JPS58170796A - 架橋コラーゲンの水性組成物とその調製方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は体組織の治療用組成物及び治療法に関する。本
発明は、特に注射可能性のある、哺乳動物における軟組
織増強用コラーゲン移植物質に関する。

コラーゲンは製剤担体、外科的補綴物（縫合糸及び包帯
用品）、及び移植物質として使用されている。（Ｃｈｖ
ａｐｉｌ、　ｅｔ　ａｌ、　Ｉｎｔｌ　Ｒｅｖ　ｏｆ　
ＣｏｎｎｅＣ−ｔｉｖｅ　Ｔｉ５ｓｕｅ　Ｒｅｓ　（１
９７３）　６　：　１　）多くの場合、コラーゲンは、
機械的特性の向上、免疫原性の低下や耐吸収性の向上を
図るために、化学薬品、放射線その他の手段（二よって
架橋される。この公知の架橋コラーゲンは固体状の性質
を有している。

固体状の架橋コラーゲンから作られた移植物は、外科的
に移植された。（即ち、切開によって移植された。） ０１ｉｖｅｒ等は、Ｃ１１ｎｉｃａｌ　０ｒｔｈｏｐａ
ｅｄｉｃｓ　＆　Ｒｅ−１ａｔｅｄ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ
　（１９７６）１１５　：２９１−３０２　。

Ｂｒ　Ｊ　Ｅｘｐ　Ｐａｔｈ　（１９８０）６１　：５
４４−５４９．及びＣｏｎｎ　Ｔｉ５ｓｕ　Ｒｅｓ　（
１９８１）９　：５９−６２において、皮膚をトリプシ
ンで処理した後、アルデヒドで架橋して得られた移植物
について記述している。その結果得られた鴫体状のコラ
ーゲン移植物は、移植の後も永い間尤の大きさを維持す
ると報告されている。このような図体状の移植物の主要
な問題点は、移植物が外科的に移植されなければならな
いということである。他の問題点は、注射可能な移植物
はど変形し易くないことと、残留グルタルアルデヒドに
より、七の個所で架橋が続くことにより、移植物がその
可撓性を失う可能性があることである。

５ｃｈｅｃｈｔｅｒ等は、Ｂｒ　Ｊ　Ｐｌａｓ　Ｓｕｒ
ｇ　（１９７５）２８：　　１９８−２０２　　におい
て、架橋の後Ｌ−アラニンに浸漬されたグルタルアルデ
ヒドで架橋した皮膚を開示している。この論文は、皮膚
をＬ−アラニンに暴露することによってアルデヒドの残
留反応基をブロックし、以って、このような反応基によ
って発生する毒性分子の放出を妨げると仮定している。

米国特許第３９４９０７３号公報には、軟組織増強のた
めの注射可能な移植物質としてコラーゲンのアテロペプ
チド溶液を使用することが記載されている。この公報の
記載によれば、移植する前にコラーゲンを再構成するが
、これは移植されると、線維組織体になる。また、この
公報には、増強部位に形成された線維体の収縮を制御す
るために、不溶性のコラーゲンのミクロフィブリルを加
えることがノＪ〈唆されている。上記公報に記載されて
いる物質の市販品は、ＺＹＤＥＲＭ（ｏ商標名）コラー
ゲン４二対であるが、これは少量の局所麻酔薬を含有す
る再構成アテロペプチド塩化ナトリウム水溶液からなる
。この市販品の効果は顕著であるが、移植されると、主
にその液体成分が体組織に吸収されるため、収縮するこ
とがある。従って、時には「永続性」と呼ばれることも
ある容量不変性が重要である場合には、補充用移植物質
を注射（一度とは限らない。）により追加しなければな
らない。

本発明の主要な目的は、皮膚の増強のために有用であっ
て、かつ（１）均一であり、即ちコラーゲンが単一の物
理的形状のみを有し、（２）注射可能であり、（３）　
Ｚ　Ｙ　Ｄ　Ｅ　ＲＭ■コラーゲン移植物に比較してす
ぐれた永続性と物理的変形に対する耐性を有する架橋コ
ラーゲン移植物質を提供することである。

