JPH1171278A - 転写因子ＮＦ−κＢ活性化阻害剤 - Google Patents
転写因子ＮＦ−κＢ活性化阻害剤Info
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- JPH1171278A JPH1171278A JP9236207A JP23620797A JPH1171278A JP H1171278 A JPH1171278 A JP H1171278A JP 9236207 A JP9236207 A JP 9236207A JP 23620797 A JP23620797 A JP 23620797A JP H1171278 A JPH1171278 A JP H1171278A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】既に実用化されている抗炎症剤、免疫抑制剤及
び抗ウイルス剤の薬剤耐性や副作用の問題を解消するた
め、転写因子ＮＦ−κＢ活性化阻害という新しい作用機
序を有する化合物を有効成分とする転写因子ＮＦ−κＢ
活性化阻害剤及びかかる化合物を有効成分とする転写因
子ＮＦ−κＢ活性化阻害が有効な疾患の治療剤又は予防
剤を提供すること。 【解決手段】式（Ｉ）： 【化１】 で表わされる３−ヒドロキシメチル−４−オキサ−１−
アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプタン−７−オンを有効
成分として含有してなる、転写因子ＮＦ−κＢの活性化
阻害剤及び該化合物を有効成分として含有してなる、転
写因子ＮＦ−κＢの活性化阻害が有効な疾患の治療剤又
は予防剤。
び抗ウイルス剤の薬剤耐性や副作用の問題を解消するた
め、転写因子ＮＦ−κＢ活性化阻害という新しい作用機
序を有する化合物を有効成分とする転写因子ＮＦ−κＢ
活性化阻害剤及びかかる化合物を有効成分とする転写因
子ＮＦ−κＢ活性化阻害が有効な疾患の治療剤又は予防
剤を提供すること。 【解決手段】式（Ｉ）： 【化１】 で表わされる３−ヒドロキシメチル−４−オキサ−１−
アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプタン−７−オンを有効
成分として含有してなる、転写因子ＮＦ−κＢの活性化
阻害剤及び該化合物を有効成分として含有してなる、転
写因子ＮＦ−κＢの活性化阻害が有効な疾患の治療剤又
は予防剤。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、転写因子ＮＦ−κ
Ｂ活性化阻害剤に関する。さらに詳しくは、３−ヒドロ
キシメチル−４−オキサ−１−アザビシクロ〔３．２．
０〕ヘプタン−７−オンを有効成分とする転写因子ＮＦ
−κＢ活性化阻害剤及びかかる化合物を有効成分とす
る、転写因子ＮＦ−κＢ活性化阻害が有効な疾患の治療
剤又は予防剤に関する。
Ｂ活性化阻害剤に関する。さらに詳しくは、３−ヒドロ
キシメチル−４−オキサ−１−アザビシクロ〔３．２．
０〕ヘプタン−７−オンを有効成分とする転写因子ＮＦ
−κＢ活性化阻害剤及びかかる化合物を有効成分とす
る、転写因子ＮＦ−κＢ活性化阻害が有効な疾患の治療
剤又は予防剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】転写因子ＮＦ−κＢは、複数の遺伝子の
転写調節に働く転写因子である（Annual Review of Imm
unology, 1994 年, 12巻, 149 頁、Journal of Biologi
cal Chemistry, 1995年,270巻, 77頁、Molecular and
Cellular Biochemistry, 1995年, 15巻, 5258頁）。転
写因子ＮＦ−κＢによって転写調節される遺伝子の多く
は、免疫や炎症反応の初期の過程に関与する。さらに、
転写因子ＮＦ−κＢは、ヒト免疫不全ウイルス(HIV) を
含む複数のウイルス遺伝子の転写活性化にも関与する
（Annual Review of Immunology, 1994 年, 12巻,141
頁）。
転写調節に働く転写因子である（Annual Review of Imm
unology, 1994 年, 12巻, 149 頁、Journal of Biologi
cal Chemistry, 1995年,270巻, 77頁、Molecular and
Cellular Biochemistry, 1995年, 15巻, 5258頁）。転
写因子ＮＦ−κＢによって転写調節される遺伝子の多く
は、免疫や炎症反応の初期の過程に関与する。さらに、
転写因子ＮＦ−κＢは、ヒト免疫不全ウイルス(HIV) を
含む複数のウイルス遺伝子の転写活性化にも関与する
（Annual Review of Immunology, 1994 年, 12巻,141
頁）。
【０００３】転写因子ＮＦ−κＢは、細胞にインターロ
イキン−１(IL-1)、腫瘍壊死因子−α(TNF−α) 、フォ
ルボール-12-ミリステート-13-アセテート(PMA) 等の刺
激が与えられると活性化される。活性化過程にはいくつ
かのキナーゼやプロテアソームが関与することが知られ
ているが、活性化の機構は完全には解明されていない。
転写因子ＮＦ−κＢは、p65 及びp50 と呼ばれる２つの
サブユニットからなるヘテロ２量体に抑制性因子のＩ−
κＢが結合した不活性型で細胞質に存在しているが、活
性化シグナルにより様々な活性化機構が作動した結果、
Ｉ−κＢがリン酸化後、部分分解されてヘテロ２量体か
ら解離する。Ｉ−κＢが解離したヘテロ２量体は核内へ
移行し、いくつかの遺伝子の発現制御配列に存在するシ
スエレメントに結合することにより、それらの遺伝子の
転写を活性化する。
イキン−１(IL-1)、腫瘍壊死因子−α(TNF−α) 、フォ
ルボール-12-ミリステート-13-アセテート(PMA) 等の刺
激が与えられると活性化される。活性化過程にはいくつ
かのキナーゼやプロテアソームが関与することが知られ
ているが、活性化の機構は完全には解明されていない。
転写因子ＮＦ−κＢは、p65 及びp50 と呼ばれる２つの
サブユニットからなるヘテロ２量体に抑制性因子のＩ−
κＢが結合した不活性型で細胞質に存在しているが、活
性化シグナルにより様々な活性化機構が作動した結果、
Ｉ−κＢがリン酸化後、部分分解されてヘテロ２量体か
ら解離する。Ｉ−κＢが解離したヘテロ２量体は核内へ
移行し、いくつかの遺伝子の発現制御配列に存在するシ
スエレメントに結合することにより、それらの遺伝子の
転写を活性化する。
【０００４】転写因子ＮＦ−κＢによって活性化される
遺伝子は、その発現制御配列中に特有の配列を有する転
写因子ＮＦ−κＢ認識シスエレメントを含む。これらの
遺伝子には、IL-1、インターロイキン−２(IL-2)、イン
ターロイキン−６(IL-6)、インターロイキン−８(IL-
8)、TNF −α等の炎症性サイトカインや細胞間接着分子
ICAM-1、内皮細胞白血球接着分子ELAM-1等の炎症、免疫
に関与する蛋白質をコードする遺伝子が多く含まれるこ
