JPS58215533A - 検鏡用切片特に冷凍切片の処理装置と冷凍乾燥切片処理方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は検鏡用切片、特に冷凍切片の処理装置ＶＣ関連
する。本発明は又冷凍切片の処理方法に関連する。

低温度に保持され、かつつ１ルトラミクロト−ムで帰ら
れる薄片状の有機体試料Ｃ冷凍切片）を電子顧砿鈍で検
鏡するためには冷凍切片を予備処理して検査に適した状
穫にすることが必要である。このｆ−１Ｊ４処理にはＦ
Ｅ縮操作、これに伏〈冷凍乾燥操作及び室温に達するま
での慎直な加温操作が必要である。この目的で冷凍切片
は最初、ウルトラミクロトームの低温室から王鋪器Ｔｌ
ｃ移し、ここから冷凍乾燥室ＶＣ移動するう冷凍乾燥と
室温までの加温操作後、　　Ｉ２１１片を収り上げて保
持器によって電子顧繊境内に固定する。

冷凍切片の多動には小型のキャリヤグリッド。

即ち移動格子が使用され、この格子は炭素又はベリリウ
ムで作られている。ウルトラミクロトームのナイフから
、　ｍｌえはヘヤ、即ち極細線（よって直接用さ離した
冷凍切片はこれらの移動格子上に移されるが、この格子
はその小型性のためビンセット状の器具で取り仮ゎなけ
ればならない。移動格子に対して冷凍切片を圧側する操
作は研摩面を有する重錘（よって行われる。

□ 上記の従泉方法令使用すると、端々の４１作の間に冷凍
切片が０失したり使用不能になったり。

又ｆ′ｉ電子確致鏡検査に不過当な状帽になる＠影響を
防止することができない。特に移動格子から冷凍切片を
引き離したりミクロトームの低温室から移動する間に冷
凍切片が移＃Ｊ名子から落下して４１虱が起きる危険が
ある。又移動格子は＠着であるから千縮器に達するまで
の間に迅速に＠度が上昇して冷凍切片も早期に加温され
て＠影響を受ける。圧縮器内に移動格子を装着する操作
間、＆びこの操作後、電子顧置鏡の取付具（挿入する間
、これＶＣ？ｉｉ：＜冷凍乾燥と加温間ｖｃ虜に汚染物
質が付着する危険がある。虹に冷凍切片を汚染＃！Ｉｊ
ｔから保護するために王Ｓ器は細心の注意を払って４浄
に維持しなければならない。最後に、乾憔操作問に、初
め扁平だった冷凍切片が湾曲することを阻止することは
殆ど不可能である。

上記の各欠点のため、非虜に性能がよくかつ操作が４Ｊ
Ｊ＋なウルトラミクロトームが市販されていても検境用
冷？１ＬＩｌｒ１片のｄｓ＠操作は高度の熟練者を必要
とし、又熟練者でもかな抄高率で不良切片を生ずる。

本発明の目的 従って本発明の目的ｌｒｉ、電子顕歓境用冷凍切片を、
特別な注意を払わなくとも容易に作成できる装置を提供
することにある。他の一目的は。

不良切片の発生を大喝に＠少する処理方法を提供するこ
とにある。

本発明による切片処理装置け、切片を支持する停動格子
、驕び核柊励略子の気持４′！ｉ−有し。

この保持４はベース板、僕ペース板で移動できる講導カ
バー板、極び上記ペース根知対してカバー板、従って移
＠晒子との切片’Ｃ？Ｔ　して固定する装置を有する。

本発明装置は冷凍切片を作るウルトラミクロトームの低
温室内に設けられ、ウルトラミクロトームのナイフに付
着する冷凍切片は直接移動格子上に成さルる。次にカバ
ー板がベース板に接して誘導された後固足されるから、
移動格子上の冷凍切片は強くペース板上で圧縮さする。

本発明装置は閉鎖状憧で低温室から取り出されるから冷
凍切片が紛失する危険はない。

又カバー板とベース板の固定により、冷凍切片は藺平状
すｖｃｌｌＥ確されるから別の圧縮器に移す必要がない
。この切片は直接冷凍乾蟻室に入れることができる。上
記の理由で、又保持器は柊動略子℃比べて熱容量が大き
いため、移＠格子は周辺温度の影響を殆ど受けず、従っ
て冷凍切片に望ましくない加温はｌ！！１対に起こらな
い。

本発明の直接かつ特殊の４漱は１本発明（よる保持器の
冷凍切片の冷凍乾燥操作が切片の圧縮状噸で行われる点
である。この保持４は冷凍乾燥室に保存することが比較
的容易で、又熱伝導は極めて緩慢であるから冷凍切片ｖ
ｃ悪影響を及ぼすような温度上昇を抑制することができ
る。

