JPS5820599B2 - ペプチド誘導体の新規合成法 - Google Patents
ペプチド誘導体の新規合成法Info
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- JPS5820599B2 JPS5820599B2 JP2593276A JP2593276A JPS5820599B2 JP S5820599 B2 JPS5820599 B2 JP S5820599B2 JP 2593276 A JP2593276 A JP 2593276A JP 2593276 A JP2593276 A JP 2593276A JP S5820599 B2 JPS5820599 B2 JP S5820599B2
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明はキテトリプシンを用いたペプチド誘導体の新規
合成法に関するものである。
合成法に関するものである。
近年、生理活性を有する諸種のペプチドの合成が盛んに
なされているが、従来の有機化学的合成方法は、官能基
の保護、ラセミ化、副反応生起の防止等種々の操作が必
要で長鎖のペプチド合店は極めて困難を伴う。
なされているが、従来の有機化学的合成方法は、官能基
の保護、ラセミ化、副反応生起の防止等種々の操作が必
要で長鎖のペプチド合店は極めて困難を伴う。
一方、酵素によるペプチド合成はラセミ化を起さない、
官能基を保護する必要がない等、有機化学的合成法に比
較して有利な点が多々認められる。
官能基を保護する必要がない等、有機化学的合成法に比
較して有利な点が多々認められる。
したがって酵素によるペプチド合成に関する報告も多数
あるが、それらはジペプチドやトリペプチドに関するも
のであったり、また生成物が直ちに転位反応または加水
分解を受けて多数の副生物が生成したりして収率も悪く
、工業的目的で広範に使用しうる酵素によるペプチド合
成は皆無といってよい。
あるが、それらはジペプチドやトリペプチドに関するも
のであったり、また生成物が直ちに転位反応または加水
分解を受けて多数の副生物が生成したりして収率も悪く
、工業的目的で広範に使用しうる酵素によるペプチド合
成は皆無といってよい。
本発明はキモｌ−ＩＪプシンの処理しうる最大濃度の基
質を用いて、生成したペプチドを沈澱させて反応系外に
おくことによって、生成物の二次分解を防ぎ収率よく所
望のペプチドを合成する方法を提供するものである。
質を用いて、生成したペプチドを沈澱させて反応系外に
おくことによって、生成物の二次分解を防ぎ収率よく所
望のペプチドを合成する方法を提供するものである。
すでにキモｔ−ＩＪプシンをペプチド合成に用いること
は公知であるが、（Ｒ，Ｍ、Ｅｐａｎｄ 、Ｂｉ ｏｃ
ｈｅｍ。
は公知であるが、（Ｒ，Ｍ、Ｅｐａｎｄ 、Ｂｉ ｏｃ
ｈｅｍ。
Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｒｃｓ、Ｃｏｒｒｍｕｎ、 、 ３７
，３１３（１９６９） 。
，３１３（１９６９） 。
Ｊ、Ｆａｓｔｒｅｚ ｅｔ ａｌ、、Ｂｉｏｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙしる２０２５（１９７３）〕、それらは低濃度
で基質を反応させたり、Ｃ端側ペプチド（以下Ｃ−成分
と略記）に対してＮ端側ペプチド（以下Ｎ −成分と略
記）を大過剰に用いることにより生成物の二次分解を抑