とが知られている。この他に、顆粒球マクロファージコ
ロニー刺激因子GM-CSF、顆粒球コロニー刺激因子G-CSF
等のサイトカイン、更に様々な免疫反応に関与する誘導
性一酸化窒素合成酵素（iNOS）、シクロオキシゲナーゼ
−２(COX-2) 等の酵素をコードする遺伝子も含まれる。
また、ヒト免疫不全ウイルス(HIV) 、ヒトT 細胞白血病
ウイルス(HTLV-1)、サイトメガロウイルス(CMV) 、アデ
ノウイルス等のウイルスは、宿主細胞の転写因子ＮＦ−
κＢを利用してその転写を活性化し、複製することが知
られている(Annual Review of Immunology 1994 年, 12
巻, 1412頁) 。
遺伝子は、その発現制御配列中に特有の配列を有する転
写因子ＮＦ−κＢ認識シスエレメントを含む。これらの
遺伝子には、IL-1、インターロイキン−２(IL-2)、イン
ターロイキン−６(IL-6)、インターロイキン−８(IL-
8)、TNF −α等の炎症性サイトカインや細胞間接着分子
ICAM-1、内皮細胞白血球接着分子ELAM-1等の炎症、免疫
に関与する蛋白質をコードする遺伝子が多く含まれるこ
とが知られている。この他に、顆粒球マクロファージコ
ロニー刺激因子GM-CSF、顆粒球コロニー刺激因子G-CSF
等のサイトカイン、更に様々な免疫反応に関与する誘導
性一酸化窒素合成酵素（iNOS）、シクロオキシゲナーゼ
−２(COX-2) 等の酵素をコードする遺伝子も含まれる。
また、ヒト免疫不全ウイルス(HIV) 、ヒトT 細胞白血病
ウイルス(HTLV-1)、サイトメガロウイルス(CMV) 、アデ
ノウイルス等のウイルスは、宿主細胞の転写因子ＮＦ−
κＢを利用してその転写を活性化し、複製することが知
られている(Annual Review of Immunology 1994 年, 12
巻, 1412頁) 。
【０００５】転写因子ＮＦ−κＢの活性化を阻害して前
記炎症、免疫反応に関与する蛋白質の発現を制御するこ
とは、炎症、移植免疫、自己免疫疾患等の抑制、治療方
法として有効と考えられる。また、HIV 、HTLV-1、CMV
、アデノウイルス等の感染症の治療にも大きな効果が
予想される。
記炎症、免疫反応に関与する蛋白質の発現を制御するこ
とは、炎症、移植免疫、自己免疫疾患等の抑制、治療方
法として有効と考えられる。また、HIV 、HTLV-1、CMV
、アデノウイルス等の感染症の治療にも大きな効果が
予想される。
【０００６】転写因子ＮＦ−κＢの活性化を阻害する物
質としては、トシルフェニルクロロメチルケトン、ジイ
ソクマリン等のプロテアーゼ阻害剤やピロリジンジチオ
カーボネイト(PDTC)、ブチルヒドロキシアニソール、N
―アセチルーＬ―システイン等の抗酸化剤等が知られて
いる（臨床免疫, 1995年, 27巻, 1099頁) 。プロテアー
ゼ阻害剤は、Ｉ−κＢの分解阻害作用によって、転写因
子ＮＦ−κＢの活性化を阻害すると推定されている。一
方、抗酸化剤は、転写因子ＮＦ−κＢの活性化に至る過
程で、活性酸素の生成を阻害することにより転写因子Ｎ
Ｆ−κＢの活性化を阻害するのであろうと報告されてい
る。しかし、これらの化合物は有効濃度が高すぎるこ
と、転写因子ＮＦ−κＢ特異的ではないこと等の理由で
医薬品としては実用化されていない。
質としては、トシルフェニルクロロメチルケトン、ジイ
ソクマリン等のプロテアーゼ阻害剤やピロリジンジチオ
カーボネイト(PDTC)、ブチルヒドロキシアニソール、N
―アセチルーＬ―システイン等の抗酸化剤等が知られて
いる（臨床免疫, 1995年, 27巻, 1099頁) 。プロテアー
ゼ阻害剤は、Ｉ−κＢの分解阻害作用によって、転写因
子ＮＦ−κＢの活性化を阻害すると推定されている。一
方、抗酸化剤は、転写因子ＮＦ−κＢの活性化に至る過
程で、活性酸素の生成を阻害することにより転写因子Ｎ
Ｆ−κＢの活性化を阻害するのであろうと報告されてい
る。しかし、これらの化合物は有効濃度が高すぎるこ
と、転写因子ＮＦ−κＢ特異的ではないこと等の理由で
医薬品としては実用化されていない。
【０００７】近年、没食子酸エステル及びタンニン類
が、転写因子ＮＦ−κＢ活性化阻害物質として開示され
ている（特開平9-59151 号公報）。没食子酸エステル及
びタンニン類の転写因子ＮＦ−κＢ活性化阻害作用は、
抗酸化作用に起因するものと推定できるが、効力や特異
性の点で問題がある。
が、転写因子ＮＦ−κＢ活性化阻害物質として開示され
ている（特開平9-59151 号公報）。没食子酸エステル及
びタンニン類の転写因子ＮＦ−κＢ活性化阻害作用は、
抗酸化作用に起因するものと推定できるが、効力や特異
性の点で問題がある。
【０００８】特開平7-291859号明細書に開示されている
化合物は、該明細書の実施例１において、TNF −α遺伝
子及びHIV-1 プロウイルスＤＮＡ配列中のＮＦ−κＢ認
識DNA 配列と転写因子ＮＦ−κＢとの結合反応阻害を示
し、また、その実施例３において、核内移行した転写因
子ＮＦ−κＢと転写因子ＮＦ−κＢ認識DNA 配列との結
合阻害を示している。いずれもDNA と転写因子ＮＦ−κ
Ｂの結合阻害は明瞭であるが、他の転写因子との競合実
験や、他の転写因子が認識するDNA 配列への他の転写因
子の結合に対する影響が示されていないため、特異性が
不明である。さらに、前記明細書の実施例２及び実施例
４において、ＮＦ−κＢの活性化剤であるLPS （リポポ
リサッカリド）での細胞処理時間が、それぞれ４８時間
及び１８時間と長すぎるため、ＤＮＡ合成や蛋白質合成
による影響を無視できず、転写因子ＮＦ−κＢの刺激応
答を特異的に調べるのに適当とは言えない。従って、か
かる化合物は、DNA と転写因子ＮＦ−κＢの結合を阻害
するが、転写因子ＮＦ−κＢが活性化される過程を阻害
するか、又は既に活性化されて核に移行した転写因子Ｎ
Ｆ−κＢのDNA 結合のみを阻害するのかどうかが不明瞭
であり、転写因子ＮＦ−κＢの活性化を特異的に阻害し
ているとは言いがたい。
化合物は、該明細書の実施例１において、TNF −α遺伝
子及びHIV-1 プロウイルスＤＮＡ配列中のＮＦ−κＢ認
識DNA 配列と転写因子ＮＦ−κＢとの結合反応阻害を示
し、また、その実施例３において、核内移行した転写因
子ＮＦ−κＢと転写因子ＮＦ−κＢ認識DNA 配列との結
合阻害を示している。いずれもDNA と転写因子ＮＦ−κ
Ｂの結合阻害は明瞭であるが、他の転写因子との競合実
験や、他の転写因子が認識するDNA 配列への他の転写因
子の結合に対する影響が示されていないため、特異性が
不明である。さらに、前記明細書の実施例２及び実施例
４において、ＮＦ−κＢの活性化剤であるLPS （リポポ
リサッカリド）での細胞処理時間が、それぞれ４８時間
及び１８時間と長すぎるため、ＤＮＡ合成や蛋白質合成
による影響を無視できず、転写因子ＮＦ−κＢの刺激応
答を特異的に調べるのに適当とは言えない。従って、か
かる化合物は、DNA と転写因子ＮＦ−κＢの結合を阻害
するが、転写因子ＮＦ−κＢが活性化される過程を阻害
するか、又は既に活性化されて核に移行した転写因子Ｎ
Ｆ−κＢのDNA 結合のみを阻害するのかどうかが不明瞭
