JPH11501653A

JPH11501653A - 四肢における虚血の治療のためのピルベートデヒドロゲナーゼ活性化剤の使用

Info

Publication number: JPH11501653A
Application number: JP8527370A
Authority: JP
Inventors: コンスタンティン−テオドシュードゥミトル; アーキボールドティモンズジェームス; レオナードグリーンハフポール; マーティンパウチャーサイモン
Original assignee: ゼネカリミテッド
Priority date: 1995-03-14
Filing date: 1996-03-11
Publication date: 1999-02-09
Also published as: DE69629282T2; EP0814801A2; WO1996028151A2; ATE245980T1; WO1996028151A3; AU4950296A; DE69629282D1; GB9505082D0; EP0814801B1

Abstract

(57)【要約】ＰＤＨキナーゼを抑制する薬剤、例えばジクロロ酢酸、その塩および誘導体は、四肢における虚血の治療に有用であることが記載される。特に、ジクロロ酢酸およびその塩は、間欠性跛行を治療するのに有用である。また、製薬学的組成物も記載される。

Description

【発明の詳細な説明】四肢における虚血の治療のためのピルベートデヒドロゲナーゼ活性化剤の使用本発明は、四肢における虚血の治療および特に間欠性跛行の治療に関する。喫煙および虚食の著しい影響によるような因子と共に、高齢化人口の数の増加により、末梢動脈性疾病の徴候を示す患者の数の増加をまねいた。四肢における虚血の臨床症状は、例えば、運動で経験されるがしかし静止により和らげられる筋肉痛を包含する。この現象は、一般に間欠性跛行として知られている。典型的に、患者は、相対的に短い距離、例えば１００ｍの歩行後に脚に痙攣のような痛みを経験する。数分間の静止時に、通常、痛みは消滅するがしかし同様の短い距離の歩行後に再び現れる。解糖中に、グルコースは、ピルベートに変換される。また、アミノ酸、例えばアラニン、セリンおよびシステインの分解は、ピルベートを発生させる。ピルベートは、組織の性質に依存している多数の代謝の結末を有する。細胞のミトコンドリア区画に起るピルベートの１つの反応は、アセチルＣｏＡへのその酸化的脱炭酸である。この反応は、ピルベートデヒドロゲナーゼ（ＰＤＨ）酵素複合体によって触媒される。ジクロロアセテートは、殊にＰＤＨキナーゼの抑制の性質を有するものとして文献に幅広く報告されている。ハッタ(Hatta)およびアトミ(Atomi)により報告された(1994 Biochemistry of Exercise Meeting、アバディーン、1994年７月)ＰＤＨキナーゼ抑制剤での動物研究は、ＤＣＡがラクテートの酸化を増大させ、かつ通常のマウスのトレッドミル運動の持続期間を２０％増大させたことを示した。また、ＤＣＡは、最大および５０％最大作業負荷中にボランティア中のラクテートの生産を３０％まで減少させ、かつ最大運動能力を１０％増大させることも報告されている(Ludvik他、P テル導入を受けているアンギナ患者において、ＤＣＡは、心拍数または左心室の変力状態(LV dp/dtmax.)の変化なしに１回心拍出量を１３％増大させた。また、心筋の効率は、２４％から３２％に増大した（Wargovich他、Am J Cardiol、第6 1巻、65〜70(1988)．）。クラスＩＩＩの心不全をもつ患者におけるＤＣＡの有益な効果も報告された（Chatergee他、J Am Coll Cardiol.、第23巻、1617〜162 4(1994)．）。本発明は、ピルベートデヒドロゲナーゼの活性化が四肢における虚血性筋肉の機能、ひいては医学的条件、例えば間欠性跛行の改善を引き起すことが見出されたことを基礎としている。特に、本発明は、四肢における虚血性筋肉の機能、ひいては医学的条件、例えば間欠性跛行の改善がＰＤＨキナーゼを抑制することによって得られることができるという予期されずに見出されたことを基礎としている。本発明によれば、四肢における虚血の治療のための医薬品を調製するためにピルベートデヒドロゲナーゼを活性化させる薬剤の使用が提供される。