JPH1180205A - ヒアルロン酸分解促進剤、ヒアルロン酸合成異常亢進疾患治療剤及びヒアルロン酸分解異常抑制疾患治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】ヒト結合組織に存在する細胞に作用し、ヒアル
ロン酸分解を促進し得るヒアルロン酸分解促進剤、更に
はヒアルロン酸の異常な産生亢進が伴う疾患やヒアルロ
ン酸分解が異常に抑制されている疾患の治療効果に優れ
た疾患治療剤を提供する。 【解決手段】コンドロイチン硫酸Ｃ誘導体及び／又はそ
の塩を含有することを特徴とするヒアルロン酸分解促進
剤、及び該促進剤を含有することを特徴とするヒアルロ
ン酸の異常産生亢進又は異常分解抑制が伴う疾患の治療
剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ヒト結合組織に存
在する細胞に作用し、ヒアルロン酸分解を促進するヒア
ルロン酸分解促進剤に関し、更にはヒアルロン酸の異常
産生亢進又は異常分解抑制が伴う疾患の治療剤に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】ヒアルロン酸は、細胞間隙への水分の保
持、組織内にジェリー状のマトリクスを形成することに
基づく細胞の保持、臓器組織の潤滑性と柔軟性の保持、
機械的障害等の外力への抵抗、及び、細菌感染の防止等
多くの機能を有している（ＢＩＯ ＩＮＤＵＳＴＲＹ、
８巻、３４６頁、１９９１年）。

【０００３】しかし、ヒアルロン酸の正常のレベルを逸
脱した合成亢進は生体において生理的異常な状態を引き
起こす場合があると考えられている。炎症や動脈硬化、
乾癬等では細胞間に産生促進されたヒアルロン酸は炎症
細胞の浸潤を容易にし、炎症を遅延化する（European R
espiratory Journal 4(4):407-14(1991)) 。また、骨再
生異常においてもヒアルロン酸の異常蓄積が見られ、骨
の硬さに影響すると考えられている（Bone 10(6):409-1
3(1989))。さらに軟骨細胞において、最終の軟骨細胞の
分化に際し、ヒアルロン酸は細胞に吸収分解されること
から、細胞の分裂ステージから分化ステージに移行する
際はヒアルロン酸は積極的に分解され、細胞間のシグナ
ル伝達が強化される必要があると考えられる。実際、細
胞間のヒアルロン酸は細胞表層にヒアルロン酸リッチマ
トリクスとして存在しているため他の接着因子等の結合
を抑制していると考えられる。さらに、ヒアルロン酸は
悪性腫瘍においてヒアルロン酸マトリクスを形成促進
し、みずからの分裂環境を最適にし、免疫細胞からの攻
撃を防御すると考えられている(J.Biol.Chem.271(17)98
75-9878(1996))。

【０００４】以上のことからヒアルロン酸合成の異常亢
進は動脈硬化、心筋梗塞、骨形成異常、乾癬、悪性腫瘍
の症状悪化に密接に関連すると考えられ、従ってこれら
の疾患の治療においてはヒアルロン酸の分解を促進する
ことが有効であると思われる。

【０００５】一方、生体内で重要な細胞外成分であるヒ
アルロン酸は正常な生理状態でも分解が促進されている
場合がある。例えば、毛成長に伴うヘアーサイクルにお
いて成長期では毛包は毛の成長とともに皮膚真皮内を貫
通することが知られている。この部分では積極的なマト
リクスの分解が起きていると考えられる。したがってマ
トリクスの主要成分であるヒアルロン酸の分解促進をす
る薬剤は成長期を延長することで育毛効果をもつと考え
られる。