本発明の一面は、２２℃における粘性流体であって、か
つ実質的に残留架橋剤のないことを特徴とする新規な化
学的に架橋されたアテロペプチドコラーゲンである。こ
のコラーゲンは、一般的に、２２℃において約７００〜
約３０００　ｃｐの粘度を有し、かつ約２０　ｐｐｍ以
下の残留架橋剤を含んでいる。

本発明の他の面は、上記の化学的（＝架橋されたアテロ
ペプチドコラーゲンの分散液からなることを特徴とする
、軟組織を増強するのに使用するコラーゲン移植物質で
ある。

本発明のもう一つの面は、酸性水溶液を、減小した温度
と低張イオン強度（二おいて中和すること（二よって、
その溶液からアテロペプチドコラーゲンを再構成するこ
とと、２２°Ｃで粘性流体である架橋されたコラーゲン
を産生するのｔ：充分な濃度と条件下において上記再構
成されたアテロペプチドコラーゲンをコラーゲンと共有
結合する架橋剤で水性媒体中で架橋することと、架橋剤
と反応する急冷剤で架橋反応を急冷することと、反応混
合物から粘性を有する架橋アテロペプチドコラーゲンを
分離することを特徴とする上記の化学的に架橋されたア
テロペプチドコラーゲンを調製する方法である。

本発明で使用する架橋コラーゲンは、多くの哺乳動物源
から採取されたコラーゲンから誘導され得る。供与体は
コラーゲン物質が最終的に移植される受容体と遺伝学的
に同様である必要はない。

入手し易いという理由で、通常牛または豚の真皮を利用
する。架橋コラーゲンを作る第一のステップは、上記真
皮からアテロペプチドコラーゲン溶液を調製することで
ある。動物の皮膚は、中程度（マイルド）の酸に浸し、
次に髪や表皮や脂肪を除去するために皮膚をスフレイブ
して軟化する。

次に脱毛した皮膚を再び中程度の酸に浸し、グラインデ
ィング、細切断、ミリング等の物理的方法（二よって粉
砕する。この粉砕（二より皮膚は可溶化できる状態にな
る。

粉砕した組織は酸性の水性媒体に分散させ、コラＮゲナ
ーゼ以外のタンパク質分解酵素で消化させると、変性さ
せずに可溶化させることができる。

低温の時には、変性を避けるために、通常希酸溶液を使
用する。Ｈｃｌなどの鉱酸や酢酸、マロン酸、乳酸など
のカルボン酸は、約１．５〜５のｐＨ範囲、約５〜２５
℃の温度範囲で使用できる。２０℃、約ｐＨ２で１〜５
１１／１３の濃度になるまで粉砕組織をＨｃｌに分散さ
せるのが好ましい。組織の分散後、酵素を加え、そして
混合物を培養して酵素によりコラーゲンのテロペプチド
部及び組織の他の可溶化成分を消化させる。酵素として
は、コラーゲンのへリツクス部を変性させずに、テロペ
プチド部分を消化するものを使用する。このような酵素
の例としては、トリプシン、ペプシン、キモトリプシン
及びパパインがある。失活、及び可溶化されたコラーゲ
ンからの分離が比較的簡単であるため、ペプシンが好ま
しい。通常、酵素濃度はコラーゲン４二対して約０．１
〜１０重量％の範囲内（二あればよい。培養時間は、一
般的には、約２日間〜２週間の間から選択すればよい。

可溶化の進行は、溶液の粘度を求めて調べればよい。粘
度がほぼ一定値に達したところが、可溶化の終了点であ
り、この時点で酵素を失活（変性）させ、分離する。

酵素の失活は水酸化ナトリウムなどのアルカリ性物質を
添加して、溶液のｐＨを少なくとも約７にすれば実施で
きる。酵素を失活（変性）させた後、溶液を処理して変
性させた酵素及び可溶化時に消化された組織部分を分離
する。この分離には、各種の透析法、沈降法や濾過法が
適用できる。好適実施例では、まず最初に酸を加えてｐ
Ｈを下げてから、けいそう土沈降法により溶液を清澄化
する。