特に、この薬剤は、間欠性跛行を治療するために使用されることができる。こうして、本発明は、ピルベートデヒドロゲナーゼを活性化させる薬剤の有効量を投与することより成る、温血動物、例えばヒトの四肢における虚血を治療する方法を提供する。特に、ピルベートデヒドロゲナーゼを活性化させる薬剤の有効量を投与することより成る、温血動物、例えばヒトの間欠性跛行を治療する方法が提供される。こうして、本発明による薬剤は、末梢動脈性疾病を治療するのに有用であるので、本発明は、本明細書中で定義されたような薬剤の有効量を投与することより成る、温血動物、例えばヒトの末梢動脈性疾病を治療する方法を提供する。このような疾病が、必ずしも四肢における虚血に限定されるものではないことは、評価されるであろう。骨格筋のためのエネルギー基質の主要な供給源は、それぞれ０．７と１．０の呼吸比（ＲＱ）を有する脂肪酸および炭水化物である。静止条件下で骨格筋は、通常、０．７に近いＲＱを有し、激しい運動中に約１．０に増加する。しかしながら、跛行患者の場合には、呼吸比の増加は症候性四肢の運動中に限られるので、基質の補給を切換える度合は損われる（Lundgren他、Am J Physiol、第255巻、H1156〜H1164(1988)．）。減少したＲＱは、虚血性四肢におけるＡＴＰ合成のための脂肪酸へのより高い依存を示す。症候性四肢は、酸素抽出を増加させることによって低い流量に適合するけれども、これは、炭化水素源に必要とされるよりもＡＴＰを生産するのに１４％も多い酸素を必要とするＡＴＰ生産の方法として脂肪酸酸化を維持するには不十分である。症候性四肢内での代謝がより酸素の効率的な炭水化物代謝に切換えられることができる場合には、ＡＴＰの水準を保持する能力、ひいては筋肉の機能は改善されることができると考えられていた。炭水化物の利用を増大させるために研究されてきた１つの取組みは、ピルベートデヒドロゲナーゼ（ＰＤＨ）の活性化によりピルベートのアセチルＣｏＡへの変換を増加させることである。ＰＤＨの活性は、多数の因子、Ｅ１サブユニットのリン酸化の程度である最も重要な因子によって調節される。リン酸化は、ＰＤＨ複合体の不活性化をもたらし、この過程は、ホスファターゼおよびキナーゼ酵素によって調節される。ＰＤＨキナーゼの抑制は、ＰＤＨのリン酸化を抑制しかつ増大したピルベート、ひいては炭水化物の酸化を生じると考えられていた。意外なことに、運動前に、より酸素の効率的な炭水化物の代謝が活性化される場合には、その後アセチル基のプールを生じることが見出された。このプールは、ＴＣＡ回路への入口に利用でき、運動中に酸素の効率的なＡＴＰ生産および骨格筋の機能の改善をもたらす。ジクロロアセテート（ＤＣＡ）、即ちジクロロ酢酸およびその塩は、ＰＤＨキナーゼを抑制することが知られている薬剤である。この薬剤は、ＰＤＨを活性化させるいかなる薬剤も含有することができる。この性質は、当業者によく知られている標準的な実験室的技術を使用して決定されることができる。例えば、ＰＤＨを活性化することの可能な薬剤は、ＮＡＤＨ形成、¹⁴ＣＯ₂形成またはアセチルＣｏＡ形成の速度を基礎とした方法を使用してＰＤＨ活性を測定することにより同定されることができる。特に適当な方法は、 Dumitru Constantin-Teodosiu、博士論文“Regulation of pyruvate dehydrogen ase complex activity and acetyl group formation in skeletal muscle durin g exercise”、ストックホルム、1992年に記載されており、Department of Clin ical Chemistry、Karolinska Institute、Huddinge University Hospital、S-14 1 86 Huddinge、スウェーデンから入手可能である。また、この方法は、Constantin-Teodosiu D他、“A sen sitive radioisotopic assay of pyruvate dehydrogenase complex in human mu scle tissue”、Anal．Biochem.、第198巻、347〜351(1991)．により報告されている。ＰＤＨを活性化させる化合物を同定するための特に適当なアッセイは、例えば KerbyおよびRandle、Biochem Journal、第231巻、523〜529(1985)．