JPS5811019B2 - 電気泳動用支持体片の脱色方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は濾紙、セルロースアセテートフィルム等の電気
泳動用支持体片の脱色方法に関するものである。

電気泳動法は血清等の体液の蛋白成分の分離定量法とし
て臨床検査の分野で盛んに用いられている方法である。

分析のプロセスは、濾紙、セルロースアセテートフィル
ム等の支持体片に塗布された血清を泳動分離させ、次い
で支持体片上で分離された成分を染色し、更に支持体片
の血清成分以外の部分を脱色し、その後各成分の光学的
密度を温度計で定量測定するという順序で行なわれる。

このような分析プロセスに対して電気泳動学会では標準
操作法を制定している。

従来このような電気泳動法による分析は総て人手で行な
っている。

すなわち、血清を泳動分離させた支持体片を染色液中に
浸して染色し、次いで脱色液中に浸して分離成分以外の
部分を脱色するプロセスを人手で行なっている。

しかし、電気泳動法が広く用いられるようになってくる
のに伴なって検体数が増大し、特に研究所、大病院では
一日に非常に多くの検体の定量測定を行なう必要が生じ
てきた。

このために、人員の確保が必要となると共に比較的単純
な操作を多数回繰返すことによる人的誤差が生ずる可能
性が生じてきた。

従って、上述した分析操作を自動的に行なう自動染色処
理装置が望まれるようになった。

従来の用手法による染色および脱色は各支持体片に対し
て常に新しい染色液および脱色液を用いているので、こ
れをそのまま自動化すると多量の染色液および脱色液が
必要となり、分析コストが高くなると共に染色液および
脱色液のための貯蔵スペースが大きく必要となり、装置
が大形となるといった欠点が生ずる。

一方、染色液および脱色液の使用量を少なくすると、従
来の標準操作法の条件を満足できないものとなり、所要
の信頼度が得られないという欠点が生ずる。

本発明者に、このような欠点を除去し、電気泳動法にお
ける支持体片の染色、脱色を標準操作法に準じて自動的
に行なうことができ、しかも染色液、脱色液の使用量を
少なくするために、同一の染色液を複数の支持体片に対
して繰返し爪いながら、各支持体片に染色液を供給して
染色し、染色を終った各支持体片に、少なくとも１回脱
色液を変えながら複数回脱色液を供給して脱色する方法
を開発した。

このような方法では脱色液を有効に利用するために複数
の支持体片に対して繰返し用いるのが好適であるが、常
に同じ脱色液を用いると脱色効果が低減して行き支持体
片により脱色作用にばらつきが生じ分析精度に悪影響を
与える欠点がある。

また、成る支持体片の脱色に用いた脱色液のみを用いて
脱色をすると支持体片に染色液が残り、完支持片に対し
て毎回新しい脱色液を用いて脱色すれば、多量の脱色液
が必要となる欠点がある。

本発明の目的は上述した欠点を除去し、少量の脱色液に
よって各支持体片を完全に脱色することができる脱色方
法を提供しようとするものである。

本発明は、電気泳動法により成分を分離させ、染色液に
より染色した順次の支持体片を脱色するに当たり、各支
持体片を複数回に亘って脱色し、成る支持体片の成る回
の脱色に使用した脱色液を次の支持体片のそれより前の
回の脱色に用いることを特徴とするものである。

本発明の好適な実施例においては、複数の脱色位置を経
て順次に支持体片を搬送し、最も上流にある脱色位置に
は新しい脱色液を供給し、最も下流にある脱色位置を除
く各脱色位置での脱色に使用した脱色液を一つ下流の脱
色位置に供給するようにし、最下流の脱色位置での脱色
に使用した脱色液を廃棄する。

このような実施例によれば、各支持体片は徐々に清浄と
なる脱色液で脱色されるようになるのできわめて有効な
脱色が行なわれ、また、脱色液に常に総ての脱色位置で
繰返し使用されるので脱色液の使用量はきわめて少なく
なると共に最終脱色は新鮮な脱色液で行なわれるため支
持体片に染色液が残存することもなくなる。

