【発明の詳細な説明】
ベンゾオキサアゼピン及びジオキセピン誘導体、それらの抗腫瘍剤としての用途
本発明は、式（Ｉ）：
（式中、
Ｒ1及びＲ2は、独立して、水素、非置換低級アルキル、低級アルコキシ、若し
くは低級アルキルチオ置換低級アルキル、又はアシル（これは，非置換であるか
、あるいは低級アルキル、低級アルコキシ、又は水素若しくはハロゲン置換低級
アルキルの１個若しくは２個以上で置換されている）であり；
Ｘは、ＣＯ又はＣＨＯＨであり；
Ｙは、ＣＯ又はＣＨ2であり；そして
Ｚは、Ｏ又はＮＨである）の化合物、及びこれらのエピマー若しくはエナンチ
オマー、又はこれらの生理学的に使用し得る塩に関する。
ここで用いた用語「低級アルキル」は、特に断らない限り、６個を含み、６個
まで、好適には１〜２個の炭素原子を有する炭化水素基（これは、非置換である
か、又は低級アルコキシ若しくは低級アルキルチオで置換されている）である。
したがって、例えば、「低級アルキル」は、例えば、メチル、エチル、tert−ブ
チル、ｎ−ペンチル、及びメトキシメチル、メチルチオメチルのような置換され
たメチルである。
「アシル」は、脂肪族、芳香脂肪族又は芳香族のアシルであることができる。
好適には、脂肪族アシルは、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ｎ−ブチリル
、iso−ブチリル、及びピバロイルのような１〜６個の炭素原子を有する。芳香
脂肪族アシルは、例えば、低級アルコキシ及びハロゲンで置換された低級アルキ
ルのような置換基の一つ以上で置換されることができるフェニルアセチル、例え
ば、
α−メトキシ−α−（トリフルオロメチル）フェニルアセチルである。好適には
、芳香族アシルは、非置換、又は、例えば、メチル、エチル、tert−ブチル及び
ｎ−ペンチルのような低級アルキル、又はフッ素、塩素、臭素又はヨウ素のよう
なハロゲンで置換されていてもよいベンゾイルである。好適には、ＸはＣＯであ
り、ＹはＣＯであり、そしてＺはＯである。
本発明は、上記の式（Ｉ）で定義した化合物の一つ以上又はこれらの生理学的
に使用し得る塩を含む組成物；抗癌剤としての、それらの化合物又はそれらの生
理学的に使用し得る塩の用途；それらの化合物又はそれらの生理学的に使用し得
る塩の製造法；及び、それらの化合物のいくつかを産生可能な微生物に関する。
より特に、本発明は、下記で定義されているように、式（Ｉ）の化合物Ａ、Ａ
−１、Ａ−２、Ａ−３、Ａ−４、Ａ−５、Ａ−６、Ａ−７、Ａ−８、Ａ−９、及
びＡ−１０、ならびに、これらのそれぞれのエピマー化合物Ｂ、Ｂ−１、Ｂ−２
、Ｂ−３、Ｂ−４、Ｂ−５及びＢ−６と同定される化合物に関する：化合物Ａ
：式（Ｉ）、Ｒ1＝Ｈ、Ｒ2＝Ｈ、Ｘ＝ＣＯ、Ｙ＝ＣＯ、Ｚ＝Ｏ（３，７
−ジヒドロキシ−６−メトキシ−１，４，６，９−テトラメチル−６，７−ジヒ
ドロ−５ａＨ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジオキヤピン−８，１１−ジオン
）；
１）外観：白色結晶
２）融点：１８７〜１８８℃
３）比旋光度：［α］23 D＝＋２７２°（ｃ＝０．５６、メタノール）
４）分子量（ＦＡＢ−ＭＳ法）
陰イオンモード：m/z ３４７（Ｍ−Ｈ）-
５）分子式：Ｃ18Ｈ20Ｏ7
６）高分解能質量分光法（Ｍ−Ｈに対して）
実験値：３４７．１１４６
Ｃ18Ｈ19Ｏ7としての計算値：３４７．１１３１
７）ＵＶλmaxnm（ε）：
ＭｅＯＨ中 :213(20,100)，282(14,500)
ＭｅＯＨ＋Ｎ/10 ＨＣｌ中 :215(18,400)，278(14,200)
ＭｅＯＨ＋Ｎ/10 ＮａＯＨ中:248(16,100)，297(13,900)，328(17,000)
８）ＩＲスペクトル：ＫＢｒタブレット、主吸収波長（cm-1）: 3410，2932，
1729，1678，1639，1604，1232，1126
９）1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：400MHz，DMSO-d6，TMS(内部標準)，δ:1.01(3H
，s)，1.77(3H，d，J=2Hz)，2.09(3H，s)，2.38(3H，s)，3.28(3H，s)，4.32(1H
，d，J=5Hz)，5.35(1H，q，J=2Hz)，5.52(1H，d，J=5Hz，D2O交換可能)，6.62(1
H，s)，10.60(1H，s，D2O交換可能)
１０）13Ｃ−ＮＭＲスペクトル：100MHz，DMSO-d6，TMS(内部標準)，δ:8.3，
8.4，3.3，21.8，50.1，74.6，80.2，82.8，110.8，113.7，114.6，117.1，142.
1，159.2，160.2，160.8，161.1，197.5
１１）溶解性：
可溶：ジメチルスルホキシド、酢酸エチル、メタノール
不溶：ｎ−ヘキサン、水化合物Ａ−１
：式（Ｉ）、Ｒ1＝アセチル、Ｒ2＝アセチル、Ｘ＝ＣＯ、Ｙ＝ＣＯ
、Ｚ＝Ｏ（３，７−ジ（メチルカルボニルオキシ）−６−メトキシ−１，４，６
，９−テトラメチル−６，７−ジヒドロ−５ａＨ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４
］ジオキセピン−８，１１−ジオン）；
１）外観：白色粉末
２）分子量（ＦＡＢ−ＭＳ法）
陽イオンモード：m/z ４３３（Ｍ＋Ｈ）+
３）分子式：Ｃ22Ｈ24Ｏ9
４）1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：400MHz，DMSO-d6，TMS(内部標準)，δ:1.09(3H
，s)，1.80(3H，d，J=2Hz)，2.10(3H，s)，2.17(3H，s)，2.34(3H，s)，2.45(3H
，s)，3.23(3H，s)，5.69(1H，s)，5.78(1H，q，J=2Hz)，7.04(1H，s)化合物Ａ−２
：式（Ｉ）、Ｒ１＝Ｈ、Ｒ2＝ｐ−ブロモベンゾイル、Ｘ＝ＣＯ、
Ｙ＝ＣＯ、Ｚ＝Ｏ（３−（４−ブロモベンゾイル）−７−ヒドロキシ−６−メト
キシ−１，４，６，９−テトラメチル−６，７−ジヒドロ−５ａＨ−ジベンゾ［
ｂ，ｅ］［１，４］ジオキセピン−８，１１−ジオン）；
１）外観：白色粉末
２）分子量（ＦＡＢ−ＭＳ法）
陽イオンモード：m/z ５３１（Ｍ＋Ｈ）+
３）分子式：Ｃ25Ｈ23ＢｒＯ8
４）1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：400MHz，DMSO-d6，TMS(内部標準)，δ:1.00(3H
，s)，1.80(3H，d，J=2Hz)，2.14(3H，s)，2.45(3H，s)，3.31(3H，s)，4.29(1H
，s)，5.56(1H，d，J=2Hz)，5.71(1H，br.s)，7.17(1H，s)，7.85(2H，d，J=8.5
Hz)，8.08(2H，d，J=8.5Hz)化合物Ａ−３
：式（Ｉ）、Ｒ1＝ｐ−ブロモベンゾイル、Ｒ2＝ｐ−ブロモベンゾ
イル、Ｘ＝ＣＯ、Ｙ＝ＣＯ、Ｚ＝Ｏ（３，７−ジ（４−ブロモベンゾイル）−６
−メトキシ−１，４，６，９−テトラメチル−６，７−ジヒドロ−５ａＨ−ジベ
ンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジオキセトシ−８，１１−ジオン）；
１）外観：白色粉末
２）分子量（ＦＡＢ−ＭＳ法）
陽イオンモード：m/z ７１３（Ｍ＋Ｈ）+
３）分子式：Ｃ32Ｈ26Ｂｒ2Ｏ9
４）1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：400MHz，CDCl3，TMS(内部標準)，δ:1.44(3H，s
)，1.97(3H，d，J=2Hz)，2.19(3H，s)，2.57(3H，s)，3.38(3H，s)，5.21(1H，d