であり、転写因子ＮＦ−κＢの活性化を特異的に阻害し
ているとは言いがたい。
【０００９】その他、サリチル酸誘導体、アスピリン等
の転写因子ＮＦ−κＢの活性抑制作用が報告されている
が、効力が不十分である。
の転写因子ＮＦ−κＢの活性抑制作用が報告されている
が、効力が不十分である。
【００１０】以上のことから、転写因子ＮＦ−κＢの活
性化阻害剤として実用的に十分な効果を持つ薬剤は開発
されていないのが現状である。
性化阻害剤として実用的に十分な効果を持つ薬剤は開発
されていないのが現状である。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、前記従来技
術に鑑みてなされたものであり、既に実用化されている
抗炎症剤、免疫抑制剤及び抗ウイルス剤の薬剤耐性や副
作用の問題を解消するため、転写因子ＮＦ−κＢ活性化
阻害という新しい作用機序を有する化合物を有効成分と
する、転写因子ＮＦ−κＢ活性化阻害剤及びかかる化合
物を有効成分とする、転写因子ＮＦ−κＢ活性化阻害が
有効な疾患の治療剤又は予防剤を提供することにある。
術に鑑みてなされたものであり、既に実用化されている
抗炎症剤、免疫抑制剤及び抗ウイルス剤の薬剤耐性や副
作用の問題を解消するため、転写因子ＮＦ−κＢ活性化
阻害という新しい作用機序を有する化合物を有効成分と
する、転写因子ＮＦ−κＢ活性化阻害剤及びかかる化合
物を有効成分とする、転写因子ＮＦ−κＢ活性化阻害が
有効な疾患の治療剤又は予防剤を提供することにある。
【００１２】
【課題を解決するための手段】従って、本発明の要旨
は、（１） 式（Ｉ）：
は、（１） 式（Ｉ）：
【００１３】
【化３】
【００１４】で表わされる３−ヒドロキシメチル−４−
オキサ−１−アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプタン−７
−オンを有効成分として含有してなる、転写因子ＮＦ−
κＢの活性化阻害剤、（２） 式（Ｉ）：
オキサ−１−アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプタン−７
−オンを有効成分として含有してなる、転写因子ＮＦ−
κＢの活性化阻害剤、（２） 式（Ｉ）：
【００１５】
【化４】
【００１６】で表わされる３−ヒドロキシメチル−４−
オキサ−１−アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプタン−７
−オンを有効成分として含有してなる、転写因子ＮＦ−
κＢの活性化阻害が有効な疾患の治療剤又は予防剤、
（３） 該疾患が、炎症性疾患、自己免疫性疾患又はウ
イルス性疾患である前記（２）記載の治療剤又は予防
剤、に関する。
オキサ−１−アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプタン−７
−オンを有効成分として含有してなる、転写因子ＮＦ−
κＢの活性化阻害が有効な疾患の治療剤又は予防剤、
（３） 該疾患が、炎症性疾患、自己免疫性疾患又はウ
イルス性疾患である前記（２）記載の治療剤又は予防
剤、に関する。
【００１７】
【発明の実施の形態】本発明における転写因子ＮＦ−κ
Ｂには、p65 及びp50 サブユニットからなるヘテロ２量
体にＩ−κＢが結合した不活性型ＮＦ−κＢ並びにＩ−
κＢが解離した該ヘテロ２量体のみからなる活性型ＮＦ
−κＢが知られており、マウス、ヒト等のものが挙げら
れるが、ヒト転写因子ＮＦ−κＢが好ましい。本発明に
おいて、転写因子ＮＦ−κＢの活性化阻害剤とは、前記
不活性型ＮＦ−κＢの活性化を阻害する物質をいう。な
お、ヒト転写因子ＮＦ−κＢの塩基配列及びアミノ酸配
列は、Cell, 1990年,62 巻,1019 頁及びCell, 1991年,6
4 巻,961頁に開示されている。
Ｂには、p65 及びp50 サブユニットからなるヘテロ２量
体にＩ−κＢが結合した不活性型ＮＦ−κＢ並びにＩ−
κＢが解離した該ヘテロ２量体のみからなる活性型ＮＦ
−κＢが知られており、マウス、ヒト等のものが挙げら
れるが、ヒト転写因子ＮＦ−κＢが好ましい。本発明に
おいて、転写因子ＮＦ−κＢの活性化阻害剤とは、前記
不活性型ＮＦ−κＢの活性化を阻害する物質をいう。な
お、ヒト転写因子ＮＦ−κＢの塩基配列及びアミノ酸配
列は、Cell, 1990年,62 巻,1019 頁及びCell, 1991年,6
4 巻,961頁に開示されている。
【００１８】不活性型ＮＦ−κＢの活性化阻害は、後述
の実施例に記載のように、転写因子ＮＦ−κＢ核移行阻
害活性またはゲルシフトアッセイにより測定することが
できる。かかる活性化阻害は、転写因子ＮＦ−κＢ核移
行阻害活性においては、例えば、抗ＮＦ−κＢ（p65 ）
抗体および蛍光標識二次抗体を用いて、転写因子ＮＦ−
κＢの細胞質内局在を可視化し、また、ゲルシフトアッ
セイにおいては、例えば、転写因子ＮＦ−κＢと放射線
標識DNA との複合体のバンドの消失という現象で最も端
的に証明される。
の実施例に記載のように、転写因子ＮＦ−κＢ核移行阻
害活性またはゲルシフトアッセイにより測定することが
できる。かかる活性化阻害は、転写因子ＮＦ−κＢ核移
行阻害活性においては、例えば、抗ＮＦ−κＢ（p65 ）
抗体および蛍光標識二次抗体を用いて、転写因子ＮＦ−
κＢの細胞質内局在を可視化し、また、ゲルシフトアッ
セイにおいては、例えば、転写因子ＮＦ−κＢと放射線
標識DNA との複合体のバンドの消失という現象で最も端
的に証明される。
【００１９】本発明の転写因子ＮＦ−κＢの活性化阻害
剤は、式（Ｉ）：
剤は、式（Ｉ）：
【００２０】
【化５】
【００２１】で表わされる３−ヒドロキシメチル−４−
オキサ−１−アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプタン−７
−オンを有効成分として含有するものである。
オキサ−１−アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプタン−７
−オンを有効成分として含有するものである。
【００２２】３−ヒドロキシメチル−４−オキサ−１−
アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプタン−７−オンの２環
核は、３位及び５位で、２つの不斉炭素原子を有し、４
種のジアステレオ異性体が存在する。後記するように、
転写因子ＮＦ−κＢの活性化阻害という観点から、（３
Ｒ，５Ｓ）−３−ヒドロキシメチル−４−オキサ−１−
アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプタン−７−オン、（３
Ｓ，５Ｓ）−３−ヒドロキシメチル−４−オキサ−１−
アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプタン−７−オン及び
（３ＲＳ，５Ｓ）−３−ヒドロキシメチル−４−オキサ
−１−アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプタン−７−オン
