JPS5824115B2 - 嫌気性微生物を維持する装置およびその使用方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、微生物を培養する装置および方法に関し、さ
らに詳しくは、本発明は、嫌気性微生物を臨床患者から
単離し、培養を行なう環境に接種する期間、嫌気性微生
物がガス状酸素に暴露されることから保護するだめの装
置およびその使用方法に関する。

最近、嫌気性伝染の診断の重要性の意識が増加してきた
。

嫌気性微生物を培養し分化するだめの装置および技術が
開発され、嫌気性伝染および原因となる有機体の診断お
よび分化について精巧化されてきた（たとえば、米国特
許第３２４６９５９号参照）。

しかしながら、臨床標本の収集、この標本の研究室への
運搬および有機体の培養の総体的操作における弱い連結
部分は移送段階にあった。

標本の臨床患者から研究室への移送において、標本をガ
ス状駿素に暴露すると、酸素に感受性の嫌気性微生物は
減少し、引き続く分化が不精確となる。

嫌気性微生物の多くの菌株は酸素に対して高度に感受性
であり、ガス状酸素に短期間暴露しただけで生存しない
であろう。

先行技術の臨床源と研究室との間の嫌気性微生物の移送
方法および装置は、アメリカ合衆国ミシガン州カラマズ
ー市のザ アップジョン カンパニーによって１９７２
年に発行された嫌気性微生物感染に関する専攻論文のザ
・スコープ（登録商標）における５４〜５５ページ（米
国国会図書館カード番号７２−７９７５４）に概説され
ている。

簡単に言えば、これらの方法は、綿棒の収集物まだは標
本を二酸化炭素充てん容器、すなわち移送媒体中に急速
に入れるか、あるいは液状の標本を注射器中に吸引し、
ついでこの標本を嫌気びん中へ射出することからなるも
のであった。

これらの方法のうちで、後者の方法は、標本が収集の間
空気を吸き込まれないかぎり、厳密な嫌気性が最も維持
されるように見える。

嫌気性微生物の還元した移送媒体の使用は有望ではなか
った（たとえば、イリオス他によるＡＳＭの年会議々事
録のアブストラクト（１９７４年発行） （Ｙｒｉｏｓ
ｅｔ ａｌ 。

Ａｂｓｔｒａｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ａｎｎｕａｌ Ｍ
ｅｅｔｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅＡＳＭ、（１９７４）参照
）。

前記の文献ザ・スコープは、鉱物油の上層を有する試験
管または小びん中の予備還元され且つ嫌気的に滅菌され
たカリ−・ブレイア−（Ｃａｒｙ −Ｂｌａｉｒ ）媒
質中に浸漬することによって、酸素への暴露から保護さ
れた綿棒上の嫌気性と思われる有機体を移送することを
記載して論る。

二酸化炭素のふん囲気中で淋病菌を移送しかつ培養する
のにとくに有用な移送装置は、米国特許第３７７３０３
５号に記載されている。

先行技術を代表する他の装置は、米国特許第３４８３０
８９ 。

号および同第３７５０６４６号に開示されている。

本発明の方法および装置は、臨床標本を嫌気的環境にで
きるだけはやく入れるという考えを取り入れる。

先行技術の方法および装置のすべては、この目的を達成
するのにある程度時間をかけてい。

る。

さらに、臨床標本を二酸化炭素充てん管に単に入れるの
ではなくて、本発明の装置にはいる空気の量は制限され
る。

本発明の装置内で標本が暴露されるガス状酸素の最大量
は約２容量係である。

ついで、この少量を以後説明するように急速に除去する
。

本発明の装置と方法は、先行技術の装置と方法に比べて
、比較的簡単である。

この装置は低価格で容易に構成され、これを操作するの
に要する訓練の量は最小であることができる。

さらに、本発明の方法は操作上の大きな信頼性を示し、
そして長期間にお贋てさえ生きた微生物の移送を確保す
る。

本発明の装置によると、標本の酸素への暴露を最小とす
ることができる。

本発明を要約すると、本発明は気密的に封止された端部
を有し且つ気密的に封止されたチャンバを形成する第１
の管状容器と、前記チャンバ内に配置されガス状酸素を
除去する手段と、密閉端と開口端とを有しかつ隔室を形
成する第２の管状容器であって該第２の管状容器は前記
第１の管状容器へ前記チャンバと前記隔室との間に連絡
が存在しないように取付けられ、前記隔室は該チャンバ
の外側のふん囲気と開口連絡している第２の管状容器と
、前記開口端を必要に応じて気密的に封止する手段と、
前記開口端を気密的に封止するとき前記チャンバと前記
隔室との間に連絡を形成する手段とを含む嫌気性微生物
を維持する装置にある。