またはBrook sおよびStorey、Analytical Biochemistry、第212巻、452〜456(1993)．に記載された方法を包含する。一般に、この薬剤は、ピルベートデヒドロゲナーゼキナーゼ（ＰＤＨキナーゼ）酵素を抑制する薬剤を含有することが好ましく、ひいては本発明の詳細な実施態様によれば、四肢における虚血の治療のため（および特に間欠性跛行の治療のため）の医薬品を調製するためにピルベートデヒドロゲナーゼを活性化する薬剤の使用が提供される。こうして、好ましい薬剤は、ＰＤＨキナーゼを抑制する化合物を含有する。この性質は、当業者によく知られている標準的な実験室的技術、例えばＰＤＨ活性化剤の同定に関連して上記のものを基礎とした方法、例えばKerbyおよびRandle 、Biochem Journal、第231巻、523〜529(1985)．またはBrooksおよびStorey、An alytical Biochemistry、第212巻、452〜456(1993)．に記載されているものを使用して決定されることができる。ＰＤＨキナーゼ抑制剤を同定するためのアッセイに対するＰＤＨに関連して上記のアッセイの変更は、当業者には日常の変更である。上記のように、ＤＣＡはＰＤＨキナーゼを抑制することが知られている薬剤である。以下に記載された実験方法は、ＤＣＡを使用してＰＤＨキナーゼ抑制剤が、間欠性跛行を有する患者と同程度に制限された血流を有する麻酔された犬の骨格筋を収縮させた場合に疲労速度を減少させることができることを証明するものである。こうして、以下に記載された方法は、ＰＤＨを活性化することができる薬剤および特にＰＤＨキナーゼを抑制することができる薬剤が、間欠性跛行を治療することに有用であることを証明するものである。ＰＤＨキナーゼを抑制する好ましい薬剤は、例えばジクロロ酢酸、その誘導体および塩を包含する。誘導体は、例えばエステル誘導体を包含する。適当なエステルは、例えばアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキルおよびフェニルアルキルエステルであり、この場合フェニル成分は場合によっては置換されていてもよい。本発明の詳細な実施態様において、四肢における虚血の治療のための医薬品を調製するためおよび特に間欠性跛行の治療のための医薬品を調製するために、式Ｉ［式中：Ｒは、水素、（１〜１０Ｃ）アルキル、（３〜１０Ｃ）シクロアルキル、（３〜１０Ｃ）シクロアルキル（１〜１０Ｃ）アルキル、フェニル（１〜１０Ｃ）アルキル｛この場合、フェニル成分は場合によっては１つまたはそれ以上の置換基を有していてもよい｝から選択される］の化合物またはその製薬学的に認容性の塩の使用が提供される。フェニル成分の場合による置換基のためのものの例は、例えばハロゲン、（１〜４Ｃ）アルキル、（３〜６Ｃ）アルケニル、（１〜４Ｃ）アルコキシ、シアノ、トリフルオロメチル、ニトロ、カルボキシ、アミノ、（１〜４Ｃ）アルキルアミノ、炭素原子６個までのジアルキルアミノ、（１〜４Ｃ）アルキルチオ、（１〜４Ｃ）アルキルスルフィニル、（１〜４Ｃ）アルキルスルホニルおよび（１〜４Ｃ）アルキレンジオキシから独立に選択されたものを包含する。フェニル成分に存在してもよい場合による置換基のための詳細なものは、例えば：ハロゲンには、フッ素、塩素および臭素；アルキルには、メチル、エチルおよびプロピル；アルケニルには、アリルおよび２−メチル−１−プロペニル；アルコキシには、メトキシ、エトキシおよびプロポキシ；アルキルアミノには、メチルアミノおよびエチルアミノ；ジアルキルアミノには、ジメチルアミノおよびジエチルアミノ；アルキルチオには、メチルチオおよびエチルチオ；アルキルスルフィニルには、メチルスルフィニルおよびエチルスルフィニル；アルキルスルホニルには、メチルスルホニルおよびエチルスルホニル；およびアルキレンジオキシには、メチレンジオキシおよびイソプロピレンジオキシを包含する。Ｒの詳細なものは、例えば：アルキルには、（１〜６Ｃ）アルキル、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ペンチルまたはヘキシル；フェニルアルキルには、フェニル（１〜４Ｃ）アルキル、例えばベンジル、フェニルエチルまたはフェニルプロピル；シクロアルキルには、（３〜６Ｃ）シクロアルキル、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシル；シクロアルキルアルキルには、（３〜６Ｃ）シクロアルキル（１〜４Ｃ）アルキル、例えばシクロプロピルメチル、シクロペンチルメチル、シクロヘキシルメチルまたは２−（シクロヘキシル）エチルを包含する。