が好ましい。
アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプタン−７−オンの２環
核は、３位及び５位で、２つの不斉炭素原子を有し、４
種のジアステレオ異性体が存在する。後記するように、
転写因子ＮＦ−κＢの活性化阻害という観点から、（３
Ｒ，５Ｓ）−３−ヒドロキシメチル−４−オキサ−１−
アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプタン−７−オン、（３
Ｓ，５Ｓ）−３−ヒドロキシメチル−４−オキサ−１−
アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプタン−７−オン及び
（３ＲＳ，５Ｓ）−３−ヒドロキシメチル−４−オキサ
−１−アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプタン−７−オン
が好ましい。
【００２３】式（Ｉ）で表わされる化合物はβ−ラクタ
ム構造を有することから、有用化に際してペニシリン、
セファロスポリン等のβ−ラクタム抗生物質やβ−ラク
タマーゼ阻害剤で培われたβ−ラクタム化合物に関する
多大な研究蓄積を応用することができる。β−ラクタム
抗生物質やβ−ラクタマーゼ阻害剤は、式（Ｉ）の５位
に相当する位置の絶対立体配置がＲである。式（Ｉ）と
同じ構造を有するヒドロキシメチルクラバム及び式
（Ｉ）において３位をヒドロキシエチル基に置換したヒ
ドロキシエチルクラバム、clavalanine 、clavamycins
並びにvalclavam 等、微生物生産物として単離され、抗
真菌活性が報告されているβ−ラクタム化合物は、５位
の絶対立体配置がＳである(Chemical Pharmacological
Ｂulletin, 39 巻, 2212頁, 1991年) 。５位の絶対立体
配置がＲであるクラブラン酸や6-アミノペニシラン酸
は、10μg/mlの濃度で転写因子ＮＦ−κＢ活性化阻害作
用を示さなかったことから、転写因子ＮＦ−κＢ活性化
阻害作用には５位の絶対立体配置がＳであることが重要
であると考えられる。３位の修飾化合物である３−（置
換メチル）−４−オキサ−１−アザビシクロ〔３．２．
０〕ヘプタン−７−オン及びその誘導体は、特表平7-50
8982号公報、特表平8-507552号公報等に抗腫瘍剤として
開示されており、抗腫瘍剤活性のためには３位と５位の
立体配座がトランスであることが好ましいとされてい
る。転写因子ＮＦ−κＢ活性化阻害作用には、５位の絶
対立体配置がＳであることが必要であることが本発明者
らにより明らかにされたが、3 位に関してはＲ、 Ｓいず
れでもよく、ラセミ混合物も転写因子ＮＦ−κＢ活性化
阻害剤として使用できる。
ム構造を有することから、有用化に際してペニシリン、
セファロスポリン等のβ−ラクタム抗生物質やβ−ラク
タマーゼ阻害剤で培われたβ−ラクタム化合物に関する
多大な研究蓄積を応用することができる。β−ラクタム
抗生物質やβ−ラクタマーゼ阻害剤は、式（Ｉ）の５位
に相当する位置の絶対立体配置がＲである。式（Ｉ）と
同じ構造を有するヒドロキシメチルクラバム及び式
（Ｉ）において３位をヒドロキシエチル基に置換したヒ
ドロキシエチルクラバム、clavalanine 、clavamycins
並びにvalclavam 等、微生物生産物として単離され、抗
真菌活性が報告されているβ−ラクタム化合物は、５位
の絶対立体配置がＳである(Chemical Pharmacological
Ｂulletin, 39 巻, 2212頁, 1991年) 。５位の絶対立体
配置がＲであるクラブラン酸や6-アミノペニシラン酸
は、10μg/mlの濃度で転写因子ＮＦ−κＢ活性化阻害作
用を示さなかったことから、転写因子ＮＦ−κＢ活性化
阻害作用には５位の絶対立体配置がＳであることが重要
であると考えられる。３位の修飾化合物である３−（置
換メチル）−４−オキサ−１−アザビシクロ〔３．２．
０〕ヘプタン−７−オン及びその誘導体は、特表平7-50
8982号公報、特表平8-507552号公報等に抗腫瘍剤として
開示されており、抗腫瘍剤活性のためには３位と５位の
立体配座がトランスであることが好ましいとされてい
る。転写因子ＮＦ−κＢ活性化阻害作用には、５位の絶
対立体配置がＳであることが必要であることが本発明者
らにより明らかにされたが、3 位に関してはＲ、 Ｓいず
れでもよく、ラセミ混合物も転写因子ＮＦ−κＢ活性化
阻害剤として使用できる。
【００２４】また３位の置換基としては、ヒドロキシメ
チル基の代わりに、アルキルオキシメチル基、置換ベン
ゾイルオキシメチル基、N-置換アミノメチル基等を用い
てもよい。
チル基の代わりに、アルキルオキシメチル基、置換ベン
ゾイルオキシメチル基、N-置換アミノメチル基等を用い
てもよい。
【００２５】３−ヒドロキシメチル−４−オキサ−１−
アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプタン−７−オンは、特
表平7-508982号公報に記載の方法に準じて、合成するこ
とができる。また、Journal of the Chemical society,
Chemical Communications 1979 年, 282 頁に記載の方
法に従って、発酵法で調製することも可能である。
アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプタン−７−オンは、特
表平7-508982号公報に記載の方法に準じて、合成するこ
とができる。また、Journal of the Chemical society,
Chemical Communications 1979 年, 282 頁に記載の方
法に従って、発酵法で調製することも可能である。
【００２６】前記合成した化合物は、所望により、例え
ば、ＨＰＬＣ等を用いて、光学活性な化合物として精製
することができる。
ば、ＨＰＬＣ等を用いて、光学活性な化合物として精製
することができる。
【００２７】本発明の転写因子ＮＦ−κＢの活性化阻害
剤は、前記したように、３−ヒドロキシメチル−４−オ
キサ−１−アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプタン−７−
オンを有効成分として含有するものであり、かかる化合
物の含有量としては、転写因子ＮＦ−κＢの活性化を阻
害するのに有効な量である限りいかなる量でもよい。
剤は、前記したように、３−ヒドロキシメチル−４−オ
キサ−１−アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプタン−７−
オンを有効成分として含有するものであり、かかる化合
物の含有量としては、転写因子ＮＦ−κＢの活性化を阻
害するのに有効な量である限りいかなる量でもよい。
【００２８】本発明の転写因子ＮＦ−κＢの活性化阻害
剤は、実施例に記載のように、転写因子ＮＦ−κＢの活
性化を阻害し、その結果として、例えば、HIV 等のウイ
ルスの複製を阻害する。
