JPS5832877B2 - 発酵法による補酵素ｑ↓１↓０の製法 - Google Patents
発酵法による補酵素ｑ↓１↓０の製法Info
- Publication number
- JPS5832877B2 JPS5832877B2 JP55116214A JP11621480A JPS5832877B2 JP S5832877 B2 JPS5832877 B2 JP S5832877B2 JP 55116214 A JP55116214 A JP 55116214A JP 11621480 A JP11621480 A JP 11621480A JP S5832877 B2 JPS5832877 B2 JP S5832877B2
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- microorganism
- carotenoid
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、発酵法による補酵素Ｑ１ｏの製法に関し、更
に詳しくはロドトルラ属に属し、かつ微生物体内に補酵
素ＱＩＯの蓄積生成能を有する微生物のカロチノイド生
成能低下または欠失変異株を用いる補酵素ＱＩＯの製法
に関する。
に詳しくはロドトルラ属に属し、かつ微生物体内に補酵
素ＱＩＯの蓄積生成能を有する微生物のカロチノイド生
成能低下または欠失変異株を用いる補酵素ＱＩＯの製法
に関する。
補酵素ＱＩＯは、生体内に広く分布し、末端電子呼吸系
の電子伝達体として重要な役割を果しており、しかして
近年これが医薬として各種疾病（たとえばうつ血性心不
全など）に対してすぐれた薬理作用、生理作用を示すこ
とが明らかにされている。
の電子伝達体として重要な役割を果しており、しかして
近年これが医薬として各種疾病（たとえばうつ血性心不
全など）に対してすぐれた薬理作用、生理作用を示すこ
とが明らかにされている。
従来、補酵素ＱＩＯを得る方法としては、動物または植
物の組織から抽出し精製する方法が知られている。
物の組織から抽出し精製する方法が知られている。
しかし、この方法は資源的な制約など種々の問題を有し
ている。
ている。
この他、酵母（ロドトルラ属）による製法が知られてい
る（たとえば、特公昭４８−８８３６号公報、特公昭５
０−４７５８号公報参照）。
る（たとえば、特公昭４８−８８３６号公報、特公昭５
０−４７５８号公報参照）。
しかし、これらの方法においては補酵素ＱＩＯの生産性
が低く、現状ではまだ満足すべきものではない。
が低く、現状ではまだ満足すべきものではない。
本発明者らは、これら従来技術の有する欠点を解決すべ
く種々検討した結果、ロドトルラ属に属し、補酵素ＱＩ
Ｏの蓄積生成能を有する微生物のカロチノイド色素生成
能低下または欠失変異株を用いれば、親株より高収率か
つ高純度で補酵素Ｑ１゜が得られることを見い出し本発
明を完成した。
く種々検討した結果、ロドトルラ属に属し、補酵素ＱＩ
Ｏの蓄積生成能を有する微生物のカロチノイド色素生成
能低下または欠失変異株を用いれば、親株より高収率か
つ高純度で補酵素Ｑ１゜が得られることを見い出し本発
明を完成した。
すなわち、本発明の要旨は、ロドトルラ属に属し、かつ
微生物体内に補酵素ＱＩＯの蓄積生成能を有する微生物
のカロチノイド生成能低下または欠失変異株を栄養培地
に培養し、生成された菌体から補酵素ＱＩＯを採取する
ことを特徴とする発酵法による補酵素Ｑｌｏの製法に存
する。
微生物体内に補酵素ＱＩＯの蓄積生成能を有する微生物