本発明の１つの実施態様において、この化合物は、Ｒが水素であるような式Ｉのものまたはその製薬学的に認容性の塩である。更に、本発明の実施態様において、この化合物は、式Ｉのものであり、この場合Ｒは（１〜１０Ｃ）アルキル、（３〜１０Ｃ）シクロアルキル、（３〜１０Ｃ）シクロアルキル（１〜１０Ｃ）アルキルおよびフェニル（１〜１０Ｃ）アルキルから選択され、この場合フェニル成分は場合によっては１つまたはそれ以上の置換基を有していてもよい。特に、好ましくかつ詳細なものは、上記のものを包含する。本発明による適当な製薬学的に認容性の塩は、製薬学的に認容性のカチオンを供給する塩基で形成されたものを含有する。適当な塩基は、アルカリ金属塩（例えばナトリウムまたはカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えばカルシウムまたはマグネシウム塩）、アンモニウム塩または生理学的に認容性のカチオンを供給する有機塩基との塩、例えばメチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ピペリジンもしくはモルホリンとの塩を包含する。本発明によるこの化合物は、構造的に類似の化合物の調製に適用可能であることが既に公知である有機化学の標準的な方法によって得られることもできる。式Ｉの化合物またはその製薬学的に認容性の塩の調製のためのこのような方法は、次の好ましい方法によって詳説され、この場合Ｒは上記で定義されたいかなる意味をも有する。こうして、式Ｉの化合物［この場合、Ｒは水素以外のものである］は、カルボン酸をエステル化するのに使用される標準的な条件下で式Ｉ（Ｃｌ₂ＣＨＣＯ₂Ｒ）［式中、Ｒは水素（即ちジクロロ酢酸）である］を式ＲＯＨの化合物と反応させることによって調製されることができる。こうして、この反応は、一般に、酸触媒の存在下および通常、適当な溶剤の存在下で実施される。このアルコールそれ自体は、溶剤として使用されてもよいことが認識されている。適当な触媒は、鉱酸、例えば濃硫酸または塩酸および有機酸、例えばｐ−トルエンスルホン酸を包含する。適当な溶剤は、不活性炭化水素、例えばトルエンを包含する。この反応は、過剰のアルコール（ＲＯＨ）を使用することおよび／または共沸蒸留またはモレキュラーシーブの使用により反応の経過中に発生した水を除去することによって促進することができる。また、Ｒが水素以外のものである式Ｉの化合物は、脱水剤の存在下で式ＲＯＨの相当するアルコールとジクロロ酢酸の反応によって調製することもできる。適当な脱水剤は、例えばジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾールおよびジエチルアゾジカルボキシレート／トリフェニルホスフィンを包含する。この反応は、周囲温度から反応混合物の反射温度までで不活性溶剤、例えば炭化水素溶剤（例えばトルエン）中で実施されることができる。ジクロロ酢酸およびその塩は、一般に入手可能であり、かつ商業的に入手可能である。式Ｉの化合物の製薬学的に認容性の塩が必要とされる場合には、例えば（生理学的に認容性のカチオンを供給する）適当な塩基と前記化合物の反応によって、またはいずれの他の常用の塩の形成方法によって得られることができる。幾つかの場合に、この化合物は、塩が（生理学的に認容性のアニオンを供給する）適当な酸とこの化合物の反応によって調製されてもよいように、塩基性基または成分に近くともよい。上記のように、本発明による化合物は、四肢における虚血の治療に使用されることができかつ特に間欠性跛行の治療に使用されることができる。疾病や医学的状態、例えば間欠性跛行の治療に使用される場合には、式Ｉの化合物（またはその製薬学的に認容性の塩）は、例えば体重ｋｇあたり０．０１〜５００ｍｇの一般的範囲内の投与量は受容されるので、経口的に、静脈内にまたは幾つかの他の医学的に認容性の経路によって投与されると考えられる。考えられる投与量の例は、体重ｋｇあたり３５〜５０ｍｇの一般的な範囲内のものである。