剤は、実施例に記載のように、転写因子ＮＦ−κＢの活
性化を阻害し、その結果として、例えば、HIV 等のウイ
ルスの複製を阻害する。
【００２９】また、本発明の転写因子ＮＦ−κＢの活性
化阻害剤は、実施例に記載のように、転写因子ＮＦ−κ
Ｂの活性化を阻害し、その結果として、IL-1、IL-2等の
サイトカインの合成を阻害することで混合リンパ球反応
を抑制する。
化阻害剤は、実施例に記載のように、転写因子ＮＦ−κ
Ｂの活性化を阻害し、その結果として、IL-1、IL-2等の
サイトカインの合成を阻害することで混合リンパ球反応
を抑制する。
【００３０】式（Ｉ）で表わされる化合物は、実施例に
記載のように、作用濃度が１μg/ml以下であり、活性が
強いこと、また１時間以下の短い作用時間で転写因子Ｎ
Ｆ−κＢの核移行を阻害することから、これまでにない
転写因子ＮＦ−κＢ活性化阻害剤となり得る。
記載のように、作用濃度が１μg/ml以下であり、活性が
強いこと、また１時間以下の短い作用時間で転写因子Ｎ
Ｆ−κＢの核移行を阻害することから、これまでにない
転写因子ＮＦ−κＢ活性化阻害剤となり得る。
【００３１】さらに、本発明は、式（Ｉ）：
【００３２】
【化６】
【００３３】で表わされる３−ヒドロキシメチル−４−
オキサ−１−アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプタン−７
−オンを有効成分として含有する、転写因子ＮＦ−κＢ
の活性化阻害が有効な疾患の治療剤又は予防剤を提供す
る。
オキサ−１−アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプタン−７
−オンを有効成分として含有する、転写因子ＮＦ−κＢ
の活性化阻害が有効な疾患の治療剤又は予防剤を提供す
る。
【００３４】前記式（Ｉ）で表わされる化合物は、転写
因子ＮＦ−κＢの活性化を阻害することにより、転写因
子ＮＦ−κＢ認識配列を有する遺伝子の転写を阻害す
る。すなわち、転写因子ＮＦ−κＢ認識配列を有する遺
伝子がコードする蛋白質の発現を阻害することができ
る。従って、IL-1、IL-2、IL-6、IL-8、TNF −α等の炎
症性サイトカインやICAM-1,ELAM-1 等の炎症・免疫に関
与する蛋白質をコードする遺伝子、GM-CSF,G-CSF等のサ
イトカイン、免疫反応に関与するiNOS、COX-2 等の酵素
をコードする遺伝子の転写及びHIV 、HTLV-1、CMV 、ア
デノウイルス等のウイルス遺伝子の複製を阻害すること
によって、これらが関与する疾患を治療又は予防するこ
とができる。
因子ＮＦ−κＢの活性化を阻害することにより、転写因
子ＮＦ−κＢ認識配列を有する遺伝子の転写を阻害す
る。すなわち、転写因子ＮＦ−κＢ認識配列を有する遺
伝子がコードする蛋白質の発現を阻害することができ
る。従って、IL-1、IL-2、IL-6、IL-8、TNF −α等の炎
症性サイトカインやICAM-1,ELAM-1 等の炎症・免疫に関
与する蛋白質をコードする遺伝子、GM-CSF,G-CSF等のサ
イトカイン、免疫反応に関与するiNOS、COX-2 等の酵素
をコードする遺伝子の転写及びHIV 、HTLV-1、CMV 、ア
デノウイルス等のウイルス遺伝子の複製を阻害すること
によって、これらが関与する疾患を治療又は予防するこ
とができる。
【００３５】従って、本発明の治療剤又は予防剤は、炎
症性疾患、自己免疫性疾患又はウイルス性疾患を治療又
は予防することができる。
症性疾患、自己免疫性疾患又はウイルス性疾患を治療又
は予防することができる。
【００３６】前記治療剤又は予防剤は、必要に応じて担
体、安定化剤、吸収促進剤等を添加し、錠剤、散剤、顆
粒剤、カプセル剤、シロップ剤等として経口的に投与し
てもよいし、また坐剤、注射剤、外用剤、点滴剤等とし
て非経口的に投与してもよい。
体、安定化剤、吸収促進剤等を添加し、錠剤、散剤、顆
粒剤、カプセル剤、シロップ剤等として経口的に投与し
てもよいし、また坐剤、注射剤、外用剤、点滴剤等とし
て非経口的に投与してもよい。
【００３７】本発明の治療剤又は予防剤中の本発明の式
（Ｉ）で表される化合物の投与量は、治療及び予防目的
の疾患、患者の年齢、体重等により適宜調整することが
できるが、通常、１回当たり１ｍｇ〜１０００ｍｇ、好
ましくは、１０ｍｇ〜５００ｍｇであり、目的に応じて
投与回数を決定することが好ましい。
（Ｉ）で表される化合物の投与量は、治療及び予防目的
の疾患、患者の年齢、体重等により適宜調整することが
できるが、通常、１回当たり１ｍｇ〜１０００ｍｇ、好
ましくは、１０ｍｇ〜５００ｍｇであり、目的に応じて
投与回数を決定することが好ましい。
【００３８】
【実施例】以下、実施例により本発明をさらに詳しく説
明するが、本発明はこれらの実施例により何ら限定され
るものではない。
明するが、本発明はこれらの実施例により何ら限定され
るものではない。
【００３９】実施例１転写因子ＮＦ−κＢ核移行阻害活性 ヒト臍帯静脈血管内皮細胞（クラボウ製）を１×１０6
個の細胞密度とし、ヘパリンを50μg/ml、内皮細胞成長
因子（シグマ社製）20μg/ml及び牛胎児血清20% を含む
M199培地（大日本製薬製）中、37℃、5%CO2 下で培養し
た。あらかじめゼラチンコートしたチャンバースライド
（Nunc社製）に前記細胞を5x103cells/ウェルとなるよ
う植え継ぎ、２日間培養した。Journal of the Chemica
l society, Chemical Communications 1979 年, 282 頁
に記載の方法に従って調製した（３Ｒ，５Ｓ）−３−ヒ
ドロキシメチル−４−オキサ−１−アザビシクロ〔３．
２．０〕ヘプタン−７−オン（化合物(I))を、リン酸緩
衝化生理食塩水に溶解し、終濃度0.09μg/ml〜 110μg/
mlとなるよう前記培地に添加、混合し、37℃で40分間培
養した。次に、International Immunology, 1996年, 8
巻, 1483頁に記載された櫻田等の方法に準じて、各ウェ
ルにリコンビナントヒトTNF −α（ギブコBRL 社製）を
終濃度10ng/ml となるように添加、混合し、37℃で15分
間インキュベートした。コントロールとして、TNF −α
無添加、TNF −αのみ添加、TNF −αと化合物(I) とも
に無添加のウェルを調製した。インキュベーション後、
直ちに4%パラフォルムアルデヒドを用いて、室温で１５
分間細胞を固定し、続いて、0.5%トライトンX-100 を用
いて室温で２０分間処理することにより、細胞膜透過処
理を行った。次に、一次抗体としてウサギ抗ＮＦ−κＢ
(p65) 抗体（サンタクルーズ社製）、二次抗体としてFI
TC標識ヤギ抗ウサギIgG 抗体（ベクターラボラトリーズ
社製）を用いて細胞内のＮＦ−κＢヘテロ２量体を蛍光
標識し、蛍光顕微鏡で検鏡観察した。
個の細胞密度とし、ヘパリンを50μg/ml、内皮細胞成長
因子（シグマ社製）20μg/ml及び牛胎児血清20% を含む
M199培地（大日本製薬製）中、37℃、5%CO2 下で培養し
