JPS58201717A - 腫瘍免疫製剤およびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 仝発問は免疫治療および化学治療製造物および癌をもつ
１こ宿主の治療方法に関する。　　　・Ａ、強制流１ａ
気泳動 強制流電気泳動（ｆｏｒｃｅｄ　ｆｌｏｗ　ｅｌｅａｔ
ｒｏｐｈｏｒｅ＋ｓｉｍ）は、体外潅流に維持された、
ヘパリン化された全面からガンマグロブリンに富んだフ
ラクションを電気泳動的に分離する技術である（文献１
〜５）。番号は発明の詳細な説明の橢の最後に示した参
照文献の番号を示す。一般・的な手法は人工腎臓で用い
られる手法に似ており、より特には血液の電気透析に似
ている（文献６）。強制流電気泳動（ＦＦＥ）は、等電
性のプロティン成分を純化する、生化学材料の急速分別
のための大規模な電気泳動法として初めに始められた（
文献５）。強制流電気の機構の原理は、中性のｐＨで、
ガンマグロブリンを除くすべての血漿タンパクが電場に
移動することにある。この原理はすべての血漿プロティ
ンを再生利用し１ガンマグｐゾリンを分離するのに用い
られる。そ　９− れが、電気濾過および水の純化へのその応用（文献７）
、ノ々クチリアファージの電気吸収（文献８）、血液の
電気透析、電気浸透、タン、・ツク溶液の脱塩（文献９
）などの種々Ω動寛膜現象の研究に適した手法であるこ
とが判ってきた。ＦＦＥはオンライン運転用に設計する
ことができ、犬から免疫グロブリンを取り除き、腎臓の
巣柚移植拒絶を防止しあるいは遅らせるのに用いられて
きた（文献１０）。癌をもった宿主（ホスト）の治療に
この装置を使用することは、発明者の知っている範囲で
は、以前に行なわれていない。

ＦＦＥの経過で、ガンマグロブリンに富み、また、同じ
く他の血漿タンパクも含む流出液７（ＥＩＥ）が得られ
る。本発明以前には、この流出液はさらに処理すること
なく捨てられていた。

本発明は、ＦＦＥ装置によるこの流出液の収集、それに
続く処理および癌をもった宿主への再投与に鋭意倉とり
くんだものである。

プロティンＡは、スタフィロコッカス　アウレウス　コ
ワンス１　（ａｔａｐｈｙｌｏａｏａａｕｓ　ａｕｒａ
ｕｓＣｏｗａｎｍ　１　）の細胞壁の構成物であり、多
くの哺乳動物種からの免疫グロブリンのＦｏフラグメン
トと反応して、免疫複合体を形成し、免疫複合体は補体
を固定し、補体成分を消費する（文献１１〜１６）。ヒ
トの胸痛のよいモデルになる自発性の乳腺癌をもった犬
についての以前の研究で、微孔膜濾過システムに固定さ
れ、連続流血漿細胞分離器（ａ　ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ
　ｆｌｏｕ　ｐｌａｍｍｍ　ｃａｌｌｓｓｐａｒａｔｏ
ｒ　）から血漿が出てくるようにオンラインで置かれた
プロティンＡをもっているスタフィロコッカス（ＳｐＡ
）に血漿が循環された（文献１７）。プロティンＡｉも
っているスタフィロコッカスに１血漿容量を循環したあ
とで、腫瘍壊死とそれに続く他覚的な腫瘍退化か観察さ
れた。プロティンＡを欠いているスタフィロコッカスに
血漿を循環したときには、これらの効果はみられなかっ
た（文献１７）。この実験的な犬のシステムで膿瘍の退
化が起こるという尭見は別個の研究で確認された（文献
１８）。

血漿潅流はついで純化され、コロジオン−炭マトリック
スに固定化された純化プロティンＡ（ｐｒｏｔｅｉｎ　
Ａ　ｃｏｌｌｏｄｌｏｎ　ｃｈａｒｃｏａｌｓ　ＰＡＣ
Ｃ）に血漿を潅流したあとで、同様な腫瘍壊死反応が観
察された（文献ｒｓ）。

治療のこの方式は、胸腺癌をもった５人の人間の患者に
適用され、ＰＡＣＣへの潅流のあとまもなく、鋭敏な殺
腫瘍反応が観察され、他覚的な腫瘍退化効果が４人の患
者に観察された（文献２０）。

自発的な胸腺癌をもった犬および人間についての以前の
研究から、固定化された８ｐＡあるいはＰＡＣＣＫ潅流
した血漿で処理したとき、次の結果が得られることが判
った（文献１７．１９２０）。少容量の血漿をＰＡＣＣ
Ｋ潅流した後に、胸壁腫瘍に形態学的変化がみられ、ま
た急速な痛みか始まり、このことはＰＡＣＣの通過の後
で血漿中に生じた因子によって効果が得られたことを示
唆している（文献１７，１９．２０）。

この手法は次のようにして技術的に単純化された。すな
わち、系内（ｏｎ−１１ｎ・）の体外循環システムを取
り除き、代りに静脈切開により予め集めた自己または同
種の少量の分別を系外（ｏｆｆ−１１ｎｅ）でＰＡＣＣ
上を通過せしめ、ついで、患者に直接注射した（文献２
０）。この系外血漿潅流で完全に治療した患者は、系内
の体外潅流システムでみられたと同じような形態学的反
応と腫瘍退化効果と共に急激な痛みを示した（文献２０
）。さらに、犬およびヒト双方の殺腫瘍反応に血清学的
および免疫組織化学的変化が伴なった。すなわち、固相
Ｃ１ｑ結合およびＣ５ａレベルが増加し、臓擾細胞膜の
０３およびＩｇＧの堆積に一連にあるＣ３が減少した（
文献１７．２０．２１　）。

８ｐＡはＩｇＧＯＦａ領域と結合する能力を有し、ｉｎ
　ｖｌｔｒ６で補体活性および他の効果を生じさせるば
かりか、１ｎｖ１マ０で、抗原抗体複合体によってもた
らされる免疫反応に似た効果を生じる。これらのいくつ
かは、溶液中の８ｐＡ−ＩｇＧ１３− 複合体によって活性化された補体を含むようにみえる。

たとえば、１０μｇという少量の投装置で正常なヒトに
皮膚内に８ｐＡを投与すると、腫れが生じ、３０分後に
紅斑反応か検知され、２４〜４８時間後にこの反応社最
強を示す。同様に、１０μｇという少量のａｐＡを皮膚
内でモルモットに与えると、顕著なアルラス様反応がみ
ラレ、３００〜４００１ＪＪｌ　テｔＢ１ｍ１反応がお
こり、これは１２〜２４時間で最強を示す（文献２２）
。

５００〜１０００μｇを心臓内に与えられたモルモット
は致命的なアナフイラキシーシ日ツタを受ける。これは
前もって抗ヒスタミン剤を投与することにより防止する
ことができる。ヘクツコ（Ｈ＠ａｓｋｏ　）ら（文献２
３）は、完全７０インド・アジュバントで５０μＩとい
う少量の８ｐＡで鋭敏にしたモルモットは２４時間で最
大になる遅延反応を示し、これに対して、不完全７レイ
ンドｅアジユノ々ンドあるいは生理的食塩水で同量を与
えたものは６時間で最大になるアルラス反応を示す。ヒ
）およびモルモットと対照的に、１４− ＳＰＡを沈澱させないＩｇＧをもった他の槙は、ｓｐＡ
を単独で与えたとき、過敏性反応を示さなかった。６ダ
までのＳＰＡを単独で注射して与えたウサギおよびｌＯ
〜５００μｇを与えたマウスは、早い始まりも遅延反応
も示さなかった（文献２４．２５）。しかしながら、１
００〜１８０ダのヒトのＩｇＧを静脈内に投与し、つい
で１０〜１５分後に０．０２５〜２１．５１ｎ９の８ｐ
Ａを皮膚内に投与して５〜１０分で、ウサギに直接アル
ラス反応が生じ、また予め形成されたヒトのＩｇＱとＳ
ＰＡとの沈澱物を皮膚内に注射したあと１８〜２４時間
で出血性壊死がみられた（文献２４）ｏウサギＩｇＧと
１！１Ｉ８ＰＡとの溶性複合体は、肝臓および牌臓によ
りウサギの循環からすみやかに除かれた。また４９％ま
でのラベル複合体か　１ｎＶｉｔｒｏで１通過の間に、
生理的塩類溶液を溢流したらウサギの肝臓により取り上
げられた。

ヒト、モルモット、ウサギあるいは豚に加えられたＳｐ
Ａは、種にもよるが、補体活性を弱くし、また、着しく
減少させることが知られている０ ８ＰＡとヒトの正常もしくは骨ｆ４ｊｍ！ＩｇＧまたは
ＦｏフラグメントあるいはＳｐＡで集められた正常のモ
ルモツ）ＩｇＧも同様の効果をもっていた（文献ａｏ、
ａｔ　）。８ｐＡとモルモットのサブクラスＩｇＧ１　
、　ＩｇＧ１双方との複合体は補体を固定し、一方、Ｉ
ｇＧＢを含む抗原抗体複合体ｒｉ固定しなかった（文献
３０．３１　）。全ヒト血清に８９ムを加えると、決定
されなかったＣ７を除いて、補体中９の補体の力価が３
０％（Ｃ８）からｓ　ｓ　％　（Ｃ３）減少し、最適の
抑制はＩｇＧ過剰で起こった。最大活性条件で調製され
た骨髄腫ＩｇＧＩを固定する補体のＦｅ７ラグメントＢ
ｐ＾との予め形成された複合体は、補体全体の力価を６
４％に減少し、個々の補体の力価を４％から９９％（Ｃ
３）Ｋ減少した（文献１４）。ｓｐＡは、また、Ｃ１と
熱集合ＩｇＧあるいはＩｇＧｆ髄腫ｌタンパクとの結合
を抑制するか、Ｃ１とＩｇＧとの結合には効果を有しな
い（文献１４）。補体活性の減少は、５ｐｋ（Ｄ　Ｉｇ
Ｇに対する量に依る。

８ｐＡ血清の投与量が増加すると、補体活性の最大レベ
ルかあり、それは高８９に濃度で減少した（文献１４．
２６．２ｇ）。この効果は、高濃度の８ｐＡがＣ１の結
合を抑制することを意味するものとして説明される。ラ
ンボン（Ｌａｎｇｏｎ＠）らの実験によれば、抗体活性
に対するＳＰＡの効果が明らかとなった。比較的多いも
しくは少ないＳＰＡの投与量で形成されたＩｇＧと８ｐ
Ａとの複合体は真正１ｇＧのように振るまり。実験式（
（ＩｇＧ）ｍａｐ人〕ｎ′ｆ：もつ８ｐＡ−ＩｇＧ　９
Ｍ合体は溶血能の点で、また、全補体あるいは純化ＣＩ
と相互作用する点で、ＩｇＭのように振るまり。蛍光消
光法、光散乱法でウサギＦｅは１価の７ラグメントＢＫ
Ｍし２つの結合部を有することが判り、また、複合体は
ＳｐＡによって架橋された２〜４分子のＦ（ｌフラグメ
ントで形成されていることが判った（文献３５）。さら
に、ＩｇＧとＳｐＡとの複合体形成は、抗体親和性を著
しく高め、これは多点付着（ｍｕｌｔｉｐｏｉｎｔ　ａ
ｔｔａｃｈｍ＠ｎｔ　）によるものと思われる（文献１
３）。

１７− ヒト多形核白血球は、ヒ）ＩｇＧとＳＰＡ　　とで形成
された不溶性複合体をすみやかに摂取し、解体する（文
献３６．３７　）。白血球はＳｐＡの存在下にヒスタミ
ンを放つ（文献３８）。食作用の程度は８ｐＡの量に依
り、形成された沈澱物に最適に依った。ミエロペルオキ
シダーゼの放出当量は複合体の食作用と相閃した。１２
３ＩでラベルしたＩｇＧを用い、取込みが好中球濃度、
複合体の性質、＠養時間および血清因子によることか明
らかにされた（文献３６）。

本発明は、ＰＡＣＣへの血漿滴流の後に、プロティンＡ
　−ＩｇＧ複合体が形成されることを明らかにする。種
々のモル比でＩｇＧあるいは血清とプロティンＡｌｔ−
培養して同種の複合体をｔｉｉｍし、ついで、腫瘍ヲも
っている宿主に静脈内で与えたところ、殺腫瘍反応およ
び腫瘍退化かみられる。これは癌治療のための新規な製
造物を提供するものである。

何年も前から、問題としている抗原−抗体複１８− 合体は、それが天然に存在するものでも人工的に製造し
たものでも、酸性あるいはアルカリ性のいずれかの極度
のｐＨ域において、実質的に完全に分解し、その対応す
る構成成分に分解することが判っている。初めにキャン
プペル（Ｃａｍｐ−ｂ＠１１）らによって示されたよう
に、人工的に作られた牛血清アルブミン−抗生血清アル
ブミンを酸性ｐ■にすると、その構成成分に分解する（
文献３９）。この考え方は、免疫複合体の形で存在する
抗原と抗体の分離に関し免疫学の分野で用いられてきた
。酸性化により抗原−抗体複合体から抗体１分解し、低
ｐｎで限外濾過により抗原を除来したのち抗体を単離す
る方法は、シ日グレン（８ｊｏｇｒ＠ｎ）らによってマ
ウスの腫瘍系で記載されている（文献４０）。より最近
、潜・夜釣な可能性をもって、白血病に関連した抗原に
関した細胞傷害抗体が、”・・急性骨髄性白血病の急性
段階の間、血清中に見い出された。低ｐＨでの限外濾過
のあとで、顕著な補体依存細胞傷害が試験された血清の
殆どに検出された（文献４１）。さらにドルセラ）　（
Ｄｏｒｓ＠ｔｔ）らは（文献４２）、塩析し、ついで、
ｐＨ２，８で培養したあと、水酸化ナトリウムを試料に
ゆっくり添加して中和することにより、卵巣癌の卵巣診
出液から腫瘍特異抗体を単離した。遊離した抗体は間接
免疫蛍光法で試験され、実質的な力価の□増加を示した
。免疫複合体を分解するために溶液をアルカリ化すると
いう考えは最初にカッセット（Ｋａｂａｔ）とマイヤー
（Ｍａｙ＠ｒ）によって記載され（文献４３）、この目
的のために何年かも用いられている。　　　　　　　□ 本発明者の認識の範囲では、強制流電気泳動流出液ある
い゛は腫瘍をもっている血漿の酸性化およびアルカリ性
化あるいはその癌治療への応用について、前には行なわ
れてもおらず、また、報告もされていない。

Ｄ、腫瘍免疫グープリン 一床薬における免疫グロブリンの使用は、ベージング（
ｎｅｈｒｔｎｇ）と北里との抗毒素の使用に始まり、ヒ
Ｆの病気の予防に、動物の抗毒素の臨床使用に進歩した
。受身免疫化のためのヒト免疫グロブリンの使用は、硫
酸アンモニウムを用いて胎盤抽出物からグルプリン分画
を単離したマツカーン（Ｍｅｋｈａｎｎ）らの研究によ
り始まった（文献４５．４６）。１９３６年に、この分
画（はしかの予防ないし緩和に有効なことが判っていた
）は免疫グロブリン（ヒト）とよばれた（文献４７）。

この分野における主要な進歩は、ヒト血漿から免疫グロ
ブリンを分画する冷エタノールの開発によってもたらさ
れ、また、免疫欠損の治療（文献４７）、肝炎（文献５
０．５１）、はしか（文献４８．４９）の治療に効果的
な分画璽、即ち免疫血清グロブリンの発表によってもた
らされた。米国における免疫グロブリンの発展は、主と
して特異免疫グνゾリンからなる。

破傷風免疫グルゾリン、抗り抗体グルゾリンおよび狂犬
病における免、疫グνブリンのような製造物は、臨床薬
における確固たる地位をゆるぎないものとした。これら
の製造物の最も新しいものは肝炎Ｂ免疫グロブリンであ
り、水痘庖疹２１− のような他のものは未だ研究段階にある。現在製剤はガ
ンマグロブリン□の静脈使用にあり、還元、アルキル化
、塩分画、β−プロピオラクトン処理、およびｐｆｌ処
理された製剤を含む（文献５２〜゛５７）。これらの製
剤は効力を示しており、また、すべてが広範囲の副作用
を示す。副作用はｐＨ４での製剤で実質的に減少すると
思われ、ゆっくりとした注入により副作用が避けられる
という示唆もある。ガンマグロブリンの理想的な特性は
、細分がないこと、集合およびＩｇＡがないことならび
に製剤゛の安定にある。それは、筋肉内および静脈内の
いずれの使用にも適しており、肝炎の危険性もない。

特異活性免疫治療への腫瘍特異抗体の使用は、以下の過
程をたどってきた。異種血清の試みはなされてきており
、アレルギー反応が結果的に生じる危険を伴ない、長期
間、異種タンＡりの投与を必要とするにもかかわらず、
初期の試みにおいて、リントストルーム（Ｌｌｎｄｓｔ
ｒｏｍ）は、骨髄白血病細胞によって免疫化したのちの
ウサ２２− ギで作られた血清投与についての反応を確認した（文献
５８）。デカルｄルホ（Ｄａａａｒｖａｌｈａ　）は、
正常組織に対する抗体により腫瘍組織の正常抗原を沈澱
させ、この抗原から分離した抗原に対しての馬中の高度
免疫グロブリンを調製した。１５人の白血病患者のうち
１３人は、免疫血清グロブリンに関し、４週間から２θ
ケ月のレミッションがあった（文献５９）。セクラ（８
０ｋ１ｍ）らは、若干異なった手法で調製した異種免疫
グロブリンを用いて、５人の患者にレミッションを見い
出すことはできなかった（文献６０）。チリン／？ス（
Ｔｓｌｒｉｍｂａｓ）らは５人の慢性リンパ白血病患者
を馬抗リンパ球血清で治療した。末梢細胞数はその最初
の値の約４０％に落ちた（文献６１）。デカルパルホは
、白血病用として調製されたグロブリンを用いて、固状
腫瘍患者における他覚的に明らかな反応を観察した。マ
ーシュ（Ｍａｒｓｈ）らは、柚々の充実性腫瘍を有する
患者にウサギ抗腫瘍血清を投与した（文献６２）。その
結果、死体ザルコーマ細胞領域に抗体が選択的に局在化
していたにもかかわらず、臨床的効果はみられなかった
。骨髄腫免疫化チンパンジーから調製した血清を用いた
最近の試みにおいて、退化は不完全で、また１人の患者
においては致命的な血小板減少症により複雑化したが、
３人の患者のうち２人において、内臓疾患において急性
壊死かみられた（文献６３）。

白血病と同様に、治療的効果に関し同種血清が研究され
た。ヒトリンパ球に対する抗体を含む血清で、リンＡ腫
および白血病を治療する試みがいくつかなされた。ラス
ｏ　−（Ｌａｓｌｏｗ）らによる研究において、正常リ
ンパ球に対して正常対象を免疫化することにより抗リン
、ｅ球血漿が調製された（文献６４）。ついで、ＩｇＧ
がこの血漿から分離され、慢性リンフ９球白血病の３人
の患者に投与された。各々の患者において、注入のあと
で、一時的なリンパ球減少とリンノ臂節の大きさの減少
があった。ドヤラシイ−（Ｄｊａｒａｓａｉ　）は、多
くの個体の顆粒球およびリン／４球の双方に感作されて
いる地中海貧血症の患者からの血清を用いて、急性リン
パ球白血病の４人の患者を治療した０４人の患者の総て
において、末梢白血球数が低下した（文献６５）。

ヘルノセーマン（Ｈ命ｒｂｓｒｍａｎ）は経妊婦からの
細胞傷害抗体をもつ血清を、７人のリンＡ増殖疾患（ｌ
ｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆａｒａｔｌｖ＠ｄｌｓ＋ｏｒｄ
ｓｒ＠）患者に投与した。この患者はリン）１１球が減
少し、また、血小板数は処置前の値の平均４８．８〜２
８．５％であり、これは１日間続いた。５人の患者のう
ち２人は末梢リンパ組織の収縮を示し、４人は熱、悪寒
などの軽微な副作用を示し、２人はガラス膜病を示した
（文献６６）。

（以下余白） ２５− ドナーが目的的に腫瘍細胞に対して免疫化されている同
種血清もまた研究されている。プリンテイングハム（Ｂ
ｒ口ｔｌｎｇｈａｍ　）とチャプリン（Ｃｈａｐｌｉｎ
　）は慢性リンパ球白血病患者からのリンパ球で正常ド
ナーを免疫化した。正常対象を３年後に慢性骨髄腫白血
病の第２の患者からの全血で再免疫化した。ドナー細胞
に活性な抗白血球抗体は正常な被検者中に見られた。ガ
ンマグロブリンはこのドナーから得られ、このドナーの
血漿は、細胞がすでに再免疫化に使われている白血病患
者に投与された。患者の病気に関し、明らかな良い効果
はみられなかった（文献６７）。スキルコビッヒ（５ｋ
ｉｌｋｏｖｉｅｈ　）らは患者を他の患者の白血病細胞
で免疫化した。免疫化後の８〜１５日に、血漿を患者の
組のドナー間で２〜３回交換した。６組の小供が治療さ
れ、３組において完全な、また５組において部分的な、
血液学的しｉツションがみられた。これらの７人がステ
ロイドおよび細胞療法を受け、１人は免疫療法のみで完
全なレミッションを得た２６− （文献６８）。また、レミッション血漿は受身治療のた
めに与えられた。メホルコビツヒらはレミッションの初
期に自己血漿および白血球を集め、これらをレミッショ
ンの後期の患者に投与し九。レミッション期間はこの巧
みな手法によシ延長され九ようにみられた（文献６９）
。