【０００６】ところで、従来よりヒアルロニダーゼ阻害
剤については数多くの報告がなされているが（特公平６
−４５８４号公報、特開平５−１７８８７６号公報、特
開平６−８０５５３号公報、特開平６−８０５７６号公
報、特開平６−９４１５号公報、特開平６−９４１６号
公報、特開平３−６８５１５号公報）、ヒアルロン酸の
分解を促進する薬剤は全く開発されていなかった。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】そこで本発明者らが鋭
意研究を行った結果、結合組織由来の正常皮膚線維芽細
胞がヒアルロン酸分解活性を持ち、さらにその分解はコ
ンドロイチン硫酸Ｃ誘導体添加によって著しく促進され
ることをことを見いだし、本発明を完成したものであっ
て、その目的とするところは、ヒト結合組織に存在する
細胞に作用し、ヒアルロン酸分解を促進し得るヒアルロ
ン酸分解促進剤、更にはヒアルロン酸の異常な産生亢進
が伴う疾患やヒアルロン酸分解が異常に抑制されている
疾患の治療効果に優れた疾患治療剤を提供するにある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】上述の目的は、コンドロ
イチン硫酸Ｃ誘導体及び／又はその塩を含有することを
特徴とするヒアルロン酸分解促進剤、該促進剤を含有す
るヒアルロン酸産生異常亢進疾患治療剤、ヒアルロン酸
分解が異常に抑制されている疾患の治療剤によって達成
される。

【０００９】

【発明の実施の形態】以下、本発明の構成について詳説
する。

【００１０】本発明で用いられるコンドロイチン硫酸Ｃ
誘導体はコンドロイチン硫酸の構成糖であるＮ−アセチ
ルガラクトサミンの６位が硫酸化されているものであ
り、コンドロイチン硫酸Ｃ，コンドロイチン硫酸Ｄ，コ
ンドロイチン硫酸Ｅ及びこれらの塩が挙げられる。これ
らは単独でも、二種以上を組み合わせて用いることがで
きる。コンドロイチン硫酸Ｃが、これらの中でも、効
果，入手のし易さより特に好ましい。

【００１１】また、本発明で用いられるコンドロイチン
硫酸Ｃ誘導体は特に限定されるものではなく、例えばサ
メやイカの軟骨からプロナーゼ処理、アルコール分画し
た常法で得られるものでよい。

【００１２】コンドロイチン硫酸Ｃ誘導体の塩として
は、特に限定されないが、特に薬学的に許容されている
ナトリウム塩、カリウム塩等を挙げることができる。さ
らに生体内ではコンドロイチン硫酸Ｃ誘導体は種々のプ
ロテオグリカンとして存在しているのでコンドロイチン
硫酸Ｃ誘導体を多く含むプロテオグリカンをグアニジン
塩酸等を用いて常法により抽出したものでもよい。

【００１３】これらのコンドロイチン硫酸Ｃ誘導体、コ
ンドロイチン硫酸Ｃ誘導体プロテオグリカン及びそれら
の塩は、１種類または２種類以上を混合して用いること
が可能である。

【００１４】本発明のヒアルロン酸分解促進剤、ヒアル
ロン酸合成亢進疾患治療剤、及びヒアルロン酸分解異常
抑制疾患治療剤におけるコンドロイチン硫酸Ｃ誘導体及
びその塩の総含有量は、対象とする疾患の種類および程
度、患者の年齢、体重、性別などにより異なり一概には
規定できないが、一般的には適用する組成物の総量を１
００ｇ基準として、０．０００１〜５０ｇが好ましく、
特に０．００１〜５ｇが好ましい。０．００１ｇ未満で
は本発明の効果が達成できない場合があり、５０ｇを超
えて配合してもその配合量に見合った効果が得られない
場合がある。

【００１５】本発明のヒアルロン酸分解促進剤、ヒアル
ロン酸合成亢進疾患治療剤、及びヒアルロン酸分解異常
抑制疾患治療剤の形態としては、特に限定されるもので
はない。例えば、適当な賦形剤、担体、希釈剤を用い
て、錠剤、液剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、軟膏剤、
貼付剤、注射剤、坐剤、入浴剤等の剤形が挙げられ、ま
たゲル、クリーム、スプレー剤、貼付剤、ローション、
パック類、乳液、パウダー及び入浴剤等の剤形が挙げら
れる。