沈殿物を許婚し、そして涙液を濃縮する。次に、イオン
交換クロマトグラフィー（＝よって濃縮物を分画し、さ
らに濃縮して、架橋コラーゲンを作るのに使用すること
ができる、実質的に純粋なアテロペプチドコラーゲン溶
液にする。

架橋コラーゲンを作る次のステップは、溶液からアテロ
ペプチドコラーゲンを再構成することである。再構成は
、望ましくは、約１０℃〜２５℃の低い温度で溶液を中
和させることによって行なうのが好ましい。中和溶液の
イオン強度は、生理的条件に比して低いのが好ましい。

約０．０３〜約０．１、好ましくは約０．０６のイオン
強度が一般的に用いられる。中和は、コラーゲン溶液が
フィブリルに再会合するレベルまで、Ｎａ２ＨＰＯ４ま
たはＮａＯＨ等の適当な塩基または緩衝液を加えること
によって、溶液のｐＨなあげることを含む。１ｌｌｌ維
は約４６９〜約１０．０のｐＨ範囲におけるこれらの条
件下で形成される。最終的なｐＨは、約５〜８の範囲で
あるのが好ましい。この範囲内でｐＨが約７より以下の
場合は、細（て軟かなフィブリルが形成され易く、ｐＨ
が７以上の場合は、より粗いフィブリルが形成され易い
。軟かいフィブリルこのような組織は軟かいフィブリル
の分散液を注射し易くする。フィブリル形成段階に要す
る時間は、通常は約Ｖ２〜約１８時間である。

再構成されたアテロププチド線維コラーゲンゲル懸濁液
は、コラーゲンと共有結合を形成する架橋剤で架橋され
る。通常、架橋剤は多官能性であるが、二官能性がより
一般的である。架橋条件は、注射可能な流体として調合
されることができ、かつ非架橋線維アテロペプチドコラ
ーゲンの比較し得る調合物から作られた移植物に対して
すぐれた永続性を有する移植物を提供する、粘性を有し
、共有結合によって架橋されたコラーゲンを産生するよ
うな条件である。架橋がこの程度まで達した時、急冷剤
の添加によって、架橋反応は急冷される。急冷剤は、架
橋剤と無害の水溶性アダクトを形成する。架橋剤の濃度
と架橋反応の期間は、それ自体で注射可能な、粘性を有
する流体産生物を提供する架橋度を得るについて重要な
プロセス条件である。急冷はそれ以上の架橋の進行と産
生物の粘度の変化を食い止めるために重要である。架橋
剤の反応基の不活はまた、産生物からこのような反応基
を除去させ、産生物を、非急冷架橋コラーゲ／に比較し
て免疫原性を低くさせる。アルデヒドは好適な架橋剤で
ある。コラーゲンを架橋するのに用いられるアルデヒド
の例としては、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド
、アセトアルデヒド、グリオキサールピルビン酸アルデ
ヒド、ジアルデヒド殿粉がある。グルタルアルデヒドは
特に好適である。架橋剤の官能基（例えばアルデヒド基
）と反応して水溶性アダクトを形成する官能基を有する
化合物を架橋反応を急冷するために用いることができる
。アミノ酸等の遊離アミノ基を有する急冷剤が好適であ
る。グリシンが特に好適である。反応混合物中のグルタ
ルアルデヒドの濃度は、一般的に約０．００１〜約０．
０５重量％である。架橋反応の期間は、一般的に半時間
乃至約−週間である。反応は通常約り０℃〜約３５℃で
行われる。急冷剤は架橋剤に対して少（なくとも化学量
的に比例して加えられる。急冷剤は過剰に加えるのが好
ましい。

特に好適な架橋及び急冷の工程の処決は以下の通りであ
る：約０．０１重量％のグルタルアルデヒドで約２２℃
において約１６時間架橋し、約０．２Ｍになるまで過剰
グリシンで約２２℃において１時間〜２時間急冷する。

