JPS5811199B2 - ３０ ５０４ｒｐ オヨビ ソノ シオノセイゾウホウホウ - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は抗生物質およびその製造方法に関する。

本発明は、新抗生物質３０，５０４ ＲＰおよびそれの
金属および窒素含有塩基との塩に関する。

このものは有用な抗コクシジウム活性、抗菌活性および
発育促進活性を有する。

３０．５０４ ＲＰは、ストレプトマイセス属に属し、
ストレプトマイセス ガリナリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓ ｇａｌ １ｉｎａｒｉｕｓ） ＤＳ ２５，
８８１ （ＮＲＲＬ５，７８５）と称し、昭和５０年２
月２８日付で寄託番号腐２９３２にて微生物工業技術研
究所に寄託された。

また以下により完全に記載する新しい微生物を培養して
得られる。

３０．５０４ ＲＰは次に示す物理化学的性質を有する
。

外 観：白色の微結晶粉末 溶解性：３０，５０４ＲＰは塩素化炭化水素たとへばメ
チレンクロライドおよびクロロホルム、アルコールたと
へばメタノール、およびジメチルホルムアミドに易溶で
あり；アセトンおよび酢酸エチルに中程度に溶解し、ヘ
キサンに僅溶で、そして水に事実上不溶である。

なお、溶解性は、ｔｈｅＰｈａｒｍａｃｏｐｅｅ Ｆｒ
ａｎｃｃａｉｓｅ 、第９版、第２部、１３頁（１９７
２）の表示法によっている。

百分率組成：３０，５０４ＲＰは炭素、水素および酸素
を含有し、その大体の百分率組成は次のようである。

Ｃ％＝６９．４ Ｈ％＝９．００％＝２１．０中和当量
重量：３０．５０４ＲＰは酸であって、ジメチルホルム
アミド溶液中水酸化４級ブチルアンモニウムで滴定して
、中和当量重量は８３０である。

融 点 （Ｋｏｆｌｅｒ ｂｅｎｃｈで測定）：約２０
０度Ｃ６旋光度：３０，５０４ＲＰのメタノール中１％
濃度の溶液としての比旋光度は、大体、次の値を示す。

（ロ）ニー７９度〔α〕ニー１８８度（６） ＝−３７
８度紫外線スペクトル：３０，５０４ＲＰは紫外線領域
に特徴的吸収を示さない。

赤外線スペクトル：（臭化カリウム錠剤で測定ルこのス
ペクトルは図面に示すが、波長はミクロン（上辺の尺度
）または波数はｃｍ−’ （下辺の尺度）を横軸に目盛
り、光学密度を縦軸に目盛る。

３０．５０４ＲＰの主要赤外線吸収は、ｃｍ−１で、次
表１に示す。

クロマトグラフィー２種の溶媒混合物を用いるシリカゲ
ル上昇クロマトグラフィーで３０，５０４ＲＰを次のよ
うに特徴付けうる。

酢酸エチル／シクロヘキサン／水／ブタノール（５０１
５０／２５１５容量比）でのＲｆは０．４５゜メチレン
クロライド／メタノール（９４／６容量比）でのＲｆは
０．５５゜ インビトロ−静菌活性 ３０．５０４ＲＰはある種のグラム陽性菌に対して特に
静菌性活性を示す。

いくつかの微生物に対する３０，５０４ＲＰの静菌活性
は、この目的に普通に使用する希釈法のひとつで測定す
る。

それぞれの微生物について、規定条件で、適当な培養ブ
ロス中での目に見える発育を阻止する活性物質の最小阻
止濃度を測定する。

種種の測定の結果を、培地Ｃ，Ｃａたりの物質のミクロ
グラムで表わす。

毒 性：にわとりでの５０％致死濃度は、経口１回投与
で８５■／ｋｇ。

抗コクシジウム活性 ３０．５０４ＲＰの抗コクシジウム活性は、Ｅ ｉｍｅ
ｒ−ｉａ ｔｅｎｅｌｌａまたはＥｉｍｅｒｉａ ａ
ｃｅｒｖｕｌ ｉｎａ感染のにわとりで測定する。