【００１６】係る製剤の調製は常法によって行われ、例
えば、固形製剤については通常の医薬添加物、例えば、
乳糖、でんぷん、結晶セルロース、タルクなどを用いて
製剤化される。カプセル剤はそのようにして調製された
細粒剤、散剤等を適当なカプセルに充填して得られる。
液剤は白糖、カルボキシメチルセルロースなどを含む水
溶液に本発明の薬剤を溶解、懸濁することにより調製さ
れる。

【００１７】また本発明のヒアルロン酸分解促進剤、ヒ
アルロン酸合成亢進疾患治療剤及びヒアルロン酸分解異
常抑制疾患治療剤に配合される賦形剤または補助剤とし
ては、本発明の効果を損なわない範囲において、化粧
品、医薬品等に一般に使用されるものが配合可能であ
り、剤形等に応じて適宜選択され、特に限定されるもの
ではない。例えば、ワセリン，スクワラン等の炭化水
素、ステアリルアルコール等の高級アルコール、ミリス
チン酸イソプロピル等の高級脂肪酸低級アルキルエステ
ル、ラノリン酸等の動物性油脂、グリセリン，プロピレ
ングリコール等の多価アルコール、グリセリン脂肪酸エ
ステル，モノステアリン酸ポリエチレングリコール，ポ
リエチレンアルキルエーテルリン酸等の界面活性剤、パ
ラオキシ安息香酸メチル，パラオキシ安息香酸ブチル等
の防腐剤、蝋、樹脂、各種香料、各種色素、クエン酸ナ
トリウム、炭酸ナトリウム等の各種無機塩、酪酸，乳酸
等の各種酸、水、およびエタノール等が挙げられる。

【００１８】本発明のヒアルロン酸分解促進剤は、ヒア
ルロン酸の合成が亢進している疾患やヒアルロン酸の分
解が異常抑制されている疾患の治療剤の有効成分として
配合することができる。更に、通常の医薬品、化粧品の
有効成分として、その他、培養細胞系に添加する研究・
試験用試薬等として用いることもできる。

【００１９】本発明において治療剤とは、後述するよう
な疾患の症状を取り去るいわゆる治療剤の他、その症状
を軽減する改善剤，その他症状が現れるのを予防する防
止剤をも含むものである。

【００２０】本発明において疾患とは、ヒアルロン酸合
成が生理的に正常時より亢進しているか又はヒアルロン
酸分解が異常に抑制されている状態を言う。

【００２１】ヒアルロン酸合成が生理的に正常時より亢
進している疾患としては、乾癬、動脈硬化、骨異常形
成、心筋梗塞等が挙げられる。本発明のヒアルロン酸異
常合成亢進疾患治療剤をこれらの疾患に用いる場合は、
防止剤または予防剤として正常人に適用することもでき
るが、ヒアルロン酸の合成が生理的に正常時より亢進し
ている症状者に適用する方が効果的である。

【００２２】一方、ヒアルロン酸分解が異常に抑制され
ている疾患とは、ヒアルロン酸の分解が患部で異常抑制
されていると考える脱毛症、若はげ等の疾患を言う。本
発明のヒアルロン酸分解疾患治療剤をこれらの疾患に用
いる場合は、症状の改善剤または治療剤として、ヒアル
ロン酸の分解が異常に抑制されている症状者に適用する
ことができる。

【００２３】今回、コンドロイチン硫酸Ｃ誘導体が結合
組織に存在する線維芽細胞に作用し、その細胞間マトリ
クスの成分であるヒアルロン酸を分解促進する作用があ
ることが明らかとなった。