しかしながら、投与される正確な投与量は、疾病の性質および重さ、治療される患者の年齢および性別ならびに投与経路によって必然的に変化することが理解される。一般に、式Ｉの化合物（またはその製薬学的に認容性の塩）は、通常、製薬学的組成物、即ち製薬学的に認容性の希釈剤または担体と一緒の形で投与され、かつこのような化合物は、本発明の他の特徴として提供される。この化合物は、治療されるべき疾病、例えば四肢における虚血を治療するのに有効な量で存在する。本発明による製薬学的組成物は、種々の投与形であってもよい。例えば、経口投与のための錠剤、カプセル、溶液または懸濁液形；直腸投与のための座薬形；非経口投与のための、例えば静脈内または筋肉内注入による無菌液または懸濁液形であってもよい。組成物は、刊行物においてよく知られている製薬学的に認容性の希釈剤および担体を使用して常法によって得られることができる。経口投与のための錠剤およびカプセルは、常用のコーティング、例えば腸溶コーティング（例えば酢酸フタル酸セルロースを基礎としたもの）で形成され、胃中で式Ｉ（またはその製薬学的に認容性の塩）の活性成分の溶解を最小限にするかまたは不快な味を遮蔽することができる。ところで、本発明は、更に、付記した、制限されない実験方法を参考にすることにより記載される。次の実験方法において、ＰＤＨキナーゼ抑制剤が間欠性跛行を有する患者と同程度に制限された血流を有する麻酔した犬の骨格筋を収縮させた際に疲労速度を減少させることができる場合、ＰＤＨキナーゼ抑制剤ジクロロアセテートを使用して測定した。ＤＣＡの適当な投与量は、これらを３０〜３００ｍｇ・ｋｇ^-1の範囲内で包含する。引続く実験方法において、ＤＣＡをジクロロ酢酸のナトリウム塩として（３００ｍｇ・ｋｇ^-1の１回量で）投与した。実験方法メスのオールダリーパークビーグル（Alderley Park Beagle)犬を、ペントバルビトンナトリウム（４５ｍｇｋｇ^-1、静脈内、サガタル(Sagatal.)）で麻酔を導入する３０分前にモルヒネ（１０ｍｇ、筋肉内）を予め投薬した。それぞれの犬に気管内チューブを挿管しかつ陽圧呼吸ポンプ（型式１６／２４、パルマーバイオサイエンス社(Palmer Bioscience)）を使用して室内気で人工的に通気した。通気を、毎分１７回の脈拍速度および脈拍容量２５０ｍｌで、室内気で開始した。直腸温度を常に監視し、かつ恒温加熱ブランケット（イギリス、ケント、エデンブリッジ(Edenbridg e)に在るハーバードインスツルメンツ社(Harvard Instruments)）で保持した（範囲３６．２℃〜３８．６℃）。外科手術左外頚静脈に、注入ポンプ（インジェクトマト(injectomat)Ｓ、フレセニウス社(Fresenius)、ビリールス(Villiers)、フランス）を使用して、麻酔薬の連続投与（５〜６ｍｌ／時の速度でペントバルビトンナトリウム１２ｍｇ／ｍｌ）のためのカニューレを挿入した。右上腕動脈にカニューレを挿入し、この動脈を圧力変換器に接続した。全圧を、ＤＣブリッジ直流増幅器（レクトロメト(Lectrom ed)ＭＴ８Ｐ、セントペーター社（St．Peter）、ジャージー）に取付けられた歪ゲージマノメータ（ＰＤＣＲ７５、ダルク社(Druck Ltd)、バレンディット(Bare ndeecht)、オランダ）を使用して測定した。圧変換器を、水銀柱を使用してそれぞれの実験開始時に較正した。脈拍数を、この圧力信号から電気的に導き出した。左上腕動脈に、動脈血試料の採取のためのカニューレを挿入し、かつ動物の血液ガスの状態を監視するために使用した（２８０血液ガスシステム、チバ・コーニング社(Chiba Corning)、メドフィールド(Medfield)、M.A.、米国）。右前肘静脈に、体外環流回路の接続の３０分前に与えられるヘパリンの注入（１ｉｕｋｇ−１分−１、マルチパリン(Mul tiparin)）のためのカニューレを挿入した。左の前肘静脈に、通常の範囲内に動脈のｐＨを保持するための１ＭＨＣＯ３−（ポリヒューサ(Polyfusor)、フレセニウムヘルスケア社(Fresenius Healthcare)、バジンストーク(Basingstoke )、イギリス）の投与のためのカニューレを挿入した。両肢の薄筋を、ジアルテミー（Ｖ．Ｉ．Ｃ．３、ザゲニト・ユリナリ社(The Genito-Urinary Mfg Co Ltd)、イギリス）およびブラントジセクション技術を使用して露出した。