次に図面を参照して本発明の詳細な説明する。

第１図は本発明の脱色方法を用いる自動染色処理装置の
一例の構成を線図的に示すものである。

本例では、支持体片１を、電気泳動法の中で現在最も広
く用いられているセルロースアセテートフィルムとする
。

第１図に示すように、電気泳動分離された支持体片１を
多数収納し、かつ順次に１個づつ送り出すことができる
供給ラック２を設ける。

各支持体片１は第２図に示すように、セルロースアセテ
ートフィルム１ａの両側端にプラスチック枠１ｂ、１ｃ
を取り付けた構造とする。

供給ラック２の近傍に連続的に移動する無終端チェーン
３を設ける。

供給ラック２から送り出される順次の支持体片１はこの
チェーン３の各区画内に装填され、プレート４上を順次
に矢印で示すように左右に送られる。

このプレート４は第３図に示すように両側縁４ａ、４ｂ
を僅かに突出させた浅い樋状とする。

従って順次の支持体片１の枠１１ｂ、１ｃがこのプレー
ト４の突縁４ａ、４ｂ上に乗っかって案内されることに
なる。

プレート４は染色区間Ｓと、脱色区間りとを有している
。

第３図はプレート４の染色区間Ｓを示し、この区間Ｓに
おいてプレート４には染色液注入孔Ｓ１と、染色液流出
孔Ｓ１′とを形成する。

脱色区間りにおいても、同様の構造の注入孔と流出孔と
の組を５組Ｄ１．Ｄ１′；Ｄ２．Ｄ２′；・・・；Ｄ５
．Ｄ５′（第１図参照）設ける。

第１図に示すように、これらを支持体片１の移動方向に
順次に配置する。

またプレート４の表面には注入孔Ｓ１と連通する条溝４
ｃを形成する。

支持体片１が染色液注入孔Ｓ１ の位置にくると、弁Ｂ
１を閉じ、弁Ｂ２を開き、ポンプＰ１を働かせて、染色
液槽Ｃ０内の染色液を一定量吸引する。

次に弁Ｂ２を閉じ、弁Ｂ１ を開いてポンプＰ１ を働
かせ、吸引した一定量の染色液をプレート４の染色液注
入口Ｓ１ から注入し、条溝４ｃ内に充満させる。

支持体片１とプレート４との間の間隔は小さいから、注
入孔Ｓ１から注入された染色液は毛細管現象で支持体片
１とプレート４との間に広がり、支持体片１の全面に染
色液が被着することになる。

この染色液は、その粘性および表面張力によって、支持
体片１とプレート４との間に保持されたまゝ支持体片１
の移動に伴なって移動し、染色液流出孔Ｓ１′の位置に
達する。

持体片１がＳｌ からＳ１′まで移動する時間を、１分
３０秒〜３分の間の適当な時間に定め、この時間中に規
定の染色処理が行なわれるようにする。

流出孔Ｓ１´の位置に達すると染色液は流出孔Ｓ１′を
経て流下し、染色液槽Ｃ０中に戻る。

このようにして染色液に循環しながら、順次の支持体片
１を染色することになる。

本発明ではこのように同一の染色液を多数の支持体片の
染色に使用することができるので、染色液の使用量は少
なくて済み、染色液槽Ｃ０を、容積の小さいものとする
ことができると共に処理コストを下げることができる。

染色液としては、ポンソー３Ｒを６５のトリクロル酢酸
水啓液に０．４〜０．８％に溶解したものを用いる。

プレート４の脱色区間りでは染色操作が行なわれ、支持
体片上に分離された血清成分以外の部分は脱色される。

本例装置では、５個の脱色液槽Ｃ１〜Ｃ５を設け、これ
ら液槽中の脱色液を１台のポンプＰ２によって吸排し、
順次の脱色位置で全な脱色を行なうことができなくなる
。

一方、各順次の支持片１に脱色液を被着し得るようにす
る。

すなわち、成る支持体片１に注目した場合、これが第１
の脱色液注入孔Ｄ１の位置にあるとき、弁ｅ２を開いて
ポンプＰ２を作動させ、第１の脱色液槽Ｃ１から一定量
の脱色液を吸引する。

