JPH11501806A

JPH11501806A - 減数分裂の刺激

Info

Publication number: JPH11501806A
Application number: JP8526543A
Authority: JP
Inventors: グダール，エーリング; グレーテビュウスコフ，アンネ; クリスティアングレウンバルド，フレデリーク; ノルドホルム，ラーズ
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Novo Nordisk AS
Priority date: 1995-03-06
Filing date: 1996-03-06
Publication date: 1999-02-16
Also published as: AU4784596A; PL322106A1; NO974089L; BR9607673A; US5830757A; CZ279797A3; HUP9800731A2; AU717180B2; HUP9800731A3; EP0813595A1; MX9706565A; KR19980702624A; WO1996027658A1; CA2214126A1; NO974089D0; RU2188006C2

Abstract

(57)【要約】本発明は、コレステロールの生合成を妨害する特定の化学化合物の使用並びに生体内、生体外及び試験管内で卵母細胞及び雌性生殖細胞の減数分裂を刺激するための前記化合物を含む薬剤に関する。

Description

【発明の詳細な説明】減数分裂の刺激発明の分野本発明は、生殖細胞において減数分裂を誘導する方法並びに生体内、生体外及び試験管内で減数分裂を刺激するための特定の化学的化合物及び該化合物を含む薬剤の使用に関する。発明の背景減数分裂は性的生殖がベースである生殖細胞の特有かつ最終的出来事である。減数分裂は２つの減数分裂の分割を含む。最初の分割の間、母方及び父方の遺伝子の間の交換が、染色体の対が２つの娘細胞に分離する前におこる。これらは半分の数（１ｎ）の染色体及び 2cDNAのみを含む。第２の減数分裂分割は、DNA合成なしに進行する。それゆえこの分割は、1cDNAのみを有する半数体を形成する。減数分裂は雄性及び雌性の生殖細胞において類似するが、卵子及び精子に導く時間スケジュール及び分化過程がかなり異なる。全ての雌性生殖細胞は生涯の初期、しばしば出生前に第１の減数分裂の前期に入るが、思春期後の排卵までに前期の卵母細胞後半（ジクチエート（dictyate）状態）に全てが停止される。これにより、生涯早期から、雌性は、その保存物が廃出されるまで要求される卵母細胞の保存物を有する。雌性の減数分裂は受精後まで終わらず、唯一の卵子及び生殖細胞当り２つの不稔的極体を生ずる。対照的に、雄性生殖細胞のいくつかのみが思春期から減数分裂に入り、生涯全体を通して生殖細胞の幹集団を残す。いったん開始すると、雄性細胞の減数分裂は、大きな遅延なく進行し、４つの精子を作り出す。雄性及び雌性の減数分裂の開始を制御するメカニズムは少し知られているだけである。卵母細胞において、新しい研究は、小胞のプリン、ヒポキサンチン又はアデノシンが減数分裂の停止の原因であり得ることを示す（Downs，S.Mら、Dev.Biol．82(1985)45 4〜458；Eppig，J.J．ら、Dev.Biol．119（1986）313〜321；及びDown，S.M.Mol .Reprod.Dev．35（1993）82〜94）。拡散性減数分裂制御物質の存在は、胎児マウス性腺の培養系内でByskovらにより最初に発表された(Byskov，A.GらDev.Biol ．52(1976)193〜200)。減数分裂活性化物質(MAS)は、減数分裂が進行中である胎児マウス卵巣により分離され、そして減数分裂防止物質(MPS)は、休止中の非減数分裂生殖細胞で、形態学的に分化した精巣から放出された。それは、MAS及び MPSの相対濃度が雄性及び雌性生殖細胞の減数分裂の開始、停止及び再開を制御することを示唆した(Byskov，A.Gら、The Physiology of Reproduction(eds．Kn obil，E．and Neill，J.D.