JPS5826320B2 - ソクテイヨウシヤクソセイブツ - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 液体中の成分を測定するために酵素反応を利用すること
がしばしば行なわれ、その場合、酵素およびアデノシン
のリン酸エステル類、更には必要に応じ基質が試薬とし
て供給される。

従来は、これら測定に必要な物質群を一組の試薬として
供給するために、これらの一部又は全部を混合し、溶液
状態又は凍結乾燥した状態で供給されてきた。

しかしながら、この種の製品は変質しやすく、長期間に
わたって一定の品質を保つことができなかった。

本発明者等は安定な測定試薬の供給手段を検討した結果
、酵素とアデノシンのリン酸エステル類を含む組成物に
あっては、凍結乾燥した状態のものよりも不活性担体と
共に圧縮成型した状態の方が安定であることを見出した
。

これは、酵素製剤に係る技術常識からみるとき、意外と
さるべきものである。

しかしながら、酵素とアデノシンのリン酸エステル類と
が共存する状態で圧縮成型物を得ようとすると圧縮成型
機への付着性が増し、量産化に適さないことが見出され
た。

この問題を解決するために研究を進めたところ、酵素と
アデノシンのリン酸エステル類とを異なる層として別々
に圧縮成型すると成型機への付着性が改善され、生産能
率が格段に上ることが見出された。

本発明はかかる知見に基き、長期にわたって安定で、製
造上容易にして、使用上便利な測定用試薬の供給を可能
としたもので、酵素、アデノシンのリン酸エステル類及
び必要に応じ基質を用いる液体中の成分を測定するため
の試薬において、酵素とアデノシンのリン酸エステル類
とを圧縮成型物中に異なる層として含有させることを特
徴とする測定用試薬組成物であり、またかかる特徴を備
えた測定用試薬の構造に係る。

本発明の測定用試薬組成物には、酵素とアデノシンのリ
ン酸エステル類とを、これらに対して不活性な物質より
なる層を介して１ケの圧縮成型物となす態様も含まれる
。

本発明の試薬組成物が適用される液体中の成分を測定す
る場合として、血清や尿のごとき体液中の物質の量を測
定する場合を挙げることができ、例えばグルコースを測
定する場合において、ヘキソキナーゼ；グルコース−６
−リン酸脱水素酵素；アデノシン三リン酸（ＡＴＰと略
称する）；ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン
酸（ＮＡＤＰと略称する）の組合せを用いる方法が知ら
れている。

更に、液体中の成分を測定する他の例として、血清中の
酵素の活性を測定する場合を挙げることができ、例えば
、グルタミン酸−オキザロ酢酸トランスアミナーゼ（Ｇ
ＯＴと略称する）の活性を測定する場合は、カルメン（
Ｋａ ｒｍｅ ｎ ）法によれば、α−ケトゲルタール
酸；Ｌ−アスパラギン酸；リンゴ酸脱水素酵素（ＭＤＨ
と略称する）：還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレ
オチド（ＮＡＤＨと略称する）の組合せが用いられる。

これらの場合において、ヘキソキナーゼ、グルコース−
６−リン酸脱水素酵素及びＭＤＨは測定に役立つ酵素の
例であり、ＡＴＰ、ＮＡＤＰ及びＮＡＤＨは前述のアデ
ノシンのリン酸エステル類の例である。

また、α−ケトゲルタール酸やＬ−アスパラギン酸は酵
素反応に必要な基質の例である。

本発明において対象とされる酵素は上記例の他に、乳酸
脱水素酵素（ＬＤＨと略称する）、ジアホラーゼ、トリ
オースイソメラーゼ、グリセリン１−リン酸脱水素酵素
、ピルビン酸キナーゼ、ヘキソナーゼ、グルコース−６
−リン酸脱水素酵素、リポプロティンリパーゼ、リパー
ゼ、グリセロールキナーゼ、ムタロターゼ、クルコース
デヒドロゲナーゼ、ウレアーゼ、クエン酸合成酵素、ホ
スホトランスアセチラーゼのごとき、液体中の成分の測
定に用いられる酵素類である。