のカロチノイド生成能低下または欠失変異株を栄養培地
に培養し、生成された菌体から補酵素ＱＩＯを採取する
ことを特徴とする発酵法による補酵素Ｑｌｏの製法に存
する。
本発明で使用する微生物は、ロドトルラ属に属し、補酵
素Ｑ１ｏの蓄積生成能を有する微生物で、カロチノイド
色素生成能の低下あるいは欠失した変異株であればいず
れでもよい。
素Ｑ１ｏの蓄積生成能を有する微生物で、カロチノイド
色素生成能の低下あるいは欠失した変異株であればいず
れでもよい。
−例を挙げれば、ロドトルラ・グラミニス、ＤＫ−３５
９−２１７−５４（微工研微生物受託番号微工研菌寄５
６７１号）がある。
９−２１７−５４（微工研微生物受託番号微工研菌寄５
６７１号）がある。
この株は、ロドトルラ・グラミニス野生株ＤＫ−３５９
（微工研微生物受託番号微工研菌寄５６７０号）から下
記の突然変異処理・により得られる。
（微工研微生物受託番号微工研菌寄５６７０号）から下
記の突然変異処理・により得られる。
該野生株ＤＫ−３５９は次の菌学的性質を示す。
１、ＹＭ寒天培地における生育状態：
不透明赤紅色。
コロニー形状は円形、隆起は中心凸状、周縁は金縁、表
面は粒状で光沢なし、仮性菌糸、菌糸の形成なし。
面は粒状で光沢なし、仮性菌糸、菌糸の形成なし。
２、子嚢胞子の形成：
形成なし
３、生理的性質：
（１）最適生育条件：
温度：２８〜３００Ｃ
ｐＨ：５〜６
（２）生育範囲
温度：２０〜３３°Ｃ
ｐＨ：２〜８
３ 硝酸塩の資化性：有
４ 尿素の分解：有
５ ゼラチンの液化：無
６ カロチノイドの生成：有
７ 顕著な有機酸の生成：無
８ デンプン様物質の生成：無
９ ビタミン要求性：無
４、炭素化合物の資化性：
■ Ｄ−アラビノース：＋
２ Ｄ−リボース：＋
３ Ｄ−キシロース：＋
４ Ｄ−グルコース：＋、発酵性：
５ Ｄ−ガラクトース：＋、発酵性：
６ Ｌ−ラムノース：＋
７ Ｌ−ソルボース：
８ ショ糖：＋、発酵性：
９ メリビオース：
（１０）ラフィノース：＋、発酵性
（ＩＩ）イノジット：
（１２） Ｄ−マンニット：＋
α３）２−ケトーＤ−グルコン酸塩：
０４）コハク酸塩：＋
（１つ クエン酸：
（１６） 可溶性デンプン：
本発明で使用する菌株は、通常の変異処理によって得ら
れるが、次に具体例を示す。
れるが、次に具体例を示す。
ロドトルラ属に属し、補酵素ＱＩＯの生成能を有する微
生物（親株、赤紅色を呈する）をＹＭ培地（麦芽エキス
０．３ ｇ／ｃｔ Ｚｓ酵母エキス０．３ｇ／ｄｌｌ、
ペプトン０．５ｇ／ｄＡ！、グルコース１ｇ／ｄｉ、寒
天２ｇ／ｄｌ、ｐＨ７，０）により３０°Ｃで２４〜４
８時間生育させた後、菌体をＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ
Ｎ−ニトロソグアニジン２００μｇ ／ｒｒｔｌ！を含
む０．０５Ｍトリス−マレエート緩衝液（ｐＨ６，０）
中に１０５〜１０７菌体／縦になる様に懸濁させ、３０
℃で４０分間振とうする。
生物（親株、赤紅色を呈する）をＹＭ培地（麦芽エキス
０．３ ｇ／ｃｔ Ｚｓ酵母エキス０．３ｇ／ｄｌｌ、
ペプトン０．５ｇ／ｄＡ！、グルコース１ｇ／ｄｉ、寒
天２ｇ／ｄｌ、ｐＨ７，０）により３０°Ｃで２４〜４
８時間生育させた後、菌体をＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ
Ｎ−ニトロソグアニジン２００μｇ ／ｒｒｔｌ！を含
む０．０５Ｍトリス−マレエート緩衝液（ｐＨ６，０）
中に１０５〜１０７菌体／縦になる様に懸濁させ、３０
℃で４０分間振とうする。
