JPH1156343A - 動物細胞培養用固定床リアクター及び細胞の播種方法 - Google Patents
動物細胞培養用固定床リアクター及び細胞の播種方法Info
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- JPH1156343A JPH1156343A JP9262633A JP26263397A JPH1156343A JP H1156343 A JPH1156343 A JP H1156343A JP 9262633 A JP9262633 A JP 9262633A JP 26263397 A JP26263397 A JP 26263397A JP H1156343 A JPH1156343 A JP H1156343A
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Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】動物細胞培養リアクター内に細胞を均一に播種
する動物細胞培養用固定床リアクター及びこれを利用し
た細胞の播種方法の提供。 【解決手段】内部を培地が通過しうる細胞を収納する容
器１の培地が通過する流路方向中央部に液出入口５を設
け、その出入口を播種口とする。
する動物細胞培養用固定床リアクター及びこれを利用し
た細胞の播種方法の提供。 【解決手段】内部を培地が通過しうる細胞を収納する容
器１の培地が通過する流路方向中央部に液出入口５を設
け、その出入口を播種口とする。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は動物細胞培養用固定床リ
アクター及びそのリアクターを用いた細胞の播種方法に
関する。
アクター及びそのリアクターを用いた細胞の播種方法に
関する。
【０００２】
【従来の技術】動物細胞培養用固定床リアクターとして
ホローファイバー型リアクターや固定化担体をカラムに
封じたカラム型リアクターが用いられている。前者は細
胞が存在する空間に複数のホローファイバーを配置しそ
のホローファイバー内に新鮮な培地を供給することによ
ってファイバーの壁面を通して細胞に酸素や栄養を供給
するもので、後者は多孔質のガラスまたはセルロースや
コラーゲンコーティングした不織布等の細胞を固定する
担体をカラムに封じ、ここに新鮮な培地を供給して用い
られる。これらの固定床リアクターには培地調製槽から
培地が送られる。これらのリアクターへ細胞を播種する
場合ホローファイバー型リアクターでは細胞が存在すべ
き空間（細胞室）の両端に配置したノズルの一方にシリ
ンジやポンプを接続して細胞液を押し込み他方のノズル
から押し込んだ細胞液と等量の培地を抜き取る方法が採
られている。またカラム型リアクターではカラムに培地
を送る送液口からカラム内に細胞を押し込む場合もあ
る。これらの方法ではリアクターの一端から他端に播種
濃度の勾配や偏りが生じ、その後の培養で細胞がリアク
ター内で均一に増殖しない原因となっている。
ホローファイバー型リアクターや固定化担体をカラムに
封じたカラム型リアクターが用いられている。前者は細
胞が存在する空間に複数のホローファイバーを配置しそ
のホローファイバー内に新鮮な培地を供給することによ
ってファイバーの壁面を通して細胞に酸素や栄養を供給
するもので、後者は多孔質のガラスまたはセルロースや
コラーゲンコーティングした不織布等の細胞を固定する
担体をカラムに封じ、ここに新鮮な培地を供給して用い
られる。これらの固定床リアクターには培地調製槽から
培地が送られる。これらのリアクターへ細胞を播種する
場合ホローファイバー型リアクターでは細胞が存在すべ
き空間（細胞室）の両端に配置したノズルの一方にシリ
ンジやポンプを接続して細胞液を押し込み他方のノズル
から押し込んだ細胞液と等量の培地を抜き取る方法が採
られている。またカラム型リアクターではカラムに培地
を送る送液口からカラム内に細胞を押し込む場合もあ
る。これらの方法ではリアクターの一端から他端に播種
濃度の勾配や偏りが生じ、その後の培養で細胞がリアク
ター内で均一に増殖しない原因となっている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は上記の従来の
欠点に鑑みリアクターへの播種濃度の勾配や偏りを小さ
くしようとする。
欠点に鑑みリアクターへの播種濃度の勾配や偏りを小さ
くしようとする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者は前記課題の解