本発明において対象とされるアデノシンのリン酸エステ
ル類とは、上記例の他にアデノシンジリン酸（ＡＤＰと
略称する）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（
ＮＡＤと略称する）、還元型ニコチンアミドアデニンジ
ヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ２と略称する）、補酵
素Ａのごとく、酵素と組合されて使用されるものであり
、アデノシンのりボフラノースの水酸基にリン酸残基又
は置換リン酸残基がエステル型に結合した化合物群であ
る。

酵素およびアデノシンのリン酸エステル類は、これらに
対し不活性な物質と共に圧縮成型され、また必要に応じ
酵素を含む層とアデノシンのリン酸エステル類を含む層
とを隔てるために、これらに不活性な物質が用いられる
が、かかる不活性物質の例としては、ブドウ糖・マンニ
ット・ショ糖・乳糖のごとき糖類、食塩のごとき塩類、
グリシン・セリン・アラニン・アミノ酪酸のごときアミ
ノ酸類、その他可溶性澱粉、イノシトール等の所謂粉末
状賦形剤を挙げることができるが、勿論これらに限らず
、不活性であり、測定の目的を阻害せず、水に溶解させ
たとき澄明な溶液を与える物質であればよい。

なお、不活性物質には、所謂賦形剤の他に、圧縮成型を
容易にするために通常用いられる物質、例えば滑沢剤等
も含まれていてよく、例えばラウリル硫酸ナトリウム、
マクロゴール等を挙げることができる。

更に、不活性物質は、酵素反応における基質として用い
られる物質のうち、酵素及び（又は）アデノシンのリン
酸エステル類に対しそれらと共存させたとき、失活・分
解等の不都合な作用を及ぼさない物質を含むことができ
る。

この条件を充足する基質を酵素を含む層、アデノシンの
リン酸エステル類を含む層、またはこれらの層を隔てる
不活性物質中に含有させるとき、測定に必要な多種類の
物質を一剤にまとめることが可能となり、試薬を使用す
る際に便利である。

酵素を含む層の不活性物質、アデノシンのリン酸エステ
ル類を含む層の不活性物質又はこれら両層を隔てる不活
性物質はそれぞれ異なっていてもよいが、測定に必要な
反応に直接係らない物質の種類はできるだけ少い方が好
ましく、そのためには各層の不活性物質を共通にするこ
とが望ましい。

なお、不活性物質としてグリシン等のアミノ酸類とマク
ロゴール４０００又は６０００とを組合せて用いるとき
は、圧縮成型における成型特性が優れており、本発明に
よる効果と相まって生産性が格段に向上する。

酵素とアデノシンのリン酸エステル類とを異なる層とし
て圧縮成型物中に含有させる例としては、酵素を含む層
を第１層とし、アデノシンのリン酸エステル類を含む層
を第２層とする所謂三層錠の構造を挙げることができる
。

更に酵素とアデノシンのリン酸エステル類とを、これ等
両者に不活性な物質よりなる層を介して一ケの圧縮成型
物となす場合を挙げることができ、この場合は酵素を含
む層を第１層とし、不活性物質からなる層を第２層とし
、アデノシンのリン酸のエステル類を含む層を第３層と
する所謂多層錠の構造をとること、或は酵素を含む錠剤
の中にアデノシンのリン酸のエステル類を含む錠剤を不
活性物質で包まれた状態で埋没させた所謂有核錠の構造
をとること等を挙げることができる。

図面第１図は三層錠の構造を示す断面図であり、第２図
は多層錠の構造を示す断面図であり、第３図および第４
図は有核錠の構造を示す断面図である。

図において１は酵素を含む層またはアデノシンのリン酸
エステル類を含む層の何れかであり、３はそれらのうち
の他の一方である。

２は上記両層を隔てる不活性物質よりなる層である。

これら圧縮成型物の形態は、上記構造をとりうる範囲内
で自由に選ぶことができ、円筒状、直方体状等の形をと
ることができる。

本発明によれば、測定に必要な酵素およびアデノシンの
リン酸エステル類が長期間にわたり品質の劣化をきたさ
ず、安定であること、酵素とアデノシンのリン酸エステ
ル類とが共存する構造をとる場合に比し圧縮成型時にお
ける成型機への付着性が少なく打錠能率が高いこと、測
定に必要な試薬構成を少なくまとめることができ使用時
の操作性が良いこと等、従来技術に比し多くの利点が得
られる。