，Raven Press，New York(1994)))。明らかに、減数分裂が制御され得るなら、生殖が制御され得る。これにより、卵母細胞の減数分裂の刺激が要求されるなら、これを達成する１つの考えられる方法は、卵母細胞の環境に存在する MASの量が存在する MPSの量より多いことを確実にすることである。これは原則として、MASを投与することにより、MASの分泌を刺激することにより、又は既に存在する MASのバイオトランスフォーメーションをブロックすることにより行われ得る。発明の概要コレステロールの生合成における中間体として知られている特定のステロールの投与が減数分裂の刺激を導くことが初期に見い出されている。驚くことに、コレステロールの生合成を妨害することが知られている特定の化合物の投与が減数分裂の刺激も導き得ることが現在、判明した。その根底にあるメカニズムは十分に理解されていないが、少くともいくつかの場合、その妨害はコレステロールの１以上の前駆体の生物変換に関連する１以上の酵素の阻害を含む。阻害の結果として、阻害されたステップに先んずるステップにおいて形成される前駆体の濃度は増加するだろう。これらの前駆体の１以上は、直接的又は間接的のいずれかで減数分裂の刺激を引きおこす。従って、その最も広い態様において、本発明は、生殖細胞の減数分裂を刺激する方法であって、内因性減数分裂活性化物質の減数分裂が誘導されるレベルまでの蓄積を引きおこす有効量の化合物を、生体内、生体外又は試験管内で前記細胞に投与することを含むことを特徴とする方法に関する。好ましい実施形態によれば、本発明は、哺乳動物生殖細胞の減数分裂を刺激する方法に関する。他の好ましい実施形態によれば、本発明は、ヒト生殖細胞の減数分裂を刺激する方法に関する。他の好ましい実施形態によれば、本発明は、卵母細胞の減数分裂を刺激する方法に関する。他の好ましい実施形態によれば、本発明は、雄性生殖細胞の減数分裂を刺激する方法に関する。他の好ましい実施形態によれば、本発明は、雌性に用いるための避妊方法に関する。他の好ましい実施形態によれば、本発明は、ゴナドトロピンの排卵のピークがおこる場合に増加された数の減数分裂卵母細胞が利用できるように減数分裂卵母細胞の形成を刺激することにより、不妊症を治療する方法に関する。他の好ましい実施形態によれば、本発明は、雄性生殖細胞からの精子の形成を刺激することにより、雄性において不妊症を治療する方法に関する。他の好ましい実施形態によれば、本発明は、生殖細胞の減数分裂を刺激する方法であって、本明細書の実施例に記載される方法の少くとも１つに従いテストした場合に、減数分裂活性化特性を示す化合物を投与することを含むことを特徴とする方法に関する。他の好ましい実施形態によれば、本発明は、アンホテリシンＢを投与することを含む生殖細胞の減数分裂を刺激する方法に関する。他の好ましい実施形態によれば、本発明は、アミノグアニジンを投与することを含む生殖細胞の減数分裂を刺激する方法に関する。他の好ましい実施形態によれば、本発明は３β，５α，６β−トリヒドロキシコレスタンを投与することを含む生殖細胞の減数分裂を刺激する方法に関する。他の好ましい実施形態によれば、本発明は、メラトニンを投与することを含む生殖細胞の減数分裂を刺激する方法に関する。他の好ましい実施形態によれば、本発明は、メラトニン誘導体を投与することを含む生殖細胞の減数分裂を刺激する方法に関する。他の好ましい実施形態によれば、本発明は、６−クロロメラトニンを投与することを含む生殖細胞の減数分裂を刺激する方法に関する。他の好ましい実施形態によれば、本発明は、５−メトキシトリプタミンを投与することを含む生殖細胞の減数分裂を刺激する方法に関する。他の好ましい実施形態によれば、本発明は、メラトニンアゴニストを投与することを含む生殖細胞の減数分裂を刺激する方法に関する。