JPH11503018A

JPH11503018A - ５−ｈｔ▲下２▼レセプタ調節剤に対する個体の応答性の判定方法

Info

Publication number: JPH11503018A
Application number: JP8529970A
Authority: JP
Inventors: カーウィン，ロバート; コリアー，デイビッド; ロバーツ，ギャレス・ウィン
Original assignee: スミスクライン・ビーチャム・パブリック・リミテッド・カンパニー
Priority date: 1995-04-07
Filing date: 1996-04-01
Publication date: 1999-03-23
Anticipated expiration: 2016-04-01
Also published as: JP2978567B2; EP0887472A1; AU1174497A; WO1998029612A1

Abstract

(57)【要約】患者が５−ＨＴ₂レセプタで作用する治療薬による処置に応答する見込みがあるかを評価する際の使用のための方法。

Description

【発明の詳細な説明】５−ＨＴ₂レセプタ調節剤に対する個体の応答性の判定方法本発明は、５−ＨＴ₂レセプタ、特に５−ＨＴ_2Cレセプタと相互に関係している治療薬、特にクロザピンなどの神経弛緩薬に対する個体の応答性を評価する方法に関する。精神分裂症は、現在、治療法がない荒廃的な神経病であるが、現在、その原因を理解することおよびその症状を抑制することは進歩しつつある。一般に、開始年齢は、青年晩期であり、予後が非常に悪い終生の疾患である。精神分裂症に罹患している患者は、妄想および幻覚などの陽の症状、および／または引きこもり、孤立ならびに最終的には社会的な堕落および自殺に至る意気沮喪などの陰の症状を示す。英国ではかつて６００,０００人の精神分裂症患者がおり、その管理費は、総健康管理予算の１.６％である。これらの費用のほとんどは、非薬物、コミュニティおよび病院費用である。したがって、有効な薬物処置の良好なターゲティングは、相当な経済的節約についての可能性を有する（British Journal of Psychiatry,（1994）165（suppl．25），18-21）。１９５０年代以来、抗精神病薬（神経弛緩薬）は、入手可能であり、精神分裂症の陽の症状を処置するために、成功の程度を変えつつ用いられている。しかしながら、これらの薬物の大部分（「典型」神経弛緩薬）は、陰の症状を緩和せず、さらにまた、多くの副作用を有しており、該副作用のうち最も悩ませられるのは、錐体外路副作用（ｅｐｓ）として知られている運動障害である。該典型神経弛緩薬の例としては、ハロペリドールおよびスルピリドが挙げられる。英国における患者の９０％以上がかかる伝統的な抗精神病薬で処置されているが、患者の約３０％は、応答しない。該典型抗精神病薬の治療効果は、主にドーパミンＤ₂ レセプタの遮断を介して発揮されると思われる；しかしながら、このメカニズムは、また、錐体外路副作用の原因であるとも考えられている。さらに最近、増強された効力および２、３の副作用を有する第２世代の抗精神病薬、いわゆる「異型」神経弛緩薬が開発された。これらの化合物は、典型神経弛緩薬よりもＤ₂レセプタに対する親和性が低いと思われるが、該化合物は、また、他のレセプタ、特にセロトニン５−ＨＴ_2Aおよび５−ＨＴ_2CレセプタならびにドーパミンＤ₄レセプタと相互に作用する。異型神経弛緩薬は、該異型神経弛緩薬が精神分裂症の陽および陰の両方の症状を改良し、実質的にはｅｐｓを生じないという長所を提供する。このタイプの薬物の例は、クロザピンである。しかしながら、その使用は、好中球減少症を生じる傾向およびその費用に関する議論により厳しく制限されてきた；したがって、他の神経弛緩薬に応答しない患者における精神分裂症の処置については見合わせられている。さらに、クロザピンによる処置にさえ抵抗のある患者の一部が残されている。したがって、おそらくこれらの患者のためになると予想するのに役立つ試験は、貴重な臨床的意志決定手段であろう。