プルチツツ（Ｂｕｒｋｌｔｔａ　）リンパ腫をもってい
る患者の後期レミッション血清を用いるＮｇｎによシ活
性疾患を亀っている患者に退化がみられた（文献７０）
。悪性黒色腫の退化を伴なっている患者からの血清を、
他の患者に投与すると、時おシ退化がひきおこされた。

動物モデルの腫瘍細胞に直接細胞傷害物質を伝える抗体
特異性を開発すべく、研究者たちは種々の試みをしてき
た。クロラムプシル（Ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ　）　
およびダウノマイシン（Ｄａｕｎａｙａｉｎ　）は抗腫
瘍抗体によシ結ヒツケラレ（文献７２　、７　ａ、、）
　、抗体ハ！”Ｎ。

ような放射性同位体でラベルされた（文献７４）。

それらは、また、ジフテリヤのような毒素（文献７５）
および細胞傷害能をもった酵素（文献７６）に結合され
た。抗体と化学療法との間の考えられる共働作用につい
てはゼゲリング（Ｓｅｇ＠ｒｌｉｎｇ　）らによって記
載され、抗体および補体による殺傷に正常に抵抗するそ
ルモット肝腫細胞が、化学療法薬剤による処理ののち、
感作されることが示されている（文献７７）。腫瘍をも
っている動物およびヒトに免疫グ四プリンを投与するこ
とに関する従来技術における横積の検討は明らかでアシ
、これらの実験の結果が結びつけられた。最初に、これ
らの治療が腫瘍を治療するに一貫して効果的でなかった
ことに注目すべきである。患者自身の血清の使用から同
様の疾患をもっている他の患者の血清の使用に至る、あ
るいはさらに異なった種の動物の血清に至る、さまざま
な治療が採用されてきた。

よシ最近、患者のもっている特異腫瘍に、マクス中で生
じた単クローン抗体を用いる治療も試みられてきた。上
記の文献に記載されたように、種々の努力は従来技術に
おいて明らかに一般的な成功をおさめていない。従来技
術によって得られた結果を結びつけたものに反して、本
発明の腫瘍連関免疫グロブリン調剤は、ヒト、動物のい
ずれにしろ、腫瘍をもっている宿主に注入されたとき、
−貫して殺腫瘍活性を生じる。さらに、この物質の原料
に関しては複雑な問題を殆んど生じない。というのは種
のどの組織から得られたいかなる免疫グロブリンも使用
可能であシ、この物質はたとえば、所望の抗体を含む免
疫複合体をもっている宿主をプラズマフエレーゼするこ
とによシ、該ホストから得た血漿のコーン（Ｃｏｈｎ　
）分別から抗体を得ることにより容易に得られた。ここ
に開示された技術は、従来技術によシ調整されたよシず
つと豊富な、一般的に効果的な抗腫瘍剤の材料の調製を
可能にする。

ここに、腫瘍をもっている宿主の血清から得られる新規
な腫瘍免疫グロブリンおよびその製造方法を開示する。

この物質は、癌をもっている患者に投与されて、殺腫瘍
効開を示す。

２９− Ｅ、補体活性 ヒトの補体系は種々の類別の血漿プロティンからなる。

総てのうちの２０以上の補体が、結果として補体活性を
生じる規則的な連続反応に関与する。蓄積された証拠に
よれば、補体系が正常な宿主の防御機構の基本的な要素
として働き、結果として補体活性が一般的に種々の病理
学的状態に関連があることが支持されている（文献７８
．７９．８０）。

古典経路および別経路とよばれる２つの一次モードがア
リ、これによシ補体が活性化される。

これら２つの経路は、一般にその開始の生じるプロセス
により区別される。補体活性のモードにかかわらず、活
性が生じたことを示すのは、中枢のＣ３補体のＣ３ａお
よびＣ３ｂフラグメントへの変換である。

古典経路あるいは別経路の活性の結果、Ｃ３コンペルタ
ーゼが形成される。Ｃ３転化は酵素複合体（０５コンベ
ルターゼの形成を生じ、これはついでＣ５を分裂し、Ｃ
ｆ５ａおよびＣ３ｂ−３〇− ７ラングメントを生成する。０５ｍは続いて溶液中に放
たれ、分子のｃｓｂ部分は、溶解換作用複合体（Ｉｙｔ
ｌｅ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ａｔｔａｃｋ　ｃｏｍｐｌｅ
ｘ　）の形成を始めるに基本的な役割を果たす。

０３ｍおよび０５ｍはアナフィラトキシンとよばれる分
子であシ、急性炎症反応の媒介子として重要な役割を演
する、非常に力強い生体活性物質である（文献８１．８
２）。０５ａとＣ５ｂとの双方はある種のスパスモジェ
ニイック（Ｓｐａｓｍｏｇａｎｉｅ　）特性を分担し、
０３ｍはナノモル（Ｎａｎｏｍｏｌａｒ　）濃度域に効
果的であシ、０５ｍはサブナノモル（Ｓｕｂｎａｎａｍ
ｏｌａｒ　）濃度域に効果的である（文献８３）。両方
の因子が血管透過性を増加することが示され（文献８４
．８５）、また肥胛細胞からヒスタミンを放たせしめる
ことも示されている（文献８６）。０５ａは走化性因子
であシ、このグリコポリペプチドは炎症によ）おこされ
た好中球の主な媒介子であると思われる（文献８７）。

ア、ナフィラトキシンの生物学的活性を制限するに効果
的ないくつかの機構が考えられている。

血清エクソペプチターゼはアナフイラトキシン分子から
基本的なＣ末端アルギニル残基を効果的に取り除き、０
３ｍおよび０５ｍをそれらが循環に放たれた少しの間に
、スパスモジェエイック反応を事実上不可能にする（文
献８８）。

Ａｒｇ　　ｎｏｎ＠ｔｈ＠１ｅｓｓの製造物０５ｍは走
化性を促進する能力を保つ。

０３ｍは７７のアミノ酸残基をもつ単鎖ポリペプチドで
あり、約９，０００の分子量である。ヒト０５ｍアナフ
ィラトキシンは、６４位のアスＡラギン残基に付いた単
一のオリゴサツカライド単位を含む７４のアミノ酸残基
の単鎖グリコペゾチドである。ポリペプチドとオリゴサ
ツカライド部分の結合分子量は１１，０００である（文
献９０．９１　）。

ヒトについての以前の研究で、０５ｍ　（および類似体
）の血清し、ベルが、ゾ四ティンＡコｐジオン活性炭へ
の血漿潅流のすぐあとに上昇した。

０５ｍの出現は、末梢の血管拡張および間質液の出現に
関連がある（文献２０．２１　）。たとえば為Ｃ５ｍが
検出されたとき、肺充血がみられた（文献２１）。さら
に、この患者の急性炎症反応は、多形核白血球を含む皮
膚の腫瘍部位に亘る小−を満たした液の出現と関連があ
った（文献２０）。Ｃ５，が血管浸透性と血管拡張を増
加せしめ、好中球に走化性であることが知られているの
で、Ｃ５１はゾｐティン人潅流の後にみられた生理学的
効果に寄与しており、おそらく、循環する殺腫瘍因子が
腫瘍部位に出入りするのを良好にしていると考えられる
。

カッセル（Ｋａｓｓ＠ｌ）らは、純粋なＣｌ１ａをとく
に白血病マウスに注入すると、顕著な白血病の退化がみ
られることを明らか圧している（文献９２）ｏ自発性白
血病をもったＡＫＲマウスに対して、さまざまな種の正
常血清を注入した。

全範囲の補体成分をもつマウスの系からの血清によって
白血病細胞破壊がおこったが、遺伝学的にＣ５の欠損が
決定されているネス曙科の系の血清では起こらなかった
。モルそット、ウマ、ヒトの血清によっても白血病細胞
の破壊がおこつた。Ｃ５がＡＫＲマウスの白血病細胞を
破壊するメカニズムについては次のように案出される。

（ａ）　　Ｃ５は失なわれた補体リンクを供給し、宿主
により生産された細胞傷害抗体が細胞溶解を起こすこと
を可能にし、白血病患者に対して直接的な効果をもつこ
とができる。

（ｂ）　　Ｃ５は白血病細胞表面以外の部位で、たとえ
ば血液あるいは腎臓中の抗原−抗体複合体と反応し、そ
れ自身白血病細胞破壊を媒介するリンフオカイネス（ｌ
ｙｍｐｈｏｋｌＨ＠ｓ　）の遊離をひきおこす。

（ａ）　　ＣＢの抗白血病効果は、白血病細胞の詩興殺
傷の他のメカニズムを示唆するような以前から存在する
免疫応答とは関係がない。

構　　　成 本発明は、それ自体で、あるい紘他の様相（療法）と組
み合わせて癌の治療に有効な、腫瘍関連免疫グ四プリン
を提供するものである。

本発明の１の態様は、治療されるべき対象から、あるい
は、同じ稙の腫瘍をもっている他の動物（ヒトも含めて
）からの血清中の免疫グルプリンを１ （ａ）　　６ｍ環する免疫グロブリンを、それと複合し
ている循環する可溶性腫瘍抗原から分離し、そして、 （ｂ）　　この遊離した免疫グロブリンを集めて、癌を
もっている宿主に注入したとき増強された殺）重傷活性
を示す物質を生産する ように処理するものである。

この分離工程は、所望の免疫グロブリンを変性すること
なく、循環する免疫複合体を所望の免疫グロブリンと可
溶性腫瘍詩興抗原とに十分に分離しうる分離技術であれ
ば、血清の通常のｐＨからの実質的なｐＨの変動、イオ
ン強度の大きな変化（塩の添加として）、加熱のような
他の数多くの従来の分離法のいずれもが用いられる。

この解ｆｍヲ行なうための１つの好ましい方法は、得ら
れた免疫複合体を、複合体を効果的に解離するに十分な
時間、酸または塩基により解離条件下で処理することで
ある。

技術的に判るように、約３．２〜１．５のｐＨで一般に
この解離が十分に行なわれる。この解離を効果的に行な
うに有望な時間は約２分から８時間という長時間もとり
うり、所要によりさらに長くしてもよい。本発明者は酸
でｐｕを約２．６に下げて約５分間処理し、ついですば
やく約ｐＨ７，４に中和することが、好ましい物質を製
造するのに効果的であることを見い出した。その他の解
離法を用いる場合は、免疫グルプリンの好ましく１） い集合　おこさすために、上記物質を引きつづ△ いて処理することか必要であるが、酸処理を用いる場合
は、集合は処理の間に実質上同時におこる。

本発明の他の態様として、免疫グルプリンとプロティン
人とのさまざまな複合体を開示する。

これらの複合体は、プロティン人と、腫瘍をもっている
宿主あるいは正常なヒトもしくは動物のいずれの免疫グ
ルプリンとの複合体でもよい。

これらの複合体は、ヒトもしくは動物の正常体あるいは
腫瘍をもっている宿主から集めた血清とプロティン＾と
を混合することにより最も簡単に製造することができる
か、これらは、また、プロティンＡあるいはプロティン
Ａをもっているスタフイルコツカスを固相に付着させた
カラムに、血清を通すことによっても調製すること−が
できる。さらに、これらの複合体は、腫瘍をもっている
宿主あるいは正常体の血清から得た純粋ＩｇＧ製剤とプ
ロティン人とを結合することによっても得ることができ
る。この純化免疫グルプリン製剤は、たとえば、コーン
分別、電気泳動、あるいはさらに本明細書に開示された
方法や当業者に知られた他の方法によっても得ることが
できる。　　　　　　　　・ これらのゾルティンへ−免疫グロブリン複合体は、複合
体が腫瘍の治療に効果的であればゾロティ・ン＾と免疫
グロブリンとの広い範囲の効果的な割合で調製すること
ができる。たとえばこれらの範囲は、プロティンＡ／グ
ロブリンが１目０００〜１：２でよい。約１１１００の
比が特に効果的であることが判った。これらの複合体は
、この技術分野においてよく知られているように・沈澱
によって簡便に得ることができる。

有用な沈澱法は、この分野においてよく知られた物質を
用いる沈澱法である。もちろん、免疫グロブリンは、宿
主がもっていたと同じ腫瘍、あるいは動物の同じ種の他
の組織中の同種の腫瘍に、マウスもしくは他の動物中に
生じた単りｐ−ン抗体であってもよい。

本発明の他の態様は、癌をもっている宿主の治療に有用
な製造物である。

製造物１ 殺腫瘍増強活性をもち、正常なあるいは腫瘍をもってい
る宿主からの血漿に由来する腫瘍関連免疫グロブリン製
剤であって、この製剤はＩｇＧおよびＩｇＭを優位に含
み、腫瘍□関連抗体の力価は少なくとも宿主からのＨＩ
Ｅの力価の２倍であり、ｃｉｑ結合はシロ糖密度勾配分
析で７８以上の沈降７ラクシヨンにある。腫瘍関連とい
う用語は、腫瘍に関連した、あるいは同類の抗原と反応
し、また、他の正常な体組織中に存在する免疫グロブリ
ンを意味する。現在、腫瘍関連免疫グロブリンは、たと
えそれが腫瘍のみに完全に特異的でないとしても、腫瘍
の検知あるいは治療に有用であると認識されている。

この腫瘍関連免疫グロブリン製剤は、宿主の血漿の強制
流電気泳動から得られた免疫グロブリンに富んだ流出液
（ＥＩＥ）を用い、本発明の他の箇所で詳細に記載した
ように、分離に十分な時間、正常な血漿のｐｉに比べて
、実質上増加したあるいは減少したｐＨに、ＥＩＥを課
すことにより簡便に得ることができる。このように調製
された物質は、未処理のＥＩＥに比較して、ＩｇＧ＊Ｉ
ｇＭおよび免疫複合体の減少したレベルを示すが、腫瘍
関連抗体の力価が増加し、重い沈降フラクション中のＣ
１ｑ結合が増加する。

製造物２ 殺腫瘍増強活性をもち、正常なあるいは腫瘍をもってい
る宿主からの血漿に由来する腫瘍関連抗体グロブリン製
剤であって、この製剤はＩｇＧと少量のＩｇＡｔ−含み
、実質上ＩｇＭと補体を含まず、腫瘍関連抗体の力価は
コーン・ガンマグロブリン・フラクションの力価の少な
くとも１．５倍であり、ショ糖密度勾配分析の７Ｓ以上
で沈降するフラクション中の増加したＣ１ｑ結合ＩｇＧ
’ｊｉ示し、非常に小さい抗補体活性を示す。腫瘍、と
くに抗体が由来する宿主の腫瘍と組織学的に同様なタイ
プの腫瘍をもつ宿主に投与されると、腫瘍は殺腫瘍反応
を生ゼしめる。

ここで用いられる殺腫瘍反応とは、問題にしている物質
が腫瘍細胞を殺すことを促進したり助けたりすることを
意味する。製造物２を得る１つの方法ハ、コーン＠７ラ
クシ日ネーションや他の変形方法により、ガンマグロブ
リン・７ラクシヨンを得ることである。この物質か得ら
れると、ついで、前記したような酸性化とそれに続くす
みやかな中和の如き分離法によって処理される。未処理
のガンマグロブリン・コーンフラクションに比較して、
ここに記載された腫瘍関連抗体グロブリン製剤は、Ｉｇ
ＧとＩｇＭのレベルを下げ、重い沈降フラクション中の
Ｃ１ｑ結合を増加し、腫瘍関連抗体のレベルを上げ、そ
して抗補体活性を少なくする。

製造物４ 次の特性をもったプロティンＡ−ＩｇＧ＆ｉｌ剤である
。

（ａ）　　ポリアクリルアミドゲル電気泳動によりプロ
ティンＡとＩｇＧのＨ領（重ｆＲ）およびＬ鎖（軽領）
を主として含む。

…）　増加したＣ１ｑ結合を伴ない、ショ糖密度勾配で
７８以上の沈降フラクションに同定される。

（ａ）　　酸性条件下に、より低い分子量のＣ１ｑ結合
フラグメントに解離する。

（ｄ）５％プリエチレングリコールで沈澱する。

（、）　　抗補体活性を示す。

（ｆ）　　Ｆａ依依存性９パ２ ｄ＠ｐ＠ｎｄ＠ｎｔ　ｌｙｍｐｈｏｅｙｔ＠ｒｏｖｅｔ
ｔ＠ｆｏｒｍａｔｔｏｎ）を抑制する。

（ｘ）好中球がミニｐベルオキシターゼ、カテプシンお
よび過酸化物アニオン遊離することを引きおこす。

（ｈ）　　イヌ赤血球の凝集を引きおこすこと。

０）非特異補体（　ｎｏｎ−ｓｐ＊ｃｉｆｉａ　　ｃｏ
ｍｐｌｅｍｅｎｔ）不足を引きおこす。

（ｊ）　　補体に依存しない機構により、プロティンＡ
−コルジオン・炭カラムに潅流したあとの正常および腫
瘍をもっている血清中に生じ、処理中の血清中に存在し
ない。

特異抗体を含む血清がプロティンＡ・コルジオン・活性
炭に潅流されると、潅流後の血清中のプロティンＡ−Ｉ
ｇＧｌ１合体は上記の特性（１）〜（ｊ）を維持し、ま
た、以下の如き顕著な特性を獲得する。

これらの製剤は、ＰＥＧ沈澱７ラクシヨン中で腫瘍関連
抗体活性を有していることが見い出された。プロティン
Ａ　−　ＩｇＧ製剤が、殺腫虜効果を有する濃度で、腫
瘍をもっている宿主に投与されると、殺腫瘍反応および
腫瘍退化がみられた。ＰＥＧ沈澱７ラクシヨン中の特異
抗体は、ヒト胸痛（Ｍｃｐ−７）で免疫された１、また
、ヒト赤血球で免疫されたイヌの血清中に見い出された
。後者の実験は、用いられていた抗原が腫瘍抗原ではな
いにもかかわらず、抗体反応を研究するモデル系として
用いられている。

製造物４ 殺腫瘍活性をもち、腫瘍をもっている宿主の血漿に由来
する腫瘍関連免疫グロブリン製剤であって、主としてＩ
ｇＧおよびＩｇＭを有し、腫瘍関連抗体の力価が少なく
とも宿主からの血清の力価の２倍であり、ショ糖密度勾
配分析の７８以上の沈降フラクシ目ンのＣ１ｑ結合が増
加し、宿主からの血清に比べて、ゼイドゼリュームが増
加し、セファデックスＧ−２００の含有フラクシ冒ンタ
ンノ臂りが増加する。これは、腫瘍をもっている宿主の
血清を用い、この血清を、解離に効果的な時間、正常な
血漿に比べてｐｍを実質的に上げるか下げるかすること
により得ることができる。

未処理の血清に比較して、腫瘍免疫血漿は腫瘍関連抗体
の力価が増加し、重い沈降フックジョン中のＣ１ｑ結合
が増加し、また、含有フラクション中のレベルの減少を
伴ない、ゼイドゼリューム中のＣ−２００１−りｐマド
グラフするタンパクレベルが増加した。

製造物５：チモサン活性血漿 （ａ）　　チモサンを含まず、Ｉｎ　ｖｌｖｏで末梢血
管拡張効果と、製造物による補体活性に一致したスパス
モジエネック（ｉｐａｓｍｏｇ＠ｎｌｅ　）　効果を生
さらに、本発明の目的および態様は、上記の癌の治療に
有用なこれらの新規な製造物を、生成し、分離する方法
にある。これらは、製造物１に関しては、腫瘍をもって
いる宿主の強制流電気泳動からの富化免疫グープリンフ
ラクションからの製造物を集め、ついで、酸性化あるい
はアルカリ化することを含む。製造物２に関しては免疫
ブレプリン製剤は、腫瘍をもっている宿主から得た、コ
ーンフラクシロンしたガンマグロブリンを酸性化して調
製することを含む。

ことによって得られるし、ポリエチレングリコールある
いは硫酸アンモニウムでそれらを沈澱させることによっ
ても得られるし、あるいは、ｆ＊ｆインＡ−コロジオン
・活性炭カラムからの流用液の一すエチレングリコール
沈澱および他の公知の沈澱法によっても得ることができ
る。

以上の目的および特徴に加え、本発明は、殺腫瘍効果を
示す特有な工程の結合も含み、例えば次のようなものが
ある。

摂　　生　１ プロティンＡと共に製造物１を投与し、ついで、Ｌ−ア
スパラギナーゼおよび／またはサイク四ホスファミドや
アドリアマイシンのような細胞傷害薬を投与する。