次いで、５０００ｒｐｍで５分間遠心分離を行い、生理
食塩水に懸濁する。
食塩水に懸濁する。
さらに生理食塩水で２回洗浄した後、約１０３〜１０４
菌体／ｍｌになる様に生理食塩水に懸濁する。
菌体／ｍｌになる様に生理食塩水に懸濁する。
得られた懸濁液０．１ ｍｌを寒天平板（エタノール２
ＴＬｌ／ｄｌ、 ＮＨ４Ｃｌ ０．２ ｇ／ｄｌ、 Ｋ
ｌ（２ＰＯ４０，２１、ｐ／ｃｉ ４ Ｎａ２ＨＰＯ４
・］ ２Ｈ２０１，２ｇ／ｄ ｌ、 ＭｇＳＯ４・２Ｈ
２００，０３ｇ／ｄＡ、 Ｎａ２ＳＯ４０，０５ｇ／ｄ
１１酵母エキス０．１９／ｄＡ、寒天２ｊｉ／ｄｌ））
上に塗布し、３０℃で３〜４日間培養した。
ＴＬｌ／ｄｌ、 ＮＨ４Ｃｌ ０．２ ｇ／ｄｌ、 Ｋ
ｌ（２ＰＯ４０，２１、ｐ／ｃｉ ４ Ｎａ２ＨＰＯ４
・］ ２Ｈ２０１，２ｇ／ｄ ｌ、 ＭｇＳＯ４・２Ｈ
２００，０３ｇ／ｄＡ、 Ｎａ２ＳＯ４０，０５ｇ／ｄ
１１酵母エキス０．１９／ｄＡ、寒天２ｊｉ／ｄｌ））
上に塗布し、３０℃で３〜４日間培養した。
出現したコロニーのうち、コロニーの色が白色ないしは
黄色で、親株のような赤紅色の色素の生成能が低いある
いは欠失したものをカロチノイド色素生成能低下または
欠失株として選んだ。
黄色で、親株のような赤紅色の色素の生成能が低いある
いは欠失したものをカロチノイド色素生成能低下または
欠失株として選んだ。
本発明の製法で用いる栄養培地の炭素源は、使用する微
生物が利用しうるものならいずれでもよいが、たとえば
グルコース、シュクロース、でんぷん加工分解物などの
炭水化物、酢酸、プロピオン酸、コハク酸などの有機酸
、エタノール、プロパツール、ブタノールなどのアルコ
ール類、大豆油等の油脂類および高級脂肪酸などが使用
され、またこれらの混合物も使用することができる。
生物が利用しうるものならいずれでもよいが、たとえば
グルコース、シュクロース、でんぷん加工分解物などの
炭水化物、酢酸、プロピオン酸、コハク酸などの有機酸
、エタノール、プロパツール、ブタノールなどのアルコ
ール類、大豆油等の油脂類および高級脂肪酸などが使用
され、またこれらの混合物も使用することができる。
窒素源としては、硫安、塩安のようなアンモニウム塩、
尿素、アミノ酸またはこれらの混合物が使用できる。
尿素、アミノ酸またはこれらの混合物が使用できる。
無機塩としては、カリウム塩、マグネシウム塩、リン酸
塩、亜鉛塩、マンガン塩、たとえば塩化カリウム、硫酸
マグネシウム、リン酸カリウム、硫酸亜鉛、などが使用
できる。
塩、亜鉛塩、マンガン塩、たとえば塩化カリウム、硫酸
マグネシウム、リン酸カリウム、硫酸亜鉛、などが使用
できる。
微量元素としては、必要に応じてビタミン類、酵母エキ
ス、糖蜜、コーンスチープリカーなどを添加してもよい
。
ス、糖蜜、コーンスチープリカーなどを添加してもよい
。
また、培地あるいは培養液中に各種の物質、たとえばス
テロール、アミノ酸、安息香酸、その他補酵素ＱＩＯの
生合成前駆物質およびその関連物質を加えることにより
、補酵素ＱＩＯの生成量を増加させることが可能である
。
テロール、アミノ酸、安息香酸、その他補酵素ＱＩＯの
生合成前駆物質およびその関連物質を加えることにより
、補酵素ＱＩＯの生成量を増加させることが可能である
。
培養は、通気攪拌式培養によって行うが、バッチ式また
は連続式培養のいずれでもよい。
は連続式培養のいずれでもよい。
培養液のｐＨは３〜７が好適である。
中和剤としては、アンモニア水、水酸化ナトリウム、水
酸化カルシウムなどが用いられる。
酸化カルシウムなどが用いられる。
培養期間は２〜７日間である。