次に実施例を挙げて本発明を説明する。

実施例 １ 体液中のＧＯＴ活性を測定するための方法の一つである
カルメン（Ｋａｒｍｅｎ）法は次の測定原理に基く。

試料（ＧＯＴ） α−ケト Ｌ−ア入パ タール酸 、 ラギン酸 Ｌ−グル 、７つ 、つ■゛°” Ｌ−リンゴ酸Ｊ＼ＮＡＤ この方法による測定に用いられる酵素ＭＤＨ。

アデノシンのリン酸エステル類ＮＡＤＨを供給スるため
に次のごとく圧縮成型体を製造する。

（１）ＮＡＤＨ層素材の調製 ＮＡＤＨ２，９、ｐ グリシン ２２８ｇ マクロゴール６０００ ９ｇ 上記３成分を粉状とし、均一に混合する。

（２）不活性物質層素材の調製 グリシン １１４ｇ マクロゴール６０００ ６ ｇ 上記２成分を粉状とし、均一に混合する。

（３）ＭＤＨ層素材の調製 ＭＤＨ（１１，０ＯＯＵ、４１’） １５灰ｌアル
ブミン ３ｇ グリシン ２０５ｐ マクロゴール６０００ １２ ｇ 精製水１５０１ｒＬｌにＭＤＨ，アルブミンおよびグリ
シンを加えて攪拌し、均一化させた後、ｌＮ−ＮａＯＨ
を滴下しｐＨを７．５とし、凍結乾燥に付す。

乾燥品を粉末とし、これにグリシンおよびマクロゴール
６０００を加え均一に混合する。

（４）圧縮成型 上記（１）で調製された粉末４０■、（２）で調製され
た粉末２０■、（３）で調製された粉末４０■をとり、
それぞれを第１、第２および第３層とする三層打錠を行
なう（厚さ４．３ ｍｍ ：直径１５關、曲率半径６關
のＲ型杵を使用）。

（５）圧縮成型特性の検討 ロータリ一式多層錠剤機を用いて打錠を行なったところ
、上記（４）の圧縮成型の場合は、１時間にわたって連
続打錠ができ、均質な三層錠を得ることができた。

一方、上記（１） 、 （２）および（３）の粉末を均
一に混合した粉末をロータリ一式錠剤機で打錠したとこ
ろ、約１５分の打錠で杵への付着が著しくなり、全部の
杵をはずして付着物を取除かねばならなかった。

その後打錠を再開したが、１０分以内に杵に付着が生じ
、錠剤の重量のバラツキが大きくなったため打錠を中止
した。

（６）安定性の検討 前記（５）において、（１） 、 （２）および（３）
の粉末を均一に混合して打錠した錠剤を対照１とし、Ｍ
ＤＨおよびＮＡＤＨを下記の如く調製して得た凍結乾燥
品を対照２として温度４０℃でカロ速試験を行なった。

（対照２の調製） ＭＤＨ（１１，０ＯＯＵ、４’） ０．２５ｄＮＡ
ＤＨ０，０５ｆｌ マンニット ４ｐ を精製水８０７ｒＬｌに溶解させた後、ｌＮ−ＮａＯＨ
でｐＨを７．５とし、精製水を加えて全量を１００７ｎ
ｌとし、１００本のバイアルに均等に分注し、凍結乾燥
に付す。

１週間、２週間及び３週間後の残存率を測定した結果を
次表に示す。

実施例 ２ 体液中のグルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（
ＧＰＴと略称する）を測定する方法の一つであるカルメ
ン法は次の測定原理に基く。

この方法による測定に用いられる酵素ＬＤＨ。

アデノシンのリン酸エステル類ＮＡＤＨを供給するため
に次のごとく圧縮成型体を製造する。

（１）ＬＤＨ層素材の調製 実施例１（３）において、ＭＤＨ１５ｍｌに替えて、Ｌ
ＤＨ（５，５００Ｕ／ｍｌ） １５ｍｌを用イテ同様に
調製し、粉末とする。

（２）圧縮成型 実施例１．（１）で得られる粉末４０■、同じ＜（２）
で得られる粉末２０■および上記ＬＤＨ層素材４０ｍ９
をとり、それぞれを第一層、第二層および第三層とする
三層打錠を行なう（厚さ４．３ ｍｕ ：直径５間、曲
率半径６ｍｒＩＬのＲ型杵を使用）。