摂生２ 補体活性血清（製造物６）および酸性化血漿（製造物４
）を２日続けて注入し、４日目ＫＬ−アスパラギナーゼ
またはサイクルホスファミドを注入した。

摂　　生　３ 製造物２と補体活性血清（製造物５）を２日間注入し、
４日目にＬ−アスパラギナーゼおよびサイク四ホスファ
ミドを注入した。

摂生４ 製造物３と４を２日間注入し、ついで、サイクルホスフ
ァミドおよび／またはアドリアマイシンを４日目に注入
した。

摂　　生　５ Ｌ−アスパラギナーゼおよびサイクｐホスファミド′ｆ
、１日目に用い、ついで、製造物５成分と自己由来酸性
化血漿（製造物４）を２日目および３日目に注入する。

摂生６ プｐティンＡＫ加うるに製造物５および異種由来の抗腫
瘍抗血清を注入する。

摂　　生　７ 製造物３と異種由来の抗腫瘍抗血清を注入する。

摂生８ プロティンＡを単独で注入する。

さらに、製造物１，２，３，４および５ならびにプロテ
ィンＡは、単独であるいは例えば上記のように組合せて
、癌をもっている宿主の治療に有用である。

本発明の他の目的、構成、作用、効果は、特許請求の範
囲も含めて明細書の記載から明らかになる。

好ましい態様 本発明は、新規な製造物、その調製および、リンパ腫、
充実腫瘍のような癌の治療方法を含み、これによれば著
しい腫瘍の減少か得られる。

製造物１は、強制流電気泳動を施し、ついで、酸性化、
アルカリ化その他の解離法を施すことにより作られた。

第１図に示すように、強制流電気泳動セル８は、一連の
スペーサ１２（第２図参照）を−緒に支持するプラスチ
ック製のエンドプレート１０を含み、また、血液および
緩衝液の循環手段と直流電源（図示せず）のフネクタ１
４を有する。スペーサ１２によって適当に配設された平
行な膜１６は一連のせまい通路を形成し、これを横切っ
て電場が形成される。

４つの区画が認められる。即ち、エンドプレート１０内
の２つの凹部１Ｂは電極（図示せず）を収納し、外部緩
衝液循環に役立つ。付加された通路は、内部緩衝液の循
環に役立つ。付加された通路は、流れる血液、血漿ある
いは血清を含み、膜あるいはフィルタ１６によりグルプ
リン出口から分離される。用いられる膜１６はセルｐ−
ス膜を再生したビスキング（Ｖｌｓｋｌｎｇ）で、人口
腎臓に用いられるキュープロファン（Ｃｕｐｒｏｐｈａ
ｎ　）と特性で似ており、機械的にはより耐性がある。

フラクシ日ネーシ田ン（分別）には、３．０〜０．４５
μの孔度のミリポアフィルタ−が用いられる。電気泳動
的に、総ての負帯電した血液成分は、液の流れの方向と
反対方向に移送される。分別の質を決定するのは、これ
ら２つのベクシルのノセランスである。除かれたフラク
ションの純度は、主としてグロブリンの濾過速度および
印加電圧に依る。通常、できるだけ速くガンマグロブリ
ンを除くことが好ましく、結果として他の血漿プロティ
ンによる汚染がある。もし電圧が印加されなければ、血
漿プロティンの濾過はおこらない。すべての実験におい
て、４枚の血液スペーサをもったセル部材が用いられ、
流れは平行であった。各々のスペーサは５００ｄの有効
面積を有している。内部緩衝液スペーサは、突出したリ
ブ構造物を用いて射出成形され、平均血漿膜厚が約０６
０３０インチとなるように血漿入口スペーサを圧縮し、
これにより装置の全血漿量が２００〜２１５（ｌｔＪに
制限される。ペクサー（Ｖ・ｘａｒ）ふるいがメｐプリ
ン出口区画の膜破壊を防止する。６〜８ｖ／ｃｎ１の電
圧勾配は０．０２〜０．４　ｈ／ｃｒ／Ｉの電流密度を
生じる。血漿流は１５〜２０１１１ｊ／スペーサに保た
れ、一方、内部血液流は約５倍の大きさである。ガンマ
グロブリンの引き抜き速度は１．５〜２．５　ｍｌ／ス
ペーサの範囲である。

第１図は、装置の操作音説明する、強制流電気泳動セル
の７０−図である。通常のあるいは好ましいタイプの血
漿上パレータ２０はライン２２により空気トラップフィ
ルタ２４を介してセル８に結合される。外部緩衝液は、
ポンプ２６により、外部緩衝液容器２８からセル８にポ
ンプ移送され、結合ラインに矢印で示すように再び戻さ
れる。内部緩衝液は、ポンプ３０により、内部緩衝液容
器３２からセル８にポンプ移送され、結合ライン上に矢
印で示したように戻される。外部緩衝液オーツ々−フロ
ーライン３４は、オーバーフａ＝ｌ、た内部循環液を内
部循環液容器３２に戻すのに供される。

富化ＥＩＥはセル８からライン３６で集められ、ポンプ
４０で容器３８にポンプ移送される。

血漿はセル８からライン４２中をポンプ４４により戻さ
れ、血漿プレヒータ４６により予備加熱される。

自発性価をもっているイヌにおけるこの装置の使用は次
の通りである。即ち、動脈および静脈は、カテーテルあ
るいは針でカニユーレされ、全血が連続流血漿−細胞セ
パレータにポンプ移送される。ここで、全血は、血漿−
細胞セパレータ２０により形態要素と血漿とに分割され
る。

ついで、血漿はＦＦＥセル８に５〜１５　酩／ｍの速度
でポンプ移送される。ＦＦＥセル８で、上記したように
血漿に電流がかけられ、ＥＩＥが容器３８４Ｃ集められ
る。ＦＦＥセル８から出てくる血漿は、ついで形態要素
（図示せず）と再合同され、宿主に戻される。通常の処
理において、約１計算（ｃａｌｏｕｌａｔｅｄ）血液蓋
が１０〜１５　ｍｅ／ｖｍの流速でこのユニットを通り
、イヌの約４０ηｌｂのＥＩＥが集められた。

ＦＦＥから集められたＥＩＥは、ついで、以下の生化学
的手法が施された。即ち、ＥＩＥのｐＨがｌ０Ｎ−１（
ＣＩで３．０に滴定され、５分間維持され、ついで、１
ＯＮ７ＮａＯＨを滴下して速やかに７．４に中和した。

出現した沈澱物は、４Ｃで３分間、１ｆＳＯＯｘｇで遠
心分離して除いた。ついで、ＥＩＥを０．４５〜５μの
ブリート膜（ｐｌ＠ａｔ＠ｄ　ｍ＠ｍｂｒａｎｅ）フィ
ルターを通し、ついで、２ｍｌ／ｖ＊の流速で静脈から
宿主に戻した。

酸および中和による処理のあとで、イヌ自体の腫瘍を基
質として用いる間接免疫蛍光法で測定して、腫瘍関連抗
体が著しい増加を示した。

この処置の結果は第１Ａ表に示した。酸性化のあとでの
生化学的特性は、酸性化しない試料に比べて、レーザー
比濁分析法（文献９３）で測定したＩｇＧＳＩｇＭおよ
び免疫複合体のレベルの減少として示された（第１Ｂ表
）。さらに、未処理および酸性化の試料をショ糖密度勾
配分別し、Ｃ１ｑに関し種々のフラクションを分析した
ところ、７Ｓをこえる沈降フラクションで、未処理ＥＩ
Ｅに比べて、酸性化試料のＣ１ｑレベルの増加がみられ
た％ｉ。

（以下余白） 第１Ａ表 １　　　　　リンパ腫　　　　２０，０．００　　　　
　１０．０００２　　　　リンパ腫　　　　１０，００
０　　　　　１３，０００３　　　　　リンパ腫　　　
　２０，０００　　　　　１２，０００＊）数値は、イ
ヌ自体の腫瘍基質に対してポジティブ蛍光を与えた終点
希釈を示す。基質としてのイヌ血管内皮層ザクｐ−÷に
対する未処理および処理血清の反応は１：１０〜１：５
０の範囲であった。上記反応は、蛍光ラベルヤギ抗−イ
ヌＩｇＧの添加前に、前もって非結合ヤギ抗イヌＩｇＧ
の保温によって１：５０に減少した。

（以下余白） ５３− 第１Ｂ表 １　６４．０　３０．２　７３．６　７１．９　１０．
８　１．８（＊）免疫反応体はレーザー比濁法により測
定した。

試験したすべてのイヌにおいて、強制流電気泳動装置１
を通して単血漿容量の通過、および約４００−の流出液
を集めたあと４時間以内に、腫瘍は暖かく、また、浮腫
になった。１２時間あとで、酸性化Ｅ　Ｉ　Ｅ　（ｔ　
ｏ　μｇ／ｋＩＰ）とプＥ１７　インＡ（８μｇ／ｌｂ
）が注入された。４時間以内に、リンパ節はより一層過
湿症になり、また浮腫になった０４８時間後に動物にＬ
−アスノぐラギナ−ゼおよびサイク四ホス７アミドが与
えられた。

続く日々に亘ってみられた腫瘍退化は、潅流前のレベル
を低下して、６６〜９５％のレベルに到達し、平均４５
日で、１５日から５ケ月間続いた。ＦＦＥおよび酸性化
ＥＩＥとプルティンＡとを投与して治療したイヌは２０
〜３５％の退化を示し、平均６〜８日間続いた。Ｌ−ア
スパラギナーゼとサイクルホスファミドだけを受けた動
物は１８〜２５％の退化を示し、それは８〜１０日間し
か続かなかった。ゾルティンＡだけを受けたイヌは顕著
な退化を示さなかった。

それゆえ、殺腫瘍応答は、免疫治療プログラムあるいの
化学治療プルグラム単独の場合に比べ、全摂生を受けた
動物の方が実質上大きかった。

結果は第２表に示した。

総ての犬において、電気泳動処理のすぐあと１０３〜１
０７Ｃの温度の上昇がみられ、それは潅流ののち通常６
時間以内に緩和された。４匹の犬の熱のあった間に取ら
れた血液の培養の結果、バクテリアの成長はみられなか
った。

ＦＦＥ、ＥＩＥ（酸性化）および化学治療後の治療のの
ち種々の期間で、腫瘍ノ９イオゾシーが生理学的活性か
ら得られる。ＦＦＥによる処理後、リンパ節が浮腫であ
ったとき、犬から取られたノ々イオゾシンで、核凝集、
細胞質の肉芽化、および細胞間隙が広くなることがみら
れた。

このとき、炎症細胞はこの試料で著しいものではなかっ
た。酸性化したＥＩＦｉとプルティンＡの投与のあとに
得られた試料は、細胞形質の球状化細胞形質金物の超光
輝化、細胞間隙の不鮮明化を伴なった染色質および核の
凝集に例示されるような顕著な腫瘍の変化がみられた。

細胞における致死のあるいは致死量以下の変化を示す発
見もあった。最小の関連炎症細胞の湿潤があった。治療
の開始後約７日あとに得られた試料で、腫瘍細胞の幻影
および好中球による病巣の湿潤を伴ない悪性リンパ節に
進展した壊死がみられた。

腫瘍関連抗体Ｃ’３および処理後の免疫グルゾリンレベ
ル 処理前は、腫瘍関連抗体は、癌をもっている宿主の血清
中に、検出されないか、まれに検出されるだけである。

強制流電気泳動による処理のあと１２時間以内に、免疫
蛍光法で測定して腫瘍関連抗体の増加がみられた。動物
が腫瘍関連抗体を含むＥｘＥｔ−嗅身的に与えられてい
たので、これはさらに評価されなかった。試験されたす
べてのイヌにおいて、強制流電気泳動処理後１２時間で
、血清Ｃ３およびＩｇＧレベルか減少したが、その後４
８時間で処理前のレベル以上にはね上がった。免疫グロ
ブリンＭレベルは大きく変化し・なかった。

４日の摂生の前後で、白血球および血小板数、ヘマトク
リットに著しい変化はみられなかった。

さらに、処理後、ナＦリウム、カリウム、塩素、カルシ
ウム、リン、８０ＰＴ、８ＧＯＴ、ＢＵＮあるいはクレ
アニチンの血清中での大きな変化はみられなかった。

好ましい態様：製造物２ 腫瘍免疫グロブリン製剤 製造物２（腫瘍免疫グロブリン製剤） 静脈からの使用に適し、腫瘍をもっている宿主の血清を
用い、Ｃｏｈｎら（文献９４）、Ｋｉｇｔｌｅｒ。

Ｎｉｔｓｅｈｍａｎｎ　（文献９５）によりすでに開示
された方法の修正法を適用することにより調製される。

方法の概略は第３表に図太的に示した。血漿分別法は以
下のようになされる。

第３表 緩衝液 （Ａ）ｐＨ１４，０緩衝液ｒ　０．０５　Ｍ−ＮａｌＨ
ＰＯ４、１容置：０．０５Ｍ−酢酸；６容量 （Ｂ）ｐＨ１４，８緩衝液：　０．０５　Ｍ　−Ｎａｌ
ＨＰＯ，、１容量：０．０５Ｍ−酢酸、１．６１５容量
（Ｃ）、ｐｆｌ６．２緩衝液：　Ｏ，Ｏ！！Ｍ−Ｎａｌ
ＨＰＯ，，１容量？０．０５Ｍ−酢酸、０．８３３容量
Ｑ））９１１５．１緩衝液：　０．０５　Ｍ　−Ｎａｌ
ＨＰＯ４ｊ　１容量：ｏ、ｏ５Ｍ−酢酸１．２容量 血漿源 血漿は、ヒトの患者の末梢全血から由来した。

酸−クエン酸−デキストｐ−ス中に集められた約１５０
０ｍＪｏ血漿は誘導され、２６００ｇ、２０分間、ＯＣ
で遠心分離して浄化された。

沈＃１の調製 浄化した血漿のｐＨを決定し、必要によりＯ，ＳＭ−酢
酸ナトリウムｐＨ４，０緩衝液を添加して、ｐＨ７，２
に調整した。一方、温度はＯＣに維持した０ ９５％エタノールの４６１＋１ｊｔ−浄化した血漿にゆ
っくり加え、最終的なエタノール濃度を８％とじた。こ
の操作の間、懸濁液を冷やしてｏｃとした。主とじで・
フィゾリノゲンからなる目視しつる沈澱物を２６００　
ｇ、　２０分、θ〜４ｃで遠心分離した。除かれたペー
ストは沈澱１とよばれた。

沈澱２の調製 沈＃１の上澄みの２　ｍｌの了りコートを０．８Ｍ−酢
酸ナトリウムｐＨ４，０でｐＨＳ、　ａに滴定し、上澄
み懸濁液をｐｉ　Ｉｓ、　８にするに必要な酢酸ナトリ
ウム緩衝液の量を決定した。

約７２ｄの冷９５％エタノールをｐｆｌ　５．８の懸濁
液に加え、最終的に濃度を１９弧とした。この添加の間
開濁液を一５Ｃに冷却した。エタノールの添加終了後３
０分間懸濁液を静かに攪拌し、溶液のｐｉｔを５．８に
維持した。懸濁液は、ついで、６０００ｘｇ、２５分間
、ＯＣで遠心分離したＯ 遠心分離機の一−ルからミーストを取り出し、重量を計
った。このペースＦは沈澱２と名づけられた。

上澄み３の調製 沈澱−ペーストを、沈澱１グラム当たり１０ｄの冷水で
再懸濁した。約２８％の水は細かい氷結１の形であった
。この沈澱は全く均一になった。ｌ容量の０．０６　Ｍ
−ＮａｌＨＰＯ４と６容量の０、　ＯＩｓ　Ｍ−酢酸と
からなるｐＨ４，０の緩衝液（緩衝液Ａ）を加えて、上
記懸゛濁液のｐｎを４．８に調整した。ついで、１容量
の０．０５　Ｍ−酢酸を含むｐＨ４，＄の緩衝液（緩衝
液Ｂ）を加えてイオン強度を増加した。この緩衝液の必
要量は、１ｇの沈澱２当たり４．８５ｍＡ！カら、前Ｋ
　ｐＨＩＮ　ｌ！＋７）　７ｅめに添加したｐＨ４，０
緩衝液Ａの容置を引いたものである。

分別ツタめ、ｌ容量の０．０５　Ｍ−ＮａｌＨＰＯ４と
０．８３３容量６０．０５　Ｍ−酢酸とからなるｐＨ６
，３の緩衝液（緩衝液Ｃ）を加え、懸濁液のｐＨを５．
１に上げた。ついで、１容置の０．０５　Ｍ　−Ｎ　＊
＠ＨＰ　０４と１．２５容量のＯ，ＯＩｓ　Ｍ−酢酸と
からなるｐＨＩｓ、　１の緩衝液（緩衝液Ｄ）を加え、
イオン強度を再調整した。必要な緩衝液りの量は、１ｇ
の沈澱２当たり４．９−から％　ｐＨ調整に用いた緩衝
液Ｃの容量を引いたものである。最後に、懸濁液を冷水
を用いて、沈＃２のダラム当たり１９、５１１１の総容
量となるように希釈した。ついで、ａｍ液に９５％冷エ
タノールを加え、エタメール濃度を１２％とした。懸濁
液をＯＣで３０分間保持し、１４，００（ｌｃｇ、２５
分間、ｏｃで遠心分離した。沈澱を除き、上澄みを取り
、上澄み３と名づけた。

ガンマグロブリン沈澱の調製 比塩導電計を用い、濃ＮａＣ１で上澄み３のイオン強度
を増加した。

上澄み３のアリコー）２ｍをｌＮ−ＮａＯＨで７．２に
滴定し、全体のｍｆｍ液のｐｎを調整するに必要なｌＮ
−ＮａＯＨ量を決定した。ついで、ｐＨが７．２となる
ような適当型でＮａＯＨを懸濁液に加えた。

ついで、９５％のエタノールを加え、エタノール濃度を
２５％とした。この添加の間、懸濁液は−７０に冷却し
た。ｇＭ液を一７ｃで３０分間静かに攪拌し、ついで、
１５０００ｘｇ、３０分間、−７Ｇで遠心分離し声、。

ついで、懸濁液を２７Ｃで５分間保温したあと、０．ｌ
Ｎ−ＮａＯＨでｐＨ７，ａに中和した。製剤はついで２
ミクロ、ンのフィルターを通し、１．■、で１分間当た
り５ωで投与した。

腫瘍免疫グロブリンの物理・化学特性 レーザー比濁計（文献９３）で分析した腫瘍免疫グロブ
リン（酸性化コーン７ラクシヨン）は、ＩｇＧと小量の
ＩｇＡを含み、Ｉ　ｇＭ　ｅ　Ｃ３は含まなかった。酸
性化しないコーンフラクションと比較して、ＩｇＧとＩ
ｇＡに減少があった（第４表）。

第　　４　　表 前　　　　後　　　　前　　　後　　前　後　　前　後
−ミー■−――■１〜−一一一――−■−１−ミー一閤
−−−−−−−−１−一＋−−――−胸癌胸痛０３２　
　９６０　２５．１　１９　　０　０　　０　０正常　
５９０４　３１９２　４１．０　３２．８　０　０　０
　０＊）前に述べた（文献９６）レーザー比濁計により
検討した。

腫瘍関連抗体は、胸腺癌の２人のヒトから得た腫瘍免疫
グロブリンの２つのノ饗ツチのそれぞれについて分析し
た。胸痛基質に対し間接免疫蛍光法を用い、終点蛍光の
力価はテストした両方のサンゾルで１ニア０，０００ｅ
超えた。同じパッチの非酸性化サンプルは１：Ｉ５０，
０００以下の終点力価を示した。

腫瘍免疫グロブリンは、非酸性化コーンフラクションと
比較して、シロ糖密度勾配で得たフラクションで、放射
線免疫検定法により、ＭＣＦ−７胸腺癌の腫瘍特異結合
についてテストされた。腫瘍免疫グロブリンは、７Ｓマ
ーカーをこえたフラクションで腫瘍特異結合活畔の増加
を示した。同様に、Ｃ１ｑ結合は非酸性化フラクション
に比べて、７８より大きなフラクシヨンで増加した。（
第３図）。それ故、腫瘍関連結合およびＣ１ｑ結合の双
方が腫瘍免疫グロブリンの酸、性化のあと、重い（＞７
８）沈降フラクションに移動する。ローマ−（Ｒｏｍ＠
ｒ）らの方法（文献９６）Ｋよってテストされた腫瘍免
疫グロブリンの抗補体活性は他の静脈用のガンマグロブ
リン製剤に比較で市ヤ範囲で、非酸性化フラクションで
低かった（第５表）。

第５表 １０　　　　３　　７５　　２　　１００．５　　　１
０　　８１＄　　　４　　３５０．２５　　１２　　　
　　１４　　５３８ ０−マーの方法（文献９６）によって研究がなされた。

血清を含まないポジティブ対照は１００チの溶血を生じ
させた。果合ＩｇＧは１以下の抗補体活性を生ぜせしめ
た。

自己由来の腫瘍をもっている血清から調製した腫瘍免疫
グロブリンの機能能力は、正常イヌ血清で活性化したチ
モサンと一緒に４００〜５　ｏ　Ｏｍｆで腫瘍をもって
いる宿主に潅流して証明された（摂生３．第９表）。２
匹の犬に注入したすぐあとで（１匹は自発性胸腺ｆｌＩ
Ｊヲもち、１匹は黒腫８シっている）、腫！の遺瘍部の
肉６８− 視できる壊死および充血によって特徴づけられる鹿瘍部
の急性壊死がみられた。顕微鏡的には腫瘍部位は、病巣
部の好中球湿潤を伴なって、腫瘍の広範曲の壊死がみら
れた。