また、本発明によれば、本発明の装置を用いる移送によ
って収集した嫌気性微生物を保護する方法が提供される
。

本発明の装置は、好気性微生物の移送および維持にも有
用である。

本発明は添付図面の第１〜８図に示される本発明の好適
な実施例を参照することによって更に理解されよう。

第１図は好適な装置１０の断面図であり、該装置１０は
、気密封止端部１４，１６を備え且つ気密封止チャンバ
１８を形成する第１の管状容器１２から成る。

容器１２は研究室の装置を構成するのにふつうに用いら
れる材料、たとえばガラス、ガス不透過性重合体などか
ら製作されよう。

好ましくは、透明な材料が選択される。

端部１４は容器１２の一体的に閉じられた末端であり、
一方端部１６は容器１２の内壁２２と摩擦係合した弾力
性のせん２０で気密的に封止されている。

孔２４はせん２０を横切り、この孔２４がふた２６で閉
じられる場合以外は、チャンバ１８と容器１２の外側の
ふん囲気を通常連絡する。

ふた２６は孔２４の中央の一点から該孔を介してせん２
０の末端の点まで伸長する剛性の棒状のプランジャであ
る。

ふた２６の長さは孔２４の長さに少なくとも等しく、そ
してふだ２６は孔２４の内壁とすべり密封状態で配置さ
れている、そのため、ふた２６はチャンバ１８の気密封
止を維持する。

ふた２６は重合体樹脂、たとえばポリエチレン、ポリプ
ロピレン、ポリウレタンなどから作ることが好ましい。

ふた２６の下端の中央部に、嫌気性微生物の臨床標本を
社集するだめの綿棒２８が取付けられている。

この綿棒２８の長さは、それが配置されている第２の管
状容器３０の長さより短かい。

容器３０は孔２４の下端に摩擦ばめによって取付けられ
ているので、容器３０もチャンバ１８に対する気密封止
を形成する。

容器３０はチャンバ内で終る気密封止された端部３２と
孔２４内で終端する開口端３４とを有する。

容器３０の長さはチャンバ１８の縦方向の長さより短か
い。

容器３０は内部の隔室３６を形成し、この隔室３６は綿
棒２８の・・ウジングを提供する。

一般に、チャンバ１８と隔室３６とは、少なくともこの
装置の操作の前と初期において、滅菌ふん囲気を含む。

チャンバ１８は 初期において、嫌気性微生物に害を与
えないいかなるガスをも含有できる。

好ましくは、チャンバ１８内のガス状ふん囲気は、初期
において、１０％の水素、５係の二酸化炭素および８５
係の窒素からなる混合物であろう。

まだ、第１図に示すように、酸素検出指示薬３８が存在
する。

これはコントロール装置であり、たとえば開放容器４０
内の水酸化カリウムでｐＨ７，０に調節されたレアズリ
ン（０，０１％）、システィン（０，０５係）、ＫＨ２
ＰＯ４（０，６％）Ｋ２ＨＰＯ４（０，８７％）および
かんてん（０，７係）の混合物であることができる。

この指示薬混合物は酸素の不存在で無色であり、酸素の
存在で赤である。

パラジウムで被覆されたアスベストのペレット４２は、
チャンバ１８内にゆるく配置されていて、酸素と水素と
の水を生成する反応に触媒作用を与える。

さて、第２〜５図について説明すると、第１図に示す装
置の操作が記載されている。

第２図は、オペレータにより保持された装置１０の斜視
図を示す。

この初期の準備段階において、装置１０の内容物は滅菌
されており、そしてチャンバ１８は嫌気性微生物に害を
与えないガス状ふん囲気を含む。

第３図において、培養すべき試験標本、たとえば嫌気性
微生物が潜伏すると思われる体の流体または抽出物の標
本を単離する目的で、ふた２６とそれに取付けられた綿
棒２８とが取り出されている。