，J=2Hz)，5.73(1H，s)，6.97(1H，s)，7.62(2H，d，J=8.5Hz)，7.69(2H，d，J=
8.5Hz)，7.95(2H，d，J=9Hz)，8.05(2H，d，J=9Hz)化合物Ａ−４
：式（Ｉ）、Ｒ1＝Ｈ、Ｒ2＝ＣＨ3、Ｘ＝ＣＯ、Ｙ＝ＣＯ、Ｚ＝Ｏ
（（５ａＳ，６Ｓ，７Ｓ）−７−ヒドロキシ−３，６−ジメトキシ−１，４，６
，９−テトラメチル−６，７−ジヒドロ−５ａＨ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４
］ジオキセピン−８，１１−ジオン）；
１）外観：白色粉末
２）分子量（ＥＩ−ＭＳ法）
陽イオンモード：m/z ３６２（Ｍ）+・
３）分子式：Ｃ19Ｈ22Ｏ7
４）1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：270MHz，CDCl3，TMS(内部標準)，δ:1.20(3H，s
)，1.97(3H，d，J=2Hz)，2.20(3H，s)，2.56(3H，s)，3.50(3H，s)，3.81(1H，d
，J=2.5Hz)，3.89(3H，s)，4.22(1H，d，J=2.5Hz)，4.91(1H，q，J=2Hz)，6.60(
1H，s)
化合物Ａ−５
：式（Ｉ）、Ｒ1＝（−）−α−メトキシ−α−（トリフルオロメ
チル）フェニルアセチル、Ｒ2＝ＣＨ3、Ｘ＝ＣＯ、Ｙ＝ＣＯ、Ｚ＝Ｏ（（Ｓ）−
３，３，３−トリフルオロ−２−メトキシ−２−フェニルプロピオン酸（５ａＳ
，６Ｒ，７Ｒ）−２，６−ジメトキシ−１，４，６，９−テトラメチル−８，１
１−ジオキソ−５ａ，６，７，８−テトラヒドロ−１１Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］
［１，４］ジオキセピン−７−イルエステル）；
１）外観：白色粉末
２）分子量（ＦＡＢ−ＭＳ法）
陽イオンモード：m/z ５７９（Ｍ＋Ｈ）+
３）分子式：Ｃ29Ｈ29Ｆ3Ｏ9
４）1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：400MHz，CDCl3，TMS(内部標準)，δ:1.29(3H，s
)，1.97(3H，d，J=2Hz)，2.13(3H，s)，2.57(3H，s)，3.09(3H，s)，3.72(3H，d
，J=1Hz)，3.89(3H，s)，4.98(1H，d，J=2Hz)，5.60(1H，s)，6.61(1H，s)，7.4
2(3H，m)，7.74(2H，m)化合物Ａ−６
：式（Ｉ）、Ｒ1＝（＋）−α−メトキシ−α−（トリフルオロメ
チル）フェニルアセチル、Ｒ2＝ＣＨ3、Ｘ＝ＣＯ、Ｙ＝ＣＯ、Ｚ＝Ｏ（（Ｒ）−
３，３，３−トリフルオロ−２−メトキシ−２−フェニルプロピオン酸（５ａＳ
，６Ｒ，７Ｓ）−２，６−ジメトキシ−１，４，６，９−テトラメチル−８，１
１−ジオキソ−５ａ，６，７，８−テトラヒドロ−１１Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］
［１，４］ジオキセピン−７−イルエステル）；
１）外観：白色粉末
２）分子量（ＦＡＢ−ＭＳ法）
陽イオンモード：m/z ５７９（Ｍ＋Ｈ）+
３）分子式：Ｃ29Ｈ29Ｆ3Ｏ9
４）1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：400MHz，CDCl3，TMS(内部標準)，δ:1.38(3H，s
)，1.96(3H，d，J=2Hz)，2.20(3H，s)，2.58(3H，s)，3.33(3H，s)，3.63(3H，d
，J=1Hz)，3.91(3H，s)，5.07(1H，d，J=2Hz)，5.66(1H，s)，6.62(1H，s)，7.4
4(3H，m)，7.70(2H，m)化合物Ａ−７
：式（Ｉ）、Ｒ1＝ＣＨ2ＳＣＨ3、Ｒ2＝ＣＨ3、Ｘ＝ＣＯ、Ｙ＝Ｃ
Ｏ、
Ｚ＝Ｏ（（５ａＳ，６Ｒ，７Ｓ）−３，６−ジメトキシ−１，４，６，９−テト
ラメチル−７−メチルスルファニルメトキシ−６，７−ジヒドロ−５ａＨ−ジベ
ンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジオキセピン−８，１１−ジオン）；
１）外観：白色粉末
２）分子量（ＦＡＢ−ＭＳ法）
陽イオンモード：m/z ４２３（Ｍ＋Ｈ）+
３）分子式：Ｃ21Ｈ26Ｏ7Ｓ
４）1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：500MHz，CDCl3，TMS(内部標準)，δ:1.40(3H，s
)，1.88(3H，d，J=1.5Hz)，2.16(3H，s)，2.18(3H，s)，2.53(3H，s)，3.43(3H
，s)，3.88(3H，s)，4.29(1H，s)，4.86(2H，d，J=12.5Hz)，4.93(1H，q，J=1.5
Hz)，6.55(1H，s)化合物Ａ−８
：式（Ｉ）、Ｒ1＝Ｈ、Ｒ2＝Ｈ、Ｘ＝ＣＨＯＨ、Ｙ＝ＣＯ、Ｚ＝Ｏ
（３，７，８−トリヒドロキシ−６−メトキシ−１，４，６，９−テトラメチル
−６，７−ジヒドロ−５ａＨ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジオキセピン−１
１−オン）；
１）外観：白色粉末
２）分子量（ＥＩ−ＭＳ法）
陽イオンモード：m/z ３５０（Ｍ）+・
３）分子式：Ｃ18Ｈ22Ｏ7
４）1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：500MHz，DMSO-d6，TMS(内部標準)，δ:1.43(3H
，s)，1.63(3H，s)，2.01(3H，s)，2.21(3H，s)，3.28(3H，s)，3.56(1H，d，J=
5，4.5Hz)，4.07(1H，ddd，J=8，4.5，1Hz)，4.59(1H，d，J=5Hz，D2O交換可能)
，4.67(1H，d，J=1Hz)，4.77(1H，d，J=8Hz，D2O交換可能)，6.40(1H，s)，9.82
(1H，br.s，D2O交換可能)化合物Ａ−９
：式（Ｉ）、Ｒ1＝Ｈ、Ｒ2＝Ｈ、Ｘ＝ＣＯ、Ｙ＝ＣＨ2、Ｚ＝Ｏ（
（５ａＳ，６Ｓ，７Ｓ）−３，７−ジヒドロキシ−６−メトキシ−１，４，６，
９−テトラメチル−６，７−ジヒドロ−５ａＨ，１１Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［
１，４］ジオキセピン−８−オン）；
１）外観：白色粉末
２）分子量（ＦＡＢ−ＭＳ法）
陽イオンモード：m/z ３３５（Ｍ＋Ｈ）+
３）分子式：Ｃ18Ｈ22Ｏ6
４）1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：500MHz，DMSO-d6，TMS(内部標準)，δ:1.15(3H
，s)，1.66(3H，s)，2.01(3H，s)，2.21(3H，s)，3.27(3H，s)，4.26(1H，d，J=
5Hz)，5.18(1H，d，J=14Hz)，5.22(1H，d，J=5Hz，D2O交換可能)，5.23(1H，s)
，5.29(1H，d，J=14Hz)，6.39(1H，s)，9.33(1H，s，D2O交換可能)化合物Ａ−１０
：式（Ｉ）、Ｒ1＝Ｈ、Ｒ2＝Ｈ、Ｘ＝ＣＯ、Ｙ＝ＣＯ、Ｚ＝ＮＨ
；
１）外観：白色粉末
２）分子量（ＦＡＢ−ＭＳ法）
陽イオンモード：m/z ３４８（Ｍ＋Ｈ）+
３）分子式：Ｃ18Ｈ21ＮＯ6
４）1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：400MHz，MeOH-d4，TMS(内部標準)，δ:1.25(3H
，s)，1.90(3H，d，J=1.2Hz)，2.20(3H，s)，2.44(3H，s)，3.36(3H，s)，4.35(
1H，s)，4.95(1H，br.s)，6.56(1H，s)化合物Ｂ