急冷が完了した後、架橋アテロペプチドコラーゲン産生
物を緩衝水溶液で洗浄し、アルデヒド−急冷剤アダクト
、未反応アルデヒド、アルデヒド重合体、及び未反応急
冷剤を除去する。ｐＨが６．９〜７．４の燐酸ナトリウ
ム−塩化ナトリウム緩衝溶液が好適である。洗浄された
産生物は、適当な蛋白質濃度、即ち一般的には約２０〜
５０竪♀、好ましくは約２５〜４０号賃になるまで、濾
過又は遠心分離によって濃縮する。蛋白質濃度は、場合
に応じて、緩衝剤を加えるか又は更に濃縮して上記範囲
に調整することができる。洗浄された産生物は、約２０
　ｐｐｍ以下の遊離アルデヒドを含み、定常流動粘性（
ｓｔｅａｄｙ　ｆｌｏｗ　ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ）ではな
く、動粘性を測定する振動ディスク粘度計（ｏｓｃｉｌ
ｌａｔｉｎｇｄｉｓｋ　ｖｉｓｃｏｓｉｔｎｅｔｅｒ）
　（Ｎａｍｅｔｒｅ　Ｃｏ、、　７．００６ＰＢＤ型）
（＝よって測定された。２２℃において約７００〜約３
０００　ｃｐの範囲の粘度を有する。

急冷された架橋コラーゲンの水性懸濁液の最終的な調合
は、懸濁液のイオン強度を等仮性（即ち約０．１５〜約
０．２）まで調整することと、注射の際の局所的痛みを
減するため約０．３重量％の濃度までライドカイン等の
局所麻酔薬を添加することとを含む。次に、ナ２７ゲー
ジあるいはそれ以上の大きさの注射針のついた注射器に
懸濁液を充填する。本明細書で使われている「注射でき
る」という用語は、調合物が通常の手の圧力で上記注射
器から分与されることができるということを意味する。

新規の注射可能な架橋コラーゲンを調製するプロセス（
二おける上記のステップは、滅菌材料を用いて滅菌条件
下で行なわれるのが好ましい。

上記の本発明コラーゲン移植物質は軟組織の増強、先天
性異常、後天性欠損や美容上の欠損の治療や矯正を目的
として皮肉又は皮下注射することができる。

これらの例には顔面卒倒形成不全症、頬及び頬骨の酸形
成症、−個性の乳房酸形成症、漏斗胸、胸筋の発育不全
又は無形成（ボーランド異常）及び口蓋裂や粘膜下口蓋
裂治療（咽頭後方移植片として）（＝伴う口蓋帆咽頭の
機能不全などの先天性異常、陥凹藏痕、（例えばＤＬＥ
円盤状エリテマトーデスζ二伴う）粘膜丁萎縮症、摘出
眼の眼球陥没（土側頭牌症）、顔面の停電陥凹、粘膜下
萎縮症を痒う線形強度（硬皮）症、鞍鼻症、ロンペルグ
病や一側性声帯麻痺などの（外傷、外科手術、感染後の
）後天性欠損、及び眉間の渋面線、深い鼻唇ひた、口周
辺の幾何学的しわ、頬陥没及び乳房の酸形成症などの美
容上の欠損がある。

以ト実施例により、粘性を有する架橋コラーゲン、該コ
ラーゲンから作られた移植物質、該移植物質が用いられ
る方法、及び該移植物質から作られる移植物の長所を説
明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものでは
ない。

牛のアテロベプテドコラーゲ／溶液の調製牛の皮膚を軟
化させ、ＨｃＪ処理によって脱毛した。次に、脱毛した
皮膚を粉砕し、ｐＨ２のＨｅｌに８〜１１　ｇ／ｌの量
で分散させた。全蛋白質に対して０１重量％のペプシン
をこの分散液に加え、混合物を１５〜２０℃で約１００
〜３００時間培養した。次に、ＮａＯＨを加えて、培養
媒体のｐＨを約７に１−げ、これ（＝よって消化を中止
させた。低いｐＨで沈殿法によって反応混合物から失活
（変性）酵素を取除いた。次に、溶液を浄化し、濾過及
びクロマトグラフィーによって濃縮して、牛のアテロペ
プチドコラーゲ／の希塩酸（ＰＨ１−４）溶液３１１９
／ｄを作った。以下この溶液をＣＩＳと呼ぶ。

