍ−Ｈ）− ３）溶解性：可溶：アセトン、クロロホルム、メタノール、ジメチルスルホキシド不溶：水４）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ値；ヘキサン−アセトン（２：１）の展開溶媒で０．３０を示す。５）紫外部吸収スペクトル；メタノール中で測定したスペクトルを図１に示す。６）赤外部吸収スペクトル；臭化カリウム錠剤で測定したスペクトルを図２に示す。７）水素核磁気共鳴スペクトル；重クロロホルム中で測定したスペクトルを図３に示す。８）炭素核磁気共鳴スペクトル；重クロロホルム中で測定したスペクトルを図４に示す。９）呈色反応；陽性：硫酸−バニリン試薬、ヨウ素１０）塩基性、酸性、中性の区別；中性

【００１９】新規抗生物質ＮＡ３０８５１Ａを農薬すな
わち殺虫剤、殺菌剤などとして使用する場合、製剤化に
あたっては何ら特別の条件を必要としない。すなわち、
農薬製造分野に於いて一般的に行われている方法によ
り、粉剤、粒剤、乳剤、マイクロカプセル剤などの任意
の製剤形態にして使用できる。また、製剤化の際には補
助剤として担体（希釈剤）及びその他の補助剤、たとえ
ば乳化剤、固着剤などを使用することができる。これら
の種々の製剤は実際の使用に際しては直接そのまま使用
するか、または水で所望の濃度に希釈して使用すること
ができる。

【００２０】新規抗生物質ＮＡ３０８５１Ａの農薬とし
ての使用量は剤形、施用する方法等によって変わるが、
通常10アール当たり有効成分量で０．１〜３００ｇ、好
ましくは０．５〜２００ｇが使用される。しかしながら
特別の場合には、これらの範囲を越えることが、また
は、下回ることが可能であり、また時には必要でさえあ
る。

【００２１】製剤に於いて、新規抗生物質ＮＡ３０８５
１Ａの含量は製剤形態等により広範囲にかえることが可
能であり、一般には新規抗生物質ＮＡ３０８５１Ａを
０．０１〜１００％（重量）、好ましくは０．０５〜８
０％（重量）含有し、残りは通常農薬用に使用される担
体その他補助剤からなる。

【００２２】

【作用】

１．殺虫活性新規抗生物質ＮＡ３０８５１Ａのコナガ幼虫に対する殺
虫活性を検討した。新規抗生物質ＮＡ３０８５１Ａを５
０％エタノール水溶液で所定濃度に希釈し、供試薬剤と
した。キャベツ葉を直径７ｃｍの円形に切り取り、これ
を薬液に浸漬風乾後、コナガ幼虫を５頭放虫し、４日後
に生死虫数を調査し死亡率を算出した。結果は表２に示
した。

【００２３】

【表２】化合物濃度（ｐｐｍ）死虫率（％）ＮＡ３０８５１Ａ１００１００

【００２４】この表に示したように、新規抗生物質ＮＡ
３０８５１Ａはコナガに対して明らかに殺虫活性を示
す。

【００２５】２. 殺菌作用新規抗生物質ＮＡ３０８５１Ａの灰色かび病菌に対する
殺菌活性を検討した。インゲンの初生葉を切り取り、所
定濃度に希釈した新規抗生物質ＮＡ３０８５１Ａの溶液
に浸漬し、風乾した。この葉上に別にポテトグルコース
寒天培地上に生育させた灰色かび病菌の直径８ｍｍの菌
そうをのせて接種した。その後、２０℃、湿度１００％
の湿室に３日間静置し、生じた病斑径を測定し、薬剤無
処理区と比較することにより防除価を算出した。結果は
第３表に示した。

【００２６】

【表３】化合物濃度（ｐｐｍ）防除価ＮＡ３０８５１Ａ１００１００

【００２７】表３に示したように、新規抗生物質ＮＡ３
０８５１Ａは灰色かび病菌に対して明らかに効果を示
す。

【００２８】

【実施例】以下本発明の実施例を示すが、これは単なる
一例示であって何等本発明を限定するものではなく、種
々の変法が可能である。

【００２９】１発酵ロータリー型振盪機用５００ml容三角フラスコにグルコ
ース１％、グリセロール２％、アジプロン（味の素社
製）０．５％、ペプトン０．５％、酵母エキス０．５
％、リン酸二水素カリウム０．０５％、硫酸マグネシウ
ム０．０５％、炭酸カルシウム０．２％の培地（ｐＨ
７．０）１００mlを分注し、１２０℃、２０分間オート
クレーブ滅菌した。これにＮＡ３０８５１Ａ株（ＦＥ
ＲＭＰ−１６２１４）の１白金耳を接種し、２７℃、２
２０回転／分、２日間振盪し、種培養とした。