他の好ましい実施形態によれば、本発明は、以下のリストから選択されるいずれかの化合物を投与することを含む生殖細胞の減数分裂を刺激する方法に関する：４α−シアノメチル−５α−コレスタン−３β−オール；４α−ニトロ−５α−コレスタン−３β−オール；４α−アミノ−５α−コレスタン−３β−オール；４α−ホルミル−５α−コレスタン−３β−オール；４α−アミノメチル−５α−コレスタン−３β−オール；４α−（２−シアノ）エチニル−５α−コレスタン−３β−オール；４−アレニル−５α−コレスタン−３β−オール；４α−オキシラン−５α−コレスタン−３β−オール；４α−（３，３−ジクロロ）ビニル−５α−コレスタン−３β−オール；４α−（３，３−ジブロモ）ビニル−５α−コレスタン−３β−オール；４α−（ジフルオロメチル）−５α−コレスタン−３−β−オール；４−シクロドデシル−２，６−ジメチルモルホリン；４−トリデシル−２，６−ジメチルモルホリン；４−ドデシル−２，６−ジメチルモルホリン；４−〔３−〔４−（１，１−ジメチルエチル）フェニル〕−２−メチルプロピル〕−２，６−ジメチルモルホリン；４−〔３−〔４−（１，１−ジメチルエチル）フェニル〕−２−メチルプロピル〕−２，６−ジメチルモルホリン−Ｎ−オキシド；シス−４−〔３−〔４−（１，１−ジメチルプロピル）フェニル〕 −２−メチルプロピル〕−２，６−ジメチルモルホリン；１−〔３−〔４−（１，１−ジメチルエチル）フェニル〕−２−メチルプロピル〕ピペリジン；８−アザ−４α，10−ジメチル−トランス−デカル−３β−オール；Ｎ−ベンジル−８−アザ−４α，10−ジメチル−トランス−デカル−３β−オール；Ｎ−ベンジル−８−アザ−４α，10−ジメチル−トランス−デカル−３β−オール−Ｎ−オキシド；Ｎ−（１，５，９−トリメチルデシル）−８−アザ−４α，10−ジメチル−トランス−デカル−３β−オール；Ｎ−（１−メチルドデシル）−８−アザ−４α，10−ジメチル−トランス−デカル−３β−オール；Ｎ−〔６−（４−tert−ブチルフェニル）−１，５−ジメチル〕ヘキシル−８− アザ−４α，10−ジメチル−トランス−デカル−３β−オール； 15−アザ−24−メチレン−Ｄ−ホモコレスタ−８，14−ジエン−３β−オール；４−クロロ−α−〔４−〔２−（ジエチルアミノ）エトキシ〕フェニル〕−α− （４−メチルフェニル）ベンゼンエタノール；１，４−ビス（２−クロロベンジルアミノメチル）シクロヘキサン；６−アミノ−２−ペンチルチオベンゾチアゾール； 24，25−イミノラノステロール；アミノトリアゾール；ニスタチン； 25−アザコレステロール； 25−アザ−24，25−ジヒドロチモステロール； 25−アザコレスタノール；（20Ｒ）−22，25−ジアザコレステロール；（20Ｓ）−22，25−ジアザコレステロール； 24−アザコレステロール； 25−アザ−24，25−ジヒドロラノステロール；及び 23−アザコレステロール。他の好ましい実施形態によれば、本発明は、減数分裂を誘導するための薬剤の調製のための、内因性減数分裂活性化物質の減数分裂が誘導されるレベルへの蓄積を引きおこす化合物の使用に関する。他の好ましい実施形態によれば、本発明は、減数分裂を誘導するための、薬剤の調製のための、本明細書の実施例に記載される方法の少くとも１つに従ってテストした場合に、減数分裂活性化特性を示す化合物の使用に関する。更なる好ましい実施形態によれば、本発明は、減数分裂を誘導するための薬剤の調製のためのアンホテリシンＢの使用に関する。更なる好ましい実施形態によれば、本発明は、減数分裂を誘導するための薬剤の調製のためのアミノグアニジンの使用に関する。更なる好ましい実施形態によれば、本発明は、減数分裂を誘導するための薬剤の調製のための３β，５α，６β−トリヒドロキシコレスタンの使用に関する。更なる好ましい実施形態によれば、本発明は、減数分裂を誘導するための薬剤の調製のためのメラトニンの使用に関する。更なる好ましい実施形態によれば、本発明は、減数分裂を誘導するための薬剤の調製のためのメラトニン誘導体の使用に関する。更なる好ましい実施形態によれば、本発明は、減数分裂を誘導するための薬剤の調製のための６−クロロメラトニンの使用に関する。更なる好ましい実施形態によれば、本発明は、減数分裂を誘導するための薬剤の調製のための５−メトキシトリプタミンの使用に関する。更なる好ましい実施形態によれば、本発明は、減数分裂を誘導するための薬剤の調製のためのメラトニンアゴニストの使用に関する。