餌中０．００５から０．０４重量％のあいだの無毒の濃
度で餌中に３０，５８４ＲＰを添加する場合に、実質的
に抗コクシジウム活性が現われる。

３０．５０４ＲＰを生産する微生物は、ＤＳ２５，８８
１の番号を与えられている、即度で採取された土壌より
得られた放線菌である。

この微生物の１試料は、アメリカ合衆国、イリノイ州、
Ｐｅｏｒｉａ ｔｈｅＮｏｒｔｈｅｒｎ Ｒｅｇｉｏｎ
ａｌ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙに寄託
され、ＮＲＲＬ５７８５の番号を受けている。

この微生物は、すでに記載されている種とは一致しない
ので、新種と考え、Ｓ ｔ ｒｅｐ ｔ ｏｍｙｃｅｓ
ｇａｌｌ １ｎａｒｉｕｓ ｔ ＤＳ ２５，８８１の
名称を与えた。

少量の土壌を滅菌蒸留水に懸濁させ、懸濁液を神様の濃
度に希釈し、各希釈液の少量を寒天培地を含有するペト
リ皿の表面に拡げる。

２６度Ｃで数日培養して微生物を発育させ、さらに検討
する目的で分離しようとするコロニーを取り出し、寒天
培地に移し、さらに豊富に発育させる。

Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇａｌ １ｉｎａｒｉｕｓ
ＤＳ ２５，８８１はシリンダー状から罪状の胞子を
形成する。

大きさは１．０から１．２ミクロン１０．８から１°０
ミクロン。

胞子柄はクラスター状となる。

胞子になったフィラメントは、ゆるくそして波状で、し
ばしば末端でコイル状となる。

つまり、やや彎曲した形となるかまたはスパイラル状に
巻きしばしば数回巻く。

この胞子形成の様式により、Ｐｒｉｄｈａｍの分類によ
れば）Ｒｅｔｉｎａｃｕｌｕｍ −Ａｐｅｒｔｕｍ ５
ｅｃｔｉｏｎに分類しうる。

Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇａｌ １ｉｎａｒｉｕｓ
ＤＳ ２５，８８１は、２６度Ｃおよび３７度Ｃでよ
く発育するが、５０度Ｃでは発育しない。

胞子状となった気菌糸は灰色に着色する。

地中菌糸の色は一般的に培地で変化し、黄色または帯灰
黄色から褐黄色または黄褐色に至る。

Ｈｉｃｋｅｙ −ａｎｄ −Ｔ ｒｅｓｎｅｒ寒天上
での特殊の可溶性帯褐色桃紫色色素を除いて、観察した
すべての培地で、一般的に非常に強くはないが褐黄色ま
たは褐灰色から黄褐色に変化する色素を与える。

Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇａｌ １ｉｎａｒｉｕｓ
ＤＳ ２５，８８１の培養特性を次表に示す。

これらは、良好な発育状態と達したもので、特に述べぬ
限り、２６度Ｃで２から３週間培養したものである。

これらの特徴は、放線菌の形態特徴を測定するのに普通
に用いられている培地およびブロスである。

寒天培地は斜面培地による。

使用する培地は、アメリカ合衆国、マサチューセッツ、
Ｗａｌｔｈａｍ 、Ｃｈｒｏｎｉｃａ Ｂｏｔａ−ｎｉ
ｃａ 社干肌 Ｓ 、Ａ 、Ｗａｋｓｍａｎ著” Ｔ
ｈｅ Ａｃｔｉｎ−ｏｍｙｃｅｔｅｓ ”記載の処方に
よる。

この場合、Ｗのあとに” Ｔｈｅ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃ
ｅｔｅｓ”記載の番号を付しである。

他の培地は次のようである。引用Ａ −”Ｈｉｃｋｅｙ
ａｎｄ Ｔｒｅｓｎｅｒ寒天”−Ｔ、Ｇ。

Ｐｒｉｄｈａｍ等−Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ Ａｎｎｕ
ａｌ 。

１９５６−１９５７．９５０頁 引用Ｂ ”Ｂｅｎｎｅｔ寒天” −Ｓ 、 Ａ 、
Ｗａｋｓｍａｎ −Ｔｈｅ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅ
ｓ 、２巻、３３１頁、４３０− Ｔｈｅ Ｗｉ Ｉ
Ｉｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉ Ｉｋｉｎｓ社Ｂａｌｔ１ｍ
ｏｒｅ 、 １９６１ 引用Ｃ−処方Ｗ−２３に２％の寒天を添加する。