えているため、それらの方法を工業的に応用することは
極めて困難であると思われる。
ｓｔｒｙしる２０２５（１９７３）〕、それらは低濃度
で基質を反応させたり、Ｃ端側ペプチド（以下Ｃ−成分
と略記）に対してＮ端側ペプチド（以下Ｎ −成分と略
記）を大過剰に用いることにより生成物の二次分解を抑
えているため、それらの方法を工業的に応用することは
極めて困難であると思われる。
本発明は、（１）基質のＣ−成分とＮ−成分をほぼ等モ
ル用いる、（２）各々の基質を高濃度で用いる、（３）
生成物が高収率で得られる点において従来の酵素による
ペプチド合成法より優れるものであり、工業的に利用可
能な新規合成法を提供する仲買する。
ル用いる、（２）各々の基質を高濃度で用いる、（３）
生成物が高収率で得られる点において従来の酵素による
ペプチド合成法より優れるものであり、工業的に利用可
能な新規合成法を提供する仲買する。
本発明に係るペプチドの新規合成方法は、ｐＨ８〜１１
の緩衝液中、温度２０〜５０℃においてキモトリプシン
の存在下、酵素が消化しうる最大・濃度の一般式Ｘ−Ａ
−Ｙで表わされるアミノ酸またはペプチド誘導体に、は
ぼ等モル比の一般式Ｈ−Ｂ−ＺまたはＨ−Ｂ−Ｃ−Ｚ’
で表わされるアミノ酸またはペプチド誘導体を反応させ
、反応液から生成物を沈澱させることにより生成物の二
次。
の緩衝液中、温度２０〜５０℃においてキモトリプシン
の存在下、酵素が消化しうる最大・濃度の一般式Ｘ−Ａ
−Ｙで表わされるアミノ酸またはペプチド誘導体に、は
ぼ等モル比の一般式Ｈ−Ｂ−ＺまたはＨ−Ｂ−Ｃ−Ｚ’
で表わされるアミノ酸またはペプチド誘導体を反応させ
、反応液から生成物を沈澱させることにより生成物の二
次。
分解を阻止しながら目的生成物を得るものである（ただ
し、上記一般式において各略号は以下の意義を有する。
し、上記一般式において各略号は以下の意義を有する。
Ｘは末端アミン保護基または末端アミ７基を保護された
アミノ酸残基もしくはペプチド残基、シＹはカルボン酸
エステル残基、 Ａはフェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファン
残基、 Ｂは任意のアミノ酸残基、ただしプロリンおよび酸性ア
ミノ酸を除く、 Ｃは任意のアミノ酸残基、ただしプロリンを除き、Ｂが
芳香族アミノ酸以外のときはＣは疎水性または芳香族ア
ミノ酸、 Ｚはアミドまたはヒドラジド基、 Ｚ′は水酸基、アミド基、ヒドラジド基、カルボン・酸
エステル残基あるいは保護されまたは保護されていない
アミノ酸またはペプチド残基、を表わす。
アミノ酸残基もしくはペプチド残基、シＹはカルボン酸
エステル残基、 Ａはフェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファン
残基、 Ｂは任意のアミノ酸残基、ただしプロリンおよび酸性ア
ミノ酸を除く、 Ｃは任意のアミノ酸残基、ただしプロリンを除き、Ｂが
芳香族アミノ酸以外のときはＣは疎水性または芳香族ア
ミノ酸、 Ｚはアミドまたはヒドラジド基、 Ｚ′は水酸基、アミド基、ヒドラジド基、カルボン・酸
エステル残基あるいは保護されまたは保護されていない
アミノ酸またはペプチド残基、を表わす。
）なお本発明方法においては特別の断わりのないかぎり
すべてＬ−アミノ酸を意味する。
すべてＬ−アミノ酸を意味する。
本発明方法において用いるＣ−成分はそのＣ端のアミノ