た。あらかじめゼラチンコートしたチャンバースライド
（Nunc社製）に前記細胞を5x103cells/ウェルとなるよ
う植え継ぎ、２日間培養した。Journal of the Chemica
l society, Chemical Communications 1979 年, 282 頁
に記載の方法に従って調製した（３Ｒ，５Ｓ）−３−ヒ
ドロキシメチル−４−オキサ−１−アザビシクロ〔３．
２．０〕ヘプタン−７−オン（化合物(I))を、リン酸緩
衝化生理食塩水に溶解し、終濃度0.09μg/ml〜 110μg/
mlとなるよう前記培地に添加、混合し、37℃で40分間培
養した。次に、International Immunology, 1996年, 8
巻, 1483頁に記載された櫻田等の方法に準じて、各ウェ
ルにリコンビナントヒトTNF −α（ギブコBRL 社製）を
終濃度10ng/ml となるように添加、混合し、37℃で15分
間インキュベートした。コントロールとして、TNF −α
無添加、TNF −αのみ添加、TNF −αと化合物(I) とも
に無添加のウェルを調製した。インキュベーション後、
直ちに4%パラフォルムアルデヒドを用いて、室温で１５
分間細胞を固定し、続いて、0.5%トライトンX-100 を用
いて室温で２０分間処理することにより、細胞膜透過処
理を行った。次に、一次抗体としてウサギ抗ＮＦ−κＢ
(p65) 抗体（サンタクルーズ社製）、二次抗体としてFI
TC標識ヤギ抗ウサギIgG 抗体（ベクターラボラトリーズ
社製）を用いて細胞内のＮＦ−κＢヘテロ２量体を蛍光
標識し、蛍光顕微鏡で検鏡観察した。
【００４０】表１に示すように、コントロールのうちTN
F −αと化合物(I) ともに無添加の細胞では、ＮＦ−κ
Ｂヘテロ２量体は細胞質にのみ局在し、核内への移行は
観察されなかった。TNF −αのみ添加した細胞では、TN
F −α刺激によりＮＦ−κＢ活性化シグナルが作動した
結果、ＮＦ−κＢヘテロ２量体は、核内へ移行して核内
のみに局在していた。一方、化合物(I) は、終濃度0.7
μg/mlから92μg/ml以上の広い濃度範囲でＮＦ−κＢヘ
テロ２量体の核内への移行を完全に阻害し、ＮＦ−κＢ
ヘテロ２量体は細胞質にのみ局在していた。化合物(I)
のみ添加した細胞では、何も添加しない細胞と同様に細
胞形態は全く正常であった。
F −αと化合物(I) ともに無添加の細胞では、ＮＦ−κ
Ｂヘテロ２量体は細胞質にのみ局在し、核内への移行は
観察されなかった。TNF −αのみ添加した細胞では、TN
F −α刺激によりＮＦ−κＢ活性化シグナルが作動した
結果、ＮＦ−κＢヘテロ２量体は、核内へ移行して核内
のみに局在していた。一方、化合物(I) は、終濃度0.7
μg/mlから92μg/ml以上の広い濃度範囲でＮＦ−κＢヘ
テロ２量体の核内への移行を完全に阻害し、ＮＦ−κＢ
ヘテロ２量体は細胞質にのみ局在していた。化合物(I)
のみ添加した細胞では、何も添加しない細胞と同様に細
胞形態は全く正常であった。
【００４１】
【表１】
【００４２】実施例２ゲルシフトアッセイ 化合物(I) が転写因子ＮＦ−κＢの活性化を阻害するこ
とを更に確認するために、ゲルシフトアッセイを行なっ
た。
とを更に確認するために、ゲルシフトアッセイを行なっ
た。
【００４３】ヒト臍帯静脈血管内皮細胞を、実施例１と
同じ培地中、ゼラチンコートした25cm2 フラスコでサブ
コンフルエントになるまで37℃、5%CO2 下で３〜４日間
培養した。次に、化合物(I) を終濃度１μg/mlとなるよ
う添加した。コントロールとして、転写因子ＮＦ−κＢ
活性化阻害作用が知られているPDTCを終濃度40μM とな
るよう添加したもの及び薬剤無添加のものを同様に調製
した。薬剤の添加後、直ちにフラスコをインキュベータ
ーに戻して60分間インキュベーションした。更にリコン
ビナントヒトTNF −αを終濃度10ng/ml となるよう添加
し、再び20分間インキュベーションした。その後、直ち
に細胞をスクレーパーで掻き取り、ＰＢＳで洗浄し、ペ
レットを液体窒素中で凍結した。続いて、リシスバッフ
ァー〔20mM HEPES pH7.9, 2.5%グリセロール， 0.42M N
aCl, 1.5mM MgCl2, 0.2mM EDTA, 0.5mM ジチオスレイ
トール, 0.2mM AEBSF(4-(2- アミノエチル) ベンゼンス
ルホニルフルオリド)(シグマ社製), 1μg/ml pepstatin
（ペプチド研究所製), 1μg/ml aprotinin（シグマ社
製) 〕を30μl 加えて細胞を溶解し、0 ℃、35000rpmで
10分遠心分離し、上清を全細胞抽出液として−80℃で保
存した。
同じ培地中、ゼラチンコートした25cm2 フラスコでサブ
コンフルエントになるまで37℃、5%CO2 下で３〜４日間
培養した。次に、化合物(I) を終濃度１μg/mlとなるよ
う添加した。コントロールとして、転写因子ＮＦ−κＢ
活性化阻害作用が知られているPDTCを終濃度40μM とな
るよう添加したもの及び薬剤無添加のものを同様に調製
した。薬剤の添加後、直ちにフラスコをインキュベータ
ーに戻して60分間インキュベーションした。更にリコン
ビナントヒトTNF −αを終濃度10ng/ml となるよう添加
し、再び20分間インキュベーションした。その後、直ち
に細胞をスクレーパーで掻き取り、ＰＢＳで洗浄し、ペ
レットを液体窒素中で凍結した。続いて、リシスバッフ
ァー〔20mM HEPES pH7.9, 2.5%グリセロール， 0.42M N
aCl, 1.5mM MgCl2, 0.2mM EDTA, 0.5mM ジチオスレイ
トール, 0.2mM AEBSF(4-(2- アミノエチル) ベンゼンス
ルホニルフルオリド)(シグマ社製), 1μg/ml pepstatin
（ペプチド研究所製), 1μg/ml aprotinin（シグマ社
製) 〕を30μl 加えて細胞を溶解し、0 ℃、35000rpmで
10分遠心分離し、上清を全細胞抽出液として−80℃で保
存した。
【００４４】次に、DNA-蛋白質結合反応を行なった。蛋
白質量として10μg を含む全細胞抽出液に対して、〔γ
−32Ｐ〕ＡＴＰ（アマシャム社製）を用いて標識したＮ
Ｆ−κＢ consensus oligonucleotide（プロメガ社製）
6000cpm （比活性、１０8 ｃｐｍ／μｇ）、poly(dI-d
C) poly(dI-dC) （ファルマシア社製）１μg を混合
し、永田等の方法（Molecular and Cellular Biochemis
try 1992年, 12巻, 3490頁) に従って、バインディング
バッファー中で結合反応を行なった。競合実験として、
この反応液に更に非標識のＮＦ−κＢ又はSP1 consensu
s oligonucleotide（プロメガ社製）を2pmol 添加した
後、前記と同様に結合反応を行なった。
白質量として10μg を含む全細胞抽出液に対して、〔γ
−32Ｐ〕ＡＴＰ（アマシャム社製）を用いて標識したＮ
Ｆ−κＢ consensus oligonucleotide（プロメガ社製）