更なる好ましい実施形態によれば、本発明は、減数分裂を誘導するための薬剤の調製のための以下のリストから選択される化合物の使用に関する：４α−シアノメチル−５α−コレスタン−３β−オール；４α−ニトロ−５α−コレスタン−３β−オール；４α−アミノ−５α−コレスタン−３β−オール；４α−ホルミル−５α−コレスタン−３β−オール；４α−アミノメチル−５α−コレスタン−３β−オール；４α−（２−シアノ）エチニル−５α−コレスタン−３β−オール；４−アレニル−５α−コレスタン−３β−オール；４α−オキシラン−５α−コレスタン−３β−オール；４α−（３，３−ジクロロ）ビニル−５α−コレスタン−３β−オール；４α−（３，３−ジブロモ）ビニル−５α−コレスタン−３β−オール；４α−（ジフルオロメチル）−５α−コレスタン−３−β−オール；４−シクロドデシル−２，６−ジメチルモルホリン；４−トリデシル−２，６−ジメチルモルホリン；４−ドデシル−２，６−ジメチルモルホリン；４−〔３−〔４−（１，１−ジメチルエチル）フェニル〕−２−メチルプロピル〕−２，６−ジメチルモルホリン；４−〔３−〔４−（１，１−ジメチルエチル）フェニル〕−２−メチルプロピル〕−２，６−ジメチルモルホリン−Ｎ−オキシド；シス−４−〔３−〔４−（１，１−ジメチルプロピル）フェニル〕−２−メチルプロピル〕−２，６−ジメチルモルホリン；１−〔３−〔４−（１，１−ジメチルエチル）フェニル〕−２−メチルプロピル〕ピペリジン；８−アザ−４α，10−ジメチル−トランス−デカル−３β−オール；Ｎ−ベンジル−８−アザ−４α，10−ジメチル−トランス−デカル−３β−オール；Ｎ−ベンジル−８−アザ−４α，10−ジメチル−トランス−デカル−３β−オール−Ｎ−オキシド；Ｎ−（１，５，９−トリメチルデシル）−８−アザ−４α，10−ジメチル−トランス−デカル−３β−オール；Ｎ−（１−メチルドデシル）−８−アザ−４α，10−ジメチル−トランス−デカル−３β−オール；Ｎ−〔６−（４−tert−ブチルフェニル）−１，５−ジメチル〕ヘキシル−８− アザ−４α，10−ジメチル−トランス−デカル−３β−オール； 15−アザ−24−メチレン−Ｄ−ホモコレスタ−８，14−ジエン−３β−オール；４−クロロ−α−〔４−〔２−（ジエチルアミノ）エトキシ〕フェニル〕−α− （４−メチルフェニル）ベンゼンエタノール；１，４−ビス（２−クロロベンジルアミノメチル）シクロヘキサン；６−アミノ−２−ペンチルチオベンゾチアゾール； 24，25−イミノラノステロール；アミノトリアゾール；ニスタチン； 25−アザコレステロール； 25−アザ−24，25−ジヒドロチモステロール； 25−アザコレスタノール；（20Ｒ）−22，25−ジアザコレステロール；（20Ｓ）−22，25−ジアザコレステロール； 24−アザコレステロール； 25−アザ−24，25−ジヒドロラノステロール；及び 23−アザコレステロール。発明の詳細な記載減数分裂活性化又は刺激物質の存在は以前から知られていた。しかしながら、現在まで、減数分裂活性化物質の同定は知られていなかった。減数分裂に影響を与えることができるという予想はいくらかある。本発明の好ましい実施形態によれば、選択された化合物は減数分裂を刺激するのに用いられる。他の本発明の好ましい実施形態によれば、選択された化合物はヒトにおける減数分裂を刺激するのに用いられる。これにより、選択された化合物は、受精能制御剤として有望である。エストロゲン及び／又はゲスタゲンに基づく従来から用いられるホルモン避妊薬から知られる体細胞への通常の副作用は本発明では見い出されないであろうことが予想される。雌性における避妊薬として用いるために、卵母細胞において減数分裂の再開を時期尚早に誘導するように減数分裂が誘導され得、ここでそれらはゴナドトロピンの排卵ピークがおこる前に、成長中の小胞内になおある。女性において、減数分裂の再開は、例えば先んずる月経が終わった後１週間に誘導することができる。排卵された場合、結果として生ずる過剰成熟した卵母細胞はほとんど受精しないようである。その通常の月経サイクルは影響を受けないようである。この文脈において、培養されたヒト顆粒層細胞（小胞の体細胞）中のプロゲステロン合成は減数分裂誘導物質の存在により影響を受けず、他方、従来から用いられるホルモン避妊薬に用いられるエストロゲン及びゲスタゲンはプロゲステロン合成に逆影響を与える。雄性生殖細胞における減数分裂の刺激も証明されている。従って、本発明は、雄性における不妊症の治療にも役立ち得る。