ふた２６と綿棒２８とは単一構造であることはかならず
しも必要ではないことはもちろんである（単一構造は有
利であるが）。

ふた２６は中空であり、綿棒２８は孔２４から突き出る
のに十分な長さをもつことができる（第１図参照）。

ふた２６が取り出されている間、チャンバ１８の気密封
止は第２容器３０の上の開口端による孔２４の閉鎖によ
って維持されている。

この時点で隔室３６は大気に対してもちろん開放されて
おり、約２１係ガス状酸素を含有する大気ガスを含むで
あろう。

隔室３６は好ましくは綿棒２８を収容するのに必要な最
小大きさである。

装置１０の操作のこの段階において、隔室３６とチャン
バ１８との間の連絡は存在しない。

試験標本を綿棒２８上に単離したのち、この綿棒２８は
第４図に示すように第２の容器３０内に急速に再びそう
人する。

再そう入すると直ちに、ふた２６を容器３０へ向けて完
全に押し込んで、容器３０を孔２４の内壁との係合から
はずしてチャンバ１８内へ落下させる。

さて完全に孔２４内にあるふた２６は、チャンバ１８の
気密封止を維持しつづける。

ここでチャンバ１８は第５図に示すように隔室３６と開
口した連絡関係におり、チャンバ１８のガス状ふん囲気
は短時間綿棒２８を浸した酸素含有ふん囲気と混合する
。

さてチャンバ１８内の酸素は、容器４０内に保持される
指示薬３８に視的に明瞭な陽性の反応を生じさせるであ
ろう。

チャンバ１８の容積測定による容量は、隔室３６の容積
測定による容量の少なくとも１０倍であることが好まし
い。

この比を用いると、酸素は隔室３６内のふん囲気の２１
％からチャンバ１８および隔室３６の合計のふん囲気の
約２％以下に希釈される。

生じたガス混合物は非爆発性である。

好ましくは、生じたガス混合物は、モル基準で酸素の少
なくとも２倍過剰量、好ましくは当量モル基準で少なく
とも５倍過剰量の水素を含有するであろう。

隔室３６のガスとチャンバ１８のガスとを混合すること
により、酸素と水素との両方を含有するガス混合物はア
スベスト担持パラジウム触媒４２と接触する。

技術分野でよく知られているように、このような触媒４
２は水素と酸素との水を生成する化学反応を促進する。

使用する触媒４２の比率は触媒的比率であり、チャンバ
１８へ導入される酸素の計算量に基づいて容易に計算さ
れる。

このように、ガス状酸素は非常に急速にチャンバ１８か
ら除去され、その結果将来の培養用の臨床標本を有する
綿棒は実質的に大気圧下にガス状酸素を含まないふん囲
気中に浸される。

嫌気性微生物が臨床標本中に存在する場合、この微生物
は酸素への暴露から保護され、研究室へ安全に移送され
、ここでふつうの技術と装置を用いて培養されうる。

ガス状酸素が除去されることにより、試薬３８はもとの
無色の状態にもどる。

なんらかの理由で、本発明の装置またはその操作に欠陥
があって綿棒２８を浸すふん囲気が酸素を含むと、オペ
レータは試薬３８の変化を視的に観察できる。

第１〜５図について前述した好ましい態様に、本発明の
精神を逸脱しないで、多くの変更を加えることができる
ことを当業者は認めるであろう。

たとえば、水素と酸素との間の反応を促進させる他のい
かなる触媒を使用することもでき、またガス混合物から
ガス状酸素を除去するいかなる他の手段、たとえば酸素
スキャベンジャ−化合物を使用することもできる。

前述の試薬の代わりに、酸素の不存在を指示する他のい
かなる手段を使用することもできる。

捷だ、綿棒２８を省略し、臨床標本を隔室３６内に直接
付着できる。

次の配合物および実施例は、本発明の効率を試験する方
法を説明し、かつ本発明を試験する発明者によって考え
られた最もよい方式であるが、本発明はこれらに限定さ
れるものではない。