「異型」神経弛緩薬のさらなる例は、リスペリドン（risperidone）であり、これは、混合した５−ＨＴ_2A／Ｄ₂レセプタ拮抗薬である。現在、臨床試験を受けているこの化合物は、クロザピンと同様の治療プロフィルを有すると思われるが、好中球減少症を生じない。現在開発中の異型神経弛緩薬としては、オランザピン（olanzapine）、セロクエル（seroquel）、セルチンドール（sertindole）およびジプラシドン（ziprasidone）が挙げられ；全てがドーパミンＤ₂および５ −ＨＴ_2Aレセプタの両方での拮抗剤である。精神分裂症は、診断されると、できる限り早く、最も適切な治療を選択し施すことが明らかに望ましい。現在、患者が薬物処置に応答する見込みがあるかを先立って判定する方法がないので、神経弛緩薬による処置は、主として、試行錯誤の原因である。したがって、患者は、不応答性が確立される前に種々の抗精神病薬によるいくつかの処置単位を受ける。これらの薬物の副作用を考慮して、不応答者に該薬物を投与するのを回避するのは非常に有益である；これは、クロザピンの場合、その既知の毒性プロフィルを考慮して、特に重要である。さらにまた、一般に、患者に最初に最も有効な薬物治療を施すと、１種類以上の不適当な薬物の後よりも、疾患の長期成果が改良されることが判明している。したがって、薬物治療に応答する見込みのあるこれらの患者を標的とする手段は、好都合である。最近、５−ＨＴ_2Cレセプタ（ＨＴＲ２Ｃとしても知られている）をコードしているヒト遺伝子が該遺伝子のＴＭＩ領域において多型性を示す（５−ＨＴ_2Ccys （Ｃ６８）および５−ＨＴ_2Cser（Ｓ６８）と称される２つの対立遺伝子からなる）ことが判明した（Lappalainen，J.，Virkkunen，M.，Dean，M.，Ozaki，N., Linniola，M.，Goldman，D.，（1994）American Journal of Human Genetics 5 5, 899“Identification of a cys-ser substitution in the 5-HT_2C（HTR_2C）r eceptor gene and alleic association to violent behaviour and alcoholism ）。これらの対立遺伝子は、各々、０.８７および０.１３の頻度で血縁ではないカフカス人において生じることが判明した。今、驚くべきことに、クロザピンで処置した精神分裂症と診断された患者群において、クロザピンによる処置に応答する患者（以下、「応答者」）とかかる処置に応答しない患者（以下、「不応答者」）との間の対立遺伝子Ｃ６８およびＳ６８の分布は、一般的な群におけるものとは有意に異なることが判明した。かくして、１つ以上のＳ６８対立遺伝子（ホモ接合またはヘテロ接合のいずれかである）を有する応答者の割合は、一般的な群におけるよりも有意に高かった。特に、対立遺伝子Ｓ６８は、不応答者よりも有意に高い割合で応答者に存在することが判明した。かくして、対立遺伝子Ｓ６８の存在とクロザピンによる処置に対する応答との間には相互関係がある。したがって、この対立遺伝子変異は、患者がクロザピンによる処置に応答する見込みがあるかを評価または予想するために用いることができる。前記したような症状、特に精神分裂症の処置における当業者には、本明細書で用いる場合の「応答者」および「不応答者」なる用語が当該技術分野でよく知られている用語であると認められるであろう。診療所では、クロザピンなどの神経弛緩薬に対する応答性の程度は、一般に、グローバル・アセスメント・スケール（Ｇlobal Ａssessment Ｓcale：ＧＡＳ）またはブリーフ・サイキアトリック・レイティング・スケール（Ｂrief Ｐsychiatric Ｒating Ｓcale：ＢＰＲＳ）などのよく確立された評定尺度に従って評価される。実際、前記のとおり、精神分裂症を処置するためのクロザピンの使用は、一般に、他の神経弛緩薬による処置に応答しなかった個体のために確保される。