（３）圧縮成型特性の検討 ロータリ一式多層錠剤機による上記（２）の圧縮成型は
１時間以上の連続打錠ができた。

得られる三層錠は均質であった。

一方、各層の素材粉末を均一に混合したものにつき行な
ったロータリ一式錠剤機による打錠は、約２０分の打錠
で杵に対する付着が著しくなったため、杵の清掃を行な
う必要があった。

僅かな付着がさらに大きな付着性を呼ぶために、累積的
に付着が進行するものと考えられる。

清掃後、打錠を再開したが約１５分で錠剤間のバラツキ
が大きくなった。

（４）安定性の検討 ＬＤＨ及びＮＡＤＨを下記の如く調製して得た凍結乾燥
品を対照として、温度４０℃において加速試験を行なっ
た。

対照の調製 ＬＤＨ（５，５００Ｕ／Ｍ） ０．２５ｍ１ＮＡ
ＤＨ０，０５ｇ マンニット ４ｇ を精製水８０ｍ１に溶解させた後ｌＮ−ＮａＯＨでｐＨ
を７．５とし、精製水をカロえて全量を１００ｍ１とし
た後、１００本のバイアルに均等に分注し、凍結乾燥に
付す。

１週間、２週問および３週間後の残存率を測定した結果
を次表に示す。

実施例 ３ 次のごとくして得られる圧縮成型体は、カルメン法によ
るＧＯＴ活性の測定およびＧＰＴ活性の測定に共用する
ことができる。

（１）酵素層の素材の調製 ＭＤＨ（１１，０ＯＯＵ、４’） １５ｍ１ＬＤ
Ｈ（５，５００Ｕ７ｆｎｌｌ） １５ ｍアル
ブミン ６ｇ グリシン ２２０ｇ マクロゴール６０００ １２ｇ 精製水１５０ｍ１にアルブミン、グリシン、ＭＤＨおよ
びＬＤＨを加え、攪拌して均一化させ、ｌＮ−ＮａＯＨ
でｐＨを７．５に調節する。

凍結乾燥に付し、粉末とする。

（２）圧縮成型 実施例１．（１）で得られる粉末４０ｍ９、同じ＜（２
）で得られる粉末２０ｍ９および前記酵素層素材４０ｒ
ｖをとり、それぞれを第一層、第二層および第三層とす
る三層打錠を行なう（厚さ４．３ｍｍ：直径５ｍｒＩＬ
１曲率半径６關のＲ型杵を使用）。

（３）上記打錠において、錠剤機の杵への付着性は少な
く１時間円滑に打錠でき、また打錠室を特＊に低湿度に
空気調節する必要も認められなかったｐ （４）安定性の検討 対照として下記のごとく凍結乾燥品を製造し、このもの
と本実施例の製品との安定性を比較検討した。

本実施例の製品は、凍結乾燥品に比べ安定性がよい。

ＭＤＨとＬＤＨとが共存しても安定であるのはＮＡＤＨ
と分離して圧縮成型することによると考えられる。

対照の調製 ＭＤＨ（１１，ＯＯＯＵ７Ｍ） ０．２５ｍ１ＬＤ
Ｈ（５，５００Ｕ、４’） ０．２５ｍ１ＮＡＤ
Ｈ０，０５ｇ マンニット ４ｇ を精製水８０ｍ１に溶解させ、ｌＮ−ＮａＯＨでｐＨを
７．５とした後、精製水をカロえて全量を１００−とし
、１００本のバイアルに均等に分注し、凍結乾燥に付す
。

温度４０℃、１週間、２週問および３週間後の残存率を
次表に示す。

実施例 ４ 体液中のＬＤＨの活性を測定する方法の一つとして、次
の原理に基く方法が知られている。

試料（ＬＤＨ） 乳酸）ｌ ＮＡＤ ＼／ホ″”ザ７ ピルビン酸 １ｃＮＡＤ、’）７（ｙｚトラゾリウム塩
この測定に用いられるＮＡＤおよびジアホラーゼを供給
するために次のごとく圧縮成型体を製造する。

（１）ＮＡＤ層素材の調製 ＮＡＤ １．５．９ニトロ
テトラゾリウムブルー ０．４ｇマンニット
５．６ｇ マクロゴール６０００ ２．５ｇ 精製水１００ｍ１に上記成分を溶解させ、凍結乾燥に付
す。