決に向けて鋭意検討を加え、以下のような知見を得た。
すなわち細胞液にインク等で着色して固定床リアクター
に播種すると細胞液の比重が培養液よりわずかに大きい
ため細胞液はリアクターの底部に沈みがちだった。ホロ
ーファイバー型リアクターのように細胞室の両端につい
たノズルの一方から細胞液を入れ他方から培養液を抜き
取ると細胞室全体に細胞が行き渡ることはなくノズル間
の最短距離に流路が出来てしまい全体への均一な細胞の
播種が難しい。これらの結果からリアクターの中央部か
ら細胞を播種し、左右均等に分散させれば偏りを小さく
できる事に思い至り本発明を完成させた。すなわち本発
明は内部を培地が通過しうる細胞を収納する容器の培地
が通過する流路方向中央部に液出入口を有することを特
徴とする動物細胞培養用固定床リアクターを提案する。
さらにその液出入口から細胞を播種する細胞の播種方法
を提案する。
決に向けて鋭意検討を加え、以下のような知見を得た。
すなわち細胞液にインク等で着色して固定床リアクター
に播種すると細胞液の比重が培養液よりわずかに大きい
ため細胞液はリアクターの底部に沈みがちだった。ホロ
ーファイバー型リアクターのように細胞室の両端につい
たノズルの一方から細胞液を入れ他方から培養液を抜き
取ると細胞室全体に細胞が行き渡ることはなくノズル間
の最短距離に流路が出来てしまい全体への均一な細胞の
播種が難しい。これらの結果からリアクターの中央部か
ら細胞を播種し、左右均等に分散させれば偏りを小さく
できる事に思い至り本発明を完成させた。すなわち本発
明は内部を培地が通過しうる細胞を収納する容器の培地
が通過する流路方向中央部に液出入口を有することを特
徴とする動物細胞培養用固定床リアクターを提案する。
さらにその液出入口から細胞を播種する細胞の播種方法
を提案する。
【０００５】
【発明の実施の形態】上記固定床リアクターは動物細胞
を収納し培養しうる容器であり、接着性の細胞、浮遊性
の細胞ともに対象となる。上記容器に培地を供給する機
能と培地を抜き取る機能が付設される。代表的にはホロ
ーファイバー型リアクターやカラム型リアクターがある
が容器中にホローファイバーの代わりに培地供給路とし
て繊維を配置したものでもよい。容器の培地が通過する
流路方向中央部に液出入口を有する。この出入口は細胞
を播種する口であり、培地出入口としても利用できる。
この出入口から播種された細胞は容器内に左右均等に分
配される。また培地をこの出入口から供給または抜き取
り、容器両端から抜き取りまたは供給すると培地の移動
距離が容器の両端から出し入れする場合に比較して半分
になるので容器通過中の培地の変成を少なくすることが
出来る。
を収納し培養しうる容器であり、接着性の細胞、浮遊性
の細胞ともに対象となる。上記容器に培地を供給する機
能と培地を抜き取る機能が付設される。代表的にはホロ
ーファイバー型リアクターやカラム型リアクターがある
が容器中にホローファイバーの代わりに培地供給路とし
て繊維を配置したものでもよい。容器の培地が通過する
流路方向中央部に液出入口を有する。この出入口は細胞
を播種する口であり、培地出入口としても利用できる。
この出入口から播種された細胞は容器内に左右均等に分
配される。また培地をこの出入口から供給または抜き取
り、容器両端から抜き取りまたは供給すると培地の移動
距離が容器の両端から出し入れする場合に比較して半分
になるので容器通過中の培地の変成を少なくすることが
出来る。
【０００６】
【実施例１】本発明を実施例に従って詳細に説明する。
図１は本発明の実施例１のホローファイバー型リアクタ
ーの一部断面図を示す。動物細胞を収納する容器１はホ
ローファイバー４と細胞室７から構成されている。容器
１の両端には培地の入口２及び出口３が固定され、入口
から入った培地はホローファイバー４内を通過して出口
に達する。容器１の流路方向の中央部に液出入口５が配
置され、通常はゴム栓６で塞がれている。
図１は本発明の実施例１のホローファイバー型リアクタ
ーの一部断面図を示す。動物細胞を収納する容器１はホ
ローファイバー４と細胞室７から構成されている。容器
１の両端には培地の入口２及び出口３が固定され、入口
から入った培地はホローファイバー４内を通過して出口
に達する。容器１の流路方向の中央部に液出入口５が配
置され、通常はゴム栓６で塞がれている。
【０００７】実施例１のリアクターの使用方法につき説
明する。予め注射針つきシリンジに播種したい細胞液を
採っておく。容器１内に培地を入れた状態で注射針をゴ
ム栓６を貫通させ細胞室７内に細胞液を注入する。この
操作によって細胞は細胞室中央部を中心に播種される。
播種された細胞液と同液量の培地はホローファイバーの