本発明の方法は、より一般的には、患者が現存する典型神経弛緩薬または異型神経弛緩薬のいずれに（特に５−ＨＴ₂レセプタと相互作用することが示されるもの）応答する見込みがあるかを予想するために用いられる。本発明の方法は、また、より一般的には、患者が、５−ＨＴ₂レセプタ（特に、５−ＨＴ_2Cレセプタ）で作用する治療薬に応答するかまたは不応答であるかを評価するために用いられてもよい。これらのレセプタで作用する化合物は、以下、５−ＨＴ₂モジュレーターおよび５−ＨＴ_2Cモジュレーターと称する。かかる化合物は、典型神経弛緩薬および異型神経弛緩薬の両方を含む。したがって、本発明は、患者における５−ＨＴ_2C遺伝子のＳ６８および／またはＣ６８対立遺伝子をコードしているＤＮＡの存在または不在について試験し、検出することを特徴とする、患者が５−ＨＴ₂モジュレーターによる処置に応答するかまたは不応答であるかを評価する際に用いるための方法を提供するものである。好ましくは、当該方法は、５−ＨＴ_2Cモジュレーターに対する応答の見込みを評価する際に用いられる。５−ＨＴ₂および５−ＨＴ_2Cモジュレーターは、これらのレセプタでの作用薬および拮抗薬を含む。かかる化合物は、種々の治療効果を発揮する。かくして、例えば、５−ＨＴ_2Cアンタゴニストは、精神分裂症、鬱病、躁鬱病、強迫障害、パニック障害、心的外傷後ストレス障害、全身性不安障害、拒食症および多食症のような感情障害、快感消失症、性的機能不全症、月経前症候群、片頭痛、癲癇、アルツハイマー病、睡眠障害、コカイン、エタノール、ニコチンおよびベンゾジアゼピンのような薬物乱用による禁断症状、ならびに水頭症のような脊髄損傷および／または頭部損傷に関連する障害などのＣＮＳ障害の処置において有用なものである。特に好ましい具体例では、本発明は、精神分裂症に罹患していると診断された患者における５−ＨＴ_2C遺伝子のＳ６８および／またはＣ６８対立遺伝子からなるＤＮＡの存在または不在について試験し検出することを特徴とする、精神分裂症に罹患していると診断された患者において該患者による神経弛緩薬に対する応答の見込みを評価する際に用いるための方法を提供するものである。神経弛緩薬は、好ましくは５−ＨＴ₂レセプタのモジュレーター、特に５−ＨＴ_2Cレセプタモジュレーターである。好都合には、神経弛緩薬は、クロザピン、リスペリドン、オランザピン、セロクエル、セルチンドールまたはジプラシドンなどの「異型」神経弛緩薬である。最も好ましくは、神経弛緩薬は、クロザピンである。クロザピンの場合、５−ＨＴ_2Cser（Ｓ６８）対立遺伝子が単独でまたは５−ＨＴ_2Cc _ys （Ｃ６８）対立遺伝子と一緒に存在することは、患者がこの薬物による処置に対する応答の大きな見込みを有することを示す。これに関して、「大きな見込み」は、応答の見込みが「正常な」応答率、すなわち、精神分裂症患者のランダムなグループについて観察された応答率よりも高いことを意味する。５−ＨＴ_2Cse _r （Ｓ６８）対立遺伝子が単独でまたは５−ＨＴ_2Ccys（Ｃ６８）対立遺伝子と一緒に存在することはまた、該患者がＳ６８対立遺伝子を持っていない患者よりもクロザピンによる処置に対する応答の大きな見込みを有することを示す。もちろん、本発明の方法は、応答者および不応答者の正確なまたは絶対的な同定を提供するものではないが、応答性の程度または見込みを示し、そこで、医師の臨床的判断を助け導くために用いることができることは、前記に記載したような症状、特に精神分裂症の処置における当業者によって理解されるであろう。さらなる具体例では、本発明は、（ｉ）５−ＨＴ₂モジュレーターにより処置される症状に罹患している患者から得たＤＮＡを含有する試料において５−ＨＴ_2C遺伝子のＳ６８および／またはＣ６８対立遺伝子をコードしているＤＮＡの存在または不在について試験する工程、（ii）該結果を、該症状に罹患している患者群について得られたＳ６８およびＣ６８対立遺伝子の分布と５−ＨＴ₂モジュレーターに対する応答との間の予め決定された相互関係と比較する工程を特徴とする、５−ＨＴ₂モジュレーターにより処置される症状に罹患している患者が５−ＨＴ₂モジュレーターによる処置に応答するかを評価するための方法を提供するものである。