バクテリアの培養 嫌気性バクテリアは、アメリカ合衆
国バージニア州プラクスパーク市のザ・バージニア ポ
リテクニック インステイテユートアナエロウブ ラボ
ラトリ−（ｔｈｅ ＶｉｒｇｉｎｉａＰｏｌｙｔｅｃｈ
ｎｉｃ Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ Ａｎａｅｒｏｂｅ Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｙ）の培養収集物（ｃｕｌｔｕｒｅ ｃ
ｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ）から得られ、且つザ・アナエロ
ウブ・ラボラトリ・オブ・バージニア・ポリテクニック
・インステイテユー） （ｔｈｅ Ａｎａｅｒｏ
ｂｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｖｉｒｇ
ｉｎｉａＰｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃ Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ
）および州立大学（５ｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ
ｙ ）刊行の（Ｖ、Ｐ、１．嫌気性微生物便覧（Ｖ、Ｐ
、 Ｉ 、 Ａｎａｅｒｏｂｅ Ｍａｎｕａｌ ））に
よって、発行された嫌気性微生物実験便覧に記載される
方法によって同定する。

好気性および条件的有機体は、バージニア ポリテクニ
ック インステイテユートの生物学課の培養収集物から
得る。

嫌気性バクテリアに対するザ・バージニア ポリテクニ
ック インステイテユートの培養収集物番号は、次のと
おりである。

バクテロイド・フラジリス種フラジリス（Ｂａｃｔｅｒ
ｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓｓｓ、 ｆｒａｇｉｌｉ
ｓ）２５５６−１ 、バクテロイド・フラジリス種セタ
イオタオミクロン（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓｆｒａｇｉ
ｌｉｓ ｓｓ 、 ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎ
） ５４８２ 。

バクテロイド・メラニノゲニクス種アサツカロリチクス
（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉ
ｃｕｓ ｓｓ 。

ａｓａｃｃｈａｒｏｌｙｔｉｃｕｓ ） ４１９８ 、
フンバクテリウム°ヌクレアツム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）８７４８ 、フンバク
テリウム・ネクロホルム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｎｅｃｒｏｐｈｏｒｕｍ ） ＋ ６０５４−Ａ、ペ
プトコックス・マグヌス（Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｍａ
ｇｎｕｓ ） ８３５２ 、ペプトストレプトコックス
・アナエロビウス（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃ
ｕｓａｎａｅｒｏｂｉｕｓ ） ５７５０ 、スチプト
コックス・インテルメデイウス（５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃ
ｃｕｓ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）３３７２ 、エウベ
クテリウム・レンツム（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅ
ｎｔｕｍ ） １９４７−Ｉ Ｂ 、クロステリジウム
・ラモスコ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｒａｍｏｓｕｍ）
８５４６ 、クロストリディウム・イノツム（Ｃｌｏｓ
ｔｒｉｄｉｕｍ ｉｎｎｏｃｕｍ ） ８５９３および
クロストリディウム・ベルフリンゲンス （Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ
）型Ａ３２０１０接種物 すべての培養物は予備還元
した切った肉（ＣＭ）の肉汁中に維持する（Ｖ、Ｐ、
１．嫌気性微生物実験便覧）。

ＣＭ肉汁中の一夜培養物のパスツールピペットからの１
滴を１０１ｎｌの予備還元した脳心蔵浸出物（Ｂｒａｉ
ｎ Ｈｅａｒｔ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ ） （ＢＨＩ ）
の肉汁に加える（Ｖ、Ｐ、１． 嫌気性微生物便覧）
。

連続して１０倍の希釈物をＢＨＩ肉汁でつくり、すべて
の試験管を３７℃で一夜培養する。

次の日光学密度が０．２に最も近いが最大のにとり度で
ない試験管を接種物として使用する。

この試験管を嫌気的チャンバ内に置き、０．２ｍｌの量
を微小力価平板（ｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒ ｐｌａｔｅ
）のくぼみに入れる。

好気性および条件的有機体に対して、上記操作を好気性
ＢＨＩ培地の使用により変更する。

生菌数平板計数（Ｖｉａｂｌｅ Ｐｌａｔｅ Ｃｏｕｎ
ｔｓ ） 嫌気性微生物平板計数に対して、綿棒を嫌
気的チャンバ内へ取り入れ、１０ｒｒＩｌの嫌気性希釈
流体を含有する試験管内に入れた（Ｖ、Ｐ、１．嫌気性
微生物便覧）。