この場合、他の弁ｅ１．ｆ１．ｆ２．ｇ１．ｇ２．ｈ１
゜ｈ２．ｉ１．ｉ２は総て閉じている。

次に弁ｅ１を開き、弁ｅ２を閉じてポンプＰ２を駆動し
、脱色液注入孔Ｄ１ から脱色液を注入する。

注入後ｅ１を閉じる。

上述した染色区間Ｓにおけるのと同様に、脱色液は毛細
管現象により支持体片１とプレート４との間に充満し、
更に支持体片１と一緒に脱色液流出孔Ｄ１′の位置まで
移動し、ここから流出する。

この流出される脱色液は染色液により著しく汚染されて
いるから廃棄する。

この支持体片１が第２の脱色液注入孔Ｄ２の位置に来る
と、弁ｆ２を開き、ポンプＰ２を再び駆動し、脱色液槽
Ｃ２から一定量の脱色液を吸引する。

次に弁ｆ２を閉じ、弁ｆ１を開いて吸引した脱色液を第
２脱色液注入孔Ｄ２を経て支持体片１とプレート４との
間に注入する。

注入後弁ｆ１を閉じる。支持体片１が第２の脱色液流出
孔Ｄ２´の位置に来ると、支持体片１とプレート４との
間に保持した脱色液を流出孔Ｄ２′を経て流出される。

この脱色液は第１の脱色液槽Ｃ１に戻す。

以下、支持体片１が第３、第４．第５の脱色液注入孔Ｄ
３．Ｄ４．Ｄ５の位置に来たときに第３．第４．第５の
脱色液槽Ｃ３，Ｃ４，Ｃ５から脱色液を注入し、第３．
第４、第５の流出孔Ｄ３´、Ｄ４´、Ｄ５´を経て流出
させ、第２．第３．第４の脱色液槽Ｃ２，Ｃ３，Ｃ４に
戻す。

第５の脱色液槽Ｃ５には新たな脱色液を補給するように
する。

このように構成することにより、順次の脱色液槽Ｃ１〜
Ｃ５には染色液で汚染される程度の少ない脱色液が収容
されているため、きわめて少量の脱色液で理想的な脱色
操作が行なわれる。

また、最終の脱色は新鮮な脱色液で行なわれるので支持
体片に染色液が残ることがなく、完全な脱色が可能とな
る。

脱色液としては、１〜３％の酢酸水容液を用いる。

また支持体片１がＤｌからＤ１′、Ｄ２からＤ４・・・
Ｄ５からＤ５′まで移動する時間が１〜２分となるよう
にする。

第１図の区間には加熱区間であり、ヒーター５により加
熱した空気を支持体片１に送り、乾燥する。

このようにして、染色、脱色、乾燥処理の終った支持体
片１はプレート４の右端でプレート４から落下し、収納
ラック６内に収納される。

第１図において、染色液槽Ｃ０内に収容された染色液は
その量が徐々に減少すると共に染色効果が低下する。

従って、例えばカウンターによって検体数をカウントし
、所定の検体数だけ処理した後に、染色液を補給するか
交替する必要がある。

また第５の脱色液槽Ｃ５内の脱色液も処理が進むにつれ
て減少するから、所定の検体数だけ処理した後に脱色液
を補給するか交替する必要がある。

第１図においては、符号７で示すブロックがこのような
機能を有するものである。

第４図に１台のポンプＰ２によって脱色液の注入を行な
う場合、同時刻に弁の動作が重ならないようにするため
のタイミングを示す線図である。

順次の支持体片１の移送間隔をｐとし、順次の脱色液注
入孔と流出孔との間隔Ｄ１−Ｄ１′＝Ｄ２Ｄ２′＝Ｄ３
Ｄ３′＝Ｄ４Ｄ４’＝Ｄ５ Ｄ５’＝ｑとし、順次の脱
色液注入孔の間隔をＤｌ Ｄ２ ＝１１．Ｄ２ Ｄ３’
＝１２．Ｄ３Ｄ４ ＝１３ 、Ｄ４ Ｄ５ ＝１４
とするとき、 １１＝１２＝１３＝１４＝ｍｐ＋１／ｎ
ｐのような位置関係をもたせることによって弁が同時に
開くことを阻止することができる。