引用ＤＩｔ酵母エキス寒天”Ｔ、Ｇ、Ｐｒｉｄｈａｍ等
、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ Ａｎｎｕａｌ 、 １９５
６−１９５７９５０頁 引用Ｅ １１トマトペーストオートミール寒天” ＴＧ
、Ｐｒｉｄｈａｍ等−Ａｎｔ ｉｂ ｉｏｔ ｉｃ Ａ
ｎｎｕａｌ 。

１．９５６−１９５７．９５０頁 引用Ｆ １１メラニン形成培地−８、Ａ 、Ｗａｋｓｍ
ａｎ−Ｔｈｅ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ、 ２巻、
３３３１頁、Ａ４２−ＴｈｅＷｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ
Ｗｉｌｋｉｎｓ社Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ 、 １９６１ 引用Ｇ Ｗ、Ｅ、Ｇｒｕｎｄｙ等−Ａｎｔｉｂｉｏｔ
ｉｃｓ ａｎｄＣｈｅｍ、、２，４０１、１９５２ 引用Ｈ”無機塩−殿粉寒天” −Ｔ 、 Ｇ、 Ｐｒ
ｉｄｈａｍ等−Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ Ａｎｎｕａｌ
、 １９５６−１９５７、９５１頁 引用■ 処方Ｗ−１に相当する。

１．５％のゲルコールを、３％のスフローズに代えて使
用 する。

引用Ｊ 処方ｗ−ｉに相当する。

１．５％のグリセロールを、３％のスフローズに代えて
用 いる。

引用Ｋ 処方Ｗ−１８で、１．５％グルコースを３％の
スクロースに代えて用いる。

引用Ｌ 処方Ｗ−１８で、スクロースを除き、小ｐ紙片
を部分的に浸す。

引用Ｍ ”Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆ
ｏｒ Ｐｕｒｅ Ｃｕ１ｔｕ−ｒｅ ５ｔｕｄｙ ｏｆ
Ｂａｃｔｅｒｉａ ” −８ｏｃｉｅｔｙ ｏｆＡｍ
ｅｒｉｃａｎ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｉｓｔｓ −Ｇ
ｅｎｅｖａ 。

Ｎ、Ｙ、■５ｏ−１８ 引用Ｎ Ｉｆ普通ゲラチン”−”Ｍａｎｕａｌ ｏｆ
Ｍｅｔｈｏ−ｄｓ ｆｏｒ Ｐｖ′ｒｅ Ｃｕ１ｔｕ
ｒｅ ５ｔｕｄｙ ｏｆ Ｂａｃｔｅ−ｒｉａ ” −
８ｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｂａｃｔｅ
ｒ−ｉｏｌｏｇｉｓｔｓ −Ｇｅｎｅｖａ 、Ｎ、Ｙ、
Ｉ［５０−１８引用Ｐ 市販スキムミルク粉末、製造
者の指示により再構成する。

引用ＱＨ２Ｓ生産検討のために指示された培地。

Ｈ，Ｄ、 ＴｒｅｓｎｅｒおよびＦ 、 Ｄａｎｇａ
−Ｊ ｏｕｒ−ｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇ
ｙ、 ７６ 、２３９−２４４１９５８。

発育の程度は、良いものから悪い方へ減少する順に、非
常に良好、良好、かなり良好、中程度、中程度より劣る
、貧弱、非常に貧弱、またはなしで表わす。

Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇａｌ １ｉｎａｒｉｕｓ
ＤＳ ２５，８８１の性質は、既に記載されているい
ずれとも一致しない。

従って、新種であると考えられる。

” Ｔｈｅ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ ” （第２
巻ＸＳ、Ａ。

Ｗａｋｓｍａｎ著、バルチモア、Ｔｈｅ Ｗｉ １１
ｊａｍｓ ａｎｄＷｉｌｋｉｎｓ社１９６１年刊）およ
び” Ｂｅｒｇｅｙ’ｓＭａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅ
ｒｍｉｎａｔｉｕｓ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ ”
（７版、Ｔｈｅ Ｗｉ Ｉｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉ
１ｋｉｎｓ社、バルチモア、１９５７）に記載の種のう
ち、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇａｌｌ １ｎａｒｉｕ
ｓ ＤＳ ２５，８８１はＳ ｔ ｒｅｐｔ ｏｍｙｃ
ｅｓｈｙｇｒｏｓｅｃｐｉｃｕｓともつとも論理的に比
較しうる。