微生物体からの補酵素Ｑ１ｏの単離は、常法により有機
溶媒による抽出またはけんか法Ｏこより補酵素を含む抽
出液を得、カラムクロマトグラフィにより分画するか、
または有機溶媒で分配抽出し、補酵素Ｑ１ｏを含有する
両分を濃縮した後、エタノールから結晶化して行う。
溶媒による抽出またはけんか法Ｏこより補酵素を含む抽
出液を得、カラムクロマトグラフィにより分画するか、
または有機溶媒で分配抽出し、補酵素Ｑ１ｏを含有する
両分を濃縮した後、エタノールから結晶化して行う。
次に実施例を示し、本発明製法を具体的に説明する。
実施例 １
水１００ＴＬｌに対しエタノール２ｍｌ、 ＮＨ４Ｃｌ
１ｇ、ＫＨ２ＰＯ４０，１ｇ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００
，０３ｇ、Ｍｇ５０４０．０５ｇおよび酵母エキス０．
１ｇの割合で添加したｐ Ｈ７，０の種培地３００ｙｄ
を２１三角フラスコに加え、１２００ＣＸ ］、 ５分
間の条件で滅菌し、これにロドトルラ・グラミスＤＫ−
３５９−２１７５４（微工研微生物受託番号微工研菌寄
第５６７１号）（カロチノイド色素生成能欠失変異株）
を接種し、３０°Ｃで２４時間振とう培養した。
１ｇ、ＫＨ２ＰＯ４０，１ｇ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００
，０３ｇ、Ｍｇ５０４０．０５ｇおよび酵母エキス０．
１ｇの割合で添加したｐ Ｈ７，０の種培地３００ｙｄ
を２１三角フラスコに加え、１２００ＣＸ ］、 ５分
間の条件で滅菌し、これにロドトルラ・グラミスＤＫ−
３５９−２１７５４（微工研微生物受託番号微工研菌寄
第５６７１号）（カロチノイド色素生成能欠失変異株）
を接種し、３０°Ｃで２４時間振とう培養した。
該培養液３００ＴＬｌを上記と同じ組成の培地３１を含
むジャー・ファーメンクー（容積７１）に接種し、回転
数６００ ｒｐｍｓ通気量ＩＶ、Ｖ、Ｍ、温度３０°Ｃ
の培養条件下で９６時間通気攪拌培養した。
むジャー・ファーメンクー（容積７１）に接種し、回転
数６００ ｒｐｍｓ通気量ＩＶ、Ｖ、Ｍ、温度３０°Ｃ
の培養条件下で９６時間通気攪拌培養した。
培養液１１当り８１１ｒ１９の補酵素Ｑ１ｏが上族した
。
。
また、この場合には赤紅色のカロチノイド色素の併産は
認められなかった。
認められなかった。
なお、培養にあたっては炭素源であるエタノールを必要
に応じて適当量追加した。
に応じて適当量追加した。
次いで、９６時間培養した後、遠心分離によって菌体を
集め、漫画６００７ｎｌ（乾燥菌体１０６ｇ）を得た。
集め、漫画６００７ｎｌ（乾燥菌体１０６ｇ）を得た。
菌体を水４８０ｍ１に懸濁し、これにメタノール１５０
０ＴＬ１１水酸化ナトリウム１５０ｇおよびピロガソー
ル６１を添加してけん化し、抽出液にｎ−ヘキサンを添
加して３回抽出する。
０ＴＬ１１水酸化ナトリウム１５０ｇおよびピロガソー
ル６１を添加してけん化し、抽出液にｎ−ヘキサンを添
加して３回抽出する。
ｎ−ヘキサン抽出物を合し、水洗後、濃縮、冷却して沈
殿物を除去した。
殿物を除去した。
得られた涙液に芒硝を添加し、脱水後、シリカゲルカラ
ムを用いてヘキサン：エーテル（８：２）で展開し、補
酵素ＱＩＯ分画を得た。
ムを用いてヘキサン：エーテル（８：２）で展開し、補
酵素ＱＩＯ分画を得た。
この分画を濃縮乾固し、エタノールに溶解し、冷却して
再結晶化した。
再結晶化した。
この操作をくり返して黄色の補酵素Ｑ１ｏの結晶９９．
６１ｎ９を得た。
６１ｎ９を得た。
これを更にエタノールから再結晶して得た結晶の高速液