線維コラーゲンの調製 １８℃乃至２０℃でＣＩＳに０．０２　Ｍ　Ｎａ２ＨＰ
Ｏ４を加え、そのｐＨを７．４七０．２又は５．８〜６
．５に上げて、　ＣＩＳから線維コラーゲンを再構成し
た。線維は１〜２時間形成せしめた。

架橋粘性コラーゲンの調製 Ａ、ｐＨ７，４±０．２で再構成されたコラーゲンを用
いた場合 中性の再構成された線維コラーゲン懸濁液１６０５ｗ／
ｌ二ｐＨ３の１．０％グルタルアルデヒド水溶液１．６
２ｄを加えた。グルタルアルデヒド溶液はがくはんしな
から徐々（二加え、最終的（二〇、０１％（二した。

１６時間の反応時間の後、反応物は、０．２　Ｍになる
まで３Ｍのグリシノを加えることによって急冷した。急
冷時間は１時間だった。次に、架橋コラーゲ／は、ｐＨ
７，４で、各洗浄の間に５〜７分間１７０００．９で遠
心分離をしながら、緩衝液約１００ｄ、０．０２ＭのＮ
ａ１ｉｌＰＯ４，０，１３Ｍ（ＤＮａ＠ｌで３度洗浄さ
れた。コラーゲンの動粘性が振動ディスク粘度針（Ｎａ
ｍ＠ｔｖｅ　Ｃｏ、、　７．００６　ＦＢＤＩｊｌで、
約５０００ｍｍ″″１の剪断レートで測定）で測定され
、２２℃で約７００　ｃｐであることがわかった。最後
の洗浄と遠心分離の後、コラーゲンは蛋白質濃度が約２
８〜３８吟−ａ：なるまで緩衝液中で再騙濁された。こ
の分散液はφ２７ゲージの注射針のついた注射器に充填
された。以下このコラーゲン１１製剤を調製剤Ｃと呼ぶ
。

注射可能な架橋コラーゲン流体の調製は、種々の架橋反
応時間とグルタルアルデヒド濃度を用いて上記のように
行なわれた。これらの調製剤を下表（＝記す。

調製剤　　憾グルタル　　反応時間 の呼称　　アルデヒド　　（時間） Ａ　　　　　　　　　　　Ｏ，０１と′　　　！ＩＣ０
，０５１ Ｇ　　　　　Ｏ，０５１６ Ｂ、　　ｐＨ＆８〜６．５で再構成されたコラーゲンを
用いた場合 ｐＨ３の１％グルタルアルデヒド水溶液を再構成された
線維コラーゲン分散液にかくはんしながら徐々に加え、
グルタルアルデヒド濃度を最終的に０．００５％〜ｏ、
ｏｉｏ％にした。架橋はか（はんしながら１６時時間桁
させた。次に２Ｍのグリシンを、最終的な濃度が０．２
Ｍ〜０．３Ｍになるまで、かくはんしながら加えて急冷
した。急冷はかくはんしながら２〜３時間続いた。次に
、急冷された架橋コラーゲンを１６，０００ｇで５〜１
０分間遠心分離してから捕集し、０．０２　Ｍ　Ｎａ、
ＨＰＯ４゜０、１３　Ｍ　Ｎａｃｌ、　ｐＨ７，４の１
０〜４０容量中で再懸濁した。この懸濁液を１６，００
０．！ｉ’で５〜２０分間遠心分離すると、最終的な、
粘性を有する、架橋コラーゲン産生物が得られた。最後
の遠心分離の後の蛋白質濃度は４５±５　ｍ９／ｄであ
った。

コラーゲン調製剤の生体内試験 生後４５〜５０日、体重１２０±２０ｇの５ｐｒａ９ｕ
ｅ−Ｄ　ａｗｌｅｙのメスのラットを移植受容体として
用いた。

３匹のラット群に、調製剤Ａ、Ｃ，Ｅ及びＧとコントロ
ール剤としてＺＹＤＥＲＭ■コラーゲン移植物を移植し
た。各ラットに次の２ケ所、即ち、架橋コラーゲン調製
剤は右背側の頭蓋部分に、コントロール剤は左背側の頭
蓋部分に移植した。１ケ所あたり約１ｃｃの調製剤を皮
下注射した。