乾燥品を粉末化し、これにマンニット顆粒１７．５ｇお
よびマクロコール６０００の２．５ｇをカロえ均一に混
合する。

（２）不活性物質層素材の調製 マンニット顆粒 １７．５ｇ マクロゴール６０００ ２．Ｆｌ 上記２成分を均一に混合する。

（３）ジアホラーゼ層素材の調製 ジアホラーゼ（２５０ＵＡＩｌの ５ｍｌマンニッ
ト ６ｇ アルブミン ２．５ｇ 精製水１００７７１１にアルブミンおよびマンニットを
溶解させ、ｌＮ−ＮａＯＨでｐＨを７．５とした後、ジ
アホラーゼをカロえて均一にし、凍結乾燥に付す。

乾燥品を粉末とし、これにマンニット顆粒１７．５Ｌマ
クロゴール６０００２．Ｅｌを加え均一に混合する。

（４）圧縮成型 上記（１）で調製された粉末３ ｏｍｑ、（２）で調製
された粉末２０■および（３）で調製された粉末３０■
をとり、それぞれを第一層、第二層および第三層とする
三層打錠を行なう（厚さ３．４ ｍｍ ｓ直径５朋、曲
率半径６關のＲ型杵を使用）。

（５）上記打錠は、杵への付着性が少なく、１時間の連
続打錠が可能であり、錠剤は均質であった。

かくして得られる製品は各層粉末を混合し、打錠して得
た錠剤（対照）に比し安定である。

ニトロテトラゾリウムブルーの共存下にもかかわらずＮ
ＡＤは変質せず、またジアホラーゼの失活も極めて少な
い。

なお、ＮＡＤ、ジアホラーゼおよびニトロテトラゾリウ
ムブルーの三者を混合して凍結乾燥したものは直ちに変
色し、極めて不安定であり、実用に供し得ない。

以下に対照錠剤との比較実験の結果を示す。

加速条件 ４０℃で３日および７日、６０℃で３日放置後の本発明
品および対照錠剤につき試薬ブランク測定およびＬＤＨ
活性の測定を行なった。

測定操作 基質緩衝溶液（リチウムラクテート０．１モル、トリス
緩衝液０．２モル）１ｍ７に錠剤１錠を溶解させ、３７
℃で５分間ブレインキュベートする。

これに試薬ブランク測定では蒸溜水５０μ１１ＬＤＨ活
性の測定では標準血清５０μｌを加え、３７℃で５分間
インキュベートする。

０．ＩＮＨＣＡ溶液５ｍ溶液５尤ｌ反応を停止させた後
、水を対照としてｌｏａｍセルを用いて５７０ ｎｍで
透過率を測定する。

測定結果 試薬ブランクの表は透過率報を、ＬＤＨ活性の表はカロ
速前の錠剤を用いて測定した場合のＬＤＨの活性値を１
００とする指数で示す。

試薬ブランク測定結果 対照錠剤では、ＬＤＨが存在しない状態でもホルマザン
の生成が行なわれていると考えられる。

本発明品ではかかる現象はみられず極めて安定である。

又、対照錠剤では変質が進行し、ＬＤＨ活性値を急激に
低い値で示す。

本発明品では安定した値が得られる。

実施例 ５ 体液中のアルドラーゼ活性を測定する方法の一つとして
、フルクトース−１，６−ニリン酸を基質とし、試料中
のアルドラーゼの反応にトリオースイソメラーゼ系およ
びグリセリン−１−リン酸脱水素酵素−ＮＡＤＨ系を共
役させ、ＮＡＤＨの減少を測定する方法が知られている
。

この測定に用いられるトリオースイソメラーゼ（ＴＩＭ
と略称する）、グリセリン−１−リン酸脱水素酵素（Ｇ
ＤＨと略称する）およびＮＡＤＨを供給するために次の
ごとく圧縮成型体を製造する。

（１）酵素層素材の調製 Ｔ ＩＭ（５，０００シ冷ワｉ ０ ｍ１３ＧＤＨ（４
００ＴＪＡｒＬｌ） １０ ｒｎｌ！アルブ
ミン ３ｇ グリシン １１０ｇ マクロゴール６０００ ６．Ｆ 精製水１５０ｍ１にアルブミン、グリシン、ＴＩＭおよ
びＧＤＨをカロえ攪拌して均一化させ、ｌＮ−ＮａＯＨ
でｐＨを７．４とし凍結乾燥に付し、後、粉末とする。