酸がフェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファン
であるものである。
酸がフェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファン
であるものである。
Ｃ−成分の末端アミン保護基としては当分野で一般に使
用されている基、例えばアセチル基、ベンジルオキシカ
ルボニル基、Ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル基
、ｔ−ブチルオキシカルボニル基などが用いうる。
用されている基、例えばアセチル基、ベンジルオキシカ
ルボニル基、Ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル基
、ｔ−ブチルオキシカルボニル基などが用いうる。
Ｎ成分の末端カルボニル保護基としてはアミド基、ヒド
ラジド基、カルボン酸エステル残基が利用される。
ラジド基、カルボン酸エステル残基が利用される。
カルボン酸エステル残基としてはメチルエステル、エチ
ルエステル、メチルエステル、ベンジルエステル、Ｐ−
ニロベンジルエステル、２，４，６−トリメチルベンジ
ルエステルなどが例示されるが、Ｃ−成分はＣ末ｉが低
級アルキルエステルで保護されているものが反応に利用
しやすい。
ルエステル、メチルエステル、ベンジルエステル、Ｐ−
ニロベンジルエステル、２，４，６−トリメチルベンジ
ルエステルなどが例示されるが、Ｃ−成分はＣ末ｉが低
級アルキルエステルで保護されているものが反応に利用
しやすい。
Ｎ−成分は遊離型は勿論のこと、塩酸塩、臭化水素酸塩
、トリフルオロ酢酸塩、Ｐ−トルエンスルホン酸塩、そ
の他有機および無機の塩が使用できる。
、トリフルオロ酢酸塩、Ｐ−トルエンスルホン酸塩、そ
の他有機および無機の塩が使用できる。
酵素濃度は０．０２−０．２ｍＭ、特に０．２ｍＭ付近
の濃度が好ましい。
の濃度が好ましい。
本発明で使用されるキモトリプシンは市販のα−キモト
リプシンや、β−キモトリプシン、γ−キモトリプシン
などであり、反応はｐＨ８〜１１で実施される。
リプシンや、β−キモトリプシン、γ−キモトリプシン
などであり、反応はｐＨ８〜１１で実施される。
したがってメンツエル緩衝液、ミバエリス緩衝液、ブリ
トンーロビンソン緩衝液等のｐＨを８〜１１に保ちうる
緩衝液が用いられる。
トンーロビンソン緩衝液等のｐＨを８〜１１に保ちうる
緩衝液が用いられる。
基質の濃度に関しては上記の如く使用する酵素が消化し
うる最大濃度のＣ−成分を用い、そのほぼ等モル比のＮ
−成分を反応させるものである。
うる最大濃度のＣ−成分を用い、そのほぼ等モル比のＮ
−成分を反応させるものである。
反応温度はキモｌ−ＩＪプシンの至適温度、すなわち２
０−５０℃である。
０−５０℃である。
溶媒は水またはメタノール、エタノールまたはジオキサ
ン等のような水と相溶性のある媒質を含む水性媒質が用
いられるが、Ｃ−成分の溶解性を高メるためジメチルホ
ルムアミドなどの有機溶媒１０〜４０係を用いてもよい
。
ン等のような水と相溶性のある媒質を含む水性媒質が用
いられるが、Ｃ−成分の溶解性を高メるためジメチルホ
ルムアミドなどの有機溶媒１０〜４０係を用いてもよい
。
反応は目的ペプチド誘導体を反応液より沈澱させながら
円滑に進行し、酸（例えば、塩酸、硫酸、トリクロロ酢
酸）または加熱により酵素を失活させることにより終了
させることができる。