双方の後肢の薄筋を、露出させた後、薄筋の動脈供給および静脈環流のみを残して血管的に分離させた。深部の大腿および膝窩動脈ならびに静脈の間の大腿動脈および静脈のこの全ての枝を達成するために、薄筋を供給する枝を除いて結紮した。中央の大腿の尾動脈にカニューレを挿入し、かつカニューレをその先端が薄筋静脈の遠位に位置するように大腿静脈中へ進めた。膝窩動脈を、四肢の下部および深部からの静脈環流を防止するために中央の伏在動脈の遠位で縛った。大腿または伏在動脈から発生するおよび薄筋から発生していない全ての他の枝を縛った。両脚の膝窩動脈にカニューレを挿入し、薄筋の環流圧を記録するために圧変換器を接続した。閉鎖神経を同定し、小部分を切開して外し、中枢で破壊した。刺激電極を、それぞれの神経の遠位部分に配置した。筋肉の収縮を、０．１ミリ秒の持続期間、１０Ｖ、０．３〜３Ｈｚの刺激パラメータを使用して開始した。この筋肉を、その起点および付着点で切開して外した。頑強な糸（７５％ポリエステル／２５％木綿）をアンカーとして役に立つ固定ポストに取付けた筋肉の起点の腱に取付けた。付着点の腱に取付けた糸を、等長性張力を記録するために外力変換器（ＦＴＣ１０、グラス社(Grass)、クインシー(Quincy)、M.A.、米国）に取付けた。筋肉の疲労を、等式：（疲労）＝［（最大張力）−（終末張力）］／（最大張力）によって測定した。左薄筋への血流を、大腿動脈の周囲に配置された電磁気の流量プローブ（１０〜１４ｍｍサーキュムフェレンス(circumference)、カロライナメディカルエレクトロニクス社(Carolina Medical Electronics)、キング、ノースカロライナ、米国）で測定した血流での筋肉中の収縮中に変化させた。ゼロの血流を流量プローブに対して遠位に配置されたスネアオクルダーによって測定した。流量プローブの原位置での較正は、犬自体の血液を使用して実験終了時に完了した。右薄筋への血流を一定の速度で固定した。３０分間のヘパリンの注入（静脈内１ｉｕｋｇ−１分−１）に続き右大腿動脈に近位および遠位にカニューレを挿入し、ローラ環流ポンプ（ミニプラス(miniplus)３、ギルソン社(G ilson)、ビリールスレベル(Villiers le bel)、フランス）を取付けた。右薄筋を、動脈血圧に合わせるのに十分である一定の流量速度でポンプ環流した。約３０分の平衡時間を、その時間中に血液ガスを測定しかつ必要に応じて補正することにより、実験計画の開始前に割当てた。全てのパラメータを８チャンネルチャート式記録計（グラフテックラインアルコーダ(Graft ech Linearcoder)、Ｍｋ８ＷＲ３５００、ナントウィッチ(Nantwich)、イギリス）に記録した。筋肉の疲労がＤＣＡでの処理の結果、４６．５％（±３．６％）から２５．０％（±３．２％）に減少することが見出された。実験記録動物をＤＣＡ処理群と賦形剤（等張食塩水）処理群とに分割した。ＤＣＡまたは賦形剤を手術の完了後に一定の注入により与えた。４５分後に収縮を開始させた。筋肉の疲労を通常および限られた流量の筋肉の双方で測定した。動脈血試料を上腕動脈から採取し、静脈血試料を静止時、収縮中および次の回復中に、それぞれの薄筋から採取した。収縮時間は、３Ｈｚの刺激での２０分間であった。血液試料（０．４ｍｌ）を血液ガス分析のために採取し、かつ直ちに分析した。記録したパラメータは、ｐＨ、ｐＣＯ２、ｐＯ２、酸素飽和度および全ヘモグロビンである。更なる試料（０．１ｍｌ）をラクテート、グルコースおよび非エステル化脂肪酸（ＮＥＦＡ）濃度の分析のために採取した。分析方法これらの試料を、３．２％クエン酸三ナトリウム０．０５ｍｌ中に採取し、直ちに遠心分離した（遠心分離機５４１５、エッペンドルフ社(Eppendorf)、１３０００ｒｐｍで５分間）。血漿を直ちに除去し、それぞれアッセイのためにアリコートを得た。ラクテートの分析（試薬ラクテートキット、シグマダイアグノステイクス社(Sigma Diagnostics)）を直ちに実施した。グルコース分析のための血漿試料を氷上に保ち、実験終了時に測定した（グルコースオートスタット（ autostat）ＧＡ１１２０、クランドン社(Clandon)）。ＮＥＦＡのための血漿試料を後の分析のために凍結させた（ＮＥＦＡＣキット、ＡＣＳ−ＡＣＯＤ法、ワコー社(Wako)）。回復試料を、血圧および血流測定値が基礎値で戻された場合に、通常１５分で採取し、次いで刺激を終結させた。