6000cpm （比活性、１０8 ｃｐｍ／μｇ）、poly(dI-d
C) poly(dI-dC) （ファルマシア社製）１μg を混合
し、永田等の方法（Molecular and Cellular Biochemis
try 1992年, 12巻, 3490頁) に従って、バインディング
バッファー中で結合反応を行なった。競合実験として、
この反応液に更に非標識のＮＦ−κＢ又はSP1 consensu
s oligonucleotide（プロメガ社製）を2pmol 添加した
後、前記と同様に結合反応を行なった。
【００４５】これらの反応液を5%非変性ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動に供し、オートラジオグラフィーによ
り転写因子ＮＦ−κＢと標識DNA との複合体のバンドの
黒化度を判定した（図１）。
ミドゲル電気泳動に供し、オートラジオグラフィーによ
り転写因子ＮＦ−κＢと標識DNA との複合体のバンドの
黒化度を判定した（図１）。
【００４６】図１より、化合物(I) で処理をしていない
コントロールではTNF −α刺激による転写因子ＮＦ−κ
Ｂの活性化の結果、転写因子ＮＦ−κＢと標識DNA との
複合体の明瞭なバンドが見られた（レーン１）。また、
TNF −α刺激したものでも非標識ＮＦ−κＢ consensus
oligonucleotideを添加した場合は競合の結果バンドは
完全に消失し（レーン３）、非標識SP1 consensus olig
onucleotide では競合効果は全く見られなかった（レー
ン４）。化合物(I) で処理した細胞（レーン６）ではポ
ジティブコントロールであるPDTC(40 μM)で処理した細
胞（レーン５）と同様、明らかにバンドの濃度低下が観
察された。
コントロールではTNF −α刺激による転写因子ＮＦ−κ
Ｂの活性化の結果、転写因子ＮＦ−κＢと標識DNA との
複合体の明瞭なバンドが見られた（レーン１）。また、
TNF −α刺激したものでも非標識ＮＦ−κＢ consensus
oligonucleotideを添加した場合は競合の結果バンドは
完全に消失し（レーン３）、非標識SP1 consensus olig
onucleotide では競合効果は全く見られなかった（レー
ン４）。化合物(I) で処理した細胞（レーン６）ではポ
ジティブコントロールであるPDTC(40 μM)で処理した細
胞（レーン５）と同様、明らかにバンドの濃度低下が観
察された。
【００４７】実施例３HIV 複製阻害試験 化合物(I) が転写因子ＮＦ−κＢの活性化を阻害し、そ
の結果としてHIV の複製を阻害することを確認するため
の試験を行った。
の結果としてHIV の複製を阻害することを確認するため
の試験を行った。
【００４８】大野、竹内等によりAntimicrobial Agents
and Chemistry 1992 年, 36巻, 492 頁に記載された方
法に準じ、９６ウェルプレート中のU937細胞（大日本製
薬製）1.25 X 105cells/ウェルに対して化合物(I) を終
濃度0.025 μg/mlから3 μg/mlとなるように加えて37
℃、30分間の処理の後、HIV IIIbを感染させ、5 日間の
培養の後HIV 逆転写酵素活性からHIV 複製阻害活性を求
めた。化合物(I) の細胞障害性は、細胞増殖キット（ベ
ーリンガーマンハイム社製）を用いる３−（４，５−ジ
メチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテ
トラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）アッセイにより求め
た。
and Chemistry 1992 年, 36巻, 492 頁に記載された方
法に準じ、９６ウェルプレート中のU937細胞（大日本製
薬製）1.25 X 105cells/ウェルに対して化合物(I) を終
濃度0.025 μg/mlから3 μg/mlとなるように加えて37
℃、30分間の処理の後、HIV IIIbを感染させ、5 日間の
培養の後HIV 逆転写酵素活性からHIV 複製阻害活性を求
めた。化合物(I) の細胞障害性は、細胞増殖キット（ベ
ーリンガーマンハイム社製）を用いる３−（４，５−ジ
メチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテ
トラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）アッセイにより求め
た。
【００４９】
【表２】
【００５０】表２に示すように、化合物(I) は、約1.5
μg/mlの濃度でHIV の複製を50% 阻害した。また、ＭＴ
Ｔアッセイにより、化合物(I) は、３μｇ／ｍｌまでの
濃度では、細胞毒性を示さないということがわかった。
μg/mlの濃度でHIV の複製を50% 阻害した。また、ＭＴ
Ｔアッセイにより、化合物(I) は、３μｇ／ｍｌまでの
濃度では、細胞毒性を示さないということがわかった。
【００５１】実施例４ヒト末梢血リンパ球を用いた混合リンパ球反応(MLR) 化合物(I) が転写因子ＮＦ−κＢの活性化を阻害し、そ
の結果として、IL-1、IL-2等のサイトカインの合成を阻
害することでMLR を抑制することを確認するための試験
を行なった。
の結果として、IL-1、IL-2等のサイトカインの合成を阻
害することでMLR を抑制することを確認するための試験
を行なった。
【００５２】健常人２人から末梢血10mlを採取し、通常
の方法によってリンパ球画分を調製した。一方のリンパ
球のみをマイトマイシンC （シグマ社製） 40 μg/mlで
37℃、30分処理し、これを刺激細胞とした。他方の無処
理リンパ球を反応細胞とした。96穴マイクロタイタープ
レート上で、化合物(I) が最終濃度9.8ng/mlから5 μg/
mlとなるように希釈し、刺激細胞と反応細胞を各々105c
ells/ ウェルとなるよう加え、混合した。コントロール
として、化合物(I) を添加しないウェルを調製した。37
℃で５日間培養後、発色試薬WST-1 （和光純薬製）を加
えて、更に37℃で１時間インキュベーションした。450n
m の吸光度で反応細胞の増殖を測定した。
の方法によってリンパ球画分を調製した。一方のリンパ
球のみをマイトマイシンC （シグマ社製） 40 μg/mlで
37℃、30分処理し、これを刺激細胞とした。他方の無処
理リンパ球を反応細胞とした。96穴マイクロタイタープ
レート上で、化合物(I) が最終濃度9.8ng/mlから5 μg/
mlとなるように希釈し、刺激細胞と反応細胞を各々105c
ells/ ウェルとなるよう加え、混合した。コントロール
として、化合物(I) を添加しないウェルを調製した。37
℃で５日間培養後、発色試薬WST-1 （和光純薬製）を加
えて、更に37℃で１時間インキュベーションした。450n
m の吸光度で反応細胞の増殖を測定した。
【００５３】
【表３】
【００５４】表３より、化合物(I) のMLR50%阻害濃度
は、約0.5 μg/mlであった。