工程（ii）で用いられる予め決定された相互関係自体は、以下の一連の工程：特定の症状に罹患していると診断された患者群またはコホートを選択する工程；該コホートを特定の５−ＨＴ₂（例えば、５−ＨＴ_2C）モジュレーターで処置する工程；該処置の成果をモニターし、該処置に対する応答者および不応答者を同定する工程；該コホートからＤＮＡを含有する生物学的試料を採取し、Ｓ６８および／またはＣ６８対立遺伝子の存在または不在について該試料を試験する工程；応答者と不応答者との間として対立遺伝子の分布を分析する工程；該症状に罹患していない対照グループの患者における対立遺伝子の分布と比較する工程；統計学的分析を行って、Ｓ６８および／またはＣ６８対立遺伝子の存在または不在と処置に対する応答との間に統計学的に有意な関係があるかを決定する工程により得られる。したがって、本発明は、（ｉ）５−ＨＴ₂モジュレーターによる処置を必要とする特定の症状に罹患している患者群におけるＳ６８およびＣ６８対立遺伝子の分布と該モジュレーターに対する観察された臨床応答との相互関係を明らかにさせる工程；（ii）該患者から得たＤＮＡを含有する試料において５−ＨＴ_2C遺伝子のＳ６８および／またはＣ６８対立遺伝子をコードしているＤＮＡの存在または不在について試験する工程；および、（iii）該結果を、該症状に罹患している患者群について得られたＳ６８およびＣ６８対立遺伝子の分布と５−ＨＴ_2Cモジュレーターに対する応答との相互関係と比較する工程を特徴とする、５−ＨＴ₂（例えば、５−ＨＴ_2C）モジュレーターで処置される症状に罹患している患者が特定の５−ＨＴ₂モジュレーターによる処置に応答するかを評価するための方法を提供するものでもある。さらなる態様では、本発明は、（ｉ）５−ＨＴ₂モジュレーター（例えば、クロザピン）で処置される特定の症状（例えば、精神分裂症）に罹患していると診断された患者のコホートを該５ −ＨＴ₂モジュレーターで処置し；（ii）予め決定した基準に従って、処置の成果を評価して、応答者および不応答者を定義し；（iii）（ｉ）における患者のコホートからＤＮＡ試料を得；（iv）該症状に罹患していないと診断された対照グループの患者からＤＮＡ試料を得；（ｖ）（iii）および（iv）において得られた試料を分析して、それらが５− ＨＴ_2Ccys（Ｃ６８）対立遺伝子、５−ＨＴ_2Cser（Ｓ６８）対立遺伝子またはその両方の対立遺伝子のいずれをコードしているかを同定し；（vi）応答者および不応答者について（iii）からの試料においてＣ６８およびＳ６８対立遺伝子の分布を算出し；（vii）（iv）からの試料においてＣ６８およびＳ６８対立遺伝子の分布を算出し；（vii）（vi）および（vii）において得られた分布を比較し；（ix）応答者と不応答者との間として（vi）において得られた分布を比較し；（ｘ）（viii）および（ix）からの結果について統計学的分析を行って、患者がＣ６８および／またはＳ６８対立遺伝子を有するかに基づいて、５−ＨＴ₂モジュレーターによる処置に対する応答の見込みを評価するためのモデルを生成することを特徴とする、患者が５−ＨＴ₂（例えば、５−ＨＴ_2C）モジュレーターによる処置に応答する見込みがあるかを評価するためのモデルを生成するための方法を提供するものである。本発明は、５−ＨＴ₂モジュレーターで処置される症状に罹患している患者の遺伝子型を前記モデルと比較することを特徴とする、５−ＨＴ₂（例えば、５− ＨＴ_2C）モジュレーターで処置される症状に罹患している患者が特定の５-ＨＴ₂ モジュレーターによる処置に応答するかを評価するための方法を提供するものでもある。前記の方法のいずれも、工程の１以上がコンピュータ制御システムにより成し遂げられると思われる。したがって、例えば、生物学的試料を入手した後、コンピュータ制御ロボットシステムにより遺伝子型分類を行う。コンピュータ制御システムは、また、評価されるべき患者と予め決定された相互関係またはモデルとの間で比較するように構成されてもよい。コンピュータ制御システムは、また、比較の成果に依存して陽性または陰性の読み出を提供するように構成されてもよい。