実際％ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏ
ｐｉｃｕｓと同様に）Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇａ
ｌ １ｉｎａｒｉｕｓ ＤＳ ２５，８８ ］、は、一
般的に黄色または中入黄色または褐黄色または黄褐色の
地中菌糸を有し、灰色の胞子化気中菌糸を有する。

有機培地上でメラニン型可溶性色素を形成せず、Ｈ２Ｓ
を生成せず、ゲラチンをゆっくりと液化し、可溶性色素
は形成しない。

合成および有機の両方の培地上で、可溶性色素を生じな
いかまたは一般的に非常に強くはない可溶性色素のみを
生ずる。

帯褐黄色から帯褐灰色から黄褐色の色素である。

これらの特徴に加えて、特殊な場合として、培養に用い
たひとつの培地つまりＨｉｃｋｅｙａｎｄ Ｔｒｅｓｎ
ｅｒ寒天上で可溶性の帯褐桃紫色色素を生ずる。

これは、Ｈ、Ｄ 、 ＴｒｅｓｎｅｒおよびＥ、Ｊ 。
Ｂａｃｋｕｓ （Ａｐｐｌ ｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｃ
ｌｏｇｙ ４．２４３−２５０．１９５６）によれば、
Ｓ 、 ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉ ｃｕｓ種種神様株の示
す性質で、株によって異なる培地上に認められる。

しかし、本発明の新しい微生物は、Ｓ、ｈ ｒｏｓｃ
ｏ １ｃｕｓ の規定される３つの本質的特徴のうちの
２つにおいて異なる。

第１に、胞子柄の形において、Ｓ 、 ｈｙｇｒｏｓｃ
ｏｐｉｃｕｓの胞子柄の形に一致しない。

そして第２に、Ｓ、 ｈｙｇｒｏｓｃｏ−ｐｉｃｕｓに
特徴的な光沢のある黒色域を、胞子形成気中菌糸中に決
して生ずることはない。

Ｓ 、 ｇａｌ １ｉｎａｒｉｕｓ ＤＳ ２５，８８
１はまた、やはり、メラニンを形成せず、一般的に黄色
からオレンジ黄色または帯褐色地中菌糸を形成し、そし
て灰色の胞子形成気中菌糸を形成するＳ ｔ ｒ ｅｐ
ｔｏｍｙｃｅ ５ａｕｒｅｏｆａｃｉｅｎｓ と比
較しうる。

さらに、 Ｓ 、 ａｕｒｅｏ−ｆａｃｉｅｎｓは多
くの培地に可溶性色素を与えず、与えるとしても、一般
的に弱い黄色から褐色の色素を与える。

ある場合には、Ｓ 、 ａｕｒｅｏｆａｃｉｅｎｓの地
中菌糸は赤褐色から紫色であるが、この場合の色素は培
地中に拡散せず、その結果、Ｓ、ｇａｌｌｉｎａ−ｒｉ
ｕｓ ＤＳ ２５，８８１の生じうる可溶性帯褐色の桃
−紫色の色素には相当しえない。