父上記の理由で、カバー板を上昇した後でも冷凍切片は
扁平形状を維持するから電子顧歇境検査が妨害されるこ
とはない。

本発明の好４実施例によれば、単数又は複数の移動格子
が保持板に永久的（固着され、この保持板はベース板の
凹部内に取出せるよう（配置される。この保持板けｆ！
ｉ虜、電子頑ｅｋ境の試料保持器の支持用取付４に一致
する寸法と形状を有するからこの取付具内（直接挿入で
きる。

従って冷凍−片を上部に支持する小型移動格子を取り扱
う後続の冷凍乾燥操作及び再加温操作は不必要である。

従来これらの操作は欅々の・塩点がありしげしげ汚染の
問題が起こっｆｃ０本発明によれば、電子ｍ畝境の上記
支持用取付具に比較的大型の保持板を装着することが可
能であるから移ｗｈ格子又はこれで支持される冷凍切片
を操作する・ビ要がない。　　　″ 従来の操作法でけ、冷凍切岸全禰平にモーする操作間、
冷？ＩＬＩ２］片が移動格子上に残らないでＩＥ＠ｉ！
５に付着したり、又ＩＥ硝器から落下して紛失したり、
これから引き離す間’／Ｃ切片が損傷したりすることが
しばしば発生した。本発明の別の実施例（よれば切片紛
失の原因を除去することができる。この実施例の装置で
は、移動格子を固着した同一の保持板が保持器のカバー
板内に配置され、保持器がクランプ状態、即ち固定状標
にある時には切片がこれらの２　Ｉｆ！の移動格子＠に
保持される。従ってこの実施例の装置では切片は２Ｍの
格子間で圧縮され、又２−の保持板は同一形状であるか
ら切片がと負らの移動格子に付着しているかは問題では
なく、切片が寸前している移動格子を支持する保持板を
電子顧畝鏡内に挿入することができる。

本発明の特殊実施例でよれば、保持板をに４する開口部
の上に移動格子が接着剤等で固着され、又圧力素子がベ
ース板の凹部内に配置される。この保持板は核凹部（嵌
合され、圧力素子Ｆｉ＃開ロ開門部内出して移動格子の
下面に接触する。切片は移＃ｈ１１１子を通して周囲空
間と連絡するから上記の構造配置によって切片の冷凍乾
燥が促進される。又もし本発明の他の実施例のように、
圧力素子の高さがｍ節可能であれば切片の扁平圧縮操作
に対して所定のｆｉ４Ｅカ値を設定することができる。

本発明は又、切片に対する新規な冷凍乾燥操作を提供す
るもので、この方法は、ミクロトームで切片を作る過程
、蚊切片を移動格子上く移す過程、該切片を扁平にＥｌ
ｉｌする過程、彼切片を４＃Ｊ格子と共（冷凍乾燥室に
移動する過程。

及び該室内で冷凍乾燥する過程、を含むものである。

添付図面の第１ないし第３図に示される本発明の＠珊装
置の第１実施例は、ヒンジ３で相互連結されたベース板
１とカバー板２を有し、これらの両板は１対のジョー、
即ちあごに類似したユニットを構成する。これらの画板
１．２は各上面が対称で１図示のように細長い矩形状１
図面と置場にみて）で、又固定ねじ４によって画板は連
結固定される。

上記の画板はそれぞれ矩形凹部５と６を有し。

これらの凹部（は保持板７が、容易（分離できるように
固着される。保持板７の固着にはねじを使用してもよく
、又凹部５．６のｉｍ！璧から突出するばね（ｎ面省略
）を利用するスナップ嵌合で固着してもよい。

保持板７１’Ｃはそれぞれ少くとも１閲の開口部８が形
成され、この開口部は保持板を！ｊ４Ｌ。

又各凹部の底面に向けて拡大している。各開口部８の上
端は、炭素又はべ１３１Ｊウム製の移動格子９によって
おおわれる。この移動格子９は保持板の上面に接着され
る。保持板７の厚さは。

この装置が閉鎖状暢Ｃ第３図）にある時ｖｃＦｉ各移＠
晒子９が精密に接触し、ｆめ設定した王カー値によって
変わる子方で相互接触するように各関連四部５．６にで
して選択される。分光学的に純粋な黒鉛が保持板７の材
料として好・題である。