：化合物Ａのエナンチオマー（３，７−ジヒドロキシ−６−メトキシ−
１，４，６，９−テトラメチル−６，７−ジヒドロ−５ａＨ−ジベンゾ［ｂ，ｅ
］［１，４］ジオキセピン−８，１１−ジオン）；
１）外観：白色結晶
２）融点：１９８〜１９９℃
３）比旋光度：［α］23 D＝−８°（ｃ＝０．５２、メタノール）
４）分子量（ＦＡＢ−ＭＳ法）
陰イオンモード：m/z ３４７（Ｍ−Ｈ）-
５）分子式：Ｃ18Ｈ20Ｏ7
６）高分解能質量分光法（Ｍ−Ｈに対して）：
実験値：３４７．１１４０
Ｃ18Ｈ19Ｏ7としての計算値：３４７．１１３１
７）ＵＶλmax nm（ε）：
ＭｅＯＨ中 ：220(21,300)，290(8,400)
ＭｅＯＨ＋Ｎ/10 ＨＣｌ中 ：220(20,100)，289(8,000)
ＭｅＯＨ＋Ｎ/10 ＮａＯＨ中：249(17,100)，335(12,800)
８）ＩＲスペクトル：ＫＢｒタブレット、主吸収波長(cm-1):3424，2932，174
4，1657，1600，1247，1128
９）1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：400MHz，DMSO-d6，TMS(内部標準)，δ:1.53(3H
，s)，1.66(3H，s)，2.00(3H，s)，2.32(3H，s)，3.24(3H，s)，4.27(1H，d，J=
6Hz)，5.13(1H，s)，5.42(1H，d，J=6Hz，D2O交換可能)，6.54(1H，s)，10.38(1
H，br.s，D2O交換可能)
１０）13Ｃ−ＮＭＲスペクトル：125MHz，DMSO-d6，TMS(内部標準)，δ:7.7，
8.6，15.7，22.3，51.3，75.4，77.0，79.9，107.9，111.0，113.0，117.3，139
.7，155.2，155.8，159.8，162.2，196.5
１１）溶解性：
可溶：ジメチルスルホキシド、酢酸エチル、メタノール
不溶：ｎ−ヘキサン、水化合物Ｂ−１
：化合物Ａ−１のエピマー（３，７−ジ（メチルカルボニルオキシ
）−６−メトキシ−１，４，６，９−テトラメチル−６，７−ジヒドロ−５ａＨ
−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］レオキヤピン−８，１１−ジオン)；
１）外観：白色粉末
２）分子量（ＦＡＢ−ＭＳ法）
陽イオンモード：m/z ４３３（Ｍ＋Ｈ）+
３）分子式：Ｃ22Ｈ24Ｏ9
４）1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：400MHz，DMSO-d6，TMS(内部標準)，δ:1.51(3H
，s)，1.69(3H，s)，1.98(3H，s)，2.21(3H，s)，2.33(3H，s)，2.39(3H，s)，3
.28(3H，s)，5.55(1H，s)，5.56(1H，s)，6.92(1H，s)化合物Ｂ−２
：化合物Ａ−２のエピマー（３−（４−ブロモベンゾイル）−７−
ヒドロキシ−６−メトキシ−１，４，６，９−テトラメチル−６，７−ジヒドロ
−５ａＨ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジオキセピン−８，１１−ジオン）；
１）外観：白色粉末
２）分子量（ＦＡＢ−ＭＳ法）
陽イオンモード：m/z ５３１（Ｍ＋Ｈ）+
３）分子式：Ｃ25Ｈ23ＢｒＯ8
４）1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：400MHz，DMSO-d6，TMS(内部標準)，δ:1.55(3H
，s)，1.71(3H，s)，2.04(3H，s)，2.41(3H，s)，3.26(3H，s)，4.23(1H，d，J=
6Hz)，5.37(1H，s)，5.46(1H，d，J=6Hz)，7.07(1H，s)，7.86(2H，d，J=8Hz)，
8.06(2H，d，J=8Hz)化合物Ｂ−３
：化合物Ａ−３のエピマー；
１）外観：白色粉末
２）分子量（ＦＡＢ−ＭＳ法）
陽イオンモード：m/z ７１３（Ｍ＋Ｈ）+
３）分子式：Ｃ32Ｈ26Ｂｒ2Ｏ9
４）1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：500MHz，CDCl3，TMS(内部標準)，δ:1.63(3H，s
)，1.87(3H，s)，2.13(3H，s)，2.50(3H，s)，3.47(3H，s)，4.92(1H，s)，5.95
(1H，s)，6.86(1H，s)，7.63(2H，d，J=9Hz)，7.69(2H，d，J=9Hz)，7.98(2H，d
，J=8Hz)，8.06(2H，d，J=8Hz)化合物Ｂ−４
：化合物Ａ−４のエピマー（（５ａＳ，６Ｓ，７Ｒ）−７−ヒドロ
キシ−３，６−ジメトキシ−１，４，６，９−テトラメチル−６，７−ジヒドロ
−５ａＨ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジオキセピン−８，１１−ジオン）；
１）外観：白色粉末
２）分子量（ＥＩ−ＭＳ法）
陽イオンモード：m/z ３６２（Ｍ）+・
３）分子式：Ｃ19Ｈ22Ｏ7
４）1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：400MHz，CDCl3，TMS(内部標準)，δ:1.71(3H，s
)，1.84(3H，s)，2.08(3H，s)，2.51(3H，s)，3.35(3H，s)，3.53(1H，d，J=3.5
Hz，D2O交換可能)，3.87(3H，s)，4.43(1H，d，J=3.5Hz)，4.76(1H，s)，6.54(1
H，s)化合物Ｂ−５
：化合物Ａ−５のエピマー（（Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−
２−メトキシ−２−フェニルプロピオン酸（５ａＳ，６Ｒ，７Ｓ）−２，６−ジ
メトキシ−１，４，６，９−テトラメチル−８，１１−ジオキソ−５ａ，６，７
，８−テトラヒドロ−１１Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジオキセピン−７
−イル
エステル）；
１）外観：白色粉末
２）分子量（ＦＡＢ−ＭＳ法）
陽イオンモード：m/z ５７９（Ｍ＋Ｈ）+
３）分子式：Ｃ29Ｈ29Ｆ3Ｏ9
４）1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：500MHz，CDCl3，TMS(内部標準)，δ:1.61(3H，s
)，1.82(3H，s)，2.11(3H，s)，2.51(3H，s)，3.30(3H，s)，3.59(3H，s)，3.88
(3H，s)，4.78(1H，s)，5.81(1H，s)，6.55(1H，s)，7.45(3H，m)，7.69(2H，m)化合物Ｂ−６
：化合物Ａ−６のエピマー（（Ｒ）−３，３，３−トリフルオロ−
２−メトキシ−２−フェニルプロピオン酸（５ａＳ，６Ｒ，７Ｒ）−２，６−ジ
メトキシ−１，４，６，９−テトラメチル−８，１１−ジオキソ−５ａ，６，７
，８−テトラヒドロ−１１Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジオキセピン−７
−イルエステル）；
１）外観：白色粉末
２）分子量（ＦＡＢ−ＭＳ法）
陽イオンモード：m/z ５７９（Ｍ＋Ｈ）+
３）分子式：Ｃ29Ｈ29Ｆ3Ｏ9
４）1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：500MHz，CDCl3，TMS(内部標準)，δ:1.37(3H，s
)，1.83(3H，s)，2.10(3H，s)，2.50(3H，s)，3.18(3H，s)，3.72(3H，s)，3.88
(3H，s)，4.72(1H，s)，5.80(1H，s)，6.55(1H，s)，7.45(3H，m)