円滑に進行し、酸（例えば、塩酸、硫酸、トリクロロ酢
酸）または加熱により酵素を失活させることにより終了
させることができる。
生じた生成物は沢取してもよいが、より純度の高い目的
ペプチド誘導体を得るために、適当な溶媒で抽出したり
、クロマトに付すことが望ましい。
ペプチド誘導体を得るために、適当な溶媒で抽出したり
、クロマトに付すことが望ましい。
以下実施例において、本発明方法の実施態様を示すが、
各実施例における略号は次の意義を有する。
各実施例における略号は次の意義を有する。
Ａｌａ：アラニン、ｃｒｙ ニゲリシン、Ｈｉｓ：ヒス
チジン、Ｉｌｅ：インロイシン、Ｌｅｕ：ロイシン、Ｌ
ｙｓ：リジン、Ｐｈｅ：フェニルアラニン、Ｐｒｏ ニ
ブロリン、Ｓｅｒ：セリン、Ｔｙｒ：チロシン、Ｖａｔ
：バリン、Ａ ｃ 、＋アセチル基、Ｚ：べ／ジルオキ
シカルボニル基、ＯＭｅ：メチルエステル、ＯＥｔ：エ
チルエステル、０Ｂｕｔ：ｔ−−ブチルエステル。
チジン、Ｉｌｅ：インロイシン、Ｌｅｕ：ロイシン、Ｌ
ｙｓ：リジン、Ｐｈｅ：フェニルアラニン、Ｐｒｏ ニ
ブロリン、Ｓｅｒ：セリン、Ｔｙｒ：チロシン、Ｖａｔ
：バリン、Ａ ｃ 、＋アセチル基、Ｚ：べ／ジルオキ
シカルボニル基、ＯＭｅ：メチルエステル、ＯＥｔ：エ
チルエステル、０Ｂｕｔ：ｔ−−ブチルエステル。
実施例 １
アセチルフェニルアラニンエチルエステル（４６１，２
”９ 、１．９６ ｍＭ ）のジメチルホルムアミド溶
液（１ｍｌ）にロイシンアミド塩酸塩（３２５，３η、
１．９７ｍＭ）の水溶液（４，８ｍ１）および結晶α−
キモトリプシン１ｍＭ溶液（０，２ｍｌ ）を加える。
”９ 、１．９６ ｍＭ ）のジメチルホルムアミド溶
液（１ｍｌ）にロイシンアミド塩酸塩（３２５，３η、
１．９７ｍＭ）の水溶液（４，８ｍ１）および結晶α−
キモトリプシン１ｍＭ溶液（０，２ｍｌ ）を加える。
攪拌下に０．５Ｍ炭酸ナトリウム−重炭酸す） ＩＪウ
ム緩衝液（１０，４ｍ１）を加え、室温で反応させると
１分以内に多量の結晶が析出しはじめる。
ム緩衝液（１０，４ｍ１）を加え、室温で反応させると
１分以内に多量の結晶が析出しはじめる。
更に１０分間攪拌した後ＩＮ塩酸を加えて酸性にし反応
を止め減圧下に溶媒を留去する。
を止め減圧下に溶媒を留去する。
残渣に食塩飽和ＩＮ塩酸を加え懸濁後酢酸エチルで抽出
する。
する。
抽出液をボウ硝で乾燥後溶媒を留去し、残渣を少量のメ
タノールに溶かし結晶化するとアセチルフェニルアラニ
ルロイシンアミド（５３１，６７ＩＩｇ、収率８４．７
％）を得る。
タノールに溶かし結晶化するとアセチルフェニルアラニ
ルロイシンアミド（５３１，６７ＩＩｇ、収率８４．７
％）を得る。
ｍｐ２５６．５〜２５８℃。
〔α’１Ｄ−１９，８±４．８°（メタノール）。元
素分析Ｃ１□Ｈ２５０３Ｎ３．１１５Ｈ２０として計算
値Ｃ、６３，２１；Ｈ，７，９３；Ｎ、 １３．０１実
験値Ｃ、６３，２９； Ｈ，８，０７； Ｎ 、 １２
．８２実施例 ２ アセチルフェニルアラニンエチルエステル（４７３，５
ｍ９，２．０１ｍＭ）のジメチルホルムアミド溶液（１
４ｍｌ）にＤＬ−ロイシンアミド塩酸塩（６７８，６”
２９ 、４．１２ｍＭ ）の水溶液（６，４ｍ１）およ
び１ｍＭ結晶α−キモトリプシン溶液（０，２１１１１
）を加える。
素分析Ｃ１□Ｈ２５０３Ｎ３．１１５Ｈ２０として計算
値Ｃ、６３，２１；Ｈ，７，９３；Ｎ、 １３．０１実
験値Ｃ、６３，２９； Ｈ，８，０７； Ｎ 、 １２
．８２実施例 ２ アセチルフェニルアラニンエチルエステル（４７３，５