筋肉代謝引続き、静止時の血液試料および薬／賦形剤注入後の静止時の筋肉生検材料（６ｍｍ径ベルグストロム(Bergstrom)針、ステイレ(Stille)、スウェーデンおよび６ｍｍ径アレンダレ(Allendale)針、エディンバラ、スコットランド）を、それぞれの筋肉から採取した。２０分間の刺激後、筋肉を依然として刺激しながら、凍結型締し、筋肉の細部を運動させ、液体窒素中で凍結させた（全方法は、１秒以内に凍結させた筋肉の上層で６秒未満を要した）。筋肉試料を、一部を凍結乾燥して分析する前に液体窒素中で貯蔵した。筋肉試料を２つの部分に分割し、一方はＡＴＰ、ホスホクレアチン（ＰＣｒ）、クレアチン（Ｃｒ）および筋肉内ラクテートの分析のためのものである（Harr is，R他、Scand．Journal Clin Lab Invest.、第33巻、109〜120(1974).）。筋肉の他の部分は、液体窒素中に湿式貯蔵させた。簡単にいえば、筋肉の最初の部分を凍結乾燥し、目で見て結合組織および血液を切開して外し、その後粉末にし、氷冷却された過塩素酸（０．５Ｍ）中で抽出し、炭酸水素カリウム（２．２Ｍ）中で中和した。グリコーゲン含量をHarris他、1974（上記参照）によって記載された方法を使用して分析評価した。凍結乾燥した抽出物でアセチルカルニチン、遊離カルニチンを、Cederblad他、Anal．Biochem.、第185巻、274〜278(1990)．によって記載された方法により、Constantin Teodosiu，D他、“A sensitive radioisotopic assay of pyruvat e dehydrogenase complex inhuman muscle tissue”、Anal. Biochem.、第198巻、347〜351(1991)．の方法を使用して湿潤組織の試料からのＰＤＨ活性（静止時および運動活性時および全体）によって分析評価した。この方法もまた、Department of Clinical Chemistry 、Karolinska Institute、Huddinge University Hospital、S-141 86 Huddinge 、スウェーデンからのDumitru Constantin-Teodosiu、博士論文“Regulation of pyruvate dehydrogenase complex activity and acetyl group formation in s keletal muscle during exercise”、ストックホルム 1992年によって記載されている。Ｐｃｒとラクテートの変化は、ＤＣＡにより減少された。アセチル基の有効性は、ＤＣＡ処理群において静止時および収縮中の双方（ＲＦ筋肉）でより高くなった。完全に変換したＰＤＣは、ＰＤＣを通じてピルベートのより大きな流れを考慮し、従ってＡＴＰ再生への嫌気性寄与を減少させ、ラクテートの集積を最小限にする。特に、上記研究により、静止時に増加するアセチル基の有効性がＡＴＰ再生へのより大きな酸化的寄与となり、嫌気性代謝の実質上の減少となり、かつ虚血条件中に骨格筋の収縮性の機能の明らかな改善をもたらすことが証明された。それゆえ、ＤＣＡの主要な作用は、乳酸の集積および嫌気性代謝の組込まれた有害性の効果を減少させることが考えられる（けれどもこの理論には縛られたくはない）。この研究は、Timmons，J．A.他、J．Clin．Invest．、第97巻、第3号、879〜8 83(1996年2月)によって論じられており、参考文献として本明細書中に組込まれている。治療上または予防上の使用のための本発明によるこの化合物を示すのに適当である例証となる製薬学的な投与形は、次の錠剤およびカプセル処方物を包含し、これは薬学の技術において十分に公知の常法によって得ることができかつヒトにおける治療上または予防上の使用に適当である：− (a) 錠剤Ｉｍｇ／錠剤化合物Ｚ^* １．０ラクトースＰｈ．Ｅｕｒ．９３．２５クロスカルメロースナトリウム４．０トウモロコシデンプンペースト０．７５（５ｗ／ｖ％水性ペースト）ステアリン酸マグネシウム１．０ (b) 錠剤ＩＩｍｇ／錠剤化合物Ｚ^* ５０ラクトースＰｈ．Ｅｕｒ２２３．７５クロスカルメロースナトリウム６．０トウモロコシデンプン１５．０ポリビニルピロリドン２．２５（５ｗ／ｖ％水性ペースト）ステアリン酸マグネシウム３．