プロティンＡ　−ＩｇＧ複合体（製造物３）は、正常な
又は癌をもっている宿主からの５〜５０−の血漿を、コ
ロジオン働炭に固定化したスタフィロコッカス・アウレ
ウス・コワンスｌからのプロティン基（固定化プロティ
ンＡ％ＬＯｔｆｉｆ含む）に潅流することにより調製す
ることができる。または５％／リエチレングリコールの
添加や、他の高分子量タンミクロの沈澱法により、流出
液から単離できる。得られた沈澱物は、通常の塩類溶液
に再懸濁し、リン酸緩衝塩類溶液に対して透析し、その
あとで腫瘍をもっている宿主に１．Ｖ、で投与された。

この方法は第６表に示した。

第６表 プロティンＡ−ＩｇＧ　複合体を単離するための？リエ
テレングリコール沈澱法 （１）　　プロティン基・コロジオン・炭カラムから流
出する血清才たは血漿の３１１／とｌ　ｍｌの２０％Ｐ
ＥＧ（ＰＥＧ６０００．　　フィッシャー・サイエンテ
イフイク・カン／ｅ　ニー　（Ｆｉｓｈｅｒ　８ｃｉｅ
ｎｔｉｆｉｃＣｏ、　）　　、　Ｆａｉｒｔａｖｎ　、
　ＮＪ　〕とを混合し、２５℃で１時間保温した。

Ｑり　　８０００Ｘｆ　　、４℃で遠心分離してＰＥＧ
沈澱を得、５−ＰＥＧで２回洗い、　ＰＥ８に溶かし、
４℃でＰＥ８に対して透析した。

プロティンＡ−ＩｇＧ複合体は、プロティン基・コロジ
オン・活性炭カラムを用いることなく、プロティンＡ（
１０〜１０００声ｆ）と正常な血清もしくは血漿（１〜
３耐〕またはＩｇＧ（１〜１０吋）とを３０分間２７℃
で保温することにより調製でき、さらに追加の（５〜１
０１）通常の塩類溶液を加え、ついでこの混合物を１．
Ｖ。

で腫瘍をもっている宿主に注入する。次の第７表はプロ
ティンＡ−ＩｇＧ複合体を調製する他の方法を示す。

第７表 （１）　　プロティンＡ（１０〜１０００／７ｆ　）を
１〜１０ｍｙのＩｇＧと共にＰＨ８中で３０分間保温す
る。

（２）２７℃で５チ濃度となるようにＰＢＧを加え、こ
の混合物％５０００Ｘｆ　、２１０分間、４℃で遠心分
離する。

（３）沈澱物を２０−の塩類溶液再懸濁し、　ＰＥ８に
対して２時間透析し、ＰＢＧを除去する。

（４）　　溶液を５〜１０１１４の容積になるようにし
て、静脈内で注入する。

プロティン人−コロジオンー炭（ｐ人ＯＣ）カラムまた
は固定化スタフィロコッカス・アウレウス・コワンスＩ
　（５ｐＡ）カラム（８ＡＯ）から流出し自発性胸腺癌
をもっているイヌの血清をミクロポーラス膜フイルタ−
（１２ミクロン）中の固定化８ｐＡあるいはプロティン
Ａ−コロジオン−活性炭に潅流した。以下のことが判っ
た。

７１− 結果 ８ＡＯ才たはＰＡＯＯ潅流後の血清中の０１ｑ５匹の正
常なイヌと６匹の胸腺癌をもったイヌからの血漿をＳＡ
Ｃに潅流し、潅流前後のサンプルについて、Ｏ１ｑ重合
油性のレベルを記載したような放射線免疫検定法により
検定した。処置前の値に対して一貫したＯＩＱ結合の増
加がみられた（第８表）。Ｏ１ｑ結合の最初の減少は、
希釈効果および／抜たは、プロティンＡ−コロジオン−
活性炭（ＰＡＣＯ）によるＩｇＧ結合免疫複合体の除去
を示すものと思われる。一般的に潅流前の腫瘍をもって
いる血清中のＯ１ｑ結合レベルは潅流前の正常な血清よ
りも高い。そして、腫瘍をもっている血清の正味の増加
は（平均増加：８８２±３７８８．Ｄ、　ｎｔ　Ａ（３
Ｇ　尚ｉｉ　／　ＩＬｌ）、正常血清（平均増力１ド１
１４±１８６８．Ｄ、　ｎｔＡＯＧｉ量）よりも大きい
。Ｏ１ｑ重合油性の増加が観察されたのに対し、ＳＡＣ
潅流血清で、潅流後のＩｇＭレベルのように、イヌＩｇ
Ｇｆｉ度は潅流７２− 前レベル以下に均一に減少した（第８表）第８表 １　　　４０　　　８　　　　４８２ ２　　　１６　　　４　　　　２２ ３　　　１６　　　４　　　　６２ ４　　　１９　　　４　　　　−５ ５　　　１４　　　４　　　　　６ 平均１１４±１８６ ２　　　８７　　　６　　　　９７８ ３　　　３７　　　８　　　　　４ ４　　　４１　　　４　　　　１８２ ５　　　４８　　　４　　　　１０３ ６　　　７０　　　４　　　　２４８ 平均３８２±３７８ ＊）潅流値は流出液で集められたフラクションの数をか
け、これらのフラクションの累積ＡＯＧ　重量からひい
た。１００−の正常または腫瘍をもっている血清を８Ａ
ＧｔＣ潅流し、ＩＩＩｊのフラクションを集め、０１ｑ
活性をテストした。

ＳＡＣ上のプロティンＡがＯ１ｑ重合管増加が生じるに
重要であるが確認するために正常なイヌおよび胸腺癌を
もっているイヌからの血清を、８ＡＯあるいはプロティ
ンＡ％欠いているスタフィロコッカス　アウレウス　ス
トレインウッド４　６（８ｔａｐｈｙｔｏｃｏｃｃｕｉ
　　　Ａｕｒｅｕｓ　　　８ｔｒａＩｎＷｏｏｄ　　　
４６）に上記した方法で潅流し、流出液についてＯ１ｑ
重合管テストした。ａＡＯカラムから流出したサンンル
は潅流前のＯ１ｑ結合レベルをこえる増加を示し、一方
ＳＡＷカラムからの流出サンプルは処理前レベルから最
小の変化しか示さなかった。

上記の研究に関し、０１４の最初の減少は希釈効果およ
び８ＡＯあるいは８ＡＷによる免疫複合体の除去を反映
するものである。

正常なイヌおよび胸腺癌をもっているイヌからの血清を
上記した方法でＰＡＣＯに潅流した。

７つの腫瘍をもっている血清の中の７つ、７つの正常血
清中の５つで流出血清中のＯ１ｑ重合管増加がみられた
（第９表）。ＳＡＣへの潅流と対称的に、ＰｋＣＣに潅
流した血清中のＩｇＧ、ＩｇＡレベルに著しい変化はみ
られなかった（第９表）第９表 ＊）１０−の正常あるいはｍｓをもっている血７５− 清をＰｋＣ（３に通し、処理前後の固相ｏｔｑ結合を分
析した。Ｏｌｑ結合は抗イヌＩｇＧ結合のナノグラムと
して表現した。数値は２倍才たは３倍の試料の平均容積
を表わす。カッコ内の数値は２倍または３倍した試料か
らの値の範曲を示す。

ＰＡＯ（！への潅流後に血清中に生じた複合体の特性プ
ロティンＡがイヌＩｇＭ詔よびＩｇＡに結合することが
判っているので、潅流後の複合体中のこれらの構成要素
、さらにＩｇＧ　、　０３についてテストした。この目
的のために、潅流前後の血清１０１ｑ被嶺管で保温し、
複合体を結合した。対照として、コロジオン−活性炭に
固定したプロティン人ではなく、イヌアルゾミンに潅流
した血清を同様にＯｌｑ　＠’覆管で保温した。管を洗
いイヌＩｇＧ　、　ＩｇＭ　、　ＩｇＡ　、　Ｃ！＋１
に特異的な１１１１　Ｆ（ａｂ’）＊フラグメントを加
え、結合した放射能を測定した。抗１ｇＧと抗ＩｇＭの
潅流後の結合レベルは潅流前の値に対して約２０−増加
した。

抗ＩｇＡ、抗Ｃ３結合には着しい変化はみられなか７６
− った。結果は腫瘍をもっている血清と正常血清に似てお
り、さらに腫瘍をもっている、あるいは正常なイヌから
の潅流後血漿に検知された抗ＩｇＧ結合の増加に似てい
た。逆に、イヌアルジミンに潅流した血清中のＩｇＧ結
合活性は１５俤減少し、他の構成要素の結合は実質上変
わらなかった。

正常なまたは腫瘍をもっている血清を同様にＰＡＯＯに
通し、ｏｔｑ被覆管中で保温し、ヒトのＩｇＧ　、　Ｉ
ｇＡ　、ＣＩに特異的な重”ＩＰ（ａｈ’）Ｈの結合を
テストした。結果として、抗ＩｇＧ、ＩｇＭおよびＣ３
の増加が示され、ＩｇＡ結合は増加しなかった。

ＰＡ（３０潅流後の血清中に発生したＯ１ｑ結合ＩｇＧ
の沈篩物性を調べるため、正常な又は腫瘍をもっている
血清からの潅流前後の液を、ショ糖密度勾配中で超遠心
し、Ｏ１ｑ結合ＩｇＧに関しフラクションを評価した。

両方の血漿とも、潅流前の血清からの対応するフラクシ
ョンに比べて７８より大きいフラクションでＯ１ｑ結合
ＩｇＧレベルの増加を示した。犬ＩｇＧのガンマ鎖に４
ＩＡ的なＦ　（ａ　ｂ’　）１　　フラグメントを用い
て結合ＩｇＧを検出したとき、これらの勾配フラクショ
ンの０１ｑ結合に同様な増加がみられた。

潅流後のイヌ血清中の高分子量ＩｇＧ複合体を、Ｇ−２
００カラムクロマトグラフイーでの分別と、ウサギ抗イ
ヌＩｇＧに特異的なガンマ鎖を含む免疫吸着剤へのボイ
ド・ボリューム・ピーク・フラクションの通過により単
離した。保持されたタンＡりは溶離され、中和され、濃
縮され、そしてＰＡＧＥによる分析の前にもどされた。

クーマシーブルーで染色されたＰＡＧＥプロフィルによ
って、イヌＩｇＧのガンマ鎖およびＬ鎖と共に移動する
顕著なｉｏ、ｏｏｏおよび２４００Ｇの分子量の４リペ
プチドか示される。イヌＩｇＭのミュー免疫グロブリン
鎖と共に移動する、軽く染色された７４ｏｏｏ分子量の
ポリペプチドも観察され、複合単離物中にイヌＩｇＭが
存在する可能性を示す。

１０ｕｌＰの単離高分子ＩｇＧを２重拡散法で試験した
ところ、ヤギ抗−全イヌ血清で単一沈澱／１ンドを示し
、ウサギ抗−イヌＩｇＧに特異的なガンマ鎖と同定され
るラインを形成した。これらの研究は、イヌＩｇＧおよ
びＩｇＱ−含む高分子量種は、血清のＰＡＯＯ潅流中に
形成されることを示している。

血漿および血漿構成成分によるＰＡＯＯ高分子量のＯ１
ｑ結合ＩｇＧはＰＡＯＯへの血清の潅流の間に形成され
たけれども、溶離物のＰＡＧｌｉｆ分析で、プロティン
Ａとして明確に特徴づけられるバンドを明らかにできな
かった。□というのはプロティン人はイヌガンマグロブ
リンと殆んど一致した場所に移動するからである。した
がって、潅流の間の血清からのプロティン人の遊離につ
いては、標識としてＰＡＣＣ中に追跡ラベルした１１１
１プロティン人を用いることにより研究した。３つの異
なった種からのＩｇＧ、アルブミン溶液、血清の潅流に
よって１１１１　　プロティンＡがＰＡ（３０から遊離
されることか結果として７９− 得られた。さらに、溶離はプロティン人に特異的でない
。例数なら、同じ液がプロティン人と同様な方法でコロ
ジオン活性炭に固定化されたｔｍｓｌイヌアルゾミンを
遊離した。ＰＡＯＯから遊離された放射能量をもとにし
て、０．００２５〜０．００ｓｍｆ（０，２！Ｓ　〜０
．５　ｓ　）のプロティンＡが１０１１１７の血清の潅
流ののちで、１？ＦＩＦの固定化プロティンＡから脱着
されたと見積もられた。

プロティンＡはＰＡＣＣに潅流された血清中でさらに次
のようにして確認された。即ち、ＰＡＯＯ才たは８ＡＯ
に潅流した血清の潅流後ＰＥＧ沈澱物をｐＨ＆０．Ｇ−
１００で分別した。金談れたフラクション（１００，０
００Ｍ、Ｗ、　）を中和し、濃縮し、ＰＡＧＥで分析し
た。これらの試料のクーマシーブルー染色プロフィルで
２〜４の顕著なポリペプチド／マントが明らかとなり、
このうちの１つは純粋プロティン人と共に移動する。

さらに研究において、イヌＩｇＧを富むイヌ血清を、標
識として０１１でラベルされたプロティンＡを含むＰＡ
ＯＯに潅流した。潅流後の血清を８０− ５チのＰＢＧで処理し　１１１１プロティンＡ−ＩｇＧ
複合体を沈澱させＰＡＧＢで分析した。プロティンＡｉ
＠誠に対応する放射能ピークが観察された。

低分子量の放射性プロティンＡ′！ｔｉがみられ、これ
は１０１プロテインＡのフラグメントを示すと思われる
。

さらに行なった研究において、ＰＡＯＯに潅流した正常
イヌ血清％ＰＩ！ＩＱで処理してプロティンＡ−ＩｇＧ
複合体を沈澱させた。可溶化した沈澱を、解離条件下で
セファデックスＧ−１００で分別し、含有フラクション
を（ＮＨ４）ｔ８０ａで沈澱させた。貴び沈澱を溶解化
し、これをヒ）ＩｇＧで結合されたセファデックス４Ｂ
に通した。結合物を溶離し、濃縮した。溶離液中にプロ
ティン人か存在することは二重拡散法検討により示唆さ
れた。この方法は正常ヒト血清の沈降素ノ９ンドを示し
、プロティンＡと結合しない正常ニワトリ血清について
は示さなかった。

潅流後の血清の高分子量ショ糖密度フラクション中のプ
ロティン人を同定するために、以下の研究がなされた。

正常イヌ血清をＰＡＯＯに通し、溶出したｕａＩプロテ
ィンＡを含む潅流後血漿をショ糖密度勾配で分別した。

１ｆｆｉ藝１プロティン人は７８〜１９８の広い範囲の
フラクションにみられた。これに対し、遊離の０１１プ
ロティン人は７Ｓマーカーより下にピークを示した。こ
のことから、高分子量の形でＰＡＯＯから溶離されるプ
ロティン人は遊離のプロティンＡと異なることと考えら
れる。

１１１１プロティンＡ％含む潅流後車？ｌｆを超遠心し
、その沈降特性を純化した遊離のプロティン人と比軟し
た。潅流後サンプル中の放射性元素でラベルしたプロテ
ィンＡは、遊離のプロティン人に比べて、勾配の高分子
量フラクションに分布していた。潅流後血清の平行ショ
糖密度勾配フラクションは１、処理紬の血清に比べて、
Ｏ１ｑ結合ＩｇＧが増加した。これは、ＰＡＯＯから潅
流後血清中に溶離したプロティンＡが免疫グロブリンと
の複合体にあり、潅流後のショ糖密度勾配フラクション
に観察されたＣｊｌ結合の増加に寄与していたことを示
唆するものである。

（以下余白） ８３− 血漿潅流後のＰＡＯＯから溶離した１１１１プロテイン
Ａが管にコートされたＯｌｑと結合できたかどうかを決
定するため、次の実験がなされた。

即ち、１０ｍの正常あるいけ腫瘍を亀っている血漿を、
１８ＩＩ　プロティンＡを含むＰＡＯＯに通過させた。

溶離したプロティンＡを含む流出液す１８１　Ｉ　プロ
ティンＡを対照として用いた。遊離の謁ＩＮ　プロティ
ンＡの結合に比較して、ＰＡＯＯ流出液中の１１１１１
　プロティンＡの結合が約７倍に増加したことが、結果
として示された。このように、血漿潅流後のＰＡＯＯか
ら溶離したプロティンＡは、それが免疫グロブリンに結
合した形で放たれたことを示唆するＯ１ｑ結合特性を獲
得した。

さらに、正常または腫瘍をもっているイヌおよびヒトの
血漿をＰＡＯＯＫ潅流した。処理前のおよび流出液サン
プル（０，５）を管にコートした０１ｑと共ｊｃｆｆｌ
潟した。管を洗い、親和性純化し８４− た１２１１■ニワトリ抗プロテインＡを記載されたよう
に加えた。

その結果 ｒａ”Ｉ　　正常なイヌの処理後サンプルの３の中の２
、および同ヒトの５の中の３ （ｂ）　　ｈ［ｉＭ瘍をもっているイヌの潅流後のサン
プルの４の中の４、および同ヒトの６中の４で抗プロテ
ィンＡの結合の著しい増加がみられた。

さらに、５０１Ｒｔの正常イヌ血清を、コロジオン−炭
に固定化したラベルしていないプロティン人と共に１！
町プロテインＡまたは１１１５：［イヌアルブミンを含
むカラムを通して潅流した。ピーク値放射能をもつ流出
液フラクションをプールした。これらのピークのｌＯ−
のアリコートに、同容量の５０チ（Ｎ　Ｈ４）１８０４
．５チＰＥＧあるいは１０％のトリクロル酢酸を加えた
。結果として、遊離のプロティンＡがわずかに５〜１０
％であるのに対し、７０〜８０％の１！町プロテインＡ
が（ＮＨ４）＊　８０４　、　ＰＥＧで沈澱可能である
ことが示された。これに対して、放たれたアルジミンは
（Ｎ）（、）、　８０４またはＰＥＧで１０チ以下が沈
澱可能であった。これらの発見はアルジミンでけ々く、
プロティンＡが免疫グロブリンと検合した潅流後流出液
中に現われることを示唆している。

イヌ血清からのイヌＩｇＧが潅流後血清中に存在するＯ
１ｑ結合複合体に結合されるかどうかについヤ決定する
ために次の実験を行なった。

１１１１１　　イヌＩｇＧを含む正常イヌの１０−を１
！ＩＩプロティン人を含むＰＡＯＯに潅流した。流出液
を濃縮し、Ｏｌｑをコートした管で保温した。ラベルし
たプロティンＡとＩｇＧの特異活性に基いて、Ｏｌｑ結
合複合体の実験式がＩｇＧ、ＰＡに近いことを計算した
。セファロ−ゼロＢのクロマドグ２フイーにより、これ
らの複合体の近似分子量が６８０．０００であることが
決定された。これらの値および実験式に基いて、分子式
は［（ＩｇＧ）、ＦＡＩ。

に対応する。

ヒト血清の場合は、イヌ血清にみられた複合体に対応す
る高分子量ｅ−りに加えて、ＩｇＧの分子量に近接した
第２のピークが現われた。この−一りは、高分子フラク
ションと同様、対照レベル以上のＯ１ｑ重合油性を示し
た。この方法でこの範囲の複合体の分子量を決定するこ
とは困難なので、この小さな複合体の分子式は決められ
ていない。

プロティンＡとＩｇＧの種々のモル比で、プロティンＡ
−ＩｇＧ複合体を調製し、２７℃で６０分保温したあと
比濁分析法で分析した。プロティンＡ　−ＩｇＧのモル
比が１：２で、最大光散乱が観察された。１：１０およ
びより大きいモル比で、低い値のものが存在した。種々
のモル比で調製されたプロティンＡ　−ＩｇＧ複合体の
補体結合特性を抗補体検定（ａｓｓａｙ　ｌ　　で研究
した（文献９６）６プロテインＡとＩｇＧのモル比が１
：１００〜１　：　１０００のところで、最大の抗補体
８７− 活性がみられた。種々のモル比で作られたプロティンＡ
−ＩｇＧ複合体について、イヌ好中球からのミーグルク
ロニグーゼ、ミエロペルオキシダーゼ、酸性プロテアー
ゼの遊離を生じさせる能力をテストした。これらの酵素
を遊離せしめる最適のプロティンＡ　−ＩｇＧ比は１：
１００であり、カテゾシン発生のレベルをｌ：１０の比
以下で減少させる。。

ヒト赤血球に特異的なイヌ抗血清およびＭＯＦ−７ヒト
胸腺癌に特異的なイヌ抗血清が調製された。これらの血
清の各々および正常なイヌ血清を５１　ＰＥＧで処理し
、免疫グロブリン凝集物および内生免疫複合体を除き、
ついでＰＡＯＯに潅流した。潅流後血清を５チＰＦｉＧ
で処理し、沈澱プロティンをＭＯＦ−７細胞ネズミの７
アグロザクローマ（Ｌ細胞）およびイヌ乳腺癌細胞に対
する抗体活性に関し評価した。第１０表、第１１表□は
Ｐ　Ａ　００潅流のあとで、特異抗体は免疫血清のＰＥ
Ｇ沈澱性フラクション中に再回収可能８８− であ如、正常血清のＰＥＧ沈澱性潅流のレベルをしのぐ
。