ｍ９，２．０１ｍＭ）のジメチルホルムアミド溶液（１
４ｍｌ）にＤＬ−ロイシンアミド塩酸塩（６７８，６”
２９ 、４．１２ｍＭ ）の水溶液（６，４ｍ１）およ
び１ｍＭ結晶α−キモトリプシン溶液（０，２１１１１
）を加える。
さらに０．５Ｍ炭酸ナトリウム−重炭酸ナトリウム緩衝
液（ｐＨ１０、６ＴｒＬｌ）を加え室温で攪拌下１０分
反応させる。
液（ｐＨ１０、６ＴｒＬｌ）を加え室温で攪拌下１０分
反応させる。
以下実施例１と同様に処理しアセチルフェニルアラニル
−Ｌ−ロイシンアミド（６０１，９７ｎ９、収率９３，
５係）を得る。
−Ｌ−ロイシンアミド（６０１，９７ｎ９、収率９３，
５係）を得る。
ｍｐ ２５３〜２５６℃、〔αＩＩ）−ｉ’７．ｓ±２
５℃（メタノール）。
５℃（メタノール）。
元素分析Ｃ１７Ｈ２５０３Ｎ３．Ｈ２Ｏとして計算値Ｃ
、６０，５１；Ｈ，８，０７；Ｎ、 １２．４５実験値
Ｃ、６０，７８；Ｈ，７，６７；Ｎ、 １２．１９実施
例 ３ アセチルフェニルアラニンエチルエステル（５０１，６
７Ｉ１９．２．１３ｍＭ ）とチロシンアミド塩酸塩（
４２０，４”？ 、 １．９４ ｍＭ ）を実施例１と
同様に反応させ、アセチルフェニルアラニルチロシンア
ミド（５５８，７７ｎ９、収率７７．８係）を得る。
、６０，５１；Ｈ，８，０７；Ｎ、 １２．４５実験値
Ｃ、６０，７８；Ｈ，７，６７；Ｎ、 １２．１９実施
例 ３ アセチルフェニルアラニンエチルエステル（５０１，６
７Ｉ１９．２．１３ｍＭ ）とチロシンアミド塩酸塩（
４２０，４”？ 、 １．９４ ｍＭ ）を実施例１と
同様に反応させ、アセチルフェニルアラニルチロシンア
ミド（５５８，７７ｎ９、収率７７．８係）を得る。
ｍｐ ２４９〜２５０℃。
元素分析Ｃ２ｏＨ２３０４Ｎ３として
計算値Ｃ、６５，０６；Ｈ，６，２３；Ｎ、 １１．３
８実験値Ｃ，６４７８；Ｈ，６，２４；Ｎ、１１．１０
実施例 ４〜１１ 実施例１と同様に、Ｃ−成分としてアセチルフェニルア
ラニンエチルエステルを用い、第１表に示すＮ−成分と
反応させて対応するペプチドを得る。
８実験値Ｃ，６４７８；Ｈ，６，２４；Ｎ、１１．１０
実施例 ４〜１１ 実施例１と同様に、Ｃ−成分としてアセチルフェニルア
ラニンエチルエステルを用い、第１表に示すＮ−成分と
反応させて対応するペプチドを得る。
結果を第１表に示す。なお収率は薄層クロマトグラフィ
ーにおける対応スポットの濃度から算出した。
ーにおける対応スポットの濃度から算出した。
実施例 １２
アセチルフェニルアラニンエチルエステル（４５３，３
ｇ、 １．９３ｍＭ ）とグリシルロイシン（３９１，
４１ｎ９．２．０８ ｍＭ ）を実施例１と同様に反応
させ、ＩＮ塩酸で反応を止めた後塩酸酸性とし減圧乾固
する。
ｇ、 １．９３ｍＭ ）とグリシルロイシン（３９１，
４１ｎ９．２．０８ ｍＭ ）を実施例１と同様に反応
させ、ＩＮ塩酸で反応を止めた後塩酸酸性とし減圧乾固
する。
残渣を酢酸エチルで抽出し、シリカゲルクロマトに付す
。
。
２０係メタノール−クロロホルム溶出部よりアセチルフ
ェニルアラニルグリシルロイシンを得る。
ェニルアラニルグリシルロイシンを得る。
クロロホルム−エタノールより再結晶し、ｍｐ １０９
〜１１０℃の結晶２７３ｍ’ｉｌ（収率３７．０％）を
得る。
〜１１０℃の結晶２７３ｍ’ｉｌ（収率３７．０％）を
得る。
元素分析 Ｃ１９Ｈ２□０６Ｎ３．３／４Ｃ２Ｈ５０Ｈ
として計算値 Ｃ，５９，７６；Ｈ，７，７１；Ｎ、