【００３０】本培養はロータリー型振盪機用５００ml容
三角フラスコにグルコース１％、グリセロール１％、デ
キストリン２％、アジプロン（味の素社製）２％、酵母
エキス０．１％、塩化ナトリウム０．３％、炭酸カルシ
ウム０．２％、硫酸鉄・７水和物０．０００１１％、硫
酸銅・５水和物０．０００６４％、硫酸亜鉛・７水和物
０．０００１５％、および塩化マンガン・４水和物０．
０００７９％の培地（ｐＨ６．５）１００mlを分注
し、１２０℃、２０分間オートクレーブ滅菌したフラス
コに前記種培養液２mlを移植し、２５℃、２２０回転／
分の条件下で５日振盪培養を行った。得られた培養液
（２．５Ｌ）に等量のエタノールを加えて活性成分を抽
出した。

【００３１】２精製得られた抽出液（５Ｌ）のエタノールを留去し、得られ
た水溶液（２Ｌ）を酢酸エチル（２Ｌ）で抽出し、抽出
液を減圧濃縮して、１．４ｇの粗物質を得た。

【００３２】得られた粗物質をシリカゲルカラム（メル
ク社製、２０ｇ）に供し、クロロホルム／メタノールの
濃度勾配溶出法により溶出した。活性を示す画分（クロ
ロホルム溶出画分）を集め減圧濃縮して４２０ｍｇの固
形物質を得た。

【００３３】この固形物質をＯＤＳ（センシュー科学
製、５ｇ）カラムクロマトグラフィー（１０％メタノー
ル水〜１００％メタノールの濃度勾配溶出法により溶
出）に供し、８５〜１００％メタノール溶出画分を減圧
濃縮して、ＮＡ３０８５１Ａを８０ｍｇ得た。

【００３４】精製したＮＡ３０８５１Ａを用いて、外
観、分子量、溶解性、シリカゲル薄層クロマトグラフィ
ーによるRf値、紫外部吸収スペクトル、赤外吸収スペク
トル、Ｈ−ＮＭＲスペクトル、Ｃ−ＮＭＲスペクトルを
測定した。ＮＡ３０８５１Ａの理化学的性質は前期した
通りの値を示した。

【００３５】

【発明の効果】以上より明らかなように、本発明の新規
抗生物質ＮＡ３０８５１Ａまたはその塩は殺虫、殺菌活
性を有し、農園芸用殺虫剤、殺菌剤の有効成分として期
待できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＮＡ３０８５１Ａのメタノール中で測定した紫
外部吸収スペクトル

【図２】ＮＡ３０８５１Ａの臭化カリウム錠剤で測定し
た赤外部吸収スペクトル

【図３】ＮＡ３０８５１Ａの重クロロホルム中（３００
ＭＨｚ）で測定した水素核磁気共鳴スペクトル

【図４】ＮＡ３０８５１Ａの重クロロホルム中（７５Ｍ
Ｈｚ）で測定した炭素核磁気共鳴スペクトル

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 17/08 Ｃ１２Ｒ 1:465）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記式（１）で示す新規抗生物質ＮＡ３０
８５１Ａ。【化１】
【請求項２】ストレプトミセス属に属し、新規抗生物質
ＮＡ３０８５１Ａを生産する能力を有する微生物を、培
地に培養し、培養物中に新規抗生物質ＮＡ３０８５１Ａ
を生産、蓄積せしめ、これを採取する事を特徴とする新
規抗生物質ＮＡ３０８５１Ａの製造法。
【請求項３】新規抗生物質ＮＡ３０８５１Ａを有効成分
として含有する殺虫剤又は殺菌剤。
【請求項４】新規抗生物質ＮＡ３０８５１Ａを生産する
能力を有するトレプトミセスエスピーＮＡ３０８
５１（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．ＮＡ３０８５
１（ＦＥＲＭＰ−１６２１４））。