本発明によって提供される方法により、化合物Ａ（Ｒ1＝Ｈ、Ｒ2＝Ｈ、Ｘ＝Ｃ
Ｏ、Ｚ＝Ｏ）及びそのエピマー化合物Ｂ（Ｒ1＝Ｈ、Ｒ2＝Ｈ、Ｘ＝ＣＯ、Ｚ＝Ｏ
）は、好気性条件下に、培地で化合物Ａ及び／又は化合物Ｂを産生することがで
きるコウジカビ属（Aspergillus）に属する微生物を培養し、培地から化合物Ａ
及びＢを単離することによって製造される。
前記の方法に用いられる微生物は、これらの化合物を産生することができるAs
pergillusに属するいかなる菌株（突然変異体及び変異株を含む）も用いられる
。特に好ましい菌株は、Aspergillus Japoicus NR 7328、Aspergillus fumigatu
s NR 7329、NR7330、NR 7331、NR7332及びNR7334並びにこれらの突然変異体及び
変
異株である。Aspergillus Japoicus NR 7328、Aspergillus fumigatus NR 7329
、NR7330、NR 7331、NR7332及びNR7334は、トウモロコシ又は土壌のサンプルか
ら単離され、それぞれ、Aspergillus Japoicus及びAspergillus fumigatusに属
する菌株として同定された。
Aspergillus japoicus NR 7328及びAspergillus fumigatus NR 7329、NR7330
、NR 7331、NR7332及びNR7334と表示される菌株は、１９９６年５月９日のブダ
ペスト協定に基づいて、次のように、DMS Deutsche sammlung von Mikroorogani
smenund Zellkulturen GmbH，Germanyに寄託されている：Aspergillus Japoicus
NR 7328(DSM 10677)，Aspergillus fumigatus NR 7329(DSM 10678)，Aspergill
us fumigatus NR 7330(DSM 10679)，Aspergillus fumigatus NR 7331(DSM 10680
)，Aspergillus fumigatus NR 7332（DSM 10681）及びAspergillus fumigatus N
R 7333(DSM 10682)。
Aspergillus japoicus NR 7328(DSM 10677)、Aspergillus fumigatus NR 7329
(DSM 10678)、NR 7330(DSM 10679)、NR 7331(DSM 10680)、NR7332(DSM 10681)及
びNR 7333(DSM 10682)の培養及び形態学的特徴は次の通りである：NR 7328 株培養上の特徴
ツァペック−酵母エキス抽出寒天（ＣＹＡ）培地で、コロニーは速やかに生育
し、２５℃で７日後にペトリ皿を満たし、濃密な綿毛状菌蓋の中心に豊富な分生
子の形成を示した。コロニーの色は、濃褐色〜黒ずんだ褐色(Munsell，7.5YR2/2
-7.5YR2/2)であった。菌糸体は白色であった。裏側の色は淡黄色(Munsell，2.5Y
8/6)であった。滲出液及び可溶性色素は産生されなかった。
麦芽エキス寒天（ＭＥＡ）培地で、コロニーは、ＣＹＡ上２５℃でのコロニー
よりも比較的遅く生育し、７日後、２５℃で４８〜５０mmの直径に達し、平らで
濃密な、多量に胞子を有するコロニーを形成した。コロニーの色は暗黄褐色（Mu
nsell，10YR3/2）であった。菌糸体は白いが目立たなかった。裏側の色は淡黄色
（Munsell，5Y8/4）であった。滲出液及び可溶性色素は見られなかった。
２０％スクロースを含むツァペック−酵母エキス抽出寒天培地（ＣＹ２０Ｓ）
上２５℃でコロニーは、ＣＹＡ上２５℃でのコロニーと同様に速やかに生育した
。コロニーの色は、同様に黒ずんだ褐色であった。菌糸体は白く綿毛状であった
。
裏側の色は黄白色であった。
ＣＹＡ上３７℃で、コロニーは適度に生育し、７日目に直径１７〜１８mmに達
し、縦溝を有し突起のあるコロニーを示した。分生子の形成は貧弱であった。コ
ロニーの色は暗黄灰色(Munsell，5Y5/2)であった。裏側の色は濃黄褐色(Munsell
，5Y3/2)であった。
ＣＹＡ上５℃で、発芽は見られなかった。Nr 7328 株の生態学的特徴
分生子頭部は、最初に放射状に伸びて、いくつかの縦の柱状体に分かれていた
。柱頭は一列の細胞からなり、密に詰まった小梗であり、小胞の殆ど全表面を被
覆した。小胞は球形又はそれに近く、直径は３５〜５５（−７５）μm、幾らか
褐色に着色した厚い壁を有していた。菌柄は、７．５〜２０×２５０〜７００（
−１０００）μmの厚くて平滑な壁で囲われていた。分生子は直径が３．５〜５
．０μmの黒ずんだ球形又は球形に近く、時には楕円形であった。分生子の表面
は、小さな刺があり、広い間隔をあけた毛を有していた。
NR 7328株は、いくらか黒の色調で暗い色をした濃密なコロニーを形成し、豊
富な分生子の形成があった。小胞は球形又はそれに近かった。柱頭は単一の幹で
あった。分生子は球形〜楕円形で小さなとげがあり、黒ずんでいた。これの独特
な特徴に基づいて、このNR 7328 株はAspergillus japonicusの菌株として同定
され、Aspergillus japonicus NR 7328(DSM 10677)と命名された。NR 7329 、NR 7330、NR 7331、NR 7332及びNR 7334株の培養上の特徴
ＣＹＡ上で、これらの菌株のコロニーは速やかに生育し、７日後に２５℃で、
直径５３〜６１mmに達した、但し、他の菌株よりも生育の遅ったNR7334は、直径
４４〜４５mmに達した。全てのコロニーは、平面でビロード状の組織を示し、豊
富で胞子の多い分生子の形成があった。コロニーの色は、光沢のない青味を帯び
た緑色（Munsell，7.5BG4/4）又は濃色〜柔らかな青緑色（Munsell，5BG4/2-7/4
）であった。菌糸体は、周辺だけが白く、往々にして目立たなかった。NR 7329
の裏の色は、群体の黄色（Munsell，5Y7/6）であり、他の菌株のそれは、ネープ
ルイエロー（Munsell，2.5Y8/6）〜地味な黄緑色（Munsell，2.5GY7/2）であっ
た。滲出液及び可溶性色素は生じなかった。
ＭＥＡ上でコロニーは速やかに生育し、２５℃で７日後に直径５２〜６３mmに
達し、平面で濃密な、時としてフェルト状のコロニーとなり、ＣＹＡ上２５℃で
の組織よりもゆるめのそれを示した。コロニーの色は、光沢のない緑〜緑色を帯
びた灰色（Munsell，5G5/4-7/2）であった。菌糸体は目立たなかった。裏側の色
は、無色又は光沢のない黄緑色（Munsell，7.5GY6/4）であった。滲出液及び可
溶性色素は見られなかった。
ＣＹ２０Ｓ上２５℃で、コロニーは速やかに生育し、７日目に直径５０−５６
mmに達し、濃密でビロード状又はフェルト状のコロニーを示した。このコロニー
の色及び組織は、ＣＹＡ上２５℃でのそれらと同様であった。菌糸体は周辺だけ
が白色又は淡い緑色を帯びた黄色（Munsell，10Y9/4）であった。コロニーの裏
の色はクリーム〜中間の帯緑黄色（Munsell，10Y7/6）であった。FE 6425の菌株
だけは赤味がかった褐色の可溶性色素をわずかに生じた。
ＣＹＡ上３７℃で、コロニーは速やかに生育してペトリ皿に一杯になり、平ら
で粉状のコロニーを示した。コロニーの色は灰色がかった黄緑色〜帯黄緑色（Mu
nsell，7.5GY6/2-5GY6/2）であった。分生子形成は非常に豊富で、菌糸体は目立
たないか又は周辺のみにあった。コロニーの裏には縦溝があり、淡黄褐色〜淡い
赤味がかった黄色（Munsell，2.5Y6/6-7/6）に着色していた。これらのコロニー
のいくつかは透明な滲出液を生じた。