壁面を通過して内部に浸透するがホローファイバーの壁
面を培地が通過する際の圧損があるためホローファイバ
ー全体から培地が通過しそれに代わって細胞液が交換さ
れるので細胞室全体に細胞が分散されやすい。播種の速
度と液量を調整することによって細胞室内に均一に播種
が可能である。
明する。予め注射針つきシリンジに播種したい細胞液を
採っておく。容器１内に培地を入れた状態で注射針をゴ
ム栓６を貫通させ細胞室７内に細胞液を注入する。この
操作によって細胞は細胞室中央部を中心に播種される。
播種された細胞液と同液量の培地はホローファイバーの
壁面を通過して内部に浸透するがホローファイバーの壁
面を培地が通過する際の圧損があるためホローファイバ
ー全体から培地が通過しそれに代わって細胞液が交換さ
れるので細胞室全体に細胞が分散されやすい。播種の速
度と液量を調整することによって細胞室内に均一に播種
が可能である。
【０００８】実施例１のリアクターを用いて上記の方法
で細胞を播種してＣＨＯ細胞を培養したところ細胞密度
が６×１０７個／ｍｌに達し、従来法では３×１０７個
／ｍｌだった細胞密度が向上した。細胞の偏りも少なか
った。
で細胞を播種してＣＨＯ細胞を培養したところ細胞密度
が６×１０７個／ｍｌに達し、従来法では３×１０７個
／ｍｌだった細胞密度が向上した。細胞の偏りも少なか
った。
【０００９】本実施例では播種した細胞液に相当する培
地をホローファイバー壁面を浸透させて排除したが細胞
室の両端８の位置に従来のようにノズルを配置しノズル
から培地を抜き取っても従来の方法より均一に分散され
ることは明白である。播種の際注射針をはじめ深くさし
ておき引き抜きながら播種する事も均一に分散する有効
な手段である。
地をホローファイバー壁面を浸透させて排除したが細胞
室の両端８の位置に従来のようにノズルを配置しノズル
から培地を抜き取っても従来の方法より均一に分散され
ることは明白である。播種の際注射針をはじめ深くさし
ておき引き抜きながら播種する事も均一に分散する有効
な手段である。
【００１０】
【実施例２】図２に実施例２のカラム型リアクターの断
面図を示す。培地入口及び出口１１及び１２はプラスチ
ック容器１３にシリコンパッキン１４及び１５で密閉を
保って固定されている。容器１３の端にはフィルター１
８及び１９が配置され容器内部に充填された直径０．５
ｍｍの多孔質細胞担体を収納している。容器１３の側面
には液出入口２０が備えられている。
面図を示す。培地入口及び出口１１及び１２はプラスチ
ック容器１３にシリコンパッキン１４及び１５で密閉を
保って固定されている。容器１３の端にはフィルター１
８及び１９が配置され容器内部に充填された直径０．５
ｍｍの多孔質細胞担体を収納している。容器１３の側面
には液出入口２０が備えられている。
【００１１】実施例２のリアクターの使用方法につき説
明する。容器１３内には多孔質で内部にも細胞を担持可
能なガラスやセルロース製ビーズ、表面吸着型のアパタ
イトやゼラチン製ビーズ、コラーゲンコーティングした
不織布やこれらの混合体等の細胞の担体が収納されてい
る。フィルター１８及び１９はこれらの担体を容器外に
漏らさないが培地は通過する特性を有する。細胞液を液
出入口２０から注入すると細胞は容器内に分散される。
注入された細胞液と同量の培地は培地入り口及び出口１
１及び１２から排出される。培地の出入りは培地入口及
び出口１１および１２を用いてもよいし液出入口２０を
利用してもよい。
明する。容器１３内には多孔質で内部にも細胞を担持可
能なガラスやセルロース製ビーズ、表面吸着型のアパタ
イトやゼラチン製ビーズ、コラーゲンコーティングした
不織布やこれらの混合体等の細胞の担体が収納されてい
る。フィルター１８及び１９はこれらの担体を容器外に
漏らさないが培地は通過する特性を有する。細胞液を液
出入口２０から注入すると細胞は容器内に分散される。
注入された細胞液と同量の培地は培地入り口及び出口１
１及び１２から排出される。培地の出入りは培地入口及
び出口１１および１２を用いてもよいし液出入口２０を
利用してもよい。
【００１２】多孔質ガラスを担体としてＣＨＯ細胞を液
出入口２０から播種して静置し、１時間後培地を液出入
口２０から供給して培地出入口１１及び１２から抜き取
り培養したところ容器体積当たりの細胞密度が１０８個
／ｍｌに達し、細胞の偏りも培地を１１から１２の方向
へ流したものと比較して少なかった。
出入口２０から播種して静置し、１時間後培地を液出入
口２０から供給して培地出入口１１及び１２から抜き取
り培養したところ容器体積当たりの細胞密度が１０８個