＠１ないし第３１図（示される装ｆｔは下記のように操
作される： 固体状の試料ブロックをウルトラミクロトームで薄切り
して冷凍切片を作る操作後、この冷凍切片はウルトラミ
クロトームの隣接位置に配置された本発明装置上にミク
ロトームナイフから移される。詳記すれば、冷凍切片は
ベース板上の移動格子９上に柊され、この４動機作は例
えばヘア、［２１Ｉｔ−細線その他公知の４具によって
行われる。第２図で切片は１０で示される６次ニカバー
板２をヒンジ３を軸（して下方Ｔ／ｃｒ５Ｊ転すると上
方の移動格子は切片１０に押し付けられ、１片は２１１
６１の移動格子間に固定される。画板１．２の外＠［設
けら几たねじ４（１−を図示）をばね装置（図面省略）
などを利用して締め付けると固定力を生じ、この力は両
停勧格千間の冷凍切片１０に所定の圧力を加える。ねじ
４の締め付けはこの装置がウルトラミクロトームの低温
室内（あるＩ！ｌｖｃ行うことも可能で、又この低温室
から取り出した後にねじを締め付けてもよい。この装置
は冷凍切片を入れたまま。

望ましくない温度上昇を起こすことなく冷凍乾燥室に導
入することが可能である。この装置内で８Ｅ−状憧にあ
る冷ＩＩＬ切片は冷凍乾燥室内で冷凍乾燥され、所定の
温度一時間曲線に従って室温まで加温されるが、この温
度一時間曲線は当業者には公知であるから詳細な説明は
省略する。

冷凍乾燥操作後、この装置１はカバー板２をべ一−ス板
１から上昇して開成し、移＃Ｊ烙子９上に冷凍切片１０
を有する保持板７を装置から収り出す。上記のように、
保持板７の形状寸法は電子韻鑓鏡の試料保持器と一致し
ているから、保持板７は直接試料保持器内＆ｃｒＡ定す
ることかで＾、冷凍切片をＳ−格子９から引き礁す必要
力濫ない、１保持板７はそのまま電子鵡敵鏡の試料保持
器内ｖｃ移動できる。

上記の操作によれば、冷凍乾燥操作はＩＥｍ状態の冷凍
１片に対して行われるから、１２］片１０は盾Ｖｃ扁平
状襟が維持されることが確認できた。

従って本発明（より、切片の変形、又はＸ線のｐｊＡ　
＊＋　ｉｃよる切片の一部のドーム形突出変形のような
不利な影響を完全に防止することができる。

上記の処理法によれば１本発明装置は多くの機能、ｕＯ
ち冷凍切片の移動、圧縮及び保持機能を発揮することを
示すものである。又本発明装置ハ、ウルトラミクロトー
ムのナイフから冷凍−片を受は取るため、このナイフの
近くのウルトラミクロトーム低温室内（・固着でなる寸
法を有する。麩に又、この寸法形状は特別な圧電を払わ
ないでも手で直接取り扱うことができるもの１！ある。

図示の実施例では１両保持板７は画板１．２の各凹部５
．６内に挿入され、又圧力素子１１又は１２は円錐形開
口部８内に各凹部の底部から突出している。これらの子
方素子１１．１２の高さは、この各上面が移動格子９の
下面に直接接触するよう（１１１訳される。従って２個
の移゛動格子は切片Ｅ１操作問、各対応田力素子に接触
してこれらの間に挟持される゛冷凍切片に所定の圧力を
加えるように支持される。図示の実施例では、圧力素子
１１．１２はベース板１とカバー板２内に確実に押し込
まれている。しかしこれらの圧力素子１１．ｉ２の代り
ｔｃｔめねじを使用することもできる。とめねじは外部
から操作できるから接賃圧力を副面できる。

第４図は電子顧徴鏡内の保持板７の配電を示す。電子−
ａ椀でＸ線分析を行う場合には、Ｘ線噴出器、及び移動
格子を支持する装＋ｉｉ　（−截−線１３で暗示する）
の側方配置のためいわゆるシャドウイブ（ｓ　ｈａｄｏ
ｗｉ　ｎｇ　）１１象が起こる。この現象のため従来、
冷凍切片を保持するｆ−置を破線１４で示す角度傾斜配
置することが必要であった。しかし本発明の方法によれ
ば、移＠栖子を保持する装ｆｊｔ１３は不必要である。

従って過当な信号プａ−ブを得るのに必要な亀斜１度は
波線１５で示すように小さくすることができる。

第５ｉｌＬび第６図は本発明装置の変型実悔例を示し、
ベース板１とカバー板２を速値するヒンジ３の代りに、
ベース板１′（第５図）の外周に滑り飲会するカバー板
２１を使用するか、又はビン−ビン孔装置が使用され、
閉鎖運物は位置決め用ピン１６と位置決め用ピン孔１７
との嵌合で行われる。これら画板の１夷な相互接近請導
のため圧縮１作問に移動格子に平行な過度の相対的運動
は防とさｆＬ、との運＃Ｊは４勅格子上の冷凍１片１０
を損傷する。