試験管をうす巻き型ミキサー上で激しくかきまぜ、連続
して１０倍の希釈物をつくる。

二重反復試験した。

、 ｉ ｒ／ｌｌの量の希釈物を適当な平板培地上に広
げる。

これらの培地を内側に嫌気的チャンバを有する培養器内
で３７℃において４８時間培養する。

好気的かつ条件的有機体に対して、上記操作を変更して
生菌数平板計数が好気的にできるようにする。

平板培地 各有機体に最適生長を与える次の培地の一つ
について生菌数平板計数を行なう。

０．５％の酵母抽出物を含有しかつ５％の余年血液を含
有するかまだは含有しない脳心蔵浸出かんてん（ＢＨＩ
Ａ） 、および５チの余年血液または溶血した羊血液を
含有するプルセラかんてん。

実施例 １ 上の「接種物」の項で調製し微小力価平板の各くぼみ中
に綿棒を置き、その中の接種物を吸収させる。

１組の綿棒をゴムせんをした試験管内に置き、嫌気性対
照としてのグローブボックスの内部に置く。

２組の綿棒をグローブボックスから取り出す。

一方の組を第１図に示すような本発明の移送装置の隔室
３６に直ちにそう人する。

他方の組を好気性のゴムせんをした試験管に入れる。

２゜４．２４時間後およびある場合において４８時間後
、各型の１本の綿棒をグローブボックス内に取り入れ、
各綿棒から生菌数平板計数を得る。

この操作に従い、嫌気性微生物の１２の標本のおのおの
の菌株を単離し、対照と比較して本発明の装置内で生存
するそれらの能力を試験する。

生細胞数計算値で表わす結果（検出限界１００細胞７／
綿棒）を、第６ａ〜８ｄ図にグラフにしだ。

各グラフに有機体を標示する。

グラフにおいて、実線は本発明の装置内に維持された嫌
気性微生物の生存率を示し、破線は嫌気的条件下に維持
された対照嫌気性微生物の生存率を示し、そして直線一
点一直線は好気的条件下に維持された微生物の生存率を
示す。

第６ａ〜６ｄ図は、３種または４種の非常に酸素に感受
性の嫌気性微生物を用いて、本発明の装置中の第１試料
期間前に有意量の死亡が起こらないことを示す。

フッバクテリウム・ネクロフォルム（Ｆｕｓｏｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ ｎｅｃｒｏｐｈｏｒｕｍ ）では、第１試
料期間にほぼ２分の１桁の大きさの生存数の損失があっ
たが、それ以上の死亡は起こらない。

バクテロイド・メラニノゲニクス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄ
ｅｓｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ ）は＼この装置
内で２４時後生存数の損失を示す唯一の培養物である。

すべての場合において、本発明の装置内に維持される有
機体の生存数および生存率は、酸素をまったく含まない
きびしい嫌気的条件下の維持に、有利に匹敵することが
明らかである。

第７ａ〜Ｉｄ図は「中程度に感受性」の嫌気性微生物に
よる結果を示し、そして第８ａ〜８ｄ図は酸素に対して
比較的大きい耐久力をもつ嫌気性微生物による結果を示
し、そしてこれらは本発明の装置内で維持された嫌気性
微生物の生存率は酸素に決して暴露されなかった同じ有
機体の生存率に有利に匹敵することを示す。

本発明の装置は、試験の間（２４時間まだは４８時間）
すべての有機体の生存を維持した。

好気的対照綿棒上では急速に死ぬほとんどの酸素感受性
群の臨床嫌気性微生物でさえ、これらを本発明の装置は
適切に保護するという事実は、本発明の装置内で嫌気的
条件が急速に達成されることを示す。

４８時間有機体が生存しつづけるということは、脱水が
起こらないことを示す。

事実、本発明の装置内の条件は、有機体のほとんどが空
気に決して暴露されない対照嫌気性綿棒上の有機体と同
じ速度で生長しつづけるようなものである。

本発明を単に説明の目的でそのある態様につＶて説明し
てきたが、本発明はその意味に制限されるものでなく、
本発明の範囲は特許請求の範囲によってのみ決定される
ものと理解すべきである。