全一製剤は移植後１５日後に体外に摘出された。

供与体の組織は、体外移植組織（エクスプラント）から
注意深く切り離され、その湿重量が記録された。次に、
重量回復率（永続性）を移植された重量から計算した。

次に重量を測定した検体を組織検査のために包埋し、切
断し、染色した。染料はへマドキシリン、エオシン、ゴ
モリ　トリクローム（Ｇｏｍｏｒｉ　ｔｒｉｃｈｒｏｍ
ｅ　）を用いた。

試験の結果 調製剤Ａ、Ｃ，Ｅ及びＧの組織検査の要約を以ト′に記
す。

調製剤Ａ： この調製剤は、より多く架橋され、グリシ／で急冷され
てない調製剤の移植物に比べてかなり均一のレース状の
外観を呈した。より多く架橋され、グリシンで急冷され
ていない調製剤は、一般的に、裂は目の介在する大きな
、密に詰まった部分を形成する。調製剤Ａの移植物の間
にも裂は目は生じたがより小さく数も少なかった。調製
剤Ａの移植物物質の中においても、介在する小さな裂は
目内においても、線維芽細胞が良く浸潤した。裂は目内
で新しいコラーゲンが合成されているように見えた。円
形細胞はほとんど観察されなかった。血管は、Ａ調製剤
の移植物の周辺の１／２において適度であり新しいコラ
ーゲン合成地帯に限定されなかった。被包の証拠は見ら
れなかった。類上皮細胞と多核はなかった。

調製剤Ｃ： この調製剤はＡ調製剤より一層レース状・多孔性を示し
た。この調製剤は、新しいコラーゲン合成区域とともに
、すぐれた分散性の細胞浸潤を示した。これらの特性は
、一般的に僅少な円形細胞とともに、調整剤Ｃが４種の
調製剤のうち、組織学的見地から最良であるとされる理
由となっている。

調製剤Ｅ： この調製剤は、０．０１％のグルタルアルデヒドで架橋
されたものより、一般的にレース性が少なかった。線維
芽細胞は分散的に分布していたが、その数は少なく、血
管新生は一般的に、移植物の周辺凶のところに限定され
た。新しいコラーゲン合成の区域もまた、他の調製剤；
ニルべて繁ばん（二は観察されなかった。

調製剤Ｇ： この調製剤は、０．０５％のグルタルアルデヒドで架橋
された全調製剤のうち、最も均一なレース状の多孔性の
外観を呈した。細胞のこの調製剤への移動は良好である
けれども、多核の病巣区域及び円形細胞の数の増加も明
白であった。　これは００１％のグルタルアルデヒドで
架橋した調製剤では観察されなかったものである。

次に示す表は、調製剤とコイトロール剤の永続性（移植
物の湿重量に対する、注意深く切り離された、体外移植
物の湿重量回復率）の結果を報告する。

１１４Ｈ剤　　　永続性 Ａ　　　　　７７１ｇ （６８金５１１ Ｂ８２８２％ ０　　　　６４＊６１に コントロール（平均）　３０〜４０ｇ！出願人　　　コ
ラーゲン・コーボレーＶｉ１ン代場人　弁理士　加　藤
朝　道 第１頁の続き 優先権主張　０１９８２年５月６日Φ米国（ＵＳ）■３
７５６６５ ０発　明　者　ドナルド・グレイスン・ウオレス 米国カリフォルニア９４０２５メン ロ・パーク・ヘッジ・ロード３８ 手続補正書（自発） 昭和５８年４月６日 特許庁長官　若杉和夫　殿 １　参件の表示 昭和５８年特許願第０３８１１７号 （昭和５８年３月８日出願） ２　発明の名称　　注射可能な架橋コラーゲンとその調
製方法及び該コラーゲンを用いた移植物質 ３　補正をする者 事件との関係　特許出願人 ８　補正の内容　　　　明細書の清書（内容に変更なし
）ｚ７ム