【００２４】本発明のヒアルロン酸分解疾患治療剤の１
日当たりの投与量としては、通常経口投与では、コンド
ロイチン硫酸Ｃ誘導体及びその塩の総量として０．０１
ｇ〜５０ｇが好ましく、特に好ましくは１ｇ〜１０ｇで
ある。非経口投与では、０．１ｇ〜５ｇが好ましい。
０．０１ｇ未満では本発明の効果が達成できない場合が
あり、５０ｇを超えて投与してもその投与量に見合った
効果が得られない場合がある。

【００２５】本発明のヒアルロン酸分解阻害剤は、培養
細胞に添加して高分子ヒアルロン酸を産生させる時は、
培養液中にコンドロイチン硫酸Ｃ誘導体が１μｇ／ｍｌ
以上となるように添加するのが好ましく、更に好ましく
は１０μｇ／ｍｌ〜１０ｍｇ／ｍｌである。１μｇ／ｍ
ｌ未満では効果を奏しない場合がある。

【００２６】本発明のヒアルロン酸分解疾患治療剤は、
加熱滅菌、濾過滅菌等の方法により、滅菌してから用い
るのが好ましい。

【００２７】

【実施例】以下、実施例、比較例により本発明を更に詳
しく説明する。尚、実施例に先立ちヒアルロン酸分解阻
害剤の効果を調べるための評価系について説明する。ま
た後記表３〜表９に示す配合量は、いずれも重量％を表
す。

【００２８】（１）ＭＥＭ培地の調製法 Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ
(大日本製薬社製、１０−１０１) １０．６ｇにそれぞ
れ終濃度として１％（Ｖ／Ｖ）Ｎｏｎ Ｅｓｓｅｎｔｉ
ａｌ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ（大日本製薬社製、１６−
８１０) 、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（大日本製薬社
製、１６−８２０）、１．２％（Ｗ／Ｖ）炭酸水素ナト
リウム、蒸留水を加えて１ｌとした後、炭酸ガスを吹き
込んでｐＨを約７にした（以下、ＭＥＭ培地と略記す
る）。

【００２９】（２）ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）の非働化 ＦＢＳ（Ｉｒｖｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製) を
５６℃で３０分間加熱処理した。

【００３０】（３）細胞添加用高分子トリチウムヒアル
ロン酸の調製方法 正常ヒト線維芽細胞株〔デトロイト５５１株（ＡＴＣＣ
ＣＣＬ １１０）〕の細胞数を１０％（Ｖ／Ｖ）の非
働化ＦＢＳを含むＭＥＭ培地にて２×１０⁵ 個／ｍｌに
調整し、２２５ｃｍ² のフラスコに５０ｍｌ入れ、３日
間培養しコンフルエント状態にした。その後ヒアルロン
酸の前駆体であるトリチウムグルコサミン（American R
adiolabeled Chemicals Inc.社製）を培養系に添加し
（１０μＣｉ／ｍｌ）、さらに３日間培養したのち、培
養液からトリチウムラベルされたヒアルロン酸をUnderh
ill らの方法（J.Cell Biology，８２巻，４７５頁，１
９７９年）によって精製し、さらにゲルろ過カラムによ
り分子量１００万以上の高分子トリチウムヒアルロン酸
（比放射活性，０．１μＣｉ／μｇ）を調製した。これ
を細胞培養系への添加用高分子トリチウムヒアルロン酸
とした。

【００３１】（４）正常ヒト線維芽細胞への高分子トリ
チウムヒアルロン酸の添加培養 正常ヒト線維芽細胞株〔デトロイト５５１株（ＡＴＣＣ
ＣＣＬ １１０）〕の細胞数を１０％（Ｖ／Ｖ）の非
働化ＦＢＳを含むＭＥＭ培地にて１．５×１０⁵ 個／ｍ
ｌに調整し、１２穴プレート（ファルコン社製）に０．
８ｍｌずつ播種し、９５％（Ｖ／Ｖ）空気−５％（Ｖ／
Ｖ）炭酸ガスの雰囲気下、３７℃で３日間静置培養し、
さらに、ＭＥＭ培地のみに培地交換し、１日間培養し
た。その後、高分子トリチウムヒアルロン酸を含む（１
４，０００ＤＰＭ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ）ＭＥＭ培地
を調製し、培地交換をし、３日間培養を行った。なお培
地交換時、最終濃度１０μＭになるようにヒスタミンと
各種アンタゴニストを添加した。