０ (c) 錠剤ＩＩＩｍｇ／錠剤化合物Ｚ^* １００ラクトースＰｈ．Ｅｕｒ．１８２．７５クロスカルメロースナトリウム１２．０トウモロコシデンプンペースト２．２５（５ｗ／ｖ％水性ペースト）ステアリン酸マグネシウム３．０ (d) カプセルｍｇ／カプセル化合物Ｚ^* １０ラクトースＰｈ．Ｅｕｒ．４８８．５ステアリン酸マグネシウム１．５注^* 活性成分の化合物Ｚは、式Ｉの化合物またはその塩、例えばＤＣＡである。錠剤組成物(a)〜(c)には、常法によって、例えば酢酸フタル酸セルロースで腸溶コーティングをしてもよい。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ジェームスアーキボールドティモンズイギリス国ノッティンガムエヌジー７２アールディーユニヴァーシティパーク（番地なし）ユニヴァーシティオブノッティンガム内 (72)発明者ポールレオナードグリーンハフイギリス国ノッティンガムエヌジー７２アールディーユニヴァーシティパーク（番地なし）ユニヴァーシティオブノッティンガム内 (72)発明者サイモンマーティンパウチャーイギリス国チェシャーエスケー10 ４ティージーマッククレスフィールドオールダーレィパーク（番地なし)

Claims

【特許請求の範囲】１．四肢における虚血の治療のために医薬品を製造するための、ピルベートデヒドロゲナーゼを活性化させる薬剤の使用。２．該医薬品が間欠性跛行の治療のためのものである、請求項１に記載の使用。３．該薬剤がＰＤＨキナーゼを抑制する薬剤を含有する、請求項１または２に記載の使用。４．該薬剤がジクロロ酢酸、その誘導体またはその塩を含有する、請求項１から３までのいずれか１項に記載の使用。５．該薬剤が式Ｉ［式中、Ｒは水素、（１〜１０Ｃ）アルキル、（３〜１０Ｃ）シクロアルキル、（３〜１０Ｃ）シクロアルキル（１〜１０Ｃ）アルキルおよびフェニル（１〜１０Ｃ）アルキル｛この場合、フェニル成分は場合によっては１つまたはそれ以上の置換基を有していてもよい｝から選択されている］の化合物またはその製薬学的に認容性の塩を含有する、請求項１から３までのいずれか１項に記載の使用。６．フェニル成分が場合によってはハロゲン、（１〜４Ｃ）アルキル、（３〜６Ｃ）アルケニル、（１〜４Ｃ）アルコキシ、シアノ、トリフルオロメチル、ニトロ、カルボキシ、アミノ、（１〜４Ｃ）アルキルアミノ、炭素原子６個までのジアルキルアミノ、（１〜４Ｃ）アルキルチオ、（１〜４Ｃ）アルキルスルフィニル、（１〜４Ｃ）アルキルスルホニルおよび（１〜４Ｃ）アルキレンジオキシから選択された１つまたはそれ以上の置換基を有していてもよい、請求項５に記載の使用。７．Ｒが（１〜１０Ｃ）アルキル、（３〜１０Ｃ）シクロアルキル、（３〜１０Ｃ）シクロアルキル（１〜１０Ｃ）アルキルおよびフェニル（１〜１０Ｃ）アルキルから選択されており、この場合、フェニル成分は場合によってはハロゲン、（１〜４Ｃ）アルキル、（３〜６Ｃ）アルケニル、（１〜４Ｃ）アルコキシ、シアノ、トリフルオロメチル、ニトロ、カルボキシ、アミノ、（１〜４Ｃ）アルキルアミノ、炭素原子６個までのジアルキルアミノ、（１〜４Ｃ）アルキルチオ、（１〜４Ｃ）アルキルスルフィニル、（１〜４Ｃ）アルキルスルホニルおよび（１〜４Ｃ）アルキレンジオキシから選択された１つまたはそれ以上の置換基を有していてもよい、請求項５または６に記載の使用。８．Ｒが水素である、請求項５から７までのいずれか１項に記載の使用。９．四肢における虚血の治療のために医薬品を製造するための、ジクロロ酢酸、その塩およびジクロロ酢酸のエステルから選択された薬剤の使用。１０．間欠性跛行の治療のための医薬品を製造するための、請求項９に記載の使用。１１．該薬剤がジクロロ酢酸およびその塩から選択される、請求項９または１０に記載の使用。１２．該薬剤がジクロロ酢酸のナトリウム塩である、請求項１１に記載の使用。１３．末梢血管性疾病の治療のために医薬品を製造するための、請求項１から１２までのいずれか１項に定義された薬剤の使用。１４．製薬学的組成物において、製薬学的に認容性の希釈剤または担体と共に、四肢における虚血を治療するのに有効な量で、請求項１または３または５から８までのいずれか１項に記載の薬剤を含有することを特徴とする、製薬学的組成物。１５．製薬学的組成物において、間欠性跛行を治療するための有効量で、ジクロロ酢酸またはその塩を含有することを特徴とする、製薬学的組成物。