１０．２０実験値 Ｃ，６０，００；Ｈ，７，５８
；Ｎ、１０．２０実施例 １３ アセチルフェニルアラニンエチルエステル４６０．４７
Ｉｌｆｔ、 １．９５ ｍＭ ）とロイシルグリシルグ
リシン（５２９，５”９ 、２．１５ｍＭ ）を実施例
１と同様に反応させ、ＩＮ塩酸で反応を止めた後減圧・
−乾固する。
として計算値 Ｃ，５９，７６；Ｈ，７，７１；Ｎ、
１０．２０実験値 Ｃ，６０，００；Ｈ，７，５８
；Ｎ、１０．２０実施例 １３ アセチルフェニルアラニンエチルエステル４６０．４７
Ｉｌｆｔ、 １．９５ ｍＭ ）とロイシルグリシルグ
リシン（５２９，５”９ 、２．１５ｍＭ ）を実施例
１と同様に反応させ、ＩＮ塩酸で反応を止めた後減圧・
−乾固する。
残渣を酢酸エチルで抽出し抽出液を濃縮、生成した沈澱
物をクロロホルムで洗滌してアセチルフェニルアラニル
ロイシルグリシルグリシン（３６９ｍ？、収率４３係）
を得る。
物をクロロホルムで洗滌してアセチルフェニルアラニル
ロイシルグリシルグリシン（３６９ｍ？、収率４３係）
を得る。
ｍｐ １４８〜１５０°ｃ。
元素分析Ｃ２１Ｈ３ｏＯ６Ｎ４として
計算値 Ｃ，５８，０５；Ｈ，６９６；Ｎ、１２．９０
実験値 Ｃ，５８，０８；Ｈ，７，０２；Ｎ、１２．８
０実施例 １４〜２３ 実施例１と同様に、Ｃ−成分としてアセチルフェニルア
ラニンエチルエステルを用い、第２表に示すＮ−成分を
反応させて対応するペプチドを得る。
実験値 Ｃ，５８，０８；Ｈ，７，０２；Ｎ、１２．８
０実施例 １４〜２３ 実施例１と同様に、Ｃ−成分としてアセチルフェニルア
ラニンエチルエステルを用い、第２表に示すＮ−成分を
反応させて対応するペプチドを得る。
結果を第２表に示す。なお、反応は基質濃度０．１Ｍで
行ない、実施例１４．２０および２３においては０．２
５Ｍで行なった。
行ない、実施例１４．２０および２３においては０．２
５Ｍで行なった。
収率は薄層クロマトにより算出したが、実施例１８の収
率は高圧濾紙電気泳動法により分離後ニンヒドリン法に
より算出した。
率は高圧濾紙電気泳動法により分離後ニンヒドリン法に
より算出した。
各０．０４Ｍ、キモトリプシン０．２ｍＭを用い、ジメ
チルホルムアミド２０％を含む緩衝液中で５分間攪拌下
に反応させて、第３表に示す結果を得る。
チルホルムアミド２０％を含む緩衝液中で５分間攪拌下
に反応させて、第３表に示す結果を得る。
ただしＣ−成分としてベンジルオキシカルボニル＊ネフ
ェニルアラニンエチルエステルヲ用い、Ｎ−成分は第３
表に示すものを使用する。
ェニルアラニンエチルエステルヲ用い、Ｎ−成分は第３
表に示すものを使用する。
なお、収率は薄層クロマトグラフィーにおける対応スポ
ットの濃度から算出した。
ットの濃度から算出した。
実施例 ３１〜３２
実施例１においてＣ−成分およびＮ−成分を各各０．１
Ｍ、キモトリプシン０．０２ｍＭを甲いジメチルホルム
アミド１０係を含む緩衝液中で２分間撹拌下に反応させ
る。
Ｍ、キモトリプシン０．０２ｍＭを甲いジメチルホルム
アミド１０係を含む緩衝液中で２分間撹拌下に反応させ
る。
ただし、Ｃ−成分としてアセチルチロシンエチルエステ
ルまたはアセチルトリプトファンエチルエステルを用い
、Ｎ−成分としてロイシンアミドを使用する。
ルまたはアセチルトリプトファンエチルエステルを用い
、Ｎ−成分としてロイシンアミドを使用する。
収率は薄層クロマトグラフィーにおける対応スポットの
濃度から算出した。
濃度から算出した。