第１０表 Ｐ　Ｂ　８　”　　　　３．５８±０．５３０　　２．
５１±０．２０６　１．９社０．１３３正常イヌ血清　
　２０．５８±３．３６３　　２３．６６±２．７５４
　９．４０±０．２１フイヌ抗−ＭＯＦ−７３６，８６
±０．０６６−　２７．１１５±０．７１３　　９．５
４±１．１５７＊）リン酸緩衝生理−塩類溶液 ＊＊）正常イヌ□血清よシ著しく高い（Ｐ）０．０５　
）（以下余白） 第１１表 Ｐ　Ｂ　８　　　０．８４±０．０３７　０．０６３±
０．０６６　１．０５±０１８１正常イヌ血清　　　７
．３１±０．１５９　　１９．６４±２．１０８　７．
８０±０５２６集合物を含む抗体の沈降特性を調べるた
めに潅流後血漿をショ糖密度勾配超遠心にかけ、放射線
免疫検定法で抗体活性を評価した。潅流後抗血清は７８
〜１９８の７２クシヨンで特異結合を示し、これらのフ
ラクションの正常血清の結合をしのいだ。） ヒト赤血球に特異的な海流後のイヌ抗血清を５４　Ｐｌ
ｉ！Ｇで沈澱させ、ヒト血清の特異凝集反応をテストし
、潅流後の正常イヌ血清からのＰＥＧ沈澱物と比較した
。第１２表はイヌ抗ヒト赤血球血清が顕著な凝集反応を
示し、これに反し、正常外イヌ血清からの同量の沈澱物
の凝集を示す。

第１２表 正常ＰＥ０　　　０　　　　　０　　　　０　　　０沈
峻物 免疫ＰＥ１Ｇ　　　＋＋＋十　　十＋十十　　　＋　　
　０沈澱物 ＊）凝集反応はＯから＋＋十＋に段階分けした。

潅流後ＰＥＧ沈澱物の抗体依存性細胞の細胞傷害（Ａｎ
ｔｉｂｏｄｙ　　　Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　　　Ｃｅ１ｌ
ｕｌａｒ　　　０ｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ　　：イヌ抗
ヒトＲＢＯおよび正常イヌ血清からの潅流後ＰＥＧ沈澱
物を用いて、ヒト赤血球ターゲラ９１− トをコートし、エフェクター細胞としてイヌ赤血球を用
いてＡＤＯＯＫ関し検定した。免疫血清カラのＰＢＧ沈
澱物は、エフエクター二ターゲット比がｌ二１で、正常
血清よｊ）３００％以上大きい細胞傷害、を示した。

ＰＡＯＯ潅流の間のＯ１ｑ結合ＩｇＧの生成における補
体の役割 固定化プロティンＡの血漿潅流の間の、Ｏ１ｑ結合Ｉｇ
Ｇの生成にイヌ補体が必須かどうか決定するため、５６
℃で６０分間加熱した、あるいは加熱しない正常イヌ血
清を５　’Ｉ　ＰＥＧで処理して免疫グロブリン集合物
を除き、ついでＰＡＯＯに潅流した。加熱龜しくは非加
熱の血漿は潅流後流出血葉中のＯ１ｑ結合が比較的増加
した。さらに、正常なあるいは先天的ＫＯ３を欠損した
イヌ血清を同様Ｋ　ＰＥＧで処理し、ＰＡＯＯに潅流し
、同量の（Ｈｑ結合が生成した。それゆえ、ｏｔｑ結合
ＩｇＧオリゴマーは、補体非依存性機構により、ＰＡＯ
Ｏ潅流後の血清中に発生する。

９２− ＰＡＯＯ潅流の間に生じた高分子量ＰＥＧ正常なまたは
腫瘍を本っている血清を５俤ＰＥＧで処理し、免疫グロ
ブリン集合物および内生免疫複合体を除き、ついで、Ｐ
ＡＯＯＫｍ流した６潅流後の流出液を２度目ＰＥＧ処理
を行ない生じた高分子量ＩｇＧを沈澱させた。ついで、
これに対して種々の生理学的機能特性を評価した。

生じたプａティンＡ−ＩｇＧを含むＩｇＧオリゴマーお
よび潅流後血清がＦｃ依存性リンパ球ロゼツト形成を抑
制するかどうかを決定するため、潅流後血清中のＰＢＧ
で沈澱されたＩｇＧオリゴマーをイヌ白血球とともに保
温し、ついで感作ヒト赤血球処ついてのロゼツト形成能
を評価した（文献９９）。潅流後血清中のＰＥＧで沈澱
させたＩｇＧオリゴマーは、集合イヌＩｇＧによる４７
饅の抑制に比べて、２８〜３１チのロゼツト形成の抑制
を示した。

プロティンＡ−ＩｇＧ複合体を含むＩｇＧオリゴマーお
よび溢流後の血清が補体を活性化し、消費するかを決定
するため、潅流後血清中のＰＥＧ沈澱ＩｇＧオリゴマー
をモルモット補体源とと本に保温し、ついで補体依存性
溶血検定で溶解媒介能を評価したＣ文献９６）。正常な
あるいは腫瘍をもっているイヌから潅流後血漿中の、Ｐ
ＥＧで沈澱したＩｇＧオリゴマーは、補体を活性化し消
費する能力において比較しうる屯のであった。

潅流後血清からのプロティンＡ−ＩｇＧ複合体がヒト多
形核細胞（ＰＭＮＩ　Ｋよる過酸化物アニオンの遊離を
促進するかどうかを決定するため、濁流後血清をＰＭＮ
とともに保温し、培養基についで化学ルミネツサンスで
過酸化物の生成を評価した（文献１００．１０１）。正
常な又は腫瘍をもっているイヌからの潅流後血清中の、
ＰＩＧ沈澱ＩｇＧオリゴマーは、イヌＰＭＮによる過酸
化物アニオンの生成を促進する能力で比較しうるもので
あった。

渦流後血清からのＰＥＧ沈澱物の細胞傷害機能を評価し
た。腫瘍をもっている又は正画な血清からの、プロティ
ンＡ−ＩｇＧ複合体を含むＰＥＧ沈澱オリゴマーは非特
異性の細胞傷害をひきおこした。乳腺癌、ネズｆＬ細胞
、ヒト赤血球のようなターゲット細胞を用いた場合も、
同程度の溶解が観察された。しかしながら、０３欠損血
清は、乳腺癌、ネズずＬ細胞、ヒト赤血球に対してテス
トしたとき、対応す悉正常血清よ如著しく低い細胞傷害
を生じたので、細胞傷害が補体依存性であることが明か
Ｉ／ｃ１つた。

合成プロティンＡ−ＩｇＧ複合体を用いる化学ルミネツ
サンスについての研究が進歩してきている。合成複合体
は、最初は、化学ルｔネツサンス活性を生じせしめる純
粋なイヌまたはヒトＩｇＧあるいは血清にプロティン人
を添加することによ９調製した。血清あ、るいはＩｇＧ
から調製された不溶性複合体からの上澄みは実質上活性
がない。純粋なプロティン人。

９５− ＩｇＧ、　　血清の対照は、単独で化学ル２ネツサンス
に活性を示さない、血清あるいは新鮮なＩｇＧから作ら
れた複合体に、新鮮な補体源を添加しても、化学ルミネ
ツサンス特性は著しく高められないようにみえた。これ
に対して、ＥＩＤＴＡの存在下に血清から作られた複合
体は、ＦＩＤＴＡの非存在下に血清から作られた錯体の
ように、アブレボメトリ−（ａｇｇｒｅｇｏｍｅｔｒｙ
）で活性でなかった。血清およびＩｇＧから得られた複
合体の上澄みは不活性だった。上澄みに複合体を加えた
非分別混合物、単離した沈澱物と上澄みとから再構成し
た混合物は、沈澱のみよ９活性であった。これは、それ
自身活性ではないが不溶性複合体の活性を高めるヒとが
できる因子が上澄み中に存在することを示す、Ｂ、アグ
レゴメＦリー 合成複合体は以下のことを示した。ＢＤＴＡと、著しい
顆粒球の集合が生じた。しかしな９６− がら、ＥＤＴＡの非存下に得られた複合体は、存在下に
得られた本のより、けるかに効果が大きかった。これら
の複合体からの上澄みは不活性であったが、再び沈澱物
に戻すと、未分別の混合物に等しい活性に著しく増強さ
れた。この発見によシ、上澄みが不溶性複合体の活性を
増強することが示唆される。この点において、０３ａ（
：０５ａの高レベルは複合体からの上澄みで放射性免疫
検定により検知された。活性を区別する重要な点は次の
通りである。即ち、血清に比較的多量のプロティンＡを
添加して得た可溶性複合体は、アグレゴメトソ−（ａｇ
ｇｒｅｇｏｍｅｔｒｙ　）で不活性で、不溶性沈澱物か
らの上澄みに比較しうる０３ｇ　　および０５ａ　　レ
ベルをもつ。

血清または純粋ＩｇＧから作られたプロティンＡ　−Ｉ
ｇＧを含む合成複合体は、イヌあるいはヒト血清中の全
補体活性を活性化する。補体不足はイヌで４０〜７０係
にのぼる。ヒトもしくはイヌの血清、０３欠損イヌ血清
、あるいはヒトもしくはイヌのＩｇＧから調製された不
溶性複合体は８１７表に示したように全補体活性の９０
係以上を消耗させる。血清に高レベルのプロティンＡを
添加して作った不溶性または可溶性の複合体は血清の１
−で２０〜３０ｕｙの０３ａ　　を生じさせる。これは
、血清中の全０３の４０１％がＯａａ　　に変換された
ことに大略等しい。洗われて新鮮な血清に添加された複
合体は、０３ａおよび０５ａ活性を続けて生じせしめる
。一度、これらの複合体が調製されると、複合体はそれ
が調製された血清から最初に０３ａ　　を生じせしめる
ばかりでなく、第１８表に示すようにさらに０３ａおよ
び０５ａを生じせしめることができる。たとえば、新鮮
な血清に添加された血清ま九は純粋ＩｇＧからの沈澱物
は、２５００　ｎｙの０５ａ／ｄに生じせしめる。実験
による検討において。

０５ａは低血圧、血管拡張および高毛管浸透性を生じせ
しめることが知られている。潅流処置後の急性臨床条件
下、Ｉｎ　ｖｌｖｏで同様な反応が報告された。予備的
な研究で、潅流後の血圧が低下したときに得た患者の血
清サンプルで、０５ａのレベルの増加がみられた。この
知見は、ＰＡ−ＩｇＧ複合体から生じたアナフィラトキ
シンが、部分的には、観察される心臓血管効果の原因を
かしていることを示唆する。

Ｃ以下余白） ９９− プロティンＡ−ＩｇＧ複合体のＩｎ　ｖｉｖｏでの効果
１■のプロティン人を３１Ｌｌの自己由来血清とともに
２７℃で３０分間保温して調製したプロティンＡＩｇＧ
複合体を自発性腫瘍をもっている３匹のイヌに与えた（
摂生９．第１８表）。ついで、通常の生理的塩類溶液を
加えて、混合物の最終容積を５１ｎｔとし、これを１１
１ｔｌ／′ｔｉｌｌの速度で１．Ｉ、　Ｖ、で注入した
。７〜１５回の治療の間、週に３〜５回注入を行なった
。注入のすぐあとで目視しうる腫瘍、が充血し、浮腫に
なった。注入を繰り返すＫつれて、第８表に示すように
レミッションが観察された。

第　　８　　表 二次元製造物（ｃｒ／ｌ） ブードル１１　　　乳腺ａ　　　　１７．？　　　１０
．０　　４４℃ｇｘトｙ　　１２　　乳腺価　　１６．
２　１２．７　　２２テリヤ ビーグル　　　７　　リンノ勺廁　　　８９．３　　６
３．７　　　２８１００ｕｇのプロティンＡに２０１１
Ｌｌの自己由来１００− イヌ血清を加えてなるプロティンＡ−ＩｇＧ？ＪｉＴ＆
体が、ウサギ抗腫瘍抗血清（２０ｍ／）およびチそサン
活性化正常イヌ血清とともに２日連続で与えられた（摂
生４．第１４表）。３日目忙動物を休ませ、４日目にサ
イクロホスファミドおよび７才たけアドリアマイシンを
与えた。この結果、乳腺癌をもっている２匹のイヌで急
性殺腫瘍効果が生じた。投与を繰り返すにつれて、２匹
のイヌは５０４以上の腫瘍の減少を示した（第１４表）
。

第　　１４　　表 正常イヌ血清から調製されたプロティンＡ−ＩｇＧ複合
体のＩｎ　ｖ１マ０での効果プロティンＡ−ＩｇＧ複合
体が現われるＰＡＣＣ流出液についての物理的、化学的
研究から確信゛をもって、さまざまな自発性イヌ腫瘍を
もっている犬における複合体の効果についてテストした
。プロティンＡ　−ＩｇＧ複合体を、種々の自発性腫瘍
をもっている５匹のイヌに与えた。用いたＰ　Ａ　−Ｉ
ｇＧの投与量については、腫瘍中に肉視しうる形態学的
変化を生じるＰ　Ａ　−ＩｇＧ量についての研究から明
らかにし、決定した。ＰＡとＩｇＧの割合については、
ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　　の研究から明かにし、そこではＰ
　Ａ　：　ＩｇＧが１：１００の比がイヌ好中球からミ
エロペルオキシダゼおよびカテプシンについて最適の遊
離結果を示した。これらはプロティンＡ　（５ｕｇ／ｌ
ｂ　）を正常イヌ血清Ｃ０，１ｍ１７１ｂ）　　ととも
に、６０分、３７℃で保温して得た。ついで、通常の生
理的塩類溶液を加えて、混合物の容量を１０７１５１と
し、１　ｒｕｇ　／　ｔｎｉｎ　ノ速度で、１．ＶＬで
注入した。

７〜１６回の治療の間、週に２〜４回注入した。

注入のまもなく後で、腫瘍は充血し、浮腫になった。注
入を繰り返すに伴なって、第１５表のように腫瘍の退化
が観察された。たとえばＰＡ−ＩｇＧ注入によって腫瘍
に炎症変化がみられたあとで、注入手順（摂生）に副次
的な治療としての化学療剤投与を行なった。この条件で
も、第１６表のように腫瘍退化がみられた。

すなわち、本発明の１つの態様は、殺腫瘍Ｉの製剤を投
与して癌をもっている宿主を治療する方法である。この
製剤はＦ６をもっている白血球のＦｃレセプターに結合
し、これにより、白血球から少なくとも１つの細胞傷害
物質が放たれ°　　　る。

第　　１５　　表 二次元製造物（ｃｒｌ） イヌ屋　　　腫　瘍　　　治療数　　前　　　後　　変
化係１　　血管肉腫　　１３　　９６　　４６　５１．
０２　乳腺癌　７　１６．２　１１．８　５７．２３　
　リンパ腫　　１０　１６Ｇ、０　６０．０　６２．０
４　乳腺癌　１５　４５．３　３０．３　３３．１５　
　　リンパ腫　　１１　　９３．６　６３．７　３１．
９゜−１０３− 第　　１６　　表 プロティンＡ−ＩｇＧ：１１１合体に低投与量の化学療
剤投与　　　腫　　瘍　　　治療数　　前　　　後　　
変化俤１　　血管内＠”　　　　　１２　　８６．ｆ＋
　　　　４．０　　９６．０２　　鱗細胞癌　”　　　
　　１５　　６０．０　　１０．０　　８６．０＊）　
１２回の治療のあとで、１回あたり２５７Ｑ／ｉのアド
リアマイシンを与えた。

傘＊）　５回の治療のあとで、１回あたり１．７　ｒｖ
／ｉのＢａＮｕを与えた。

遊離のプロティンＡをイヌ血漿とともに保温して得た複
合体の毒性効果について検討し、この知見をすでに記載
したヒトの研究と相関せしめるため、イヌのモデルを開
発した。この研究において、この反応の病理物理学を特
徴づけ、血清学的媒介子を調べ、薬理学的妨害（ｂｌｏ
ｃｋａｄｅ）効果を検討し、応答を弱める方法を検討し
、最−１０４− 後にヒトの反応と対照すべく試みた。

４つのグループについて研究した。グループｌは、３分
間に亘ってプロティンＡ　−ＩｇＧ複合体な与えた。グ
ループ２は３０分に亘ってプロティンＡ−ＩｇＧ複合体
を与えた。グループ３は顆粒球が減少したイヌであって
、グループ２と同じ処方（摂生）であった。グループ４
は、グループ２と同じ処方を与える前に、ヒスタミンプ
ロツケード処理を施した。

以下のパラメータについて検討された。

（ａ）　　左心室ＤＰ／ＤＴ （ｂ）　　心臓節長さ収縮（Ｃａｒｄｉａａ　ｓｅｇｍ
ｅｎｔ　ｌｅｎｇｔｈ　−ｃｏｎｔｒａｃｔｉｌｉｔｙ
　） （ａ）　　平均大動脈圧 （ｄ）　　ピーク左心室収縮血圧 （ｅ）回旋冠状動脈流 （ｆ）　　腎動脈流 （ｇ）　　大腿動脈流 （ｈ）　　肺動脈流 その結果、プロティンＡ　−ＩｇＧ複合体の急速な漂流
に伴なって、上記パラメータのすべてが急速に降下し、
ゆっくりとベースラインに戻ることが判った。プロティ
ンＡ−ＩｇＧ複合体を注入すると、すべてのパラメータ
が１５分をピークとして減少し、４５〜６０分間維持さ
れ、そして、ベースラインに戻る。最初の主要な徴候は
左心室ＤＰ／ＤＴ　　と節長さであり、二次的な効果と
して平均大動脈血圧を伴なう。グループ２と同じ処置（
摂生）を受けた犬の碩粒減少は結果として、心臓血管効
果の減少が観察された。

ヒスタミンプロツケードを用いても、心臓血管応答を弱
める効果は殆どなかった。

注入のあとで種々の組織について病理学的な検討を加え
たところ、最も顕著な変化は肺における肺胞浮盾、肺胞
部への細胞浴出（ｃ＠１１ｕｒａｒｅｘｔｒａｖａｓａ
ｔｉｏｎ　１ｎｔｏ　ｔｈｅ　ａｌｖ＊１ｏｒ　５ｐａ
ｃｅ　）として現われた。

これらの研究において、イヌは、ヒトにみられたのと異
なったパターンの心臓血管毒性を示した。主管における
血液流の減少は心臓節の減少によるものと思われ、一方
、急性状態におけるヒ）Ｋついての研究では、低血圧の
結果として、系脈管抵抗の減少を伴なって心臓血液搏出
量の増加を示した。双方において、血管浸透性の変化が
みられた。

以下余白 １０７− → ｗ＆　　会 −１０９− 一　　へ　　の　　啼　　１ 畳　　　４１４１　　　　畳　　　骨 へ Ｊ　　” 〜　　・ 七 → へ　　　　　　△ 一ノＮ２ノ ゾ　　　　　　　　Ｖ Ｎ　　　　　　　　　　　０ 嵜　　ら１　　　　　　タ ー　　　　　Ｐ　廿　　　縣 ■　　　　鍼　歩　　　置 ゝ　　　−Ｅ４０−Ｉｓ ト　　　　　　＠　螺　　　　Ｑ ミ　　　岨　　　　６口　　　　　　　　　　頴　　　
＾　　ｓ　　　Ｊ４＠　　　＠’４ｒ＼　　　　　　　
ｂａ　＊　　　４［１４０Ｋ　報４ｎ　ｉ　　　　　−
迦　烏　ａ第１８表は同種全補体活性に対するプロティ
ンＡの効果に関するデータであり、第１９表合成核合体
から生じる０３ｍおよび０５ｍに関するデータである。

好ましい態様：製造物４ 腫瘍をもっている宿主からの自己由来血清または血漿、
４ｍｌ／１ｂＫ１０Ｎ−ＨＣ１ｋＣ３ｂて、ｐ　Ｈ２，
５に酸性化し、２７℃で５分間保った。ついで、ｌ０Ｎ
−ＮａＯＨを加えてｐ　Ｈ７，４に血清をすみやかに中
和し、ついで、１５００Ｘｇ。

３０分、４℃で遠心分離した。ついで、上澄み血清を取
り、１ｔｔｄ　／　ｍの速度で、Ｉ、Ｖ、で与えた。

上記手順による酸性化およびすみやかな中和の後での、
ヒト血漿の主な構成成分の変化は第１８ＡＩ％の通りで
ある。総タンパク、グロ゛ノリンフラクション、フイブ
リノゲンが減少し、他のパラメータは実質上変化しない
ことが判る。