ＣＹＡ上５℃で発芽は菌株の全てに見られなかった。NR 7329 、NR 7330、NR 7331、NR 7332及びNR 7334株の生態学的特徴
分生子頭は円柱状であった。柱頭は一列の細胞からなり、互いに平行している
密に詰まった小梗及び菌柄軸を有していた。小梗は小胞の半分〜３分の２を被っ
ていた。小胞は幅が１３〜３０μmの厚い壁で形づけられるへら状又は漏斗状で
あった。菌柄は無着色で、平滑な壁があり、長さが４００μm以下、場合によっ
ては５００μmまで小胞中に徐々に伸張している。分生子は直径が２．５〜４．
０μmの球形又はほぼ球形〜楕円形であった。表面は多様で、平滑〜粗面で、場
合によっては刺があった。
コロニーは２５℃及び３７℃で速やかに生育し、いくらか光沢のない緑の色合
いに着色し、濃密で豊富な分生子の形成があった。分生子頭は円柱状を形成した
。
小胞はへら状をなし、その半分〜３分の２に胞子を生じる機能をもち、互いに平
行している密に詰まった小梗及び軸を有していた。分生子は小さい球形〜楕円形
であった。これらの独特な特徴に基づいて、このNR 7329、NR 7330、NR 7331、N
R 7332及びNR 7334株は、Aspergillus fumigatusの菌株として同定され、それぞ
れ、Aspergillus fumigatus NR 7329(DSM 10678)、NR 7330(DSM 10679)、NR 733
1(DSM 10680)、NR 7332(DSM 10681)及びNR 7334(DSM 10682)と命名された。
本発明の化合物Ａ及びＢは、好気性条件下に、培地で化合物Ａ及び／又はＢを
製造することができるAspergillusに属する微生物を培養し、培地から化合物Ａ
及びＢを単離することによって製造される。
本発明による培養は、培養される微生物によって用いることができる通常の栄
養素を含む培地で行なわれる。炭素源としては、例えば、グルコース、スクロー
ス、澱粉、グリセリン、糖蜜、デキストリン及びこれらの混合物が挙げられる。
窒素源は、例えば、大豆粉、綿実粉、肉エキス、ペプトン、乾燥酵母、酵母エキ
ス、コーンスティープリカー、硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウム及びこれらの
混合物である。更に、培地には微生物の生育を促進し、フンガルレスチンの産生
を増加させる有機又は無機の他の物質を加えてもよい。このような物質の例は、
炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、リン酸塩などのような無機塩類である。
培養は、好気性条件下に水性の培地で、好適には液内醗酵によって行なわれる
。培養は２０℃〜３７℃の温度、２７℃の最適温度で適切に行なわれる。培養は
pH３〜９で好適に行なわれる。培養時間は培養が行なわれる条件により異なる。
一般に、培養を２０〜２００時間続ければ足りる。
培養組織から化合物Ａ及びＢを単離するために、微生物によって産生される代
謝物を培養組織から単離するのに通常用いられる分離法が用いられる。例えば、
菌糸体は、遠心分離又は濾過によって醗酵培養液から分離され、目的化合物は、
アルカノール、例えばｎ−ブタノール、及びエステル、例えば酢酸エチル、酢酸
ブチルなどのような水に不溶の有機溶媒で濾液から抽出される。他方、分離した
菌糸体に含まれる目的化合物は、例えば、菌糸体を含水アセトン又は含水メタノ
ールのような溶媒で抽出し、溶媒を留去し、更に残渣を水に不溶の有機溶媒で抽
出することによって得られる。このようにして得た溶媒層は硫酸ナトリウムなど
の
ような脱水剤で乾燥され、減圧下に濃縮される。生成した粗製の化合物Ａ及びＢ
は、分配法、カラムクロマトグラフィー法（吸着剤として、シリカゲル、酸化ア
ルミニウム、オクタデシル−シリカゲル、Sephadex LH-20などを使用する）及び
高速液体クロマトグラフィー（吸着剤として、シリカゲル、オクタデシル−シリ
カゲル、フェニル−シリカゲルなどを使用する）によって精製することができる
。
化合物Ａ及びＢは遊離の形で単離されるが、必要に応じて、常法により、生理
学的に使用し得る塩（例えば、ナトリウム塩、アンモニウム塩など）に変換され
る。
化合物Ａ及びＢは、以下に記載する工程Ａ〜Ｆによって、それぞれ、化合物Ａ
−１〜Ａ−１０及びＢ−１〜Ｂ−６に変換することができる。工程Ａ
：
Ｒ1が低級アルキルであり、Ｒ2が水素であり、Ｘ及びＹがＣＯであり、そして
ＺがＯであるか；又はＲ1が水素であり、Ｒ2が低級アルキルであり、Ｘ及びＹが
ＣＯであり、そしてＺがＯであるか；又はＲ1及びＲ2が低級アルキルであり、Ｘ
及びＹがＣＯであり、そしてＺがＯである、式（Ｉ）の化合物は、炭酸カリウム
又は酸化銀のような塩基の存在下、アセトン又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
のような溶媒中で、アルキルハロゲン化物又はアルキル硫酸を用いて、化合物Ａ
又はＢをアルキル化することによって製造することができる。反応温度は、約−
５０℃〜１５０℃、好適には、約０℃〜１００℃の広い範囲で異なる。メチル化
は、クロロホルム又はメタノールのような溶媒中で、化合物Ａ又はＢをジアゾメ
タンで処理することによっても行なわれる。この反応温度は、約０℃〜８０℃、
好適には１０℃〜３０℃の広い範囲で異なる。工程Ｂ
：
Ｒ1がアシルであり、Ｒ2が水素であり、Ｘ及びＹがＣＯであり、そしてＺがＯ
であるか；又はＲ1が水素であり、Ｒ2がアシルであり、Ｘ及びＹがＣＯであり、
そしてＺがＯであるか；又はＲ1及びＲ2がアシルであり、Ｘ及びＹがＣＯであり
、そしてＺがＯである、式（Ｉ）の化合物は、カルボジイミドのようなカップリ
ング剤の存在下、アセトニトリル又はジオキサンのような不活性溶媒中で、カル
ボン酸を用いて、化合物Ａ又はＢをアシル化することによって製造することがで
き
る。反応温度は、約−５０℃〜１００℃、好適には、約−２０℃〜５０℃の広い
範囲で異なる。アシル化は、例えば、酸塩化物、又は他の有機酸、例えばベンゼ
ンスルホン酸との混合酸無水物のような上記のカルボン酸の反応性誘導体を用い
て達成される。アシル化は、場合により、重炭酸ナトリウム、ピリジン、トリエ
チルアミン又はＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンのような塩基の存在下、塩化メ
チレン、クロロホルム、アセトニトリル又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのよ
うな不活性溶媒中で行なわる。工程Ｃ
：
Ｒ1が低級アルキルであり、Ｒ2がアシルであり、Ｘ及びＹがＣＯであり、そし
てＺがＯであるか；又はＲ1がアシルであり、Ｒ2が低級アルキルであり、Ｘ及び
ＹがＣＯであり、そしてＺがＯである、式（Ｉ）の化合物は、カルボジイミドの
ようなカップリング剤の存在下、アセトニトリル又はジオキサンのような不活性
溶媒中で、カルボン酸を用いて、Ｒ1が低級アルキルであり、Ｒ2が水素であり、
Ｘ及びＹがＣＯであり、そしてＺがＯであるか；又はＲ1が水素であり、Ｒ2が低
級アルキルであり、Ｘ及びＹがＣＯであり、そしてＺがＯである、式（Ｉ）の化
合物（工程Ａの方法に準じて製造される）をアシル化することによって製造する
ことができる。反応温度は、約−５０℃〜１００℃、好適には約−２０℃〜５０
℃の広い範囲で異なる。アシル化は、例えば酸塩化物又は他の有機酸、例えばベ
ンゼンスルホン酸との混合酸無水物のような上記のカルボン酸の反応性誘導体を
用いても行なうことができる。アシル化は、場合により、重炭酸ナトリウム、ピ
リジン、トリエチルアミン又はＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンのような塩基の