したがって、本発明は、このようなコンピュータ制御されたかまたはコンピュータ遂行された方法にまで及ぶ。Ｓ６８および／またはＣ６８対立遺伝子をコードしているＤＮＡの存在または不在について試験し検出する工程は、適切な手段により、例えば、当該技術分野でよく知られている技術により、直接または間接的に行われてよく、好ましくは、半ビボで行われる。全ては、一般的に、患者由来のＤＮＡを含有する生物学的物質の試料を回収する工程、次いで、該試料から患者が有する対立遺伝子を検出する工程を必要とする。例えば、該検出工程は、患者由来のＤＮＡを含有する生物学的試料を回収し、次いで、該生物学的試料においてＳ６８および／またはＣ６８対立遺伝子からなるＤＮＡの存在または不在を決定することにより行われる。組織試料および血液試料を含む、該患者のＤＮＡを含有する生物学的試料を用いてもよく、血液細胞が特に好都合な原料である。Ｓ６８および／またはＣ６８対立遺伝子からなるＤＮＡの存在または不在の決定は、適切な検出可能な基で標識したオリゴヌクレオチドプローブを用いて、ポリメラーゼ連鎖反応またはリガーゼ連鎖反応などの増幅反応により（次いで、該増幅反応の生成物を、標識オリゴヌクレオチドプローブを用いて検出する）、または制限ヌクレアーゼ消化および電気泳動的分離を行って制限断片長多型（ＲＬＦＰ）を検出することにより、行われる。さらに、該検出工程は、該患者がＳ６８またはＣ６８対立遺伝子をコードしている遺伝子に対してヘテロ接合であるかまたはホモ接合であるかを検出する工程を含んでなる。本発明を行うために用いられる多くの種々のオリゴヌクレオチドプローブアッセイフォーマットが知られている。該検出工程が直接的に行われても間接的に行われてもよいことは、容易に認識されるであろう。かくして、例えば、上記技術のいずれを用いても、Ｓ６８対立遺伝子またはＣ６８対立遺伝子のいずれも検出される。該患者においてＳ６８対立遺伝子のみが検出される場合、該患者が対立遺伝子Ｓ６８に対してホモ接合であると判定されるが、該患者において対立遺伝子Ｃ６８が単独または対立遺伝子Ｓ６８に加えて検出される場合、該患者は、Ｃ６８に対してホモ接合またはヘテロ接合であることが判定される。実際は、２つの対立遺伝子のうちの１つの存在について試験することが必要とされるだけである。かくして、例えば、クロザピン応答に関係して、Ｓ６８対立遺伝子の存在について試験することが必要とされるだけであり、陽性の結果は、応答の大きな見込みを示し、陰性の結果（すなわち、患者がＣ６８に対してホモ接合である場合）は、応答の低い見込みを示す。本発明は、精神分裂症に罹患している患者の臨床管理の改良を可能にするのに有用である。処置に先立ってクロザピンなどの神経弛緩薬に応答する見込みのない人を同定することにより、かかる薬物の不要かつ無益の投与ならびに関連する副作用および費用を回避し、代わりに治療のより適切な形態を選択することが可能であろう。かくして、本発明は、処置プロセスのできる限り初期に最も適切な治療を指示することによって患者に直接的な利益を提供し、保健経済学に関して幅広い利益を有するものである。したがって、さらなる具体例では、本発明は、（ｉ）５−ＨＴ₂モジュレーターによる処置を必要とする症状に罹患している患者から得られたＤＮＡを含有する生物学的物質の試料において対立遺伝子Ｓ６８および／またはＣ６８からなるＤＮＡについて試験し、（ii）単独またはＣ６８対立遺伝子の存在下でＳ６８対立遺伝子からなるＤＮＡが試料中に存在する場合、５−ＨＴ₂モジュレーターで患者を処置することを特徴とする、５−ＨＴ₂モジュレーターによる処置を必要とする症状の処置方法を提供するものである。好ましくは、該症状は、精神分裂症である。５−ＨＴ₂モジュレーターは、好ましくは、クロザピンなどの神経弛緩薬である。さらに、本発明は、神経弛緩薬による臨床試験の効果的かつ有効な設計を可能にするのに有用である。かくして、２以上の神経弛緩薬による比較試験において、該薬物のいずれかまたはいずれにも応答する見込みがない患者を排除することができる。