第１８Ｂ表は酸による血漿の処理ののち、ヒト免疫グロ
ブリンＧ　、　ＭおよびＡが減少することな示すＯ 以下余白 鰭 く　　叫 ゲ 藺 価　　　　　　　　　　　２ マ ＠へべ−Ｌ図３２避ト謔 〜 第　　１８Ｂ　　表 酸性化の後のヒト免疫グロブリンの変化試料　ＩｇＧ（
ｍｇ／ｄｉ）　ＩｇＭ（ｍｇ／ｄｉ）　ＩｇＡ（ｍｇ／
ｄｉ）未処理　、　　１２００　　１００　　１１０酸
性化　　８６０　　１００　　９０ 腫瘍をもっている宿主からの自己由来酸性化血清は、基
質として各々のイヌ自身の腫瘍を用いて間接免疫螢光法
で測定したとき、腫瘍関連抗体の著しい増加を示した（
第１９表）第　　　１９　　　表 １　　　　リンパ腫　　　　１０，０００　　　２０，
０００２　　　　リンパ腫　　　　１０，０００　　　
３０，０００３　　　　リンパ腫　　　　１０，０００
　　　４０，０００４　　　　リンパ腫　　　　１０，
０００　　’　　２０．０００５　　　血管肉腫　　　
　　１００　　　５０．０００＊）数値は、犬自身の基
質に対するポジイティブ螢光血清を与える終点希釈を示
す。

乳腺癌をもっている犬についての、酸性化後の血清中の
呻瘍関連抗体の変化に関し、放射線免疫検定法で試験し
た。ここで、ターゲットとしてイヌ乳腫癌の組織培養系
が用いられイヌＩｇＧＫ結合した細胞を検知するインジ
ケータと２５ して　　ＩプロティンＡを用いた。１０の血清のテス）
において、ｐ　Ｈ２，１５に酸性化したのち速やかに中
和した。未処理血清の値をしのぐ、１２０±６３　％　
（Ｓ、Ｄ、）の腫瘍関連結合レベルの増加が生じた。

胸腺癌をもっているヒトかの全血清についての、酸性化
前後でのセファデックスＧ−２００クロマトグラフイー
による分析の結果は次の通りである。（ａ）血清を酸性
化すると、未処理面一に比べて、ゼイドぜリュームーブ
ロチインが増加し、含有フラクション中のプロテイルが
比較的減少した。（ｂ）未処理血清に比較して、放射性
免疫検定により測定した肺癌関連（親和）結゛合が含有
フラクションで９４８チ増加し、Ｉイドボリューム−フ
ラクションで１３４％緬加した。

ショ糖密度勾配超遠心後の酸性化全血清の分析の結果、
未処理血清に比較して、７ｓより大ぎなフラクションで
４００％まで増加した。それゆえ、腫瘍をもっている血
清を酸性化するとその結果、腫瘍関連抗体および高分子
量プロティンの生成が増加することが判る。

腫瘍をもっている犬からの自己由来酸性化血清を、正常
イヌ血清で活性化したチモサンと共に与え２４時間後（
２日目）に再び与えた。３日は動物を休ませ、４日目に
Ｉ、Ｖ、で、サイクロホスファミドを与えた（摂生２．
第１８表）。

５匹の犬のこの摂生（処りの結果を第２０衣に示した。

以下余白 −１１５− 第　　２０　　表 治療□に対する応ｉ 二次元Ｍ遺物 １　　ブリ　　　血管肉腫　１４０　　７０　　５０２
　　ラブラドール　血管間＠　　　５８　　３２　　　
３７３　　テリャ　　　骨髄腫５０．　３０　　　４０
４　　　スゲリンカース ）：：−エ）Ｌｐ　　リンパ腫　　１４０　　５０　　
　Ｔ。

５　　ブードル　　　乳　腺　癌　　２５０　　１２５
　　　５０検討すべきに値する効果埴生み出す種々の効
果的な態様は次の通りである。Ｌ−アスパラギナーゼと
サイクロホスファミドを１日目に宿主に与□え、腫瘍の
最大の退化が得られたとき、チモサンで活性化した正常
イヌ血清（１００ｒｎｌ）と、酸性化あるいはアルカリ
化した前処理自己由来血ｇ（４ｒｎｌ／　ｌｂ　）　　
とを与え、次の日にＬ−アスパラギナーゼとサイクロホ
スファミドを−１１６− 投与した（摂生５．第１２表）。結果４第２１表に示し
た。　　　　　　　、 第　　２１　　　表　　　　、 １　スバニエル　　リ、ンパ腫　　１４０　　３５　　
７５２　　ビーグル　　　リンパ腫　　１２０　　３０
　　７５３　ブードル　　　リンパ腫　　　７０　　３
５　　５０チモサンは１．補体配列を活性化し、轡体削
生ころ、ｌｎ　ｖｌｖｏで次の結摩が得られた。

（ａ）血管拡張、血圧の減少、頻搏。

（ｂ）１スムーズな筋スバスモジェニイク効果。

これらの効果は、１ｓ分的には、補体副障物、すな、わ
ち、アナフィラトキシン０３ａ、０．５ｍによる。

全正常イヌ血清の補体な活性化するために、チモサン（
５ｇ）を血清（ＩＱＯｍ／）とともに２７℃で１０分間
保温した。ついで、１５’００Ｘｇで３０分間遠心分離
してチモサンを除いた。

ついで・、補体活性血清を、腫瘍をもっている宿主に、
１０ｍ／ン騙の速度で、Ｉ、Ｖ、で注入した。

自発性イヌ腫瘍の治療に用いた種々の治療プログラムに
おいて、チモサン活性正常イヌ血漿は、付加的な治療法
として用いられた。チモサレ活性イヌ血漿を、（・）腫
瘍免疫グ・プリン製剤、（ｂ）プロティンＡ　−ＩｇＧ
橡合体、（ｃ）酸性化またはアルカリ化血漿と一緒に投
与したと１き、殺腫瘍あるいは腫瘍退化効果がみもれた
。これらの製造物を′投与したすぐあと、Ｌ−アスパラ
ギナーゼ、サイクロホスファミドまたはアドリアマイシ
ンを与えたとき、殺膣効果もしくは退化は著しかった。

好、ましい態様ニブロチインＡ ５プロテインＡは、スタフィロコッカス・アウレウスー
コワンスＩの細胞壁の成分であり、多くの哺乳動物ｍに
関し、Ｆｅ領域あるいは免疫グロブリンと反応する能力
を有する。腫瘍をもっているイヌに投ヤしたとき、抗腫
瘍活性が観察さ訃た。プロティンＡは、１０〜８０　ｕ
ｇ／　ＫＨの投与量で注入された（摂生８．第１２表）
。

この結果、４つの動物で５〜２０チの一時的腫瘍の減少
が少し、他の１では殺腫瘍応□答をみせた。また、他の
２匹では効果がみられなかった。

上記の製造物を単独で、お互いに組合せて、また、棟々
の化学療法薬剤と併用して用いることにより、実質的な
殺腫瘍反応がみられた。この効果をもたらすために用い
られた治療方法およびその際の製造物の使用を第２２図
に示した。

また、得られた上記の結果は奸才しい態様に記載した。

以下余白 −１１９− −１２０− Ｏ −〇 ψ　　　　　　　　ト　　　　１）　　Φここのすべて
の実施例はイヌの自発性腫瘍に関するものであるが、こ
れら腫瘍゛を対応するヒトのものの、知られたそして優
れたモデルであると認識される。プロティン−コロジオ
ン−チャコール（炭）系を用いる。イヌモデルでの治□
、僚的な成功は（文献１７．１９）、最近、ヒトに移さ
れ、腫瘍退化は処理した５人の患者の中４八忙おいて得
られた（文献２０）。このように腫瘍・をもったイヌに
関し徹告′されたデータは、同様に自発性癌をもつヒト
、にその方法あ５るいは組成物を適・用し゛た場合、に
も、効果−を納めるものと考えられる。

本明細書では、解離技術として酸処理を用い、る場合に
ついて特に説明したが、他−の＠離技術を使用しうるは
勿論である。

さらに、本明細書の開示には以下の治ゝ療方法も含まれ
る。

（１）　　正常な、または腫瘍をもっている宿主からの
血清をチモサンと保温して得たチモサン活性血漿製剤で
あって、チモサンを災質上含ま−１２１− ず、また、補体副産物の活性に一致して、インビｄ’　
（ｉｎ　ｖｉｖｏ　）で末梢血管拡張とスパスモジエネ
イレク（’Ｉｐａ＋１ｍ０ｇ・ｎｉａ　’）効果を生じ
る゛製剤を、効果的癌治療で宿主に投与するどとを特徴
とする、癌をもっている宿主め治療方法。゛ （２、特許請求の範囲第１項、第２項、第３項、第４項
またはｇｓｍに製剤を、癌治療有効量で宿主に投与する
ことを特徴とするｆ＃Ｊｖもっている宿主の治療方法。

　　　　　　“（３）　　特ｆｆ１ｌ！求の範−第１項
に記載の製剤を癌治療有効量で宿主に投与し、らいでこ
め投与の・後２一時間以内に、癌治療有効量でも一アス
パラギナーゼおよび細胞傷害剤を投与することを特徴と
する、癌をもうている宿主の治療方法。　　　　　゛・
・　　　　　゛ （４）゛癌治療有効量で、４Ｉ許請求の範囲第５項に記
載の製剤およびチモサシ活性血漿！２日遅廐で宿主に投
与し、ついで、−この投与のあと２′４時間以内に、癌
治療有効量＋Ｌ−アスパ−１２２−一 ラギナーゼおよび細胞傷害剤を投与することを特徴とす
る、癌をもっている宿主の治療方法。

（５）癌治療有効量で、特許請求の範囲第２項および第
５項に記載の製剤を２日連続で宿主に投与し、ついで、
この投与のあと２４時間以内に、癌治療有効量でＬ−ア
スパラギナーゼおよび細胞傷害剤を投与することを特徴
とする、癌をもっている宿主の治療方法。

（６）癌治療有効′ｉで、Ｌ−アスパラギナーゼおよび
細胞傷害剤を宿主に投与し、ついで、癌治療有効量で、
特許請求の範囲第５項に記載の製剤およびチモサン活性
血漿を宿主に投与し、この投与のあと２４時間以内に、
癌治療有効量でＬ−アスパラギナーゼおよび細胞傷害剤
を投与することを特徴とする、癌をもっている宿主の治
療方法。

（７）・癌治療有効量で、特許請′□求の範囲第３項に
記載の製剤およびチモサン活性血漿を２日連続で宿主に
投与し、ついで、この投与のあと２４時間以内に、癌治
療有効量でサイクロホスファミドおよびアドリアマイシ
ンを投与することを特徴とする、癌をもっている宿主の
治療方法。

（８）癌治療有効量でチモサン活性血漿および他＋・＝
由来抗腫瘍ＩｇＧとプロティンＡの複合体を２日連続で
宿主に投与し、ついで、この投与のあと２４時間以内に
、癌治療有効１でＬ−アスパラギナーゼ、サイクロホス
ファミドまたはアドリアマイシンを投与することを特徴
とする、癌をもっている宿主の治療方法。

（９）癌治療有効量で、特許請求の範囲第３項に記載の
製剤と異種由来抗腫瘍ＩｇＧとを２日連続で宿主に投与
し、ついで、この投与のあと２４時間以内に、癌治療有
効量でも一アスパラギナーゼおよび少なくとも一種の細
胞傷害剤を投、与−ｒることを特徴とする、癌をもって
−１ いる宿主の治療方法。

（１０）　　宿主に癌治療有効量のスタフィロコッカス
・アウレクス・コワンスエのプロティンＡを投与するこ
とを特徴とする癌をもっている宿主の治療方法。

（１１）　　宿主（癌治療有効量で、特許請求の範囲第
１項、第２項、第３項、第４項および第５項に記載した
製剤の少なくとも一種またはチモサン活性血漿を投与し
、ついで、癌治療有効量で、化学治療剤の少なくとも一
種を投与す、ることを特徴とする、癌をもっている宿主
の治療方法。　　　　。

（１２）　　特許請求の範囲第１項、第２項、笛３項、
第４項および等５項に記載した製剤の少なくとも２攬ま
たはチモサン活性血漿を、癌治療有効量で宿主に投与す
ることを特徴とする、癌をもっている宿主の治療方法。

（１３）％許請求の範囲第１項、第２項、第３項、第４
項および第５項に記載した製剤の少なくとも２１１Ｉま
、たけチモブン活悸血漿を、癌治療有効量で宿主に投与
し、ついで癌治療有効量で、化学治療剤Ω少なくとも一
種を投与することを特徴とする、癌をもっている宿主の
治−１２５− 速力法。

（１４）　　癌治療有効量のチモサンで活性化された面
漿ン、宿主の補体系を活性化するに有効なｔで投与する
ことを特徴とする、癌をもっている宿主の治療方法。

（１５）　　Ｆｃをもっている白血球のＦｃレセプメー
に結合する製剤を癌治療有効・１で宿主に投与し、該白
血球から少なくとも一種の細胞傷害物質を遊離せしめる
ことを特徴とする、癌をもっている宿主の治療方法。

（１６）　　宿主に癌治療有効量で、特許請求の範囲第
１項、第２項、第３項、第４項および第５項に記載した
製剤な・らびにスタフィロコッカス・アウレクスのプロ
ティンＡの少なくとも一種を投与することを特徴とする
癌をもっている宿主の治療方法。

−１２６− 参考文献 （１）　Ｂｉｅｒ、　Ｍ、　Ｉｎ　Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈ
ｏｒｅｓｉｓ、　（ｅｄ、　Ｍ、　Ｂｉｅｒ）、　Ａｃ
ａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　Ｎｅ
ｗ　Ｙｏｒｋ、　１，９５９．　ｐ、　２６３゜（２）
　Ｂｉｅｒ、　Ｍ、　Ｉｎ　Ｍｅｍｂｒａｎｅ　Ｐｒｏ
ｃｅｓｓ　ｆｏｒ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ、　５ｏｕｔｈｅ
ｒｎＲｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ、　Ｂｉｒ
ｍｉｎｇｈａｍ、　Ａｌａ、、　１９６６、　ｐ、　２
１８゜（３）　Ｂｉｅｒ、　Ｍ、　５ｉｘｔｈ　Ｉｎｔ
ｅｒｎ、　Ｃｏｎｇｒｅｓｓ　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、　Ｎ
ｅｗ　Ｙｏｒｋ、　１９６４゜（４）　Ｂｉｅｒ、　Ｍ
、、　５ｃｉｅｎｃｅ　１２５：１０８４．１９５７゜
（５）　Ｈａｎｎｉｎｇ、　Ｋ、　Ｉｎ　Ｅｌｅｃｔｒ
ｏｐｈｏｒｅｓｉｓ、　Ｖｏｌ、　ＩＩ、　Ａｃａｄｅ
ｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ。

Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　１９６７、
　ｐ、　４２３゜（６）　Ｂｉｅｒ、　Ｍ、、　Ｂｒｕ
ｃｋｎｅｗ、　Ｇ、Ｃ，、ａｎｄ　Ｒｏｙ、　）１．Ｅ
、　Ｔｒａｎｓ、　Ａ＋ｎｅｒ、　Ｓｏｃ。

Ａｒｔｉｆ、　Ｉｎｔ、　Ｏｒｇａｎｓ　１３：２２７
．１９６７゜（７）　Ｂｉｅｒ、　Ｍ、、　ａｎｄ　Ｍ
ｏｕｒｌｅｋ、　Ｓ、Ｐ、　Ｉｎ　Ｐｒｏｃ、　Ｔｈ１
ｒｄ　Ａｎｎｕａｌ　ＡｍｅｒｉｃａｎＷａｔｅｒ　Ｒ
ｅ５ｏｕｒｃｅｓ　Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ、　１９６７
、　ｐ、　５２４゜（８）　　Ｂｉｅｒ、　Ｍ、、　Ｂ
ｒｕｃｋｎｅｒ、　Ｇ、Ｃ，、Ｃｏｏｐｅｒ、　Ｆ、Ｃ
，、ａｎｄ　Ｒｏｙ、　Ｈ，Ｅ。

Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｂａｃｔｅｒｉｏ
ｐｈａｇｅ　ｂｙ　Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　
ｉｎＴｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｖｉｒｕｓｅｓ
　ｂｙ　Ｗａｔｅｒ　Ｒｏｕｔｅ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ
、　１９６７゜ｐ、　５７゜ （９）　　Ｂｉｅｒ、　Ｍ、　　Ｉｎ　Ｓｙｍｐｏｓｉ
、ｕｍ　ｏｎ　Ｅｌｅｃｔｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ、　Ｅ
］、ｅｃｔｒｏｃｈｅｎ＋−１ｃａｌ　５ｏｃｉｅｔｙ
、　Ｂｏｓｔｏｎ、　Ｍａｓｓ、、　１９６８゜（１０
）　Ｂｉｅｒ、　Ｍ、、　Ｂｅａｖｅｒｓ、　Ｄ、Ｃ，
、Ｍｅｒｒｉｍａｎ、　Ｗ、Ｇ、、　Ｍｅｒｋｅｌ、　
Ｆ、に、。

Ｅｉｓｅｎｍａｎ、　Ｂ、、　ａｎｄ　５ｔａｒｚｌ、
　Ｔ、Ｚ、　　Ｔｒａｎｓ、　Ａｍｅｒ、　　Ｓｏｃ、
　Ａｒｔｉｆ。

Ｉｎｊ、　Ｏｒｇａｎｓ、　Ｖｏｌ、　ＸＶＩ、　１９
７０、（１１）ＦｏｒｓｇｒｅｎＡ、、５ｊｏｑｕｉｓ
ｔＪ、Ｊ、Ｉｍ＋ｎｕｎｏ１．１９６６．９７：８２２
、（１２）　Ｋｒｏｎｖａｌｌ　Ｇ、、　Ｆｒｏｍｍｅ
ｌ　Ｄ、　　Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ、　１９７０．７：
１２４゜（１３）　Ｋｅｓｓｌｅｒ、　Ｓ、Ｗ、　　Ｊ
、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１９７５．１１５：１６１７゜
（１４）　５ｔａｌｅｎｈｅｒｎ　Ｇ、、　Ｇｏｔｚｅ
　Ｏ，、Ｃｏｏｐｅｒ　Ｎ、Ｒ１，Ｓ％ｑｕｉｓｔ　Ｊ
、、　Ｍｕｌ、］、ｅｒ　−Ｅｂｅｒｈａｒｄ、　Ｈ，
Ｊ、　　Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ、　　１９７３．１０：
５０１゜（１５）　Ｖａｌｌｏｔａ、　Ｅ、Ｈ，、Ｍｕ
ｌｌｅｒ−Ｅｂｅｒｈａｒｄ、　Ｈ，Ｊ、　　Ｊ、　Ｅ
ｘｐ、　Ｍｅｄ、　１９７３゜１３７：１１０９゜ （１６）　Ｓｔａｌｅｎｈａｍ、　Ｃａ５ｔｅｎｓｓｏ
ｎ、　ｓ、　　ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔｅｒｓ　１９７４．
１４ニア９゜（１７）　Ｔｅｒｍａｎ、　Ｄ、Ｓ、、　
Ｙａｍａｍｏｔｏ、　Ｔ、、　Ｍａｔｔｉｏｌｉ、　Ｍ
、、　Ｃｏ６に、　Ｇ、。

Ｔｉ１ｌｑｕｉｓｔ、　Ｒ，、Ｈｅｎｒｙ、　Ｊ、、　
Ｐｏ５ｅｒ、　Ｒ，、Ｄａｓｋａｌ、　Ｙ、　　Ｊ。

Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９８０１２４ニア９５゜（１Ｂ）　
Ｈｏ１ｏｈａｎ、Ｔ、、　Ｂｏｗｌｅｓ、　Ｃ，、Ｄｅ
ｉｓｓｅｒｏｔｈ、　Ａ、　Ｐｒｏｃ、　Ａｍ、　Ａｓ
５ｏｃ。

Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、、Ａｍ、Ｓｏｃ、Ｃ１１ｎ、０
ｎｃｏ１．２１：２４１　ａｂｓｔｒａｃｔ。

（１９）　Ｔｅｒｍａｎ　Ｄａ、　Ｙａｍａ＋ｎｏｔｏ
　Ｔ、　Ｔｉ１ｌｑｕｉｓｔ　ＲＬ、　Ｈｅｎｒｙ　Ｊ
Ｆ、　Ｃｏｏｋ　ＧＬ。

５ｉｌｖｅｒｓ　Ａ、　５ｈｅａｒｅｒ　ＷＴ：　　５
ｃｉｅｎｃｅ、　１９８０．２０９：１２５７゜（２０
）　Ｔｅｒｍａｎ　ＤＳ、　ＹＯｕｎｇ　ＹＢ、　５ｈ
ｅａｒｅｒ　ＷＴ、　Ａｙｕｓ　Ｃ，Ｌｅｈａｎｅ　Ｄ
。

Ｍａｔｔｉｏｌｉ　Ｃ，Ｅｓｐａｄａ　Ｒ，Ｈｏｗｅｌ
ｌ　ＪＦ、　Ｙａｍａｍｏｔｏ　Ｔ、　Ｚａｌｅｓｋｉ
　ＨＩ。

Ｍｉｌｌｅｒ　Ｌ、　Ｆｒｏｍｍｅｒ　Ｐ、　Ｆｅｄｌ
ｍａｎ　Ｌ、　Ｈｅｎｒｙ　ＪＦ、　Ｔｉｌｌｑｕｉｇ
ｔ　Ｒ。

Ｃｏｏｋ　Ｇ、　、Ｄａｓｋａｌ　Ｙ：　Ｎ　Ｅｎｇｌ
　Ｊ　Ｍｅｄ　１９８１．３０５：１１９５゜（２１）
　Ｙｏｕｎｇ　ＪＢ、　Ａｙｕｓ　ＪＯ，’＋Ｍｉ１１
ｅｒ　ＬＫ、　Ｗｅｂｓｔｅｒ　ＲＯ，Ｍｉｌｌｅｒ　
ＲＲ。