【００３２】（５）リウマチ滑膜細胞への高分子トリチ
ウムヒアルロン酸の添加培養 ヒトリウマチ滑膜細胞の細胞数を１０％（Ｖ／Ｖ）の非
働化ＦＢＳを含むＭＥＭ培地にて１．５×１０⁵ 個／ｍ
ｌに調整し、１２穴プレート（ファルコン社製）に０．
８ｍｌずつ播種し、９５％（Ｖ／Ｖ）空気−５％（Ｖ／
Ｖ）炭酸ガスの雰囲気下、３７℃で３日間静置培養し、
さらに、１％ＦＢＳを含むＭＥＭ培地のみに培地交換
し、１日間培養した。その後、高分子トリチウムヒアル
ロン酸を含む（１４，０００ＤＰＭ／ｍｌ）ＭＥＭ培地
を調製し、培地交換をし、３日間培養を行った。なお培
地交換時、最終濃度１０μＭになるようにヒスタミンと
各種アンタゴニスト、コールドの高分子ヒアルロン酸を
添加した。

【００３３】（６）細胞による高分子トリチウムヒアル
ロン酸の分解評価 培養終了後、培養液を回収し、１００℃で５分間加熱処
理を行った後、培地１ｍｌをセファロースＣＬ−２Ｂカ
ラム（内径１ｃｍ，長さ６０ｃｍ）にアプライし以下の
条件でゲルろ過を行った。 流速：０．６ｍｌ／ｍｉｎ 分画：４ｍｌ／１Ｆｒａｃｔｉｏｎ 分画総数：２５ 更に分子量１０万以下のヒアルロン酸が溶出するフラク
ション１０〜２５の１６本を集め、［³ Ｈ］放射活性を
測定し分解したヒアルロン酸の量を求めた。

【００３４】実施例１，比較例１〜４ コンドロイチン硫酸Ａ（比較例２）、コンドロイチン硫
酸Ｂ（比較例３）、コンドロイチン硫酸Ｃ（実施例
１）、ヘパラン硫酸（比較例４）を最終濃度が１ｍｇ／
ｍｌになるようにＭＥＭ培地に溶解した。また、ＭＥＭ
培地のみを比較例１とした。

【００３５】試験例１（ヒト正常皮膚線維芽細胞による
ヒアルロン酸分解） 実施例１，比較例１〜４を用いて、前述した（６）の方
法により、高分子トリチウムヒアルロン酸の分解量を算
出した。結果を下記表１に示す。

【００３６】

【表１】

【００３７】その結果、コンドロイチン硫酸Ｃ添加によ
って無添加時よりヒアルロン酸の分解は促進され（実施
例１）、他のグリコサミノグリカンであるコンドロイチ
ン硫酸Ａ、コンドロイチン硫酸Ｂ、ヘパラン硫酸、いず
れの薬剤においても分解は促進しなかった（比較例１〜
４）。

【００３８】この結果からコンドロイチン硫酸Ｃはヒト
のヒアルロン酸分解促進剤として非常に有効であること
が判明した。また本発明のヒアルロン酸分解阻害剤はヒ
アルロン酸合成が異常に亢進している疾患やヒアルロン
酸の分解が異常に抑制されている疾患に対する治療剤の
有効成分として用いることができるものである。