○アセチルチロシルロイシンアミド
Ｒｆ １．５ （ｌＶ） 、収率８３％ 、 ｍｐ２４
９〜２５０℃。
９〜２５０℃。
元素分析 Ｃ１□Ｈ２５ｏ、Ｎ３として
計算値 Ｃ，６０，８８；Ｈ，７，５１；Ｎ、１２５３
実験値 Ｃ，６１，０２；Ｈ，７，５１；Ｎ、１２．３
９０アセチルトリプトフイルロイシンアミドＲｆ＝ １
．７ （［［） 、収率４１係ｍｐ ２４９〜２５０
℃（ｄ） 元素分析 Ｃ１９Ｈ２６０３Ｎ４として 計算値 Ｃ，６３，６７、Ｈ，７，３１，Ｎ、１５．６
３実験値 Ｃ，６３，２９；Ｈ，７，３７；Ｎ、１５．
１２実施例 ３３ ０イジンアミド塩酸塩（１６７”ｉｔ 、 １．０１
ｍＭ ）を含む水溶液（１，８ｒｒＬｌ） 、 １ｍＭ
結晶α−キモトリプシン溶液（０，２ｍ１）および０．
５Ｍ炭酸ナトリウム−重炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ１
０，４ｍ１）の混液を激しく攪拌しながらベンジルオキ
シカルボニルクリシルプロリルフェニルアラニンエチル
エステル（４８６７’２９ 、１．０ ｍＭ ）を含む
ジメチルホルムアミド溶液（４ｍｌ）を５〜６分間で滴
下し、さらに４分間攪拌後ＩＮ塩酸（５ｍｌ）を加えた
後溶媒を減圧留去する。
実験値 Ｃ，６１，０２；Ｈ，７，５１；Ｎ、１２．３
９０アセチルトリプトフイルロイシンアミドＲｆ＝ １
．７ （［［） 、収率４１係ｍｐ ２４９〜２５０
℃（ｄ） 元素分析 Ｃ１９Ｈ２６０３Ｎ４として 計算値 Ｃ，６３，６７、Ｈ，７，３１，Ｎ、１５．６
３実験値 Ｃ，６３，２９；Ｈ，７，３７；Ｎ、１５．
１２実施例 ３３ ０イジンアミド塩酸塩（１６７”ｉｔ 、 １．０１
ｍＭ ）を含む水溶液（１，８ｒｒＬｌ） 、 １ｍＭ
結晶α−キモトリプシン溶液（０，２ｍ１）および０．
５Ｍ炭酸ナトリウム−重炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ１
０，４ｍ１）の混液を激しく攪拌しながらベンジルオキ
シカルボニルクリシルプロリルフェニルアラニンエチル
エステル（４８６７’２９ 、１．０ ｍＭ ）を含む
ジメチルホルムアミド溶液（４ｍｌ）を５〜６分間で滴
下し、さらに４分間攪拌後ＩＮ塩酸（５ｍｌ）を加えた
後溶媒を減圧留去する。
塩酸酸性下に酢酸エチルで残渣を抽出し、抽出液を５係
重炭酸ナトリウム水溶液、水で順次洗滌後酢酸エチルよ
りベンジルオキシカルボニルグリシルプロリルフェニル
アラニルロイシンアミド（３２７〜、収率５８Ｕを得る
。
重炭酸ナトリウム水溶液、水で順次洗滌後酢酸エチルよ
りベンジルオキシカルボニルグリシルプロリルフェニル
アラニルロイシンアミド（３２７〜、収率５８Ｕを得る
。
ｍｐ１６２〜１６３．５℃。
元素分析 Ｃ３ｏＨ３９０６Ｎ５．３／２Ｈ２０として
計算値 Ｃ，６０，８０、Ｈ，７，１４；Ｎ、 １１．
８２実験値 Ｃ，６０，８５；Ｈ，７，１５；Ｎ、１１
．８４実施例 ３４〜３７ 実施例１と同様の反応操作で第４表に示されるＣ−成分
とＮ−成分を反応させて第４表に示される生成物を得る
。
計算値 Ｃ，６０，８０、Ｈ，７，１４；Ｎ、 １１．
８２実験値 Ｃ，６０，８５；Ｈ，７，１５；Ｎ、１１
．８４実施例 ３４〜３７ 実施例１と同様の反応操作で第４表に示されるＣ−成分
とＮ−成分を反応させて第４表に示される生成物を得る
。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ｉ ｐＨ８〜１１の緩衝溶液中、温度２０〜５０℃に