Ｔｅｒｍａｎ　　ＤＳ：　　Ｃ１ｒｃｕｌａ仁ｉｏｎ　
　１９８１．　６４：３２５　　ａｂｓｔｒａｃｔ、’
（２２）　Ｍａｒｔｉｎ、　ＲＲ，Ｃｒｏｗｄｅｒ、　
ＪＧ、　Ｗｈｉｔｅ　ＡＪ、　Ｊ、　Ｉ＋ｎｍｕｎｏ１
．９９２６９．１９６７゜（２３）　Ｇｕｓｔａｆｓｅ
ｎ、　ＧＴ、　Ｓｔａｌｅｎｈｅｉｍ　Ｇ、　Ｆｏｒｓ
ｇｒｅｎ　Ａ、　５ｊｏｑｕｉｓｔ、　Ｊ。

Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１００，５３０，１９６８゜（２
４）　）（ｅｃｚｋｏ、　ＰＢ、　Ｇｒｏｖ　Ａ、　Ｏ
ｅｄｉｎｇ　Ｐ、　Ａｃｔａ　Ｐａｔｈｏｌ、　Ｍｉｃ
ｒｏｂｉｏｌ。

５ｃａｎｄ、　　５ｅｃｔｉｏｎ　Ｊ　　８１．　７３
１．１９７３゜（２５）　Ｇｕｓｔａｆｓｅｎ、　ＧＴ
、　５ｊｏｑｕｉｓｔ　Ｊ、　Ｓｔａｌｅｎｈｅｉｍ、
　Ｇ、、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ。

９８、１１７８．　１９６７゜ （２６）Ｍａｓｕｄａ、５ａｎｄ、Ｋｏｎｄｏ工、）ｉ
ｉｃｒｏｂｉｏｌ、Ｉ＋ｎｍｕｎｏ１．２３，１２２３
，１９７９゜（２７）　Ｋｒｏｎｖａｌｌ、　Ｇ　ａｎ
ｃｌＧｅｖｕｒｚ、　Ｃ１１ｎ、　Ｅｘｐ９．１＋ｎｍ
ｕｎｏ１．７．２１１．１９７０゜（２８）　Ｓｔａｌ
ｅｎｈｅｍｉｎ、　Ｇ、　、　Ａｃｔａ、　Ｐａｔｈｏ
ｌ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、５ｃａｎｄ、５ｅｃｔｉｏｎ
Ｂ、　　７９．　６６５．　１９７１゜（２９）　５ｊ
ｏｑｕｉｓｔ、　Ｊ　ａｎｄ　Ｓｔａｌｅｎｈｅｉｍｒ
　ｃ、、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１０３．４６７１
９６９゜（３０）　５ｅａｌ＠ｎｈｅｉｍ、　Ｇ、　Ｇ
ｏｔｚｅ　Ｏ，Ｃｏｏｐｅｒ　Ｎ、　５ｊｏｑｕｉｓｔ
　Ｊ、　Ｍｕｌｌｅｒ−Ｅｂｅｒｈａｒｄ　Ｈ，Ｉｍｍ
ｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　１０．５０１，１９７３
゜（３１）　Ｓｔａｌｅｎｈｅｉｍ　Ｇ、　Ｍａｌｍｈ
ｅｄｅｎ−Ｅｒｉｃｋｓｓｏｎ、工、　ＦＥＢＳ　Ｌｅ
ｔｔ、　１４８２．１９７１゜（３２）　Ｓｔａｉｅｎ
ｈｅｉｍ　Ｇ　ａｎｄ　Ｃａ５ｔｅｎｓｓｏｎ　Ｓ、　
ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ、　１４，７９．１９７１゜（３３
）　Ｌａｎｇｏｎｅ、　ＪＪ、　Ｉｎ　Ｍｅｔｈｏｄｓ
　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｐｇｙ、　、Ａｃａｄｅｍｉｃ
　Ｐｒｅｓｓ。

Ｉｎｃ、　Ｎ、Ｙ、、　７０．３５６．１９８Ｑ。

（３４）　Ｌａｎｇｏｎｅ、　ＪＪ、　、Ｊ、■＋ｎｎ
＋ｕｎｃ＋１．　Ｍｅｔｈｏｄｓ、　、３４．９３．１
９８０ｃ。

（３５）　Ｌａｎｇｏｎｅ、　ＪＪ、　Ｂｏｙｌｅ、　
ＭＤＰ、　Ｂｏｔｓｏｓ、　、Ｔ、、　Ｊ、　Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ＋　１２１゜３３３．１９７８゜ （３６）　Ｌａｎｃｅｔ　Ｄ、、　Ｉｓｅｎｍａｎ　Ｄ
、、　５ｊｏｄａｈｌ、Ｊ、、　５ｊｏｑｕｉｓｔ　、
Ｔ、、　Ｐｅｃｈｔ　１．。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏ
ｍｍｕｎ、　８５．６０８．１９７８゜（３７）　Ｈａ
ｌｌｇｒｅｎ、　Ｒａｎｄ　Ｓｔａｌｅｎｈａｉｍ、　
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、　３０．７５５．１９７６゜１
２９− （３Ｂ）　Ｈａｌｌｇｒｅｎ、　Ｒａｎｄ　Ｓｔａｌｅ
ｎｈｅｉｍ　Ｇ、、　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　３５．１
３．１９７８゜（３９）　Ｍａｒｔｉｎ　ＲＲａｎｄ　
Ｗｈｉｔｅ　Ａ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１０２，
４３７．’　１９６９゜（４０）　’Ｃａｍｐｂｅｌｌ
　Ｄ’、Ｓ、、　Ｌｕｅｓｃｈｅｒ　Ｅ、、　ａｎｄＬ
ｅｒｍａｎ　Ｌ、Ｓ、’、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ’。

５ｃｉｅｎｃｅｓ　３７：５７５．４９５１゜（４１）
　Ｓｊｏｇｒｅｎ　Ｈ，Ｏ，、、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ　
１．、　Ｂａｎ５ａｌ！ｌｉ、ｃ、、　ａｎｄ　Ｈｅｌ
ｌｓｔｒｏｍＫ、Ｅ、、　　Ｐｒｏｃ、　　Ｎａｅ’１
．　　Ａｃａｄ、　　５ｃｉｅｎｃｅｓ　　６８：１３
７２．　１９７１゜（４２）　Ｆａｌｄｔ　Ｒ，、Ａｎ
ｋｅｒｓｔ　Ｊ、、Ｉｎｔ、　Ｊ、　Ｃａｎｃｅｒ　２
６：３０９．１９８０゜（４３）　Ｄｏｒｓｅｔｔ、　
Ｉｏａｃｈｉｍ、　５ｔｏｌｂａｃｋ、　Ｉｎｃ、　Ｊ
’、Ｃａｎｃｅｒ　１６：７７９．’　１９７５゜（４
４）　Ｋａｂａｔ、　ＬＡ、、　Ｍａｙｅｒ、　Ｍ、Ｍ
、、’　ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙＣ，Ｃ，、Ｔｈｏｍａｓ、　Ｓｐｒｉｎｇ
ｆｉｅｌｄ、　ＩＬ、　１９４８．　ｐ、　４８０゜（
４５）　Ｂｅｈｒｉｎｇ；　Ｋｉｔａｓａｔｏ’、　Ｄ
ｔｓｃｈ、　Ｍｅｄ、　Ｗｏｃｈｅｒｉｓｃｈｒ、　１
６：１１１３．　’１８９０゜（４６）　ＭｃＫｈａｎ
ｎ、　Ｃ，Ｆ、’；　に”　Ｉｎｆｅｃｔ、”Ｄｉｓ、
　５２：２６８．１’９３３゜（４７）　ＭｃＫｈａｎ
ｎ、　Ｃ，Ｆ、、　Ｇｒｅｅｎ、　Ａ、Ａ、；　Ｃｏａ
ｄｙ、　Ｈ，Ｊ、　Ｐｅｄｉａｔｒ、　６：６０３．１
９３５゜（４８）　　Ｅｌｅｙ、　　Ｒ，Ｃ，；　Ｇｒ
ｅｅｎ、　　Ａ、Ａ、；　　ＭｃＫｈａｎｎ、　　Ｃ，
Ｆ、、　　Ｊ、　　Ｐｅｄｉａｔｒ、　８：１３５゜１
９３６゜ （４９）　５ｊｏｋｅｓ、　Ｊ、、　Ｊｒ、、　Ｍａｒ
ｉｒ、　Ｅ、Ｐ、；　Ｇｅ１ｌｉｓ、　Ｅｉ’、！３．
．　、ｔ、　Ｃ１１ｎ。

Ｉｎｖｅｓｔ、　　２３：５３１．　１９４４゜（５０
）　Ｏｒｄｍａｎ、　Ｃ，Ｗ、；　Ｊｅｎｎｉｎｇ、　
Ｃ，Ｇ、、　Ｊｒ、；　Ｊａｎｅｗａｙ’、　Ｃ，Ａ、
、　ｊ、　Ｃ１４ｎ。

Ｉｎｖｅｓｔ、　　２３：５４１．　１９４４゜（５１
）　５ｔｏｋｅｓ、　Ｊ、；　Ｎｅｅｆｅ”、”　Ｊ、
Ｒ，、”Ｊ、Ａ、Ｍ、Ａ、　１２７：１４４’、　１９
４５゜（５２）　Ｇｅ１ｌｉｓ、’Ｓ、Ｓ、；　５ｔｏ
ｋｅｓ、　Ｊ、、　’Ｊｒ、；　Ｂｒｏｔｈｅｒ、　Ｇ
、Ｍ、；　Ｈａｌｌ、　’Ｗ、Ｍ弓Ｇｉ１ｍｏｒｅ、　
）１．Ｒ弓Ｂｅｙｅｒ＋　Ｅ、；　Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ
、　Ｒ，Ａ、、　Ｊ、Ａ’、Ｍ、Ａ。

１２８：１０６２．１（＋４５゜ １３０− （５３）　Ｂｒｕｔｏｎ、　Ｏ，Ｃ，、Ｐｅｄｉａｃｒ
ｉｃｓ　９ニア２２．１９５２゜（５４）　Ｅｉｂｌ、
　Ｍ、、　Ｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ：　
　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｕｓｅｓ
ｏｆ　Ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏ
ｎｓ　（ｅｄｓ、　Ｂ、Ｍ、　Ａｌｖｉｎｇ、　Ｊ、Ｓ
。

Ｆｉｎａｌｙｓｏｎ）、　Ｕ、Ｓ、　Ｄｅｐａｒｔｍｅ
ｎｔ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ、　ａｎｄ　Ｈｕｍａｎ　５
ａｒｖｉｃｅｓ。

ｐｐ、２３．１９７９゜ （５５）　０ｃｈｓ、　Ｈ，Ｄ、、　Ｉｎ　Ｉｍｍｕｎ
ｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ：　　Ｃｈａｒａｃｔａｒｉｓｔ
ｉｃｓ　ａｎｄ　Ｕｓｅｓｏｆ　Ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕ
ｓ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ　（ａｄｓ、　Ｂ、Ｍ、
　Ａｌｖｉｎｇ、　Ｊ、Ｓ。

Ｆｉｎａｌｙｓｏｎ）、　Ｕ、Ｓ、　Ｄｅｐａｒｔｍｅ
ｎｔ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ、　ａｎｄ　Ｈｕｍａｎ　５
ｅｒｖｉｃｅｓ。

ｐｐ、　９．１９７９゜ （５６）　Ｃｏｎｄｉｅ、　ＲＭ、　Ｉｎ　Ｉｍｍｕｎ
ｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ：　　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔ
ｉｃｓ　ａｎｄ　Ｕｓｅｓｏｆ　　Ｉｎｔｒａｖｅｎｏ
ｕｓ　　Ｐｒｅｐａｒａヒ１ｏｎｓ　　（ａｄｓ、　　
Ｂ、Ｍ、　　Ａｌｖｉｎｇ、　　Ｊ、Ｓ。

Ｆｉｎａｌｙｓｏｎ）、　Ｕ、Ｓ、　Ｄｅｐａｒｔｍｅ
ｎｔ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ、　ａｎｄ　Ｈｕｍａｎ　５
ｅｒｖｉｃｅｓ。

ｐｐ、　１７９．１９７９゜ （５７）　５ｋｖａｒｉｌ、　Ｆ、、　Ｂａｒａｎｄｕ
ｎ、　Ｓ、、　Ｉｎ工ｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ：
　　Ｃｈａｒａｃｔｅｒ−１ｓｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｕｓ
ｅｓ　ｏｆ　Ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ　Ｐｒｅｐａｒａ
ｅｉｏｎｓ　（ｅｄｓ、　Ｂ、Ｍ。

Ａｌｖｉｎｇ、　Ｊ、Ｓ、　Ｆｉｎａｌｙｓｏｎ）、　
Ｕ、Ｓ、　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｉ（ｅａｌ仁
ｈ＋　ａｎｄＨｕｍａｎ　５ｅｒｖｉｃｅｓ、　ｐｐ、
　　２０１．１９７９゜（５８）　５ｅｉｌｅｒ、　Ｐ
Ｒ，Ｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌ、１ｒｕｓ：　　
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｕｓｅｓｏ
ｆ　、Ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏ
ｎｓ　（ａｄｓ、　Ｂ、Ｍ、　Ａｌｖｉｎｇ、　Ｊ、Ｓ
。

Ｆｉｎａｌｙｓｏｎ）、　Ｕ、Ｓ、　Ｄｅｐａｒｔｍｅ
ｎｔ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ、　ａｎｄ　Ｈｕｗｎａｎ　
５ｅｒｖｉｃｅｓ。

ｐｐ、　２０７．１９７９゜ （５９）　Ｆｕｎａｋｏｇｈｉ、　Ｓ、、　Ｉｎ　Ｉｍ
ｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ：　　Ｃｈａｒａｃｔｅｒ
ｉｓｔｉｃｓ　ａｎｄＵｓｅｓ　ｏｆ　Ｉｎｔｒａｖｅ
ｎｏｕｓ　ｐｒｅｐａｒａｔｔｏｎｓ　（ｅｄｓ、　Ｂ
、Ｍ、　Ａｌｖｉｎｇ、　Ｊ、Ｓ。

Ｆｉｎａｌｙｓｏｎ）、　Ｕ、Ｓ、　Ｄｅｐａｒｔｍｅ
ｎｔ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ、　ａｎｄ　Ｈｕｍａｎ　５
ｅｒｖｉｃｅｓ。

ｐｐ、　２１９．１９７９゜ （６０）　Ｌｉｎｄｓｔｒｏｍ、　Ｇ、Ａ、＋　Ａｃｔ
ａ　Ｍａｄ、　５ｃａｎｄ、　５ｕｐｐｌ、２２．１．
１９２７゜（６１）　ｄｅ　Ｃａｒｖａｌｈａ、　Ｓ、
、　Ｃａｎｃｅｒ、　１６．３０６．１９６３゜（６２
）　５ｅｋｌａ、　Ｂ、、　１ｌｏｌｅｃｋｏｖａ、　
Ｅ、、　Ｊａｎｅｌｅ、　Ｊ、、　Ｌｉｂａｎｓｋｙ、
　Ｊ、。

Ｈｎｅｖｋｏｖｓｋｙ、　Ｏ，、Ｎｅｏｐｌａｓｍａ　
１４．６４１．１９６７゜（６３）　Ｔｓｉｒｉｍｂａ
ｓ、　Ａ、Ｄ、、　Ｐｉｃｈｌｍａｙｒ、　Ｒ，、Ｈｏ
ｒｎｉｎｕｎｇ、　Ｂ、、　Ｐｆｉｓｔｅｒｅｒ。

Ｈ，、Ｔｈ１ｅｒｆｅｌｄｅｒ、　Ｓ、、　Ｂｒｅｎｄ
ｅｌ、　Ｗ、、　ａｎｄ　５ｔｉｔｃｈ、　Ｗ、、　Ｋ
１１ｎＷｓｃｈｒ、４６．５８３．１９６８゜（６４）
　Ｍａｒｓｈ、　Ｂ、、　Ｆｌｙｎｎ、　Ｌ、　ａｎｄ
　Ｅｎｎｅｋｉｎｇ、　Ｗ、、　Ｊ、　Ｂｏｎｅ　ａｎ
ｄ　ＪｏｉｎｔＳｕｒｇｅｒｙ　５４Ａ、　１３６７、
１９７２゜（６５）　Ｐａｒｋｓ、　Ｌ、Ｃ，、Ｓｍ１
ｔｈ、　Ｗ、Ｊ、、　Ｂｅｅｂｅ、　Ｂ、、　Ｗｉｎｎ
、　Ｌ、、　Ｒａｆａｊｋｏ。

Ｒ，、Ｒｏｌｌｅｙ、　Ｒ，、ａｎｄ　Ｗｉｌｌｉａｍ
ｓ　Ｇ、、　Ｍｅｌｖｉｌｌａ、　Ｐｒｏｃ、　Ａｍｅ
ｒ。

Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　ａｎｄ　Ａｍｅｒ、　Ｓｏｃ
、　Ｃ１１ｎ、　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ　１６．１３４．１
９７５゜（６６）　Ｌａ５ｚｌｏ、　Ｊ、、　Ｂｕｃｋ
ｌｅｙ、　Ｃ，Ｅ、、　ａｎｄ　Ａｍｏｓ、　Ｄ、Ｂ、
、　Ｂｌｏｏｄ、　３１゜１０４、１９６８゜ （６７）　Ｄｊｅｒａｓｓｉ、　１．、　Ｃ１１ｎｉｃ
ａｌ　Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ　７＋　２７２．１９６８
゜（６８）　Ｈｅｒｂｅｒｍａｎ、　Ｒ，Ｂ、、　０ｒ
ａｎ、　Ｍ、Ｅ、、　Ｒｏｇｅｎｔｉｎｅ、　Ｇ、Ｎ、
＋　ａｎｄ　Ｆａｈｅｙ。

Ｊ、１．、、　Ｃａｎｃｅｒ　２８．３６５．１９７１
゜（６９）　Ｂｒｉｔｔｉｎｇｈａｍ、　Ｔ、Ｅ、、　
ａｎｄ　Ｃｈａｐｌｉｎ、　Ｈ，、Ｃａｎｃｅｒ　１３
，４１２１９６０゜（７０）　５ｋｕｒｋｏｖｉｃｈ、
　Ｓ、Ｖ、、　Ｋ１５ｌｊａｋ、　Ｎ、Ｓ、、　Ｍａｃ
ｈｏｎｋｏｖａ、　Ｌ、Ａ、、　ａｎｄＢｅｇｕｎｅｎ
ｋｏ、　Ｓ、Ａ、、　Ｎａｔｕｒｅ　２２３．５０９１
９６９゜（７１）　５ｋｕｒｋｏｖｉｃｈ、　Ｓ、Ｖ、
、　Ｍａｋｈａｏｎｏｖａ、　Ｌ、Ａ、、Ｒｅｚｎｉｃ
ｈｅｎｋｏ、　Ｆ、Ｍ、。

ａｎｄ　Ｃｈｅｒｖｏｎｓｋｉｙ、　Ｇ、１．、　Ｂｌ
ｏｏｄ　３３．１８６．１９６９゜（７２）　Ｎｇｕ、
　Ｖ、、　Ｂｒ１ｍ、　Ｍｅｄ、　Ｊ、　１．３４５．
１９６７゜（７３）　Ｇｈｏｓｅ、　Ｔ、、　ａｎｄ　
Ｎｉｇａｒｎ、　Ｓ、Ｐ、、　Ｃａｎｃｅｒ　２９．１
３９８．１９７２゜（７４）　Ｌｅｖｙ、　Ｒ，、Ｈｕ
ｒｗｉｔｚ、　Ｅ、、　Ｍａｒｏｎ、　Ｒ，、ａｎｄ　
５ｅｌａ、　Ｍ、、　ＣａｎｃｅｒＲｅｓ、　３５．　
１１８２．４９７５゜（７５）　Ｖｉａｌ、　Ａ、Ｂ、
、　ａｎｄ　Ｃａ１ｌａｈａｎ、　Ｗ、、　Ｃａｎｃｅ
ｒ　１０．９９９．１９５７゜（７６）　Ｍｏｏｌｔｏ
ｎ、　Ｆ、Ｌ、、　ａｎｄ　Ｃｏｏｐｅｒｂａｐｄ、　
Ｓ、Ｒ，、５ｃｉｅｎｃｅ、　１６９．６８１９７０゜
（７７）　Ｐａｒｋｅｒ、　Ｃ，Ｗ、、　Ｐｈａｒｍａ
ｃｏｌ、　Ｒｅｖ、　２５．３２５．１９７３゜（７８
）　Ｓｅｇｅｒｌｉｎｇ、　Ｍ、、　０ｈａｎｉａｎ、
　Ｓ、）１．、　ａｎｄ　Ｂｏｒｓｏｓ、　Ｔ、、　Ｃ
ａｎｃｅｒ　　Ｒｅｓ。