さらに、Ｓ、ａｕ−ｒｅｏｆａｃ １ｅｎｓ はゲラチ
ンは液化せず、ゲラチン上でクリーム色の地中菌糸を形
成し、スキムミルクを凝固せずまたペプトン化もしない
。

他方、Ｓ 、 ｇａｌ １１ｎａｒｉｕｓ ＤＳ ２５
，８８１はゲラチンを液化し、黄褐色の地中菌糸を形成
し、スキムミルクを明確にしそして均一にペプトン化す
る。

それでＳ 、 ｇａｌ １１ｎａｒｉｕｓ ＤＳ ２
５，８８１は、Ｓ、ａｕｒｅｃｆａ−ｃ １ｅｎｓとも
異なる。

発育のための種種の炭素または窒素原の利用能を、Ｐｒ
ｉｄｈａｍおよびＧｏｔ ｔ ｌ ｉ ｅｄ法（Ｊ 、
ｏｆ Ｂａｃｔ 、 。

１否、１０７−１１４．１９４８）に従って測定した。

著者の指示した基本培地を用い、グルコースを種種の試
験炭素原に代えるか、または、（ＮＨ４） ２ ＳＯ４
は種種の試験窒素原で代える。

結果を次表に示す。

本発明によれば、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇａｌ
Ｉ １ｎａｒｌｕｓＤＳ ２５，８８１またはその生産
性変異株（つまり３０．５０４ＲＰを生産しうる変異株
）を培地中好気的に培養し、培養中に生成された３０，
５０４ＲＰをそのままかまたは塩として分離することに
より、３０．５０４ＲＰを製造する。

Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇａｌｌ １ｎａｒｉｕｓ
ＤＳ ２５，８８１は、表面培養または深部培養で培
養しうるが、便宜的には後者が有利である。

この目的では、発酵工業で利用の種種の型の装置を使用
しうる。

特に、次の工程で培養を実施する。

Ｓｔｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇａｌｌｉｎａｒｉｕｓ Ｄ
Ｓ２５，８８１保存培養発酵培地は、同化可能の炭素原
および同化可能の窒素源、無機要素、特にクロライド、
そして場合によっては発育要素を本質的に含有せねばな
らない。

そしてこれらの物質は、明確な形かまたは種種の由来の
生物的生産物にあるごとき複合混合物として添加しうる
。

適当な同化可能の炭素原には炭水化物たとへばグルコー
ス、スクロース、マルトース、デキストリン、でんぷん
および他の炭水化物性物質たとへば糖アルコール（グリ
セロールを含む）およびある種の有機酸たとへば乳酸お
よびくえん酸がある。

ある種の動物または植物性の油たとへばラード油または
大豆油もこれらの種の炭化水素原に代えて用いうるしま
たはそれらに添加しうる。

適当な窒素源は非常に多様である。

それらは非常に単純な化学物質たとへば無機または有機
アンモニウム塩、尿素およびある種のアミノ酸でありう
る。

蛋白質の形で主として窒素を含有する複合物質たとへば
カゼイン、ラクトアルブミン、グルテンおよびそれらの
水解生成物、大豆粉、落花生粉、魚粉、肉エキス、酵母
エキス、デイステイラースソルブル、およびコーンステ
イープの形でも添加しうる。

添加する無機要素のうち、アルカリまたはアルカリ土金
属のリン酸塩またはカルシウムまたはマグネシウムの炭
酸塩のごときは、緩衝または中和効果を有する。

別のものは、たとへばアルカリ金属およびアルカリ土金
属の塩化物および硫酸塩は、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
ｇａｌ １１ｎａｒｉｕｓ ＤＳ ２５，８８１の発
育および３０，５０４ＲＰの生産に必要なイオン平衡を
与える。

最後に、あるものは、Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇａ
ｌ １ｉｎａｒｉｕｓ ＤＳ ２５，８８１の代謝の活
性剤として作用する。

それらは亜鉛、コバルト、鉄、銅およびマンガン塩であ
る。

適当な発育要素はビタミン型中性物質たとへばリボフラ
ビン、葉酸およびパントテン酸である。

培地のｐＨは出発時に５．８から７．８の間のすべきで
あり、なるべくは６．２から７．４までの間とする。

発酵の温度は２５から３０度Ｃまでの間であるが、２３
から３３度Ｃまでの間の温度で満足な生産を達成しうる
。

発酵の通気はむしろ広範囲に変動しうる。

しかし、分当りブロスリットルについて０．３から３リ
ツトルの通気量が非常に適当であることが分った。

３０，５０４ＲＰの最大収量は２から８日の培養で達成
される。

この時間は使用する培地に本質的に依存する。

これらの事実から、３０，５０４ＲＰ生産のためのＳｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇａｌ １ｉｎａｒｉｕｓ Ｄ
Ｓ ２５，８８１培養のための一般的条件は広範囲に変
動可能で、特定の要求に応じて変化させうる。