／ｍｌに達し、細胞の偏りも培地を１１から１２の方向
へ流したものと比較して少なかった。
【００１３】
【発明の効果】本発明により細胞の播種濃度の偏りを少
なくできるとともに、培地供給口として用いると培地の
流路を短く出来その分リアクターを通過中の培地の変成
を少なくすることが出来る。
なくできるとともに、培地供給口として用いると培地の
流路を短く出来その分リアクターを通過中の培地の変成
を少なくすることが出来る。
【図１】実施例１のホローファイバー型リアクターの一
部断面図を示す。
部断面図を示す。
【図２】実施例２のカラム型リアクターの断面図を示
す。
す。
１．容器 ２，３．培地の入口、出口 ４．ホローファイバー ５．液出入口 ６．ゴム栓 ７．細胞室 ８．細胞室両端のノズル位置 １１，１２．培地入口及び出口 １３．容器 １４，１５．シリコンパッキン １６，１７．袋ナット １８，１９．フィルター ２０．液出入口
Claims (2)
- 【請求項１】内部を培地が通過しうる細胞を収納する容
器の培地が通過する流路方向中央部に液出入口を有する
ことを特徴とする動物細胞培養用固定床リアクター - 【請求項２】前記液出入口から細胞を播種することを特
徴とする細胞の播種方法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9262633A JPH1156343A (ja) | 1997-08-21 | 1997-08-21 | 動物細胞培養用固定床リアクター及び細胞の播種方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9262633A JPH1156343A (ja) | 1997-08-21 | 1997-08-21 | 動物細胞培養用固定床リアクター及び細胞の播種方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1156343A true JPH1156343A (ja) | 1999-03-02 |
Family
ID=17378505
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9262633A Pending JPH1156343A (ja) | 1997-08-21 | 1997-08-21 | 動物細胞培養用固定床リアクター及び細胞の播種方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1156343A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004005454A1 (ja) * | 2002-07-05 | 2004-01-15 | Able Corporation | ヒドロキシアパタイトを用いた細胞培養装置及び細胞モジュール |
| WO2004005455A1 (ja) * | 2002-07-05 | 2004-01-15 | Able Corporation | 細胞培養担体及び細胞培養装置 |
| JP2006509502A (ja) * | 2002-12-11 | 2006-03-23 | フェローサン アクティーゼルスカブ | スワブとしてのゼラチンベースの材料 |
| CN111770987A (zh) * | 2018-02-27 | 2020-10-13 | 三维生物科技有限公司 | 用于生物反应器的支架装载机 |
-
1997
- 1997-08-21 JP JP9262633A patent/JPH1156343A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004005454A1 (ja) * | 2002-07-05 | 2004-01-15 | Able Corporation | ヒドロキシアパタイトを用いた細胞培養装置及び細胞モジュール |
| WO2004005455A1 (ja) * | 2002-07-05 | 2004-01-15 | Able Corporation | 細胞培養担体及び細胞培養装置 |
| JP2006509502A (ja) * | 2002-12-11 | 2006-03-23 | フェローサン アクティーゼルスカブ | スワブとしてのゼラチンベースの材料 |
| CN111770987A (zh) * | 2018-02-27 | 2020-10-13 | 三维生物科技有限公司 | 用于生物反应器的支架装载机 |
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