いずれの減数分裂活性化特性も有さないラノスタ−８，24−ジエン−３β−オール（ラノステロール）は、哺乳動物細胞におけるステロール合成における一次環化産物である。次のコレステロールの生合成は、その全てが酵素により制御される脱メチル化、酸化、還元及び二重結合の置換の様な一連のステップを通して進行する。これらのステップを制御する酵素のいくつかのみが単離され、キャラクタライズされている。コレステロール骨格で形成される一次産物は、ヒト小胞液から単離された減数分裂活性化化合物と同一である４，４−ジメチルコレスタ −８，14，24−トリエン−３β−オールである(AG Byskovら、Nature 374(1995) 559〜562)。次の14位における二重結合の還元は、雄牛テストから単離された減数分裂活性化化合物と同一である４，４−ジメチルコレスタ−８，24−ジエン− ３β−オールを生成する(AG Byskovら、Nature 374(1995)559〜562)。４位におけるメチル基の段階的除去は、その両方が減数分裂活性化特性を有する４−メチルコレスタ−８，24−ジエン−３β−オール及びコレスタ−８，24−ジエン−３β−オール（チモステロール）を生成する。次の８位から５位への二重結合の移動は、減数分裂活性化特性を有さないコレスト−５−エン−３β−オール（コレステロール）を生成する。上述の一連の反応において活性であるいずれの酵素の阻害も、減数分裂活性化特性を有する上流の中間体を蓄積させ、それにより存在する生殖細胞において減数分裂を誘導する。文献から知られているいくつかの化合物は、ラノスタ−８，24−ジエン−３β −オールのコレステロールへの生体内変換に関連する１以上の酵素についてのインヒビターとして記載されており、その分野が現在、報告されている(Mercer，E .I.Prog.Lipid Res ．32(1993)357〜416)。アンホテリシンは、真菌におけるエルゴステロール合成の後期のステップを妨害することが知られており(Coulon，J. ら、Can.J.Microbiol ．32（1982）738〜742)、抗真菌剤として臨床に用いられる。試験管内のラット肝臓において、コレスタントリオールは、コレステロールの生合成の中間体の４位の脱メチル化を妨害して、４，４−ジメチルコレスタ−８ −エン−３−オール及び４−メチルコレスタ−８−エン−３−オールの蓄積を誘導する(Scallen，T.J.ら、J.Biol.Chem. 246（1971）3168〜3174)。本発明の活性剤の投与されるべき量は、当業者により治療の目的に従って決定される。その量は、例えば問題の特定の薬剤、投与の特定の形態（例えば生体内、生体外、又は試験管内）及び他の要因によるであろう。活性剤を投与するための本発明による組成物は、錠剤、カプセル、粉体、溶液又は懸濁液の形態であり得る。その組成物において、活性剤は、当該技術に通常用いられる担体、アジュバント、及びビヒクルと組合わせることができる。生きている動物における全身的効果は、本発明による活性剤の経口投与により、又は注射もしくは注入により達成することができ、ここでその溶液は周知の技術に従って調製される。また、全身的効果は、本活性剤を含む粉体又はエーロゾルの吸息及び鼻の投与により達成することができる。単離された細胞、例えば卵母細胞又は雄性生殖細胞への本発明による活性剤の投与は、適切な種類の細胞を保持するために通常用いられる種類の培地中に細胞を保持し、その培地に活性剤を加えることにより達成することができる。本発明は以下の実施例により更に詳説されるが、それは保護の範囲を限定するものとして考慮されるべきでない。上述の記載及び以下の実施例に開示される特徴は、別個に又はそれらのいずれかの組合せのいずれかで、その異なった形態において本発明を具体化するための材料となり得る。実施例材料及び方法卵母細胞テストにおける減数分裂活性化物質のテスト動物未成熟の雌マウス(B6D2-F1、株 C57B1／6J)を制御された光（14時間明、10時間暗）及び温度下で任意に食物及び水を与えて維持した。動物が（出生後20〜22 日の年齢に相当する）13〜16グラムの体重に達した時に、それらに約20IU FSH及び 20IU LHを含むヒト閉経期ゴナドトロピン（Humegon，Organon，The Netherla nd）を単一注入（i.p.）