ここにｍ。ｎは正数であって、ｍは支持体片１の移動速
度、装置の寸法等の設計要素によって適当な値に選定さ
れ、ｎは脱色液注入孔の個数によって定められる。

電気泳動学会によって制定された標準操作法によれば、
脱色液を５回変える方法が推奨されているので、その場
合には、ｎ＝５とすればよい。

第１および第４図はｎ＝５の例であり、支持体片群が右
方へ移送されるものであり、支持体片１−１に方へ移動
すると、支持体片１−２に脱色液が注入される。

する毎に支持体片１−３，１−４，１−５に脱色液が注
入される。

更に１１５ｐだけ移動すると、脱色液注入孔Ｄ１ の
位置に来る支持体片１−１※に脱色液が注入され、以下
１１５ｐだけ移動する毎に支持体片１−２※、１−３※
、１−４※、１−５※に脱色液が注入される。

このように脱色液の注入タイミングをずらすことにより
、１台の比較的小型のポンプを用いることができ、この
場合、脱色液間の混合も起らない。

これに対し総ての脱色液の注入を１台のポンプにより同
時に行なうとすると大型のポンプが必要になると共に脱
色液の混合が起る惧れがある。

上述したように本発明の脱色方法によれば、脱色液を複
数の支持体片の脱色に用いるため、脱色液の使用量を少
なくすることができ、しかも成る支持体片の成る回の脱
色に使用した脱色液は他の支持体片のそれより前の回の
脱色に使用するため、順次の支持体に対する脱色作用は
均一となりばらつきは生じなくなり、したがって分析精
度を上げることができる。

さらに最終回の脱色を新鮮な脱色液で行なうようにすれ
ば、支持体片に染色液が残ることがなく、完全な脱色を
行なうことができる。

本発明は上述した例にのみ限定されるものでになく、幾
多の変更を加え得ること勿論である。

例えば上述した例ではチェーン３を用いたが、ベルトそ
の他の適当な移送機構を用いることもできる。

またチェーン、ベルト等に必らずしも連続的に送る必要
になく、間欠的に送ることもできる。

また、上述の例では、染色処理した支持体片１を収納ラ
ック６に落し込むようにしたが、順次の染色処理した支
持体枠１を濃度計に直接送り込んで光学的密度を測定し
て定量分析するようにすることもできる。

この場合には電気泳動法による分析定量を行なう自動測
定装置が得られる。

更に上述した例では１台のポンプによって５回の脱色液
注入を行なうようにしたが、例えば５個のポンプを設け
ることもできる。

この場合にはこれら５個のポンプを同時に駆動すること
ができる。

また染色液、脱色液注入、流出機構も上述した例だけに
限定されるもので汀なく、他の任意の注入、流出機構を
用いることができる。

また上述した例では支持体片１には１検体分のフィルム
１ａを収納したが複数の検体のフィルムを同時に収納す
ることもできる。

またフィルム１ａは上述したように枠１ｂ、１ｃで両側
縁を挾んだ構造とする必要はなく、例えばプラスチック
ケース内に収納することもできる。

【図面の簡単な説明】

第１図に本発明の脱色方法を適用した自動染色処理装置
の一例の構成を示す線図、第２図は第１図に示す自動染
色処理装置に用いる支持体片の構成を示す斜視図、第３
図は第１図に示す自動染色処理装置のプレートの構造を
示す斜視図、第４図は第１図に示す自動染色処理装置に
おける脱色操作を示す線図である。 １・・・・・・支持体片、２・・・・・・供給ラック、
３・・・・・・無終端チェーン、４・・・・・・プレー
ト、５・・・・・・ヒーター、６・・・・・・収納ラン
ク、Ｓ・・・・・・染色区間、Ｄ・・・・・・脱色区間
、Ｋ・・・・・・乾燥区間、Ｐｌ・・・・・・染色液供
給ポンプ、Ｐ２・・・・・・脱色液供給ポンプ、Ｃ０・
・・・・・染色液槽、Ｃ１〜Ｃ５・・・・・・脱色液槽
。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 電気泳動法により成分を分離させ、染色液により染
   色した順次の支持体片を脱色するに当たり、各支持体片
   を複数回に亘って脱色し、成る支持体片の成る回の脱色
   に使用した脱色液を次の支持体片のそれより前の回の脱
   色に用いることを特徴とする電気泳動用支持体片の脱色
   方法。