は、約0.5 μg/mlであった。
【００５５】
【発明の効果】本発明により、転写因子ＮＦ−κＢ活性
化阻害という新しい作用機序を有する３−ヒドロキシメ
チル−４−オキサ−１−アザビシクロ〔３，２，０〕ヘ
プタン−７−オンを有効成分とする転写因子ＮＦ−κＢ
活性化阻害剤及びかかる化合物を有効成分とする、転写
因子ＮＦ−κＢ活性化阻害が有効な疾患の治療剤又は予
防剤が提供される。本発明によれば、抗炎症剤、免疫抑
制剤、抗ウイルス剤等の薬剤耐性や副作用の問題を解消
することが可能となる。
化阻害という新しい作用機序を有する３−ヒドロキシメ
チル−４−オキサ−１−アザビシクロ〔３，２，０〕ヘ
プタン−７−オンを有効成分とする転写因子ＮＦ−κＢ
活性化阻害剤及びかかる化合物を有効成分とする、転写
因子ＮＦ−κＢ活性化阻害が有効な疾患の治療剤又は予
防剤が提供される。本発明によれば、抗炎症剤、免疫抑
制剤、抗ウイルス剤等の薬剤耐性や副作用の問題を解消
することが可能となる。
【図１】図１は、（３Ｒ，５Ｓ）−３−ヒドロキシメチ
ル−４−オキサ−１−アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプ
タン−７−オン（化合物(I))が転写因子ＮＦ−κＢの活
性化を阻害することを示すゲルシフトアッセイの電気泳
動の写真である。図中、レーン１及び２は、薬剤無添加
の細胞にＴＮＦ−αを添加（レーン１）及び無添加（レ
ーン２）した全細胞抽出液を用いたコントロールを示
す。レーン３及び４は、薬剤無添加の細胞にＴＮＦ−α
を添加した全細胞抽出液を用い、レーン３は標識してい
ないＮＦ−κＢ consensus oligonucleotideを過剰に加
えた競合コントロールを示し、レーン４は標識していな
いＳＰ１ consensus oligonucleotideを過剰に加えた競
合コントロールを示す。レーン５は、PDTC及びＴＮＦ−
α添加の全細胞抽出液を用いた陽性コントロールを示
し、レーン６は、化合物(I))及びＴＮＦ−αを添加した
全細胞抽出液を用いた場合を示す。
ル−４−オキサ−１−アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプ
タン−７−オン（化合物(I))が転写因子ＮＦ−κＢの活
性化を阻害することを示すゲルシフトアッセイの電気泳
動の写真である。図中、レーン１及び２は、薬剤無添加
の細胞にＴＮＦ−αを添加（レーン１）及び無添加（レ
ーン２）した全細胞抽出液を用いたコントロールを示
す。レーン３及び４は、薬剤無添加の細胞にＴＮＦ−α
を添加した全細胞抽出液を用い、レーン３は標識してい
ないＮＦ−κＢ consensus oligonucleotideを過剰に加
えた競合コントロールを示し、レーン４は標識していな
いＳＰ１ consensus oligonucleotideを過剰に加えた競
合コントロールを示す。レーン５は、PDTC及びＴＮＦ−
α添加の全細胞抽出液を用いた陽性コントロールを示
し、レーン６は、化合物(I))及びＴＮＦ−αを添加した
全細胞抽出液を用いた場合を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 竹内 富雄 東京都品川区東五反田５丁目１−11ニュー フジマンション701Ａ (72)発明者 沢 力 神奈川県綾瀬市綾西４−６−７ (72)発明者 浜田 雅 東京都新宿区内藤町１−26秀和レジデンス 405
Claims (3)
- 【請求項１】 式（Ｉ）： 【化１】 で表わされる３−ヒドロキシメチル−４−オキサ−１−
アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプタン−７−オンを有効
成分として含有してなる、転写因子ＮＦ−κＢの活性化
阻害剤。 - 【請求項２】 式（Ｉ）： 【化２】 で表わされる３−ヒドロキシメチル−４−オキサ−１−
アザビシクロ〔３．２．０〕ヘプタン−７−オンを有効
成分として含有してなる、転写因子ＮＦ−κＢの活性化
阻害が有効な疾患の治療剤又は予防剤。 - 【請求項３】 該疾患が、炎症性疾患、自己免疫性疾患
又はウイルス性疾患である請求項２記載の治療剤又は予
防剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9236207A JPH1171278A (ja) | 1997-09-01 | 1997-09-01 | 転写因子ＮＦ−κＢ活性化阻害剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9236207A JPH1171278A (ja) | 1997-09-01 | 1997-09-01 | 転写因子ＮＦ−κＢ活性化阻害剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1171278A true JPH1171278A (ja) | 1999-03-16 |
Family
ID=16997373
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9236207A Pending JPH1171278A (ja) | 1997-09-01 | 1997-09-01 | 転写因子ＮＦ−κＢ活性化阻害剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1171278A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003518507A (ja) * | 1999-12-24 | 2003-06-10 | シノヴィス・リミテッド | 免疫系の活性化および阻害 |
| JP2005529123A (ja) * | 2002-04-24 | 2005-09-29 | リサーチ ディベロップメント ファンデーション | 核転写調節因子ＮＦ−κＢ抑制剤と抗腫瘍薬の相乗効果 |
-
1997
- 1997-09-01 JP JP9236207A patent/JPH1171278A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003518507A (ja) * | 1999-12-24 | 2003-06-10 | シノヴィス・リミテッド | 免疫系の活性化および阻害 |
| US7915009B2 (en) * | 1999-12-24 | 2011-03-29 | The Mathilda And Terence Kennedy Institute Of Rheumatology Trust | Activation and inhibition of the immune system |
| JP2005529123A (ja) * | 2002-04-24 | 2005-09-29 | リサーチ ディベロップメント ファンデーション | 核転写調節因子ＮＦ−κＢ抑制剤と抗腫瘍薬の相乗効果 |
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