した（Ziebe，Sら、Hum.Reprod．8（1993）385〜88）。 48時間後、その動物を頸を転位させて殺した。卵母細胞の収集及び培養卵巣を除去し、Hx培地（以下参照）中に入れ、外来組織からはずした。その収集及び培養培地は、４mMヒポキサンチン（Hx）、３mg／mlのウシ血清アルブミン、0.23mMのピルビン酸ナトリウム、２mMグルタミン、100Ｕ／mlのペニシリン、及び 100μｇ／mlのストレプトマイシン（全てSigma，USA）を含むイーグルの最少必須培地(Flow，USA)からなっている。この培地はHx培地と呼ばれる。同じ培地でHxがないものを対照培地として用いた。卵母細胞の減数分裂へのテスト化合物の影響を卵丘に被包された卵母細胞(CEO 、テストＡ）及び裸にした卵母細胞（DO、テストＢ）において研究した。27−ゲージ針を用いて、解剖顕微鏡下で卵巣の腔の小胞に穴をあけることにより、CEO を得た。均一のサイズの卵丘に被包された卵母細胞(CEO)を選択し、テストＡに用いる前に、それらの新鮮なHx培地中で３回、洗浄した。テストＢに用いるための卵丘細胞から遊離された卵母細胞、即ち裸にされた卵母細胞（DO）を、細孔口調節ピペットを通して静かに CEOを流すことにより、得た。テストＡにおいて、 CEO、テストＢにおいてDOを、対照培地で培養した対照を除いて表に示される濃度のテスト化合物を含む0.5mlのHx培地で、４−ウエルマルチ皿（Nunclon，Denm ark）内で培養した。各々のウエルには35〜50の卵母細胞を含ませた。表に示されるように、テストされるべき化合物の異なる濃度でテスト培養物を作った。その培養物を24時間、空気中で５％ CO₂と共に、37℃及び 100％湿度に維持した。卵母細胞、テストＣ（Ａ）及びＣ（Ｂ）のプライミングテストＣ（Ａ）及びＣ（Ｂ）を、卵母細胞をテストの開始５分〜３時間の範囲の一定期間（予備期間）、テスト化合物を含む培地中にのみ維持した他は、各々テストＡ及びテストＢのように行った。予備期間の後、卵母細胞を対照培地に移し、テスト開始後22時間まで、培養を続けた。卵母細胞の実験 24時間の培養期間を終えた後、卵核胞（GV）又は卵核胞破損（GVBD）及び極体を有するもの（PB）を、微分干渉対比装置を備えた倒立顕微鏡で計数した。卵母細胞の総数当りのGVBDを有する卵母細胞の割合（％）及びGVBD当りのPDを有する卵母細胞の割合（％）を計算した。MAS活性の単位として計算したテストＡ，Ｂ，Ｃ（Ａ）及びＣ（Ｂ）についての結果を、各々の例において表に示す。１MAS 活性単位、MASUは次のように定義される： MAS活性単位、MASUの数は次の通り計算される：実施例１コレスタン−３β，５α，６β−トリオールを用いる卵母細胞における減数分裂の活性化テスト化合物としてコレスタン−３β，５α，６β−トリオールを用いて、上述のようにテストＡ及びテストＢを行った。結果を表に示す。用いたコレスタン−３β，５α，６β−トリオールはSigma（St.Louis，USA）から得た。コレスタン−３β，５α，６β−トリオールは投与量に関連した様式で卵母細胞における減数分裂の再開を誘導することが表から明らかである。実施例２アミノグアニジン炭酸水素塩を用いる卵母細胞における減数分裂の活性化テスト化合物としてアミノグアニジン炭酸水素塩を用いて上述のようにテストＡ及びテストＢを行った。結果を表に示す。用いたアミノグアニジン炭酸水素塩は、Aldrich Chemical Co.,Inc.（Milwauk ee，Wisconsin）から得た。アミノグアニジン炭酸水素塩は、投与量に関連した様式で卵母細胞において減数分裂の回復を誘導することが表から明らかである。実施例３アンホテリシンＢを用いる卵母細胞における減数分裂の活性化テスト化合物としてアンホテリシンＢを用いて上述のようにテストＡ及びＢを行った。結果を表に示す。用いたアンホテリシンＢはBristol-Myers Squibbから得た。アンホテリシンＢが投与量に関連した様式で卵母細胞において減数分裂の回復を誘導することが表から明らかである。アンホテリシンは1.25μｇ／ml超の濃度で毒性である。