存在下、塩化メチレン、クロロホルム、アセトニトリル又はＮ，Ｎ−ジメチルホ
ルムアミドのような不活性溶媒中で行なわれるか、又は重炭酸カリウム又は酸化
銀のような塩基の存在下、アセトン又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような
不活性溶媒中で、アルキルハロゲン化物又はアルキル硫酸を用いて、Ｒ1がアシ
ルであり、Ｒ2が水素であり、Ｘ及びＹがＣＯであり、そしてＺがＯであるか；
又はＲ1が水素であり、Ｒ2がアシルであり、Ｘ及びＹがＣＯであり、そしてＺが
Ｏである、式（Ｉ）の化合物（上記の工程Ｂの方法に準じて製造される）をアル
キル化することによって製造することができる。反応温度は、約−５０℃〜１０
０℃、
好適には約−２０℃〜５０℃の広い範囲で異なる。メチル化は、クロロホルム又
はメタノールのような溶媒中で、化合物Ａ及びＢをジアゾメタンで処理すること
によっても行なうことができる。反応温度は、約０℃〜８０℃、好適には約１０
℃〜３０℃の広い範囲で異なる。工程Ｄ
：
ＸがＣＨＯＨであり、Ｒ1及びＲ2のそれぞれが、水素、低級アルキル又はアシ
ルであり、ＹがＣＯであり、そしてＺがＯである、式（Ｉ）の化合物は、化合物
Ａ若しくはＢ、又は上記の工程Ａ、Ｂ若しくはＣに記載の方法によって製造され
る化合物を、エチルアルコール又は酢酸のような適切な有機溶媒中で、パラジウ
ム炭素又は白金のような触媒上で、場合によっては高圧下での水素化；又はエチ
ルアルコールのような適切な有機溶媒中で、水素化ホウ素ナトリウムで処理して
還元することによって製造することができる。反応温度は、約−８０℃〜５０℃
、好適には約０℃〜３０℃の広い範囲で異なる。工程Ｅ
：
ＹがＣＨ2であり、Ｒ1及びＲ2のそれぞれが、水素、低級アルキル又はアシル
であり、ＸがＣＯ又はＣＨＯＨであり、そしてＺがＯである、式（Ｉ）で表され
る化合物は、化合物Ａ若しくはＢ、又は上記の工程Ａ、Ｂ、Ｃ若しくはＤに記載
の方法によって製造される化合物を、エチルアルコールのような適切な有機溶媒
中で水素化ホウ素ナトリウムで処理して還元することによって製造することがで
きる。反応温度は、約−８０℃〜５０℃、好適には約０℃〜３０℃の広い範囲で
異なる。工程Ｆ
：
ＺがＮＨであり、Ｒ1及びＲ2のそれぞれが、水素、低級アルキル又はアシルで
あり、ＸがＣＯ又はＣＨＯＨであり、そしてＹがＣＯ又はＣＨ2である、式（Ｉ
）で表される化合物は、化合物Ａ若しくはＢ、又は上記の工程Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ若
しくはＥに記載の方法によって製造される化合物を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムア
ミドのような適切な有機溶媒中、約−４０℃〜８０℃、好適には約０℃〜３０℃
の温度で、アンモニアで処理し、次いでピリジニウムｐ−トルエンスルホナート
のような弱酸の存在下、約４０℃〜２００℃、好適には約８０℃〜１５０℃の温
度
で、トルエン及びベンゼンのような適切な溶媒中で加熱することで製造すること
ができる。形質変換を起こしたいくつかの細胞系に対する式（Ｉ）の化合物の抗増殖活性
結腸−直腸癌細胞系(ＨＴ−２９及びＳＷ４８０)、肺癌細胞系(Ｈ４６０ａ)、
骨肉腫細胞系（Ｓａｏｓ−２）及び膵臓細胞系（ＡＳＰＣ１）を、全てＡＴＣＣ
（American type Cell Culture Collection）から購入し、ＡＴＣＣによって推
奨される培地で培養して生育させた。乳癌細胞系(Ｔ−４７Ｄ及びＭＣＦ−７)、
結腸−直腸癌細胞系（ＣＯＬＯ−３２０ＤＭ及びＨＣＴ１１６）及び肺癌細胞系
（Ｈ１２９９）に対する、化合物の抗増殖活性もテストした。これらの細胞の生
育に及ぼす種々の化合物の効果を分析するために、アッセイの終わりに最低４倍
増の余裕をみておく濃度で細胞を培養した。分析する化合物を１００％ＤＭＳＯ
に溶解し、１０mM原液を生成した。それぞれの化合物をＨ2Ｏで１mMに希釈し、
培地を含む９６穴マスタープレートの最初の列にある３穴に加え、４０μMの最
終濃度にした。次いで、化合物を「マスタープレート」の培地に連続的に希釈し
た。次いで、希釈された化合物は、細胞を含むテストプレートに移した。それぞ
れの穴におけるＤＭＳＯの最終濃度は０．１％ＤＭＳＯであった。ＭＴＴアッセ
イを化合物添加後の異なる時間で行った。それぞれの穴にＭＴＴ[３−（４−５
−メチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド
、チアゾリルブルー]を加え、１mg/mlの最終濃度とした。次いで、プレートを３
７℃で２．５〜３時間培養した。次に、ＭＴＴを含む培地を取り除き、それぞれ
の穴に１００％エタノール５０μlを加えてホルマザンを溶解した。その後、自
動プレート読み取り装置（Bio-tek micropkate reader）を用いて、吸光度を読
み取った。Ｓａｏｓ−２細胞の場合、細胞は６穴プレートで培養し、化合物を異
なる濃度で培養２４時間後に加え、その後、薬剤添加後の異なる日数に細胞を計
数した。結果を表１に示した。
上記の表１に示すように、化合物Ａ及びＢは、形質転換を起こした細胞系の増
殖に対して阻害活性を有する。したがって、本発明によって提供される式（Ｉ）
の化合物は、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、骨肉腫癌などに対する抗癌剤として有用
であり、同様にヒト及びヒト以外の両方の哺乳動物への投与に適切である。
本発明によって提供される式（Ｉ）の化合物の急性毒性は見られなかった。
本発明による生成物は、薬剤として、例えば腸溶性（経口）投与のための薬学
的製剤の形態で用いられる。本発明による生成物は、例えば、経口的に、例えば
、錠剤、被覆錠剤、糖衣錠、硬質及び軟質のゼラチンカプセル、液剤、乳剤又は
懸濁剤の形態で、又は直腸的に、例えば、坐剤の形態で投与することができる。
治療上の用途のためには、式（Ｉ）の化合物及びこれらの生理学的に使用し得
る塩は、種々の形態の薬学的組成物に調剤することができる。これらの化合物を
含む薬学組成物は、当業者が熟知している常法を用いて、例えば、適切な、非毒
性、不活性、治療的に適合性の固体又は液体の担体物質、及び、所望ならば、通
常の薬学的添加剤と一緒に、成分を投薬形態に組み合わせることによって製造さ
れる。
化合物は、最終的に、適切な経口又は非経口の投薬形態の組成物に包含するこ
とが意図されている。本発明の組成物は、場合による、薬学的製剤の製造におい
て通常用いられる種々の添加剤のいずれかを含むことができる。したがって、例
えば、本組成物を所望の経口投薬形態に調合する場合、任意の成分として、共沈
させた水酸化アルミニウム−炭酸カルシウム、リン酸ジカルシウム又はラクトー
スのような充填剤；トウモロコシ澱粉のような崩壊剤；タルク、ステアリン酸カ
ルシウムのような滑沢剤などを用いることができる。しかしながら、ここに挙げ
た場合による成分は、単なる例として引用したものであり、本発明は、これらの
使用に限定されないことが十分に理解されるべきである。その他の同様な添加剤
は、当分野でよく知られており、本発明を実施するのに用いられる。
このような担体物質として、無機のみならず有機の担体物質も適切である。し
たがって、錠剤、被覆錠剤、糖衣錠及び硬質ゼラチンカプセルには、例えば、ラ
クトース、トウモロコシ澱粉又はこれらの誘導体、タルク、ステアリン酸又はそ
の塩を用いることができる。軟質ゼラチンカプセルのための適切な担体は、例え
ば、植物油、ロウ、脂肪、及び半固体及び液体のポリオールである(活性物質の
性質により異なるが、軟質ゼラチンカプセルの場合には担体は必要でない)。液
剤又はシロップ剤の製造のための適切な担体物質は、例えば、水、ポリオール、