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （］）　　（ａｌ　　２２℃において粘性流体であり、
   （ｂ）　　残留架橋剤を実質的に含まないことを特徴と
   する化学的に架橋されたアテロペプチドコラーゲン。 （２）　　コラーゲンは２２℃において約７００〜約３
   ０００　ｃｐの粘度を有することを特徴とする特許請求
   の範囲第１項記載のコラーゲン。 （３）　　コラーゲン中の残留架橋剤の量は、約２０ｐ
   ｐｍ以ドであることを特徴とする特許請求の範囲第１項
   又は第２項記載のコラーゲン。 （４）架橋剤がグルタルアルデヒドであることを特徴と
   する特許請求の範囲第１項、第２項、又は第３項記載の
   コラーゲン。 （５）２２°Ｃにおいて粘性流体であり、残留架橋剤を
   実質的に含まない化学的に架橋されたアゾロペプチドコ
   ラーゲンの、次のステップからなることを特徴とする、
   調製方法： （ａ）　　酸性水溶液を低い温度と低張イオン強度で中
   和することによって酸性水溶液からアゾロペプチドコラ
   ーゲンを再構成すること、 （ｂ）２２℃において粘性流体である架橋コラーゲ／を
   産生するのに充分な濃度と条件下で、前記再構成された
   アテロペプチドコラーゲンをコラーゲンと共有結合を形
   成する架橋剤により水性媒体中において架橋すること、 （ｃ）　　架橋剤と反応する急冷剤で架橋反応を急冷す
   ること、及び （ｄ）　　反応混合物から粘性を有する架橋アテロペプ
   チドコラーゲンを分離すること。 （６）架橋アテロペプチドコラーゲンが２２℃において
   約７００〜約３０００　ｃｐの粘度を有し、２０　ｐｐ
   ｍ以下の反応性架橋剤を含むことを特徴とする特許請求
   の範囲第５項記載の方法。 （７）ステップ（ａ）の温度が約り０℃〜約２５°Ｃで
   あり、ステップ（ａｔのイオン強度が約０．０３〜約０
   ．１であり、ステップ（ａｌの最終的なｐＨが約４９〜
   約１０．０であり、架橋剤がグルタルアルデヒドであり
   、架橋反応混合物中のグルタルアルデヒドの濃度が約０
   ．００１重量−〜約０．０５重量％であることを特徴と
   する特許請求の範囲第６項記載の方法。 （８）　　コラーゲンが牛の真皮のコラーゲンであり、
   ステップ（ａ）の温度が約り０℃〜約２５℃であり、ス
   テップ（ａ）のイオン強度が約０．０３〜約０．１であ
   り、ステップ（ａ）の最終的なｐＨが約５〜約８の範囲
   にあり、架橋剤がグルタルアルデヒドであり、架橋反応
   混合物中のグルタルアルデヒドの濃度は約０．　Ｏ（１
   １重量％〜約０．０５重量％であり、架橋反応は約手時
   間〜約１週間行なわれ、急冷剤はグリノンであり、分離
   は、粘性を有する架橋アテロペプチドコラーゲンを洗浄
   して他の反応産生物や未反応反応物を除去することを含
   み、架橋アテロペプチドコラーゲンが２２℃において約
   ７００〜約３０００　ｃｐの粘度を有し、約２０　ｐｐ
   ｍ以下の反応性アルデヒドを含むことを特徴とする特許
   請求の範囲第５項記載の方法。 （９）　　（ａ）　　２２℃において粘性流体であり、
   （ｂ）　　残留架橋剤を実質的に含まない化学的に架橋
   されたアテロペプチドコラーゲンの水性懸濁液からなる
   ことを特徴とする哺乳類の軟組織増強に使用するための
   コラーゲン移植物質。 αＱ　コラーゲ／は２２℃において約７００〜約３００
   ０　ｃｐの粘度を有することを特徴とする特許請求の範
   囲第９項記載の移植物質。 ａυ　コラーゲン中の残留架橋剤の量は、約２０ｐｐｍ
   以下であることを特徴とする特許請求の範囲第９項記載
   の移植物質。 ０２　　架橋剤がグルタルアルデヒドであることを特徴
   とする特許請求の範囲第９項、第１０項又は第１１項記
   載の移植物質。