50μｇ／mlまでの濃度をテストした。アンホテリシンＢでの卵母細胞のプライミング結果を表に示す。表から明らかなように、５分間のみ続くアンホテリシンＢへの露出はDO及び C EOの両方において、減数分裂の再開を開始するのに十分である。実施例４アンホテリシンＢを用いる雄性生殖細胞における減数分裂の活性化本テスト系は、胎児マウス性腺11.5（p.c.）日からなる。各々の胎児からの１つの性腺を対照として用い、他の１つのテスト性腺として用いた。培養期間の間に分化した性腺を、通常の培養条件下で、化学的に規定された培養培地中で６日間、培養した(Westergaardら、Fertil.Steril ．41（1984）377を参照のこと)。テスト性腺を培養した培養培地に、種々の量のアンホテリシンＢを表に示されるように加えた。培養期間の後、対照性腺は非減数分裂生殖細胞のみを含んでいた。染色後に顕微鏡により得られたテスト性腺での結果の半定量的評価を以下の表に示す。ここで、“−”は応答がないことを示し、“＋”，“++”及び“+++” は増加する応答を示す。用いたアンホテリシンＢは、Bristol-Myers，Squibbから得た。アンホテリシンＢは投与量に関連した様式で雄性生殖細胞における減数分裂を活性化することが表から明らかである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者グレウンバルド，フレデリーククリスティアンデンマーク国，デーコー−2950 ベドベーク，ドロニンゲンゲン 19 (72)発明者ノルドホルム，ラーズデンマーク国，デーコー−2730 ヘルレウ，コレガルドスベイ 18 アー

Claims

【特許請求の範囲】１．生殖細胞の減数分裂を刺激するための方法であって、減数分裂が誘導されるレベルまでの内因性減数分裂活性化物質の蓄積を引きおこす有効量の化合物を、生体内、生体外又は試験管内で前記細胞に投与することを含むことを特徴とする方法。２．前記生殖細胞が哺乳動物生殖細胞であることを特徴とする請求項１に記載の方法。３．前記生殖細胞がヒト生殖細胞であることを特徴とする請求項１に記載の方法。４．前記生殖細胞が卵母細胞であることを特徴とする請求項１に記載の方法。５．前記生殖細胞が雄性生殖細胞であることを特徴とする請求項１に記載の方法。６．前記内因性減数分裂活性化物質の蓄積を引きおこす化合物が、本明細書の実施例に記載される方法の少くとも１つに従ってテストした場合に減数分裂活性化特性を示す化合物であることを特徴とする請求項１に記載の方法。７．前記内因性減数分裂活性化物質の蓄積を引きおこす化合物が、アンホテリシンＢ、アミノグアニジン及び３β，５α，６β−トリヒドロキシコレスタンからなる群から選択されることを特徴とする請求項１に記載の方法。８．前記内因性減数分裂活性化物質の蓄積を引きおこす化合物がメラトニンであることを特徴とする請求項１に記載の方法。９．前記内因性減数分裂活性化物質の蓄積を引きおこす化合物が６−クロロメラトニンであることを特徴とする請求項１に記載の方法。 10．前記内因性減数分裂活性化物質の蓄積を引きおこす化合物が５−メトキシトリプタミンであることを特徴とする請求項１に記載の方法。 11．前記内因性減数分裂活性化物質の蓄積を引きおこす化合物がメラトニン誘導体であることを特徴とする請求項１に記載の方法。 12．前記内因性減数分裂活性化物質の蓄積を引きおこす化合物がメラトニンアゴニストであることを特徴とする請求項１に記載の方法。 13．減数分裂を誘導するための薬剤の調製のための、減数分裂が誘導されるレベルまでの内因性減数分裂活性化物質の蓄積を引きおこす化合物の使用。 14．本明細書の実施例に記載される方法の少くとも１つに従ってテストした場合に減数分裂活性化特性を示す化合物の請求項13に記載の使用。 15．アンホテリシンＢ、アミノグアニジン及び３β，５α，６β−トリヒドロキシコレスタンからなる群から選択される化合物の請求項13に記載の使用。 16．メラトニンの請求項13に記載の使用。 17．６−クロロメラトニンの請求項13に記載の使用。 18．５−メトキシトリプタミンの請求項13に記載の使用。 19．メラトニン誘導体の請求項13に記載の使用。 20．メラトニンアゴニストの請求項13に記載の使用。