３０．５０４ＲＰを培養物より分離するには次のように
する。

酸性のｐＨ１一般的には３から６の間でそしてなるべく
は５に近いｐＨで濾過助剤の存在で培養物を濾過する。

３０，５０４ ＲＰは濾塊に保留されるので適当な有機
溶媒たとへば低級アルコールたとへばメタノールまたに
塩素化溶媒たとへばメチレンクロライドで抽出する。

減圧で濃縮し結晶化さすことにより有機溶液より粗生成
物を分離する。

その際適当とあれば３０，５０４ＲＰを溶解しない溶媒
または溶解しにくい溶媒を添加し、一定時間冷室中に放
置して、３０，５０４ＲＰの結晶化を完結させる。

３０．５０４ ＲＰは、再結、適当な吸着剤上のクロマ
トグラフィーまたは向流分配といった便宜な方法で精製
する。

次に本発明の実施例を示す。

例１ ａ）発酵 １７０リツトルの発酵槽に次の成分を導入する。

ペプトン １，２００ｇ酵母エキス
６００ｇグルコース１水和物
１，２００ｇ部分的水解殿粉 ２，
４００ｇ水道水 全体を１１０リツトルとする量１
０規定水酸化ナトリウム溶液（５０ｃ、ｃ、）を添加し
、ｐＨを７．３とする。

１２２度Ｃで４０分間蒸気を通して培地を減菌する。

冷却後のブロスの容量は１２０リツトルとなるが、それ
は滅菌中の蒸気の凝縮による。

ｐＨは６．９０となる。振とうエルシンマイヤーフラス
コ中で用意したＳ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇａｌ
Ｉ １ｎａｒｉｕｓ ＤＳ ２５，８８ ］の培養物（
２００ｃｃ）を接種する。

滅菌空気を通し、２１時間かくはん通気培養する。

それで生産培養の種にするに適当な状態となる。

生産培養は８００リツトルの発酵槽中で実施する。

仕込む材料は次のようである。デイステイラースソルブ
ル １２．５ｋｇスクロース １２．
５ｋｇ塩化ナトリウム ２．５ ｋｇ硫硫
酸マグネシウム氷水和物 １．０ｋｇ塩化コバルト６水
和物の溶液 ０．５リットル２０ｇ／リットル 水道水 全体を４６０リツトルとする量１０規定水
酸化ナトリウム溶液（７２０ω）を添加し培地のｐＨを
７．５とする。