【００３９】実施例２〜４ コンドロイチン硫酸Ｃを培地中での濃度が２０、１０
０、５００ｍｇ／ｍｌになるようにＭＥＭ溶解した（実
施例２〜４）。

【００４０】試験例２ 実施例２〜４、比較例１（ＭＥＭ培地のみ），を用い
て、前述した（６）の方法により、高分子トリチウムヒ
アルロン酸の分解を調べ、ヒアルロン酸分解量を算出し
た。結果を下記表２に示す。

【００４１】

【表２】

【００４２】その結果、コンドロイチン酸Ｃは用量依存
的にヒアルロン酸の分解を促進することが判明した（実
施例２〜４）。

【００４３】この結果からコンドロイチン硫酸Ｃはヒト
のヒアルロン酸分解促進剤として非常に有効であること
は明らかである。また本発明のヒアルロン酸分解阻害剤
を含有するヒアルロン酸合成異常亢進疾患治療剤は、ヒ
アルロン酸合成が異常に亢進している乾癬等の治療に有
効である。

【００４４】実施例５〜７（錠剤）

【００４５】

【表３】

【００４６】上記表３の各成分を均一に混合し、常法に
従って、１錠３００ｍｇとなるように打錠した。

【００４７】実施例８〜１０（カプセル剤）

【００４８】

【表４】

【００４９】上記表４の各成分を均一に混合し、常法に
従って、混合物の２００ｍｇを３号硬カプセルに充填し
た。

【００５０】実施例１１〜１２（液剤）

【００５１】

【表５】

【００５２】精製水に上記表５の各成分を溶解し、攪拌
均一化して液剤とした。

【００５３】実施例１４〜１７（ローション）

【００５４】

【表６】

【００５５】上記表６の各成分を常法により混合溶解し
て、ローションを調製した。

【００５６】実施例１８〜１９（入浴剤）

【００５７】

【表７】

【００５８】上記表７中の各成分を混合し、入浴剤を調
製した。なお、この入浴剤は使用時に約３０００倍に希
釈される。

【００５９】実施例２０〜２３（軟膏）

【００６０】

【表８】

【００６１】上記表８中において、（Ｂ）の各成分を湯
浴で８０℃に加温しながら混合し、これに、８０℃に加
温した上記（Ａ）の各成分の混合物中に攪拌しながら徐
々に加えた。つぎに、ホモジナイザー（Ｔｏｋｕｓｙｕ
ｋｉｋａ Ｋｏｇｙｏｕ社製）で２．５分間激しく攪拌
（２５００ｒｐｍ）して各成分を充分乳化分散させた
後、攪拌しながら徐々に冷却してコンドロイチン硫酸Ｃ
またはコンドロイチン硫酸Ｄを含む軟膏を得た。

【００６２】実施例２４〜２６（注射剤）

【００６３】

【表９】

【００６４】メスシリンダーに上記表９の処方にて、コ
ンドロイチン硫酸Ｃ、コンドロイチン硫酸Ｄ、塩化ナト
リウム、燐酸１水素ナトリウムをとり、注射用蒸留水を
加え、溶解し、メンブランフィルター（０．２２μｍ）
で濾過し、ガラスアンプルに分注し、注射剤を調製し
た。

【００６５】

【発明の効果】以上の様に、本発明により、ヒト結合組
織に存在する細胞に作用し、ヒアルロン酸分解を促進す
るヒアルロン酸分解促進剤、ヒアルロン酸合成異常亢進
疾患治療剤、及びヒアルロン酸分解異常抑制疾患治療剤
を提供できることは明らかである。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 31/725 ＡＤＵ Ａ６１Ｋ 31/725 ＡＤＵ

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 コンドロイチン硫酸Ｃ誘導体及び／又は
   その塩を含有することを特徴とするヒアルロン酸分解促
   進剤。
2. 【請求項２】 請求項１記載のヒアルロン酸分解促進剤
   を含有することを特徴とするヒアルロン酸の異常産生亢
   進又は異常分解抑制を伴う疾患の治療剤。