本発明の他の多くの変更は当業者にとって自明であり、
たとえば、本発明の装置はいかなる大きさおよびいかな
る形であることもできる。

まだ、本発明の装置は、容器３０内に培地を入れること
によって嫌気性微生物を培養するのに使用でき、さらに
、嫌気的条件下で化学反応を行なうのに使用できるなど
、このようないろいろな本発明の装置の使用は本発明の
精神を逸脱するものではない。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の好適な実施例を示す断面図、第２図は
第１図−に示された実施例の斜視図、第３図は臨床標本
を単離するだめに取り出した綿棒構成成分を示す第２図
におけるような部分的な斜視図（装置の下方部は図示さ
れていない）、第４図は第３図と同様であるが綿棒構成
成分を元へ戻した後の斜視図、第５図は第４図と同様で
あるが収集した標本を嫌気的条件のもとに配置させる操
作をしだ後の状態を示す斜視図、第６ａ〜６ｄ図は酸素
に感受性の嫌気性微生物の、それぞれ第１〜５図の装置
の綿棒に保持される場合（実線）、嫌気的条件のもとに
維持される場合（破線）および好気的条件のもとに維持
される場合（一点鎖線にて）の生存率を示すグラフ、第
１ａ〜７ｄ図は第６ａ〜６ｄ図と同様であるが、中程度
の酸素に対する感受性をもつ嫌気性微生物に関するグラ
フ、第８ａ〜８ｄ図は第６ａ〜６ｄ図と同様であるが酸
素に対して比較的耐久力のある嫌気性微生物に関するグ
ラフである。 １０・・・嫌気性微生物を維持する装置、１２・・・第
１管状容器、１４．１６・・・気密的に封止された端部
、１８・・・チャンバ、２０・・・弾力性のせん、２２
・・・内壁、２４・・・孔、２６・・・ふた、２８・・
・綿棒、３０・・・第２管状容器、３２・・・気密的に
封止された端部、３４・・・開口端、３６・・・隔室、
３８・・・酸素検出用指示薬、４０・・・開口容器、４
２・・・パラジウムで被覆されたアスベストのペレット
またはパラジウム触媒。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 気密的に封止された端部を有し且つ気密的にシール
   されたチャンバを形成する第１の管状容器と、該チャン
   バ内に配置されガス状酸素を除去する手段と、密閉端と
   開口端とを有しかつ隔室を形成する第２の管状容器であ
   って該第２の管状容器は前記チャンバと前記隔室との間
   を連通させないよう前記第１の管状容器に取付けられ、
   前記隔室は前記チャンバの外側のふん囲気と連通してい
   る第２の管状容器と、前記開口端を必要に応じて気密的
   に封止する手段と、前記開口端を気密的に封止されてい
   る時前記チャンバと前記隔室との間の連通を形成する手
   段とを含む嫌気性微生物を維持する装置。 ２ 前記チャンバ内に配置され、酸素の存在を指示する
   検出器を特徴とする特許請求の範囲第１項記載の嫌気性
   微生物を維持する装置。 ３ ガス状酸素を除去する手段がガス状水素と触媒とか
   らなり、該触媒がガス状水素とガス状酸素とから水を生
   成するのを促進する特許請求の範囲第１項記載の嫌気性
   微生物を維持する装置。 ４ 前記触媒がパラジウムであることを特徴とする特許
   請求の範囲第３項記載の嫌気性微生物を維持する装置。 ５ 前記触媒がキャリヤー上に存在するパラジウムであ
   ることを特徴とする特許請求の範囲第３項記載の嫌気性
   微生物を維持する装置。 ６ 前記第２の管状容器が前記チャンバを形成する内壁
   上に設置されていることを特徴とする特許請求の範囲第
   １項記載の嫌気性微生物を維持する装置。 ７ 前記隔室に取り出すことができるように位置した綿
   棒をさらに備える特許請求の範囲第１項記載の嫌気性微
   生物を維持する装置。 ８ 前記第１の管状容器の気密的に封止された端部の一
   つが孔を有する弾力性の密封せんから成り、前記第２の
   管状容器の前記開口端が前記孔の壁によって摩擦的に保
   持されており、しかも前記開口端を気密的に封止する手
   段が前記開口端の上の孔；内に摺動自在に取付けられた