この粉末にグリシンおよびマクロゴール６０００を加え
て均一に混合する。

（２）圧縮成型 実施例１．（１）で得られる粉末４０ＴＮ？、同じ＜（
２）で得られる粉末２０■および上記酵素層素材４０ｍ
９をとりそれぞれを第一層、第二層および第三層とする
三層打錠を行なう（厚さ４．３ ｍｍ ｓ直径５間、曲
率半径６關のＲ型打を使吊）。

（３）上記打錠は、ロータリ一式多層錠剤機を用いて充
分円滑に行なわれる。

得られる製品は凍結乾燥品に比べ安定性において優れ、
また、試薬構成が少い（本発明の錠剤と基質緩衝液の二
種）＊ャ ので測定操作が容易である。

実施例 ６ 体液中のクレアチンホスホキナーゼ（ＣＰＸと略称する
）の活ｋを測定する方法として、所謂ＮＡＤ法が知られ
ている。

この方法は次の測定原理に基いている。

この測定方法で用いられるＬＤＨ，ピルビン酸キナーゼ
（ＰＫと略称する）、ＮＡＤＨおよびＡＴＰを供給する
ために、次のごとく圧縮成型体を製造する。

（１）ＮＡＤＨ，ＡＴＰ層の素材の調製 ＮＡＤＨ１，５、？ ＡＴＰ ２２．ｐ グリシン ９０ｇ マクロゴール６０００ ４，５．ｐ上記成分を粉
状において均一に混合する。

（２）ＰＫ、ＬＤＨ層素材の調製 Ｐ Ｋ （２，０００ＴＪＡｎ７） １０ ｍ
１ＬＤＨ（５，５００Ｕ７ｆｎｌ）７ｍｌ アルブミン ３ｇ グリシン １１０ｇ マクロゴール６０００ ６ ｇ 精製水１５０Ｍにアルブミン、グリシン、ＰＫおよびＬ
ＤＨを加え攪拌して均一化させ、ｌＮ−ＮａＯＨで州を
７．４とし凍結乾燥に付し、粉末とする。

この粉末にグリシンおよびマクロゴール６０００を加え
て均一に混合する。

（３）圧縮成型 上記（１）で得られる粉末４０ｒｎｆ１１実施例１．（
２）で得られる粉末２０■、および上記（２）で得られ
る粉末４０■をとり、それぞれを第一層、第二層および
第三層とする三層打錠を行なう（厚さ４、３ ｍＭ＋直
径５間、曲率半径６１１ＬｒＬのＲ型打を使用）。

（４）上記打錠は充分円滑に行なわれる。

得られる製品は安定である。

実施例 ７ 体液中の中性脂肪は、次の測定原理に基いて定量するこ
とができる。

試 料（中性脂肪） リポプロティンリパーゼ グリセロール ＡＴＰ） グリセロールキナーゼ ＤＰ グリセロール−１−リン酸 ＮＡＤ ＧＤＨ（ ＮＡＤＨ ジヒドロキシアセトン リン酸 この方法による測定に用いられる酵素リポプロティンリ
パーゼ（ＬＰＬと略称する）、グリセロールキナーゼ（
ＧＫと略称する）、およびＧＤＨ。

並びにアデノシンのリン酸エステル類ＡＴＰおよびＮＡ
Ｄを供給するために、次のごとく圧縮成型体を製造する
。

（１）ＮＡＤ、ＡＴＰ層素材の調製 ＮＡＤ ５ ｇ ＡＴＰ ２２ｇグリシン
９０ｇ マクロゴール６０００ ４．５ｇ 上記成分を粉状において均一に混合する。

（２）酵素層素材の調製 ＬＰＬ（１０００ｏＵ／９ ） ３ ｇＧ Ｋ
（４２０Ｔ−ｌＡｌ１９ ３流１ＧＤＨ（
４００Ｕ／Ｍ） ６ ｍｌアルブミン
３ｇ グリシン １１０ｇ マクロゴール６０００ ６ｇ 精製水１５０ｍ１にアルブミン、グリシン、ＬＰＬ 、
ＧＫ、ＧＤＨをカロえ攪拌して均一化させ、ｌＮ−Ｎａ
ＯＨでｐＨを７．４とし凍結乾燥に付し、後、粉末とす
る。