おいてキモｌ−ＩＪプシンの存在下、酵素が消化しうる
最大濃度の一般式Ｘ−Ａ−Ｙで表わされるジアミノ酸ま
たはペプチド誘導体に、はぼ等モル比の一般式Ｈ−Ｂ−
ＺまたはＨ−Ｂ−Ｃ−Ｚで表わされるアミノ酸またはペ
プチド誘導体を反応させて、反応液から沈澱させること
により二次分解を阻害しながら目的物を得ることを特徴
とする一般。 式Ｘ−Ａ−Ｂ−ＺまたはＸ−Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｚ′で表わさ
れるペプチド誘導体の新規合成法。 ただし、式中 Ｘは末端アミノ保護基または末端アミン基を保護された
アミノ酸残基もしくはペプチド残基、。 Ｙはカルボン酸エステル残基、 Ａはフェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファン
残基、 Ｂは任意のアミノ酸残基、ただしプロリンおよび酸性ア
ミノ酸を除く、 Ｃは任意のアミノ酸残基、ただしプロリンを除き、Ｂが
芳香族アミノ酸以外のときはＣは疎水性または芳香族ア
ミノ酸、 Ｚはアミドまたはヒドラジド基、 Ｚ′は水酸基、アミド基、ヒドラジド基、カルボン酸エ
ステル残基あるいは保護されまたは保護されていないア
ミノ酸またはペプチド残基。 ただし、上記定義におけるアミノ酸はすべてＬ一体をい
う。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2593276A JPS5820599B2 (ja) | 1976-03-09 | 1976-03-09 | ペプチド誘導体の新規合成法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2593276A JPS5820599B2 (ja) | 1976-03-09 | 1976-03-09 | ペプチド誘導体の新規合成法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS52108089A JPS52108089A (en) | 1977-09-10 |
| JPS5820599B2 true JPS5820599B2 (ja) | 1983-04-23 |
Family
ID=12179541
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2593276A Expired JPS5820599B2 (ja) | 1976-03-09 | 1976-03-09 | ペプチド誘導体の新規合成法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5820599B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6027519B2 (ja) * | 1977-11-02 | 1985-06-29 | 塩野義製薬株式会社 | ペプチド誘導体の新規合成法 |
-
1976
- 1976-03-09 JP JP2593276A patent/JPS5820599B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS52108089A (en) | 1977-09-10 |
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