さらなる具体例では、本発明は、また、生物学的試料においてヒト５−ＨＴ_2C 遺伝子の対立遺伝子Ｓ６８および／またはＣ６８をコードしているＤＮＡの存在または不在を判定するための手段を特徴とする、本発明の方法における使用に適しているアッセイを提供するものでもある。本発明は、（ａ）ヒトＤＮＡの試料においてヒト５−ＨＴ_2C遺伝子の対立遺伝子Ｓ６８および／またはＣ６８をコードしているＤＮＡの存在または不在について試験するための手段；（ｂ）検出工程において使用するための試薬を含有してなる、５ＨＴ₂モジュレーターに対する患者の応答性を評価する際に用いるのに適しているキットを提供するものでもある。該試験手段は、好ましくは、標識プローブまたは制限酵素を含有してなる。該試薬は、例えば、希釈剤、洗浄液および対照溶液を含有してなる。さらなる具体例では、本発明は、ヒト５−ＨＴ_2C遺伝子のＳ６８および／またはＣ６８対立遺伝子をコードしているＤＮＡを発現するセルラインを提供するものである。かかるセルラインは、公知の組換え技術および方法を用いて得ることができる。さらに好ましい具体例では、本発明は、Ｓ６８対立遺伝子を含有するヒト５− ＨＴ_2C遺伝子を発現するか、および／または、Ｃ６８対立遺伝子を含有するヒト５−ＨＴ_2C遺伝子を発現する、トランスジェニック動物、特にトランスジェニック哺乳動物（例えば、マウス）を提供するものでもある。かかるトランスジェニック動物を用いて、新規抗精神病薬についてスクリーニングし、同定してよい。Ｓ６８対立遺伝子を含有するヒト５−ＨＴ_2C遺伝子を発現する動物を用いて、クロザピンなどの現在入手可能な神経弛緩薬に応答しない患者において有効であると思われる薬物をスクリーニングしてもよい。トランスジェニック動物は、遺伝子工学の分野で標準的な方法を用いて得られる。疑問を回避するために、本明細書で用いる場合、特記しない限り、「５−ＨＴ_2C 遺伝子」なる用語は、コードしている遺伝子を表し、「Ｃ６８対立遺伝子」および「Ｓ６８対立遺伝子」なる用語は、各々、ヒト５−ＨＴ_2Cレセプタの５−ＨＴ_2Ccys（Ｃ６８）および５−ＨＴ_2Cser（Ｓ６８）対立遺伝子を表す。（Lappal ainen，J.，Virkkunen，M.，Dean，M.，Ozaki，N.，Linniola，M.，Goldman，D. ，(1994)American Journal of Human Genetics 55，899）。同様に、５−ＨＴ₂ レセプタおよび５−ＨＴ_2Cレセプタなる用語は、これらのレセプタのヒト形態を表す。実施例方法Ｈinf Ｉ多型体についての遺伝子型分類は、精神分裂症に罹患していると診断され（ＤＳＭ III）、クロザピンによる治療下にある個体から得た血液試料を用いて行った。該個体を、クロザピン治療に対する応答性について別々に評価した：不応答は、６週間の治療の後にＧＡＳで＜２０ポイントまたはＢＰＲＳで＜２０％の低下として定義した。結果は、下記表において示すように相互に関係した。ＰＣＲによるHinf Ｉ多型体（対立遺伝子Ｃ６８およびＳ６８）の検出セロトニンレセプタ遺伝子５−ＨＴ_2C（ＨＴＲ２Ｃ）の推定ＴＭＩ領域に対応するフラグメントを、オリゴヌクレオチドプライマー対５'ttggcctattggtttggga at３'（プライマー１）およびgtctgggaatttgaagcgtccac（プライマー２）を用いて増幅させた。これらのプライマーの使用により、Ｓ６８対立遺伝子が存在する場合にHinf Ｉ制限エンドヌクレアーゼ部位が生じる。というのは、プライマー１は、プライマー配列の５'開始から１８位のヌクレオチドで天然遺伝子配列にーとは異なるヌクレオチド（Ｃの代わりにＧ）を有するからである。各反応１５ μ1は、バッファータイプIV（アプライド・ビオシステムズ（Ａpplied Ｂiosystems））、１.５mＭＭgＣl₂、各２００μＭのｄＮＴＰ、各プライマー０.２５μＭ、サーモプライムポリメラーゼ（アプライド・ビオテクノロジー・リミテッド(Ａpplied Ｂiotechnology Ｌtd.)）１Ｕおよび患者ＤＮＡ５０ng を含有した。増幅プログラムは、９５℃で１分間、５０℃で２分間および７２℃ で３分間のサイクル３５回を含んだ。