１２２度Ｃで４０分間蒸気を通し滅菌する。

冷却後のブロスの容量は蒸気の凝縮で５００リツトルと
なる。

培地のｐＨは６．４０°上記１７０リットル発酵槽から
種培養（５０リツトル）を接種する。

２０５回転／分のタービンでかくまぜ滅菌空気を通気（
２０立方米／時）しながら２７度Ｃで１１６時間培養す
る。

５規定の水酸化ナトリウム溶液（全使用量０．５リツト
ル）を自動的に添加することで、出発時のｐＨが６．５
の限界を切るのを防ぐ。

操作終了時の培地のｐＨは７．８５で容量は４７０リツ
トルである。

ｂ）抽出 上記条件で得た培地（１，０００リツトル）を、６規定
塩酸（７リツトル）でｐＨ５の酸性としたあと０．５時
間かくはんする。

濾過助剤（３５ｋｇ）と混合した、培地はフィルタープ
レスで濾過する。

濾塊はフィルター上で、６規定塩酸でｐＨを５に調整し
た水（２００リツトル）で洗う。

濾液および洗液は除く。

濾塊はメタノール（７００リツトル）中でこね、得られ
た混合物は６規定水酸化ナトリウム溶液（４７０■）で
ｐＨ７とし、０．５時間かくはんする。

混合物はフィルタープレスで濾過し、濾塊を、フィルタ
ー上でメタノール（１００リツトル）で洗う。

ろ液および洗液をあわせ、減圧（５から１０ｍｙｚＨｇ
）で濃縮し、水性濃縮液（６０リットル）をうる。

この濃縮物に、６規定塩酸（５８０ｃｃ ）を添加しｐ
Ｈ３とする。

次にメチレンクロライド（４０リツトル）とあわせて１
０分間かくはんする。

２相を分け、水相はメチレンクロライドで、３０リツト
ルそして２０リツトルで抽出する。

メチレンクロライド抽出液を合併し、水（９リツトル）
とかきまぜ、２０ｃ、ｃ、の６規定塩酸を添加し、水相
のｐＨを３とする。

有機相を分け、水（１８リツトル）でふたたび洗い、２
０ｃｃの６規定水酸化ナトリウムを添加し、水相のｐＨ
を９、５とする。

減圧（５から１０ｍｍＨｇ）でメチレンクロライド相を
濃縮し約１リツトルの容量とする。

得られたメチレンクロライド濃縮物はヘキサン（１０リ
ツトル）にゆっくり注入する。

溶液は濾過して不活性不溶物（７，５ｇ）を除去する。

濾液を濃縮し約１リツトルの容量とする。

濃縮物に１リツトルの酢酸エチルを添加し、水（１リツ
トル）の存在でかくはんする。

６規定塩酸を添加し、ｐＨを３とする。

有機相を分け、１リツトルに濃縮する。

溶液をプラス４度Ｃに放置すると３０，５０４ＲＰがゆ
っくりと晶出する。

得られる結晶を濾取し４度Ｃでヘキサン（５０ＣＣ，）
で洗い減圧（５から１０ｍｍＨｇ）で３５度Ｃで乾燥す
る。

粗３０，５０４ＲＰを酸の形でうる。

７６ｇ。Ｃ）精製 得られる粗生成物（７６ｇ）をアセトン （１，５２０ＣＣ，）に溶解する。

活性炭の存在で０．５時間溶液をかくはんする。

懸沈液を濾過し、濾塊をアセトン（ｉｏｏｃｃ、）で洗
う。

濾液および洗液を合併し、水（８５０ＣＣ，）を添加す
る。

その際０度Ｃでゆっくりとかきまぜておく。

つぎに４度Ｃに放置する。

生成結晶を濾取し、混合物をアセトンおよび水（ｌから
３倍容量、１００ＣＣ）で洗い、３５度Ｃで減圧（５か
ら１０ ｍｉＨｇ ）で乾燥する。

３０，５０４ＲＰ（６８，５ｇ）をうる。

ｄ）再結晶 生成物（６８ｇ）をヘキサン（２，８８リツトル）に溶
解する。

溶液は７時間かくはんする。その間に生成物はゆっくり
と再晶出する。

プラス４度Ｃで１５時間放置し、結晶を濾取し、ヘキサ
ン（１００ＣＣ，）で洗い、減圧（５から１０ｍｍＨｇ
）で３５度Ｃで１２時間乾燥する。

酸型３０．５０４ＲＰの第１の分画（５４ｇ）をかくし
てうる。

減圧（５から１０ｍｍＨｇ）で母液を濃縮し、０．４リ
ツトルとしそしてプラス４度Ｃに１２時間放置し第２の
分画をうる。

生成結晶を濾取しヘキサン（２０ＣＣ）で洗い、減圧（
５から１０ｍｍＨｇ）で３５度Ｃで１２時間乾燥する。

酸型の３０，５０４ＲＰの第２の分画（１０ｇ）をうる
。

本発明範囲には、３０，５０４ＲＰまたはそれの金属ま
たは窒素含有塩基との塩の０．０００１から９９．９重
量％と動物の消費しうる物質とを含有する、動物の飼料
組成物も含まれる。

これらの組成物は、動物の混合飼料または濃厚飼料混合
物と、３０，５０４ＲＰまたはその金属または窒素含有
塩基と塩そして場合によっては他の抗コクシジウム剤を
あわせて含有しつる。

適当な効果を発揮するに要する投与量は、もちろん、飼
料の割合に応じて広範囲に変動しうる。

一般的に３０，５０４ＲＰまたはそれの金属または窒素
含有塩基との塩を、０．００５から０．０４重量％含有
すれば十分である。

３０．５０４ＲＰまたはその金属または窒素含有塩基と
の塩は、完全飼料中に上記の割合で均一に分散させた形
で用いうる。

強化のための飼料中に、もつともしばしばビタミンおよ
び無機塩のような他の添加物とあわせて添加しうる。

これらの強化用飼料は、メインの飼料と混合しうるしま
たはそれの消費にともなって添加してゆく。

それは普通メインの飼料５から２０％である。

″プレミックス“として、０．０５から２０％の３０，
５０４ＲＰまたはそれの金属塩または窒素含有塩基との
塩を飼料用の増量剤で希釈したものを用意し、これを用
いて、完全飼料または強化用飼料を調整してもよい。