この粉末にグリシンおよびマクロゴール６０００をカロ
えて均一に混合する。

（３）圧縮成型 上記（１）で得られる粉末４０■、実施例１．（２）で
得られる粉末２０■、および上記（２）で得られる粉末
４０■をとり、それぞれ第一層、第二層および第三層と
する三層打錠を行なう（厚さ４．３間；直径５１ｎｒ／
Ｌ１曲率半径６關のＲ型打を使用）。

（４）上記打錠は充分円滑に行なうことができる。

得られる製品は長期にわたり安定である。

実施例 ８ 体液中のグルコースを定量する方法として、所謂ＮＡＤ
ＰＨ２法が知られている。

これは次の測定原理に基く。

この測定方法で用いられるヘキソキナーゼ（ＨＫと略称
する）、グルコース−６−リン酸脱水素酵素（Ｇ−６−
ＰＤＨと略称する）、ＡＴＰおよびＮＡＤＰを供給する
ために次のごとく圧縮成型体を製造する。

（１）ＮＡＤＰ、ＡＴＰ層素材の調製 ＮＡＤＰ ６ ｇＡＴＰ
４４ｇ グリシン ９０５２ マクロゴール６０００ ４．５ｇ 上記成分を粉状において均一に混合する。

（２）ＨＫ、Ｇ−６−ＰＤＨ層素材の調製１（Ｋ（９３
０ＵＡ＠ １０流１Ｇ−６−ＰＤＨ（４６０
Ｕ、ｍｇ） １ｏ膨アルブミン ３ｇ グリシン １１０ｇ マクロゴール６０００ ６．９ 精製水１５０ｍ１にアルブミン、グリシン、ＨＫ、およ
びＧ−６−ＰＤＨをカロえ攪拌して均一化させ、ＩＮ
ＮａＯＨでｐＨを７．４とし凍結乾燥に付し、粉末と
する。

この粉末にグリシンおよびマクロゴール６０００をカロ
えて均一に混合する。

（３）圧縮成型 上記（１）で得られる粉末４０１ｎ９、実施例九（２）
で得られる粉末２０■および上記（２）で得られる粉末
４０■をとり、それぞれを第一層、第二層および第三層
とする三層打錠を行なう（厚さ４．３關；直径５ ｍｒ
ｎ１曲率半径６關のＲ型打を使用）。

（４）上記打錠は円滑に行なわれる。

得られる製品は安定である。

実施例 ９ 血清中の尿素窒素を定量する方法として、次の測定原理
に基く方法が知られている。

ウレアーゼ゛ （尿素）十水−一−−→２ＮＨ４＋＋ＨＣＯＩＮＨ４＋
＋α−ケトグルタレート＋ＮＡＤＨグルタミン酸脱水素
酵素１、 クルタメート＋ＮＡＤ この測定方法で用いられるウレアーゼ、グルタミン酸脱
水素酵素およびＮＡＤＨを供給するために、次のごとく
圧縮成型体を製造する。

（１）ウレアーゼ層素材の調製 ウレアーゼ（３００００７５’） １．５ｇグリシン
１１０ｇ マクロゴール６０００ ４．５ｇ 上記成分を粉状において均一に混合する。

（２）圧縮成型 実施例１．（１）で得られる粉末４０■、同じく（２）
で得られる粉末２０■および上記ウレアーゼ層素材４０
■をとり、それぞれ第一層、第二層および第三層とする
三層打錠を行なう（厚さ４、３ ｍｕ ；直径５ｍ４曲
率半径６間のＲ型打を使用）。

（３）上記打錠は、ロータリ一式多層錠剤機を用いて円
滑に行なわれる。

得られる製品は安定である。

【図面の簡単な説明】

第１図は三層錠の構造を示す断面図、第２図は多層錠の
構造を示す断面図、第３図及び第４図は有核錠の構造を
示す断面図である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 酵素、アデノシンのリン酸エステル類及び必要に応
   じ基質を用いる液体中の成分を測定するための試薬にお
   いて酵素とアデノシンのリン酸エステル類とを圧縮成型
   物中に異なる層として含有させることを特徴とする測定
   用試薬組成物。