３５、３１９５．１９７５゜ （７９）　Ｒｕｄｄｙ　Ｓ、、　Ｇｉｇｌｉ　Ｉ、　Ａ
ｕ５ｔｅｎ　ＫＦ：　Ｎ、　Ｅｎｇｌ　Ｊ　Ｍｅｄ　２
８７：４８９゜５４５．５９２，６４２．１９７２゜ （８０）　Ｗｉｌｓｏｎ　ＭＲ，Ａｒｒｏｙａｙｅ　Ｃ
Ｍ、　Ｎ４ｋａｎｕｒａ　ＲＭ、　Ｖａｕｇｈｎ　ＪＨ
，Ｔａｎ　ＥＭ：Ｃ１１ｎ　Ｅｘｐ　Ｉｍｍｕｎｏｌ　
２６：１１．１９７６゜（８１）　Ｖｅｒｈａｅｇｅｎ
　Ｈ，ＤｅＣｏｃｋ　Ｗ、　ＤｅＣｔｅｅ　Ｊ、　Ｖｅ
Ｔｂｒｕｇｇｅｎ　Ｆ：　Ｃａｎｃｅｒ３８：１６０８
．１９７６゜ （８２）　Ｒｙａｎ　ＧＢ、　Ｍａｊｎｏ　Ｇ：　、ｋ
ｎ　Ｊ　Ｐａｔｈｏｌ　８６：１８３．１９７７゜（８
３）　、１ｔｕｇｌｉ　ＴＥ、　Ｍｕｌｌｅｒ−Ｅｂｅ
ｒｈａｒｄ　ＨＪ：　”Ａ（ｉｖａｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｉ
ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、”２６、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ＋　
Ａｃａｄｅｍｉｃ、Ｐｒｅｓｇ、　１９７８．　ｐｐ、
　ｌ。

（８４）　Ｃｏｃｈｒａｎｅ　ＣＧ、　Ｍｕｌｌｅｒ−
Ｅｂａｒｈａｒｄ　ＨＪ：　Ｊ、　Ｅｘｐ　Ｍｅｄ　１
２７：３７１．１９６８゜１３３− （８５）　　Ｌｅｐｏｗ　　ＩＨ，Ｗｉｌｌｍ−Ｋｒａ
ｔｓｃｈｍｅｒ　　Ｋ、　　Ｐａ仁ｒｉｃｋ　　ＲＡ、
　　Ｒｏｓｅｎ　　Ｒ３，Ａｍ　　ＪＩ’ａｔｈｏｌ　
６１：１３．１９７０゜（８６）　９ａｌｌｏｔａ　Ｅ
ｌ、　Ｍｕｌｌｅｒ＝Ｅｂｅｒｈａｒｄ　ＨＪ：　Ｊ　
Ｅｘｐ　Ｍｅｄ　１３７：１１０９．１９７３（８７）
　Ｊｏｈｎｓｏｎ　ＡＲ，Ｈｕｇｌｉ　ＴＥ、　Ｍｕｌ
ｌｅｒ−Ｅｂｅｒｈａｒｄ　ＩＩＪ：　工ｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｙ２８：１０６７、１９７５゜ （８８）　Ｈｕｇｌｉ　ＴＥ：　”Ｔｈｅ　Ｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｐｈｓｙｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｈｕ
ｍａｎ　ＰｌａｓｍａＰｒｏｔｅｌｎｓ、”　Ｎｅｗ　
Ｙｏｒｋ＋　Ｐｅｒｇａｍｏｎ　Ｐｒｅｓｓ、　１９７
９　ｐｐ、　２２５゜（８９）　Ｂｏｋｉｓｃｈ　ＶＡ
、　Ｍｕｌｌｅｒ−Ｅｂｅｒｈａｒｄ　ＨＪ＋・Ｊ　Ｃ
１１ｎ　Ｉｎｖｅｓｔ　４９：２４２７．１９７０゜（
９０）　Ｃｈｅｎｏｗｅｔｈ　ＤＥ、　Ｈｕｇｌｉ　Ｔ
Ｅ：　Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ　１２４：’１５１７．１９
８０゜（９１）　Ｈｕｇｌｉ　ＴＥ：　Ｊ　Ｂｉｏｌ　
Ｃｈｅｍ　２５０：８２９３．１９７５゜（９２）　Ｆ
ａｒｎａｎｄｅｚ　ＨＮ、　Ｈａｇｌｉ　ＴＥ＋　Ｊ　
Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ　２５３：６９５５．１９７８゜（
９３）　Ｋａｓｓｅｌ、　Ｒ，Ｌ、、　Ｏｌｄ、　Ｌ、
Ｊ、、　Ｃａｒｓｖｅｌｌ、　Ｅ、Ａ、、　Ｆｉｒｅ、
　Ｎ；Ｃ，、ＨａｒｄｙＷ、Ｄ、、　Ｊ、　Ｅｘｐ、　
Ｍｅｄ、１３８．９２５．１９７３゜（９４）’Ｃｏｈ
ｎ　Ｅ、Ｊ、、　Ｊ、Ａｍｅｒ　Ｃｈｅｒｎ　Ｓｏｃ　
６８：４５９．１９４６゜（９５）　Ｋ１５ｔｌｅｒ　
Ｐ、　ａｎｄ　Ｎｉｔｓｃｈｍａｎｎ　Ｈｓ、、　Ｖｏ
ｘ　Ｓａｎｇ　７：４１４．１９６２゜（９６）　Ｋｉ
ｌｌｉｎｇｓ＋ｗｏｒｔｈ、　Ｌ、Ｍ、　ａｎｄ　Ｊ、
　５ａｖｏｙ、　１９７２　Ｍａｎｕａｌ　ｎｅｐｈｅ
ｌｏｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　ｉｍｍｕｎ
ｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｄｅｔｅｒ＋ｎ１ｎａｔｉｏｎ　
ｏｆ　４ｍｙｎｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓＩｇＧ、　Ｉ
ｇＡ’ａｎｄ　ｔｇＭ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｓｅｒｕｍ
　Ｃ１１ｎ　Ｃｈｅｍ’　１８＋３３５゜（９７）　Ｍ
ａｎｃｉｎｉ、　Ｇ、、　Ａ、Ｏ，Ｃａｒｂｄｎａｒａ
　ａｎｄ　Ｊ、Ｆ、　Ｈｅｒａｍａｎｓ、　１９６５Ｉ
ｎ＋ｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉ
ｏｎ　ｏｆ　ａｎｔｉｇｅｎｓ　ｂｙ　ｓｉｎｇｌｅ　
ｒａｄｉａｌＩｍｎｉｕｎｏｄｉｆｆｕｓｉｏｎ、Ｉｍ
ｍｕｎｏｃｈｅｍ、２：２３５゜１３４− （９８）　　Ｒｏｍｅｒ、　Ｊ、、　Ａ、　Ｇａｒｄｉ
　ａｎｄ　Ｐ、　Ｋ１５ｔｌｅｒ、　１９７９　Ａｓ５
ａｙ　ｏｆ　ａｎｔｉ−ｃｏｔｎｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ
　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　５ｏｌｕｔｉｏｎｓ　ｏｆ
　ｉｍ＋ｎｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ。

Ｄｅｖｅｌｏｐ、　Ｂｉｏｌ、　５ｔａｎｄａｒｄ　４
４：１４７゜（９９）　　Ｌａｅｍｍｌｉ、　Ｕ、に、
　１９７０　Ｃｌｅａｖａｇｅ　ｏｆ　５ｔｒｕｃｔｕ
ｒａｌ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｄｕｒｉｎｇａｓｓｅｍｂ
ｌｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈｅａｄ　ｏｆ　ｂａｃｋｔｅｒ
ｉｏｐｈａｇｅ　Ｔ４．　Ｎａｔｕｒａ　２３２：５２
゜（１００）　Ｉｓｈｉｙａｍａ、　Ｈ，、Ｋ、　Ｏｋ
ｕｙａｍａ、　Ｋ、　Ｍａｓｕｄａ　ａｎｄ　Ｊ、　Ｙ
ａｓｕｄａ、　１９７８Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｈｕｍ
ａｎ　ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ　ｐｒｅｐａｒａ
ｔｉｏｎｓ　ｏｎ　Ｆｃ　ｒｏｓｅｔｔｅｆｏｒｍａｔ
ｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ａｎｔｉ−Ｄ　ｃｏａｔｅｄ
　ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓ　ａｎｄ　ｌｙｍｐｈｏｅ
ｙｔｅｓ。

Ｚ、Ｉｍｍｕｎ、−Ｆｏｒｓｃｈ　　１５４：３８７゜
（１０１）　Ｗｅｂｓｔｅｒ、　Ｒ，Ｏ，ａｎｄ　Ｐ、
Ｍ、　Ｈｅｎ５ｏｎ　１９７８　Ｒａｐｉｄ　ｍｉｃｒ
ｏａｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｏｆ　ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ
　ｅｘｏｃｙｔｏｓｉｓ、工ｎｆｌａｔｎｍａｔｉｏｎ
　３：１２９゜（１０２）　Ａｎｄｅｒｓｏｎ、　Ｄ、
Ｃ，、Ｍ、Ｓ、Ｅｄｗａｒｄｓ　ａｎｄ　Ｃ，Ｌ、　Ｂ
ａｋｅｒ　１９８０　Ｌｕｍ１ｎｏｌ−ｅｎｈａｎｃｅ
ｄ　ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ　ｆｏｒ　ｅ
ｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｙｐｅ　Ｉ工Ｉｇｒｏｕ
ｐ　Ｂ　５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ　ｏｐｓｏｎｉｎ
ｓｌｎ　ｈｕｍａｎ　８ｅｒａ、　Ｊ、　Ｉｎｆｅｃｔ
。

Ｄｉｓ、１４１：３７０゜ （１０３）　Ｊｏｂｎｅｔｏｎ、　Ｒ，Ｂ、、　Ｊｒ、
、　Ｊ、Ｅ、Ｌｅｈｍｅｙｅｒ　ａｎｄ　Ｌ、Ａ、　Ｇ
ｕｔｈｒｉｅ、　１９７６Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ
　５ｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ａｎｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈｅ
ｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ　ｂｙｈｕｍａｎ　ｍｏ
ｎｏｃｙｔｅｓ　ｄｕｒｉｎｇ　ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓ
ｉｓ　ｉｎ　ｃｏｎｔａｃｔ　ｗｉｔｈｓｕｒｆａｃｅ
　ｂｏｕｎｄ　ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ　Ｇ、　
Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１４３：１５５１゜（１０
４）　Ｌｅｖｙ　Ｐ、Ｃ，、Ｓｈａｗ、　Ｇ、Ｍ、、　
ａｎｄ　ＬｏＢｕｇｌｉｏ　Ａ、Ｆ、、　Ｊ、　Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ。

Ｖｏｌ、　１２３．　Ｎｏ、　　２．５９４．１９７９
゜（１０５）　Ｋｏｒｅｎ、　Ｈ，Ｓ、　ａｎｄ　Ｗｉ
ｌｌｉａｍｓ　Ｍ、Ｓ、、　Ｊ、工ｍｍｕｎｏ１．　Ｖ
ｏｌ、１２１゜Ｎｏ、　　５．１９５６．　１９７８゜

【図面の簡単な説明】

第１図は、免疫グロブリンに富んだ流出液（ＥＩＥ）を
調製するに有用な強制流電気泳動のフロー図である。 第２図は強制流電気泳動セルの展開部分図である。 第３図は、腫瘍をもっている血清の酸処理後の、ショ糖
密度勾配フラクションのＣ１ｑ結合を示すグラフである
。 第４図は、ＰＡＣＣ潅流後の血清から単離された、高分
子量イヌＩｇＧ　Ｋついてのクーマシプルーで染色匂だ
ＰＡＧＥプロフィルを示す図である。 第５図は、ＰＡＣＣ潅流後の血清から単離したプロティ
ンＡＫついてのクーマシプルーで染色したＰＡＧＦｉプ
ロフィルを示す図である。 ８・・・セル １０・・・エンドプレート １２・・・スペーサ １２′・・・内部緩衝液スペーサ １２’・・・透析剤スペーサ ｌｆ′・・・血漿スペーサ １４・・・コネクタ １６・・・膜 １８・・・凹部 ：：Ｉ１１″”ｌ′：；５ｙｌｙ４″パ。 ２８・・・外部緩衝液容器 ３２・・・内部緩衝液容器　　　　　　３４・・・外部
緩衝オーバーフローライン４０・・・グロブリンポンプ ４　・・・血漿循環、でンプ ４６・・・血漿プレヒータ ー　１３７− 図面の浄書（内容に変更なし） 手続補正書（方式） 昭和５８年６月１ｂ日 特許庁長官　若　杉　和　夫　殿 １、事件の表示 昭和５８年　特　許　願第６１５１０号２、発明の名称 腫瘍免疫製剤およびその製造方法 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 住　所　アメリカ合衆国、７７０３０セリス、ヒヱース
トン。 モーサンド　アヴエエユ−１２００番地テキサス　メデ
ィカル　センター 名称　　ベイラー　カレンダ　オブ　メデイスン代表者
ニー、オー、ジョンソン ４、代　理　人 ５、補正の対象 （１）　　願書の「特許出願人」の欄 （２）図面 （３）　　委任状及び同訳文 ム　補正の内容 （１）特許出願人会社の代表音名を記載した願書を提出
する。 （２）図面の浄書（内容に変更なし。）を提出する０ （３）　　委任状及び同訳文を提出する。 ７　添付書類の目録 （１）　　願　　　　書　　　　　　　　　　１通（２
）　　　図　　　　　　　面　　　　　　　　　　　　
　　　　１通（３）　　委任状及び同訳文　　　　　　
　　　　　　　各１通　２−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　正常なまたは腫瘍をもっている宿主の血漿を含み
   、以下の（ａ）〜（４Ｉ）の特性（＆）　　主としてＩ
   ｇＧおよびＩｇＭを含み、少量のアルブミンを有する、 （ｂＪ　　ショ糖密度勾配で７８以上の沈降フラクショ
   ンでＣ１ｑ結合を有する、 （ｃ）　　腫瘍をもっている宿主に注入したとき、殺腫
   瘍反応を生じる、 （ｄ）　　血漿の強制流電気泳動に由来する未処理の富
   化免疫グロブリンに比べて、減少したＩｇＧ　、　Ｉｇ
   Ｍおよび免疫複合体レベルを有し、また、ショ糖密度勾
   配の７８以上の沈降プラクジョンで増加したＣ１ｑ結合
   を有する、（ｓ）　　該血漿が腫瘍をもった宿主からの
   ものであるときは、腫瘍関連抗体のガ価が２０，０００
   以上である、 を有することを特徴とする腫瘍免疫製剤。 ２、正常なまたは腫瘍をもっている宿主に由来し、以下
   の（＆）〜（ｆ）の特性、 （＆）　　免疫グロブ＋）ｙＧと少量のＩｇＡを含み、
   実質的にＩｇＭおよび補体を含まない、（ｂ＞　°ショ
   糖密度勾配による７以上の沈降フラクションでｃｔｑ結
   合ＩｇＧの増加を示す、（０）　　非常に小さな抗補体
   活性を有する、（ａ）腫瘍をもっている宿主に投与した
   とき、殺腫瘍反応を生じる、 （ｅ）　　酸性化していないコーン分別したガンマ゛　
   グロブリンに比べて、ＩｇＧおよびＩｇＡの低レベル値
   を有し、７８以上のプラクジョンでＣ１ｑ結合の増加を
   示す、 （ｆ）　　製剤が腫瘍をもつでいるホストに１来すると
   きは腫瘍特異抗体の増加したレベルと低い抗補体を活性
   を示す、 を有することを特徴とする腫瘍免疫グロブリン製剤。 ３、次の（ａ）〜（ｋ）の特性 （ａ）　　ポリアクリルアミドゲル電気泳動により：：
   　冗：ｇ：　：Ｈ（ａおよびＬ鎖ならび、にプ（ｂｌ　
   　増加したＣ１４結合活性を伴ないショ糖密度勾配で７
   ８以上の重い沈降フラクション中に確認される、　　” （ｃ）酸性条件下により低い分子量のＣ１ｑ結合フラグ
   メントに解離する、 （４）　５％のポリエチレングリコールによシ、あるい
   は他の公知の免疫グロブリンの沈澱法によシ沈澱可能で
   あ、る、 （ｅ）　　抗補体活性をもつ、 （ｆ）　　Ｆｃ依存性リンパ球ロゼツト形成を抑制する
   、 （ｇ）　　好中球が集合し、ミエロペルオキシダーゼ、
   カテズシンおよび過酸化物アニオンを遊離することを促
   がす、 （ｈ）　　イヌ血赤球の凝集をひきおこす、（１）　　
   アナフイラトキシンの生成を伴ない補体活性を生じせし
   める、 （ｊ）　　イヌ胸腺癌細胞、ネズミＬ細胞およびヒト赤
   血球の非特異補体依存性細胞傷害を生“　　じせしめる
   、 （ｋ）　　補体非依存性機構により、血漿と、遊離のも
   しくは非共有結合的に結合したプロティンＡとの相互反
   応によシ生成し、処理前の血漿には存在しない、 を着することを特徴とするプロティンＡ−ＩｇＧ製剤。 ４、以下の（ａｌ〜（ｊ）の特性 （ａ）　　ポリアクリルアミドゲル電気泳動によシ主と
   してＩｇＭのＨ鎖およびＬ鎖ならびにプロティン人を含
   む （ｂ）　　増加したＣ１４結合活性を伴々いショ糖密度
   勾配で７８以上の重い沈降フラクション中に確認される
   、 （ｅ＞　　酸性条件下により低い分子量のＣ１ｑ結合フ
   ラグメントに解離する、 （ｄ）５％のポリエチレングリコールによシ、あるいは
   他の公知の免疫グロブリンの沈澱法により沈澱可能であ
   、る、 （ｅ）　　抗補体活性をもつ、。 （ｆ）　　Ｆｃ依存性リンパ球口、ゼット形成を抑制す
   る、 （ｇ）　　好中球がミエロペルオキシダーゼ、カテブシ
   ンおよび過酸化物アニオンを遊離することを促がす、 （ｈ）　　イヌ血赤球の凝集をひきおこす１、（ｉ）補
   体、の存在下にその抗原親和性を維持し、また、比較的
   増加した細胞傷害能力を有する、 （ｊｌ　　種々のそル比でプロティン人−，ＩｇＧ複合
   体の腫瘍をもっている宿主に注入したとき、殺腫瘍反応
   と腫瘍単化を生じる、 を有することを特徴とするプロティンＡ−ＩｇＧ製剤。 ５、　以下の（ａ）〜（ｆ、）の特性 （ａ）　　間接免疫螢光法で腫瘍関連抗体の力価が１０
   ．０００〜５０，０００である、 （ｂｌ　　放射性免疫検定法で、腫瘍関連結合レペ　５
   − ルが未処理のプラズマよシ８５％以上増加しており、 （、）　　ショ糖密度勾配の７８よシ大きい沈降フラク
   ションでＣ１４結合が増加する、 （ｄ）　　ボイドボリュームで増加し、セファデックス
   Ｇ−２００で含有フラクションでタンパクが減少する。 　　　　　　　　　・ （ｅ）　　腫瘍をもっている宿主に注入したとき、腫瘍
   免疫血漿が殺腫瘍反応を生じる、 （ｆｌ　　生の血漿に比較して、該腫瘍免疫血漿が低下
   したＩｇＧ　、　ＩｇＭ　、　Ｉｇ＆およびフイプリノ
   ゲンレベルを有し、重い沈降）９ラクシヨンでＣ１４結
   合の増加を示し、Ｇ−２００のクロマトグラフで、ボイ
   ドボリュームで増加したタンパクレベルを示し、含有フ
   ラクションでレベルカ低下スル、 を有することを特徴とする腫瘍免疫血漿製剤。 ６、血漿に電場をかけ、免疫グロブリンを含む富化７ラ
   クシヨンを有する流出液を血漿から得られるように電流
   を流して作動せしめ、　６− 抗原−抗体複合体を解離するに十分な酸性化またはアル
   カリ化を流出液に施して、腫瘍特異抗体を遊離せしめ、 流出液を中和し、ついで、 沈澱物を含む中和された流出液を濾過することを特徴と
   する特許請求の範囲第１項記載の製剤の製造方法。 ７、　正常なまたは腫瘍をもっている血清からのガンマ
   グロブリンを酸性化し、。 この酸性化したガンマグロブリンを中和し、中和したガ
   ンマグロブリンから沈澱物を除去することを特徴とする
   特許請求の範囲第２項記載の製剤の製造方法。 ８、　固定化したスタフィロコッカス・アウレクスプロ
   テインＡに潅流後の腫瘍をもっているまたは正常の血漿
   から、プロティンＡ−ＩｇＧ複合体を沈澱せしめて、こ
   のプロティンＡ−ＩｇＧ複合体を分離することを特徴と
   する特許請求の範囲第３項記載の製剤の製造方法。 ９、　プロティンＡとＩｇＧとを保温することを特徴と
   する特許請求の範囲第３項記載の製剤の製造方法。 １０、プロティンＡとＩｇＧとを保温し、ついで得られ
   たプロティンＡ　−ＩｇＧ複合体を単離することを特徴
   とする特許請求の範囲第３項記載の製剤の製造方法。 １１、　　ＩｇＧが腫瘍特異性をもっている特許請求の
   範囲第１０項記載の製造方法。 １２、正常なまたは腫瘍をもっているホストからの血清
   をデモサン中で保温し、ついでチモサンを除去すること
   を特徴とする製剤の製造方法。 （以下余白）