増幅後、ＰＣＲ生成物（１０４bp）１０μ lを制限酵素バッファー２μl、水７μlで希釈し、３７℃で最低３時間、Ｈinf Ｉ（ニュー・イングランド・ビオラブズ（Ｎew Ｅngland Ｂiolabs）（１０Ｕ／試料）で消化した。プライマー認識配列の最初の塩基と最後の塩基との間にＣ６８対立遺伝子を含有する天然ＤＮＡフラグメントは、以下のヌクレオチド配列：を有する。プライマー認識配列の最初の塩基と最後の塩基との間にＳ６８対立遺伝子を含有する天然ＤＮＡフラグメントは、以下のヌクレオチド配列：を有する。プライマーを用いて増幅されるＣ６８対立遺伝子を含有する実際のＤＮＡ配列は、である。プライマーを用いて増幅されるＳ６８対立遺伝子を含有する実際のＤＮＡ配列は、である。消化した試料のサイズは、トリス−ホウ酸塩ＥＤＴＡバッファーおよびアガロースゲル１００ml当たり臭化エチレン５０μgを含有する３％アガロースゲル中で電気泳動的にそれらを分離することにより分析した。２６０nmでの紫外線照射によりＤＮＡフラグメントを視覚化し、標準的なＤＮＡサイズラダー（ギブコ（Ｇibco）、１Ｋbラダー）に対して大きさにより分類した。Ｃ６８対立遺伝子（１０４bp）は、該酵素によって切断されないが、Ｓ６８対立遺伝子は、１８bpおよび８６bpの２つのフラグメントに切断される。データクロザピンで治療している患者における５−ＨＴ_2C遺伝子のＣ６８およびＳ６８対立遺伝子についての遺伝子型の結果を下記表Ｉに示す。gasdiffの欄は、クロザピンによる治療前および後とのＧＡＳスコアの差異を示し、他の欄は、遺伝子型およびgasdiffにより分類された患者の数を示す。２０以上のスコアの患者は、応答者であるとみなされ、２０未満のスコアの患者は、不応答者であるとみなされる。コンピュータープログラムのＳＰＳＳパッケージ（ＳＰＳＳインコーポレイテッド（ＳＰＳＳＩncorporated）により遂行される変動にの分析によるこれらの結果の試験により、６.０７１のＦおよび０.００３のＦの有意さが得られ、これは、クロザピンに対する良好な臨床的応答が５−ＨＴ_2C遺伝子のＳ６８対立遺伝子によって影響を及ぼされることを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者コリアー，デイビッドイギリス、エスイー５・８エイエフ、ロンドン、デンマーク・ヒル、デ・クレスピグニー・パーク、インスティトゥート・オブ・サイカイアトリー (72)発明者ロバーツ，ギャレス・ウィンイギリス、シーエム19・５エイディ、エセックス、ハーロウ、ザ・ピナクルズ、コールドハーバー・ロード、スミスクライン・ビーチャム・ファーマシューティカルズ

Claims

【特許請求の範囲】１．５−ＨＴ₂モジュレーターで処置される症状に罹患している患者において５−ＨＴ_2C遺伝子のＳ６８対立遺伝子および／またはＣ６８対立遺伝子をコードしているＤＮＡの存在または不在を検出することを特徴とする、５−ＨＴ₂モジュレーターで処置される症状に罹患している患者において、該患者が５−ＨＴ₂ モジュレーターによる処置に対して応答するかの見込みを評価する際に用いるための方法。２．５−ＨＴ₂モジュレーターが５−ＨＴ_2Cレセプタで作用する請求項１記載の方法。３．５−ＨＴ₂モジュレーターが５−ＨＴ₂レセプタでの拮抗薬である請求項１または２記載の方法。４．症状が精神分裂症である請求項１〜３のいずれ１項記載の方法。５．５−ＨＴ₂モジュレーターが神経弛緩薬である請求項１〜４のいずれか１項記載の方法。６．神経弛緩薬が異型である請求項５記載の方法。７．神経弛緩薬がクロザピンである請求項６記載の方法。８．神経弛緩薬がリスペリドンである請求項６記載の方法。９．神経弛緩薬がオランザピン、セロクエル、セルチンドールおよびジプラシドンから選択される請求項６記載の方法。１０．