この形は、飼料中に活性生成物を均一に分布さすことを
容易とする便宜な中間体である。

プレミックス自体は、９９．９から２０％の３０，５０
４Ｒまたは塩を含有する濃縮物に、可食性の変性剤たと
へば可食性染料、風味剤、分散剤または凝集防止剤およ
び飼料増量剤を添加調製しうる。

濃縮物およびプレミックスに一般的に粉剤である。

強化用飼料および完成飼料は、粉剤かまたは粒剤で、常
法で調製する。

次に本発明に準する組成物を説明する。

例２ 次の組成を有する飼料を調製する。

穀物の粉（並品） １３．４１％大麦
の粉 １３．４１％とうもろこし
粉 １３．４１％小麦粉
３１３２％魚粉
８．９２％大豆粉
８．９２％脱水フオツダフロア（ｆｏｄｄｅｒｆｌｏｕ
ｒ） ４．５６％酵母エキス
２．３３％乾燥ミルク粉 ２．
６８％塩化ナトリウム ０．０９％
塩化カルシウム ０．８９％無機要
素 ０．０６％ビタミン型コ
ンプレックス ビタミンＡ ４，０００ Ｉ 、Ｕ、／
ｋｇビタミンＤ３１，０００ Ｉ 、Ｕ、／ｋｇクロラ
イド型塩素 １１５■／ｋｇリボフラビン
２．２４■／ｋｇ０．０２％の３０
，５０４ＲＰを添加し飼料中に十分に混せる。

本発明はまた、反雛獣（牛、羊および山羊）の発育要素
として使用しうる、３０，５０４Ｒ，Ｐまたはその塩を
基材とする組成物をもまた供与する。

また豚の下痢を治療する薬剤としても用いうる。

これらの組成物は、反雛獣または豚の混合飼料および飼
料用濃厚混合物より成立つ。

このものは、３０．５０４ＲＰまたはその塩を含有する
。

適当な効果を与えるに必要な投与量はもちろん、動物の
種および飼料自体の栄養価に応じて、広範囲に変動する
。

動物１頭について５０から２５０ｍｇの間の３０、５０
４ ＲＰを１日量として用いるのが特に有利である。

０．０１から０．１％の本発明の抗生物質を、もつとも
しばしば、他の添加剤たとへばビタミンおよび無機塩と
あわせて含有する強化用飼料として、３０．５０４ＲＰ
を分散さすのが有利である。

これらの強化用飼料は、メインの飼料と混合しておくか
またはそれが消費されるのにともなって添加する。

強化飼料は、普通は１日の消費量の約１から１０％とす
る。

それで、３０．５０４ ＲＰは、１日の飼料の０．００
０１から０．０１重量％とする。

完成飼料または強化用飼料に用いる゛プレミックス”は
、飼料増量剤で希釈して、一般的に０．１から５％の３
０，５０４ＲＰを含有する。

これは、抗生物質３０，５０４ＲＰを飼料に均一に分散
さすことを便利にする、便宜的な中間体となる。

この″プレミックス”は一般的に、可食性の変性剤たと
へば可食性染料、風味物質、凝集防止用分散剤および飼
料増量剤を添加した、９９．５から５％までの３０，５
０４ＲＰを含有する濃厚物より一般的に調製する。

濃厚物および″プレミックス”は一般的に粉剤である。

強化用飼料は、常法で調製の粉剤であるかまたは粒剤で
ある。

これらの組成物中で、抗生物質３０，５０４ＲＰまたは
その塩は、そのままかまたは被覆された微粒子の形であ
りうる。

【図面の簡単な説明】

図面は３０，５０４ＲＰの赤外線吸収スペクトルを示す
。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ストレプトマイセス・ガリナリウス（Ｓｔｒｅ−ｐ
   ｔｏｍｙｃｅｓ ｇａｌｌｉｎａｒｉｕｓ） ＤＳ ２
   ５，８８１ （ＮＲＲＬ５．７８５、微工研寄託番号第
   ２，９３２号）又はその生産性変異株を培地中で好気培
   養し、ついで培養中に生成した３０，５０４ＲＰをその
   まま又は塩として分離することを特徴とする、３０，５
   ０４ＲＰおよびその塩の製造方法。