   剛性のふた部材から成り、該部材が前記孔の内壁とすべ
   り密封を形成する特許請求の範囲第１項記載の嫌気性微
   生物を維持する装置。 ９ 前記ふた部材がその一端に取付けられた綿棒を有し
   、該綿棒は前記ふだ部材が前記開口端を閉じるとき前記
   第２の管状容器の開口端の中へ延びることを特徴とする
   特許請求の範囲第８項記載の嫌気性微生物を維持する装
   置。 １０前記ふた部材がまた連通形成手段をさらに備えてい
   る特許請求の範囲第１項記載の嫌気性微生物を維持する
   装置。 １１前記連通形成手段が前記チャンバの内側と外側との
   間を連絡する棒から成り、該棒が前記第２の管状容器を
   押すとき前記第２の管状容器を前記第１の管状容器上の
   その取付は位置からはずすことを特徴とする特許請求の
   範囲第６項記載の嫌気性微生物を維持する装置。 １２気密的に封止された端部を有し且つ気密的に封止さ
   れたチャンバを形成する第１の管状容器と、前記チャン
   バ内に配置されガス状配素を除去する手段と、密閉端と
   開口端とを有しかつ隔室を形成する第２の管状容器であ
   って、該第２の管状容器は前記チャンバと前記隔室との
   間に連通が起らないよう前記第１の管状容器に取付けら
   れ 前記隔室が前記チャンバの外側のふん囲気と前記開
   口端で連通している第２の管状容器と、前記開口端を気
   密的に封止する手段と、前記開口端を気密的に封止する
   とき前記チャンバと前記隔室との間に連通を形成する手
   段とを含む装置を準備すること、嫌気性微生物が潜伏し
   ていると思われる臨床標本を前記隔室内に入れること、 前記隔室の開口端を気密的に封止し、次いで前記開口端
   を気密封止したとき前記チャンバと前記隔室との間の連
   絡を形成すること、 前記チャンバからガス状酸素を除去する手段を活性化す
   ることを含む嫌気性微生物を維持する装置の使用方法。 １３前記ガス状酸素除去手段を前記隔室と前記チャンバ
   との間に連絡を形成することによって同時に活性化する
   特許請求の範囲第１２項記載の嫌気性微生物を維持する
   装置の使用方法。 １４前記微生物がバクテロイド・メラニノゲニクスであ
   る特許請求の範囲第１２項記載の嫌気性微生物を維持す
   る装置の使用方法。 １５前記嫌気性微生物がペプトステレプトコックス・ア
   ナエロビウスである特許請求の範囲第１２項記載の嫌気
   性微生物を維持する装置の使用方法。 １６前記嫌気性微生物がフンバクテリウム・ネクロフォ
   ルムである特許請求の範囲第１２項記載の嫌気性微生物
   を維持する装置の使用方法。 １７前記嫌気性微生物がクロストリジウム・イノツムで
   ある特許請求の範囲第１２項記載の嫌気性微生物を維持
   する装置の使用方法。 １８前記微生物がクロストリジウム・ベルフリンゲンス
   である特許請求の範囲第１２項記載の嫌気性微生物を維
   持する装置方法。 １９前記嫌気性微生物がクロストリジウム・ラモスムで
   ある特許請求の範囲第１２項記載の嫌気性微生物を維持
   する装置の使用方法。 ２０前記微生物がフンバクテリウム・ヌクレアツムであ
   る特許請求の範囲第１２項記載の嫌気性微生物を維持す
   る装置の使用方法。 ２１前記嫌気性微生物がペットコックス・マグヌスであ
   る特許請求の範囲第１２項記載の嫌気性微生物を維持す
   る装置の使用方法。 ２２前記嫌気性微生物がバクテロイド・フラジルス種フ
   ラジルスである特許請求の範囲第１２項記載の嫌気性微
   生物を維持する装置の使用方法。 ２３前記嫌気性微生物がバクテロイド・フラジリス種セ
   タイオタオミクロンである特許請求の範囲第１２項記載
   の嫌気性微生物を維持する装置の使用方法。 ２４前記嫌気性微生物がフバクテリウム・レンツムであ
   る特許請求の範囲第１２項記載の嫌気性微生物を維持す
   る装置の使用方法。 ２５前記嫌気性微生物がストレプトコックス・インテル
   メデイウスである特許請求の範囲第１２項記載の嫌気性
   微生物を維持する装置の使用方法。