上記のように本発明装置は電子顧敵娩検査にｆ用する冷
凍切片のＱｋ備が特別な注意を仏わないでも簡単に行わ
れるのみならず倹誕用切片数を大喝ＶＣＣ項中ることが
でき、精巧な移動格子の破損や汚染の危倹がなく、又初
めの低温度。

例えば−１２０℃から冷凍乾燥間ＶＣ切片の１度を盟ａ
ｔで上昇する加温が制御下で行われる利保がある。この
利裁け６例えば、支持部に対して最小の熱接触を行ない
、かつ過度の早期加温で発生する妨害的＠度変化を防止
するためベース板ｌを鋭い先端を有する支持点上に装着
することによつ【侮られる。

ベース板ｌとカバー板２の上部に設けられ。

かつ冷凍切片１０Ｖｃ対する接樒圧力を発生する固定圧
＠装置の代りに、これらの画板、′４に第５１極び第６
図に示すベース板１１友びカバー板２′を別の固定位置
（挿入して画板を圧縮することも可能である。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の処理製置の第１実施例で。 冷凍切片を入れた開放状穫を示す。第２図ｆ′ｉ第１図
の装置の保持板を示す。第３図は第１図の装置の閉鎖し
た１Ｅｌｉ状権を示す。＠４図は電子頚ｅ１１境内く装
着された保持板を示し、この図面は咳保持板との１片が
従来の方法に比べて接近性が良好であることを示す。第
５図及び第６図はそれぞれ本発明装置の第２実施例と第
３実施例を示す。 １・・・ペース＆、　　　２・・・カバー１Ｎ、５．６
・・・矩形凹部、　　７・・・保持板、　　８・・・開
口部、　　９・・・移＠格子、　　　１０・・・冷ａＩ
ＩＴｊＪ片、　　　１１．１２−・・モカ素子 ｂ Ｒｇ、２ シ Ｆｉｇ、３ ん ＦｉＱ、ｌｔ− Ｆｉｇ、５ Ｆ７ｇ、６

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　検鏡用切片を支持する移動格子、及び榎移ｍ務子
   の保持４を有する切片の処理装置で、償保持４はペース
   板、償ベース板上で移動される誘導カバー板６位び咳ベ
   ース板′Ｃ付してカバー板を固定して上記移動格子上の
   切片を固定する装置、を有する切片処理袋１ｉ１゜ ２、上記第ｌｌ０ａ記載の装置で、保持器は九Ｖｃ。 ベース板の四部に取外しできるように配置された保持板
   金有し、移動格子が彼保持板に永久的に固着されている
   切片処理装置。 ３、　上記”＠　１４！記載の装置で、保持器は虹に。 ベース板の四部（取外しできるよう（配置され。 かっこｆ′ＬＶＣ水久的に移動格子が固着さａ上書１保
   持板、第２保持板、＆び咳第２保持板に永久的に固着さ
   れ上第２眸動格子を含み、償第２保持板は、保持板が固
   定状憧にちる時では切片が第１移動格子と第２移動格子
   との間に保持されるようにカバー板内に配置されている
   切片％理装置。 ４、　上記第２＠紀載の装置で、４＃Ｊ格子は、保持板
   が突出している開口部の上方に固定さｆ′Ｌ。 又圧力素子がベース板の凹部内に配電され、接圧力素子
   は上記開口部内に突出し、かつ移動格子の下面ｔＣ接咄
   している切片処理装置。 ５、　上記櫂４項記載の装置で、圧力素子は１聚装竜を
   有し、このためペース板℃対する咳王力素子の高さがａ
   整できる切片処理装ｆｔ。 ６、　上記第２項記載の装置で、保持板が電子顧ｔＩｌ
   鏡の取付具が挿入される寸法配置を有する切片りａｉｆ
   Ｉｔ。 ７、　上記第２項記載の装置で、保持板が高純度黒鉛で
   作られている切片処理装置。 ８、　上記第１項記載の装置で、麩にベース板とカバー
   板を連結するヒンジ装置を有する切片処理装置。 ９、　上記第１項記載の装置で、麩にカバー板にりして
   ベース板を確実に滑動案内する誘導装置を何する切片処
   理装置。 １０、冷凍乾燥切片を処理する方法で、ミクロトームで
   切片を乍ろ過程、核切片を移動格子上に移動する過程、
   彼切片を扁平に圧縮する過程。 核切片を移動格子と共に冷凍乾燥室内（移動する過程、
   Ｉｌｌび咳室内で切片を冷凍乾燥する過程。 を含む冷凍乾燥切片処理方法。 １１、上記第１０項記載の方法で、麩（、冷凍乾燥切片
   を加温する過程、を含む冷凍乾燥切片処理方法。