サッカロース、転化糖及びグルコースである。坐剤のための適切な担体物質は、
例えば、天然又は硬化油、ロウ、脂肪、及び半流動性又は液状のポリオールであ
る。
薬学的添加剤は、通常の保存剤、溶解剤、安定剤、湿潤剤、懸濁剤、甘味剤、
着色剤、芳香剤、浸透圧を変化させる塩、緩衝液、被覆剤及び抗酸化剤が意図さ
れる。
式（Ｉ）の化合物又はこれらの塩は、非経口投与のために好適に用いられ、こ
の目的のために、好適には、水又は等張性の通常の塩溶液のような通例の媒体に
よる希釈用の凍結乾燥品又は乾燥粉末として製剤される。
例えば、化合物Ａは、生理食塩水に好都合に溶解され、通常１〜５０mg/kg/da
y、好適には１〜２０mg/kg/dayの用量で、静脈内、皮下又は筋肉内に投与される
；又は、カプセル又は糖衣錠の形態で、通常１〜１００mg/kg/day、好適には５
〜５０mg/kg/dayの用量で投与される。
以下の実施例は、より詳細に本発明を説明するが、この発明を限定するもので
はない。特に断らない限り、％は重量／容量％を意味する。実施例１
：フラスコ培養
Aspergillus fumigatus NR 7329(DSM 10678)の原培養液の一部（０．１ml）を
、０．０５％Ｍｇ3(ＰＯ4)2・８Ｈ2Ｏ、０．８％ＫＣｌ、０．５％スクロース、
１．０％コーンスティープリカー、２．０％Toast soya（Nisshin Seiyu Co．Lt
d.,Japan）及び０．０３％Nissan disfoam CA-123（Nippon Yushi Co.Ltd.，Jap
an）よりなる培地１００mlを含む５００-ml容のエーレンマイヤーフラスコ中で
培養した。培地のpHを６．５に調整した。種培養液を回転振盪器で２２０rpm、
２７℃で３日間培養した。次いで、一部分の２mlを、それぞれが上記と同じ培地
１００mlを含む１００個の５００-ml容のフラスコに移した。種培養と同じ条件
下に回転振盪器で醗酵を行なった。約９６時間後に、化合物の収率は最高に達し
た。次いで、全培養液に下記の単離法を行なった。ジャー醗酵
Aspergillus fumigatus NR 7329(DSM 10678)の原培養液の一部（０．１ml）を
、上記と同じ培地１００mlを含む５００-ml容のエーレンマイヤーフラスコ中で
培養した。最初の種培養液を回転振盪器で２２０rpm、２７℃で培養した。次い
で、培養液の一部（２ml）を、それぞれが上記と同じ培地１００mlを含む２４個
の５００-ml容のフラスコに移した。同じ条件下に醗酵を３日間行なった。生成
した培養液の６００mlのそれぞれを、それぞれが、更にNissan disfoam CA-123
の５００mlを加えた同じ培地の３０リットルを含む４個の５０リットル容のジャ
ー醗酵器で培養した。ジャー醗酵を、４００rpm、３０L/minの空気流速で撹
拌しながら、２７℃で行なった。醗酵の約９１時間後に、化合物の最高収率に達
し、全培養液に下記の単離法を行なった。単離法−Ｉ
上記のフラスコ醗酵で得られた培養液（１０L）を、遠心分離によって上澄液
及び菌糸体ケーキに分離した。上澄液（６．４L）を酢酸エチル（６．４L）で抽
出し、有機層を減圧下に濃縮乾固した。濃縮物（６．９ｇ）をメタノール（１L
）に溶解し、ｎ−ヘキサン（２L）で分配した後、ｎ−ヘキサン層を取り除いた
。次いで、メタノール層を減圧下に濃縮乾固した（粗抽出物Ｉ：５．２ｇ）。他
方、菌糸体ケーキにメタノール（４．５L）を加えて抽出し、この混合物を濾過
してメタノール抽出液を得た。このようにして得たメタノール抽出液を減圧下に
濃縮し、濃縮物（１．５L）をｎ−ヘキサン（１．５L）で洗浄した。下層を減圧
下に濃縮した。残渣に水（１．５L）を加え、このようにして得た懸濁液を酢酸
エチル（１．５L）で抽出した。次いで、酢酸エチル層を減圧下に濃縮乾燥固し
た(粗抽出物II：４．０ｇ)。粗抽出物Ｉ及びIIを合わせ、YMC-GEL ODS-A60-60/3
0(５０ｇ、YMC Co．Ltd.，Japan)を用いたカラムクロマトグラフィーに付した。
カラムを水とメタノールの混合溶媒で溶出した。活性化合物を含む溶出液を合わ
せ、減圧下に濃縮乾固した。次いで、残渣（７．１ｇ）をSephadex LH-20(４L、
Pharmacia，Sweden)を用いたカラムクロマトグラフィーに付し、溶出液としてメ
タノールを用いた。活性化合物を含む溶出液を合わせ、２画分(画分１：１．９
８ｇ、画分２:６３mg)を得た。画分１を分取用ＨＰＬＣ(CAPCELL PAK C18 UG-12
0A; Shiseido，Japan)に付し、溶出液として３０％水性アセトニトリルを用いた
。それぞれ、化合物Ａ及びＢを含む画分を減圧下に濃縮乾固した。化合物Ａを含
む残渣（２７５mg）を再び分取用ＨＰＬＣ（YMC-Pack Ph A-414; YMC Co．Ltd.
，Japan）に付し、溶出液として３０％水性アセトニトリルを用いた。化合物Ａ
を含む画分を減圧下に濃縮乾固し、メタノールから結晶化し、化合物Ａ（１３２
mg）の白色結晶を得た。化合物Ｂを含む残渣(１１５mg)を同様に処理し、化合物
Ｂ（７４mg）の白色結晶を得た。単離法−II
上記のフラスコ醗酵で得られた培養液（１２０L）を、遠心分離によって上澄
液及び菌糸体ケーキに分離した。上澄液（１００L）を酢酸エチル（７２L）で抽
出し、有機層を減圧下に濃縮乾固した。濃縮物（１６０ｇ）をメタノール（３L
）に溶解し、ｎ−ヘキサン（５L）を加えて分配した後、ｎ−ヘキサン層を取り
除いた。次いで、メタノール層を減圧下に濃縮乾固した（粗抽出物Ｉ：７０ｇ）
。他方、菌糸体ケーキにメタノール（３６L）を加えて抽出し、この混合物を濾
過してメタノール抽出液を得た。このようにして得たメタノール抽出液を減圧下
に濃縮し、濃縮物（３L）をｎ−ヘキサン（３L）で洗浄した。下層を減圧下に濃
縮した。残渣に水（２L）を加え、このようにして得た懸濁液を酢酸エチル（２L
）で抽出した。次いで、酢酸エチル層を減圧下に濃縮乾固した(粗抽出物II：２
３０ｇ)。粗抽出物Ｉ及びIIを合わせ、シリカゲル（３００ｇ、Wakogel C-200;
Wako Pure Chemical Tndustries，Ltd.，Japan）を用いたカラムクロマトグラフ
ィーに付した。カラムをジクロロメタンとメタノールの混合溶媒で溶出した。活
性化合物を含む溶出液を減圧下に濃縮乾固した。次いで、残渣（７７ｇ）をSeph
adex LH-20（４４L）を用いたカラムクロマトグラフィーに付し、溶出液として
メタノールを用いた。活性化合物を含む溶出液を合わせ、３画分（画分１、２、
３）を得た。化合物Ａ及びＢを含む画分１（１０．６１ｇ）をLobarカラム（LiC
hroprep Si60 size C; Merck，Germany）に付し、溶出液としてジクロロメタン
及びメタノールを用いた。化合物Ａを含む画分を減圧下に濃縮乾固し、メタノー
ルから結晶化し、化合物Ａ（２．３９ｇ）の白色結晶を得た。化合物Ｂ含む画分
を同様に処理し、化合物Ｂ（０．７２ｇ）を白色結晶として得た。実施例２
：
Aspergillus fumigatus NR 7334(DSM 10682)及びAspergillus japonicus NR 7
328(DSM 10677)を、実施例１に記載と同じ方法で培養した。
化合物Ａ及びＢの単離収率を、表２に示した。
実施例３：フラスコ培養
Aspergillus fumigatus NR 7330(DSM 10679)の原培養液の一部（０．１ml）を
、２％グルコース、１％ジャガイモ澱粉、１．５％グリセリン、１％Toast soya
、０．２５％ポリペプトン、０．３５％酵母エキス、０．３％ＮａＣｌ、０．５
％ＣａＣＯ3、０．００５％ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ、０．０００５％ＣｕＳＯ4・５