体クロマトグラフィのリテンションタイム、融点、ＮＭ
Ｒスペクトル、元素分析値、赤外吸収スペクトル、紫外
吸収スペクトル曲線は、いずれも補酵素ＱＩＯの標品の
ものと一致した。
体クロマトグラフィのリテンションタイム、融点、ＮＭ
Ｒスペクトル、元素分析値、赤外吸収スペクトル、紫外
吸収スペクトル曲線は、いずれも補酵素ＱＩＯの標品の
ものと一致した。
一方、同じ条件で、対照として用いたロドトルラ・グラ
ミス野生株ＤＫ−３５９（微工研微生物受託番号微工研
菌寄第５６７０号）を培養したが、補酵素ＱＩＯの生産
量は４２．７■／ｌで、カロチノイドの併産が認められ
た。
ミス野生株ＤＫ−３５９（微工研微生物受託番号微工研
菌寄第５６７０号）を培養したが、補酵素ＱＩＯの生産
量は４２．７■／ｌで、カロチノイドの併産が認められ
た。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ ロドトルラ属に属し、かつ微生物体内に補酵素Ｑ１
ｏの蓄積生成能を有する微生物のカロチノイド生成能低
下または欠失変異株を栄養培地に培養し、生成された菌
体から補酵素Ｑ、０を採取することを特徴とする発酵法
による補酵素ＱＩＯの製法。 ２ 該カロチノイド生成能低下または欠失変異株がロド
トルラ・グラミニス、ＤＫ−３５９−２１７−５４（微
工研微生物受託番号微工研菌寄第５６７１号）である特
許請求の範囲第１項記載の製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55116214A JPS5832877B2 (ja) | 1980-08-22 | 1980-08-22 | 発酵法による補酵素ｑ↓１↓０の製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55116214A JPS5832877B2 (ja) | 1980-08-22 | 1980-08-22 | 発酵法による補酵素ｑ↓１↓０の製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5739790A JPS5739790A (en) | 1982-03-05 |
| JPS5832877B2 true JPS5832877B2 (ja) | 1983-07-15 |
Family
ID=14681654
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP55116214A Expired JPS5832877B2 (ja) | 1980-08-22 | 1980-08-22 | 発酵法による補酵素ｑ↓１↓０の製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5832877B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115895922B (zh) * | 2022-12-19 | 2024-04-02 | 云南大学 | 一株高产类胡萝卜素的禾本红酵母及其应用 |
-
1980
- 1980-08-22 JP JP55116214A patent/JPS5832877B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5739790A (en) | 1982-03-05 |
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