（ｉ）５−ＨＴ₂モジュレーターにより処置される症状に罹患している患者から得たＤＮＡを含有する試料において５−ＨＴ_2C遺伝子のＳ６８および／またはＣ６８対立遺伝子をコードしているＤＮＡの存在または不在について試験する工程、および（ii）該結果を、該症状に罹患している患者群について得られたＳ６８およびＣ６８対立遺伝子の分布と５−ＨＴ₂モジュレーターに対する応答との間の相互関係と比較する工程を特徴とする、５−ＨＴ₂モジュレーターにより処置される症状に罹患している患者が５−ＨＴ₂モジュレーターによる処置に応答するかを評価するための方法。１１．（ｉ）５−ＨＴ₂モジュレーターにより処置される特定の症状に罹患している患者群におけるＳ６８およびＣ６８対立遺伝子の分布と、該モジュレーターに対する観察された臨床応答との相互関係を明らかにする工程、（ii）該患者から得られたＤＮＡを含有する試料において５−ＨＴ_2C遺伝子のＳ６８および／またはＣ６８対立遺伝子をコードしているＤＮＡの存在または不在について試験する工程、（iii）該結果を、該患者から得られたＤＮＡを含有する試料においてＳ６８および／またはＣ６８対立遺伝子の分布と５−ＨＴ_2Cモジュレーターに対する応答との間の相互関係と比較する工程を含んでなる請求項９記載の方法。１２．（ｉ）５−ＨＴ₂モジュレーターで処置される特定の症状に罹患していると診断された患者のコホートを５−ＨＴ₂モジュレーターで処置し、（ii）予め決定した基準にしたがって、処置の成果を評価して、応答者および不応答者を定義し、（iii）（i）における患者のコホートからＤＮＡ試料を得、（iv）該症状に罹患していないと診断された対照グループの患者からＤＮＡ試料を得、（ｖ）（iii）および（iv）において得られた試料を分析して、それらが５− ＨＴ_2Ccys（Ｃ６８）対立遺伝子、５−ＨＴ_2Cser（Ｓ６８）対立遺伝子または両方の対立遺伝子をコードしているかを同定し、（vi）応答者および不応答者について（iii）からの試料においてＣ６８およびＳ６８対立遺伝子の分布を計算し、（vii）（iv）からの試料においてＣ６８およびＳ６８対立遺伝子の分布を計算し、（viii）（vi）および（vii）において得られた分布を比較し、（ix）応答者および不応答者の間として（vi）において得られた分布を比較し、（ｘ）（viii）および（ix）からの結果について統計学的分析を行って、患者がＣ６８および／またはＳ６８対立遺伝子を有するかに基づいて、５−ＨＴ₂モジュレーターによる処置に対する応答の見込みを評価するためのモデルを生成することを特徴とする、患者が５−ＨＴ₂モジュレーターによる処置に応答する見込みがあるかを評価するためのモデルの生成方法。１３．５−ＨＴ₂モジュレーターにより処置される症状に罹患している患者の遺伝子型を請求項１２記載のモデルと比較することを特徴とする、５−ＨＴ₂モジュレーターにより処置される症状に罹患している患者が特定の５−ＨＴ₂モジュレーターによる処置に応答するかを評価するための方法。１４．少なくとも１つの工程がコンピューター制御システムにより行われる請求項１０〜１３のいずれか１項記載の方法。１５．Ｓ６８対立遺伝子を検出するように構成される請求項１０、１１、１３または１４記載の方法。１６．Ｓ６８対立遺伝子の検出が５−ＨＴ₂モジュレーターによる処置に良好な応答を示す請求項１〜１５のいずれか１項記載の方法。１７．症状が精神分裂症である請求項１０〜１６のいずれか１項記載の方法。１８．５−ＨＴ₂モジュレーターが神経弛緩薬である請求項１０〜１７のいずれか１項記載の方法。１９．生物学的試料において対立遺伝子Ｓ６８および／またはＣ６８からなるＤＮＡの存在または不在を判定するための手段からなることを特徴とするアッセイ。２０．（ａ）ヒトＤＮＡの試料において対立遺伝子Ｓ６８および／またはＣ６８をコードしているＤＮＡの存在または不在について試験するための手段、（ｂ）検出工程における使用のための試薬を含有してなる、５−ＨＴ₂モジュレーターに対する患者の応答性を評価する際の使用に適しているキット。２１．Ｓ６８対立遺伝子からなるヒト５−ＨＴ_2C遺伝子を発現するトランスジェニック哺乳動物。２２．Ｃ６８対立遺伝子からなるヒト５−ＨＴ_2C遺伝子を発現するトランスジェニック哺乳動物。２３．抗精神病活性について化合物をスクリーニングすることにおける請求項２０または２１記載のトランスジェニック哺乳動物の使用。