Ｈ2Ｏ、０．０００５％ＭｎＳＯ4・４Ｈ2Ｏ、及び０．００３％Nissan disfoam
CA-123よりなる培地１００mlを含む５００-ml容のエーレンマイヤーフラスコ中
で培養した。培地のpHは調整しなかった。接種及び生産培養の方法と条件は、フ
ラスコ培養１と同様にした。醗酵の約９６時間後、全培養液に単離操作を行なっ
た。Aspergillus fumigatus NR 7331（DSM 10680）及びAspergillus fumigatus
NR 7332(DSM 10681)を、上記と同様な方法で培養した。
化合物Ａ及びＢの単離収率を、表３に示した。
実施例４：化合物Ａ−１及びＢ−１の製造
ピリジン／無水酢酸（１：１、v/v）の１．４mlに溶解した化合物Ａの２１mg
の溶液を、室温で１時間撹拌した。この混合物を減圧下に乾燥して、化合物Ａ−
１（２６mg）を白色粉末として得た。
ピリジン／無水酢酸（１：１、v/v）の１．４mlに溶解した化合物Ｂの２１mg
の溶液を、室温で１時間撹拌した。この混合物を減圧下に乾燥して、化合物Ｂ−
１（２６mg）を白色粉末として得た。実施例５
：化合物Ａ−４及びＢ−４の製造
メタノール３mlに溶解した化合物Ａの４mgの溶液に、過剰のジアゾメタンエー
テル溶液を室温で加えた。８時間放置した後、反応溶液を減圧下に濃縮した。残
渣を分取用ＴＬＣ（Kieselgel 60 F254，Art 5715; Merck，Germany）に付して
精製し、化合物Ａ−４（４mg）を白色粉末として得た。
メタノール３mlに溶解した化合物Ｂの６mgの溶液を、同様に処理して、化合物
Ｂ−４（５mg）を白色粉末として得た。実施例６
：化合物Ａ−７の製造
ジメチルスルホキシド０．２mlに溶解した化合物Ａ−４の５mgの溶液に、無水
酢酸０．２mgを室温で加えた。この混合物を１７時間撹拌した後、減圧下に濃縮
した。残渣をＨＰＬＣに付して精製し、化合物Ａ−７（０．５mg）を白色粉末と
して得た。実施例７
：化合物Ａ−８の製造
エチルアルコール１０mlに溶解した化合物Ａの５０mgの溶液に、パラジウム炭
素１５mgを加えた。この混合物を、水素ガスの雰囲気下、室温で１５時間撹拌し
た。触媒を濾去した後、溶媒を減圧下に留去した。残渣をＨＰＬＣ（CAPCELL PA
K C18 SG120A）に付し、溶出剤としてリン酸緩衝液及びアセトニトリルの混合液
を用いて精製し、化合物Ａ−８（５mg）を白色粉末として得た。実施例８
：化合物Ａ−９の製造
メタノール４mlに溶解した化合物Ａの２０mgの溶液に、アルゴンガスの雰囲気
下、水素化ホウ素ナトリウム２．６mgを０℃で加えた。４時間撹拌した後、反応
溶液を減圧下に濃縮し、残渣に酢酸エチル４ml及び蒸留水４mlを加えた。この溶
液を振盪し、有機層を減圧下に濃縮した。残渣をＨＰＬＣ（CAPCELL PAK C18 SG
120A）に付し、溶出剤としてリン酸緩衝液及びアセトニトリルの混合液を用いて
精製し、化合物Ａ−８（１５mg）及び化合物Ａ−９（２mg）を白色粉末として得
た。実施例９
：化合物Ａ−５、Ａ−６、Ｂ−５及びＢ−６の製造
ピリジン０．２mlに溶解した化合物Ａ−４の３mgの溶液に、（−）−α−メト
キシ−α−トリフルオロメチルフェニルアセチルクロリド４．５mgを加えた。こ
の混合物を５時間撹拌した。ピリジンを減圧下に留去した後、残渣を分取用ＴＬ
Ｃ（Kieselgel 60 F254，Art 5715）に付して精製し、化合物Ａ−５（３mg）を
白色粉末として得た。
ピリジン０．２mlに溶解した化合物Ａ−４の３mgの溶液に、（＋）−α−メト
キシ−α−トリフルオロメチルフェニルアセチルクロリド４．５mgを加えた。こ
の混合物を５時間撹拌した。ピリジンを減圧下に留去した後、残渣を分取用ＴＬ
Ｃ（Kieselgel 60 F254，Art 5715）に付して精製し、化合物Ａ−６（３mg）を
白色粉末として得た。
ピリジン０．２mlに溶解した化合物Ｂ−４の２mgの溶液に、（−）−α−メト
キシ−α−トリフルオロメチルフェニルアセチルクロリド４．５mgを加えた。こ
の混合物を５時間撹拌した。ピリジンを減圧下に留去した後、残渣を分取用ＴＬ
Ｃ（Kieselgel 60 F254，Art 5715）に付して精製し、化合物Ｂ−５（２mg）を
白色粉末として得た。
ピリジン０．２mlに溶解した化合物Ｂ−４の２mgの溶液に、（＋）−α−メト
キシ−α−トリフルオロメチルフェニルアセチルクロリド４．５mgを加えた。こ
の混合物を５時間撹拌した。ピリジンを減圧下に留去した後、残渣を分取用ＴＬ
Ｃ（Kieselgel 60 F254，Art 5715）に付して精製し、化合物Ｂ−６の２mgを白
色粉末として得た。実施例１０
：化合物Ａ−３及びＢ−３の製造
ピリジン０．８mlに溶解した化合物Ａの５mgの溶液に、ｐ−ブロモベンゾイル
クロリド４mgを加えた。この混合物を１時間撹拌した。ピリジンを減圧下に留去
した後、残渣を分取用ＴＬＣ（Kieselgel 60 F254，Art 5715）に付して精製し
、化合物Ａ−２（２mg）及び化合物Ａ−３（０．５mg）を白色粉末として得た。
ピリジン０．８mlに溶解した化合物Ｂの５mgの溶液を、同様に処理して、化合
物Ｂ−２（１mg）及び化合物Ｂ−３（２mg）を白色粉末として得た。実施例１１
：化合物Ａ−２及びＢ−２の製造
アセトニトリル２０mlに溶解した化合物Ａの２００mgの溶液に、ｐ−ブロモベ
ンゾイルクロリド１６４mg及び炭酸カリウム１２０mgを加えた。この混合物を室
温で３０分間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、蒸留水で洗浄した。
有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下に濃縮した。残渣をシリカゲル（
Wakogel C-200）を用いたクロマトグラフィーに付し、溶出液として酢酸エチル
とヘキサンの混合溶媒を用いて、化合物Ａ−２（１００mg）を白色粉末として得
た。
アセトニトリル２０mlに溶解した化合物Ｂの２００mgの溶液を、同様に処理し
て、化合物Ｂ−２（１００mg）を白色粉末として得た。実施例１２
：化合物Ａ−１０の製造
無水ＤＭＦ０．２５mlに溶解した化合物Ａの７２．９mgの溶液に、アルゴンガ
スの雰囲気下、新たに調製したＮＨ3の０.５mlをＤＭＦ溶液として加えた。３０
分後、揮発性物質を減圧下に留去した。固体の残渣に、トルエン２２ml及びピリ
ジニウムｐ−トルエンスルホナート１０mgを加えた。この混合物を合計１２５分
間還流し、次いで冷やし、揮発性物質を減圧下に留去した。生成物をシリカゲル
を用いたクロマトグラフィーに付し、ヘキサン−酢酸エチル（１：１）で溶出し
て、化合物Ａ−１０（４５．９mg）を白色粉末として得た。
以下の実施例は、本発明で提供された化合物Ａを含む抗癌剤を例示する：実施例
以下の成分を含む錠剤を、常法により製造した：
化合物Ａ １００mg
澱粉 ２６mg
カルボキシメチルセルロースカルシウム １５mg
結晶セルロース ２０mg
ステアリン酸マグネシウム ４mg
１６５mg
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ
Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｎ 1/14 Ａ
Ｃ１２Ｐ 17/08 Ｃ１２Ｐ 17/08
17/14 17/14
//(Ｃ１２Ｎ 1/14
Ｃ１２Ｒ 1:66）
(Ｃ１２Ｎ 1/14
Ｃ１２Ｒ 1:68）
(72)発明者 ウォフクリッチ，ペーター・マイケル
アメリカ合衆国、ニュージャージー
07110、ナットレー、ローダ・アベニュー
124
(72)発明者 矢吹 奈美
神奈川県茅ヶ崎市高田３―21―20